Klinická embryologie

- zdravotnicko-vědecký obor
- Hlavní náplní jsou diagnostické a terapeutické výkony na lidských spermiích, oocytech,
embryích a tkáních, mimotělní oplození, kultivace embryí pro genetické vyšetření, výběr embrya
pro transfer, teoreticky pak vývoj gamet, procesy oplození, časný embryonální vývoj, implantace
a vývoj po ní

1. Přednáška
- Embryologická laboratoř - kultivace embryí, mikromanipulace, kryokonzervace oocytů, embryí a
ovariální tkáně, rozmrazování, příprava embryí pro embryotransfer
- Andrologická laboratoř - příprava spermií (IUI, IVF, ICSI), kryokonzervace spermií a
testikulární tkáně, uložení kryokonzervovaného materiálu
- Založení centra -> Podmínka pro zařazení do sítě zdravotnických zařízení + Minimální standard
pracoviště pro léčbu sterility metodou IVF
- Výkony v IVF centrech jsou odborně a eticky velmi citlicé a náročné na kvalitu provedení - není
zde místo pro chyby
- precizní práce při kultivaci a manipulaci s embryemi -> při nesprávné manipulaci může dojít k
epigenetickým změnám
- Důležitý je psychický stav pacientek\pacientů -> často je lepší vyhovět nárokům a požadavkům
- Zabezpečení kvality péče z pohledu lékařů, úředníků, manažerů zdrav. Zařízení, pacientů…
- Zavedení systému kvality - zařazení pracoviště do struktury národní a evropské sítě ->
poskytování efektivní zdravotní péče, AR multidisciplinární obor, medicínsko-technologické
procesy, aspekty psychologické a etické
- Řízení evropskou unií - zákony a vyhlášky, které je třeba dodržovat. Pravidellné kontroly,
SUKL…
- Systém kvality ISO…= řízení kvality v daném zařízení
- Začlenění systému managementu kvality do lab IVF - dostatečný počt kvalifikovaných osob (2
embryologové\150 cyklů), ucelený seznam postupů, bezpečnostní příručky, funkčnost a kalibrace
přístrojů
- Unifikace procesů, zastupitelnost pracovníků
- Systém 3 kontrol -> při odběru vajíček (do správné misky), barevné označení spermií a vajíček
jednoho páru, práce s jedním vzorkem,

 - Velmi důležitá dokumentace, vedení záznamů, přesnost při uchovávání - přiřazení správného
embrya správné pacientce, elektronická identifikace, dvojité kontroly
- Bezpečnostní postupy, skladování kritického materiálu, přísné kontroly složení médií a látek
přímo dotýkajících se buněk, sledování expirace, evidovaní šarže…
- Celá řada ontrolních složek, všechno musí být dohledatelné, evidované, x-krát kontrolované…
- Indikátory kvality -> fertilization, cleavage, pregnancy, implantation, utilization(kolik embryí z
daného cyklu bylo opotřebených) RATE -> variabilní indikátory, je to na nastavení každé
laboratoře, je třeba to sledovat a zaznamenávat -> úspěšnost chodí ve vlnách
- Systémy jakosti - AKK kurz - nástavba, včlenění systémů jakosti
- Zavedení systémů kvality zajišťuje standartizaci jednotlivých procesů a postupů vedoucí k
poskytování efektivní a bezpečné zdravotní péče, umožňuje proaktivní přístup s ohledem na
eliminaci specifických rizik a v konečném důsledku vede k trvalému zlepšování organizace práce
a výsleků pracoviště
- Kvalifikace pracovníků je dána platnou legislativou
Vybavení\zařízení laboratoře
- laminární flow box, inkubátory, mikroskopy mrazící
přístroje, vyhřívané desky,
- Mikroskop - světelný, stereomikroskop(obraz
pozorovaný pod určitými úhly)
- Hoffmanův modulační kontrast
- Polarizační mikroekopie - znázornění dvojlomných
struktur
- Laser
- Monochromatické světlo
- Kultivační média - kvalitní média musí respektovat
fyziologii a biochemii embrya a jeho genetické a
epigenetické vlastnosti. Vycházejí ze složení
tubulárního a endometriálního sekretu
- Bikarbonát - pro dobré pH, důležitá je osmolarita…
různé požadavky
- G-MOPS - medium pro manipulaci, důležité
médium, dostatečná koncentrace HEPES
- Média pro ICSI metodu
- Embryo glue - dobré výsledky při použití před
embryotransferem
- Pyruvát , laktát, albumin, hyaluronan(snížení
přilnavosti), zdroje energie - aminokyseliny
- Na obrázku je schéma kultivace ——————————>
- Rozdíly podmínek časného vývoje embryí in vivo a in vitro

- je důležité všechno pořádně popsat a zhodnocovat stav embryí, ale je otázkou, jestli někdy není
lepší nechat je ve stálém rostředí, v klidu -> tzn. Není potřeba je zhodnocovat denně
- Čisté prostory - naučit se na zkoušku, je to v učebnicích, které zmiňovala

 2. přednáška

SPERMIE
- spermie se v UVF centrech mohou používat buď vlastní nebo darované, čerstvé nebo
kryokonzervované
- Male faktor - kvalita spermií ovlivňuje nejen vlastní fertilizaci, ale i další vývoj embrya ->
rychlost embryonálního dělení, morfologii embryí, počet blastocyst, implantaci (IVF + ICSI)
- Příčiny patospermie - jen v USA každý rok přichází na trh 1700 nových chemických látek,
evropský registr eviduje 100 000 chem. Látek ->
nežádoucí účinky jsou známé jen u 400
- Konzumace alkoholu v graviditě -> snížení kvality
semene u synů(dánská studie)
- Příčiny poklesu testosteronu s postupujícím
věkem - redukce počtu leydigových buněk,
zhoršená testikulární perfúze, zhoršená odpověď
na gonadotropiny, pokles aktivity enzymatických
procesů a senzitivity receptorů, přidružené
choroby a medikace
- Program darovaných spermií - do 35 let
- Indukční léčba - interval je 3 měsíce (podle
životního cyklu spermií - 74 dní plus transport)
- Znát spermiogenezi
- Posuzování spermiogramu - podle manuálu
WHO. Normy se postupem času mění - to co dříve
značilo málo spermií, je dnes normospermie
- Liquifikace - uvolnění spermií z hlenu = normálně
kolem 30 min- někdy se jim to nepovede, musí se
jim pomoct -> nahřátím na 37 stupňů, nebo
mechanicky pipetováním
- Objem - 2-6 ml
- Procento motility , totální počet motilních spermií,
příměsi(červené či bílé krvinky), morfologie atd..
- Aspermie - chybí ejakulace nebo retrográdní ejakulace(smísení ejakulátu s močí -> moč vytváří
odlišné pH které vadí spermiím-> dá se to napravit naředěním, odstředěním -> spermi pak
mohou fungovat)
- Azoospermie - žádné spermie ani po centrifugaci
- Kryptozoospermie - spermie se objeví až po centrifugaci -> v peletě -> následně ICSI
- Leukospermie - koncentrace leukocytů je nad referenční hranicí
- Nekrozoospermie - spermie jsou
nepohyblivé, ale ne mrtvé
- Hemospermie - ery v ejakulátu
- MESA, TESE - punkce nadvarlete
není složitá, ale ty spermie se
musí rychle zamrazit , jinak se
přestanou hýbat -> pak
nepoznáme, které jsou mrtvé a
které živé. Je dobré si vzít
současně i z varlat, tam jsou ty
spermie odolnější(ale zase nejsou
vyzrálé…)
- Příprava pacienta před odběrem
- > pohlavní abstinence Max 3-5
dnů ( ne delší, radši kratší. Žádná
už taky není tak velký problém). Následně samotný odběr - je lepší to odebrat (masturbací)
přímo v labu, když to vezou z domu, může se jim něco stát. Jsou důležité i parametry odběrových
nádobek - plast s určitým složením atd… Každá lahvička musí být řádně označené, aby nedošo k
záměně, podpisy lékařů, embryologa - vše musí být dohledatelné. Někdy se nechává u vzorku i
vlas pacienta - aby se mohl udělat test DNA.

 - Hodnocení spermatu - vzhled(našedlá barva, kalný, dlouhá abstinence - žlutý), ztekucení

(nejpozději do 60 min), viskozita(ovlivněna sekrecí prostaty a semenných váčků, hyperviskozita-
z 50% infekce), měření objemu(1,5 - 8ml, koreluje s hladinou testosteronu), měření pH, měření
pohyblivých spermií, počítání spermií (maklerova komůrka, další různé komůrky)

- KASA - compiter-aided sperm analysis - kinetické vlastnosti spermie -> VSL(přímá

rychlost),VCL(oblouková rychlost) atd…
- Z ejakulátu musíme odebrat ty nejlepší spermie -> různé metody, např swim-up metoda
(ejakulát dáme k médiu -> centrifugace, převrstvení -> dobré spermie vyplavou do média- trvá
to 30-90min -> čím kratší tím lepší)
- metoda hustotního gradientu - odběr pelety -> hlavně pro UIU
- Vylepšená metoda swim-up -> spermie prochází přes filtry a tím se vyselektují -> je tam lepší
DNA integrita a ty spermie pak lépe oplozují
- Schéma magnetické separace spermií -> selekce pomocí magnetu, ještě se uplně neví, jestli to je
výhodné
- Postkoitální test -> idntifikace spermií v děložním hrdle - zjistí se, jestli jsou spermie v cervik.
Hlenu - jestli tam vůbec dojdou - dělá se to hlavně ve státních, protože to není finančně zajímavé
- Viability test -> zjištění životnosti spermií pomocí barvení, není moc výhodné, ty spermie se pak
už nevyužijí - když je spemie v pořádku, tak se spermie obarví a následně barvivo vypudí, u
nezdravých spermií barvivo zůstává
- HDS test -> zjištění životnosti spermií pomocí hypoosmotického roztoku
- LeucoScreen - identifikace leukocytů ve spermatu
- Spermmar IgG test - zjištění protilátek proti spermiím

 In vitro fertilizace
- spermie se po zpracování přidají k vajíčkům, za 2-12hodin po odběru oocytů. Spermie se použijí
odebrané tentýž den, kdy probíhá odběr oocytů, nebo se použijí rozmražené

PICSI metoda - celkem pracná metoda

IMSI metoda - když jsou spermie patologické, tak si je můžeme až 400x zvětšit a pozorova přesné
malformace. Dost náročná metoda, můžeme vizualizovat hodně detailně poškození.

Uchovávání spermií
- v tekutém dusíku
- Standartní mrazení
- Vitrifikace
- Uchovávání spermií do prázdné zony pellucidy -> získáme to po vypuzení špatného vajíčka či
embry

 Měl by bát registr dárců , protože každý dárce by měl mít jen 10 oplození -> někteří chodí často a
hodně, tudíž má velký počet potmků.

Dříve se dělalo jen klasické IVF, dnes už se dělají i metody ICSI - je málo dárců a málo kvalitní
spermie.

Azoospermie - žádná spermie v ejakulátu

- získávání spermií z varlat a nadvarlat - ještě před operací si urolog pacienta připraví - zjištění
hormonálního profilu, stanovení velikosti varlat, barvení
spermatid apod.
- Muži po vasektomii - spousta nepohyblivých buněk, ale
prognóza dobrá
- podle kanálků se pozná, jestli tam bude spermiogeneze -
listování mezi kanálky
- Spolupráce urologa a embryologa
- Sklerotizované tubuly - můžou se vyskytovat
TESA vyšetření - velice časově náročné

Většinou v polovině testikulárních biopsií se najdou spermie,

někdy je nutno je „vytrhávat „ z těch kanálků - můžou být
poškozeny.

Odhad kvality spermií - hledání spermatid a predikce spermiogeneze

Pohlaví dětí - injikace vajíček různým typem spermií - u MESA a TESA jsou častější holčičky, jinak
je to skoro vždy půl na půl.

3. přednáška
METODY ASISTOVANÉ REPRODUKCE
- získat kvalitní vajíčko je složité - šance na těhotentství je cca 225% na cyklus - se stárnutím se
procenta snižují
- IVF se skládá z několika fází, které zahrnují podávání léků ženě k podpoře růstu vajíček ve
vaječníku(tzv. Stimulace). Po dozrání vajíček se provádí jejich odběr a vyhledávání -> dále se
oocyty uchovávají v miskách se speciálním mediem v inkubátoru. Spermie se po zpracování
přidají k vajíčkům (cca 2-12 hodin po
odběru oocytů). Spermie se použijí buď
odebrané ten den, nebo rozmražené
- Embrya se navzájem potencují v růstu -
komunikují spolu
- Média jsou různá - equilibrované na 37
stupňů\sycené CO2\nesycené…
- Důležité je množství média - důležitý
výpočet spermií - kolik jich k vajíčku
přidáme (do jednoho důlku)
- Pozor na kontaminaci misek
- Víčko misky musí být čisté
- Odběr folikulární tekutiny - ze sálu
dostaneme folikulární tekutinu ve
zkumavkách\stříkačkách. Vyhledávání
oocytů provádíme na binolupě v
lamináru. Často je v ní krev, které je třeba se zbavit. Vyskytují se i krevní sraženiny
- Zralé vajíčko - viditelná corrona radiata a výrazný kumulární komplex
- Nezralé vajíčko - má zárodečý váček -> když ho získáme při odběru, nemůžeme ho použít - in
vitro maturace je neúspěšná
- Metafáze I - není to uplně ideální, ale je to lepší než nic a může dozrát v lab. Podmínkách
- Pomocí polarizačního filtru můžeme pozorovat vřeténka - vajíčko tím nijak neporušíme a
můžeme podle toho posuzovat, kdy budem vajíčka oplozovat

- Při redukčním dělení se vydělí polové tělísko -

struktury jsou odděleny - poloha polového tělíska a
vřeténka nám řekne přesnou fázi vajíčka
- Vlastní x darovaná vajíčka - proces darování je velmi
složitý - dárkyně pouze do 35 let -> musí podstoupit
hodně vyšetření, darování pouze v jednom centru
- Čerstvé x kryokonzervovaná - začalo se to používat
nedávno, ale je to obtížné -> při chlazení se vřeténka
rozvolňují a pak při rozmrazení se to musí dat zpět ->
některé se ale dohromady nedají, nespojí se a vznikají
aneuploidie. Někde se to ale využívá hodně a k
darování se používají pouze ty kryokonzervovaná
- ICSI - zavedení spermie do vaíčka. Vajíčko je pro tuto
metodu pečlivě připraveno - odstranění kumulárních
buněk. Při přidržení vajíčka pod tlakem v
mikropipetě je do něj pod tlakem vpravena jediná
morfologicky kvalitní spermie
- Využití ICSI v AR ve světě - řada států dělá
kombinace - klasické IVF a ICSI, různé jsou poměry,
někde dělají jen ICSI(což asi není moc dobře), IVF se
ale někdy ani dělat nedá, z různých důvodů
(například u starších žen, kde není ani stimulace,
nebo cykly kde děláme preimplantační diagnostiku)
- IVF bylo prapůvodně, pak se trošku narušila ZP a
spermie tam lépe vklouzly, pak se spermie píchaly
pod ZP(SUZI) a dnes přímo do vajíčka
- První - 1992, žena byla 38 let stará, u ní se SUZI
nepovedlo, ICSI se po 24hod. Ukázalo jako úspěšné
a paní otěhotněla
- Zkoumalo se to na myších a dalších zvířatech
- Manipulátor - makropohyb se přenáší na
mikropohyb. Při injikaci je velice důležité postavení
jehel, musí být opravdu přesně, aby nedošlo k
deformaci vajíčka. Seřizování někdy trvá i hodinu
- Vajíčka by měly být dokonale „oholená“- očištěná od
kumulárních buněk. Existují i roztoky pro rozvolňování.
- Je třeba používat vyhřívací desku, vše musí být čisté atd..
- Denudace oocytů - nasávání a vysávání pipetou, nesmí dojít k poškození!,
nemělo by to trvat moc dlouho, dělá se to v kapkách media s hepesem +
hyazy, kapky jsou pod parafinovým olejem. Pokud ty buňky zůstanou na
oocytu, tak někdy mohou negativně ovlivnit kultivaci embryí
- Cytoplasmic pool - můžeme pozorovat u „oholených“ oocytů, jsou to
takové tmavé fleky a značí kvalitu toho vajíčka
- Oocyt s vakuolami - na vyhození, pokud tam je jen jedna, tak se to ještě
dá nějak zvládnout
- Při IVF je opravdu důležité, kolik spermií přidáme k vajíčku -
musí se to počítat a vyhodnocovat - když by jich bylo málo,
nedojde k oplození, když jich bude moc, tak se mohou
vyskytnout polyploidie (standart 210-300 000 spermií a jeden
důlek = 100 000 spermií na oocyt). Ve výpočtech se zohledňuje
i pohyblivost spermií
- Miska na ICSI - cca 3cm průměr - nahoru se dávají spermie,
dolů vajíčka -> pruh pro zpomalení spermií (PVP) - oblast pro
selekci -> různé formace, kudy spermie prochází a vyselektují se
- Zdroje spermií pro ICSI - čerstvý ejakulát, punktát po MESA,
tkáně pro TESE, kryo vzorky
- ICSI by se mělo dělat rychle, ale zároveň velice pečlive - vybrat
co nejlepší spermii
- Metodika ICSI - imobilizace spermie a uvolnění
cytoplazmatických faktorů aktivujících oocyt k dalšímu vývoji

 -> poklepání\zlomení bičíku jehlou -> potom spermie aktivuje vajíčko. Musí se to dělat i u
nepohyblivých spermií
- Injikovat by se mělo co nejméně media
- Pozor na oolemu - je velmi pružná, musí prasknout, aby nevypudila spermii zase ven
- Hodnocení prvojader - 2 krásná prvojádra. Když jsou 3, tak je to velký problém. Můžou se
hodnotit i jadérka - např. Jejich symetrie
- Kultivace embryí - kultivace v čtyřdůlkových miskách, pod olejem(udrží se teplota a
nevyschnou), v kapkách, důležitý je výběr embrya pro ET
- Implantační okno - psychický a fyziský stav pacientky, věk pacientky, substituční hormonální
léčba, režim po embryotransferu
- Přenos do úplně idální dělohy - vyplatí se v případě potřeby transfer odložit - všechno zamrazit -
kryokonzervace embryí je velmi kvalitní, mrazí se čím dál víc. Úspěšnost po mrazení je velmi
vysoká
- PGT-A - biopsie embrya, genetický screening
- Embryotransfer - lékař pacientku musí připravit, správně identifikovat pacientku i embryo,
přenos embrya, kontrola katetru po ET
- Úspěch ET - PR(pregnancy rate), IR(implantation rate), THBR(narozené děti)
- Nidaci. Embrya ovlivňuje technocky správně provedený embryotransfer, výběr kvalitního
embrya, receptivita endometria (podpora endometria gestageny)
- Punkce folik. Tekutiny - 7-10 oocytů, Max 15. U polycystických ovárií je to obtížné - obtížná
stimulace, normální dávky mohou znamenat hypertimulační syndrom. S vyšším věkem je to také
složitější a rezistence vůči hormonální stimulaci se svyšuje - obecně se musí stimulovat vyššími
dávkami
- Hyperstimulační syndrom - zavodnění organismu, selhání orgánů -> ve folik. Tekutině je mnoho
oocytů
- Preimplantační diagnostika - je to riziko pro ty embrya, ale pořád se to zdokonaluje a riziko klesá

4. PŘEDNÁŚKA
- polar body extraction - vydělení polárního tělíska - nutné pro oplození
- Pronuclear Stage - dvě prvojádra a dvě polární tělíska (ty jsou často rozpadlé, ale dá se to dobře
rozeznat)
- Selekce na úrovni prvojader - někdy se tam mohou vyskytnout i vakuoly a ty od prvojader
rozeznáme díky jadérkům
- Pronuclei evaluation - hodnocení embryí na základě prvojader - dle velikosti, polarizaci jadérek
atd…
- 1. mitotické dělení - prometafáze(syntagmie) - podle prvojader poznáme, kde se to rozdělí.
Buňky v dvojbuněčném embryu by měly být stejné, pokud nejsou, je snížena kvalita embrya
- Multijadernost - může dojít k vyrovnání vícejadernosti v průběhu prvních dělení
- Korekce multinukleace - pokud najdeme vícejadernou buňku ve stadiu blastomery, není třeba ji
vyřazovat - opravdu se sama opraví (není to ale pravidlo)
- Přenos i čtvyřbuňěčných embryí (4-cell), ale nejčastěji 3-dnní embrya - zvyšuje se tak
pravděpodobnost implantace
- Posuzování fragmentace u 4-cell embryí - procentuální vyjádření fragmentace , několik kategorií.
Někdy se v embryu objeví značná fragmentace ( granulózní útvary všude), může to snížit
pravděpodobnost správného vývoje, ale také nemusí - i taková embrya lze přenést
- Abnormální embrya - i embrya, která se nám zdají abnormální\špatné\zralé na vyřazení, mohou
překvapit a vyvine se z nich zdravý jedinec
- 8,16-cell embryo - 3. den - odběr jedné buňky pro preimplantační diagnostiku, v tuto chvíli už
embryo jedena vlastní genom. Přechod ze 4. do 8. buňěk je stěžejní a funguje jako takový
selekční checkpoint. I tady je dobrý znak kvality, když jsou buňky stejně velké
- Proces kompaktace - tvorba blastocysty -> až 4. den -> tyto embrya už mají nižší šanci, že budou
implantovat
- Parciální kompaktace - vyloučení\odhození buňěk, které jsou nefunkční či poškozené. Samotné
embryo to nijak neovlivní a vyvíjí se v klidu dál. Embryo si umí poradit i s vakuolami, ale při
přenosu dáváme přednost embryím bez vakuol
- Morula - zde se mohou vyskytovat ty vakuoly-> 4. den odpoledne už se vytváří časná blastocysta
-> tvorba dutinky, která se vyplní tekutinou
- Blastocysta - hodnocení embrya a trofoblastu (Gardner System). Je důležité kontrolovat jak
embryoblast, tak i trofoblast -> tím jak se embryo zvětšuje, dojde k ruptuře ZP (pokud by
například bylo málo buněk v trofoblastu, k prasknutí by vůbec nedošlo

 - Patologické blastocysty - vyřazené ICM, velké

vakuoly, granulózní ICM atd… opět je těžké,
jednoznačně určit, zda je embryo špatné, jestli
sstojí za to ho implantovat atd…
- Hatching - když embryo vystrčí prvních pár
buněk z otvoru na ZP, tak tento objem nasajeme,
laserem uzavřeme dírku a necháme analyzovat -
pošleme do labu.
- V ZP po hatchingu zůstanou ty vyřazené buňky.
- Pokud je to možné, přesouváme embrya 5. den,
protože jsou krásně vyřazené všechny nechtěné
buňky a už zde není ani ZP
- Polarizace buňěk v blastocystě -> dva
embryonální póly -> jednovaječná dvojčata(tyto
embrya se nepřenáší, protože je zde riziko pro
ženu, tyto embrya se vyřazují)
- Time-lapse -> vizualizace vývoje časných embryí
-> udělá se z toho film. Ty přístroje jsou zároveň
inkubátory. Musí se používat
bezpečné barvy světla,
monochromatické světlo
nízké intenzity. Různé
intervay snímání (většinou
5-20min), záznam
vyhodnocen softwarem,
snímá se v jedné nebo více
rovinách
- Postupně se ztrácí
synchronizace dělení
jednotlivých buněk
- Na timelapsu máme třeba 9
embryí od jedné paní ->
můžeme vybrat ty nejlepší
- Transfery 6. den -> velmi
nízká implantace. Sice je to
ideální pro preimplantační
dg, ale implantace je fakt
velmi nízká. Proto je lepší
odebírat buňky z 5tidenního
embrya, kde je vyšší riziko(o
trošku) poškození, ale zase
máme vyšší praavděpodobnost implantace
- CATI (=automatic timelapse embryo evaluation)- umělá inteligence vyhodnocující kvalitu
embryí -> embryo grading. Musí se jí nafotit hodně fotek, aby se naučila, jak vypadá ideální

 embryo atd… Teď se zkoumá vliv poloha vřeténka na kvalitu\úspěšnost implantace embrya ->
zase to může vyhodnocovat ta umělá inteligence.
- zajímavá vlastnost blastocyst - jsou hodně lepivý -> hlavně ten 6. den -> možná proto ten 6. den
je nízká pravděpodobnost implantace
- Asistovaný hatching -> laserem či mechanicky se trošinku poruší ZP -> jen se naťukne nebo
ztenčí

5.PŘEDNÁŚKA
- Neplodnost je stará jako lidstvo samo, počet
neplodných párů stoupá
- První dítě ze zkumavky v čr - 1982 - MUDr.
Ladislav Pilka - kladl důraz hlavně na děti. „Cílem
asistování při reprodukci není manipulace s
přírodou, ale optimalizace přirozené fertilní
schopnosti páru, který žádá lékaře o pomoc“
- Sterilita uznána jako nemoc v r.1977 -> definice
„ stav kdy žena při pravidelném pohlavním styku
alespoň 2x týdně neotěhotní v průběhu jednoho
roku“
- Vhodná komunikace zdravotníků s pacienty -
problém párové komunikace, neplodnost jako
taková je problém páru
- Dávat informace pouze páru - i telefonicky ->
klidně i dvojí identifikace
- MUDr. Konečná - knihy zabývající-se etikou
- Fertilita - podle českého ART registru - znázornění,
jak jde úspěšnost s věkem dolů, s vlastnímy vajíčky
se ještě snižuje
- Rodičovství mimo reprodukční věk -> dřív se ta maximální hranice pohybovala kolem 40ti let
- MUDr. Konečná - studie na preferovaný věk rodičů očima dětí
- Odkládání rodičovství - více faktorů, důvodů
- Sociální mrazení - žena si do budoucna zamrazí svoje vlastní oocyty
- V čr je zakázaná selekce pohlaví,např ve Vietnamu je to povoleno. Dělá se to pouze u nemocí
vázaných na pohlaví, tam je to 100% jasné
- Etické výzvy preimplantační diagnostiky - narůstající složitost a množství informací získaných
pomocí komplexního genetického testování přináší otázky reprodukční autonomie, práva dítěte
na otevřenou budoucnost a rozsah odpovědnosti zdravotníka vzhledem ke kvalitě života
budoucího dítěte - kdyby to bylo otestováno nejlépe jk to je možné, tak by nikdo neprošel tím
„sítem“. Může to být ale výhodou pro páry, které mají postižené dítě a nechcou mít další
- Koncept právo nevědět
- Designing babies - kontroverze
- Netradiční rodiny - LGBT, neúplné rodiny, samotné ženy - je otázka, co je pro dítě rizikové a co
ne. Například žádné předstudky vúči lesbickým párům.
- Náhradní mateřství (surrogátní mateřství)- rizika jsou pro náhradní matku značná (medicínské i
psychologické). Problém je, že pokud si žena která dítě porodí rozmyslí svůj záměr a dítě si chce
nechat, tak ji nikdo nedonutí, aby se dítěte zřekla. Velký kritik - MUDr. Rumpík doporučuje, aby
se v případě surrogátního mateřství alespoň enpoužívaly darované oocyty
- Transplantace dělohy - někdy se to podaří - pak se ta děloha stejně musí odstranit a je tam riziko
pro dítě
- Darování gamet - různé v různých státech, někde ten potomek má právo na poznání svých
biologických rodičů, u nás to tak není - vše je anonymní
- Kryokonzervace zárodečných buněk - rizika a finanční náročnost. Problémy při případném
rozchodu páru - žena nemůže použit spermie partnera bez svolení
- Kryokonzervace hlavně případech, když jsou pacientky onkoloické a mají podstoupit léčbu, kter
by vajíčka potencionálně ohrozila
- Kryokonzervace jako taková je bezpečná, je dobrá i pro psychiku onkologické pacientky.
Nevýhodou je oddálení onko léčby o několik týdnů

 6. PŘEDNÁŠKA
Kryokonzervace - specifikace mrazení a tání, vitrifikace a ohřátí spermií, oocytů, embryí, ovariální a
testikulární tkáně
- první spermabanka v USA - 1953. První těhotenství po rozmrazených embryích - 1984
- Kryonzervace - tkáně a buňky se uchovávají pro budoucnost, tkáně i buňky jsou téměř totožné
před a po rozmražení - zastavení fyzio procesů = zastavení biologického času
- Teplota -196 stupňů
- Mrazí se pro zlepšení léčby AR, zachování fertility(nemoc - léčba ničící zárodečné buňky, donor,
sociální důvody= social freezing, nepředvídatelné události), biopsie (PGT-A,PGT-M,PGT-SR)
- Když ženě hrozí hyperstimulační syndrom - je nutná hospitalizace -> embrya se zmrazí a pak se v
klidu použijí a nedojde k poškození ženy aní embrya
- různé důvody pro odložení transferu
- Úspěšnost je vyšší u mražených embryí než u mražených vajíček (cca o 10%)
- Kryobanka - jsou tam uchovány embrya, oocyty,
ovariální tkáně, spermie -alogenní\autologní (dárců
spermatu, onko pacientů, partnerů pacientek
podstupujících IVF), testikulární tkáně nebo asporát
z nadvarlete
- Postup -> (dehydratace a zajištění toho,, aby led v
buňce připomínal drť a ne krystaly) inkubace s
kryoprotektivy, chlazení, uchování v tekutém
dusíku, rozmrazení- odmytí kryoprotektiv
- Kryoprotektiva zajišťují správnou formu ledu a
dehydrataci. Jsou to ale vysoce jedovaté látky
- Nepenetrující kryoprotektiva - cukry vyvazující vodu
- sacharóza, manitol, sorbitol,
trehalóza…velké molekuly
- Penetrující protektiva - procházejí
membránami a zajišťují ochranu před
ostrým ledem
- Kryokonzervace lze dělat 2 způsoby -
pomalé mrazení x vitrifikace(krátké
působení kryoprotektiv a pak vhození
do tekutého dusíku). Ukazuje se se že
vitrifikace je mnohem lepší a
spolehlivější, nicméně je náročná -
nutné dodržovat přesné postupy,
protože se pracuje s vysokými
koncentracemi kryoprotektiv
- vytažení z tekutého dusíku a přendání
do média je stežejním bodem a velmi
rizikovým
- Blastocysty jsou normálně
expandované a mrazením se zmenší
vlivem dehydratace -> dobré mrazení
se ukáže na tom smršťování embryí i
vajíček
- Dnes se používá skoro všude
vitrifikace-> vyjímkou jsou velká centra
- Kryokonzervace by měl dělat vyškolený
pracovník, velmi důležité je dodržovat
doporučené teploty a časy, nutná
kontrola identifikace pacientky (popisování misek),
potřebné jsou protokoly před začátkem mrazení i po
rozmražování
- Pokud je pracovník zkušený, dokáže odhadnout vše podle
vzhledu zamražovaných vajíček a nemusí se orientovat
doporučovanými standarty
- Plnění slámek\straw -> stanovený objem, přesné postupy,
bubliny, určitý objem , pozor při zatavování

 - Když by se uchovávaly buňky infekčních pacientů, tak by se pro ně měl používat speciální mrazák
- Existují různé programy pro snižování teploty
- V nemocnicích se žasto dělají kryokonzervace ovariálních tkání - velké úspěchy s následným
otěhotněním těchto pacientek
- Goblety = organizéry straw\slámek, organizace podle barev a čísel
- Vitrifikace - při kryokonzervaci se vytvoří jiný led -> porovnáme-li kapky -.> kapka s ledem je
bílá, u vitrifikace je průhledná
- Vitrifikace zvyšuje kumulativní pregnancy rate, přelomová metoda pro oocyty(pro embrya po
PGD i pro normální embrya)

- Není statistický rozdíl mezi kryokonzervovanýmí a čerstvými embryii z pohledu úspěšnosti

těhotenství (2011)
- Vliv doby uplynulé mezi odebráním a zamrazením oocytu - optimální zrací fáze -> delší doba
byla pro mrazení ideálnější -> vyplati se počkat a nechat vajíčka dozrát -> během kryokokzervase
se oddělí chromozomy -> rozmrazení je také zásadní a mělo by se min. 3 hodiny počkat před
dalším použití
- Rizika vitrifikace - poškození cytoplasmy a cytoskeletu, depolymerizace meiotického Spindlu,
degenerace či fůze polárního tělíska, ztvrdnutí zony pellucidy
- Nelze zmrazit všechny oocyty -> cca 1,7% nejde zmrazit
- Vitrifikace není moc náročná na vybavení:

- Vitrifikovat by se mělo v dostatečně velkých kapkách -> v malých objemech hrozí nebezpečí
odpařování roztoků a zvýšení osmolarity -> bezpečné mrazení s jistotou dobrého výsledku. Pozor
na doporučenou pokojovou teplotu
- Přísné dodržování postupů, vytvoření SOP…
- Postup : ekvilibrace 5-15min, vitrifikace, rozmrazení,
odmývání kryokonzerv. Rztoků
- Kryokonzervace spermií ————->
- Spermie se mrazí v mrazicích přístrojích, vitrifikací a
nebo kryokonzervace v parách
- Postup -> materiálem je ztekucené sperma se
zhodnocenými parametry ze spermiogramu (vzorky z
MESA|TESE
- Postup - příprava kryokonzervačních médií ->
příprava a identifikace pejet -> naředění spermatu s
kryokonz. Mediem 1:1 -> naplnění pejet -> uzavření ->
mrazení

- rozmražení -> kontrola

identifikačních údajů ->
rozmrazení při pokojové
teplotě -> vyjmutí z pejet
- Kryokonzervace ovariálních
tkání - pomalé Fmrazení
-