Pathromtin* SL

Intended Use Two controls (one in the normal range and one in the pathological/therapeutic range) must
be measured at the start of the test run, after each change of reagent vial, and at least
Reagent for the determination of the activated partial thromboplastin time (APTT) in citrated once during an 8-hour shift. The control material should be prepared and processed in the
human plasma. same manner as the patient samples. Each laboratory should establish its own confidence
intervals for the controls. This interval is generally ± 2 to ± 2.5 standard deviations from the
Summary and Explanation mean control value. If the control values are outside of the confidence interval, the controls,
Pathromtin* SL Reagent enables rapid screening for disorders of the intrinsic coagulation reagents and instrument must be checked. Before reporting the patient values, it is recom-
system and sensitively detects Factors VIII and IX as well as the contact factors. In con- mended that all steps should be documented that were taken to identify and rectify the
junction with deficient plasmas it enables the individual factors of the intrinsic system to be problem. New control ranges should be defined for each new lot of reagents or controls.
quantified and permits diagnosis of hemophilia. In addition it can be used for monitoring
Results
heparin therapy1.
The result is given in seconds.
The use of the APTT as a screening test for coagulation disorders is indicated particularly
prior to surgical interventions as this allows potential hemophiliacs to be diagnosed and
given special therapeutic protection. Limitations of the Procedure
The presence of non-specific inhibitors such as the lupus-like anticoagulant may prolong Interferences of APTT are described in bibliography references4-6. Therapeutic doses of hi-
the APTT, but this effect is variable and generally recognized as being related more to the rudin or other direct thrombin inhibitors may prolong clotting times7. The choice of antico-
nature of the APTT reagent employed2. agulant (i.e. oxalate instead of citrate) and the condition of the specimen (e.g. hemolyzed,
lipemic, parenteral feeding, etc.) may affect results. The latter is particularly true of optical
instrumentation measurements of the APTT. Preactivation of the sample due to poor phle-
Principle of the Method botomy technique can lead to false results. Referencing the Sample handling and Collec-
Incubation of plasma with the optimal quantity of phospholipids and a surface activator leads tion section of CLSI Document H21-A4 it is recommended that test tubes with non-wetable
to activation of factors of the intrinsic coagulation system. The addition of calcium ions triggers surfaces (e. g., plastic) be used rather than glass test tubes.
the coagulation process; the time to formation of a fibrin clot is measured.
Siemens has validated use of these reagents on various analyzers to optimize product
performance and meet product specifications. User defined modifications are not supported
Reagents by Siemens as they may affect performance of the system and assay results. It is the re-
Materials provided sponsibility of the user to validate modifications to these instructions or use of the reagents
10 x 5 mL, [REF] OQGS 29 on analyzers other than those included in Siemens Application Sheets or these instructions
for use.
20 x 5 mL, [REF] OQGS 35
Results of this test should always be interpreted in conjunction with the patient’s medical
Composition history, clinical presentation and other findings.
Pathromtin* SL Reagent: Silicon dioxide particles (1.2 g/L), plant phospholipids (0.25 g/L),
sodium chloride, Hepes, pH 7.6 Expected Values
Preservative: Sodium azide (< 1 g/L). Reference intervals vary from laboratory to laboratory depending on the population served
and the technique, method, equipment and reagent lot used. Therefore, each laboratory
Warnings and Precautions must establish its own reference intervals or verify them whenever one or more of the
1. For in-vitro-diagnostic use. aforementioned variables are changed.
2. Contains sodium azide (< 0.1 %) as a preservative. Sodium azide can react with cop- In a study of ostensibly healthy individuals using a specific lot of Pathromtin* SL Reagent,
per or lead pipes in drain lines to form explosive compounds. Dispose of properly in the following values were obtained:
accordance with local regulations.
Preparation of the Reagents Median 90 % Reference Interval
Pathromtin* SL Reagent must be gently inverted (5 to 8 times) to mix before first use and 5th Percentile 95th Percentile
must be used at room temperature (+15 to +25 °C). Every 24 hours of use, the reagent must 111 individuals Sysmex® CA-1500 30.9 sec. 26.4 sec. 37.5 sec.
be inverted to resuspend any sediment.
Calcium chloride solution 0.025 mol/L: warm to +37 °C. 111 individuals BCS® System 30.2 sec. 25.9 sec. 36.6 sec.
Reference ranges for other populations such as pediatric groups should also be established
Storage and Stability where warranted.
Stored unopened at +2 to +8 °C Pathromtin* SL Reagent may be used by the expiry date
given on the label. Once opened Pathromtin* SL Reagent must be used within 2 weeks Specific Performance Characteristics
(store at +2 to +25 °C). Precision
Information regarding on-board stability is specified in the Reference Guides (Application Using opto-densitometric detection, precision studies were run over a 5 day period, twice per
Sheets) for the different coagulation analyzers. day (n = 8 replicates per day), to total n = 40 for normal and pathological control plasmas
Materials required but not provided as well as a heparin plasma pool. Intra-assay precision was calculated from the individual
- Calcium Chloride (CaCl2) Solution 0.025 mol/L n = 4 precision values for the daily runs over the 5 days. Intra-assay precision ranged from
0.6 - 2.0 % CV, while the inter-assay precision ranged from 0.3 - 2.8 % CV.
- Control Plasma N, or Dade® Ci-Trol® Level 1 as control for the normal range
- Control Plasma P, or Dade® Ci-Trol® Level 2, or Dade® Ci-Trol® Level 3 as control for the Method Comparison
pathological/therapeutic range Results of a comparison of APTT determinations using Pathromtin* SL Reagent and an-
- Coagulation analyzer (see “Equipment”) other commercially available APTT reagent gave a correlation coefficient of 0.96 and a
y-intercept of 2.1 sec., and a slope of 0.99.
- Pipettes
- Plastic test tubes Bibliography
Equipment: 1. Wagner C, Dati F. Activated partial thromboplastin time (APTT) test. In: Thomas L, ed.
Pathromtin* SL can be used manually or on automated coagulation analyzers. Siemens Clinical Laboratory Diagnostics. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft, 1998: 602-4.
Healthcare Diagnostics provides Reference Guides (Application Sheets) for several co- 2. Brandt JT, Triplett DA, Rock WA, et al. Effect of lupus anticoagulants on the activated
agulation analyzers. The Reference Guides (Application Sheets) contain analyzer/assay- partial thromboplastin time. Arch Pathol Lab Med 1991; 115: 109-14.
specific handling and performance information which may differ from that provided in these 3. CLSI. Collection, Transport, and Processing of Blood Specimens for Testing Plasma-
Instructions for Use. In such a case, the information contained in the Reference Guides Based Coagulation Assays; Approved Guideline - Fourth Edition. CSLI document H21-
(Application Sheets) supersedes the information in these Instructions for Use. In addition, A4 [ISBN 1-56238-521-6]. CLSI, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsyl-
please also consult the instruction manual of the instrument manufacturer. vania 19087-1898 USA, 2003.
4. Poller L, Thomson JM. The activated partial thromboplastin time (aPTT) In: Jespersen
Specimen Collection and Preparation J, Bertina RR, Haverkate F, eds. A Manual of Laboratory Techniques. Kluwer Academic
To obtain the plasma, carefully mix 1 part sodium citrate solution (0.11 mol/L) with 9 parts Publishers, Hingham, MA, 1992: 35-40.
venous blood, avoiding the formation of foam. Immediately centrifuge for 15 minutes at 5. Brack MJ, More RS, Hubner PJ, Gershlick AH. The effect of low dose nitroglycerin
1500 x g, remove the supernatant plasma and keep at +15 to +25 °C until use in the test on plasma heparin concentrations and activated partial thromboplastin times. Blood
(max. 4 hours). In the US please refer to the CLSI Document H21-A4, entitled “Collection, Coagul Fibrinolysis 1993; 4: 183-6.
Transport and Processing of Blood Specimens for Coagulation Testing and Performance
of Coagulation Assays”3. 6. Harder S, Graff J, Klinkhardt U, et al. Transition from argatroban to oral anticoagulation
with phenprocoumon or acenocoumarol: effects on prothrombin time, activated partial
thromboplastin time, and Ecarin Clotting Time. Thromb Haemost 2004; 91: 1137-45.
Procedure 7. Boogen C, Niederau C, Reinauer H. Assessment of the influence of r-hirudin on coagu-
Manual Testing: lometric factor assays. Ann Hematol 1999; 78 (Suppl): 73 (Abstract).
Pipette into a test tube pre-warmed to +37 °C:
* Pathromtin is a trademark of Siemens Healthcare Diagnostics.
Citrated plasma 100 µL BCS, Ci-Trol and Dade are trademarks of Siemens Healthcare Diagnostics.
Pathromtin* SL Reagent 100 µL Sysmex is a registered trademark of SYSMEX CORPORATION.
Incubate for 2 minutes at +37 °C
Calcium chloride solution (+37 °C!) 100 µL
On adding the calcium chloride solution start the stopwatch or timer on the coagulation
analyzer and measure the coagulation time.
Internal Quality Control
Normal range: Control Plasma N, or Dade® Ci-Trol® Level 1
Pathological range: Control Plasma P, or Dade® Ci-Trol® Level 2, or Dade® Ci-Trol® Level 3

OQGS G29 E0501 (681)  Edition May 2008

Pathromtin* SL
Anwendungsbereich
Reagenz zur Bestimmung der aktivierten partiellen Thromboplastinzeit (APTT) in mensch-
lichem Citratplasma.
Diagnostische Bedeutung
Die Bestimmung der APTT mit Pathromtin* SL Reagenz ist ein schneller Suchtest auf Ge-
rinnungsstörungen des endogenen Systems und erfasst empfindlich die Faktoren VIII und
IX sowie die Kontaktfaktoren. Zusammen mit Mangelplasmen ist Pathromtin* SL Reagenz
geeignet für die Bestimmung von Einzelfaktoren des endogenen Systems und zur Diagno-
se einer Hämophilie. Außerdem kann es zur Überwachung der Heparintherapie benutzt
werden1.
Die Messung der APTT ist indiziert als Suchtest auf Gerinnungsstörungen insbesondere vor
chirurgischen Eingriffen, um potenzielle Bluter unter besonderen therapeutischen Schutz
stellen zu können.
Die Anwesenheit von unspezifischen Inhibitoren, wie der des Lupus-ähnlichen Antikoagu-
lans, können die APTT verlängern. Dieser Effekt ist jedoch variabel und ist generell als ein
natürlicher Effekt des verwendeten APTT-Reagenz bekannt2.
Prinzip der Methode
Inkubation von Plasma mit der optimalen Menge an Phospholipiden und einem Oberflä-
chenaktivator führt zur Aktivierung von Faktoren des endogenen Gerinnungssystems.
Durch Zugabe von Calcium-Ionen wird der Gerinnungsvorgang ausgelöst; gemessen wird
die Zeit bis zur Bildung eines Fibringerinnsels.
Reagenzien
Inhalt der Handelspackungen
10 x 5 ml, [REF] OQGS 29
20 x 5 ml, [REF] OQGS 35
Zusammensetzung
Pathromtin* SL Reagenz: Siliciumdioxid-Partikel (1,2 g/l), pflanzliche Phospholipide (0,25 g/l),
Natriumchlorid, Hepes, pH 7,6
Konservierungsmittel: Natriumazid (< 1 g/l)
Warnungen und Vorsichtsmaßnahmen
1. Nur zur in-vitro-diagnostischen Anwendung.
2. Enthält Natriumazid (< 0,1 %) als Konservierungsmittel. Natriumazid kann mit kupfer-
oder bleihaltigen Abflussrohren explosive Verbindungen eingehen. Entsorgen Sie bitte
ordnungsgemäß entsprechend den örtlichen Richtlinien.
Vorbereitung der Reagenzien
Pathromtin* SL muss vor erstmaligem Gebrauch durch 5 bis 8-maliges Überkopfddre-
hen resuspendiert werden und wird bei Raumtemperatur (+15 bis +25 °C) eingesetzt. Das
Resuspendieren muss alle 24 Stunden wiederholt werden, um Sedimentationseffekte zu
vermeiden!
Calciumchlorid-Lösung 0,025 mol/l auf +37 °C erwärmen.
Haltbarkeit und Lagerungsbedingungen
Pathromtin* SL Reagenz ist, ungeöffnet bei +2 bis +8 °C gelagert, bis zu dem auf dem
Etikett angegebenen Verfallsdatum verwendbar.
Nach dem erstmaligen Öffnen ist Pathromtin* SL Reagenz 2 Wochen bei +2 bis +25 °C
stabil.
Die Angaben zur Stabilität auf dem Gerät sind in den Referenzhandbüchern (Applikations-
vorschriften) für die einzelnen Gerinnungsmessgeräte aufgeführt.
Zusätzlich benötigte Materialien
- Calciumchlorid (CaCl2)-Lösung 0,025 mol/l
- Kontroll-Plasma N oder Dade® Ci-Trol® Level 1 als Kontrolle für den Normalbereich
- Kontroll-Plasma P oder Dade® Ci-Trol® Level 2 oder Dade® Ci-Trol® Level 3 als Kontrolle
für den pathologischen/therapeutischen Bereich
- Gerinnungsmessgerät (siehe “Geräte“)
- Pipetten
- Teströhrchen aus Plastik
Geräte
Pathromtin* SL kann manuell oder an automatischen Gerinnungsmessgeräten verwendet
werden. Siemens Healthcare Diagnostics stellt für verschiedene Gerinnungsmessgeräte Re-
ferenzhandbücher (Applikationsvorschriften) zur Verfügung. Diese enthalten geräte-/ testspe-
zifische Informationen zur Abarbeitung und zu Leistungsdaten, die von den Informationen in
dieser Gebrauchsanweisung abweichen können. In diesem Fall ersetzen die Informationen in
den Referenzhandbüchern (Applikationsvorschriften) die Informationen in dieser Gebrauchsan-
weisung. Bitte auch die Bedienungsanleitung des Geräteherstellers beachten!
Probenabnahme und -vorbereitung
Zur Plasmagewinnung 1 Teil Natriumcitrat-Lösung (0,11 mol/l) mit 9 Teilen Venenblut sorg-
fältig unter Vermeidung von Schaumbildung mischen. Sofort mindestens 15 Minuten bei
mindestens 1500 x g zentrifugieren, überstehendes Plasma abhebern und bis zum Test bei
+15 bis +25 °C aufbewahren (max. 4 Stunden). In den USA bitte auf das CLSI Dokument
H21-A4 mit dem Titel „Collection, Transport and Processing of Blood Specimens for Coa-
gulation Testing and Performance of Coagulation Assays“ beziehen3.
Testdurchführung
Manuelle Durchführung:
In ein auf +37 °C vorgewärmtes Teströhrchen pipettieren:
Citratplasma 100 µl
Pathromtin* SL Reagenz 100 µl
2 Minuten bei +37 °C inkubieren
Calciumchlorid-Lösung (+37 °C!) 100 µl
Mit Zugabe von Calciumchlorid-Lösung Stoppuhr bzw. Messstelle am Gerinnungsmessge-
rät starten und die Gerinnungszeit messen.
Interne Qualitätskontrolle
Normalbereich: Kontroll-Plasma N oder Dade® Ci-Trol® Level 1
Pathologischer Bereich: Kontroll-Plasma P oder Dade® Ci-Trol® Level 2 oder Dade®
Ci-Trol® Level 3
OQGS G29 E0501 (681)  Ausgabe Mai 2008
Zu Beginn eines Testlaufs, bei jedem Reagenzflaschenwechsel und mindestens einmal
während einer 8-Stunden-Schicht müssen zwei Kontrollen (eine im Normalbereich und eine
im pathologischen/therapeutischen Bereich) gemessen werden. Das Kontrollmaterial sollte
wie die Patientenplasmen behandelt werden. Jedes Labor sollte seinen eigenen Vertrau-
ensbereich für die Kontrollen ermitteln. Dieser beträgt in der Regel ±2 bis ±2,5 Standard-
abweichungen vom mittleren Kontrollwert. Liegen die Kontrollwerte außerhalb des Ver-
trauensbereichs, sind die Kontrollen, Reagenzien und das Gerät zu überprüfen. Es wird
empfohlen, vor der Ausgabe von Patientenwerten alle Maßnahmen zu dokumentieren, die
zur Feststellung und Behebung des Problems ergriffen wurden. Bei jeder neuen Reagenzi-
en- oder Kontrollencharge sollten neue Kontrollbereiche definiert werden.
Ergebnisse
Das Messergebnis wird in Sekunden angegeben.
Einschränkungen der Testdurchführung
Über Störungen der APTT wird in der Literatur berichtet4-6. Therapeutische Dosen von Hiru-
din oder anderen direkten Thrombininhibitoren können zu verlängerten Gerinnungszeiten
führen7. Die Ergebnisse können außerdem durch das gewählte Antikoagulans (z. B. Oxalat
anstelle von Citrat) beeinflusst werden, sowie durch die Beschaffenheit der Probe (z. B. hä-
molytisch, lipämisch, künstliche Ernährung, usw.), welche insbesonders bei der optischen
Bestimmung der APTT von Bedeutung ist. Eine abnahmebedingte Voraktivierung der Probe
kann zu falschen Ergebnissen führen. Im Abschnitt über Probennahme und -handhabung
des CLSI Dokuments H21-A4 wird empfohlen, Teströhrchen mit nicht-benetzbarer Oberflä-
che (z. B. Plastik) anstelle von Glasröhrchen einzusetzen.
Siemens hat den Einsatz dieser Reagenzien auf verschiedenen Analysengeräten auf opti-
male Produktleistung und Einhaltung der Produktspezifikationen überprüft. Vom Benutzer
vorgenommene Änderungen werden von Siemens nicht unterstützt, da sie die Leistung des
Systems und die Testergebnisse beeinflussen können. Es liegt in der Verantwortung des
Benutzers, Änderungen an diesen Anleitungen oder die Verwendung dieser Reagenzien
auf anderen als in den Applikationsvorschriften von Siemens oder diesen Gebrauchsanwei-
sungen genannten Analysengeräten zu validieren.
Resultate dieses Tests sollten stets in Verbindung mit der Vorgeschichte des Patienten,
dem klinischen Bild und anderen Untersuchungsergebnissen interpretiert werden.
Referenzbereiche
Referenzintervalle variieren von Labor zu Labor in Abhängigkeit von der zu untersuchenden
Population und den angewendeten Arbeitstechniken, Methoden, Geräten und Reagenz-
chargen. Daher sollte jedes Labor auf der Grundlage der jeweils angewendeten Arbeits-
techniken, Methoden, Geräte und Reagenzchargen eigene Referenzbereiche ermitteln,
bzw. die Referenzbereiche nach einem Wechsel der aufgeführten Parameter verifizieren.
In einer Studie an offensichtlich gesunden Probanden wurden mit einer spezifischen Char-
ge Pathromtin* SL Reagenz folgende Werte erhalten:
Median 90 % Referenzintervall
5. Perzentile 95. Perzentile
111 Probanden Sysmex® CA-1500 30,9 sec. 26,4 sec. 37,5 sec.
111 Probanden BCS® System 30,2 sec. 25,9 sec. 36,6 sec.
Für andere Kollektive, wie z. B. pädiatrische Patienten, sollten gegebenenfalls eigene Re-
ferenzbereiche ermittelt werden.
Leistungsmerkmale des Tests
Präzision
Auf einem opto-densitometrischen Messverfahren wurden Präzisionsuntersuchungen
an normalen und pathologischen Plasmen, sowie einem Heparin-Plasmapool, über
5 Tage, zweimal täglich (n = 8 Bestimmungen pro Tag), mit insgesamt 40 Bestimmungen
durchgeführt. Der Variationskoeffizient in der Serie wurde aus den einzelnen 4-fach-Bestim-
mungen berechnet. Er lag zwischen 0,6 und 2,0 %, während der Variationskoeffizient von
Tag zu Tag zwischen 0,3 und 2,8 % lag.
Methodenvergleich
Bei einem Vergleich von APTT-Bestimmungen mit Pathromtin* SL Reagenz und einem
anderen APTT-Reagenz ergab sich mit Pathromtin* SL Reagenz ein Korrelationskoeffizient
von 0,96 bei einem y-Achsenabschnitt von 2,1 sec. und einer Steigung von 0,99.
Literatur
Siehe Seite 1.
* Pathromtin ist ein Warenzeichen von Siemens Healthcare Diagnostics.
BCS, Ci-Trol und Dade sind Warenzeichen von Siemens Healthcare Diagnostics.
Sysmex ist eine eingetragene Marke der SYSMEX CORPORATION.
Pathromtin* SL
Domaine d’utilisation
Réactif pour la détermination du Temps de Céphaline Activé (TCA) dans le plasma citraté
humain.
Intérêt diagnostique
La détermination du TCA à l'aide de Réactif Pathromtin* SL est un test de dépistage ra-
pide des troubles du système endogène de la coagulation, sensible aux Facteurs VIII, IX, et
aux facteurs de la phase contact. Utilisé en association avec des plasmas exempts, Réactif
Pathromtin* SL permet le dosage des différents facteurs du système endogène de la coagu-
lation, ainsi que le diagnostic d'hémophilie. Il peut également être utilisé pour la surveillance
des traitements à l'héparine1.
La détermination du TCA est indiquée comme test de dépistage des troubles de la coagula-
tion, en particulier avant une intervention chirurgicale, afin de pouvoir prendre les mesures
thérapeutiques appropriées chez les patients susceptibles de faire une hémorragie.
La présence d’inhibiteurs non spécifiques, tel l’anticoagulant de type lupus, peut allonger
le TCA, même si cet effet est variable et généralement considéré comme lié à la nature du
réactif TCA utilisé2.
Principe de la méthode
L'incubation du plasma avec une quantité optimale de phospholipides et d'un activateur de
surface entraîne l'activation des facteurs du système endogène de la coagulation. L'addition
d'ions calcium déclenche le processus de la coagulation. On mesure alors le temps écoulé
jusqu'à la formation du caillot de fibrine.
Réactifs
Contenu des coffrets
10 x 5 ml, [REF] OQGS 29
20 x 5 ml, [REF] OQGS 35
Composition
Réactif Pathromtin* SL : particules de dioxyde de silicium (1,2 g/l), phospholipides végé-
taux (0,25 g/l), chlorure de sodium, Hépès, pH 7,6
Agent de conservation : azide de sodium (< 1 g/l)
Mises en garde et précautions d’emploi
1. Ne doit être employé que pour un usage in vitro.
2. Contient de l’azite de sodium (< 0,1 %) comme conservateur. L’ azite de sodium peut
réagir avec les tuyaux d’évacuation en cuivre ou en plomb et former des composés
explosifs. L’évacuer conformément aux réglementations locales.
Préparation des réactifs
Avant son premier emploi, remettre le Réactif Pathromtin* SL en suspension en retournant
le flacon 5 à 8 fois, et l’utiliser à la température ambiante (+15/+25 °C). La remise en sus-
pension doit être répétée toutes les 24 heures pour éviter tout effet de sédimentation !
Porter la Solution de chlorure de calcium 0,025 mol/l à +37 °C.
Stabilité et conditions de conservation
Conservé non ouvert à +2/+8 °C, Réactif Pathromtin* SL peut être utilisé jusqu’à la date
d’expiration indiquée sur l’étiquette.
Après première ouverture, il reste stable 2 semaines à +2/+25 °C.
Les données de stabilité sur appareil sont indiquées dans les manuels de référence (proto-
coles d’adaptation) des différents appareils de coagulation.
Autres réactifs nécessaires
- Solution de chlorure de calcium (CaCl2) 0,025 mol/l
- Plasma de contrôle N ou Dade® Ci-Trol® niveau 1 comme contrôle dans le domaine
normal
- Plasma de contrôle P ou Dade® Ci-Trol® niveau 2 ou Dade® Ci-Trol® niveau 3 comme
contrôle dans le domaine pathologique/thérapeutique
- Appareil de coagulation (cf. « Appareils »)
- Pipettes
- Tubes à essai en plastique
Appareils
Pathromtin* SL peut être utilisé manuellement ou sur des automates de coagulation.
Siemens Healthcare Diagnostics met à la disposition de ses clients des manuels de ré-
férence (protocoles d’adaptation) pour différents appareils de coagulation. Ces manuels
contiennent des informations spécifiques à chaque appareil et aux tests, fournissant des
données de travail et de performance qui peuvent être différentes de celles indiquées dans
cette fiche technique. Dans ce cas-là, utiliser les données du manuel de référence (proto-
cole d’adaptation) et non celles de cette fiche technique. Respecter les instructions d’utili-
sation du fabricant de l’automate utilisé !
Prélèvement et préparation des échantillons
Pour obtenir les plasmas, prélever 1 volume de solution de citrate de sodium (0,11 mol/l) avec
9 volumes de sang veineux, et mélanger avec précaution en évitant la formation de mousse.
Centrifuger aussitôt pendant au moins 15 min à au moins 1500 x g, prélever le plasma surna-
geant, et le conserver à +15/+25 °C (max. 4 heures) jusqu’au test. Aux USA, se reporter au
document CLSI H21-A4 intitulé «Collection, Transport and Processing of Blood Specimens
for Coagulation Testing and Performance of Coagulation Assays»3.
Réalisation du test
Méthode manuelle :
Distribuer dans un tube à essai préchauffé à +37 °C :
Plasma citraté 100 µl
Réactif Pathromtin* SL 100 µl
Laisser incuber 2 min à +37 °C
Solution de chlorure de calcium (+37 °C !) 100 µl
Déclencher le chronomètre ou la chambre de mesure de l'automate de coagulation au
moment de l'addition de la Solution de chlorure de calcium, et mesurer le temps de coa-
gulation.
OQGS G29 E0501 (681)  Edition Mai 2008
Contrôle de qualité interne
Domaine normal : Plasma de contrôle N ou Dade® Ci-Trol® niveau 1
Domaine pathologique : Plasma de contrôle P ou Dade® Ci-Trol niveau 2 ou Dade® Ci-
Trol® niveau 3
Au début de chaque série, à chaque changement de flacon de réactif, et au moins toutes
les 8 heures de travail, mesurer deux contrôles (un dans le domaine normal et un dans
le domaine pathologique/thérapeutique). Traiter les contrôles comme des échantillons de
patients. Chaque laboratoire doit déterminer ses propres domaines de confiance pour les
contrôles. Ils sont généralement de ±2 à ±2,5 déviation standard (DS) par rapport à la valeur
moyenne du contrôle. Si les valeurs obtenues pour les contrôles sortent de leur domaine de
confiance respectif, procéder à une vérification des contrôles, des réactifs et de l’appareil.
Il est recommandé de documenter toutes les mesures prises pour identifier et résoudre le
problème rencontré avant de rendre les résultats des patients. Etablir de nouveaux domai-
nes de confiance à chaque changement de lot de réactif ou de contrôle.
Résultats
Les résultats sont exprimés en secondes.
Limites de réalisation du test
La littérature fait état de perturbations du TCA4-6. Des doses thérapeutiques d’Hirudin ou
d’autres inhibiteurs directs de la thrombine peuvent entraîner un allongement des temps
de coagulation7. Les résultats peuvent également être influencés par l’anticoagulant choisi
(par ex. de l’oxalate au lieu du citrate), ainsi que par l’état de l’échantillon (par ex. hémolyti-
que, lipémique, alimentation artificielle, etc.), tout particulièrement en cas de détermination
optique du TCA. Une préactivation de l’échantillon due à la technique de prélèvement peut
entraîner de faux résultats. Selon le document CLSI H21-A4 sur le prélèvement et le traite-
ment des échantillons, il est recommandé d’utiliser des tubes à essai non mouillables (par
ex. en plastique) au lieu de tubes en verre.
Siemens a validé l’utilisation de ces réactifs sur plusieurs analyseurs afin d’optimiser les
performances du produit et répondre à ses spécifications. Les modifications apportées par
l’utilisateur ne sont pas sous la responsabilité de Siemens dans la mesure où elles peuvent
affecter les performances du système et les résultats des dosages. Il est de la respon-
sabilité de l’utilisateur de valider toutes modifications apportées à ces instructions ou à
l’utilisation des réactifs sur les analyseurs autres que ceux mentionnés dans les protocoles
d’application Siemens ou dans la présente notice d’utilisation.
Les résultats de ce test doivent toujours être interprétés en rapport avec les antécédents
médicaux du patient, les signes cliniques et autres constatations.
Domaines de référence
Les intervalles de référence varient d’un laboratoire à l’autre selon les populations étudiées,
ainsi que selon les techniques de travail, les méthodes, les appareils et les réactifs utilisés.
Aussi chaque laboratoire doit-il déterminer ses propres domaines de référence en fonction
des techniques de travail et des méthodes qu’il applique, ainsi que des appareils et des
lots de réactifs qu’il utilise, et vérifier ses domaines de référence après tout changement
d’un des paramètres.
Dans le cadre d’une étude effectuée sur des sujets apparemment sains, les valeurs suivan-
tes ont été obtenues avec un lot spécifique de Réactif Pathromtin* SL :
médiane 90 % de l’intervalle de référence
5ème percentile 95ème percentile
111 échantillons sur Sysmex® CA-1500 30,9 sec 26,4 sec 37,5 sec
111 échantillons sur BCS® System 30,2 sec 25,9 sec 36,6 sec
Pour d’autres collectifs de patients, par ex. pédiatriques, il peut être nécessaire de détermi-
ner un domaine de référence spécifique.
Caractéristiques du test
Précision
Une étude de précision a été effectuée selon un procédé photo-densitométrique sur des
plasmas normaux et pathologiques, ainsi que sur un pool de plasmas héparinés. Les
échantillons ont été testés sur 5 jours, deux fois par jour (n = 8 dosages par jour). Un total
de 40 dosages a été effectué. Les coefficients de variation de répétabilité ont été calculés à
partir des dosages en quadruple, et trouvés entre 0,6 et 2,0 %. Les coefficients de variation
de reproductibilité ont été trouvés entre 0,3 et 2,8 %
Comparaison avec d’autres méthodes
La comparaison des dosages de TCA effectués avec Réactif Pathromtin* SL et de ceux
effectués avec un autre réactif TCA a permis d’obtenir pour Réactif Pathromtin* SL un
coefficient de corrélation de 0,96, avec une intersection de l’axe des y à 2,1 sec. et une
pente de 0,99.
Littérature
Cf. Page 1.
* Pathromtin est une marque commerciale de Siemens Healthcare Diagnostics.
BCS, Ci-Trol et Dade sont des marques commerciales de Siemens Healthcare Diagnostics.
Sysmex est une marque déposée de SYSMEX CORPORATION.
Pathromtin* SL
Settori d'impiego
Reagente per la determinazione del tempo di tromboplastina parziale attivato (APTT) nel
plasma citratato umano.
Significato diagnostico
Il Reagente Pathromtin* SL permette una rapida valutazione dei disturbi legati al sistema
endogeno della coagulazione e rivela con sensibilità deficit dei fattori VIII, IX e dei fattori di
contatto. Utilizzato con plasmi carenti, il Reagente Pathromtin* SL è adatto per la determi-
nazione dei singoli fattori della via intrinseca e per la diagnosi di emofilia. Inoltre, può essere
impiegato nel monitoraggio della terapia eparinica1.
La misura dell'APTT è indicata per rilevare potenziali soggetti emofilici, in modo da sottopor-
li ad un adeguato trattamento terapeutico prima di un intervento chirurgico.
La presenza di inibitori non-specifici, come l’anticoagulante lupus-like, possono prolungare
l’APTT. Questo effetto, però, è variabile e generalmente noto come un effetto collegato alla
natura del reagente APTT utilizzato2.
Principio del metodo
L'incubazione del plasma con una quantità ottimale di fosfolipidi e di un attivatore di super-
ficie determina l'attivazione dei fattori del sistema endogeno della coagulazione. L’aggiunta
di ioni calcio innesca il processo della coagulazione; viene quindi misurato il tempo di for-
mazione del coagulo di fibrina.
Reagenti
Contenuto delle confezioni
10 x 5 mL, [REF] OQGS 29
20 x 5 mL, [REF] OQGS 35
Composizione
Reagente Pathromtin* SL: particelle di biossido di silicio (1,2 g/L), fosfolipidi vegetali
(0,25 g/L), cloruro di sodio, Hepes, pH 7,6
Conservante: sodio azide (< 1 g/L)
Avvertenze e precauzioni
1. Solo per uso diagnostico in-vitro.
2. Contiene azoturo di sodio (< 0,1 %) come conservante. L’azoturo di sodio può reagire
con le tubazioni in rame o piombo nelle linee di scarico formando composti esplosivi.
Provvedere allo smaltimento in modo appropriato e secondo le normative locali.
Preparazione dei reagenti
Il Reagente Pathromtin* SL deve essere delicatamente capovolto (da 5 a 8 volte) per
miscelarlo prima del primo utilizzo e deve essere utilizzato a temperatura ambiente
(da +15 a +25 °C). Ogni 24 ore di utilizzo, il reagente deve essere capovolto per risospen-
dere l’eventuale sedimento.
Riscaldare la soluzione di cloruro di calcio 0,025 mol/L a +37 °C.
Conservazione e validità
Prima dell'apertura il Reagente Pathromtin* SL può essere utilizzato fino alla data di
scadenza indicata sull’etichetta del flacone se conservato, sigillato, a +2 a +8 °C. Dopo
la prima apertura il Reagente Pathromtin* SL è stabile per 2 settimane se conservato a
+2 a +25 °C.
Le informazioni riguardanti la stabilità on-board sono specificate nelle Reference Guides
(Protocolli Applicativi) per i diversi analizzatori per coagulazione.
Materiale necessario, ma non fornito
- Soluzione di Calcio Cloruro (CaCl2) 0,025 mol/L
- Control Plasma N, oppure Dade® Ci-Trol® Livello 1 come controllo nell’intervallo normale
- Control Plasma P, oppure Dade® Ci-Trol® Livello 2, oppure Dade® Ci-Trol® Livello 3
come controllo per l’intervallo patologico
- Analizzatore per coagulazione (vedere “Strumentazione”)
- Pipette
- Provette di plastica
Strumentazione
Pathromtin* SL può essere utilizzato manualmente oppure su analizzatori per coagulazione
automatici. Siemens Healthcare Diagnostics offre Reference Guides (Protocolli Applicativi)
per numerosi analizzatori per coagulazione. Le Reference Guides (Protocolli Applicativi)
contengono informazioni di gestione e prestazionali analizzatore/test-specifiche che pos-
sono differire da quelle offerte nella presenti istruzioni per l’uso. In tal caso, le informazioni
contenute nelle Reference Guides (Protocolli Applicativi) prevalgono sulle informazioni del-
le presenti Istruzioni per l’Uso. Inoltre, si raccomanda di consultare il manuale di istruzioni
del produttore dello strumento.
Raccolta e preparazione del campione
Per ottenere il plasma mescolare accuratamente 1 parte di soluzione di citrato sodico
(0,11 mol/L) con 9 parti di sangue venoso, evitando la formazione di schiuma. Centrifugare
immediatamente per 15 minuti a 1500 x g, rimuovere il plasma sovranatante e mantenerlo
da +15 a +25 °C fino all’utilizzo nel test (max. 4 ore). Negli USA fare riferimento al Documen-
to CLSI H21-A4, intitolato "Raccolta, Trasporto e Analisi di Campioni di Sangue per l’Analisi
della Coagulazione e l’Esecuzione di Test Coagulativi"3.
Esecuzione del test
Procedura Manuale
Distribuire in una provetta preriscaldata a +37 °C:
Plasma citrato 100 µL
Reagente Pathromtin* SL 100 µL
incubare per 2 minuti a +37 °C
Soluzione di cloruro di calcio (+37 °C!) 100 µL
Dopo l’aggiunta della soluzione di cloruro di calcio azionare il cronometro o il dispositivo di mi-
sura sull'analizzatore per coagulazione e determinare il tempo di formazione del coagulo.
OQGS G29 E0501 (681)  Edizione Maggio 2008
Controllo di qualità interno
Intervallo normale: Control Plasma N, oppure Dade® Ci-Trol® Livello 1
Intervallo patologico: Control Plasma P, oppure Dade® Ci-Trol® Livello 2, oppure Dade®
Ci-Trol® Livello 3
Due controlli (uno per l’intervallo normale e uno per l’intervallo patologico/terapeutico) devo-
no essere misurati all’inizio di ogni ciclo analitico, dopo ogni cambio di flacone del reagente,
e almeno una volta ogni 8 ore. Il materiale di controllo deve essere preparato e processato
allo stesso modo dei campioni dei pazienti. Ogni laboratorio dovrebbe definire i propri in-
tervalli di accettabilità per i controlli. L’intervallo è generalmente da ±2 a ±2,5 deviazioni
standard dal valore medio del controllo. Se i valori dei controlli sono al di fuori dell’intervallo
di accettabilità, occorre verificare i controlli, i reagenti e lo strumento. Prima di refertare i
valori dei pazienti, si raccomanda di documentare tutte le azioni intraprese per identificare
e correggere il problema. Nuovi intervalli di controllo dovrebbero essere definiti per ogni
nuovo lotto di reagente o di controllo.
Risultati
Il risultato viene dato in secondi.
Limitazioni della esecuzione del test
Le interferenze per l’APTT sono descritte nelle referenze bibliografiche4-6. Dosi terapeutiche
di irudina o di altri inibitori diretti della trombina possono allungare i tempi di coagulazione7.
La scelta dell’anticoagulante (es., ossalato invece di citrato) e la condizione dei campioni
(es. emolizzati, lipemici, nutrizione parenterale, ecc.) possono influenzare i risultati. L’ultima
condizione vale in particolare per le misurazioni dell’APTT con strumentazione ottica. La
preattivazione del campione a causa della tecnica di prelievo carente può portare a falsi
risultati. In riferimento alla sezione “Gestione e Raccolta dei Campioni” del documento CLSI
H21-A4 si raccomanda di utilizzare provette con parete idrofobica (es. plastica) piuttosto
che provette di vetro.
Siemens ha validato l’uso di questi reagenti su vari analizzatori per ottimizzare le prestazioni
e rispettare le specifiche dei prodotti. Le modifiche definite dall’utente non sono supportate
da Siemens poiché possono influire sulle prestazioni del sistema e sui risultati del test.
Pertanto è responsabilità dell’utente validare tutte le modifiche apportate a queste istruzioni,
l’uso dei reagenti su analizzatori diversi da quelli inclusi nei fogli di istruzioni o nelle istruzioni
d’uso fornite da Siemens.
I risultati di questo test devono essere sempre interpretati alla luce della anamnesi del
paziente, della presentazione clinica e valutando contestualmente l’esito di altri accerta-
menti.
Valori Attesi
Gli intervalli di riferimento variano da laboratorio a laboratorio secondo la popolazione af-
fluente e secondo la tecnica, il metodo, la strumentazione ed il lotto di reagente utilizzati.
Pertanto, ogni laboratorio deve definire i propri intervalli di riferimento o verificarli qualora
cambi una o più delle variabili menzionate.
In uno studio su soggetti evidentemente sani utilizzando un lotto specifico di Reagente
Pathromtin* SL, sono stati rilevati i seguenti valori:
Mediana Intervallo di riferimento al 90%
5° Percentile 95° Percentile
111 soggetti Sysmex® CA-1500 30,9 sec. 26,4 sec. 37,5 sec.
111 soggetti Sistema BCS® 30,2 sec. 25,9 sec. 36,6 sec.
Anche gli intervalli di riferimento per altre popolazioni quali i gruppi pediatrici devono essere
definiti ove richiesto.
Caratteristiche del test
Precisione
Sono state eseguite delle verifiche di precisione mediante procedimento di misurazio-
ne ottico-densitometrico su plasmi normali e patologici, e su un pool di plasmi epariniz-
zati, per 5 giorni, due volte al giorno (n = 8 determinazioni al giorno), per un totale di
40 determinazioni. La precisione intra-ciclo è stata calcolata dai valori di precisione di
n = 4 soggetti su cicli quotidiani per 5 giorni. La precisione intra-ciclo è risultata compresa
nell’intervallo CV 0,6 - 2,0 %, mentre la precisione inter-ciclo è risultata CV 0,3 - 2,8 %.
Confronto tra i metodi
Confrontando i valori di APTT ottenuti con il Reagente Pathromtin* SL e i valori ottenuti
con altri reagenti per APTT è stato determinato un coefficiente di correlazione di 0,96 con
intercetta 2,1 sec. e coefficiente angolare di 0,99.
Bibliografia
Vedi pagina 1.
* Pathromtin è un marchio di Siemens Healthcare Diagnostics.
BCS, Ci-Trol e Dade sono marchi di Siemens Healthcare Diagnostics.
Sysmex è un marchio registrato di SYSMEX CORPORATION.
Pathromtin* SL
Campos de aplicación
Reactivo para la determinación del tiempo de tromboplastina parcial activado (APTT) en
plasmas humanos citratados.
Significado diagnóstico
La determinación del APTT con Reactivo Pathromtin* SL es un test rápido para la búsqueda
de anomalías del sistema endógeno de la coagulación, que además registra con precisión
tanto los factores VIII y IX como los factores de contacto. Pathromtin* SL, en colaboración con
plasmas deficientes, es apropiado para la determinación individual de los factores del sistema
endógeno y para el diagnóstico de la hemofilia. Además, puede también emplearse para el
control de la terapéutica heparínica1.
La medida de APTT es indicada como test de búsqueda de los trastornos de la coagu-
lación, especialmente antes de intervenciones quirúrgicas, con el fin de poder someter a
tratamientos preventivos a hemofílicos en potencia.
La presencia de inhibidores no específicos, como los anticuoagulantes similares al lúpico, puede pro-
longar el APTT. Este efecto es, sin embargo, variable y es generalmente reconocido como un efecto
más relacionado con la naturaleza del reactivo APTT empleado2.
Principio del método
La incubación del plasma con cantidades óptimas de fosfolípidos y un activador de super-
ficie conduce a una activación de los factores del sistema endógeno de la coagulación.
Mediante la agregación de iones de calcio se desencadena el proceso de coagulación; se
mide el tiempo transcurrido hasta la formación de un coágulo de fibrina.
Reactivos
Contenido de los envases comerciales
10 x 5 ml, [REF] OQGS 29
20 x 5 ml, [REF] OQGS 35
Composición
Reactivo Pathromtin* SL: Partículas de bióxido de silicio (1,2 g/l), fosfolípidos vegetales
(0,25 g/l), cloruro de sodio, Hepes, pH 7,6
Medio de conservación: Azida de sodio (< 1 g/l)
Advertencias y medidas de seguridad
1. Sólo para ser utilizado en diagnósticos in-vitro.
2. Contiene azida de sodio (< 0,1 %) como conservante. La azida de sodio puede reaccio-
nar con tuberías de cobre o de plomo en los conductos de drenaje y formar compuestos
explosivos. Elimine este producto de forma apropiada conforme a la normativa local.
Preparación de reactivos
El reactivo Pathromtin* SL, antes de usarse por primera vez, debe resuspenderse in-
vertiendo el frasco de 5 a 8 veces y debe ser usado a temperatura ambiente (entre +15 y
+25 °C). La resuspensión se debe repetir cada 24 horas, para evitar efectos de sedimen-
tación.
Calentar la solución de cloruro de calcio 0,025 mol/l a +37 °C.
Estabilidad y almacenaje
El Reactivo Pathromtin* SL, conservado cerrado entre +2 y +8 °C, es estable hasta la fecha
de vencimiento dada en la etiqueta.
Una vez abierto Reactivo Pathromtin* SL es estable durante 2 semanas si se mantiene
entre +2 y +25 °C.
Los datos de estabilidad están especificados en el manual de referencia (hojas de aplica-
ción) para cada uno de los analizadores de coagulación.
Materiales adicionales necesarios, pero no incluídos
- Solución de cloruro de calcio (CaCl2) 0,025 mol/l
- Plasma control N o Dade® Ci-Trol® nivel 1 como control para el intervalo normal
- Plasma control P o Dade® Ci-Trol® nivel 2 o Dade® Ci-Trol® nivel 3 como control para
los intervalo patológico/terapéutico
- Analizadores de coagulación (ver "Analizadores")
- Pipetas
- Tubos de ensayo de plástico
Analizadores
El reactivo Pathromtin* SL se puede usar en analizadores de coagulación manuales o
automáticos. Siemens Healthcare Diagnostics pone a disposición manuales de referencia
(hojas de aplicación) para los diferentes analizadores de coagulación. Estas hojas contie-
nen información específica analizador /prueba , que pueden diferenciarse de la información
dada en este folleto . En este caso, la información contenida en los manuales de referencia
(hojas de aplicación) reemplaza la información de este folleto. Por favor consulte el manual
de instrucciones del fabricante del analizador.
Extracción y preparación de las muestras
Para obtener el plasma, mezclar cuidadosamente 1 parte de solución de citrato de sodio
(0,11 mol/l) con 9 partes de sangre venosa, evitando la formación de espuma. Centrifugar
inmediatamente por lo menos 15 min a un mínimo de 1500 x g, separar el plasma sobrena-
dante y mantenerlo entre +15 y +25°C hasta la realización de la prueba (máx. 4 horas). En
USA, por favor, referirse al documento H21-A4 del CLSI con el título “Collection, Transport
and Processing of Blood Specimens for coagulation Testing and Performance of Coagu-
lation Assays”3.
Método
Procedimiento manual:
En un tubo de ensayo precalentado a +37 °C, pipetear:
Plasma citratado 100 µl
Reactivo Pathromtin* SL 100 µl
Incubar 2 min. a +37 °C
Solución de cloruro de calcio (¡+37 °C!) 100 µl
Agregar la solución de cloruro de calcio y simultáneamente accionar el cronómetro o el aparato
de medida de la coagulación y medir el tiempo de coagulación.
OQGS G29 E0501 (681)  Edición Mayo 2008
Control de calidad interno
Intervalo normal: Plasma control N o Dade® Ci-Trol® nivel 1
Intervalo patológico: Plasma control P o Dade® Ci-Trol® nivel 2 o Dade® Ci-Trol® nivel 3
Se deben medir dos niveles de control (uno en el intervalo normal y uno en el intervalo
patológico/terapéutico), al comienxo de cada serie de análisis , en cada cambio de frasco
del reactivo y por lo menos cada 8 horas en un día de trabajo. El material de control debe
ser tratado como las muestras de pacientes. Cada laboratorio debe determinar sus propios
intervalos de confianza para los controles. Este intervalo, por lo general se encuentra entre
±2 a ±2,5 desviaciones estándard (s) del valor promedio del control. Si los resultados de las
medidas del control se encuentran fuera del intervalo de confianza, se deben comprobar
los controles, los reactivos y los instrumentos. Antes de reportar los resultados de los pa-
cientes, se recomienda documentar todas las medidas tomadas para identificar y eliminar
el problema. Para cada nuevo lote de reactivos o de controles se debe definir un nuevo
intervalo de referencia.
Resultados
Los resultados de las medidas se deben dar en segundos.
Limitaciones del procedimiento
Sobre alteraciones del APTT se informa en la literatura4-6. Dosis terapéuticas de hirudina
o de otros inhibidores directos de la trombina pueden conducir a tiempos prolongados
de coagulación7. Los resultados pueden también ser influenciados por el anticoagulante
escogido (por ej., oxalato en lugar de citrato), así como también, por las condiciones de la
muestra (por ej., hemolítica, lipémica, alimentación parenteral, etc), la cual es de gran
significado en la determinación óptica del APTT. Una preactivación dependiente de la toma
de la muestra puede conducir a resultados falsos. En la sección sobre Toma y manejo de
las muestras del documento H21-A4 del CLSI se recomienda usar tubos de ensayo con una
superficie no mojable (por ej., plástico) en lugar de tubos de vidrio.
Siemens ha validado el uso de los reactivos en varios analizadores para optimizar el ren-
dimiento del producto y cumplir con las especificaciones del mismo. Las modificaciones
definidas por el usuario no están garantizadas por Siemens dado que pueden afectar al
rendimiento del sistema y a los resultados del ensayo. Es responsabilidad del usuario
validar las modificaciones realizadas a estas instrucciones o el uso de los reactivos en
analizadores distintos a los incluidos en las hojas de aplicaciones de Siemens o en estas
instrucciones de uso.
Los resultados de esta prueba deberán interpretarse siempre de acuerdo con la historia
clínica del paciente, la sintomatologia clínica y otras observaciones.
Rangos de referencia
Intervalos de referencia
El intervalo de referencia varía de laboratotio a laboratorio, dependiendo de la población
investigada y de las técnicas de trabajo, métodos, instrumentos y lotes de referencia utiliza-
dos. Por esta razón, cada laboratorio debe determinar sus propios intervalos de referencia
basados en las correspondientes técnicas de trabajo, métodos, instrumentos y lotes de
referencia utilizados, como también el verificar el intervalo de referencia al cambiar alguno
de los parametros arriba mencionados.
En un estudio realizado con individuos presuntamente sanos, para un lote específico del
reactivo Pathromtin* SL , se obtuvieron los siguientes resultados:
Mediana 90% Intervalo de referencia
5. percentil 95. percentil
111 Individuos Sysmex® CA-1500 30,9 seg. 26,4 seg. 37,5 seg.
111 Indivicuos Sistema BCS® 30,2 seg. 25,9 seg. 36,6 seg.
Para otros colectivos, como por ej., pacientes pediátricos, se debe determinar, en cada
caso , su propio intervalo de referencia.
Características de la prueba
Precisión
Con un procedimiento de medición optodensitométrico se realizaron medidas de precisión
de plasmas normales, patológicos y de un pool de plasmas heparínicos durante 5 días,
dos veces al día (n = 8 determinaciones por día), con un total de 40 determinaciones. El
coeficiente de variación en la serie se obtuvo a partir de los valores de una determinación
cuádruple, dando un resultado entre 0,6 y 2,0 %, mientras el coeficiente de variación día
a día fue entre 0,3 y 2,8 %.
Comparación de métodos
Al comparar una determinación de APTT con Reactivo Pathromtin* SL y una con otro reac-
tivo para APTT se encontró para Reactivo Pathromtin* SL un coeficiente de correlación de
0,96 para un corte de eje-y de 2,1 seg. y una pendiente de 0,99.
Bibliografía
Ver página 1.
* Pathromtin es una marca comercial de Siemens Healthcare Diagnostics.
BCS, Ci-Trol y Dade son marcas comerciales de Siemens Healthcare Diagnostics.
Sysmex es una marca registrada de SYSMEX CORPORATION.
 OQGS G29 E0501 (681)

Pathromtin* SL Limitações do procedimento

Campo de aplicação
Reagente para determinação do tempo de tromboplastina parcial activado (TTPA) em plas-
mas humanos citratados.
Significado diagnóstico
A determinação do TTPA com Reagente Pathromtin* SL é um teste rápido para detecção de trans-
tornos do sistema intrínseco da coagulação e que detecta de modo sensível os factores VIII e IX,
assim como os factores de contacto. Usado com plasmas defi­citários, Reagente Pathromtin* SL é
um instrumento apropriado para a determinação de factores singulares do sistema intrínseco e o
diagnóstico da hemofilia. Além disso, pode ser utilizado para o controlo da terapia heparínica1.
A medição do TTPA está indicada como teste de triagem de perturbações da coagulação
especialmente antes de intervenções cirúrgicas, a fim de poder submeter potenciais hemo-
fílicos a um tratamento preventivo.
A presença de inibidores não específicos, como os anticoagulantes lúpicos, pode prolongar o TTPA,
mas este efeito é variável e geralmente atribuido à natureza do reagente de TTPA utilizado2.
Princípio metodológico
A incubação do plasma com quantidades óptimas de fosfolípidos e um activador de super-
fície leva a uma activação dos factores do sistema intrínseco da coagulação. Mediante a
agregação de iões de cálcio é desencadeado o processo de coagulação. Mede-se o tempo
transcurso até à formação de um coágulo de fibrina.
Reagentes
Conteúdo da embalagem comercial
10 x 5 ml, [REF] OQGS 29
20 x 5 ml, [REF] OQGS 35
Composição
Reagente Pathromtin* SL: Partículas de dióxido de silício (1,2 g/l), fosfolípidos vegetais
(0,25 g/l), cloreto de sódio, Hepes, pH 7,6
Agente de conservação: azida sódica (< 1 g/l)
Advertências e medidas de precaução
1. Só para uso diagnóstico in-vitro.
2. Contém azida de sódio (< 0,1 %) como conservante. A azida de sódio pode reagir com os
tubos de cobre ou de chumbo das canalizações de esgotos formando compostos explosi-
vos. Elimine este produto de forma correcta e de acordo com as regulamentações locais.
Preparação dos reagentes
Antes do primeiro uso, o Pathromtin* SL tem de ser resuspenso invertendo o frasco 5 a
8 vezes e é utilizado à temperatura ambiente (+15 a +25 °C) . A resuspensão tem de ser
repetida a cada 24 horas, para evitar os efeitos da sedimentação!
Aquecer a solução de cloreto de cálcio 0,025 mol/l a +37 °C.
Estabilidade e condições de conservação
Não aberto, e conservado entre +2 e +8 ° C, Reagente Pathromtin* SL mantém-se utilizá-
vel até à data de validade indicada no rótulo.
Uma vez aberto, mantém-se estável durante 2 semanas à temperatura de +2 a +25 °C.
As indicações sobre a estabilidade no aparelho estão mencionadas nos manuais de refe-
rência (instruções de aplicação) para os diferentes coagulómetros.
Outros materiais necessários
- Solução de cloreto de cálcio (CaCl2) 0,025 mol/l
- Plasma de controlo N ou Dade® Ci-Trol® Level 1 como controlo para o intervalo normal
- Plasma de controlo P ou Dade® Ci-Trol® Level 2 ou Dade® Ci-Trol® Level 3 como con-
trolo para o intervalo patológico/terapêutico
- Coagulómetro (veja “Aparelhos“)
- Pipetas
- Tubinhos de ensaio em plástico
Aparelhos
Pathromtin* SL pode ser usado manualmente ou em coagulómetros automáticos. A Siemens
Healthcare Diagnostics disponibiliza livros de referência (instruções de aplicação) para os diversos
coagulómetros. Estes contêm informações específicas dos aparelhos/testes sobre o processamen-
to e características de performance que podem divergir das informações deste manual de instru-
ções. Neste caso, as informações dos livros de referência substituem as informações constantes
neste manual de instruções. Por favor observe o manual de instruções do fabricante do aparelho!
Colheita e preparação de amostras
Para obter o plasma, misturar cuidadosamente 1 parte de so­lução de citrato de sódio
(0,11 mol/l) com 9 partes de san­gue venoso, evitando formação de espuma. Centrifugar,
imediatamente, durante 15 min. no mínimo a 1500 x g, recolher o plasma sobrenadante
e conservar até à realização do teste à temperatura entre +15 e +25 °C (4 horas, no má-
ximo). Nos EUA, por favor consultar o documento CLSI H21-A4 com o título „Collection,
Transport and Processing of Blood Specimens for Coagulation Testing and Performance
of Coagulation Assays“3.
A literatura faz referências a perturbações de APTT4-6. As doses terapêuticas de hirudina ou
outros inibidores directos de trombina podem originar tempos de coagulação prolongados7.
Além disso, os resultados podem ser influenciados pelo anticoagulante escolhido (p. ex.,
oxalato em vez de citrato), e pelas características da amostra (p. ex., hemolítica, lipémica,
alimentação artificial, etc.), que são importantes, sobretudo, para a determinação óptica do
APTT. A activação prévia da amostra condicionada pela colheita, pode provocar resultados
incorrectos. No capítulo sobre a colheita e manipulação de amostras do documento CLSI
H21-A4 recomenda-se que sejam utilizados tubinhos de ensaio com superfície não humec-
tante (p. ex., plástico), em vez de tubinhos de vidro.
A Siemens validou a utilização destes reagentes em vários analisadores, com o intuito de
optimizar o desempenho do produto e satisfazer as especificações do produto. As modifica-
ções definidas pelo utilizador não são suportadas pela Siemens, na medida em que podem
afectar o desempenho do sistema e os resultados do ensaio. Constitui responsabilidade do
utilizador validar as modificações efectuadas nestas instruções ou em relação ao uso dos
reagentes noutros analisadores que não os incluídos nas folhas de instruções de aplicação
da Siemens ou nestas instruções de utilização.
Os resultados deste teste devem sempre ser interpretados em conjunto com o histórico
médico do doente, estado clínico e outros dados de interesse.
Intervalos de referência
Os intervalos de referência variam de laboratório para laboratório em função da população
a analisar, técnicas de trabalho, métodos, aparelhos e lotes de reagentes utilizados. Por
isso, cada laboratório deverá determinar intervalos de referência próprios com base nas
respectivas técnicas de trabalho, métodos, aparelhos e lotes de reagentes utilizados, ou
verificar os intervalos de referência após mudança dos parâmetros acima referidos.
Num estudo efectuado com indivíduos examinados aparentemente saudáveis, obtiveram-
se os seguintes valores com um lote específico do reagente Pathromtin* SL:
Média Intervalo de referência 90 %
5.º Percentil 95.º Percentil
111 Indivíduos examinados com Sysmex® CA-1500 30,9 seg. 26,4 seg. 37,5 seg.
111 Indivíduos examinados no sistema BCS® 30,2 seg. 25,9 seg. 36,6 seg.
Para os outros colectivos, como p. ex., pacientes pediátricos, também deverão ser determi-
nados intervalos de referência próprios.
Características do teste
Precisão
Com um processo de medição optodensitométrico foram efectuadas medições de precisão
de plasmas normais, patológicos e de um pool de plasmas heparínicos durante 5 dias, 2 ve-
zes por dia (n = 8 determinações por dia), com um total de 40 determinações. Os coeficientes
de variação intra-assay foram calculados a partir de cada uma das determinações quádruplas
e obtiveram-se resultados compreendidos entre 0,6 e 2,0 %, enquanto que, para os coeficien-
tes de variação inter-assay, foram achados valores situados entre 0,3 e 2,8 %.
Comparação de métodos
A comparação de uma determinação do TTPA com Reagente Pathromtin* SL com outra efec-
tuada com outro reagente para TTPA revelou pa­ra Reagente Pathromtin* SL um coeficiente de
correlação de 0,96 com uma intersecção do eixo y de 2,1 seg. e um coeficiente angular de 0,99.
Bibliografia
Vide página 1.
* Pathromtin é uma marca comercial da Siemens Healthcare Diagnostics.
BCS, Ci-Trol e Dade são marcas comerciais da Siemens Healthcare Diagnostics.
Sysmex é uma marca registada da SYSMEX CORPORATION.

Procedimento
Execução manual:
Pipetar para um tubo de ensaio pré-aquecido a +37 °C:
Plasma citratado 100 µl
Reagente Pathromtin* SL 100 µl
Deixar incubar 2 min a +37 °C
Solução de cloreto de cálcio (+37 °C!) 100 µl
Simultaneamente com a adição de solução de cloreto de cálcio, pôr em marcha o cronóme-
tro ou o aparelho de medição da coagulação e determinar o tempo de coagulação.
Controlo de qualidade interno
Intervalo normal: Plasma de controlo N ou Dade® Ci-Trol® Level 1
Intervalo patológico: Plasma de controlo P ou Dade® Ci-Trol® Level 2 ou Dade®
Ci-Trol® Level 3
No início de uma série de teste, em cada mudança de reagente e uma vez, no mínimo,
durante um turno de 8 horas, deverão ser medidos dois controlos (um no intervalo normal
e um no intervalo patológico/terapêutico). O material de controlo deverá ser tratado como
o plasma do paciente. Cada laboratório deverá determinar o seu intervalo de confiança
próprio para os controlos. Normalmente, este apresenta desvios (s) standard de ± 2 a
± 2,5 em relação ao valor de controlo médio. Se os valores de controlo se situarem fora
do intervalo de confiança, é necessário controlar os controlos, os reagentes e o aparelho.
É aconselhável documentar todas as medidas que foram tomadas para a constatação e
eliminação do problema antes da divulgação dos valores do paciente. Para cada lote de
reagente ou controlo novo deverão ser definidos intervalos de controlo novos.
Resultados © 2008 Siemens Healthcare Diagnostics Products GmbH.
O resultado da medição é expresso em segundos. All rights reserved.
OQGS G29 E0501 (681)  Edição Maio 2008