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PULSE PROGRAM
CATALOGUE:
II. BIOMOLECULAR
NMR EXPERIMENTS
Teodor Parella
Servei RMN, Universitat Autònoma de Barcelona
E-mail: teodor.parella@uab.cat
TOPSPIN v3.0
NMRGuide
UAB
_____________________________________________________________________
Copyright © 2010 by Bruker BioSpin GmbH

All rights reserved. No part of this publication may be reproduced, stored in a retrieval system,
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31-03-2010
Part Number --------
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Pulse Program Catalogue
NMRGuide – Topspin 3.0
VOLUME I: 1D & 2D NMR EXPERIMENTS.............................................................. 1-466
VOLUME II: BIOMOLECULAR NMR EXPERIMENTS
• Table of Contents............................................................................................................. 467

• Protein NMR Experiments
3D Basic NOESY and TOCSY
53. Basic 3D Homonuclear .......................................................................................... 473
3D TOCSY-NOESY
3D TOCSY-ROESY
3D NOESY-TOCSY
3D NOESY-NOESY
X-edited TOCSY experiments
54. Basic 3D X-edited TOCSY..................................................................................... 477
3D TOCSY-HMQC
3D HMQC-TOCSY
3D HSQC-TOCSY
55. 3D TOCSY-HSQC .................................................................................................... 481
3D TOCSY-13C-HSQC
3D TOCSY-15N-HSQC
56. 2D C/15N-doubly filtered TOCSY.......................................................................
13
485
2D w1-13C/15N-doubly filtered TOCSY
2D w2-13C/15N-doubly filtered TOCSY
2D w1,w2-13C/15N-doubly filtered TOCSY
57. HCCH-type experiments ........................................................................................ 489
3D HC(C)H-COSY
3D (H)CCH-COSY
4D HCCH-COSY
3D HC(C)H-TOCSY
3D (H)CCH- TOCSY
4D HCCH- TOCSY
X-edited NOESY experiments
58. 3D NOESY-HSQC...................................................................................................... 499
3D NOESY-HMQC
3D HMQC-NOESY
3D NOESY-13C-HSQC
3D NOESY-15N-HSQC
3D NOESY-15N-TROSY
3D NOESY-13C,15N-HSQC
59. 3D and 4D HSQC-NOESY-HSQC ........................................................................... 511
13
C-HSQC-NOESY-13C-HSQC
13
C-HSQC-NOESY-15N-HSQC
15
N-HSQC-NOESY-13C-HSQC
15
N-HSQC-NOESY-15N-HSQC
60. 2D X-Filtered NOESY.............................................................................................. 519
2D w1,w2-13C filtered/edited NOESY
2D w1-13C/15N-Doubly Filtered NOESY
2D w2-13C/15N-Doubly Filtered NOESY
2D w1,w2-13C/15N-Doubly Filtered NOESY
61. 3D Doubly-Filtered HSQC-NOESY & NOESY-HSQC....................................... 525
3D w3-13C/15N-Doubly Filtered 13C-HSQC-NOESY
3D w3-13C/15N-Doubly Filtered 15N-HSQC-NOESY
© 2010 BRUKER Biospin, Teodor Parella. 467

3D w1-13C/15N-Doubly Filtered NOESY-15N-HSQC

3D w1-13C/15N-Doubly Filtered NOESY-13C-HSQC
3D w1-13C/15N-Doubly Filtered NOESY-13C,15N-HSQC
Backbone experiments
62. Introduction............................................................................................................... 533
63. 3D HNCO..................................................................................................................... 539
Adjusment of Pulses and Power Levels.
Recording 2D planes
Understading Triple-Resonance Experiments
Experiment Version vs Labeling Strategy and Protein Size
64. 3D HNCA..................................................................................................................... 553
65. HNCACO...................................................................................................................... 563
3D HN(CA)CO
4D HNCACO
66. HNCOCA..................................................................................................................... 573
3D HN(CO)CA
4D HNCOCA
67. 3D Sequential HNCA................................................................................................ 585
68. 3D Intra-HNCA........................................................................................................ 591
69. 3D HNCANNH ......................................................................................................... 597
3D (H)N(CA)NNH
3D H(NCA)NNH
70. 3D HNCOCANNH ................................................................................................... 609
3D (H)N(COCA)NNH
3D H(NCOCA)NNH
71. Miscellaneous NH-Detected Backbone............................................................... 619
3D HA(CA)NH
3D HA(CACO)NH
3D (HACA)CONH
3D HN(CA)HA
72. HA-Detected Backbone......................................................................................... 625
3D HCACO
2D and 3D HCAN
2D and 3D HCACON
3D HCBCA(CO)N
Backbone-Sidechain experiments
73. Introduction.............................................................................................................. 633
74. CBCACONH............................................................................................................... 637
3D CBCA(CO)NH
4D CBCACONH
5D HBHACBCACONH
75. 3D HN(CO)CACB ..................................................................................................... 643
76. CBCANH.................................................................................................................... 649
3D CBCANH
4D HBHACBCANH
77. 3D Sequential CBCANH......................................................................................... 655
78. 3D HNCACB............................................................................................................. 657
79. 3D Sequential HNCACB........................................................................................ 663
80. 3D Intra-HNCACB................................................................................................. 667
81. 3D CCANH ……………................................................................................................. 673
82. 3D CCA(CO)NH & CC(CO)NH ............................................................................. 677
83. HCC(CO)NH ............................................................................................................ 683
3D (H)CC(CO)NH

3D H(CC)(CO)NH
4D HCC(CO)NH
84. HBHACONH ......................................................................................................... 691
3D HBHA(CO)NH
4D HBHACONH
85. 3D HBHANH......................................................................................................... 697
Miscellaneous NMR experiments
86. Reduced Dimensionality (APSY) ...................................................................... 703
87. SOFAST/Best...................................................................................................... 707
88. Aminoacid-selective (MUSIC)........................................................................... 723
89. Aromatic-specific................................................................................................. 753
2D (HB)CB(CGCD)HD
2D (HB)CB(CGCDCE)HE
2D (HB)CB(CGCC-TOCSY)Har
3D Har(CC-TOCSY-CGCBCACO)NH
90. Methyl-Selective ................................................................................................ 761
3D (Hme)Cme([C])CA
3D (Hme)Cme([C]CA)CO
3D (Hme)Cme([C]CA)NH
3D Hme (Cme[C]CA)NH
3D (Hme)Cme([C]CACO)NH
91. 2D & 3D Carbon-detected.................................................................................. 769
2D 13C-13C COSY
2D 13C-13C TOCSY
2D 13C-13C NOESY
2D CACO
2D COCA
2D NCA
2D NCO
3D HCC CT-TOCSY
3D CANCO
3D intra-CANCO
3D HCACO
3D HCAN
3D CBCACO
3D HCBCA
3D CBCAN
3D HNCA
3D HNCO
3D HNCACO
3D HNCOCA
• Relaxation/Dynamics in Proteins
92. 2D HSQC for measurement of relaxation times.............................................. 823
T1(C), T2(C) and 1H-13C NOE
T1(N), T2(N), T1rho(N) and 1H-15N NOE
15
N-R(exchange)
93. 3D HNCO for measurement of T1(N) , T2(N) and 1H-15N NOE.................... 839
• Coupling Constants in Proteins
94. Introduction............................................................................................................. 847
95. Phi dihedral angle..................................................................................................... 851
3D HNHA
3D soft HNCA-E.COSY
3D DQ/ZQ+SQ-HNCA

2D CT-HMQC-J
3D HNHB
3D HNCA[CB]-E.COSY
3D CO-coupled (H)CANNH
3D soft HNCA-COSY
3D HNCACB-E.COSY
2D spin-echo difference CT-HSQC
CO-coupled (H)NCAHA
(HN)CO(CO)NH
96. Psi dihedral angle..................................................................................................... 867
3D (H)NNH-TOCSY
3D HCACO[N]-E.COSY
97. Omega dihedral angle............................................................................................. 871
3D HNCO[CA]-E.COSY
3D HN(COCA)CA
98. Chi1 dihedral angle................................................................................................... 875
3D HNHB
3D HACAHB-COSY
3D HN(CO)C
3D soft HCCH-E.COSY
3D HNCG
99. Chi2 dihedral angle................................................................................................... 885
3D HN(CO)CACali
100. 3D experiments for RDC measurements............................................................ 887
3D IPAP-HNCO
3D IPAP-HNCA
101. 3D experiments for Through-hydrogen-bond coupling constants................ 907
3D Through-hydrogen-bond 3D HNCO
• 2D & 3D Nucleic Acids.
102. Introduction............................................................................................................... 911
103. 2D & 3D HCN experiments..................................................................................... 921
3D 1H-13C CT-HSQC and NOESY-HSQC experiments
3D 1H-15N HSQC and NOESY-HSQC experiments
2D & 3D HCN
2D & 3D HCNCH
3D HCN-CCH COSY & TOCSY
2D H(CN)C
2D H(CN)H
3D H(CC)NH & HNCCH
2D HNCC
2D HNN Hydrogen-bond
104. 2D & 3D HCP experiments..................................................................................... 963
2D HP experiments
HETCOR
HSQC with XY-16
HeteroTOCSY
HeteroTOCSY-COSY
HeteroTOCSY-NOESY
3D HCP
3D HCP TOCSY
PCH
PCCH
105. Measurement of Coupling Constants.................................................................... 981

2D HSQC
3D HCCH-TOCSY experiments
HCP Quantitative
P-FIDS

NMRGuide - Topspin 3.0
BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
BASIC
3D HOMONUCLEAR
EXPERIMENTS
© 2010, BRUKER Biospin, Teodor Parella 473

General Scheme for 3D Homonuclear Experiments
1
H d1 d0
MIXING-1
d10
MIXING-2
F1
F2 Dimension F3 Dimension
Dimension
The delays d0 and d10 represent two independent variable periods that provide two independent
frequency dimensions (F2 and F3). The third dimension is directly generated from the FID
period (F1 Dimension), as in 1D or 2D experiments.
F1
Dimension
F2 Dimension
F3 Dimension

3D Homonuclear Experiments
· 3D TOCSY-NOESY experiment (mlevnoesy3d)

· 3D TOCSY-ROESY experiment (mlevroesy3d)
· 3D NOESY-TOCSY experiment (noesymlev3d)
· 3D NOESY-TOCSY experiment using presaturation (noesymlevpr3d)
· 3D NOESY-NOESY experiment using presaturation (noesynoesypr3d)
Also see related 2D NOESY, 2D ROESY and 2D TOCSY experiments
References:
A. Bax & D.G. Davis, J. Magn. Reson. 65, 355-360 (1985)
NOE
JHH JHH
JHH
H H H H H H
C C C N C C N C
mlevnoesy3d
d9
1 d1 d0 d10
H MLEV-17
d8
p6
pl10
mlevroesy3d
d9
1
H d1 d0
MLEV-17
d10
CW
p6 p15
pl10 pl11

NOE
JHH JHH
JHH
H H H H H H
C C C N C C N C
noesymlev3d
d9
1 d1 d0 d8 d10
H MLEV-17
p6
pl10
noesymlevpr3d
d9
1 d1 d0
H d8 d10
presat MLEV-17
pl9 p6
pl10
H
NOE
H
NOE
noesynoesypr3d
1 d1 d8 d20
H d0 d10
presat presat presat
pl9

BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
BASIC 3D X-EDITED
TOCSY EXPERIMENTS

3D Basic X-edited TOCSY
· 3D 1H-13C TOCSY-HMQC experiment using presaturation (mlevhmqcpr3d)

· 3D 1H-13C HMQC-TOCSY experim ent using BIRD (hmqcmlevbi3d)
· 3D 1H-13C HSQC-TOCSY experiment using echo/antiecho, adiabatic pulses and MLEV-17

(hsqcetgpml3d.2)
· 3D 1H-13C HSQC-TOCSY experiment using PEP, adiabatic pulses and DIPSI-2
(hsqcdietgpsisp3d.2)
Also see:
2D TOCSY experiment
2D HSQC-TOCSY experiments and Measurement of long-range proton-carbon coupling constants
3D TOCSY-HSQC experiments
2D X-filtered/edited TOCSY experiments
Other Protein NMR experiments involving TOCSY:

HCCH-TOCSY Experiment
HCC(CO)NH Experiment
13C-13C TOCSY
References:
A. Bax and S. Subramanian, J. Magn. Reson. 67, 565-569 (1986)

TOCSY-HMQC
JHH JHH
JHH
H H H H H H H
C C C N C C N C
C
H
mlevhmqcpr3d
y
d9
1 d1
H D d0 d0
MLEV-17 d2 d2
presat
pl9 p6
pl10
d10 d10
X GARP
pl12
HMQC-TOCSY
JHH JHH
JHH
H H H C
H H H
C C C N C C N C
H
H
hmqcmlevbi3d
d9
1 d1 d2 d2 d7 d2 d2 d10 d10
H MLEV-17y
p6
pl10
d0 d0
X GARP
pl12

HSQC-TOCSY
JHH JHH
JHH
H H H H H H C
C C C N C C N C
H
H
hsqcetgpml3d.2
y
d9 Frec
1 d1 d4 d4 p28
d4 d10 d4+d10 d d
H MLEV-17
p6
F1
pl10
13 d0 d0 d d
C GARP
p14 p24 p14 pl12
sp3 sp7 sp3
Gz
G2
G1
hsqcdietgpsisp3d.2
y y -x
d9 Frec
1 d1 d4 d4 p28 d24 d24 d4 d4 D d10 d10 d d d
H
F1 DIPSI-2 (y)
Y p6
pl10
13 d0 d0 d d
C GARP
p14 p24 p24 p14 p14 p14 pl12
sp3 sp7 sp7 sp3 sp3 sp3
Gz
G3
G1 G2

BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
3D TOCSY-HSQC
EXPERIMENTS

3D TOCSY-HSQC
Gradient-enhanced from f2 channel:
· ge-3D 1 H-13 C TOCSY-HSQC experiment using echo-antiecho (mlevhsqcetgp3d | M LEV HSQ CETG P3D )
Gradient-enhanced from f3 channel:
· ge-3D 1 H-15 N TOCSY-HSQC with MLEV using echo-antiecho (mlevhsqcetf3gp3d |

M LEV HSQ CETF3G P3D )
· ge-3D 1 H-15 N TOCSY-HSQC with DIPSI-2 and PEP (dipsihsqcf3gpsi3d | D I PS IHS QCF3G PS I3D )
· ge-3D 1 H-15 N TOCSY-HSQC with DIPSI-2 using TROSY (dipsitretf3gp3d | DI PS I TRET F3GP3D )
Also see:
2D TOCSY experiment
2D & 3D HSQC-TOCSY experiments
2D X-filtered/edited TOCSY experiments
ppm
H C H 1
H C H 4
N C C N 6
H O H 8
H 9
9 8 7 6 5 4 3 2 1 ppm
mlevhsqcetgp3d
y y
d9
1
H d1 D d0 d0
MLEV-17
d4 d4 d4 d4
p6
pl10
13 p14 d10 d10 d d
H C sp3 GARP
p14 p14 p112
15 sp3 sp3
N optional
C
H
G1
Gz
G2

References:
1. A. Bax & D.G. Davis, J. Magn. Reson. 65, 355-360 (1985)
2. A.L. Davis, J. Keeler, E.D. Laue & D. Moskau, J. Magn. Reson. 98, 207-216 (1992)
3. A.G. Palmer III, J. Cavanagh, P.E. Wright & M. Rance, J. Magn. Reson. 93, 151-170 (1991)
4. L.E. Kay, P. Keifer & T. Saarinen, J. Am. Chem. Soc. 114, 10663-5 (1992)
5. J. Schleucher et al., Angew. Chem. 114(10), 1518 (1993)
H C H
H C H
N C C N
H O H
H
N
NH
mlevhsqcetf3gp3d
y y
d9
1
H d1 D d0 d0
MLEV-17
d26 d26 d26 d26
p6
pl10
15 d10 d10
N d d
GARP
p116
13
C optional
p14 p14
sp3 sp3
G1
Gz
G2

ppm
9.5 9.0 8.5 8.0 7.5 7.0 6.5 ppm
dipsihsqcf3gpsi3d
y -x y
d9 Frec
1 d1
H D d0 d0 d20
DIPSI-2 (y)
d21 d26 d26 d24 d24 d26 d26 d d
presat
pl32 p6 F1 Y
pl10
15 d d10 d10 d d
N GARP
pl16
13
C optional
p14 p14
sp3 sp3
Gz G2
G1 G3
dipsitretf3gp3d
y -x y y Y
d9 Frec
1 d1
H D d0 d0
DIPSI-2 (y)
d26 d26 d26 d26 d26 d26 d d
presat
pl32 p6 F1 y q
pl10
15 d10 d10 d d
N
13
C optional
p14 p14
sp3 sp3
Gz
G1 G1 G3 G3 G4 G4 G5
G2 G2

BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
2D 13C/15N-FILTERED
TOCSY EXPERIMENTS

13
2D C/ 15N-filtered TOCSY
ge-2D w1 - 13 C,15 N-filtered TOCSY experiment
· ge-2D w1 -13 C, 15N-filtered TOCSY using DIPSI2 and WATERGATE (dipsi2gpphwgx1)
ge-2D w2 - 13 C,15 N-filtered TOCSY experiment
· ge-2D w2 -13C,15N-filtered TOCSY using DIPSI2 and WATERGATE (dipsi2gpphwgx2)
ge-2D w1 ,w2 -13 C,15N-filtered TOCSY experiment
· Phase-sensitive ge-2D w1,w2 13 C, 15 N -filtered TOCSY using DIPSI2 and WATERGATE

(selective pulses) (dipsi2gpphwgxf)
Also see:
2D TOCSY experiment
3D TOCSY-HSQC and 3D HSQC-TOCSY experiments
1. A.L. Breeze, Prog. NMR Spectrosc. 36, 323-372 (2000).

2. C. Zwahlen, P. Legault, S.J.F. Vincent, J. Greenblatt, R. Konrat &
L.E. Kay, J. Am. Chem. Soc. 119 6711-6721 (1997).
3. K. Ogura, H. Terasawa & F. Inagaki, J. Biomol. NMR 8, 492-498 (1996).
4. J. Iwahara, J.M. Wojciak & R.T. Clubb, J. Biomol. NMR 19, 231-241 (2001).
1H-13C -Iy -2IySz -2IzSy Gradient G3 removes

1H-12C -Iy -Iy -Iz transverse 1H-13C component!!!
y -x
1 d26 d26 d
H
13
C d28
Single 13C,15N-Filter p15
sp18
15
N
Gz
G2 G2 G3

Double 13C,15N-Filter
d26: 1/(4*J(NH))
y -x y -x
d28: 1/(4*J(CH)min)
1 d26 d26 d d26 d26 d d29: 1/(4*J(CH)max)
H
Differentiation between TOCSY in
13
C d28 d29
labeled/unlabeled Compounds
p15 p15
sp18 sp18
15
N Unlabeled
Labeled
Gz
Intramolecular NOEs
G2 G2 G3 G4 G4 G5
H H
H H
H H H H
JHH JHH
JHH
H H H H H H
C C X N C C N C
dipsi2gpphwgx1
y -x y -x
1 d1 d26 d26 d d26 d26 d d0 -x -x

H CW DIPSI-2 d d
pl32 p11
d9 sp1
13 pl10
C d28 d29
p15 p15
15
sp18 sp18
N
Gz
G2 G2 G3 G4 G4 G5 G0 G6 G7 G1 G1

JHH JHH
JHH
H H H H H H
C C C N C X N C
dipsi2gpphwgx2
y -x y -x
1
d1 e d0 d26 d26 d d26 d26 d -x -x
H CW DIPSI-2
pl32 d9 p11
pl10 sp1
13
C d28 d29
p8 p15 p15
sp13 sp18 sp18
15
N
Gz
G6 G7 G2 G2 G3 G4 G4 G5 G1 G1
JHH JHH
JHH
H H H H H H
C C X N C X N C
dipsi2gpphwgxf
y -x y -x y -x y -x
1 d1 d26 d26 d d26 d26 d d0 d26 d26 d d26 d26 d -x -x

H CW DIPSI-2
p132 d8 p11
p110 sp1
13
C d28 d29 d28 d29
p15 p15 p15 p15

sp18 sp18 sp18 sp18
15
N
Gz
G2 G2 G6 G4 G4 G5 G7 G8 G2 G2 G3 G4 G4 G5 G1 G1

BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
3D HCCH-COSY
3D HCCH-TOCSY

HCCH-COSY / HCCH-TOCSY
o HCCH-COSY
3D HC(C)H-COSY experiment (hcchcogp3d | HCCHCOG P3D )

3D (H)CCH-COSY experiment (hcchcogp3d2)
3D (H)CCH-COSY experiment using TROSY for aromatic residues (trhcchcogp3d)
4D HCCH-COSY experiment (hcchcogp4d)
o HCCH-TOCSY
3D HC(C)H-TOCSY experiment (hcchdigp3d | HCCHDI GP 3D)

3D (H)CCH-TOCSY experiment (hcchdigp3d2 | HCCHD IG P3D 2 )
3D HC(C)H-TOCSY using adiabatic TOCSY experiment (hcchatgp3d | HCCHA TG P3D )
3D (H)CCH-TOCSY using adiabatic TOCSY experiment (hcchatgp3d2)
4D HCCH-TOCSY experiment (hcchdigp4d)
o ge-2D Long-range HCCH correlation
Phase-sensitive ge-2D Long-range (H)C(C)H using echo-antiecho (hcchetgplr)
Also see 3D HCCH-E.COSY experiments for J measurement
o 3D HC(C)H[HA]-E.COSY (hcchecosgp3d | HCCHECOS GP 3D) - 3J[HA-HB] via E.COSY

o 3D HC(C)H[CO]-E.COSY (hcchcosygp3d | HCCHCOS YGP 3D ) - 3J[CO-HB] via E.COSY
o 3D (H)C(C)CH[CO]-E.COSY (hccccosygp3d | HCCCCOSY GP3D ) - 3J[CG-CO] via E.COSY
Also see HCCH-type experiments in “Nucleic Acids Experiments”
o 3D TROSY-(H)CCH-COSY for intra-base correlation (na_trhcchco3d)

o 3D H(C)CH-E.COSY experiment (na_hcchecgp3d | NA _HCCHECGP 3D)
o 3D HCC-TOCSY-CCH-COSY experiment (na_hcchfwdigp3d | NA _HCCHFW DI GP 3D )
o 3D HCC-TOCSY-CCH-E.COSY experiment (na_hcchfwdiecgp3d | N A _HCCHFWD I ECGP3D )
o 3D HCC-TOCSY-CCH-E.COSY experiment using jump-and-return (11) (na_hcchfwdiecgpjr3d)
o 3D forward directed quantitative gamma HCCH-TOCSY (na_ghcchfwdigp3d | NA _GHCCHFW D IG P3D )
Related Experiments:
HCC(CO)NH Experiment
13C-13C TOCSY
References:
1. L.E. Kay, G.Y. Xu, A.U. Singer, D.R. Muhandiram & J. D. Forman-Kay J. Magn. Reson. B 101, 333 - 337 (1993))
2. W.Peti, C. Griesinger & W. Bermel, J. Biomol. NMR 18, 199 - 205 (2000)

H H H H H H
1 1
JCH JCH C
C C C C C C N C
1
JCC
C
H
1 2 3 d4 : 1/(4J(CH)) - tau a [1.6 msec]

d21: 1/(6J'(CH)) - tau c [1.1 msec]
H C C H d22: d22+d23*2+t2max*0.5 = 1/(4J(CC)) : 3.6m-d23*2-(in0*td1/4)
t1 t2 t3 d23: tau b [475 usec]
d24: 1/(4J(CC)) [3.6 msec]
hcchcogp3d2
y
Frec
1
y
H d1 d4 d4 d d4 d4
p17
F1 y y
pl10
13 d22+ d22+
C d d0 d23 d23 d0
d23 d23
d24 d24 d d21 d10 d10 d21
GARP
pl12
13
CO
p14 p14
15
sp5 sp5
N
Gz
G1 G1 G3 G2 G2 G2 G2 G2 G2 G4 G4 G1 G1 G1 G1
trhcchcogp3d
y
d4 d4 Frec
-y -x -x
1 d1 d4 d4
H
13 d4/2 d4/2 d0 d23-d0 d22-d10 d22 d10 d

C GARP
pl12
Gz
G1 G1 G2 G2 G3 G4 G4

H H H H H H
1 1
JCH JCH
C C C C C C N C
1
JCC
1 2 3
H C C H
t1 t2 t3
hcchcogp3d
F1 y
Frec
p17 y
1 d1 d4+d0 d0 d4 d d21 d21 d4 d4
H pl10
y y
13 d d10 d23 d23 d10 d22 d23 d23 d22 d24 d24 d
C GARP
pl12
13
CO
p14 p14
sp5 sp5
15
N
Gz
C
H

H H H H H H
1 1
JCH JCH
C C C C C C N C
1
JCC
1 2 3
H C C H
t1 t2 t3 t4
hcchcogp4d
F1 y
Frec
d4 d4- p17 y
1 d1 +d31 (1-k) k*d31 d d4 d4
H *d31 pl10
y y
d21
d d32 d23 d23 d32 d22 d23 d23 d22 d24 d24 d d33 d21
13 +d33
C GARP
p8 pl12
sp13
13
CO
p14 p14
sp5 sp5
15
N
Gz
G3 G2 G2 G2 G2 G2 G2 G4 G4 G1 G1 G1 G1

H H H H H H
1
JCH H
C N C C C C N C
1 1 1
JCC JCC JCC
C
1 2 3 H
H C C H
t1 t2 C t3
hcchdigp3d
F1 y
Frec
y
1 d1 d4+d0 d0 d4 d d21 d21 d4 d4
H
p17
y y
pl10
d31
13 d d10 d23 d23 d10 d23 d23 d
C DIPSI-3 (y) GARP
p9 pl12
pl15
13
CO
p14 p14
sp5 sp5
15
N
Gz
G1 G1 G3 G2 G2 G2 G2 G4 G4 G1 G1 G1 G1
hcchatgp3d
F1 y
Frec
y
1 d1 d4+d0 d0 d4 d d21 d21 d4 d4
H
p17
y y
pl10
13 d d10 d23 d23 d10 d23 d23 d

C X_M16 GARP
p10 pl12
sp0
13
CO
p14 p14
sp5 sp5
15
N
Gz
G1 G1 G3 G2 G2 G2 G2 G4 G4 G1 G1 G1 G1

H H H H H H
1
JCH C
C N C C C C N C
1 1 1
JCC JCC JCC
C
1 2 3 H
H C C H
t1 C t3
C
t2
hcchdigp3d2
y
Frec
y
1 d1 d4 d4 d d4 d4
H
p17
F1 y y
pl10
d31
13 d d0 d23 d23 d0 d23 d23 d d21 d10 d10 d21
C DIPSI-3 (y) GARP
p9 pl12
pl15
13
CO
p14 p14
sp5 sp5
15
N
Gz
G1 G1 G3 G2 G2 G2 G2 G4 G4 G1 G1 G1 G1
hcchatgp3d2
y
Frec
y
1 d1 d4 d4 d d4 d4
H
p17
F1 y y
pl10
d31
13 d d0 d23 d23 d0 d23 d23 d d21 d10 d10 d21
C X_M16 GARP
p10 pl12
sp0
13
CO
p14 p14
sp5 sp5
15
N
Gz
G1 G1 G3 G2 G2 G2 G2 G4 G4 G1 G1 G1 G1

ppm ppm
10
0
20
1
30
2
40
3
50
4
60
5
70
6
6 5 4 3 2 1 0 ppm 6 5 4 3 2 1 0 ppm
H H H H H H
1
JCH
C N C C C C N C
1 1J 1
JCC CC JCC
1 2 3
H C C H
t1 t2 C t4
C
t3
hcchdigp4d
F1 y
Frec
d4 d4- y
1 d1 +d31 (1-k) k*d31 d d4 d4
H *d31
y p17 y
pl10
d15 d21+
13 d d32 d23 d23 d32 d23 d23 d d33 d21
d33
C DIPSI-3 GARP
p8 p9 pl12
sp13 pl15
13
CO
p14 p14
sp5 sp5
15
N
Gz
G3 G2 G2 G2 G2 G4 G4 G1 G1 G1 G1

2D (H)C(C)H:
A. Bax, D. Max & D. Zax, J. Am. Chem. Soc. 114, 6923-6925 (1992)
H H H H H H
1
JCH
C C C N C C N C
1
JCC
hcchetgplr
y y y y
Frec
1 d1
H d4 d4 d4 d4
p28 y p14 p14 F1

sp3 sp3
13
Cali d d22 d22 e d0 d0 d d d22 d22
GARP
p8 p8 p8 p8 pl12
13 sp13 sp13 sp13 sp13
CO GARP
p14 p14 p14 p14 pl12
sp5 sp5 sp5 sp5
15
N
Gz
G1 G2 G3


BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
3D NOESY-HSQC
EXPERIMENTS

Edited NOESY experiments for labeled proteins:

2D NOESY
2D ROESY 2D HOESY
NOE
H H H NOE
C
2D/3D NOESY-HSQC
2D/3D HSQC-NOESY
1 1
JCH NOE JNH NOE
H H H H
NOE 1J
H H CH C N
C
1
JXH NOE
NOE H
H
1J H
H NH
X
N
3D w3 12C,14N-Edited HSQC-NOESY
2D/3D w1/w2 12C,14N-Edited NOESY
3D w1 12C,14N-Edited NOESY-HSQC
1 1
NOE 1
JXH JXH NOE JXH NOE 1
1
JXH NOE 1
H H H JCH JNH
H H H H H
X X X C X N
1 1 1 1
1
JNH NOE JXH JCH NOE JXH
JXH NOE 1
JXH H H H H
H H N X C X
X X
1 1
JNH NOE 1
JCH JCH NOE 1
JNH
H H H H
N C C N 3D HSQC-NOESY-HSQC
1
JNH NOE 1 1
JNH NOE 1
H JCH 1
JNH JCH NOE 1
H H H JCH
H H
N C N N C C 4D HSQC-NOESY-HSQC

3D Basic X-edited NOESY
· 3D 1H-13C NOESY-HMQC experiment using presaturation (noesyhmqcpr3d)

· 3D 1H-13C HMQC-NOESY experiment using BIRD (hmqcnoesybi3d)
Also see:
2D HMQC and 2D NOESY experiments
2D & 3D HSQC-NOESY Experiments
3D NOESY-HSQC Experiments
References:
A. Bax and S. Subramanian, J. Magn. Reson. 67, 565-569 (1986)
H
H
NOE C
H H H H H H
JCH
H
C C C N C C N C H
hmqcnoesybi3d
-x
d2 d10 d10 d8 Frec

1 d1 d2 d2 d7 d2
H
F1
d0 d0
X GARP
pl12

NOE
H H H H H H
JCH JCH
C C C N C C N C
C
H
noesyhmqcpr3d
1
H d1 D d0 d0 d8 d2 d2
presat presat
pl9
d10 d10
X GARP
pl12
ppm ppm
0
10
2 20
30
4
40
6
50
8 60
70
8 7 6 5 4 3 2 1 ppm 8 7 6 5 4 3 2 1 0 ppm

3D NOESY-HSQC / 3D NOESY-HMQC
o Gradient-enhanced from f2 channel:
3D 1H-13C NOESY-HSQC experiment

· using echo-antiecho (noesyhsqcetgp3d | N OESYHS Q CETG P3D )
· using PEP (noesyhsqcetgpsi3d | N OESY HSQ CETG PS I3D )
o Gradient-enhanced from f3 channel:
3D 1H-15N NOESY-HSQC experiment
o using echo-antiecho (noesyhsqcetf3gp3d | N OESYHS Q CETF3G P3D )

o using PEP (noesyhsqcf3gpsi3d | N OESYHS Q CF3GPS I3D )
o using PEP and water flip-back (noesyhsqcfpf3gpsi3d | NOE SYHS QCFP F3GP SI 3D)
o using WATERGATE with 3919 (noesyhsqcf3gp193d | NO ESYHS QCF3G P193D )
o using WATERGATE with shaped pulses (noesyhsqcf3gpwg3d)
o using TROSY (noe sytretf3gp3d | N OESYT RET F3GP3D )
o using ZQ-TROSY and WATERGATE (noesytzgp3d | NO ESYT ZG P3D )
o using TROSY for aromatic residues and WATERGATE (noesytrosyargpphwg)
3D 1H-15N NOESY-HMQC experiment
o using WATERGATE (noesyhmqcf3gpph3d)
o Gradient-enhanced from f2 and f3 channel:
3D NOESY-13 C, 15 N-HSQC experiment

§ with simultaneous evolution (noesyhsqcgpsm3d.2 | NO ESYHS QCG PS M 3D.2 )
§ with simultaneous evolution, sensitivity improvement and adiabatic 13C pulses
(noesyhsqcgpsismsp3d | NOE SYHS QCG PS IS MS P 3D )
Also see NOESY-HSQC experiments in Nucleic Acid Experiments:

3D 1 H-13 C NOESY-CT-HSQC using echo-antiecho (na_noesyhsqcctetgp3d)
3D 1 H-13 C NOESY-HSQC using WATERGATE and refocusing of J(C5C6) during t1
(na_c6noesyhsqcgp3d)
3D 1 H-15 N NOESY-HSQC using WATERGATE (na_noesyhsqcf3gpwg3d)
2D NOESY
3D NOESY-HSQC
3D HSQC-NOESY-HSQC
2D & 3D X-filtered/edited NOESY

NOESY-HSQC:
1. A.L. Davis, J. Keeler, E.D. Laue & D. Moskau, J. Magn. Reson. 98, 207-216 (1992)
2. O. Zhang, L.E. Kay, J.P. Olivier & J.D. Forman-Kay, J. Biomol. NMR 4, 845 - 858 (1994)
3. G. Zhu, X.M. Kong & K.H. Sze, J. Biomol. NMR 13, 77-81 (1999)
4. K.V. Pervushin, G. Wider, R. Riek & K. Wuethrich, PNAS, 96, 9607-9612 (1999)
1
JCH NOE
H H
C H
C
H
noesyhsqcetgp3d
y y
1
H d1 D d0 d0 d8 d4 d4 d4 d4
F1
13 p14 d10 d10

C sp3
d d
GARP
p14 pl12
sp3
15
Noptional
G1
Gz
G2
noesyhsqcetgpsi3d
y y y
Frec
1
H d1 D d0 d0 d8 d4 d4 d24 d24 d4 d4 d d
F1 Y
p14
13 d d10 d10 d
C sp3 D
GARP
pl12
15
N optional
Gz
G3 G4 G1 G2

1
JNH NOE
H H
N H
N
H
noesyhsqcetf3gp3d
y y
1
H d1 D d0 d0 d8 d26 d26 d26 d26
F1
15 d10 d10
d d
N GARP
pl16
13
C optional
p14 p14
sp3 sp3
G1
Gz
G2
ppm
9.5 9.0 8.5 8.0 7.5 7.0 6.5 ppm

noesyhsqcf3gpsi3d
y y y
Frec
1
H d1 D d0 d0 d8 d26 d26 d24 d24 d26 d26 d d
F1 Y
15 d d10 d10 d D
N GARP
pl16
13
C optional
p14 p14
sp3 sp3
Gz
G1 G2 G3 G4
noesyhsqcfpf3gpsi3d
y y y
Frec
1
H d1 D d0 d0 d8 d26 d26 d24 d24 d26 d26 d d
F1 Y
15 d d10 d10 d D
N GARP
pl16
13
C optional
p8 p8
sp13 sp13
Gz
G1 G2 G3 G4 G4 G5 G5 G6

noesyhsqcf3gp193d
y y
Frec
1
H d1 D d0 d0 d8 d26 d26 d26 d26
F1
15 d10 d10 D
N GARP
pl16
13
C optional
p14 p14
sp3 sp3
Gz
G1 G1
noesyhsqcf3gpwg3d
y y y
-x -x d26-x -x Frec
1
H d1 d0 d0 d8 d26 d26 d26
CW
pl32 p29 F1
sp11
15 d10 d10
N GARP
pl16
13
C optional
p8 p8
sp13 sp13
Gz
G3 G4 G4 G5 G5 G6 G6

NOESY-TROSY
noesytretf3gp3d
y y Y
1
Frec
H d1 D d0 d0 d8 d26 d26 d26 d26 d26 d26 d d
F1 y q
15 d10 d10 d D
N
13
C optional
p14 p14
sp3 sp3
Gz
G6 G1 G1 G3 G3 G4 G4 G5
G2 G2
NOESY-HMQC
noesyhmqcf3gpph3d
-x -x -x Frec
1
H d1 D d0 d0 d8 d21 d21
p29 F1 p11
sp11 sp1
15 d10 d10 D
N GARP
pl16
13
C optional
p8 p8
sp13 sp13
Gz
G1 G2 G2

NOESY-ZQ-TROSY
K.V. Pervushin, G. Wider, R. Riek & K. Wuethrich, Proc. Natl. Acad. Sci USA 96, 9607-9612 (1999)
noesytzgp3d
d26 d26 Frec

1 d26 d26
H d1
/2 /2 d8 -x d26 d26 -x -x
p11F2 F1 y
sp1
15 d10 d10
N
Gz
G1 G1 G3 G1 G1 G2 G2
NOESY-TROSY for Aromatic Residues
noesytrosyargpphwg
y y
1 d1 d8 -y d4 d4 Frec
H D d0 d0 d4 d4
-x -x
CW
pl32
15
N
F1 -x
d4/2 d4/2 d23-d4/2 d23-d4/2 d

13
C -d10 +d10 GARP
p8 pl12
sp13
Gz
G1 G2 G2 G3 G3 G4 G5 G5

NOESY-13C,15N-HSQC
S.M. Pascal, D.R. Muhandiram, T. Yamazaki, J.D. Forman-Kay & L.E. Kay, J. Magn. Reson. B103, 197 - 201 (1994)
1
JXH NOE
H H
X H
C / N
H
noesyhsqcgpsm3d.2
y y F1
1 y Frec
H d1 D d0 d0 d8 d d26 d26 d26 d26
p17
pl10
15 d d10 d10 e d
N GARP
pl16
13 d4 d4
C GARP
p8 p8 p8 pl12
sp13 sp13 sp13
Gz
G7 G1 G2 G3 G3 G4 G5G6 G6
30:40:16:60:-36:16:50
noesyhsqcgpsismsp3d
y y
Frec
1 d26-
H d1 D d0 d0 d8 d26 d26 d d24 d26
d4/2
d26 d26 d d
F1
15 e d20 d20 d10 d10 d D

N GARP
pl16
13 d4 d4 d4
C /2 GARP
p8 pl12
sp13
Gz
G1 G3 G4
G2

BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
3D and 4D
HSQC-NOESY-HSQC
EXPERIMENTS

3D HSQC-NOESY-HSQC
o 3D 1H-13C HSQC-NOESY- 1 H-15 N HSQC (noesycngp3d | NOES YCNG P3D )
o 3D 1H-15N HSQC-NOESY- 1H-13C HSQC (noesyncgp3d | NOES YNCG P3D )
4D HSQC-NOESY-HSQC
4D HSQC-NOESY-HMQC
4D HMQC-NOESY-HMQC
13
o C-13 C
§ 4D 1 H-13 C HSQC-NOESY- 1 H-13 C HSQC (hsqcnoesyhsqcccgp4d | HS QCN OESYHS Q CCCGP 4D)
13 15
o C- N
§ 4D 1 H-13 C HSQC-NOESY- 1 H-15 N HSQC (hsqcnoesyhsqccngp4d | HSQ CNO ESYHS QCCN GP 4D)
§ 4D 1 H-13 C HSQC-NOESY- 1 H-15 N HMQC (hsqcnoe syhmqccngp4d)
§ 4D 1 H-13 C HMQC-NOESY- 1 H-15 N HSQC (hmqcnoesyhmqcncgp4d)
15
o N-13 C
§ 4D 1 H-15 N HSQC-NOESY- 1 H-13 C HSQC (hsqcnoesyhsqcncgp4d | HSQ CNO ESYHS QCN CGP 4D)
15
o N-15 N
§ 4D 1 H-13 C HSQC-NOESY- 1 H-15 N HSQC (hsqcnoesyhsqcnngp4d | HSQ CNO ESYHS QC NNG P4D )
§ 4D 1 H-13 C HMQC-NOESY- 1 H-15 N HMQC (hmqcnoesyhmqcnngp4d)
2D NOESY
3D NOESY-HSQC
2D & 3D X-filtered/edited NOESY
References:
T. Diercks, M. Coles & H. Kessler, J. Biomol. NMR, 15, 177-180 (1999)

1
JNH NOE 1
JCH
H H
N C
N
HN
noesycngp3d
y y y y
Frec
y
1 d1 d4 d4 d d d4 d4 d8 d26 d26 d d24 d24 d26 d26 d d
H
p11
F2 Y
sp1
15
N d10 d10 d d
GARP
F1 pl16
13
C d0 d0 e
p8 p8 p8
sp13 sp13 sp13
13
CO
p14 p14
sp5 sp5
Gz
G1 G1 G2 G3 G4 G5

1 1
JCH NOE JNH
H H
C N
C
H
noesyncgp3d
y y y y
Frec
1 d1 d26 d26 d d d26 d26 d8
H d4 d4 d d24 d24 d4 d4 d d
F1
15
N d0 d0 e
F2 Y
13
C d10 d10 d d
GARP
p8 p8 pl12
13 sp13 sp13 p14
CO sp5
p14
sp5
Gz
G1 G1 G2 G3 G4 G5

1
JCH NOE 1
H JCH
H
C C
hsqcnoesyhsqcccgp4d
y y y y
Frec
1 d1 d4 d4 p28 d d4 d4 d32 d32 d8 d4 d4
H d24 d24 d4 d4 d d
CW
pl32
y
15
N
F1 F2 Y
13
C d31 d31 e d33 d33 d d
GARP
p8 p8 p8 p8 p8 pl12
sp13 sp13 sp13 sp13 sp13
Gz
G3 G4 G5 G6 G6 G7 G7 G2
G1
1H-13C HSQC NOESY 1H-13C HSQC

BLOCK with PEP

1
JNH NOE 1
H JCH
H
N C
hsqcnoesyhsqccngp4d
y y y y -x y y
Frec
d1 y
1 d4 d4 d d4 d4 d32 d32 d8
H CW
d26 d26 d24 d24 d26 d26 d d
pl32 p11
y sp1 F2 Y
15
N d33 d33 d d
GARP
F1 pl16
13
C d31 d31 e
p8 p8 p8 p8
sp13 sp13 sp13 sp13
Gz
G3 G4 G5 G6 G7 G7 G8 G8 G2
G1
hsqcnoesyhmqccngp4d
y y y y -x y
-x -y -y Frec
1 d1 d4 d4 d4 d4 d32 d32 d8 d21
H CW
d21
pl32 p29 p11

y sp11 F2 sp1
15
N d33 d33
GARP
F1 pl16
13
C d d31 d31 e
p8 p8 p8 p8
sp13 sp13 sp13 sp13
Gz
G3 G4 G5 G6 G6

1
JCH NOE 1
H JCH
H
C C
hsqcnoesyhsqcncgp4d
y y y y
Frec
1 d1 d26 d26 d d26 d26 d32 d32 d8 d4 d4
H CW
d24 d24 d4 d4 d d
pl32
F1 y
15
N d31 d31 e
F2 Y
13
C d33 d33 d d
GARP
p8 p8 p8 p8 pl12
sp13 sp13 sp13 sp13
Gz
G3 G4 G5 G6 G6 G7 G7 G2
G1
hmqcnoesyhsqcncgp4d
y y
Frec
-x -x -x y
1 d1 d21 d21 d32 d32 d8 d4 d4
H CW
d24 d24 d4 d4 d d
pl32 p11 p29

sp1 F1 sp11
15
N d31 d31
F2 Y
13
C d33 d33 d d
GARP
p8 p8 p8 p8 pl12
sp13 sp13 sp13 sp13
Gz
G3 G3 G4 G5 G6 G6 G7 G7 G2
G1

1
JNH NOE 1
JNH
H H
N N
hsqcnoesyhsqcnngp4d
y y y y -x y y
Frec
d1 y
1 d26 d26 d d26 d26 d32 d32 d8
H CW
d26 d26 d24 d24 d26 d26 d d
pl32 p11
F1 y sp1 F2 Y
15
N d31 d31 e d33 d33 d d
GARP
pl16
13
C
p8 p8 p8
sp13 sp13 sp13
Gz
G3 G4 G5 G6 G7 G7 G8 G8 G2
G1
hmqcnoesyhmqcnngp4d
y y
-x -y -y -x -y -y Frec
1 d1 d21 d32 d32
H CW
d21 d8 d21 d21
pl32 p11 p29

sp1 F1 F2
sp11
15
N d31 d31 d33 d33
GARP
pl16
13
C
p8 p8 p8
sp13 sp13 sp13
Gz
G3 G3 G4 G5 G5

BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
2D X-FILTERED/EDITED
NOESY EXPERIMENTS

2D X-Filtered/edited NOESY
13
ge-2D w1 ,w2 C-filtered/edited NOESY experiment
· Phase-sensitive ge-2D w 1,w2 13C-filtered/edited NOESY with presaturation (noesygpphprxf

| N A_ NOES YGP PHP RXF )
· Phase-sensitive ge-2D w 1,w2 13C-filtered/edited NOESY with WATERGATE (3-9-19)
(noesygpphxf19| NA _NO ESYG PP HXF19 )
ge-2D w1 ,w2 -15 N-filtered/edite d NOESY experiment
· Phase-sensitive ge-2D w 1,w2 -15 N-filtered/edited NOESY using WATERGATE (3-9-19)

(noesyf3gpphxf19| NO ESYF3G PP HX F19 )
ge-2D w1 - 13 C,15 N-Doubly Filtered NOESY experiment
· ge-2D w1 -13C,15 N-Doubly Filtered NOESY using WATERGATE (noesygpphwgx1|

NOES YG PPHW G X1 )
ge-2D w2 - 13 C,15 N-Doubly Filtered NOESY experiment
· ge-2D w2 -13C,15N-Doubly Filtered NOESY using WATERGATE (noesygpphwgx2|

NOES YG PPHW G X2 )
ge-2D w1 ,w2 -13 C,15N-Doubly Filtered NOESY experiment
· Phase-sensitive ge-2D w1,w2 13 C, 15 N -Doubly Filtered NOESY with WATERGATE (selective

pulses) (noesygpphwgxf| NOES YGP PHW GX f)
· Phase-sensitive ge-2D w1,w2 13 C, 15 N-Doubly Filtered NOESY with WATERGATE (selective
pulses) (noesygpphwgxf.2| NOES YGP PHW G Xf .2 )
2D NOESY
3D NOESY-HSQC
3D X-filtered/edited NOESY
3D and 4D HSQC-NOESY-HSQC
References:
1. A.L. Breeze, Prog. NMR Spectrosc. 36, 323-372 (2000)
L.E. Kay, J. Am. Chem. Soc. 119 6711-6721 (1997)
3. K. Ogura, H. Terasawa & F. Inagaki, J. Biomol. NMR 8, 492-498 (1996)
4. J. Iwahara, J.M. Wojciak & R.T. Clubb, J. Biomol. NMR 19, 231-241 (2001)

1
JCH NOE 1
JCH
H H
C C
noesygpphprxf
1 d1
H d2 d2 d0 d0 d8 d2 d2
presat
pl9
13
C
GARP
pl12
Gz
G1
noesygpphxf19
1 d1 d2 d2 d0 d0 d8 d2 d2
H
13
C GARP
pl12
Gz
G1 G1

Unlabeled
Labeled
Intramolecular NOEs
H H H H
Intermolecular NOEs
H H
1
JNH NOE 1
JNH
H H
N N
noesyf3gpphxf19
1 d1 d2
d21 d21 d0 d0 d8 d21 d21
H
15
N GARP
pl12
Gz
G1 G1

NOE 1
H JXH
H
w1-13C,15N-Doubly Filtered NOESY
H[C12,N14] (t1) -> H (t2) X
noesygpphwgx1
1 d1 d26 d26 d d26 d26 d d0 d8 -x -x

H d d
p11
sp1
13
C d28 d29
p15 p15
sp18 sp18
15
N
Gz
G2 G2 G3 G4 G4 G5 G0 G1 G6 G6
1
JXH NOE
H H
w2-13C,15N-Doubly Filtered NOESY
X
H (t1) -> H[C12,N14] (t2)
noesygpphwgx2
1
H d1 e d0 d8 d26 d26 d d26 d26 d -x -x
p11
sp1
13
C d28 d29
p8 p15 p15
15 sp13 sp18 sp18
N
Gz
G1 G2 G2 G3 G4 G4 G5 G6 G6

1
JXH NOE 1
JXH
H H
w1,w2-13C,15N-Doubly Filtered NOESY
H[C12,N14] (t1) -> H[C12,N14] (t2)
X X
noesygpphwgxf
1 d1 d2 d2 d0 d8 d24 -x -x d24
H
p11
sp1
13 d2*2 d24*2
C -d21 -d21
15 d21 d21
N -d2 -d24
Gz
G1 G2 G3
noesygpphwgxf.2
1 d1 d26 d26 d d26 d26 d d0 d8 d26 d26 d d26 d26 d -x -x

H
p11
sp1
13
C d28 d29 d28 d29
p15 p15 p15 p15

sp18 sp18 sp18 sp18
15
N
Gz

BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
3D DOUBLY-13C,15N-FILTERED
HSQC-NOESY & NOESY-HSQC
EXPERIMENTS

3D X-Filtered HSQC-NOESY
3D X-Filtered NOESY-HSQC
13
ge-3D C,15N-Doubly Filtered HSQC-NOESY experiment
· W3 -13 C, 15N-Doubly Filtered 3D 1 H-13 C-HSQC-NOESY using WATERGATE (hsqcgpnowgx33d|

HSQ CG PNO WG X33D )
13 15 1 15
· W3 - C, N-Doubly Filtered 3D H- N-HSQC-NOESY using WATERGATE
(hsqcf3gpnowgx33d| HS QCF3G PNO WG X 33D )
13
ge-3D C,15N-filtered/edited NOESY-HSQC experim ent
· w1 -13 C, 15N- Filtered 3D NOESY-1 H-13 C-HSQC using WATERGATE (noesyhsqcgpwgx13d|

NOES YHS QCG PW GX 13D )
· w1 -13 C, 15N- Filtered 3D NOESY-1 H-15 N-HSQC using WATERGATE (noesyhsqcf3gpwgx13d|

NOES YHS QCF3G PW GX 13D )
· w1 -13 C, 15N- Filtered 3D NOESY-1 H-15 N-HSQC using PEP and echo-antiecho
(noesyhsqcfpf3gpsix13d)
· 3D w1 -12 C/ 14 N- Filtered NOESY-13C, 15N-HSQC experiment with simultaneous evolution and
editing between labeled-unlabeled part (noesyhsqcedgpsm3d | N OESYHS Q CEDG PS M3D )
· 3D w1 -12 C/ 14 N- Filtered NOESY-13C, 15N-HSQC experiment with simultaneous evolution,
sensitivity improvement and editing between labeled-unlabeled part (noe syhsqcedgpsism3d
| N OESY HSQ CED GPS IS M 3D)
Also see:
NOESY, NOESY-HSQC, HSQC-NOESY , and HSQC-NOESY-HSQC experiments
1 1
JXH NOE 1 JXH NOE 1
H JCH JNH
H H H
X C X
w3-Filtered 3D HSQC-NOESY
N
1 1 1 1
JNH NOE JXH JCH NOE JXH
H H H H
N X C X
w1-Filtered 3D NOESY-HSQC

References:
1. A.L. Breeze, Prog. NMR Spectrosc. 36, 323-372 (2000)
L.E. Kay, J. Am. Chem. Soc. 119 6711-6721 (1997)
3. K. Ogura, H. Terasawa & F. Inagaki, J. Biomol. NMR 8, 492-498 (1996)
4. J. Iwahara, J.M. Wojciak & R.T. Clubb, J. Biomol. NMR 19, 231-241 (2001)
In a mixture of a 13C,15N-compound and a natural-abundance 12C,14N compound there is some

different NOE pathways:
i) Intramolecular Unlabeled-Unlabeled NOEs
ii) Intramolecular Labeled-Labeled NOEs
iii)Intermolecular Labeled-Unlabeled NOEs
X-Filtered/Edited NOESY experiments can distinguish between them:
Unlabeled
Labeled
Intramolecular NOEs
H H H H
Intermolecular NOEs
H H

All these experiments use a Double 13C,15N-Filter

(see X-filtered TOCSY experiments)
y -x y -x
1 d26 d26 d d26 d26 d

H
13
C d28 d29 d26: 1/(4*J(NH))
p15 p15 d28: 1/(4*J(CH)min)
sp18 sp18 d29: 1/(4*J(CH)max)
15
N
Gz
G2 G2 G3 G4 G4 G5
w3-13C,15N-Doubly Filtered 13C-HSQC-NOESY experiment

C13 (t1) -> H[C13] (t2) -> H[C12,(N14)] (t3)
1
JXH NOE 1
H JCH
H
X C
C
H
H
hsqcgpnowgx33d
y
Frec
-x -x
1 d1 d4 d4 p28 d4 d4 d10 d10 d8
H d d d
F1 p11
p8 sp1
13 d d0 d0 e d sp13 d26 d26 d d26 d26
C d28
-d28
d29
-d29
p8 p8 p15 p15
sp13 sp13 sp18 sp18
15
N optional
Gz
G7 G8 G1 G2 G2 G3 G4 G4 G5 G6 G6

w3-13C,15N-Doubly Filtered 15N-HSQC-NOESY experiment

N15 (t1) -> H[N15] (t2) -> H[(C12),N14] (t3)
1
JXH NOE 1
H JNH
H
X N
H
HN
hsqcf3gpnowgx33d
y
Frec
y -x -x
1 d1 d26 d26 -x d26 d26 d10 d10 d8
H d d d d
d
p11 F1
sp1
15
N d0 d0 e d26 d26 d d26 d26
13
C optional d28 d29
p8 p8 p15 p15
sp13 sp13 sp18 sp18
Gz
G7 G8 G1 G2 G2 G3 G4 G4 G5 G6 G6

w1-13C,15N-Doubly Filtered NOESY-HSQC experiment

H[(C12),N14] (t1) -> N15 (t2) -> H[N15] (t3)
1 1
JNH NOE JXH
H H
N X H
N
HN
noesyhsqcf3gpwgx13d
1 d1 d26 d26 d d26 d26 d e d0 d0 d8 d26 d26 d26 -x -x d26

H d d
p8 p11
sp13 sp1
13
C d28 d29
p15 p15 p8
15
sp18 sp18 sp13
N optional d10 d10 e GARP
pl16
Gz
G4 G4 G5 G6 G6 G7 G8 G1 G2 G3 G3
noesyhsqcfpf3gpsix13d
1 d1 d26 d26 d d26 d26 d d0 d8 d26 d26 d26 d26 d26 d26 d d
H d
p11 p8
sp1 sp13
13 d29
C d28
p15 p15
sp18 sp18
15 d10 d10 d d
N optional GARP
pl16
Gz
G4 G4 G5 G6 G6 G7 G8 G1 G2 G9 G9 G10 G10 G3

w1-13C,15N-Doubly Filtered NOESY-HSQC experiment

H[(C12),N14] (t1) -> C13 (t2) -> H[C13] (t3)
1 1
JCH NOE JXH
H H
C X
C
H
noesyhsqcgpwgx13d
1 d1 d26 d26 d d26 d26 d e d0 d0 d8 d4 d4 d4 -x -x d4

H
p11
sp1
13
C d28 d29 d d10 d10 e d
GARP
p15 p15 p8 p8 pl12
15
sp18 sp18 sp13 sp13
N optional
Gz
G4 G4 G5 G6 G6 G7 G8 G1 G2 G3 G3

12C,14N vs 13C,15N-edited NOESY-HSQC:

C. Eichmueller, W. Schueler, R. Konrat & B. Kraeutler, J. Biomol. NMR 21, 107-116 (2001)
noesyhsqcedgpsm3d
y y F1
1 y Frec
H d1 d d21 d21 d D d0 d0 d8 d d26 d26 d26 d26
on/off
15 d d10 d10 e d
N GARP
pl16
13 d4 d4
C d2
GARP
p15 p8 p8 p8 pl12
sp8 sp13 sp13 sp13
Gz
G1G2 G2 G3 G4 G5 G6 G6 G7 G8G9 G9
;use AU-program split [2 F2] to create separate datasets
noesyhsqcedgpsism3d
y y
1 y Frec
d26-
H d1 d d21 d21 d D d0 d0 d8 d26 d26 d24 d26
d4/2
d26 d26 d d
on/off F1
15 d e d20 d20 d10 d10 d D

N GARP
pl16
13 d4 d4 d4
C d2 /2 GARP
p15 p8 pl12
sp8 sp13
Gz
G1G2 G2 G3 G4 G6 G7
G5

BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
PROTEIN NMR
BACKBONE EXPERIMENTS

NOESY-HSQC HNCO HNCA
HSQC-NOESY
HSQC-NOESY-HSQC HNN
Dynamics
TROSY
HN HSQC HNCOCA HNCACO
NOE HNCAN
© 2010, BRUKER Biospin, Teodor Parella

NOESY HNCOCANH HNCANH
HNCOCAHA HNCAHA
HACACONH HACANH
HCANCO
N HCACON
CHEMICAL HC
SHIFT C HCAN
HSQC
H BACKBONE
HCACO
CCCONH CCNH
HCACB HNCOCACB HNCACB
CBCACONH CBCANH
TOCSY TOCSY-HSQC
HSQC-TOCSY HBCB/HACACONH HBCB/HACANH
COSY
HBHACONH HBHANH
HCCCONH HCCNH
HCCH-TOCSY
HCCH-COSY SIDECHAIN
534
Interpulse delays are optimized as a function of the following heteronuclear coupling constants:
140
H C H 4-9 H C H
35
7-11
N C 55 C 15 N C C
91 140
O O
H H H H
Identifier Power Duration spnam cpdprg Description Remarks
PROTON PULSES & POWER LEVELS

p1,p2 pl1 High Power Pulse
p6 pl10 25u TOCSY
p15 pl11 ROESY Power as 125u pulse
p26,pcpd1 pl19 55-65u dipsi2 Decoupling pulse
p11 sp1 1.5-2m SINC1.1000 Water flipback pulse
CARBON PULSES & POWER LEVELS

p9 pl15 25u dipsi3 CC-TOCSY or HC-Cross polarization
p13 sp2 320u Q5.1000 on-resonance 90º (Cali or CO)
p13 sp8 320u Q5tr.1000 on-resonance time-reversed 90º (Cali or CO)
p14 sp3 256u Q3.1000 on-resonance 180º (Cali or CO)
p14 sp5/sp7 256u Q3.1000 off-resonance 180º (Cali or CO)
1500u Q5.1000 on-resonance 90º (CA)
1500u Q5tr.1000 on-resonance time-reversed 90º (CA)
p24 sp9 1000u Q3.1000 on-resonance 180º (CA)
p24 sp7 2000u Crp60comp.4 Adiabatic 180º refocusing Power as 25u pulse
p8 sp13 500u Crp60,0.5,20.1 Adiabatic 180º inversion Power as 25u pulse
pcpd2 pl12 60u-80u garp Low Power Pulse for broadband decoupling
pcpd2, p31 sp15,pl13 1500u Crp42,1.5,20.2 p5m4sp180.p31 Adiabatic Decoupling Power as GARP + 2dB
750u Crp42,1.5,20.3 Adiabatic Bilev
pcpd2, p31 sp15,pl28 768u Q3.1000 mlevsp180.p31 CA or CO selective decoupling
pcpd2, p31 sp15,pl28 100u Gauss5.256 mlevsp180.p31 Selective CO Decoupling Power as 25u pulse
NITROGEN PULSES & POWER LEVELS

pcpd3 pl16 200-300u garp Low Power Pulse for broadband decoupling
DEUTERIUM PULSES & POWER LEVELS
pcpd4 pl17 250u garp Low Power Pulse for broadband decoupling

Delay Coupling Constant length (ms) Remarks Experiment
d3 1/(3JCH) 2.2
d4 1/(4JCH) 1.6-1.8
d21 1/(6JCH) 1.1
d21 1/(2JNH) 5.5
d22 1/(4JCOCA) 4.0
d22 1/(2JCOCA) 3.6 Two-bond
d22 1/(2JCOCA) 4.4 One-bond
d23 1/(2JNCO) 12.0
d24 1/(4JCC) 3.6
d26 1/(4JNH) 2.3
d21 T(N) 12.4

d23 T(C ) 12.0 2T=24ms<1/4JCH

H(N)-Detection X
N
HN
HN,N,CO HN,N,CA HN,N,N NH,N,HN

HNCO HNCA (H)N(CA)NNH H(NCA)NNH
HN(CA)CO HN(CO)CA (H)N(COCA)NNH H(NCOCA)NNH
(HACA)CONH SeqHNCA
IntraHNCA
HN,N,HA HN,N,Cali HN,N,Hali

HN(CA)HA CBCA(CO)NH HBHA(CO)NH
HA(CA)NH HN(CO)CBCA HBHANH
HA(CACO)NH CBCANH H(CC)(CO)NH
SeqCBCANH
IntraCBCANH
HNCBCA
CCANH
CCA(CO)NH
CC(CO)NH
(H)CC(CO)NH
HA-Detection X
CA
HA
HA,CA,CO HA,CA,N
HACACO HACAN
HACA(CO)N
HCBCA(CO)N

1H Chemical Shifts of random-coil 20 aa

BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
3D HNCO

Experiment Description
The HNCO experiment correlates the NH group (d(NH) and d(N)) with the carbonyl
carbon (d(CO)) of the preceding residue. It is the basis for more complicated
triple-resonance 3D, 4D ... NMR pulse sequences
Sample Requirements
13C,15N-doubly labeled protein
Hardware Requirements
Triple Channel Configuration
References
1. S. Grzesiek & A. Bax, J. Magn. Reson. 96, 432 - 440 (1992)

2. J. Schleucher, M. Sattler & C. Griesinger, Angew. Chem. Int. Ed. 32, 1489-1491 (1993)
3. L.E. Kay, G.Y. Xu & T. Yamazaki, J. Magn. Reson. A109, 129-133 (1994)
4. T. Schulte-Herbrueggen & O.W. Sorensen, J. Magn. Reson. 144, 123 - 128 (2000)
1
JHN + 1JNCO HNCO
H C H H C H
N C C N C C
O O
H H H H
CO
N
HN

Understanding 3D Triple-Resonance NMR Experiments
hncogp3d
y y
y -y y -y
Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19
Y
sp1
15N d23 d23 d23-d10 d23+d10
GARP
p22 pl16
f1
13C´ d d0 d0 d
p14 p13 p14 p13 p14

sp3 sp2 sp3 sp8 sp3
13
Ca
p14 p14 p14 p14
sp5 sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G2 G3 G4 G5
1 2 3 4 5
1 1H-15N INEPT transfer: Iz to 2IxNz
Concatenated Fixed period consisting of J(NH) refocusing and

2 INEPT 15N-CO:
2IxNz-to-2IzNy-to-2NyCOz
CO evolution period consisting of d(CO) evolution and J(CO-N) decoupling

3 and d(CO) evolution and J(CO-CA) decoupling:
-2NzCOy(cos w(CO)t1)
Concatenated Constant-time 15N evolution period consisting of: i) d(N)
evolution and J(N-H) evolution, ii) d(N) evolution and J(N-CA) refocusing
4 and iii) d(N) evolution and J(N-CO) decoupling:
-2NyIz cos (w(CO)t1)exp(iw(N)t2)
5 1H-15N INEPT-PEP transfer consisting of two retro-INEPT like blocks:

[Ix(cosw(N)t2)+Iy(sin(w(N)t2)]cos(w(CO)t1)

Concatenated Periods in 3D Triple-Resonance NMR Experiments
1
H
Fixed period
Overall Duration: 2d23
X d25 d23-d25 d23
1
H Chemical shift: d25 - (d23-d25) - d23 = 2d25-2d23
X Chemical shift: d25 + (d23-d25) - d23 = 0
J(XH) Coupling Constant: d25 - (d23-d25) + d23 = 2d25
J(HH) and J(XX) Coupling Constant: d25 + (d23-d25) + d23 = 2d23
A related building block is largely used in 3D experiments in which J(XY) evolves during d23
whereas J(HH) is refocused during d25 and decoupled
y
1 d21
H DIPSI-2
15N d23 d23
f1
13C´

Constant-time 15N-evolution periods
1
H
X d23-d0 d23+d0 Variable Constant-time period

1
H Chemical shift: (d23 - d0) - (d23 + d0) = -2d0
X Chemical shift: (d23 - d0) - (d23 + d0) = -2d0
J(XH) Coupling Constant: (d23 - d0) + (d23 + d0) = 2d23
J(HH) and J(XX) Coupling Constant: (d23 - d0) + (d23 + d0) = 2d23
y -y
1 d21
H DIPSI-2
15N d23-d10 d23+d10
13C´
p14
sp3
13
Ca
p14 p14
sp5 sp5

1
H
d23+d0 d23-d0 Variable Constant-time period

X
1
H Chemical shift: (d23 + d0) + (d23 - d0) = 2d23
X Chemical shift: (d23+d0) - (d23-d0) = 2d0
J(XH) Coupling Constant: (d23+d0) - (d23-d0) = 2d0
J(HH) and J(XX) Coupling Constant: (d23+d0) + (d23-d0) = 2d23
trhncogp3d
-y
1
H
15N d10 d23 d23-d10
13C´
p13 p14
sp8 sp3
13
Ca
p14
sp5

Practical fine adjustment of pulse lengths and power levels.
1. Load the basic parameter set for the HNCO experiment: rpar HNCOGP3D all
2. Load the basic pulses and power levels according to your available probehead: getprosol
3. Change the parmode in eda from 3D to 1D (see mc command) and then set td in the indirect
F1 and F2 dimensions to 1. Also increases td in the detected dimension up to 8K, for instance.
4. Set ns and start acquisition with rga and zg.

5. When the data is transformed with ef, the program asks for the procno number.
If you type 2, for instance, the corresponding 1D H(NCO) spectrum is displayed in the
“filename 1 2” file
hncogp3d
y y
y -y y -y
Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19
Y
sp1
15N d23 d23 d23-d10 d23+d10
GARP
p22 p21 pl16
f1
13C´ d d0 d0 d
p14 p13 p14 p13 p14

sp3 sp2 sp3 sp8 sp3
13
Ca
p14 p14 p14 p14
sp5 sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G2 G3 G4 G5
In the 1D H(NCO) experiment, d0 and d10 are

fixed to a minimum fixed value of 3us.

6. Once the 1D data shows signals in the NH region, the overall signal must be maximized
by individual optimization of the different parameters of the sequence. This process is
performed from the “1 2” file and executing the popt program. In the case of hncogp3d
the most important pulses are:
Hard 1H pulse (p1) at pl1

Water 90 selective 1H pulse (p11) at sp1
Hard 15N 90 pulse (p21) at pl3
Selective 13CO 180º pulse (p14) at sp3
Selective 13CO 90º pulse (p13) at sp2 and sp8
Selective 13CA 180º pulse (p14) at sp5
Usually, pulse length are fixed and the power level is varied over an specific range up to a
maximum value is obtained.
1D HNCO
1D HSQC
1D proton
10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 ppm
Although sequences included into the pp directory are highly robust, this same 1D calibration
protocol based on the use of zg/popt can be used to optimize other parameters and to design
better alternatives or modify the exisiting ones according to the used sample conditions:
Required number of scans

Setting of delay durations
Check for proper gradient strengths
Use of alternative purgue gradients
Use of additional water flip-back pulses
Check for proper and minimum phase cycling
.....

Recording 2D Planes:
Once the acquisition parameters have been finely adjusted, it is recommended to record the
first 2D planes of the 3D spectrum. This is automatically set from the original dataset
and setting the corresponding td values according to the required resolution in each
dimension. Thus, an 2D HN(CO) spectrum is acquired by setting td to 2k(1H), 64(N) and 1(CO)
in eda. Otherwhise, a 2D H(N)CO spectrum is acquired by setting td to 2k(1H), 1(N) and 64(CO),
for instance. These preliminary spectra could be also used to check for useful offsets and
spectral windows in each dimension.
2D HN(CO) 2D H(N)CO
ppm ppm
104 160
106 162
108 164
110 166
112 168
114 170
116 172
118 174
120 176
122 178
124 180
126 182
128 184
10 9 8 7 ppm 10 9 8 7 6 ppm

Experiment Version vs Labeling Strategy and Protein Size:
Basically, all 3D experiments can be designed with different pulse timings as a

function of sample requirements and performance. The most typical approaches
are:
i) PEP Block in step 5: Maximum Theoretical sensitivity for IS spin systems

ii) WATERGATE Block in step 5: Better solvent suppression
iii) TROSY Block in step 5: TROSY editing for large proteins. heteronuclear decoupling
is removed during N evolution and during acquisition.
1. Conventional
2. Echo/Antiecho
iv) 2H-decoupling during CA evolution: For 2H-labeled Proteins
3D HNCO experiment
· 3D HNCO using PEP (hncogp3d | HNCOGP 3D)

· 3D HNCO using WATERGATE (hncogpwg3d | HNCO GP WG 3D)
· 3D HNCO using TROSY (trhncogp3d | T RHNCOG P3D ):
o using echo-antiecho gradient (trhncoetgp3d | T RHNCOET GP 3D)
o with 2H-decoupling (trhncogp2h3d | TRHN COGP 2H3D)
Also see:
3D APSY-HNCO experiment:
Reduced-Dimensionality (3,2)-HNCO (rd_hnco_32 | APSY_HNCO_32)
3D SOFAST/BEST-HNCO experiment:
3D BEST-HNCO (b_hncogp3d | B_HNCOGP3D)
3D BEST-HNCO using TROSY (b_trhncogp3d)
3D BEST-intraHNCO (b_hncoigp3d | B_HNCOIGP3D)
3D BEST-intraHNCO using TROSY (b_trhncoigp3d)
3D HNCO-type experiments for T1, T2 and T1(rho) relaxation measurements

3D HNCO-type experiments for J measurements
3D HNCO-type experiments for RDC measurements
3D HNCO-type experiments for Hydrogen-Bonds J measurements
3D Carbon-Detected HNCO experiments
intra-HNCO, HN(CA)CO experiments

1 2 3 4
NH N CO N NH
t1 t2 t3
d26=1/4J(NH)=2.5m
d21=1/2J(NH)=5.5m
d23=1/4J(NCO)=12m
hncogp3d
y y
y -y y -y
Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19
Y
sp1
15N d23 d23 d23-d10 d23+d10
GARP
p22 pl16
f1
13C´ d d0 d0 d
p14 p13 p14 p13 p14

sp3 sp2 sp3 sp8 sp3
13
Ca
p14 p14 p14 p14
sp5 sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G2 G3 G4 G5

hncogpwg3d
y
y -y y -y
-x -x -x Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19 d26 d26
sp1
15N d23 d23 d23-d10 d23+d10
GARP
p22 p21 pl16
f1
13C´ d0 d0 d
p14 p13 p14 p13 p14

sp3 sp2 sp3 sp8 sp3
13
Ca
p14 p14 p14 p14
sp5 sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G2 G3 G4 G4
trhncoetgp3d
-y -y y y
y -x d26 d26 Frec
1 d1 d26 d26 d26 d26 -y -y
H d
p11 p1 p2 f1 y y -y
sp1
15N d23 d23 d23-d26 d23-d26
-d10 +d10 d
p22 p21
13C´ d0 d0
p14 p13 p14 p13 p14 p14

13
Ca
p14 p14 p14 p14
sp5 sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G1 G2 G2 G4 G4 G6 G6
G3 G5 G7

trhncogp3d
-y -y
d26 d26 d26 d26 d26 d26 Frec

1 d1 -x -y -x -x
H
p1 p11 p2 f1 -y
sp1
15N d23 d23 d10 d23 d23-d10
p22 p21
13C´
d0 d0
p14 p13 p14 p13 p14

sp3 sp2 sp3 sp8 sp3
13
Ca
p14 p14 p14
sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G1 G2 G2 G3 G3
trhncogp2h3d
-y -y
d26 d26 d26 d26 d26 d26
1 d1 -x -y -x -y Frec
H
p1 p11 p2 f1 -y
sp1
15N d23 d23 d10 d23 d23-d10
p22 p21
13C´
d0 d0
p14 p13 p14 p13 p14

sp3 sp2 sp3 sp8 sp3
13
Ca
p14 p14 p14
sp5 sp5 sp5
2
H GARP
pl17
GZ
G1 G1 G2 G2 G3 G3


BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
3D HNCA

The HNCA experiment correlates the NH group (d(NH) and d(N)) with the alpha carbon
carbon (d(CA)) of the same and of the preceding residue.
Sample Requirements
13C,15N-doubly labeled protein
Triple Channel Configuration
References
1. S. Grzesiek & A. Bax, J. Magn. Reson. 96, 432 - 440 (1992)

2. J. Schleucher, M. Sattler & C. Griesinger, Angew. Chem. Int. Ed. 32, 1489-1491 (1993).
;3. L.E. Kay, G.Y. Xu & T. Yamazaki, J. Magn. Reson. A109, 129-133 (1994))
Main Features:
1. HNCA provides one inter-residue and one intra-residue cross peak.
2. The intensity of the HNCA peaks are less intense than in the HNCO experiment.
3. The inter-residue cross peak is generally less intense than the intra-residue cross peak
Comparison of different 3D experiments detecting HN, N and CA
1
JHN + 1JNCA iHNCA
HNCA
1 2
JHN + JNCA
H C H H C H H C H H C H
N C C N C C N C C N C C
O O O O
H H H H H H H H
1
seqHNCA JNH + 1JNCO + 1JCOCA
HN(CO)CA
1 2
JHN + JNCA
O O O
H H H H H O H
H H

3D HNCA experiment
· 3D HNCA using PEP (hncagp3d | HNCA G P3D )

o with 2H-decoupling (hncagp2h3d | HN CAG P2H3D )
· 3D HNCA using WATERGATE (hncagpwg3d | HNCA GP W G3D )
o with 2H-decoupling (hncagpwg2h3d | HN CAG PW G2H3D )
· 3D HNCA with selective Cb/C=O decoupling (hncadhgp3d)
· 3D HNCA using TROSY(trhncagp3d2.2 | TRHN CA GP3D 2.2 ) :
o using echo-antiecho gradient (trhncaetgp3d | T RHNCA ET GP 3D)
o using echo-antiecho gradient and with 2 H-decoupling (trhncaetgp2h3d | TRHN CAET GP 2H3D )
o with HMQC steps (trhncagp3d.2 | T RHNCA GP 3D .2 )

o with 1 H?-decoupling (trhncagp3d2 | T RHNCA GP 3D2 )
o with 1 H?-decoupling and HMQC steps (trhncagp3d | T RHNCA GP 3D)
o with 2H-decoupling and HMQC steps (trhncagp2h3d | T RHNCA G P2H3D )
o with 2H-decoupling (trhncagp2h3d2 | T RHNCA GP 2H3D2 )
Also see:
3D APSY-HNCA experiment:
Reduced-Dimensionality (3,2)-HNCA (rd_hnca_32 | APSY_HNCA_32)
3D SOFAST/BEST-HNCO experiments:
3D BEST-HNCA (b_hncagp3d | B_HNCAGP3D)
3D BEST-HNCA using TROSY (b_trhncagp3d)
3D HNCA-type experiments for J measurements

3D HNCA-type experiments for RDC measurements
3D Carbon-Detected HNCA experiments
intra-HNCA, sequential-HNCA, HN(CO)CA
In all experimentos involving a N-CA transfer, two complementary pathways are involved:
HNCA
H C H H C H
N C C N C C
O O
H H H H
1
JNCA=7-11Hz
2
JNCA=4-9Hz

1 2 3 4
d26=1/4J(NH)=2.5m
NH N CA N NH d21=1/2J(NH)=5.5m
d23=1/4J(NCA)=12m
t1 t2 t3
hncagp3d
y y
y -y
Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19 Y
sp1
15N d23 d23 d23-d10 d23+d10
GARP
p22 p21 pl16
f1
13
Ca d0 d0
p14 p13 p14 p13 p14

sp3 sp2 sp3 sp8 sp3
13C´
p14 p14 p14 p14

sp5 sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G2 G3
CA
N
HN
2D HN(CA) 2D H(N)CA
ppm ppm
105
45
110
50
115
55
120
60
125
65
130
10 9 8 7 ppm 10 9 8 7 6 ppm

hncadhgp3d
y y
y -y
Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19
Y
sp1
15N d23 d23 d23-d10 d23+d10
GARP
p22 p21 pl16
f1
13
Ca d0 d0
p14 p13 p13

sp3 sp2 sp8
13C´
p5m4sp180.p31
pl13 p14
sp15 sp5
GZ p31
G1 G2 G3
Selective CB/CO Decoupling:

H. Matsuo, E. Kupce, H. Li & G. Wagner, J. Magn. Reson. B 113, 91-96 (1996)
hncagp2h3d
y y
y -y y -y
pl19 Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 Y
sp1
15N d22 d22 d4 d23-d10 d23+d10
GARP
p22 p21 pl16
f1
13
Ca d0 d27 d27-d0
p14 p13 p14 p13 p14

sp3 sp2 sp3 sp8 sp3
13C´
p14 p14 p14 p14

sp5 sp5 sp5 sp5
2
H GARP
pl17
GZ
G1 G2 G3

hncagpwg3d
y
y -y y -y
-x -x -x
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d Frec
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19 f2 d26 d26
sp1
15N d23 d23 d23-d10 d23+d10
GARP
p22 p21 pl16
f1
13
Ca d0 d0 d
p14 p13 p14 p13 p14

sp3 sp2 sp3 sp8 sp3
13C´
p14 p14 p14 p14

sp5 sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G2 G3 G4 G4
hncagpwg2h3d
y
y -y y -y
-x -x -x
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d Frec
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19 f2 d26 d26
sp1
15N d23 d23 d4 d23-d10 d23+d10
GARP
p22 p21 pl16
f1
13 d0 d27
Ca d27
-d0
d
p14 p13 p14 p13 p14

sp3 sp2 sp3 sp8 sp3
13C´
p14 p14 p14 p14

sp5 sp5 sp5 sp5
2
H GARP
pl17
GZ
G1 G2 G3 G4 G4

trhncagp3d
-y -y
d26 d26 d26 d26 d26 d26 Frec
1 d1 -x -y -x -x
H
p1 p11 p2 f1 -y
sp1
15N d23 d23 d0 d23 d23
d10 d0 d10
-d0 -d10 -d10 -d0
p22 p21
13
Ca d10 d10 d10 d10
p14 p13 p13 p14

sp3 sp2 sp8 sp3
13C´
p14 p14 p14

sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G1 G2 G2 G3 G3
trhncagp3d2
-y -y
d26 d26 d26 d26 d26 d26 Frec
1 d1 -x -y -x -x
H
p1 p11 p2 f1 -y
sp1
15N d23 d23 d10 d23 d23-d10
p22 p21
13
Ca d0 d0 d0 d0
p14 p13 p14 p13 p14

sp3 sp2 sp3 sp8 sp3
13C´
p14 p14 p14

sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G1 G2 G2 G3 G3

trhncagp3d.2
-y -y
d26 d26 y -y d26 d26 d26 d26 Frec
1 -x -y -x -x
H d1 DIPSI-2
p1 p11 p2 f1 pl19 -y
sp1
15N d23 d23 d0 d23 d23
d10 d0 d10
-d0 -d10 -d10 -d0
p22 p21
13
Ca d10 d10 d10 d10
p14 p13 p13 p14

sp3 sp2 sp8 sp3
13C´
p14 p14 p14

sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G1 G2 G2 G3 G3
trhncagp3d2.2
-y -y
d26 y y d26 d26 d26 d26 Frec

1 -x -y -x -x
H d1
DIPSI-2
p1 p11 p2 f1 -y
sp1
15N d23 d23 d10 d23 d23-d10
p22 p21
13
Ca d0 d0
p14 p13 p14 p13 p14

sp3 sp2 sp3 sp8 sp3
13C´
p14 p14 p14

sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G1 G2 G2 G3 G3

-y trhncagp2h3d
-y
d26 d26 d26 d26 d26 d26 Frec
1 -x -y -x -x
H d1
p1 p11 p2 f1 -y
sp1
15N d23 d23 d0 d23 d23
d10 d0 d10 -d0
-d0 -d10 -d10
p22
13
Ca d10 d10 d10 d10
p14 p13 p13 p14

sp3 sp2 sp8 sp3
13C´
p14 p14 p14

sp5 sp5 sp5
2
H GARP
pl17
GZ
G1 G1 G2 G2 G3 G3
trhncagp2h3d2
-y -y
d26 d26 d26 d26 d26 d26 Frec
1 d1 -x -y -x -x
H
p1 p11 p2 f1 -y
sp1
15N d23 d23 d10 d23 d23-d10
p22 p21
13
Ca d0 d0 d0 d0
p14 p13 p14 p13 p14

sp3 sp2 sp3 sp8 sp3
13C´
p14 p14 p14

sp5 sp5 sp5
2
H GARP
pl17
GZ
G1 G1 G2 G2 G3 G3

trhncaetgp3d
y -y y y
y -x d26 d26 Frec
1 d1 d26 d26 d26 d26 -y -y
H d
p11 p1 p2 f1 y y -y
sp1
15N d23 d23 d23-d25 d23-d25
-d10 +d10 d
p22 p21
13
Ca d0 d0 d0 d0
p14 p13 p14 p13 p14 p14

13C´
p14 p14 p14 p14

sp5 sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G1 G2 G2 G4 G4 G6 G6
G3 G5 G7
trhncaetgp2h3d
y -y y y
y -x d26 d26 Frec
1 d1 d26 d26 d26 d26 -y -y
H d
p11 p1 p2 f1 y y -y
sp1
15N d23 d23 d23-d25 d23-d25
d4 -d10 +d10 d
p22 p21
13
Ca d0 d27 d27
-d0
p14 p13 p14 p13 p14 p14
13C´
p14 p14 p14 p14

sp5 sp5 sp5 sp5
2
H GARP
pl17
GZ
G1 G1 G2 G2 G4 G4 G6 G6
G3 G5 G7

BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
3D HN(CA)CO

HNCACO Experiment
3D HN(CA)CO e xperiment
· 3D HN(CA)CO using PEP (hncacogp3d | HNCA COGP 3D)

o with 2H-decoupling and suppression of protonated carbons (hncacogp2h3d |
HNCA COG P2H3D )
o with 2H-decoupling (hncacogp2h3d.2 | HNCA COG P2H3D .2 )
· 3D HN(CA)CO using WATERGATE (hncacogpwg3d | HN CACO GPW G 3D)
o with 2H-decoupling and suppression of protonated carbons (hncacogpwg2h3d |
HNCA COG PW G2H3D )
· 3D HN(CA)CO using TROSY (trhncacogp3d | T RHNCA COGP 3D )

o with 2H-decoupling (trhncacogp2h3d | T RHNCA COGP 2H3D )
o using echo-antiecho gradient (trhncacoetgp3d | TRHN CAC OETG P3D )
o using echo-antiecho gradient and with 2 H-decoupling (trhncacoetgp2h3d |
TR HNCA COETG P2H3D )
4D HNCACO experiment
· 4D HNCACO using PEP (hncacogp4d)

o with 2H-decoupling (hncacogp2h4d)
· 4D HNCACO using WATERGATE (hncacogpwg4d)
o with 2H-decoupling (hncacogpwg2h4d)
· 4D HNCACO using TROSY (trhncacogp4d)
o with 2H-decoupling (trhncacogp2h4d)
o using echo-antiecho gradient (trhncacoetgp4d)
o using echo-antiecho gradient and with 2 H-decoupling (trhncacoetgp2h4d)
Also see:
3D SOFAST/BEST-HN(CA)CO experiment
3D BEST-HN(CA)CO (b_hncacogp3d | B_HNCACOGP3D)
3D BEST-HN(CA)CO using TROSY (b_trhncacogp3d)
4D BEST-HNCACO (b_hncacogp4d)
3D CO-Detected (H)NCACO experiments
HNCO Experiment
1
JNH + 1JNCA + 1JCACO
HN(CA)CO
1 2 1
JNH + JNCA + JCACO
H C H H C H CO
N C C N C C
O O N
H H H H HN

1 2 3 4 5 6
NH N CA CO CA N NH
t1 t2 t3
hncacogp3d
y y
y -y
Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19
Y
sp1
15N d23 d23 d23-d10 d23+d10
GARP
p13 p14 pl16
p22 p21 sp8 sp7 y
13
Ca d22 d22 d22 d22
p14 p13 p24 p14 p13 p24 p13
sp3 sp2 sp9 f1 sp7 sp2 sp9 sp8
13
C´ d0 d0
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14

sp5 sp5 sp2 sp3 sp8 sp5 sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G3
G2
hncacogpwg3d
y
y -y y -y
-x -x -x Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19 f2 d26 d26
sp1
15N d23 d23 d d23-d10 d23+d10 d
GARP
p13 p14 pl16
p22 p21 f1 sp8 sp7 y
13
Ca d22 d22 d22 d22
p14 p13 p24 p14 p13 p24 p13 p14
sp3 sp9
y sp7 sp2 sp9
sp2 sp8 sp3
13C´ d0 d0
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14

GZ
G1 G2 G3 G4 G4
d26=1/4J(NH)=2.3m
d21=1/2J(NH)=5.5m
d23=1/4J(NCO)=12m
d22=1/4J(COCA)=4m
d4=1/4J(CH)=1.7m

complu2008 19 2 D:\data\700\nmr
RAW 13 plane number 1 read from teo071008 19 1 \opt\topspin\data\nmr\nmr
168 F1 [ppm]
170
HNCO (blue)
172
vs
HN(CA)CO (red)
174
176
178
9 8 7 6 F2 [ppm]
hncacogp2h3d
y y
y -y y -y
pl19 Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d4 d21 d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 p26
Y
sp1
15N d23 d23 d23-d10 d23+d10
GARP
p22 p21 p13 p14 pl16
sp8 sp7 y
13
Ca d22 d22 d22 d22
p14 p13 p24 p14 p13 p24 p13 p14
sp3 sp2
f1 sp7 sp2 sp9 sp8
sp9 sp3
13C´ d0 d0
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14

2
H
GARP GARP
pl17
GZ
G1 G3
G2
hncacogp2h3d.2
y y
y -y y -y
pl19 Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 Y
sp1
15N d23 d23 d23-d10 d23+d10
GARP
p13 p14 pl16
p22 p21
sp8 sp7 y
13
Ca d22 d22 d22 d22
p14 p13 p24 p14 p13 p24 p13 p14
f1 sp7 sp2 sp9
sp3 sp2 sp9 sp8 sp3
13C´ d0 d0
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14

2
H
GARP GARP
pl17
GZ
G1 G3
G2

hncacogpwg2h3d
y
y -y y -y
-x -x -x Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19 f2 d26 d26
sp1
15N d23 d23 d d23-d10 d23+d10 d
GARP
p13 p14 pl16
p22 p21 f1 sp8 sp7 y
13
Ca d22 d22 d22 d22
p14 p13 p24 p14 p13 p24 p13 p14
sp3 sp9
y sp7 sp2 sp9
sp2 sp8 sp3
13C´ d0 d0
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14

2
H GARP GARP
pl17
GZ
G1 G2 G3 G4 G4
trhncacogp3d
-y -y
d26 d26 d26 d26 d26 d26 Frec
1 -x -y -x -x
d1
H
p1 p11 p2 f1 -y
sp1
15N d23 d23 d10 d23 d23-d10
p22 p21 p13 p14

f1 sp8 sp7
13
Ca d22 d22 d22 d22
p14 p13 p24 y p14 p13 p24 p13 p14
sp3 sp2 sp9 sp7 sp2 sp9 sp8 sp3
13C´ d0 d0
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14
sp5 sp5 sp2 sp3 sp8 sp5 sp5
GZ
G1 G1 G2 G2 G3 G3
trhncacogp2h3d
-y -y
d26 d26 d26 d26 d26 d26 Frec
1 -x -x
H d1 -y -x
p1 p11 p2 f1 -y
sp1
15N d23 d23 d10 d23 d23-d10
p22 p21 p13 p14

f1 sp8 sp7
13
Ca d22 d22 d22 d22
p14 p13 p24 y p14 p13 p24 p13
13C´
d0 d0
p14 p14 p13 p14 p13 p14

2
H
GARP
pl17
GZ
G1 G1 G2 G2 G3 G3

trhncacoetgp3d
-y -y y y
y -x d26 d26 Frec
1 d26 d26 -y -y
H d1 d26 d26 d
p11 p1 p2 f1 y y -y
sp1
15N d23 d23 d23-d25 d23-d25
-d10 +d10 d
p22 p21 p13 p14

f1 sp8 sp7
13
Ca d22 d22 d22 d22
p14 p13 p24 y p14 p13 p24 p13 p14 p14
13C´ d0 d0
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14
GZ
G1 G1 G2 G2 G1 G1 G4 G4 G6 G6
G3 G5 G7
trhncacoetgp2h3d
-y -y y y
y -x d26 d26 Frec
1 d26 d26 -y -y
H d1 d26 d26 d
p11 p1 p2 f1 y y -y
sp1
15N d23 d23 d23-d25 d23-d25
-d10 +d10 d
p22 p21 p13 p14

f1 sp8 sp7
13
Ca d22 d22 d22 d22
p14 p13 p24 y p14 p13 p24 p13 p14 p14
13C´ d0 d0 d0 d0
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14
2
H GARP GARP
pl17
GZ
G1 G1 G2 G2 G4 G4 G6 G6
G3 G5 G7

hncacogp4d
y y
y -y
Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19
Y
sp1
d23 d23 d23 d23
15N
-d33 +d33 GARP
p13 p14 pl16
p22 p21 sp8 sp7 y
13
Ca d22 d22 d32 d22
d22
-d32
p14 p13 p24 p14 p13 p24 p13 p14
sp3 sp2 sp9 f1 sp7 sp2 sp9 sp8 sp3
13
C´ d31 d31
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14

GZ
G1 G3
G2
hncacogp2h4d
y y
y -y y -y y -y
Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d4 d21 d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2 DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19
Y
sp1
d23 d23 d23 d23
15N d
-d33 +d33 GARP
p13 p14 pl16
p22 p21 sp8 sp7 y
13
Ca d22 d22 d32 d22
d22
-d32
p14 p13 p24 p14 p13 p24 p13 p14
13
C´ d31 d31
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14

2
H GARP GARP
pl17 pl17
GZ
G1 G4 G3
G2

hncacogpwg4d
y
y -y y -y -x -x -x Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19
sp1
15N d23 d23 d23 d23
-d33 +d33 GARP
p13 p14 pl16
p22 p21 sp8 sp7 y
13
Ca d22 d22 d32 d22
d22 d
-d32
p14 p13 p24 p14 p13 p24 p13
f1 p14
13
C´ d31 d31
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14

GZ
G1 G2 G3 G4 G4
hncacogpwg2h4d
y
y -y y -y y -y -x -x -x Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d4 d21 d
p1 p2 p11 p26 pl19
sp1
d23 d23 d23 d23
15N
-d33 +d33 GARP
p13 p14 pl16
p22 p21 sp8 sp7 y
13
Ca d22 d22 d32 d22
d22 d
-d32
p14 p13 p24 p14 p13 p24 p13
f1 p14
13
C´ d31 d31
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14

2
H GARP GARP
pl17
GZ
G1 G2 G3 G4 G4

trhncacogp4d
p1 y -y Y
d26 d26 d26 d26 d26 d26 Frec
-x -y -x -x
1 d1
H
p11 p2 Y
sp1
15N d23 d23 d23

d33 d23 -d33
p13 p14
p22 p21 sp8 y
sp7
13
Ca d22 d22 d d32 d22
d22
-d32
p14 p13 p24 p14 p13 p24 p13 p14
13
C´ d31 d31
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14

GZ
G1 G1 G4 G2 G2G3 G3
trhncacogp2h4d
p1 y -y Y
d26 d26 d26 d26 d26 d26 Frec
-x -y -x -x
1 d1 d4
H
p11 p2 Y
sp1
15N d23 d23 d23

d33 d23 -d33
p13 p14
p22 p21 sp8 y
sp7
13
Ca d22 d22 d d32 d22
d22
-d32
p14 p13 p24 p14 p13 p24 p13 p14
13
C´ d31 d31
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14

2
H GARP GARP
pl17
GZ
G1 G1 G4 G2 G2G3 G3

trhncacoetgp4d
p1 y y -x -x Y y
d26 d26 Frec
y -x -y -y
1 d1 d26 d26 d26 d26 d d
H
p11 p2 y Y
sp1
d23 d23 d23 d23
15N
-d33 +d33
p13 p14
p22 p21 sp8 sp7 y
13 d22
Ca d22 d22 d32 d22
-d32
p14 p13 p24 p14 p13 p24 p13 p14 p14
sp3
13
C´ d31 d31
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14

GZ
G1 G1 G2 G2 G1 G1 G1 G1 G4 G4 G6 G6
G3 G5 G7
trhncacoetgp2h4d
p1 y y -x -x Y y
-x d26 d26 Frec
y d4 d26 d26 d -y -y d
1 d1 d26 d26
H
p11 p2 y Y
sp1
d23 d23 d23 d23
15N
-d33 +d33
p13 p14
p22 p21 sp8 sp7 y
13 d22
Ca d22 d22 d32 d22
-d32
p14 p13 p24 p14 p13 p24 p13 p14 p14
sp3
13
C´ d31 d31
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14

2
H GARP GARPGARP
pl17
GZ
G1 G1 G2 G2 G1 G1 G1 G1 G4 G4 G6 G6
G3 G5 G7

BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
3D HN(CO)CA

HNCOCA Experiment
3D HN(CO)CA e xperiment
· 3D HN(CO)CA using PEP (hncocagp3d | HNCOCA GP 3D)

o with 2H-decoupling (hncocagp2h3d | HNCOCA GP 2H3D)
· 3D HN(CO)CA using WATERGATE (hncocagpwg3d | HN COCA GPW G 3D)
o with 2H-decoupling (hncocagpwg2h3d | HNCOCA GP WG 2H3D)
· 3D HN(CO)CA using TROSY (trhncocagp3d | T RHNCOCA GP 3D ):
o with 2H-decoupling (trhncocagp2h3d | T RHNCOCA GP 2H3D )
o using echo-antiecho gradient (trhncocaetgp3d | TRHN COCA ETG P3D )
o using echo-antiecho gradient and with 2 H-decoupling (trhncocaetgp2h3d |
TR HNCOCA ETG P2H3D )
4D HNCOCA experiment
· 4D HNCOCA using PEP (hncocagp4d)

o with 2H-decoupling (hncocagp2h4d)
· 4D HNCOCA using WATERGATE (hncocagpwg4d)
o with 2H-decoupling (hncocagpwg2h4d)
· 4D HNCOCA using TROSY (trhncocagp4d)
o with 2H-decoupling (trhncocagp2h4d)
o using echo-antiecho gradient (trhncocaetgp4d)
o using echo-antiecho gradient and with 2 H-decoupling (trhncocaetgp2h4d)
Also see:
SOFAST/BEST-HN(CO)CA experiment
3D BEST-HN(CO)CA (b_hncocagp3d | B_HNCOCAGP3D)
3D BEST-HN(CO)CA using TROSY (b_trhncocagp3d)
4D BEST-HNCOCA (b_hncocagp4d)
3D APSY-HNCOCA experiment
Reduced-Dimensionality (4,2)-HNCOCA (rd_hncoca_42 | APSY_HNCOCA_42)
3D (H)NCOCA in “Carbon-Detected Experiments”
3D HNCO-type experiments for J measuring
intra-HNCA, HNCA

1
JNH + 1JNCO + 1JCOCA
HN(CO)CA
H C H H C H
N C C N C C
O O
H H H H
1 2 3 4 5 6
NH N CO CA CO N NH
t1 t2 t3
CA
N
HN
2D H(NCO)CA 2D H(N)CA
ppm ppm
44 44
46 46
48 48
50 50
52 52
54 54
56 56
58 58
60 60
62 62
64 64
66 66
10 9 8 7 ppm 10 9 8 7 6 ppm

hncocagp3d
y y
y -y y -y
Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19
Y
sp1
15N d23 d23 d23-d10 d23+d10
GARP
p13 p14 pl16
p22 p21
sp8 sp7
13C´
d22 d22 d22 d22
p14 p13 p14 p14 p13 p14 p13 p14
sp3 sp2 sp3
f1 sp7 sp2 sp3 sp8 sp3
13
Ca d0 d0
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14

GZ
G1 G4 G3
G2
hncocagp2h3d
y y
y -y y -y
Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d4 d21 d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19
sp1
Y
15N d23 d23 d23-d10 d23+d10

GARP
p22 p21 p14 pl16
f1 sp7
13C´
d22 d22 d22 d22
p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14
13 d27
Ca d0 d27
-d0
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14
2
H
GARP
pl17
GZ
G1 G3
G2
d26=1/4J(NH)=2.3m
d21=1/2J(NH)=5.5m
d23=1/4J(NCO)=12m
d22=1/4J(COCA)=4m
d27=CT(CA)=13.8m
d4=1/4J(CH)=1.7m

hncocagpwg3d
y
y -y y -y
-x -x -x Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19 f2 d26 d26
sp1
15N d23 d23 d d23-d10 d23+d10 d
GARP
p21 p13 p14 pl16
p22
sp8 sp7
13C´
d22 d22 d22 d22
p14 p13 p14 p14 p13 p14 p13 p14
f1
13 d0 d0
Ca
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14
GZ
G1 G2 G3 G4 G4
hncocagpwg2h3d
y
y -y y -y
-x -x -x Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19 f2 d26 d26
sp1
15N d23 d23 d4 d23-d10 d23+d10 d
GARP
p21 p13 p14 pl16
p22
sp8 sp7
13C´
d22 d22 d22 d22 d
p14 p13 p14 p13 p14
f1 p14 p13 p14
13 d27
Ca d0 d27
-d0
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14
2
H GARP
pl16
GZ
G1 G2 G3 G4 G4

trhncocagp3d
-y -y
d26 d26 d26 d26 d26 d26 Frec
1 d1 -x -x
H -y -x
p1 p11 p2 f1 -y
sp1
15N d23 d23 d10 d23 d23-d10
p22 p21 f1 p14

sp7
13C´
d22 d22 d22 d22
p14 p14 p13 p13 p14 p13 p14
p13 p14
13 sp2 sp7
Ca d0 d0 d0 d0
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14

GZ
G1 G1 G2 G2 G3 G3
trhncocagp2h3d
-y -y
d26 d26 d26 d26 d26 d26 Frec
1 -x -x -x
H d1 -y
p1 p11 p2 f1 -y
sp1
15N d23 d23 d10 d23 d23-d10
p22 p21 f1 p14

sp7
13C´
d22 d22 d22 d22
p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14
13 sp3
Ca d0 d0 d0 d0
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14
2 sp5 sp5 sp2 sp3 sp8 sp5 sp5
H
GARP
pl17
GZ
G1 G1 G2 G2 G3 G3

trhncocaetgp3d
-y -y y y
y -x d26 d26 Frec
1 -y -y
H d1 d26 d26 d26 d26 d
p11 p1 f1 y y
sp1
-y
15N d23 d23 d23-d25 d23-d25
-d10 +d10 d
p22 p21 f1 p14

sp7
13C´
d22 d22 d22 d22
p14 p14 p13 p13 p14 p13 p14 p14
p13 p14
13 sp2 sp7
Ca d0 d0 d0 d0
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14

GZ
G1 G1 G2 G2 G1 G1 G1 G1 G4 G4 G6 G6
G3 G5 G7
trhncocaetgp2h3d
-y -y y y
y -x d26 d26 Frec
1 -y -y
H d1 d26 d26 d26 d26 d
p11 p1 f1 y y
sp1
-y
15N d23 d23 d23-d25 d23-d25
d4 d
-d10 +d10
p22 p21 f1 p14
sp7
13C´
d22 d22 d22 d22
p14 p14 p13 p13 p14 p13 p14 p14
p13 p14
13 sp2 sp7
Ca d0 d27
d27
-d0
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14
2
H GARP
pl17
GZ
G1 G1 G2 G2 G1 G1 G1 G1 G4 G4 G6 G6
G3 G5 G7

hncocagp4d
y y
y -y y -y
Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19
Y
sp1
d23 d23 d23 d23
15N d
-d33 +d33 GARP
p13 p14 pl16
p22 p21 sp8 sp7 y
13 d22
C´ d22 d22 d32 d22
-d32
p14 p13 p14 p14 p13 p14 p13
f1 p14
13
Ca d31 d31
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14

GZ
G1 G4 G3
G2
hncocagp2h4d
y y
y -y y -y
Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19 Y
sp1
d23 d23 d23 d23
15N d
-d33 +d33 GARP
p13 p14 pl16
p22 p21 sp8 sp7 y
13
C´ d22 d22 d32 d22
d22
-d32
p14 p13 p14 p14 p13 p14 p13 p14
sp3 sp2 sp3 f1 sp7 sp2 sp3 sp8
13 sp3
Ca d31 d31
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14

2
H GARP
pl17
GZ
G1 G4 G3
G2

hncocagpwg4d
y
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d
p1 p2 p11 p26 pl19
sp1
15N d23 d23 d23 d23
-d33 +d33 GARP
p13 p14 pl16
p22 p21 sp8 y
sp7
13
C´ d22 d22 d32 d22
d22 d
-d32
p14 p13 p14 p14 p13 p14 p13
f1 p14
13
Ca d31 d31 d
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14

GZ
G1 G5 G2 G3 G4 G4
hncocagpwg2h4d
y
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d
p1 p2 p11 p26 pl19
sp1
15N d23 d23 d23 d23
-d33 +d33 GARP
p13 p14 pl16
p22 p21 sp8 y
sp7
13
C´ d22 d22 d32 d22
d22 d
-d32
p14 p13 p14 p14 p13 p14 p13
f1 p14
13
Ca d31 d31 d
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14

2
H GARP
pl17
GZ
G1 G5 G2 G3 G4 G4

trhncocagp4d
p1 y -y Y
d26 d26 d26 d26 d26 d26 Frec
-x -y -x -x
1 d1
H
p11 p2 Y
sp1
15N d23 d23 d23

d33 d23 -d33
p13 p14
p22 p21 sp8 y
sp7
13
C´ d22 d22 d d32 d22
d22
-d32
p14 p13 p14 p14 p13 p14 p13 p14
13 d31 d31
Ca
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14
GZ
G1 G1 G4 G2 G2G3 G3
trhncocagp2h4d
p1 y -y Y
d26 d26 d26 d26 d26 d26 Frec
-x -y -x -x
1 d1
H
p11 p2 Y
sp1
15N d23 d23 d23

d33 d23 -d33
p13 p14
p22 p21 sp8 y
sp7
13
C´ d22 d22 d d32 d22
d22
-d32
p14 p13 p14 p14 p13 p14 p13 p14
13 d31 d31
Ca
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14
2
H GARP
pl17
GZ
G1 G1 G4 G2 G2G3 G3

trhncocaetgp4d
-x y y -x Y y
d26 d26 Frec
y -x -y -y
1 d1 d26 d26 d26 d26 d d
H
p11 p1 p2 y Y
sp1
d23 d23 d23 d23
15N
-d33 +d33
p13 p14
p22 p21 sp8 sp7 y
13 d22
C´ d22 d22 d32 d22
-d32
p14 p13 p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14
sp3
13
Ca d31 d31
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14

GZ
G1 G1 G2 G2 G1 G1 G1 G1 G4 G4 G6 G6
G3 G5 G7
trhncocaetgp2h4d
-x y y -x Y y
-x d26 d26 Frec
y d26 d26 d -y -y d
1 d1 d26 d26
H
p11 p1 p2 y Y
sp1
d23 d23 d23 d23
15N
-d33 +d33
p13 p14
p22 p21 sp8 sp7 y
13 d22
C´ d22 d22 d32 d22
-d32
p14 p13 p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14
sp3
13
Ca d31 d31
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14

2
H GARP
pl17
GZ
G1 G1 G2 G2 G1 G1 G1 G1 G4 G4 G6 G6
G3 G5 G7


BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
3D SEQUENTIAL HNCA

3D sequential-HNCA experiment
· 3D Sequential HNCA using TROSY (seqtrhncagp3d | S EQ TRHN CAG P3D )

o with 2H-decoupling (seqtrhncagp2h3d | SEQ TR HNCA GP 2H3D )
o with gradient echo-antiecho (seqtrhncaetgp3d | SEQ TRHN CAE TGP 3D )
o with gradient echo-antiecho and with 2 H-decoupling (seqtrhncaetgp2h3d |
SEQ T RHNCA ET GP2H3D )
Also see: HNCA, intra-HNCA, HN(CO)CA
seqHNCA
1
JHN + 2JNCA
H C H H C H
CA
N C C N C C
O O
H H H H N
HN
1 2 3 4
NH N CA N NH
t1 t2 t3
d26=1/4J(NH)=2.3m
d23=1/4J(NCA)=12m
d22=1/4J(CACO)=4.5m
d27=1/4J(CACB)=13.3m
d25=1/4J(NH)=2.3m

Identification of evolution elements
seqtrhncagp3d
-y -y
d26 d26 d26 d26 d26 d26 Frec
1 d1 -x -y -x -x
H
p1 p11 p2 -y
sp1
15N d23 d23 d10 d23 d23-d10
p22 p21 f1
13 d27
Ca d0 d0 d22 -d22
d27
-2d0
p14 p13 p14 p13 p14
sp3 sp2 sp3 sp8 sp3
13C´
p14 p14 p14 p14

sp5 sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G1 G2 G2 G3 G3
1 2 3 4 5
1 1H-15N INEPT transfer
Concatenated Fixed period consisting of:

J(NH) evolution
2 INEPT 15N-CA
INEPT 15N-CO
Concatenated Constant-time CA evolution period consisting of:

d(CA) evolution and J(CA-N) decoupling
3 d(CA) evolution and J(CA-H) decoupling
d(CA) evolution and J(CA-CO) refocusing
Concatenated Constant-time 15N evolution period consisting of:

d(N) evolution and J(N-H) evolution
4 d(N) evolution and J(N-CA) refocusing
d(N) evolution and J(N-CO) decoupling
5 1H-15N TROSY transfer consisting of two retro-INEPT like blocks

seqtrhncaetgp3d
-y -y
y d26 d26 d26 d26 Frec
1 -x -x d
H d1 d26 d26
p11 p1 p2 -y
sp1
15N d23-d25 d23-d25
d23 d23
+d10 d
-d10
p22 p21
f1
13
Ca d27
d0 d0 d22 -d22
d27
-2d0
p14 p13 p14 p13 p14
sp3 sp2 sp3 sp8 sp3
13C´
p14 p14 p14 p14 p14

sp5 sp5 sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G1 G2 G2 G4 G4 G6 G6
G3 G5 G7
seqtrhncaetgp2h3d
-y -y
1 -x -x d
H d1 d26 d26
p11 p1 p2 -y
sp1
15N d23-d25 d23-d25
d23 d23 d4 +d10 d
-d10
p22 p21
f1
13
Ca d0 d0 d22
d27 d27
-d22 -2d0
p14 p13 p14 p13 p14
sp3 sp2 sp3 sp8 sp3
13C´
p14 p14 p14 p14 p14

sp5 sp5 sp5 sp5 sp5
2
H GARP
pl17
GZ
G1 G1 G2 G2 G4 G4 G6 G6
G3 G5 G7

seqtrhncagp2h3d
-y -y
d26 d26 d26 d26 d26 d26 Frec
1 d1 -x -y -x -x
H
p1 p11 p2 -y
sp1
15N d23 d23 d4 d10 d23 d23-d10
p22 p21 f1
13 d27
Ca d0 d0 d22 -d22
d27
-2d0
p14 p13 p14 p13 p14
sp3 sp2 sp3 sp8 sp3
13C´
p14 p14 p14 p14

sp5 sp5 sp5 sp5
2
H GARP
pl17
GZ
G1 G1 G2 G2 G3 G3


BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
3D INTRA-HNCA

3D intra-HNCA experiment
· 3D Intra-HNCA using PEP (hncaigp3d | HN CAI GP 3D)

o with 2H-decoupling (hncaigp2h3d | HNCA IG P2H3D )
· 3D Intra-HNCA using WATERGATE (hncaigpwg3d | HNCA IG PW G 3D )
o with 2H-decoupling (hncaigpwg2h3d | HNCA IG PW G2H3D )
· 3D Intra-HNCA using TROSY (trhncaigp3d | TRHN CAI GP 3D)
o with 2H-decoupling (trhncaigp2h3d | T RHNCA I GP 2H3D )
o with gradient echo-antiecho (trhncaietgp3d | T RHNCA IET GP 3D)
o with gradient echo-antiecho and with 2 H-decoupling (trhncaietgp2h3d |
TR HNCA IET GP 2H3D)
Also see:
3D SOFAST/BEST-intraHNCA experiment
3D BEST-intraHNCA (b_hncaigp3d | B_HNCAIGP3D)
3D BEST-intraHNCA using TROSY (b_trhncaigp3d)
seq-HNCA, HNCA, HN(CO)CA
iHNCA
H C H H C H
N C C N C C
O O
H H H H
ppm ppm
45 45
50 50
CA 55 55
N 60 60
HN
65 65
9.5 9.0 8.5 8.0 7.5 ppm 9.5 9.0 8.5 8.0 7.5 7.0 ppm
2D H(N)CA 2D intra-H(N)CA

1 2 3 4 5
NH N CO CA N NH
t1 t2 t3
d26=1/4J(NH)=2.3m
d21=1/2J(NH)=5.5m
d23=1/4J(NCA)=26m
d22=1/4J(CACO)=4.2m
d27=1/4J(NCA)&1/4J(NCO)=15.8m
d25=1/4J(NCO)=16.5m
hncaigp3d
y y
y -y
Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19
Y
sp1
15N d23 d23 d27-d10 d27+d10
GARP
p13 p14 pl16
p22 p21
sp8 sp7
13C´
d25 d22 d22
p14 p13 p14 p14 p8 p13
sp7 sp2 sp3
f1 sp7 sp13 sp4
13 d0 d0
Ca
p14 p14 p14 p14 p13 p13
p13
sp2
GZ
G1 G3
G2
hncaigp2h3d
y y
y -y y -y
Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p11 p26 pl19
p2 Y
sp1
15N d23 d23 d4 d24-d10 d24+d10
GARP
p13 p14 pl16
p22 p21
sp8 sp7
13C´
d25 d22 d22
p14 p13 p14 p14 p8 p13
sp7 sp2 sp3
f1 sp7 sp13 sp4
13 d28
Ca d0 d28
-d0
p14 p14 p14 p14 p13 p13
p13
sp2
2
H GARP
pl17
GZ
G1 G3
G2

hncaigpwg3d
y
y -y
-x -x -x
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d Frec
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19
d26 d26
sp1
15N d23 d23 d d27-d10 d27+d10
GARP
p13 p14 pl16
p22 p21
sp8 sp7
13C´
d25 d22 d22
p14 p13 p14 p14 p8 p13
sp7 sp2 sp3
f1 sp7 sp13 sp4
13 d0 d0
Ca
p14 p14 p14 p14 p13 p13
p13
sp2
GZ
G1 G2 G3 G4 G4
hncaigpwg2h3d
y
y -y
-x -x -x
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d Frec
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19
d26 d26
sp1
15N d23 d23 d4 d d24-d10 d24+d10
GARP
p13 p14 pl16
p22 p21
sp8 sp7
13C´
d25 d22 d22
p14 p13 p14 p14 p8 p13
sp7 sp2 sp3
f1 sp7 sp13 sp4
13 d28
Ca d0 d28
-d0
p14 p14 p14 p14 p13 p13
p13
sp2
2
H GARP
pl17
GZ
G1 G2 G3 G4 G4

trhncaietgp3d
y y y
y -x -y -y Frec
1 d1 d26 d26 d26 d26 d
H
p1 p2 y y y Y
15N d23 d23 d27-d10 d27+d10 d d26 d26
p13 p14
p22 p21
sp8 sp7
13C´
d24 d22 d22
p14 p13 p14 p14 p8 p13
sp7 sp2 sp3
f1 sp7 sp13 sp4
13
Ca d0 d0
p14 p14 p14 p14 p13 p13

p13
sp2
GZ
G1 G1 G2 G2 G1 G1 G4 G4 G6 G6 G7
G3
G5
trhncaietgp2h3d
y y y
y -x -y -y Frec
1 d1 d26 d26 d26 d26 d
H
p1 p2 y y y Y
d27-d25 d27-d25
15N d23 d23 d4 d d26 d26
-d10 +d10
p13 p14
p22 p21
sp8 sp7
13C´
d24 d22 d22
p14 p13 p14 p14 p8 p13
sp7 sp2 sp3
f1 sp7 sp13 sp4
13 d29
Ca d0 d29
-d0
p14 p14 p14 p14 p13 p13
p13
sp2
2
H GARP
pl17
GZ
G1 G1 G2 G2 G1 G1 G3 G4 G4 G6 G6 G7
G5

trhncaigp3d
y y
d26 d26 -x -x Frec
1
H d1 d26 d26
p1 -x -y p2 Y
15N d23 d23 d27-d10 d27+d10 d26 d26
p13 p14
p22 p21
sp8 sp7
13C´
d24 d22 d22
p14 p13 p14 p14 p8 p13
sp7 sp2 sp3
f1 sp7 sp13 sp4
13
Ca d0 d0
p14 p14 p14 p14 p13 p13

p13
sp2
GZ
G1G1 G2 G2 G3 G3
trhncaigp2h3d
y y
d26 d26 -x -x Frec
1
H d1 d26 d26
p1 -x -y p2
Y
15N d23 d23 d4 d27-d10 d27+d10 d26 d26
p13 p14
p22 p21
sp8 sp7
13C´
d24 d22 d22
p14 p13 p14 p14 p8 p13
sp7 sp2 sp3
f1 sp7 sp13 sp4
13
Ca d0 d25
d25
-d0
p14 p14 p14 p14 p13 p13
p13
sp2
2
H GARP
pl17
GZ
G1G1 G2 G2 G3 G3

BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
3D HNCANNH

HNCANNH Experiment
3D (H)N(CA)NNH experiment
· 3D (H)N(CA)NNH (hncannhgp3d | HNCA NN HGP 3D)

· 3D (H)N(CA)NNH with 2 H-decoupling (hncannhgp2h3d | HNC AN NHGP 2H3D)
· 3D (H)N(CA)NNH using WATERGATE (hncannhgpwg3d)
· 3D (H)N(CA)NNH using WATERGATE and 2H-decoupling (hncannhgpwg2h3d)
· 3D (H)N(CA)NNH using TROSY (trhncannhgp3d)
· 3D (H)N(CA)NNH using TROSY and 2 H-decoupling (trhncannhgp2h3d)
· 3D (H)N(CA)NNH using TROSY and echo-antiecho (trhncannhetgp3d)
· 3D (H)N(CA)NNH using TROSY, echo-antiecho and 2 H-decoupling (trhncannhetgp2h3d)
3D H(NCA)NNH experiment
· 3D H(NCA)NNH (hncannhgp3d.2)
· 3D H(NCA)NNH with 2 H-decoupling (hncannhgp2h3d.2)
· 3D H(NCA)NNH using WATERGATE (hncannhgpwg3d.2)
· 3D H(NCA)NNH using WATERGATE and 2 H-decoupling (hncannhgpwg2h3d.2)
· 3D H(NCA)NNH using TROSY (trhncannhgp3d.2)
· 3D H(NCA)NNH using TROSY and 2 H-decoupling (trhncannhgp2h3d.2)
· 3D H(NCA)NNH using TROSY and echo-antiecho (trhncannhetgp3d.2)
· 3D H(NCA)NNH using TROSY, echo-antiecho and 2 H-decoupling (trhncannhetgp2h3d.2)
Also see:
HNCOCANNH Experiment
1
1
JNH + 1JNCA (H)N(CA)NNH JNH + 1JNCA H(NCA)NNH
1J 2 1J 2
NH + JNCA NH + JNCA
N C C N C C N N C C N C C N
O O O O
H H H H H H H H H
H
1J 1 1 1
NH + JNCO+ JCOCA+ JCAN 1
JNH + 1 JNCO+ 1 JCOCA+ 1 JCAN
(H)N(COCA)NNH H(NCOCA)NNH
O O O O H
H H H H H H H H H

R. Weisemann, H. Rueterjans & W. Bermel, J. Biomol. NMR 3, 113-120 (1993)
1
JNH + 1JNCA (H)N(CA)NNH
1J 2
NH + JNCA
H C H H C H
N C C N C C N
O O
H H H H H
1 2 3 4
NH N CA N NH
t1 t2 t3
N
HN
2D (HNCA)NH 2D (H)N(CAN)H
ppm ppm
110 110
112 112
114 114
116 116
118 118
120 120
122 122
124 124
126 126
128 128
9.5 9.0 8.5 8.0 7.5 ppm 9.5 9.0 8.5 8.0 7.5 ppm

hncannhgp3d
y y
-y y -y y -y y
Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d26 d26 d26 d26 d d
p1 p2 p11 pl19 Y
sp1
d23 d23
15N d23+d0 d23-d0 -d10 +d10
GARP
p22 p21 pl16
f1
13
Ca d d27 d27 d27 d27 d
p14 p13 p14

p13 p24
sp3 sp8 sp3
sp2 sp9
13C´
p14 p14 p14 p14 p14 p14 p14 p14

GZ
G1 G4 G5 G2 G3
d21: 1/(2J(NH) [5.5 msec]

d23: 1/(4J(NCa) [12.4 msec]
d26: 1/(4J'(NH) [2.3 msec]
d27: 1/(4J`(NCa) [12.5 msec]
hncannhgp2h3d
y y
-y y -y y -y y
Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d26 d26 d26 d26 d d
p1 p2 p11 pl19 Y
sp1
d23 d23
15N d23+d0 d23-d0 -d10 +d10
GARP
p22 p21 pl16
f1
13
Ca d d27 d27 d27 d27 d
p14 p13 p14

p13 p24
sp3 sp8 sp3
sp2 sp9
13C´
p14 p14 p14 p14 p14 p14 p14 p14

2
H GARP
pl17
GZ
G1 G4 G5 G2 G3

hncannhgpwg3d
y
-y y -y y -y y
Frec
1 -x -x -x
d1 d26 d26 d d21 d21
p1 p2 p11 pl19 d26 d26
sp1
d23 d23
15N d23+d0 d23-d0 -d10 +d10 d
GARP
p22 p21 pl16
f1
13
Ca d d27 d27 d27 d27 d
p14 p13 p14

p13 p24
sp3 sp8 sp3
sp2 sp9
13C´
p14 p14 p14 p14 p14 p14 p14 p14

GZ
G1 G2 G3 G4 G5 G5
hncannhgpwg2h3d
y
-y y -y y -y y
Frec
1 -x -x -x
d1 d26 d26 d d21 d21
p1 p2 p11 pl19 d26 d26
sp1
d23 d23
15N d23+d0 d23-d0 -d10 +d10 d
GARP
p22 p21 pl16
f1
13
Ca d d27 d27 d27 d27 d
p14 p13 p14

p13 p24
sp3 sp8 sp3
sp2 sp9
13C´
2
H GARP
pl17
GZ
G1 G2 G3 G4 G5 G5

trhncannhgp3d
y -y
-y y -y y d26 d26 d26 d26 Frec
1 d1 d26 d26 d d21 -x -x
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 pl19
-y
sp1
15N d23+d0 d23-d0 d10 d23 d23-d10
p22 p21
f1
13
Ca d d27 d27 d27 d27 d
p14 p13 p14

p13 p24
sp3 sp8 sp3
sp2 sp9
13C´
p14 p14 p14 p14 p14 p14 p14

GZ
G1 G4 G5 G2 G2 G3 G3
trhncannhgp2h3d
y -y
-y y -y y d26 d26 d26 d26 Frec
1 d1 d26 d26 d d21 -x -x
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 pl19
-y
sp1
15N d23+d0 d23-d0 d10 d23 d23-d10
p22 p21
f1
13
Ca d d27 d27 d27 d27 d
p14 p13 p14

p13 p24
sp3 sp8 sp3
sp2 sp9
13C´
p14 p14 p14 p14 p14 p14 p14

2
H GARP
pl17
GZ
G1 G4 G5 G2 G2 G3 G3

trhncannhetgp3d
y -y y y
-y y -y y
-x d26 d26 Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d26 d26 -y -y
H DIPSI-2 DIPSI-2 d
p1 p2 p11 pl19
sp1 y y -y
15N d23+d0 d23-d0 d23-d10 d23+d10 d
p22 p21
f1
13
Ca d d27 d27 d27 d27 d
p14 p13 p14 p14

p13 p24 sp3
sp3 sp8 sp3
sp2 sp9
13C´
p14 p14 p14 p14 p14 p14 p14 p14

GZ
G1 G2 G3 G5 G5 G7 G7
G4 G6 G8
trhncannhetgp2h3d
y -y y y
-y y -y y
-x d26 d26 Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d26 d26 -y -y
H DIPSI-2 DIPSI-2 d
p1 p2 p11 pl19
sp1 y y -y
15N d23+d0 d23-d0 d23-d10 d23+d10 d
p22 p21
f1
13
Ca d d27 d27 d27 d27 d
p14 p13 p14 p14

p13 p24 sp3
sp3 sp8 sp3
sp2 sp9
13C´
p14 p14 p14 p14 p14 p14 p14 p14

2
H GARP
pl17
GZ
G1 G2 G3 G5 G5 G7 G7
G4 G6 G8

1
JNH + 1JNCA H(NCA)NNH
1J 2
NH + JNCA
H C H H C H
N C C N C C N
O O
H H H H H
1 2 3 4
NH N CA N NH
t1
t2 t3
HN
N
HN

hncannhgp3d.2
p1 y y
y -y y -y y -y y
-x d26 (1-k) d26 Frec
1 d1 d d21 d21 d26 d26 d26 d26 d d
H +d0 d0 -kd0 DIPSI-2 DIPSI-2 DIPSI-2
p11 p2 pl19 Y
sp1
d23 d23
15N d23 d23 -d10 +d10
GARP
p22 p21 pl16
f1
13
Ca d d27 d27 d27 d27 d
p14 p13 p14

p13 p24
sp3 sp8 sp3
sp2 sp9
13C´
p14 p14 p14 p14 p14

sp5 sp5 sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G4 G5 G2 G3
hncannhgp2h3d.2
p1 y y
y -y y -y y -y y
-x d26 (1-k) d26 Frec
1 d1 d d21 d21 d26 d26 d26 d26 d d
p11 p2 pl19 Y
sp1
d23 d23
15N d23 d23 -d10 +d10
GARP
p22 p21 pl16
f1
13
Ca d d27 d27 d27 d27 d
p14 p13 p14

p13 p24
sp3 sp8 sp3
sp2 sp9
13C´
p14 p14 p14 p14 p14

sp5 sp5 sp5 sp5 sp5
2
H GARP
pl17
GZ
G1 G4 G5 G2 G3

hncannhgpwg3d.2
p1 y
y -y y -y y -y y
-x d26 (1-k) d26 Frec
1 d21 -x -x -x
d1 d d21
p11 p2 pl19 d26 d26
sp1
d23 d23
15N d23 d23 -d10 +d10 d
GARP
p22 p21 pl16
f1
13
Ca d d27 d27 d27 d27 d
p14 p13 p14

p13 p24
sp3 sp8 sp3
sp2 sp9
13C´
p14 p14 p14 p14 p14

sp5 sp5 sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G2 G3 G4 G5 G5
hncannhgpwg2h3d.2
p1 y
y -y y -y y -y y
-x d26 (1-k) d26 Frec
1 d21 -x -x -x
d1 d d21
p11 p2 pl19 d26 d26
sp1
d23 d23
15N d23 d23 -d10 +d10 d
GARP
p22 p21 pl16
f1
13
Ca d d27 d27 d27 d27 d
p14 p13 p14

p13 p24
sp3 sp8 sp3
sp2 sp9
13C´
p14 p14 p14 p14 p14

sp5 sp5 sp5 sp5 sp5
GZ
GARP
pl17
GZ
G1 G2 G3 G4 G5 G5

trhncannhgp3d.2
p1 y -y
y -y y -y y
-x d26 (1-k) d26 d26 d26 d26 d26 Frec
1 d1 -x -x
H -kd0 d d21 DIPSI-2
+d0 d0 DIPSI-2
p11 p2 pl19
-y
sp1
d23 d23
15N d23 d23 -d10
+d10
p22 p21
f1
13
Ca d d27 d27 d27 d27 d
p14 p13 p14

p13 p24
sp3 sp8 sp3
sp2 sp9
13C´
p14 p14 p14

sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G4 G5 G2 G2 G3 G3
trhncannhgp2h3d.2
p1 y -y
y -y y -y y
-x d26 (1-k) d26 d26 d26 d26 d26 Frec
1 d1 -x -x
H -kd0 d d21 DIPSI-2
+d0 d0 DIPSI-2
p11 p2 pl19
-y
sp1
d23 d23
15N d23 d23 -d10
+d10
p22 p21
f1
13
Ca d d27 d27 d27 d27 d
p14 p13 p14

p13 p24
sp3 sp8 sp3
sp2 sp9
13C´
p14 p14 p14

sp5 sp5 sp5
2
H GARP
pl17
GZ
G1 G4 G5 G2 G2 G3 G3

trhncannhetgp3d.2
p1 y -y y y
y -y y -y y
-x d26 (1-k) d26 -x d26 d26 Frec
1 d1 d26 d26 -y -y
H -kd0 d d21 DIPSI-2 d
+d0 d0 DIPSI-2
p11 p2 pl19
y y -y
sp1
d23 d23
15N d23 d23 -d10 +d10 d
p22 p21
f1
13
Ca d d27 d27 d27 d27 d
p14 p14 p14

p13 p24 p13 sp3
sp3 sp8 sp3
sp2 sp9
13C´
p14 p14 p14 p14

sp5 sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G2 G3 G5 G5 G7 G7
G4 G6 G8
trhncannhetgp2h3d.2
p1 y -y y y
y -y y -y y
-x d26 (1-k) d26 -x d26 d26 Frec
1 d1 d26 d26 -y -y
H -kd0 d d21 DIPSI-2 d
+d0 d0 DIPSI-2
p11 p2 pl19
y y -y
sp1
d23 d23
15N d23 d23 -d10 +d10 d
p22 p21
f1
13
Ca d d27 d27 d27 d27 d
p14 p14 p14

p13 p24 p13 sp3
sp3 sp8 sp3
sp2 sp9
13C´
p14 p14 p14 p14

sp5 sp5 sp5 sp5
2
H GARP
pl17
GZ
G1 G2 G3 G5 G5 G7 G7
G4 G6 G8

BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
3D HNCOCANNH

HNCOCANNH Experiment
3D (H)N(COCA)NNH experiment
· 3D (H)N(COCA)NNH (hncocannhgp3d)
· 3D (H)N(COCA)NNH with 2H-decoupling (hncocannhgp2h3d)
· 3D (H)N(COCA)NNH using WATERGATE (hncocannhgpwg3d)
· 3D (H)N(COCA)NNH using WATERGATE and 2 H-decoupling (hncocannhgpwg2h3d)
· 3D (H)N(COCA)NNH using TROSY (trhncocannhgp3d)
· 3D (H)N(COCA)NNH using TROSY and 2H-decoupling (trhncocannhgp2h3d)
· 3D (H)N(COCA)NNH using TROSY and echo-antiecho (trhncocannhetgp3d)
· 3D (H)N(COCA)NNH using TROSY, echo-antiecho and 2H-decoupling
(trhncocannhetgp2h3d)
3D H(NCOCA)NNH experiment
· 3D H(NCOCA)NNH (hncocannhgp3d.2)
· 3D H(NCOCA)NNH with 2 H-decoupling (hncocannhgp2h3d.2)
· 3D H(NCOCA)NNH using WATERGATE (hncocannhgpwg3d.2)
· 3D H(NCOCA)NNH using WATERGATE and 2H-decoupling (hncocannhgpwg2h3d.2)
· 3D H(NCOCA)NNH using TROSY (trhncocannhgp3d.2)
· 3D H(NCOCA)NNH using TROSY and 2 H-decoupling (trhncocannhgp2h3d.2)
· 3D H(NCOCA)NNH using TROSY and echo-antiecho (trhncocannhetgp3d.2)
· 3D H(NCOCA)NNH using TROSY, echo-antiecho and 2 H-decoupling
(trhncocannhetgp2h3d.2)
Also see:
HNCANNH Experiment
1J 1 1 1
NH + JNCO+ JCOCA+ JCAN 1
(H)N(COCA)NNH H(NCOCA)NNH
O O O O H
H H H H H H H H H
References:
1. C. Bracken, A.G. Palmer & J. Cavanagh, J. Biomol. NMR 9, 94-100 (1997) N

2. S.C. Panchal, N.S. Bhavesh & R.V. Hosur, J. Biomol. NMR 20, 135-147 (2001)
3. Z.-Y. J. Sun, D.P. Frueh, P. Selenko, J.C. Hoch & G. Wagner, J. Biomol. NMR
33, 43-50 (2005) N
HN

1J 1 1 1
NH + JNCO+ JCOCA+ JCAN
(H)N(COCA)NNH d21: 1/(2J(NH) [5.5 msec]
d22: 1/(4J(COCa)) [4.5 msec]
H C H H C H d23: 1/(4J(NCa) [12.4 msec]
N C C N C C N d26: 1/(4J'(NH) [2.3 msec]
d27: 1/(4J`(NCa) [12.5 msec]
O O
H H H H H
hncocannhgp3d
y y
-y y -y y -y y -y y
1 Frec
H d1 d26 d26 d d21
DIPSI-2 DIPSI-2 DIPSI-2
d21 d26 d26 d26 d26 d d
DIPSI-2
p1 p2 p11 pl19 Y
sp1
d23 d23 d23 d23
15N
+d0 -d0 -d10 +d10
GARP
p22 p21 pl16
f1
13
Ca d27 d27 d27 d27 d
p14 p14 p14 p14 p14 p13 p13 p14

p24
sp9
13C´
d d22 d22 d
p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14
p14
sp7
GZ
G1 G4 G5 G6 G2 G3
hncocannhgp2h3d
y y
-y y -y y -y y -y y
1 Frec
H d1 d26 d26 d d21
d21 d26 d26 d26 d26 d d
DIPSI-2
p1 p2 p11 pl19 Y
sp1
d23 d23 d23 d23
15N
+d0 -d0 -d10 +d10
GARP
p22 p21 pl16
f1
13
Ca d27 d27 d27 d27 d
p14 p14 p14 p14 p14 p13 p13 p14

p24
sp9
13C´
d d22 d22 d
p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14
p14
sp7
2
H GARP
pl17
GZ
G1 G4 G5 G6 G2 G3

hncocannhgpwg3d
y
-y y -y y -y y -y y
1 Frec
H d1 d26 d26 d d21
d21 -x -x -x
DIPSI-2
p1 p2 p11 pl19 d26 d26
sp1
d23 d23 d23 d23
15N d
+d0 -d0 -d10 +d10
GARP
p22 p21 pl16
f1
13
Ca d27 d27 d27 d27 d
p14 p14 p14 p14 p14 p13 p13 p14

p24
sp9
13C´
d d22 d22 d
p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14
p14
sp7
GZ
G1 G2 G3 G4 G5 G6 G6
hncocannhgpwg2h3d
y
-y y -y y -y y -y y
1 Frec
H d1 d26 d26 d d21
d21 -x -x -x
DIPSI-2
p1 p2 p11 pl19 d26 d26
sp1
d23 d23 d23 d23
15N d
+d0 -d0 -d10 +d10
GARP
p22 p21 pl16
f1
13
Ca d27 d27 d27 d27 d
p14 p14 p14 p14 p14 p13 p13 p14

p24
sp9
13C´
d d22 d22 d
p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14
p14
sp7
2
H GARP
pl17
GZ
G1 G2 G3 G4 G5 G6 G6

trhncocannhgp3d
y -y
-y y -y y -y y
1 d26 d26 d26 d26 Frec
H d1 d26 d26 d d21
DIPSI-2 DIPSI-2
-x -x
DIPSI-2
p1 p2 p11 pl19
-y
sp1
d23 d23 d23 d23
15N
+d0 -d0 +d10 -d10
p22 p21
f1
13
Ca d27 d27 d27 d27 d
p14 p14 p14 p14 p14 p13 p13 p14

p24
sp9
13C´
d d22 d22 d
p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14
GZ
G1 G4 G5 G6 G2 G2 G3 G3
trhncocannhgp2h3d
y -y
-y y -y y -y y
1 d26 d26 d26 d26 Frec
H d1 d26 d26 d d21
DIPSI-2 DIPSI-2
-x -x
DIPSI-2
p1 p2 p11 pl19
-y
sp1
d23 d23 d23 d23
15N
+d0 -d0 +d10 -d10
p22 p21
f1
13
Ca d27 d27 d27 d27 d
p14 p14 p14 p14 p14 p13 p13 p14

p24
sp9
13C´ d d22 d22 d
p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14
2
H GARP
pl17
GZ
G1 G4 G5 G6 G2 G2 G3 G3

trhncocannhetgp3d
y -y y
y -y y
-y y -y y
1 d26 d26 Frec
H d1 d26 d26 d d21
DIPSI-2 DIPSI-2
-x
d26 d26 -y -y
DIPSI-2 d
p1 p2 p11 pl19
sp1 y y -y
d23 d23 d23 d23
15N
+d0 -d0 +d10 -d10 d
p22 p21
f1
13
Ca d27 d27 d27 d27 d
p14 p14 p14 p14 p14 p13 p13 p14 p14

p24 sp3
sp9
13C´
d d22 d22 d
p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14
p14
sp7
GZ
G1 G2 G9 G3 G5 G5 G7 G7
G4 G6 G8
trhncocannhetgp2h3d
y -y y
y -y y
-y y -y y
1 d26 d26 Frec
H d1 d26 d26 d d21
DIPSI-2 DIPSI-2
-x
d26 d26 -y -y
DIPSI-2 d
p1 p2 p11 pl19
sp1 y y -y
d23 d23 d23 d23
15N
+d0 -d0 +d10 -d10 d
p22 p21
f1
13
Ca d27 d27 d27 d27 d
p14 p14 p14 p14 p14 p13 p13 p14 p14

p24 sp3
sp9
13C´
d d22 d22 d
p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14
p14
sp7
2
H GARP
pl17
GZ
G1 G2 G9 G3 G5 G5 G7 G7
G4 G6 G8

1
H(NCOCA)NNH
H C H H C H HN
N C C N C C N
O O H
H H H H N
HN
hncocannhgp3d.2
p1 y y
-y y -y y -y y -y y
y Frec
1 -x d26 (1-k) d26 d21 d26 d26 d26 d26 d d
d1
H +d0 d0 -kd0 d d21 DIPSI-2 DIPSI-2 DIPSI-2 DIPSI-2
p11 p2 pl19 Y
sp1
d23 d23
15N d23 d23 -d10 +d10
GARP
p22 p21 pl16
f1
13
Ca d27 d27 d27 d27 d
p14 p14 p14 p13 p13 p14

p24
sp9
13C´
d d22 d22 d
p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14 p14

GZ
G1 G4 G5 G6 G2 G3
hncocannhgp3d.2
p1 y y
-y y -y y -y y -y y
y Frec
1 -x d26 (1-k) d26 d21 d26 d26 d26 d26 d d
d1
p11 p2 pl19 Y
sp1
d23 d23
15N d23 d23 -d10 +d10
GARP
p22 p21 pl16
f1
13
Ca d27 d27 d27 d27 d
p14 p14 p14 p13 p13 p14

p24
sp9
13C´
d d22 d22 d
p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14 p14

2
H GARP
pl17
GZ
G1 G4 G5 G6 G2 G3

hncocannhgpwg3d.2
p1 y
-y y -y y -y y -y y
y Frec
1 -x d26 (1-k) d26 d21 -x -x -x
d1
p11 p2 pl19 d26 d26
sp1
d23 d23
15N d23 d23 -d10 +d10 d
GARP
p22 p21 pl16
f1
13
Ca d27 d27 d27 d27 d
p14 p14 p14 p13 p13 p14

p24
sp9
13C´
d d22 d22 d
p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14 p14

GZ
G1 G2 G3 G4 G5 G6 G6
hncocannhgpwg2h3d.2
p1 y
-y y -y y -y y -y y
y Frec
1 -x d26 (1-k) d26 d21 -x -x -x
d1
p11 p2 pl19 d26 d26
sp1
d23 d23
15N d23 d23 -d10 +d10 d
GARP
p22 p21 pl16
f1
13
Ca d27 d27 d27 d27 d
p14 p14 p14 p13 p13 p14

p24
sp9
13C´
d d22 d22 d
p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14 p14

2
H GARP
pl17
GZ
G1 G2 G3 G4 G5 G6 G6

trhncocannhgp3d.2
p1 y -y
-y y -y y -y y -y
1 -x d26 (1-k) d26 -x -x
d1
H +d0 d0 -kd0 d d21 DIPSI-2 DIPSI-2 DIPSI-2
p11 p2 pl19 -y
sp1
d23 d23
15N d23 d23 +d10 -d10
p22 p21
f1
13
Ca d27 d27 d27 d27 d
p14 p14 p14 p13 p13 p14

p24
sp9
13C´
d d22 d22 d
p13 p14 p13 p14 p14 p14

GZ
G1 G4 G5 G6 G2 G2 G3 G3
trhncocannhgp2h3d.2
p1 y -y
-y y -y y -y y -y
1 -x d26 (1-k) d26 -x -x
d1
H +d0 d0 -kd0 d d21 DIPSI-2 DIPSI-2 DIPSI-2
p11 p2 pl19 -y
sp1
d23 d23
15N d23 d23 +d10 -d10
p22 p21
f1
13
Ca d27 d27 d27 d27 d
p14 p14 p14 p13 p13 p14

p24
sp9
13C´
d d22 d22 d
p13 p14 p13 p14 p14 p14

2
H GARP
pl17
GZ
G1 G4 G5 G6 G2 G2 G3 G3

trhncocannhetgp3d.2
p1 y -y y y
-y y -y y -y y -y
y d26 d26 Frec
1 -x d26 (1-k) d26 -x
-y -y
d1 d26 d26
H +d0 d0 -kd0 d d21 DIPSI-2 DIPSI-2 DIPSI-2 d
p11 p2 pl19
y y -y
sp1
d23 d23
15N d23 d23 -d10 +d10 d
p22 p21
f1
13
Ca d27 d27 d27 d27 d
p14 p14 p14

p14 p14 p13 p24 p13 sp3
sp9
13C´
d d22 d22 d
p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14 p14

GZ
G1 G2 G9 G3 G5 G5 G7 G7
G4 G6 G8
trhncocannhetgp2h3d.2
p1 y -y y y
-y y -y y -y y -y
y d26 d26 Frec
1 -x d26 (1-k) d26 -x
-y -y
d1 d26 d26
H +d0 d0 -kd0 d d21 DIPSI-2 DIPSI-2 DIPSI-2 d
p11 p2 pl19
y y -y
sp1
d23 d23
15N d23 d23 -d10 +d10 d
p22 p21
f1
13
Ca d27 d27 d27 d27 d
p14 p14 p14

p14 p14 p13 p24 p13 sp3
sp9
13C´
d d22 d22 d
p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14 p14

2
H GARP
pl17
G4 G6 G8
GZ
G1 G2 G9 G3 G5 G5 G7 G7
G4 G6 G8

BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
3D HN(CA)HA
3D HA(CA)NH
3D HA(CACO)NH

Miscellaneous NH-Detected Backbone Experiments
· 3D HA(CA)NH using WATERGATE (hanhgpwg3d)
· 3D HA(CACO)NH using WATERGATE (haconhgpwg3d)

· 3D (HACA)CONH using PEP (hcaconhgp3d)
· 3D (HACA)CONH using WATERGATE (hcaconhgpwg3d)
· 3D HN(CA)HA (hncah3d)
1
1J 1 1
NH + JNCA+ JHACA
JHACA+ 1JNCA+1JNH
HN(CA)HA HA(CA)NH
1J 2 1
NH + JNCA+ JHACA
1 JH 2 1
ACA+ JNCA+ JNH
O O O O
H H H H H H H
H
1 (HACA)CONH 1
JHACA+ 1JCACO+ 1JNCO+1JNH
HA(CACO)NH
O O O O
H H H H H H
H H

1
JHACA+ 1JNCA+1JNH
HA(CA)NH
1 JH 2 1
ACA+ JNCA+ JNH
H C H H C H
N C C N C C
O O
H H H H
1 2 3
HA CA N NH HA
t1 t2 t3
N
HN
hanhgpwg3d
y
y -y d26 d26
d1 d4 (K-1) d4- -x
1 d3 -x -x Frec
H CW +d0 *d0 K*d0 DIPSI-2y DIPSI-2 d25 d
pl32 p1 p2 f1 p11
sp1
d23/2 d23/2 d23/2 d23/2
15N
-d10 -d10 +d10 +d10 GARP
p21 pl16
13
Ca d27 d27 d
p14 p13 p24 p13 p14

sp3 sp2 sp9 sp8 sp3
13
CO
p14 p14
GZ sp5 sp5
G2 G3 G4 G4
d3 : 1/(3J(CH)) [2.2 msec]

d4 : 1/(4J(CH)) [1.8 msec]
d21: 1/(4J(NCa)), T(N) [12.4 msec]
d25: 1/(2J(NH)) [5.5 msec]
d26: 1/(4J(NH)) [2.3 msec]
d27: 1/(4J'(NCa)) [11 msec]

1 (HACA)CONH R. Folmer & G. Otting, J. Biomol. NMR

16, 229-233 (2000)
H C H H C H
1 2 3 4
N C C N C C
HA CA CO N NH
O O
H H H H t1 t2 t3
hcaconhgp3d
y y
y -y
1 d26 d26 d26 d26 d d Frec
H d1 d4 d4 d3 DIPSI-2 d21
p1 p2 f1 Y
15N d23/2 d23/2 d23/2 d23/2

d23 d23 -d10 -d10 +d10 +d10 GARP
p21
pl16
13
Ca
p14 p13 p14 p13 p14
13 sp5 sp4 sp5 sp6 sp5
CO d22 d0 d0 d22 d
p13 p13 p14 p14
sp2 sp8 sp3 sp3
GZ
G3 G3 G4 G1 G2
hcaconhgpwg3d
y
y -y d26 d26
1 -x -x -x Frec
H d1 d4 d4 d3 DIPSI-2 d21 d
p1 p2 f1 p11
sp1
15N d23/2 d23/2 d23/2 d23/2
d23 d23 -d10 -d10 +d10 +d10 GARP
p21 pl16
13
Ca
p14 p13 p14 p13 p14
CO d22 d0 d0 d22 d
p13 p13 p14 p14
sp2 sp8 sp3 sp3
GZ
G1 G1 G2 G3 G4 G4
d3 : 1/(6J(HCa)) [1.16 msec]

d4 : 1/(4J(HCa)) [1.5 msec]
d21: 1/(2J(NH) [5.5 msec]
d22: 1/(4J(CaCO) [4.5 msec]
d23: 1/(4J(NCa) [12.4 msec]
d26: 1/(4J'(NH) [2.3 msec]

1 HA(CACO)NH
H C H H C H
N C C N C C
O O
H H H H
1 2 3 4
HA CA CO N NH
t1 t3
t2
haconhgpwg3d
y
d1 y -y y -y d26 d26
d4 (K-1) d4- -x -x -x Frec
1 d3
H CW +d0 *d0 K*d0 DIPSI-2y DIPSI-2 DIPSI-2 d25 d
pl32 p1 p2 f1
d23/2 d23/2 d23/2 d23/2

15N
-d10 -d10 +d10 +d10 GARP
p21 pl16
13
Ca d22 d22 d
p14 p24 p14 p14 p14

p13 p13 p14
sp3 sp9 sp7 sp7 sp7
13 sp2 sp8 sp7
d27-
CO d d22 d22 d27
p13 p14 p14
p14 p14 p13
sp2
GZ sp5 sp5 sp3 sp8 sp3
G1 G2 G3 G4 G4
d3 : 1/(3J(CH)) [2.2 msec]

d4 : 1/(4J(CH)) [1.8 msec]
d22: 1/(4J'(CaCO)) [4.4 msec]
d23: 1/(4J(NCO)), T(N) [12.4 msec]
d25: 1/(2J(NH)) [5.5 msec]
d26: 1/(4J(NH)) [2.3 msec]
d27: 1/(4J'(NCO)) [12.4 msec]

1J 1 1
NH + JNCA+ JHACA
HN(CA)HA
1J 2 1
NH + JNCA+ JHACA
H C H H C H HA
N C C N C C
O O N
H H H H HN
; S. Seip, J. Balbach & H. Kessler, J. Magn. Reson. 100,

; 406-410 (1992)
1 2 3 4 5 6
HN N CA HA CA N NH
t1 t2 t3
hncah3d
d1 Frec
1 d26 d26 d21 d21 d26 d26
H presat DIPSI-2 DIPSI-2
pl9 p1 p2 f1 pl19
15N d22 d22 d10 d10 d10 d10

GARP
p22 p21 pl16
13
Ca d2 d0 d0 d2
p14 p13 p14 p13 p14

sp3 sp2 sp3 sp2 sp3
13C´
p14 p14
sp5 sp5
d2 : 1/(2J(CH)) [3 msec]
d21: 1/(2J`(NH)) [4.5 msec]
d22: 1/(4J(N-Ca)) [11 msec]
d26: 1/(4J(NH)) [2.75m]

BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
HA-DETECTED
BACKBONE EXPERIMENTS

HA-Detected Backbone Experiments
· 3D HCACO experiment (hcacogp3d | HCA COG P3D )
Also see:
3D HCACO-type experiments for J measuring
13
C-detected CACO-type experiments
· 2D H(CA)N with 2 H-decoupling (hcangp2h)

· 3D HCAN using PEP (hcangp3d)
· 2D H(CACO)N with 2 H-decoupling (hcacongp2h)
· 3D HCA(CO)N using PEP (hcacongp3d)
· 3D HCBCA(CO)N (hcbcacongp3d)

1
JHACA + 1JCACO HCACO
H C H H C H
N C C N C C
O O
H H H H
1 2 3 4
d4=1/4J(CAHA)=1.7m
HA CA CO CA HA d21=1/4J(CH) or 1/6J(CH)=1.7m or 1.2m
d22=1/4J(CACO)=4.5m
t1 t2 t3
hcacogp3d
y
Frec
1 d1 d4 d4 d21 d21 d4 d4
H
p24 p13 p14 p13 p24 p13
F1 sp9 sp8 sp7 sp2 sp9 sp8
13
Ca d22 d22 d22 d10 d22 d10
GARP
p14 p13 p14 p14 p14 pl12
sp3 sp2 sp5 sp7 sp3
13
CO d0 d0
p14 p23 p14 p23 p14 p14

15
N
Gz
G1 G2 G3 G4
ppm ppm
166
47
168
48
170
49
172
50
CO 51
174
176
52
178
53
180
CA 54
182
55
HA 184
56
186
5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 ppm 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 ppm
2D HACA(CO) 2D HA(CA)CO

2D H(CA)N Experiment
A.C. Wang, S. Grzesiek, R. Tschudin, P.J. Lodi & A. Bax, J. Biomol. NMR 5, 376-382 (1995)
1
JHACA+ 1JNCA
1
JHACA+ 2JNCA H(CA)N
H C H H C H
N C C N C C
O O
H H H H
1 2 3 4
HA CA N CA HA
t1 t2
hcangp2h
y
Frec
1
H d1 d4 d4 d d21 d21 d d4 d4
p1 p2 p28 f2
15N d0 d0 e
p22 p21
f1
13
Ca d23 d23 d d23 d23 GARP
p14 p13 p24 p13 p8 p13 p24 p13 p14 pl12
2
H
GARP
pl17
GZ
G1 G2 G3 G4

3D HCAN Experiment
1 2 3 4
HA CA N CA HA
t1 t2 t3
hcangp3d
y y y
-x y -y -x
1 Frec
H d1 d4 d4 d21 d21 d24 d24 d4 d4 d d
p1 p2 f2
15N d0 d0 e
p22 p21
f1 Y
13
Ca d23 d23 d d23-d10 d23+d10 GARP
p14 p13 p24 p13 p8 p13 p24 p13 p14 p13 p14
sp3 sp2 sp9 sp8 sp13 sp2 sp9 sp8 sp8 sp2 sp8 pl12
13
CO
p14 p14
sp3 sp3
GZ
G3 G4 G1 G2
CA
HA

2D H(CACO)N Experiment
1
JHACA+ 1JCACO+ 1JNCA
H(CACO)N
H C H H C H
N C C N C C
O O
H H H H
1 2 3 4 6
5
HA CA CO CO CA HA
N
t1 t2
hcacongp2h
y
Frec
1
H d1 d4 d4 d d21 d21 d d4 d4
p1 p2 p28
15N d0 d0 e
p22
f2
13
Ca d23 d23 d d25 d25 d23 d23
GARP
p14 p13 p24 p13 p14 p14 p8 p14 p14 p13 p24 p13 p14 pl12
sp3 sp2 sp9 sp8 sp7 sp7 sp3 sp7 sp7 sp2 sp9 sp8 sp3
13
C´ d23 d23 d d d23 d23
p14 p14 p23 p14 p23 p23 p14 p23 p14 p14
2 sp5 sp5 sp3 sp12 sp10 sp3 sp12 sp5 sp5
H sp10
GARP
pl17
GZ
G1 G2 G3 G4 G5 G6
d4 : 1/(4J(HCa)) [1.5 msec]

d21: 1/(4J`(HCa)) [1.55 msec]
d22: 1/(4J(CaCO)) [4.5 msec]
d23: 1/(4J(NCO)) [13.1 msec]
d25: 1/(4J`(CaCO)) [4.5 msec]

2D HCA(CO)N Experiment
1
JHACA + 1JCACO + 1JNCO
HCA(CO)N
H C H H C H
N
N C C N C C
O O
H H H H CA
HA
1 2 3 4 6
5
HA CA CO N CO CA HA
t1 t2 t3
hcacongp3d
y y y
-x y -y -x
1 d1 d4 d4 d21 d24 d24 d4 d4 d d Frec
H d21
p1 p2 f2
15N d0 d0 e
p21
f1 Y
13
Ca d22 d22 d d22-d10 d22+d10 GARP
p24 p24
p14 p13 p13 y p8 p13 p13 p14 p13 p14
sp9 sp9 pl12
CO d23 d23 d d23 d23
p14
p14 p14 p13 p14 p13 p13 p14 p13 p14
sp5
GZ sp5 sp5 sp2 sp3 sp8 sp2 sp3 sp8 sp5
G3 G4 G1 G2
d4 : 1/(4J(HCa)) [1.6 msec]

d21: 1/(3J(HCa)) [2.2 msec]
d22: 1/(4J(CaCO)) [4.5 msec]
d23: 1/(4J(NCa)) [12 msec]
d24: 1/(8J(HCa)) for all multiplicities
1/(4J(HCa)) for CH

2D HCBCA(CO)N Experiment
1. V. Kanelis, L. Donaldson, D.R. Muhandiram, D. Rotin, J.D. Foreman-Kay & L.E. Kay,
J. Biomol. NMR 16, 253-259 (2000))
2. A.C. Wang, S. Grzesiek, R. Tschudin, P.J. Lodi & A. Bax, J. Biomol. NMR 5, 376-382 (1995))
1
JHBCB +1JHACA + 1JCACO + 1JNCO
HCBCA(CO)N
H C H H C H
N C C N C C
O O
H H H H
1 2 3 4 5 6 7
HB CB CA CO CO CA HA
N
t2 t3
t1
hcbcacongp3d
y
Frec
1 d1 d4 d4
H d3 DIPSI2 DIPSI2 d d3 d d4 d4
p1 p2 p17
15N d10 d10 e
p22
13
Ca d0 d28 d28-d0 d22 d22 d d27 d27 GARP
p14 p13 p14 p13 p14 p13 p8 p13 p24 p13 p14 pl12
sp3 sp2 sp3 sp8 sp3 sp2 sp3 sp2 sp9 sp8 sp3
13
C´ d23 d23 d23 d23
d
p14 p14 p14 p14 p13 p14 p13 p13 p14 p13 p14 p14
sp5 sp5 sp5 sp5 sp2 sp3 sp8 sp2 sp3 sp8 sp7 sp7
GZ
G1 G2 G3 G4
d3 : 1/(6J(HCa)) [1.1 msec]

CA d4 : 1/(4J(HCa)) [1.6 msec]
d22: 1/(4J'(COCa) [3.6 msec]
d23: 1/(4J(NCO) [12 msec]
d27: 1/(4J(COCa) [4.2 msec]
N
d28: 1/(8J(CaCb)) [3.6 msec]
HA

BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
PROTEIN NMR.
BACKBONE-SIDECHAIN
3D EXPERIMENTS

3D BACKBONE-SIDECHAIN
HN(CO)CACB HNCACB intraHNCACB

SeqHNCACB
CCA(CO)NH CCANH
CBCA(CO)NH CBCANH SeqCBCANH
CC(CO)NH (H)CC(CO)NH
H(CC)(CO)NH HBHA(CO)NH HBHANH
A. Experiments Involving CO into the Magnetization Transfer Mechanism
Example: CCANH vs CCA(CO)NH:
1 2 3 1 2 3 4
CA CA N NH CA CA CO N NH
CB t2 t3 CB t2 t3
t1 t1
1
JCCA + 1JCAN + 1JNH 1
JCCA + 1JCON + 1JNH CCA(CO)NH
1
CCANH
JCCA + 2JCAN + 1JNH
H C H H C H
O O O O
H H H H H H H H
Other examples:
CBCA(CO)NH vs CBCANH
HN(CO)CACB vs HNCACB

B. COSY vs TOCSY CC Transfer. Example: CCA(CO)NH vs CC(CO)NH

1 2 3 4
1 2 3 4
CA CA CO N NH
CA CA CO N NH
CB t2 t3
CB t2 t3
CG
t1
t1
1
S 1JCC + 1JCON + 1JNH CC(CO)NH
H C H
H C H
H C H H C H
H C H H C H
N C C N C C
N C C N C C
O O
H H H H O O
H H H H
C. Starting from 13C or from 1H. Example1: CCA(CO)NH vs CBCA(CO)NH
1 2 3 4 1 2 3 4 5
CA CA CO N NH HA CA CA CO N NH
CB t2 t3 HB CB t2 t3
t1
t1
1
JCCA + 1JCON + 1JNH CCA(CO)NH 1
JCH + 1JCC + 1JCON+ 1JNH
CBCA(CO)NH
H C H
H C H H C H
H C H H C H
N C C N C C
N C C N C C
O O
O H
O H H H H
H H H
Example 2: CC(CO)NH vs (H)CC(CO)NH:

1 2 3 4 5
1 2 3 4
HA CA CA CO N NH
CA CA CO N NH
HB CB t2 t3
CB t2 t3
HG CG
CG
t1
t1
S 1JCC + 1JCON + 1JNH CC(CO)NH 1

JCH + S 1JCC + 1JCON + 1JNH (H)CC(CO)NH
H C H H C H
O O O O
H H H H H H
H H

D. Out-and-back vs Out-and-Stay. Examples: HN(CO)CACB vs CBCA(CO)NH
Other examples: HNCACB vs CBCANH
1 2 3 4 5 6 7 8
NH N CO CA CA CA CO N NH
CB t2 t3
t1
1 2 3 4 5
HA CA CA CO N NH
HB CB t2 t3
t1
1
JCC + 1JCON+ 1JNH 1
HN(CO)CACB JCH + 1JCC + 1JCON+ 1JNH
CBCA(CO)NH
H C H H C H
H C H H C H
N C C N C C
N C C N C C
O O
H H H H O O
H H H H
E. Evolving Aliphatic Carbons or Aliphatic protons.

Example (H)CC(CO)NH vs H(CC)(CO)NH:
Other examples:
CBCA(CO)NH vs HBHA(CO)NH
CBCANH vs HBHANH
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
HA CA CA CO N NH HA CA CA CO N NH
HB CB t2 t3 HB CB t2 t3
HG CG HG CG
t1 t1
1
JCH + S 1JCC + 1JCON + 1JNH (H)CC(CO)NH 1
JCH + S 1JCC + 1JCON + 1JNH H(CC)(CO)NH
H C H H C H
O O O O
H H H H H H
H H

BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
3D CBCACONH

CBCACONH experiment
· 3D CBCA(CO)NH using PEP (cbcaconhgp3d | CBCA CONHG P3D )

· 3D CBCA(CO)NH using WATERGATE (cbcaconhgpwg3d | CB CACON HGP WG 3D)
· 3D CBCA(CO)NH using WATERGATE and filter por CG (cbcaconhgpwg3d.2)
· 3D CBCA(CO)NH using TROSY (trcbcaconhgp3d | T RCBCA CONHG P3D )
· 3D CBCA(CO)NH using TROSY and gradient echo-antiecho (trcbcaconhetgp3d |
TR CBCAC ONHET GP 3D )
· 4D CBCACONH using WATERGATE (cbcaconhgpwg4d)
· 5D HBHACBCACONH using WATERGATE (hbhacbcaconhgpwg5d)
Also see:
CBCANH experiments
HN(CO)CACB experiments
HCCCONH experiments
1
CBCA(CO)NH
H C H H C H
N C C N C C
O O
H H H H

1 2 3 4 5
HA CA CA CO N NH
HB CB t2 t3
t1
cbcaconhgp3d
y y
-y y -y
Frec
1 d1 d4 d4 d3 d25d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2 y d DIPSI-2
p1 p2 pl19
Y
15N d21-d10 d21+d10

GARP
p22 p14 p21 pl16
sp5
13
C´ d27 d27
f1 p14 p14 p14 p13 p14 p13 p14

13 d22 d22
Cab d0 d23 d23 d24
-d0
p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14
sp3 sp2 sp3 sp8 sp3 sp2 sp7 sp7 sp7 sp7
GZ
G1 G2 G3
d4=1/4J(CH)=1.7m d27=1/4J(NCO)=12.4m
d3=1/6J(CH)=1.1m d21=1/4J(NCO)=12.4m
d22=1/4J(CBCA)=3.6m d25=1/2J(NH)=5.5m
d23=1/4J(CBCA)=3.6m d26=1/4J(NH)=2.3m
d24=1/4J(CACO)=4.4m
ppm
15
20
25
30
35
Cali 40
45
50
N 55
HN 60
65
70
10 9 8 7 ppm

cbcaconhgpwg3d
y
-y y -y y -y
-x -x -x Frec
1 d1 d4 d4 d3 d25
H DIPSI-2 y d DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 pl19
d26 d26
15N d21-d10 d21+d10 d

GARP
p22 p14 p21 pl16
sp5
13C´ d
d27 d27
f1 p14 p14 p14 p13 p14 p13 p14

13 d0 d22 d22
Cab -d0 d23 d23 d24
p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14
GZ
G1 G2 G3 G4 G4
trcbcaconhgp3d
-y
y
-x y -y d26 d26 d26 d26
1 Frec
H d1 d4 d4 d3
d
-x -x
DIPSI-2 y DIPSI-2
p1 p2 pl19 f1 -y
15N
d10 d21 d21-d10
p22 p14
sp5
13C´
d27 d27
f1 p14 p14 p14 p13 p14 p13 p14

Cab d0 d22 d22 d23 d23 d24
-d0
p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14
G1 G2 G2 G3 G3

trcbcaconhetgp3d
-y y y
y
-x y -y d26 d26
-x Frec
1 d3 d26 d26 -y -y
H d1 d4 d4
DIPSI-2 y d DIPSI-2
d
p1 p2 pl19 f1 y y -y
15N d21-d25 d21-d25

-d10 +d10 d
p22 p14
sp5
13C´
d27 d27
f1 p14 p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14

13
Cab d0 d22 d22 d23 d23 d24
-d0
p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14
GZ
G1 G1 G2 G4 G4 G6 G6
G3 G5 G7
cbcaconhgpwg3d.2
y
-y y -y y -y
-x -x -x Frec
1 d1 d4 d4 d3 d21
p1 p2 pl19
d26 d26
15N d27-d10 d27+d10 d

GARP
p22 p14 p21 pl16
sp5
13C´ d
d22 d27 d27
f1 p14 p14 p14 p13 p14 p13 p14

13 d0 d28
Cab d28
-d0 d23 d23 d22
p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14
GZ
G1 G2 G3 G4 G4

cbcaconhgpwg4d
y
-y y -y y -y
-x -x -x Frec
1 d1 d4 d4 d3 d25
p1 p2 pl19
d26 d26
d23 d23
15N +d33 d
-d33 GARP
p22 p14 p21 pl16
sp5
13C´ d27 d27 d
+d32 -d32
f1 p14 p14 p14 p13 p14 p13 p14
13 d31 d22 d22
Cab -d31 d23 d23 d22
p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14 p14
GZ
G1 G2 G3 G4 G4
hbhacbcaconhgpwg5d
y
-y y -y y -y
1 d1 d4+ (1-k) d4- -x -x -x Frec
H d31 *d31 K*d31 d3
DIPSI-2 y d DIPSI-2 DIPSI-2
d25
p1 p2 pl19
d26 d26
15N d23 d23
+d34 d
-d34 GARP
p22 p14 p21 pl16
sp5
13C´
d23 d23 d
+d32 -d32
f1 p14 p14 p14 p13 p14 p13 p14
13 sp3
Cab d32 d22 d22
d23 d23 d22
-d32
p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14 p14
GZ sp3 sp2 sp3 sp8 sp3 sp2 sp7 sp7 sp7 sp7 sp7
G1 G2 G3 G4 G4

BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
3D HN(CO)CACB

3D HN(CO)CACB experiment
· 3D HN(CO)CACB using PEP (hncocacbgp3d | HNCOCA CBGP 3D ):

o with 2H-decoupling (hncocacbgp2h3d | HNCOCA CBGP 2H3D)
· 3D HN(CO)CACB using WATERGATE (hncocacbgpwg3d | HN COCA CBGP WG 3D)
o with 2H-decoupling (hncocacbgpwg2h3d | HNCOCA CBGP W G2H3D )
· 3D HN(CO)CACB using TROSY (trhncocacbgp3d | T RHNCOCA CBG P3D ):
o with 2H-decoupling (trhncocacbgp2h3d | T RHNCOCA CBG P2H3D )
o using gradient echo-antiecho (trhncocacbetgp3d | TRHN COCA CBETG P3D )
o using gradient echo-antiecho and with 2 H-decoupling (trhncocacbetgp2h3d |
TR HNCOCA CBET GP2H3D )
Also see:
APSY-HNCOCACB experiment
Reduced-Dimensionality (3,2)-HNCOCACB (rd_hncocacb_32 | APSY_HNCOCACB_32)
SOFAST/BEST-HNCOCACB experiment
3D BEST-HN(CO)CACB (b_hncocacbgp3d | B_HNCOCACBGP3D)
3D BEST-HN(CO)CACB using TROSY (b_trhncocacbgp3d)
4D BEST-HNCOCACB (b_hncocacbgp4d)
3D HNCACB and CBCA(CO)NH experiments
1
JCC + 1JCON+ 1JNH
HN(CO)CACB
H C H H C H
N C C N C C
O O
H H H H
ppm
20
30
Cali 40
50
N
60
HN
70
10 9 8 7 ppm

1 2 3 4 5 6 7 8
NH N CO CA CA CA CO N NH
CB t2 t3
t1
hncocacbgp3d
y y
y -y
Frec
1 d d21 d21 d26 d26 d26 d26 d d
H d1 d26 d26
DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19 Y
sp1
15N d23 d23 d23-d10 d23+d10
GARP
p22 p21 p14 p13 pl16
sp7 sp2
13C´
d22 d22 d22 d22
p14 p13 p14 p13 p14 f1 p14 p13 p14
sp3 sp2 sp3 sp8 sp7
f2 sp3 sp8 sp3
13
Cab d28 d28 d0 d0 d28 d28
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14
GZ
G1 G3
G2
hncocacbgp2h3d
y y
y -y y -y Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d4 d21 d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19 Y
sp1
15N d23 d23 d23-d10 d23+d10
GARP
p22 p21 p14 p13 pl16
sp7 sp2
13C´
d22 d22 d22 d22
p14 p13 p14 p13 p14 f1 p14 p13 p14
sp7
f2
13 d28 d28 d27 d28
Cab d0 d27
-d0
d28
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14
2
H
GARP
pl17
GZ
G1 G3
G2
d26=1/4J(NH)=2.3m
d21=1/2J(NH)=5.5m
d23=1/4J(NCO)=12m
d22=1/4J(CACO)=4m
d28=1/4J(CACB)=3.6m

hncocacbgpwg3d
y
y -y y -y
-x -x -x Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19 d26 d26
sp1
15N d23 d23 d d23-d10 d23+d10 d
GARP
p22 p21 p14 p13 pl16
sp7 sp2
13C´
d22 d22 d22 d22
p14 p13 p14 p13 p14 f1 p14 p13 p14
sp3 sp2 sp3 sp8 sp7 f2 sp3 sp8 sp3
13 d28 d28
Cab d0 d0 d28 d28
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14
GZ
G1 G2 G3 G4 G4
hncocacbgpwg2h3d
y
y y -y
-y Frec
-x -x -x
1 d1 d26 d26 d d21 d21
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19
d26 d26
sp1
15N d23 d23 d4 d23-d10 d23+d10 d
GARP
p22 p21 p14 p13 pl16
sp7 sp2
13C´
d22 d22 d22 d22 d
p14 p13 p14 p13 p14 f1 p14 p13 p14
13 d28 d28 d0 d27 d27 d28
Cab -d0
d28
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14
2
H GARP
pl17
GZ
G1 G2 G3 G4 G4

trhncocacbgp3d
p1 -y -y
d26 d26 d26 d26 d26 d26 Frec
1 d1 -x -y -x -x
H
p11 p2 f1 -y
sp1
15N d23 d23 d10 d23 d23-d10
p22 p21 p14

sp7
13C´
d22 d22 d22 d22
p14 p13 p14 p13 p14 p14 p13 p14 p13 p14
13 d28 d28 d0 d0 d0 d0
Cab d28 d28
p14 p14 p13 p14 p13 p13 p14 p13 p14 p14 p14
GZ
G1 G1 G2 G2 G3 G3
trhncocacbgp2h3d
p1 -y -y
d26 d26 d26 d26 d26 d26 Frec
1 -x -y -x -x
H d1
p11 p2 f1 -y
sp1
15N d23 d23 d10 d23 d23-d10
p22 p21 p14

sp7
13C´
d22 d22 d22 d22
p14 p13 p14 p13 p14 p14 p13 p14 p13 p14
13 d28 d28 d0 d0 d0 d0
Cab d28 d28
p14 p14 p13 p14 p13 p13 p14 p13 p14 p14 p14
2
H
GARP
pl17
GZ
G1 G1 G2 G2 G3 G3

trhncocacbetgp3d
-y -y y y
y -x d26 d26 Frec
1 d26 d26 d26 d26 -y -y
H d1 d
p11 p1 p2 f1 y y -y
sp1
d23-d25 d23-d25
15N d23 d23 d
-d10 +d10
p22 p21 p14

sp7
13C´
d22 d22 d22 d22
p14 p13 p14 p13 p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14
13
Cab d28 d28 d0 d0 d0 d0 d28 d28
p14 p14 p14 p14 p13 p14 p14 p14 p14

p13 p13 p13
sp5 sp5
GZ
G5 G7 G9
trhncocacbetgp2h3d
-y -y y y
y -x d26 d26 Frec
1 d26 d26 d26 d26 -y -y
H d1 d
p11 p1 p2 f1 y y -y
sp1
d23-d25 d23-d25
15N d23 d23 d4 d
-d10 +d10
p22 p21 p14

sp7
13C´
d22 d22 d22 d22
p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p14
13 d27 d28
Cab d28 d28 d0 d27
-d0
d28
p14 p14 p14 p14 p14 p13 p14 p14 p14 p14
p13 p13 p13
sp3 sp5 sp5
2
H GARP
pl17
GZ
G1 G1 G2 G2 G1 G1 G1 G1 G4 G4 G6 G6
G3 G5 G7

BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
3D CBCANH

CBCANH experiment
· 3D CBCANH using PEP (cbcanhgp3d | CBCA NHG P3D )

· 3D CBCANH using WATERGATE (cbcanhgpwg3d | CBCA NHGP W G3D )
· 3D CBCANH using TROSY (trcbcanhgp3d | TRCBCA NH GP3D )
· 3D CBCANH using TROSY and gradient echo-antiecho (trcbcanhetgp3d | TRCBC AN HETG P3D )
· 4D HBHACBCANH using WATERGAT E (hbhacbcanhgpwg4d)
Also see:
HNCACB experiments
Sequential CBCANH experiments
CBCA(CO)NH experiments
CCANH experiments
References:
S. Grzesiek & A. Bax, J. Magn. Reson. 99, 201-207 (1992)
1
JCH + 1JCC + 1JCAN+ 1JNH
1
JCH + 1JCC + 2JCAN+ 1JNH CBCANH
H C H H C H
N C C N C C
O O
H H H H

1 2 3 4
HA CA CA N NH
HB CB t2 t3
t1
cbcanhgp3d
y y
-y y -y
1 pl19 Frec
H d1 d4 d4 d3 d25d26 d26 d26 d26 d d
DIPSI-2 y DIPSI-2
p1 p2 Y
15N d21-d10 d21+d10

GARP
p22 p21 pl16
13
C´
f1 p14 p14 p14 p14
sp5 sp5 sp5 sp5
13 d22
Cab d0 d22
-d0
d27 d27 d
p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14

GZ
G1 G2 G3
d4=1/4J(CH)=1.7m
d3=1/6J(CH)=1.1m
d22=1/4J(CBCA)=3.6m
d27=1/4J(NCO)=11m
d21=1/4J(NCO)=12.4m
d25=1/2J(NH)=5.5m
d26=1/4J(NH)=2.3m
CBCA(N)H
Negative peaks Positive pekas

ppm ppm
15 15
20 20
25 25
30 30
35 35
Cali 40 40
45 45
50 50
55
N 60
55
60
HN 65 65
70 70
10 9 8 7 6 ppm 10 9 8 7 6 ppm

cbcanhgpwg3d
y
-y y -y
1 d3 pl19 -x -x -x Frec
H d1 d4 d4
DIPSI-2 y DIPSI-2
d25
p1 p2 d26 d26
15N d21-d10 d21+d10 d
GARP
p22 p21 pl16
13
C´
f1 p14 p14 p14 p14
13 sp5 sp5 sp5 sp5
Cab d0 d22 d22 d27 d27 d
-d0
p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14
sp3 sp2 sp3
GZ sp3 sp2 sp3 sp8
G2 G3 G4 G4
CBCA(CON)H CBCA(N)H
ppm ppm
15 15
20 20
25 25
30 30
35 35
40 40
45 45
50 50
55 55
60 60
65 65
70 70
10 9 8 7 ppm 10 9 8 7 6 ppm

trcbcanhgp3d
y -y
-x
d26 d26 d26 d26 Frec
1 -x -x
H d1 d4 d4 d3
DIPSI-2 y
p1 p2 pl19 f1 -y
15N d21+d10 d21-d10
p22 p21
13
C´
f1 p14 p14 p14
13 sp5 sp5 sp5
Cab d0 d22 d22 d27 d27 d
-d0
p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14
GZ
G1 G2 G2 G3 G3
trcbcanhetgp3d
y -y y y
-x
-x d26 d26 Frec
1 d26 d26 -y -y
H d1 d4 d4 d3
DIPSI-2 y d
p1 p2 pl19 f1 y y -y
15N d21-d25 d21-d25

-d10 +d10 d
p22 p21
13
C´
f1 p14 p14 p14 p14
sp5 sp5 sp3 sp3
13
Cab d0 d22 d22-d0 d27 d27 d
p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p14

GZ
G1 G1 G2 G4 G4 G6 G6
G3 G5 G7

hbhacbcanhgpwg4d
y
-y y -y
1 d4+ (1-k) d4- d3 pl19 -x -x -x Frec
H d1 d31 *d31 K*d31 DIPSI-2 y DIPSI-2
d25
p1 p2 d26 d26
15N d23- d23+
d33 d33 d
GARP
p22 p21 pl16
13
C´
p14 p14 p14 p14
f1 p14
sp5 sp5
sp5 sp5 sp5
13
Cab d32 d28
d28-
d32 d27 d27 d
p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14

sp3 sp3
GZ sp3 sp2 sp3 sp8 sp2
G2 G3 G4 G4

BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
3D SEQUENTIAL CBCANH

3D Sequential CBCANH experiment
· 3D Sequential CBCANH using TROSY (seqtrcbcanhgp3d | S EQ TRCBCA NH GP3D )
Also see:
CBCANH experiments
Sequential HNCACB experiment
Ref: A. Meissner & O.W. Sorensen, J. Magn. Reson. 151, J. Biomol. NMR 20, 188-180 (2001))
1
JHC+ 1JCACB+ 2JNCA+1JHN seqCBCANH
H C H H C H Cali
N C C N C C
O O N
H H H H HN
1 2 4
3 d26=1/4J(NH)=2.3m
HA CA CA d21=1/4J(NCA)=12.4m
N NH
d22=1/8J(CACB)=3.6m
HB CB t2 t3 d27=1/4J(NCA)=11m
t1 d24=1/4J(CACO)=4.5m
d4=1/4J(CH)=1.7m
d3=1/6J(CH)=1.1m
seqtrcbcanhgp3d
-y -y
-x d26 d26 d26 d26 Frec
1 d1 d4 d4 -x -x
H DIPSI-2
p1 p2 p11 -y
sp1
15N d d21+d10 d21-d10
d3
p21
f1
13
Ca 2d0 d22 d22-2d0 d27 d27
p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14
13C´
d24
p14 p14 p14 p14
sp5 sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G2 G2 G3 G3

BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
3D HNCACB

3D HNCACB experiment
· 3D HNCACB using PEP (hncacbgp3d | HNC ACBG P3D ):

o with 2H-decoupling (hncacbgp2h3d | HNCA CBG P2H3D )
· 3D HNCACB using WATERGATE (hncacbgpwg3d | HNCA CBGP 2H3D)
o with 2H-decoupling (hncacbgpwg2h3d | HNCA CBGP W G2H3D )
· 3D HNCACB using TROSY (trhncacbgp3d | TRHN CACB GP3D ) :
o with 2H-decoupling (trhncacbgp2h3d | TRHNCA CBG P2H3D )
o with gradient echo-antiecho (trhncacbetgp3d | T RHNCA CBET GP3D )
o with gradient echo-antiecho and with 2 H-decoupling (trhncacbetgp2h3d |
TR HNCA CBETG P2H3D )
Also see:
3D APSY-HNCACB experiment
Reduced-Dimensionality (3,2)-HNCACB (rd_hncacb_32 | APSY_HNCACB_32)
3D SOFAST/BEST-HNCACB experiment
3D BEST-HNCACB (b_hncacbgp3d | B_HNCACBGP3D)
3D BEST-HNCACB using TROSY (b_trhncacbgp3d)
3D HNCACB for J Measurements
3D HNCACB[CO]-E.COSY (hncacbgpjc3d | HNCA CBG PJC3D ) - 3J[CO-CB] via E.COSY
3D HNCA(CO)CB and CBCANH experiments

3D intra-HNCACB & 3D sequential-HNCACB experiments
1. M. Wittekind & L. Mueller, J. Magn. Reson. B 101, 201-205 (1993)

2. D.R. Muhandiram & L.E. Kay, J. Magn. Reson. B 103, 203-216 (1994)
1
JHN + 1JNCA+ 1JCACB
1
HNCACB
JHN + 2JNCA+ 1JCACB
H C H H C H
N C C N C C
O O
H H H H
HNCACB
ppm
20
30
40
Cali
50
N 60
HN
70
10 9 8 7 ppm

1 2 3 4 5 6
NH N CA CA CA N NH
CB t2 t3
t1
hncacbgp3d
y y
y -y
Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19 Y
sp1
15N d23 d23 d23-d10 d23+d10
GARP
p14 pl16
p22 p21
sp5
13C´
p14 p14
sp5 f1 f2 p14
sp5 sp5
13 d28 d28
Cab d0 d0 d28 d28
p14 p13 p14 p14 p14

p13 p14 p13 p13
sp3 sp2 sp3 sp3 sp3
sp8 sp3 sp2 sp8
GZ
G1 G3
G2
d26=1/4J(NH)=2.3m
d21=1/2J(NH)=5.5m
d23=1/4J(NCO)=12.4m
d28=1/4J(CACB)=3.6m
if ZGOPTNS=LABEL_CB d28=7.2m
hncacbgp2h3d
y y
y -y y -y
Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d4 d21 d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19 Y
sp1
15N d23 d23 d23-d10 d23+d10
GARP
p14 pl16
p22 p21
sp5
13C´
p14 p14 p14

sp5 f1 f2 sp5 sp5
13 d28 d28 d27
Cab d0 d27
-d0
d28 d28
p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14

H GARP
pl17
GZ
G1 G3
G2

hncacbgpwg3d
y
y -y y -y
-x -x -x Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19 d26 d26
sp1
15N d23 d23 d d23-d10 d23+d10 d
GARP
p22 p21 p14 pl16
sp5
13C´
p14 p14
y sp5 f1 f2 sp3
13 d28 d28
Cab d0 d0 d28 d28
p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14

p14 p13 p13
sp3 sp2 sp8
GZ
G1 G2 G3 G4 G4
hncacbgpwg2h3d
y
y -y y -y
-x -x -x Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d4 d21
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19
d26 d26
sp1
15N d23 d23 d d23-d10 d23+d10 d
GARP
p22 p21 p14 p14 pl16
sp5 sp5
13C´
p14
y f1 f2 sp3
13 d27
Cab d28 d28 d0 d27 d28 d28
-d0
p14 p13 p14 p13 p13 p14 p13 p14 p14
p14
sp3
2
H
GARP
pl17
GZ
G1 G2 G3 G4 G4

trhncacbgp3d -y
p1 y
d26 d26 d26 d26 d26 d26 Frec
1 -x -y -x -x
H d1
p11 p2 f1 -y
sp1
15N d23 d23 d10 d23 d23-d10
p22 p21
13C´
p14 p14 p14

sp5 sp5 sp5
13
Cab d28 d28 d0 d0 d0 d0 d28 d28
p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14

GZ
G1 G1 G2 G2 G3 G3
trhncacbgp2h3d
p1 y -y
d26 d26 d26 d26 d26 d26 Frec
1 -x -y -x -x
H d1
p11 p2 f1 -y
sp1
15N d23 d23 d10 d23 d23-d10
p22 p21
13C´
p14 p14 p14

sp5 sp5 sp5
13
Cab d28 d28 d0 d0 d0 d0 d28 d28
p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14

2
H GARP
pl17
GZ
G1 G1 G2 G2 G3 G3

trhncacbetgp3d
y -y y y
y -x d26 d26 Frec
1 d26 d26 -y -y
H d1 d26 d26 d
p11 p1 p2 f1 y y -y
sp1
d23-d25 d23-d25
15N d23 d23 d
-d10 +d10
p22 p21
13C´
p14 p14 p14 p14

sp5 sp5 sp5 sp5
13
Cab d28 d28 d0 d0 d0 d0 d28 d28
p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p14
GZ
G1 G1 G2 G2 G3 G3 G4 G4 G6 G6 G8 G8
G5 G7 G9
trhncacbetgp2h3d
y -y y y
y -x d26 d26 Frec
1 d26 d26 -y -y
H d1 d26 d26 d
p11 p1 p2 f1 y y -y
sp1
d23-d25 d23-d25
15N d23 d23 d4 d
-d10 +d10
p22 p21
13C´
p14 p14 p14 p14

sp5 sp5 sp5 sp5
13 d27 d28
Cab d28 d28 d0 d0 d27
-2d0
d28
p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p14
2
H GARP
pl17
GZ
G1 G1 G2 G2 G4 G4 G6 G6
G3 G5 G7

BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
3D SEQUENTIAL HNCACB

3D Sequential-HNCACB experiment
· 3D Sequential HNCACB using TROSY (seqtrhncacbgp3d | S EQ TRHN CACB GP3D )

o with 2H-decoupling (seqtrhncacbgp2h3d | SEQ T RHNCA CBGP 2H3D)
o Using gradient echo-antiecho (seqtrhncacbetgp3d | S EQ TRHN CACBE TGP 3D )
o Using gradient echo-antiecho and with 2 H-decoupling (seqtrhncacbetgp2h3d |
SEQ T RHNCA CBET GP2H3D )
Also see:
3D HNCACB and intra-HNCACB experiments
3D sequential CBCANH experiments
References:
A. Eletsky, A. Kienhoefer & K. Pervushin, J. Biomol. NMR 20, 188-180 (2001)
seqHNCACB
1
JHN + 2JNCA + 1JCACB
H C H H C H Cali
N C C N C C
O O N
H H H H HN
1 2 3 4 6
5
NH N CA CA CA N NH
CB t3
t2
t1
d26=1/4J(NH)=2.3m
d23=1/4J(NCA)=12m
d22=1/4J(CACO)=4.5m
d28=1/8J(CACB)=5m
d25=1/4J(NH)=2.3m

seqtrhncacbgp3d
-y -y
d26 d26 d26 d26 d26 d26 Frec
1 d1 -x -y -x -x
H
p1 p11 p2 f1 -y
sp1
15N d23 d23 d10 d23 d23-d10
p22 p21
13
Ca d28 d28 d0 d0 d0 d0 d28 d28
p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14

13C´
d22
p14 p14 p14 p14 p14 p14

GZ
G1 G1 G2 G2 G3 G3
seqtrhncacbgp2h3d
-y -y
d26 d26 d26 d26 d26 d26 Frec
1 d1 -x -y -x -x
H
p1 p11 p2 f1 -y
sp1
15N d23 d23 d4 d10 d23 d23-d10
p22 p21
13
Ca d28 d28 d0 d0 d27
d27
-2d0 d28 d28
p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14

13C´
d22
p14 p14 p14 p14 p14 p14

2
H GARP
pl17
GZ
G1 G1 G2 G2 G3 G3

seqtrhncacbetgp3d
-y -y
1 d1 -x -x d
H d26 d26
p11 p1 p2 f1 -y
sp1
15N d23-d25 d23-d25
d23 d23 d
-2d0 +2d0
p22 p21
13
Ca d28 d28 d0 d0 d0 d0 d28 d28
p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14

13C´
d22
p14 p14 p14 p14 p14 p14 p14

GZ
G1 G1 G2 G2 G3 G3 G4 G4 G6 G6 G8 G8
G5 G7 G9
seqtrhncacbetgp2h3d
-y -y
1 d1 -x -x d
H d26 d26
p11 p1 p2 f1 -y
sp1
15N d4 d23-d25 d23-d25
d23 d23 d
-2d0 +2d0
p22 p21
13 d27
Ca d28 d28 d0 d0 d27 -2d0 d28 d28
p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14

13C´
d22
p14 p14 p14 p14 p14 p14 p14

2
H GARP
pl17
GZ
G1 G1 G2 G2 G4 G4 G6 G6
G3 G5 G7

BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
3D Intra-HNCACB

3D intra-HNCACB experiment
· 3D Intra-HNCACB using PEP (hncacbigp3d | HNCA CBIG P3D )

o with 2 H-decoupling (hncacbigp2h3d | HNCA CBI GP2H3D )
· 3D Intra-HNCACB using WATERGATE (hncacbigpwg3d | HN CACBI GP W G3D )
o with 2 H-decoupling (hncacbigpwg2h3d | HNCA CBIG PW G 2H3 D)
· 3D Intra-HNCACB using TROSY (trhncacbigp3d | T RHNCA CBIG P3D )
o with 2 H-decoupling (trhncacbigp2h3d | T RHNCA CBI GP 2H3D)
o With gradient echo-antiecho (trhncacbietgp3d | TRHNCA CBI ETG P3D )
o With gradient echo-antiecho and with 2 H-decoupling (trhncacbietgp2h3d |
T RHNCA CBI ETG P2H3D )
Also see:
3D SOFAST/BEST intra-HNCACB experiment
3D BEST-intraHNCACB (b_hncacbigp3d | B_HNCACBIGP3D)
3D BEST-intraHNCACB using TROSY (b_trhncacbigp3d)
3D HNCACB and sequential-HNCACB experiments
D.Nietlispach, Y. Ito & E.D. Laue, J. Am. Chem. Soc. 124, 11199-11207 (2002)
iHNCACB
H C H H C H
N C C N C C
O O
H H H H
intra-HNCACB
ppm
20
30
Cali 40
50
N
60
HN
70
10 9 8 7 ppm

1 2 3 4 5 6 7
NH N CO CA CA CA N NH
CB t2 t3
t1
hncacbigp3d
y y
y -y
Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19
Y
sp1
15N d23 d23 d27-d10 d27+d10
GARP
p13 p14 pl16
p22 p21
sp8 sp7
13C´
d25 d22 d22
p14 p13 p14 p14 f p8 p13
sp7 sp2 sp3 sp7 1 sp13 sp4
13 d0 d0
Ca d28 d28 d28 d28
p14 p14 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p13
GZ
G1 G3
G2
d26=1/4J(NH)=2.3m
d21=1/2J(NH)=5.5m
d23=1/4J(NCA)=26m
d22=1/4J(CACO)=4.2m
d27=1/4J(NCA)&1/4J(NCO)=15.8m
d25=1/4J(NCO)=16.5m
d28: 1/(8J(CaCb)) =3.6m (7.2m if ZGOPTNS=-DLABEL_CB)
hncacbigp2h3d
y y
y -y y -y Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19 Y
sp1
15N d23 d23 d4 d27-d10 d27+d10
GARP
p13 p14 pl16
p22 p21
sp8 sp7
13C´
d25 d22 d22
p14 p13 p14 p14 f p8 p13
sp7 sp2 sp3 sp7 1 sp13 sp4
13 d27 d28
Ca d28 d28 d0 d27
-d0
d28
p14 p14 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p13
2
H GARP
pl17
GZ
G1 G3
G2

hncacbigpwg3d
y
y -y
-x -x -x
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d Frec
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19 d26 d26
sp1
15N d23 d23 d d27-d10 d27+d10
GARP
p13 p14 pl16
p22 p21
sp8 sp7
13C´
d25 d22 d22
p14 p13 p14 p14 p8 p13
sp7 sp2 sp3
f1 sp7 sp13 sp4
13 d0 d0 d28 d28
Ca d28 d28
p14 p14 p14 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p13
p13
sp2
GZ
G1 G2 G3 G4 G4
hncacbigpwg2h3d
y
y y y -y
-x -x -x Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19 d26 d26
sp1
15N d23 d23 d4 d27-d10 d27+d10
GARP
p13 p14 pl16
p22 p21
sp8 sp7
13C´
d25 d22 d22
p14 p13 p14 p14 p8 p13
sp7 sp2 sp3
f1 sp7 sp13 sp4
13 d27 d28 d28 d
Ca d28 d28 d0 d27
-d0
p14 p14 p14 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p13
p13
sp2
2
H GARP
pl17
GZ
G1 G2 G3 G4 G4

trhncacbietgp3d
y y y
y -x -y -y Frec
1 d1 d26 d26 d26 d26 d
H
p1 p2 y y y Y
15N d23 d23 d27-d25 d27-d25

-d10 +d10 d d26 d26
p13 p14
p22 p21
sp8 sp7
13C´
d24 d22 d22
p14 p13 p14 f1 p14 p8 p13
13
Ca d28 d28 d0 d0 d28 d28
p14 p14 p14 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p13
p13
sp2
GZ
G5
G7
trhncacbietgp2h3d
y y y
y -x -y -y
1 Frec
H d1 d26 d26 d26 d26 d
p1 p2 y y y Y
15N d23 d23 d4 d27-d25 d27-d25

-d10 d d26 d26
+d10
p13 p14
p22 p21
sp8 sp7
13C´
d24 d22 d22
p14 p13 p14 f1 p14 p8 p13
13 d29
Ca d28 d28 d0 d29
-d0
d28 d28
p14 p14 p14 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p13
p13
2 sp2
H GARP
pl17
GZ
G5
G7

trhncacbigp3d
y y -y
d26 d26 -x -x Frec
1
H d1 d26 d26
p1 -x -y p2 Y
15N d23 d23 d27-d10 d27+d10 d26 d26
p13 p14
p22 p21
sp8 sp7
13C´
d24 d22 d22
p14 p13 p14 f1 p14 p8 p13
13
Ca d28 d28 d0 d0 d28 d28
p14 p14 p14 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p13
p13
sp2
GZ
G1G1 G2 G2 G3 G3
trhncacbigp2h3d
y y -y
d26 d26 -x -x Frec
1
H d1 d26 d26
p1 -x -y p2 Y
15N d23 d23 d27-d10 d27+d10
d4 d26 d26
p13 p14
p22 p21
sp8 sp7
13C´
d24 d22 d22
p14 p13 p14 p13
f1 p14 p8
sp4
13 d25
Ca d28 d28 d0 d25
-d0
d28 d28
p14 p14 p14 p14 p13 p13 p14 p13 p13

p13 p14
sp2 sp3
2
H GARP
pl17
GZ
G1G1 G2 G2 G3 G3

BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
3D CCANH

3D CCANH experiment
· 3D CCANH using PEP (ccanhgp3d | CCA NHG P3D )

· 3D CCANH using PEP with 2 H-decoupling (ccanhgp2h3d | CCA NHG P2H3D )
· 3D CCANH using PEP and 1H-NOE (ccanhgp3d.2 | CCA NHGP 3D.2 )
Also see:
CCA(CO)NH and 3D CC(CO)NH experiments
3D & 4D HCCCONH Experiments
S. Grzesiek & A. Bax, J. Biomol. NMR 3, 185-204 (1993)
1
JCCA + 1JCAN + 1JNH
1
CCANH
JCCA + 2JCAN + 1JNH
H C H
H C H H C H
N C C N C C
O O
H H H H
1 2 3
CA CA N NH
CB t2 t3
t1
Cali
N
HN

ccanhgp3d
y
-x y -y
pl19 Frec
1
d25d26 d26 d26 d26 d d
p2 Y
15N d21-d10 d21+d10

GARP
p22 p21 pl16
13C´
f1 p14 p14 p14

sp5 sp5 sp3
13
Cali d1 d0 d22 d22-d0 d27 d27
p13 p14 p13 p14 p13 p14 p14

GZ
G1 G2 G3
d21=1/4J(NCO)=12.4m
d22=1/4J(CC)=3.6m
d25=1/2J(NH)=5.5m
d26=1/4J(NH)=2.3m
d27=1/4J(CACO)=11m
ccanhgp2h3d
y
y -y
pl19 Frec
1 d4 d25d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2
p2 Y
15N d21-d10 d21+d10

GARP
p22 p21 pl16
13C´
f1 p14 p14 p14

sp5 sp5 sp3
13
Cali d1 d0 d22 d22-d0 d27 d27 d
p13 p14 p13 p14 p13 p14 p14

2
H GARP
pl17
GZ
G1 G2 G3

1 2 3 4
HA CA CA N NH
HB CB t2 t3
t1
ccanhgp3d.2
y
-x y -y
pl19 Frec
1 d25d26 d26 d26 d26 d d
d1 p2 Y
15N d21-d10 d21+d10

GARP
p22 p21 pl16
13C´
f1 p14 p14 p14

sp5 sp5 sp3
13 d22
Cali d0 d22-d0 d27 d27
p13 p14 p13 p14 p13 p14 p14

GZ
G1 G2 G3

BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
3D CCA(CO)NH
3D CC(CO)NH

CCA(CO)NH and CC(CO)NH Experiments
3D CCA(CO)NH experiment
· 3D CCA(CO)NH using PEP (ccaconhgp3d | CCA CONHGP 3D )

· 3D CCA(CO)NH using PEP with 2 H-decoupling (ccaconhgp2h3d | CCA CONHGP 2H3D)
· 3D CCA(CO)NH using PEP and 1 H-NOE (ccaconhgp3d.2 | CCA CONHG P3D .2 )
3D CC(CO)NH e xperiment
· 3D CC(CO)NH using PEP (ccconhgp3d | CCCON HGP3D )

· 3D CC(CO)NH using PEP with 2H-decoupling (ccconhgp2h3d | CCCON HGP 2H3D )
Also see:
3D CBCACONH, 3D CCANH, 3D (H)CC(CO)NH and H(CCCO)NH experiments
References:
S. Grzesiek & A. Bax, J. Biomol. NMR 3, 185-204 (1993)
1
H C H
H C H H C H
N C C N C C
O O
H H H H
d21=1/4J(NCO)=12.4m
d22=1/4J(CC)=3.6m
d23=1/4J(CBCA)=3.6m
Cali d24=1/2J(CBCA)=4.4m
d25=1/2J(NH)=5.5m
d26=1/4J(NH)=2.3m
d27=1/4J(CACO)=12.4m
N
HN

1 2 3 4
CA CA CO N NH
CB t2 t3
t1
ccaconhgp3d
p1 y
-x y -y
Frec
1 d25d26 d26 d26 d26 d d
p2 pl19 Y
15N d21-d10 d21+d10

GARP
p22 p14 p21 pl16
sp5
13C´
d27 d27
f1 p14 p14 p14 p13 p14 p13 p14

13 d1 d0
Cali d22 d22-d0 d23 d23 d24
p13 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14

GZ
G1 G2 G3
ccaconhgp2h3d
y
y -y
Frec
1 d4 d25d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2
p2 Y
15N d21-d10 d21+d10

GARP
p22 p14 p21 pl16
sp5
13C´ d27
d27
f1 p14 p14 p14 p13 p14 p13 p14

13 d1 d0 d22 d22-d0 d23 d23 d d24
Cali
p13 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14
2
H GARP
pl17
GZ
G1 G2 G3

1 2 3 4 5
HA CA CA CO N NH
HB CB t2 t3
t1
ccaconhgp3d.2
p1 y
y -y y -y
pl19 Frec
1 d d25d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2 DIPSI-2
d1 Y
15N d21-d10 d21+d10

GARP
p22 p14 p21 pl16
sp5
13C´ d27 d27
f1 p14 p14 p14 p13 p14 p13 p14

13 d0 d22 d22-d0 d23 d23 d24
Cali
p13 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14
GZ
G1 G2 G3

S 1JCC + 1JCON + 1JNH CC(CO)NH
H C H
H C H H C H
N C C N C C
O O
H H H H
References:
1. G.T. Montelione, B.A. Lyons, S.D. Emerson & M. Tashiro, J. Am. Chem. Soc. 114, 10974-75 (1992)
2. S. Grzesiek, J. Anglister & A. Bax, J. Magn. Reson. 101 B, 114-9 (1993)
3. B.A. Lyons & G.T. Montelione, J. Magn. Reson. 101 B, 206-9 (1993)
4. T.M. Logan, E.T. Olejniczak, R.X. Xu & S.W. Fesik, J. Biomol. NMR 3, 225-31 (1993)
5. R.T. Clowes, W. Boucher, C.H. Hardman, P.J. Domaille & E.D. Laue, J. Biomol. NMR 3, 349-354 (1993)
6. T. Carlomagno, M. Maurer, M. Sattler, M.G. Schwendinger, S.J. Glaser & C. Griesinger,
J. Biomol. NMR 8, 161-170 (1996)
1 2 3 4
CA CA CO N NH
CB t2 t3
CG
t1
ccconhgp3d
p1 y
-x y -y
pl19 Frec
1 d25d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2 y DIPSI-2
p2 f1 Y
15N d d23-d10 d23+d10

GARP
p22 p21 pl16
13C´
d23 d23
f2 p14 p14 p14 p14 p13 p14 p13 p14

13 d15
Cali d1 d0 d0 e d21 d21 d22
DIPSI-2
p13 p14 p9 p14 p13 p14 p14 p14 p14
sp2 sp3 pl15 sp3 sp8 sp7 sp7 sp7 sp7
GZ
G1 G2 G3

ccconhgp2h3d
p1 y
pl19
-x y -y
Frec
1 d25d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2 y DIPSI-2
p2 f1 Y
15N d d23-d10 d23+d10

GARP
p22 p21 pl16
13C´ d23 d23
y p14 p14 p14 p14 p13 p14 p13 p14

d15
13 d4 d0 d21 d21
Cali d0 d4
DIPSI-2
d22
p13 p14 p9 p14 p13 p14 p14 p14 p14

sp2 sp3 pl15 sp3 sp8 sp7 sp7 sp7 sp7
2
H GARP GARP
pl17
GZ
G1 G2 G3
1 2 3 4 5
d15:TOCSY mixing time [12 msec]

Variable Cali evolution period consisting of: d21=1/4J(CACO)=3.6m
d(CAli) evolution and J(CAli-CO) decoupling d22=1/2J(CACO)=4.4m
d23=1/4J(NCO)=12.4m
d(CAli) evolution and J(CAli-N) decoupling
1 d(CAli) evolution and J(CAli-2H) decoupling
d25=1/2J(NH)=5.5m
d26=1/4J(NH)=2.3m
d(CAli) evolution and J(CAli-H) defocusing d4=1/4J(CH)=1.7m
d(CAli) evolution and J(CAli-Cali) evolution
2 Cali-CO INEPT transfer
CO-N INEPT transfer

3 J(CO-H) decoupling
J(CO-H) refocusing
Concatenated Constant-time 15N evolution period consisting of:

d(N) evolution and J(N-H) evolution
4 d(N) evolution and J(N-CO) refocusing
d(N) evolution and J(N-Cali) decoupling
5 1H-15N TROSY transfer consisting of two retro-INEPT like blocks

BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
HCC(CO)NH EXPERIMENTS

HCC(CO)NH experiments
3D (H)CC(CO)NH Experiment
· 3D (H)CC(CO)NH using PEP ( hccconhgp3d3 | HCCCON HG P3D 3 )

· 3D (H)CC(CO)NH using WATERGATE ( hccconhgpwg3d3 | HCCCONHGP W G3D 3 )
· 3D (H)CC(CO)NH using TROSY (trhccconhgp3d3 | T RHCCCONHG P3D 3 )
o With gradient echo-antiecho (trhccconhetgp3d3 | T RHCCCONHE TGP 3D 3 )
o With additional gradient (trhccconhgp3d3.2 | TRHCCC ONHGP 3D3.2 )
o With additional gradient and with gradient echo-antiecho (trhccconhetgp3d3.2 |
TR HCCCONHET GP 3D3.2 )
3D H(CC)(CO)NH Experiment
· 3D H(CC)(CO)NH using PEP (hccconhgp3d2 | HCCCO NHGP 3D2 )

o with 1 H-13 C CP transfer (hccconhgp3d1 | HCCCON HGP3D 1 )
· 3D H(CC)(CO)NH using WATERGATE (hccconhgpwg3d2 | HCCCONHG PW G 3D 2 )
· 3D H(CC)(CO)NH using TROSY (trhccconhgp3d2 | TR HCCCONHGP 3D 2 )
o With gradient echo-antiecho (trhccconhetgp3d2 | T RHCCCONHE TGP 3D 2 )
4D HCC(CO)NH Experiment
· 4D HCC(CO)NH using WATERGATE (hccconhgpwg4d)
Also see:
3D HBHA(CO)NH experiment
3D CC(CO)NH & CCA(CO)NH experiments
3D CBCA(CO)NH experiment
References:
1. G.T. Montelione, B.A. Lyons, S.D. Emerson & M. Tashiro, J. Am. Chem. Soc. 114, 10974-75 (1992)
2. S. Grzesiek, J. Anglister & A. Bax, J. Magn. Reson. 101 B, 114-9 (1993)
3. B.A. Lyons & G.T. Montelione, J. Magn. Reson. 101 B, 206-9 (1993)
4. T.M. Logan, E.T. Olejniczak, R.X. Xu & S.W. Fesik,
J. Biomol. NMR 3, 225-31 (1993)
5. R.T. Clowes, W. Boucher, C.H. Hardman, P.J. Domaille & E.D. Laue,
J. Biomol. NMR 3, 349-354 (1993)
6. T. Carlomagno, M. Maurer, M. Sattler, M.G. Schwendinger, S.J. Glaser
& C. Griesinger, J. Biomol. NMR 8, 161-170 (1996)

1
JCH + S 1JCC + 1JCON + 1JNH (H)CC(CO)NH
H C H
H C H H C H
N C C N C C
O O
H H H H
1 2 3 4 5
HA CA CA CO N NH
HB CB t2 t3
HG CG
t1
hccconhgp3d3
y y
-x y -y
Frec
1 d1 d4 d4 d25d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2 y DIPSI-2
p1 p2 pl19 f1 Y
15N d d23-d10 d23+d10

GARP
p22 pl16
13C´ d23 d23
p14 p14 p14 p14 p13 p14 p13 p14

13 d15
Cali d0 d3 d0 d3
DIPSI-2
d21 d21 d22
p14 p14 p13 p9 p24 p13 p14 p14 p14
p13 p13
sp3 sp3 sp8 pl15 sp9 sp8 sp7 sp7 sp7
sp2 sp2
GZ
G1 G2 G3 G4
50:-30:80:8.1
hccconhgpwg3d3
y
-x y -y
-x -x -x Frec
1 d1 d4 d4 d25
H DIPSI-2 y DIPSI-2
p1 p2 pl19 f1
d26 d26
15N d d23-d10 d23+d10 d

GARP
p22 p14 p21
sp5
13C´ d23 d23
p14 p14 p14 p13 p14 p13 p14

13 d15
Cali d0 d3 d0 d3
DIPSI-2
d21 d21 d22
p14 p14 p13 p9 p24 p13 p14 p14 p14

p13 p13
sp2 sp2
GZ
G2 G3 G4 G4
G1
50:40:60:30

d3=1/6J(CH)=1.1m
d4=1/4J(CH)=1.7m
d21=1/2J(CACO)=3.6m
d22=1/2J(CACO)=4.4m Cali
d23=1/4J(NCO)=12.4m
d25=1/2J(NH)=5.5m
d26=1/4J(NH)=2.3m
N
HN
trhccconhgp3d3
y -y
-x d26 d26
d1 d4 d4 Frec
1 d26 d26
H DIPSI-2 y
p1 p2 pl19 f1 p11 -x -x
sp1 Y
d23
15N d d10 d23
-d10
p22
13C´ d23 d23
p14 p14 p14 p14 p13 p14 p13 p14

13 d15
Cali d d0 d3 d0 d3 d21 d21 d22
DIPSI-2
p14 p14 p13 p9 p24 p13 p14 p14 p14
p13 p13
sp2 sp2
GZ
G1 G2 G3 G3 G4 G4
50:-30:18:44
trhccconhgp3d3.2
y -y
-x d26 d26
d1 d4 d4 Frec
1 d26 d26
H DIPSI-2 y
p1 p2 pl19 f1 p11 -x -x
sp1 Y
d23
15N d d10 d23
-d10
p22
13C´ d23 d23
p14 p14 p14 p14 p13 p14 p13 p14

13 d15
Cali d d0 d3 d0 d3 d
DIPSI-2
d21 d21 d22
p14 p14 p13 p9 p24 p13 p14 p14 p14
p13 p13
sp2 sp2
GZ
G1 G5 G2 G3 G3 G4 G4
50:-30:18:44:-80

trhccconhetgp3d3
y -y y y
-x
-x d26 d26
d4 d4 Frec
1 d1 d26 d26 d
H DIPSI-2 y
p1 p2 pl19 f1 p11 -y -y
y Y
sp1
15N d d23-d25 d23-d25 d

-d10 +d10
p22 y -y
13C´ d23 d23
p14 p14 p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14

13 d15
Cali d d0 d3 d0 d3 d21 d21 d22
DIPSI-2
p14 p14 p13 p9 p24 p13 p14 p14 p14 p14
p13 p13
sp3 sp3 sp8 pl15 sp9 sp8 sp7 sp7 sp7 sp7
sp2 sp2
GZ
G1 G2 G4 G4 G6 G6
G3 G5 G7
50:70:-80:5:30:45:30.13
trhccconhetgp3d3.2
y -y y y
-x
-x d26 d26
d1 d4 d4 Frec
1 d26 d26 d
H DIPSI-2 y
p1 p2 pl19 f1 p11 -y -y
y Y
sp1
15N d d23-d25 d23-d25 d

-d10 +d10
p22 y -y
13C´ d23
d23
p14 p14 p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14

13 d15
Cali d d0 d3 d0 d3 d d21 d21 d22
DIPSI-2
p14 p13 p14 p13 p9 p24 p13 p14 p14 p14 p14
p13
sp3 sp2 sp3 sp8 pl15 sp9 sp8 sp7 sp7 sp7 sp7
sp2
GZ
G1 G8 G2 G4 G4 G6 G6
G3 G5 G7
50:70:-80:5:30:45:30.13:-50

1
JCH + S 1JCC + 1JCON + 1JNH H(CC)(CO)NH
H C H
H C H H C H
N C C N C C
O O
H H H H
1 2 3 4 5
HA CA CA CO N NH
HB CB t2 t3
HG CG
t1
hccconhgp3d1
y
-y -y y
e 6 ms Frec
1 d1 d0 d0 d25d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2 DIPSI-2 y DIPSI-2
p1 p2 p6 pl19 f1 Y
pl10
15N d d23+d10 d23-d10

GARP
p21 pl16
13C´ d23 d23
p14 p14 p13 p14 p13 p14

13 12 ms
Cali DIPSI-2 d21 d21 d22
p14 p9 p24 p13 p14 p14 p14
sp3 pl15 sp9 sp8 sp7 sp7 sp7
GZ
G1 G2 G3
30:80:8.1
d3=1/6J(CH)=1.1m
d4=1/4J(CH)=1.7m
d21=1/2J(CACO)=3.6m
Hali d22=1/2J(CACO)=4.4m
d23=1/4J(NCO)=12.4m
d25=1/2J(NH)=5.5m
d26=1/4J(NH)=2.3m
N
HN

hccconhgp3d2
y y
-x y -y
d1 d4 (k-1) d4- Frec
1 +d0 d0 kd0 d25d26 d26 d26 d26 d d
H cw DIPSI-2 y DIPSI-2
pl32 p1 p2 pl19 f1
Y
15N d d23-d10 d23+d10

GARP
p22 pl16
13C´ d23 d23
p14 p14 p13 p14 p13 p14

13 d15
Cali d d3 d3
DIPSI-2 d21 d21 d22
p14 p13 p14 p13 p9 p13 p24 p13 p14 p14 p14
GZ
G1 G2 G3 G4
50:-30:80:8.1
hccconhgpwg3d2
y
-x y -y
d1 d4 (k-1) d4- -x -x -x Frec
1 +d0 d0 kd0 d25
pl32 p1 p2 pl19 f1
d26 d26
15N d d23-d10 d23+d10 d

GARP
p22 pl16
13C´ d23 d23
p14 p14 p13 p14 p13 p14

d15
13 d
Cali d3 d3
DIPSI-2 d21 d21 d22
p14 p13 p14 p13 p9 p24 p13 p14 p14 p14
p13
sp3 sp2 sp3 sp8 pl15 sp9 sp8 sp7 sp7 sp7
sp2
GZ
G1 G2 G3 G4 G4
50:40:60:30
trhccconhgp3d2
y -y
d26 d26
1 d26 d26
H +d0 d0 kd0 DIPSI-2 y
p1 p2 pl19 f1 p11 -x -x
Y
sp1
15N d d10 d23 d23-d10
p22
13C´ d23 d23
p14 p14 p13 p14 p13 p14

13 d15
Cali d d3 d3
DIPSI-2 d21 d21 d22
p14 p13 p14 p13 p9 p13 p24 p13 p14 p14 p14
GZ
G1 G2 G3 G3 G4 G4
50:-30:18:44

trhccconhetgp3d2
y -y y y
-x d26 d26
1 d26 d26 d
p1 p2 pl19 f1 p11 y -y -y
Y
sp1
15N d d23-d25 d23-d25 d

-d10 +d10
p22 y -y
13C´ d23 d23
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14

13 d15
Cali d d3 d3
DIPSI-2 d21 d21 d22
p14 p13 p14 p13 p9 p13 p24 p13 p14 p14 p14 p14
sp3 sp2 sp3 sp8 pl15 sp2 sp9 sp8 sp7 sp7 sp7 sp7
GZ
G1 G2 G4 G4 G6 G6
G3 G5 G7
50:70:-80:5:30:45:30.13
1
JCH + S 1JCC + 1JCON + 1JNH HCC(CO)NH
H C H
H C H H C H
N C C N C C
O O
H H H H
hccconhgpwg4d
y
-x y -y
d1 d4+ (k-1) d4- -x -x -x Frec
1 d31 d31 kd31 d25
pl32 p1 p2 pl19 f1
d26 d26
d23- d23+
15N d d33 d33 d
GARP
p22 pl16
13C´ d23 d23
p14 p14 p14 p14 p13 p13 p14

p14
d15 sp3
13 d d32 d3 d32 d3
Cali DIPSI-2 d28 d28 d22
p14 p13 p14 p13 p9 p13 p14 p14 p14 p14 p14
p13 p24
sp2 sp9
GZ
G1 G2 G3 G4 G4

BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
3D HBHA(CO)NH

HBHACONH experiment
· 3D HBHA(CO)NH with PEP (hbhaconhgp3d | HBHA CONHG P3D )

· 3D HBHA(CO)NH using WATERGATE (hbhaconhgpwg3d | HBHACO NHGP WG 3D )
· 3D HBHA(CO)NH using TROSY (trhbhaconhgp3d | T RHBHA CONHG P3D )
· 3D HBHA(CO)NH using TROSY and gradient echo-antiecho (trhbhaconhetgp3d |
TR HBHACO NHET GP3D )
· 4D HBHACONH using WATERGATE (hbhaconhgpwg4d)
Also see:
3D HBHANH experiment
3D CBCA(CO)NH experiment
3D H(CC)(CO)NH experiment
1
HBHA(CO)NH
H C H H C H
N C C N C C
O O
H H H H
CBCA(CON)H HBHA(CON)H
ppm ppm
15 -0.5
20 0.0
25 0.5
1.0
30
1.5
35
2.0
40
Hali 45
2.5
3.0
50
3.5
55 4.0
60
N 65
4.5
5.0
HN 70 5.5
10 9 8 7 ppm 10 9 8 7 6 ppm

d4=1/4J(CH)=1.8m
d3=1/6J(CH)=2.2m
d21=1/4J(NCO)=12.4m
1 2 3 4 5
d22=1/4J(CACB)=3.6m
N NH d23=1/4J(CACO)=3.6m
HA CA CA CO
d24=1/2J(CACO)=4.4m
HB CB t2 t3 d25=1/2J(NH)=5.5m
t1 d26=1/4J(NH)=2.3m
d27=1/4J(NCO)=12.4m
hbhaconhgp3d
f1 y y
-y
d4 (k-1) d4- pl19 Frec
1 d1 d25d26 d26 d26 d26 d d
H +d0 d0 kd0 d3
DIPSI-2 y d DIPSI-2
p1 p2 Y
15N d21-d10 d21+d10

GARP
p14 p21 pl16
sp5
13
C´ d27 d27
p14 p13 p14 p13 p14

sp5 sp2 sp3 sp8 sp3
13
Cab d22 d22 d23 d23 d24
p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14
GZ
G1 G2 G3
hbhaconhgpwg3d
f1
y
y -y y -y
d4 (k-1) d4- -x -x -x Frec
1 d1 d3 d25
H +d0 d0 kd0 DIPSI-2 y d DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 pl19 f2 d26 d26
15N d d21-d10 d21+d10 d
GARP
p14 p21 pl16
sp5
13
C´ d27 d27
p14 p13 p14 p13 p14

sp5 sp2 sp3 sp8 sp3
13
Cab d22 d22 d23 d23 d24
p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14
GZ
G1 G2 G3 G4 G4

trhbhaconhgp3d
f1
y -y
y -y
d4 (k-1) d4- -y d26 d26 d26 d26 Frec
1 d1 d3 -x -x
H +d0 d0 kd0 DIPSI-2 d DIPSI-2
p1 p2 pl19 f -y
15N d21+d10 d21-d10
p21
13
C´ d27 d27
p14 p14 p13 p14 p13 p14

13
Cab d22 d22 d23 d23 d24
p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14

GZ
G1 G2 G2 G3 G3
trhbhaconhetgp3d
f1 y -y y
y -y d26 d26
1 d4 (k-1) d4- y -y Frec
H d1 +d0 d0 kd0 d3 DIPSI-2 d DIPSI-2
d26 d26 -y
d
p1 p2 pl19 f y -y
15N d21-d25 d21-d25
-d10 +d10 d
p21
13
C´ d27 d27
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14

13
Cab d22 d22 d23 d23 d24
p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14
sp3
G1 G3 G3 G5 G5
G2 G4 G6

1
JCH + S 1JCC + 1JCON + 1JNH HBHACONH
H C H
H C H H C H
N C C N C C
O O
H H H H
1 2 3 4 5
HA CA CA CO N NH
HB CB t2 t3 t4
t1
hbhaconhgpwg4d
y
-y y -y y -y
1 d1 d4+ (1-k) d4- -x -x -x Frec
H d31 *d31 K*d31 d3 DIPSI-2 y d DIPSI-2 DIPSI-2
d25
p1 p2 pl19
d26 d26
15N d23 d23
+d33 d
-d33 GARP
p14 p21 pl16
sp5
13C´ d27
d27 d
+d32 -d32
p14 p13 p13 p14
f1 p14
sp3
13 sp5 sp2 sp3 sp8
Cab d28 d28 d23 d23 d22
p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14 p14
GZ sp3 sp2 sp3 sp8 sp3 sp2 sp7 sp7 sp7 sp7 sp7
G1 G2 G3 G4 G4


BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
3D HBHANH

3D HBHANH experiment
· 3D HBHANH using PEP (hbhanhgp3d) | HBHAN HGP 3D)

· 3D HBHANH using WATERGATE (hbhanhgpwg3d) | HBHA NHG PW G3D )
· 3D HBHANH using TROSY (trhbhanhgp3d | TRHB HAN HGP3D )
· 3D HBHANH using TROSY and gradient echo-antiecho (trhbhanhetgp3d | TR HBHAN HETG P3D )
Also see:
3D HBHA(CO)NHexperiment
1
JCH + 1JCC + 1JCAN+ 1JNH
1
JCH + 1JCC + 2JCAN+ 1JNH HBHANH
H C H H C H Hali
N C C N C C
O O N
H H H H HN
HBHA(N)H
Positive peaks Negative Peaks

ppm ppm
0.0 0.0
0.5 0.5
1.0 1.0
1.5 1.5
2.0 2.0
2.5 2.5
3.0 3.0
3.5 3.5
4.0 4.0
4.5 4.5
10 9 8 7 6 ppm 10 9 8 7 6 ppm

d4=1/4J(CH)=1.8m
1 2 3 4
d3=1/6J(CH)=2.2m
HA CA CA N NH d21=1/4J(NCO)=12.4m
d22=1/4J(CACB)=3.6m
HB CB t2 t3 d25=1/2J(NH)=5.5m
t1 d26=1/4J(NH)=2.3m
d27=1/4J(NCO)=12.4m
hbhanhgp3d
f1 y
y
pl19 y -y
d4 (k-1) d4- Frec
1 d1 d3 d25d26 d26 d26 d26 d d
H +d0 d0 kd0 DIPSI-2 y DIPSI-2
p1 p2 Y
15N d21-d10 d21+d10

GARP
pl16
13
C´
p14 p14
sp5 sp5
13
Cab d22 d22 d27 d27 d
p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14

GZ
G1 G2 G3
hbhanhgpwg3d
f1
y
y -y
d4 (k-1) d4- -x -x -x Frec
1 d1
H +d0 d0 kd0 d3
DIPSI-2 y DIPSI-2
d25
p1 p2 pl19 f2 d26 d26

15N d21-d10 d21+d10 d
GARP
pl16
13
C´
p14 p14
13 sp5 sp5
Cab d22 d22 d27 d27 d
p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14

GZ
G2 G3 G4 G4

CBCA(N)H HBHA(N)H
ppm ppm
0.0
15
20 0.5
25 1.0
30
1.5
35
2.0
40
2.5
45
50 3.0
55 3.5
60
4.0
65
4.5
70
10 9 8 7 ppm 10 9 8 7 6 ppm
HBHA(CON)H HBHA(N)H
ppm ppm
0.0 0.0
0.5 0.5
1.0 1.0
1.5 1.5
2.0 2.0
2.5 2.5
3.0 3.0
3.5 3.5
4.0 4.0
4.5 4.5
10 9 8 7 6 ppm 10 9 8 7 6 ppm

trhbhanhgp3d
f1 -y
y
d4 (k-1) d4- d26 d26 d26 d26 Frec
1 d1 -x -x
H +d0 d0 kd0 d3
DIPSI-2 y
p1 p2 pl19
-y
15N d21+d10 d21-d10
13
C´
p14
13 sp5
Cab d22 d22 d27 d27 d
p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14

GZ
G1 G2 G2 G3 G3
trhbhanhetgp3d
f1 y -y
1 d4 (k-1) d4- -x -x d
d1 d3
p1 p2 pl19
-y
15N d21-d25 d21-d25

+d10 d
-d10
13
C´
p14 p14
sp5 sp5
13
Cab d22 d22 d27 d27 d
p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p14

GZ
G1 G3 G3 G5 G5
G2 G4 G6


BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
REDUCED-DIMENSIONALITY
(APSY) NMR
EXPERIMENTS

S. Hiller, F. Fiorito. K. Wuethrich & G. Wider, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102, 10876-10881 (2005).
F. Fiorito, S. Hiller, G. Wider & K. Wuethrich, J. Biomol. NMR 35, 27-37 (2006)
Reduced-Dimensionality (RD) /APSY NMR Experiments
· Reduced-Dimensionality (3,2)-HNCA (rd_hnca_32 | APSY_HNCA_32)

· Reduced-Dimensionality (3,2)-HNCACB (rd_hncacb_32 | APSY_HNCACB_32)
· Reduced-Dimensionality (3,2)-HNCOCACB (rd_hncocacb_32 | APSY_HNCOCACB_32)
· Reduced-Dimensionality (6,2)-HNCOCANH (rd_hncocanh_62 | APSY_HNCOCANH_62)
· Reduced-Dimensionality (3,2)-HNCO (rd_hnco_32 | APSY_HNCO_32)
· Reduced-Dimensionality (4,2)-HNCOCA (rd_hncoca_42 | APSY_HNCOCA_42)
See the original experiments
rd_hnco_32
y
y -y y -y
-x -x -x Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19
d26 d26
sp1
15N d23 d23 d23-d32 d23+d32
GARP
p22 p21 pl16
f1
13C´ d31 d31 d
p14 p13 p14 p13 p14

sp3 sp2 sp3 sp8 sp3
13
Ca
p14 p14 p14 p14
sp5 sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G5 G2 G3 G4 G4
rd_hnca_32
y
y -y y -y
-x -x -x
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d Frec
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19 f2 d26 d26
sp1
15N d23 d23 d23-d32 d23+d32
GARP
p22 p21 pl16
f1
13
Ca d d31 d31 d
p14 p13 p14 p13 p14

sp3 sp2 sp3 sp8 sp3
13C´
p14 p14 p14 p14

sp5 sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G5 G2 G3 G4 G4

rd_hncoca_42
y
y -y y -y
-x -x -x Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19 f2 d26 d26
sp1
15N d23 d23 d d23-d33 d23+d33 d
GARP
p21 p13 p14 pl16
p22
sp8 sp7
13C´
d31 d31 d22 d22 d22 d22
p14 p13 p14 p14 p13 p14 p13 p14
f1
13 d32 d32
Ca
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14
GZ
G1 G5 G2 G3 G4 G4
rd_hncacb_32
y
y -y y -y
-x -x -x Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19 d26 d26
sp1
15N d23 d23 d d23-d32 d23+d32 d
GARP
p22 p21 p14 pl16
sp5
13C´
p14 p14
y sp5 f1 f2 sp3
13 d28 d28 d31 d31 d28 d28
Cab d
p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p14
GZ
G1 G5 G2 G3 G4 G4

rd_hncocacb_32
y
y -y y -y
-x -x -x Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19 d26 d26
sp1
15N d23 d23 d d23-d32 d23+d32 d
GARP
p22 p21 p14 p13 pl16
sp7 sp2
13C´
d22 d22 d22 d22
p14 p13 p14 p13 p14 f1 p14 p13 p14
13 d28 d28
Cab d31 d31 d28 d28
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14
GZ
G1 G2 G3 G4 G4
rd_hncocanh_62
y
y -y
-x -x -x Frec
d26+ (1-k) d26- d d21
1 d1 d21
H d31 d31 d31 DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19 d26 d26
sp1
d23+ (1-k) d23- d23- (1-k) d23+
15N d35 d
d32 d32 k*d32 k*d35 d35 GARP
p22 p21 pl16
13C´ d22+(1-k) d22+

d d33 k*d33
d33
p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14
13 d22+ (1-k) d22+
Cab d34 d34 k*d34
d
p14 p14 p14 p14
p14 p13 p14 p13
sp5 sp5 sp5 sp3
sp5 sp2 sp3 sp8
GZ
G1 G5 G2 G3 G4 G4
A Decription of the usage of the APSY techmique

in TOPSPIN can be found in the APSY Manual
(see Help menu in Topspin)

BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
2D & 3D
BEST/SOFAST
NMR EXPERIMENTS

SOFAST/BEST NMR Experiments
2D SOFAST/BEST Experiments
· 2D Sofast-HMQC (sfhmqcf3gpph | SFHMQCF3GPPH)

· 2D Sofast-HMQC with inversion of water/aliphatic protons (hetsfhmqcf3gpph)
· 2D Sofast-HMQC with sensitivity improved (sfhmqcf3gpphiasi)
· 2D BEST-HSQC (b_hsqcetf3gpsi | B_HSQCETF3GPSI)
· 2D BEST-TROSY (b_trosyf3gpph)
· 2D BEST-TROSY with sensitivity improved (b_trosyetf3gpsi)
· 3D BEST-HNCO (b_hncogp3d | B_HNCOGP3D)

· 3D BEST-HNCO using TROSY (b_trhncogp3d)
· 3D BEST-intraHNCO (b_hncoigp3d | B_HNCOIGP3D
· 3D BEST-intraHNCO using TROSY (b_trhncoigp3d)
· 3D BEST-HNCA (b_hncagp3d | B_HNCAGP3D)
· 3D BEST-HNCA using TROSY (b_trhncagp3d)
· 3D BEST-intraHNCA (b_hncaigp3d | B_HNCAIGP3D)
· 3D BEST-intraHNCA using TROSY (b_trhncaigp3d)
· 3D BEST-HN(CO)CA (b_hncocagp3d | B_HNCOCAGP3D)
· 3D BEST-HN(CO)CA using TROSY (b_trhncocagp3d)
· 3D BEST-HN(CA)CO (b_hncacogp3d | B_HNCACOGP3D)
· 3D BEST-HN(CA)CO using TROSY (b_trhncacogp3d)
· 3D BEST-HNCACB (b_hncacbgp3d | B_HNCACBGP3D)
· 3D BEST-HNCACB using TROSY (b_trhncacbgp3d)
· 3D BEST-intraHNCACB (b_hncacbigp3d | B_HNCACBIGP3D)
· 3D BEST-intraHNCACB using TROSY (b_trhncacbigp3d)
· 3D BEST-HN(CO)CACB (b_hncocacbgp3d | B_HNCOCACBGP3D)
· 3D BEST-HN(CO)CACB using TROSY (b_trhncocacbgp3d)
· 4D BEST-HNCACO (b_hncacogp4d)
· 4D BEST-HNCOCA (b_hncocagp4d)
· 4D BEST-HNCOCACB (b_hncocacbgp4d)
See the original experiments

NH-selective shaped pulses for BEST/Sofast NMR Experiments:
p39: f1 channel - 120 degree shaped pulse for excitation

p39 sp23= Pc9_4_120.1000 (120o) (3.0ms at 600.13 Mhz)
sp23
(or Q5.1000 (90o) (2.0ms at 600.13 MHz) )
p40: f1 channel - 180 degree shaped pulse for refocussing

p40
sp24 sp24= Rsnob.1000 (1.0ms at 600.13 Mhz)
p41
sp25 sp25=sp27= Pc9_4_90.1000 (3.0ms at 600.13 Mhz)

p42 sp26= Reburp.1000 (2.0ms at 600.13 Mhz)
sp26

p43 sp28= Eburp2.1000 (1.92ms at 600.13 Mhz)
sp28
sp29= Eburp2tr.1000 (1.92ms at 600.13 Mhz)

p44 sp30= Bip720,50,20.1 (200us at 600.13 MHz)
sp30

BEST-NMR:
1. P. Schanda, H. v. Melckebeke & B. Brutscher, J. Am. Chem. Soc. 128, 9042-9043 (2006)
2. E. Lescop, P. Schanda & B. Brutscher, J. Magn. Reson. 187 163-169 (2007)
sfhmqcf3gpph
1 d1 Frec
H d21 d21
p39 p40
F1
sp23 sp24
15 d0 d0
N
GARP
pl26
13
C optional
p8
sp3
Gz
G2 G1 G1
hetsfhmqcf3gpph
1 Frec
H d1 d21 d21
p49 p39 p40

F1
sp32 sp23 sp24
15 d0
N d0
GARP
pl26
13
C optional
p8
sp3
Gz
G3 G1 G1

sfhmqcf3gpphiasi
p42 p42 p42

sp26 sp26 sp26 Frec
1 d1 d26 d26 d26 d26
H
p39 F1
sp23
15 d0 d0
N
13
C optional
p8
sp3
Gz
G2 G1 G1
b_hsqcetf3gpsi
p42 p44
sp26 y p43 p43 p43
sp30 Frec
sp28 sp29 sp28
1 d1 d26 d26 d26 d26 y d26 d26 d d
H d
p41 p41
sp25 sp27 F1 Y
15
N d0 d0 d d
GARP
pl16
13
C optional
p8
sp13
Gz
G3 G3 G4 G5 G5 G6 G6 G2
G1

b_trosyf3gpph
y -y
Y
1 d1 d26 d26 d26 d26 Frec
H d24 d24
p41 p42 p41 p43

p43
sp25 sp26 sp27F1 sp29
sp28
15
N d d0
Q
13
C optional
p8
sp13
Gz
G1 G1 G4 G2 G2 G3 G3
b_trosyetf3gpsi
-x y y y y
Y Frec
1 d1 d26 d26 d25 d25 d d26 d26 d
H
p41 p42 p41 p43
sp26 F1 y p43 y Q
sp25 sp27 sp28 sp29
15
N d d0 d0 d
13
C optional
p8
sp13
Gz
G1 G1 G2 G4 G4 G6 G6
G3 G5 G7

b_hncogp3d
p41
p41 sp27 p43
p42 p44
sp25 y p43 sp29 p43
sp26 sp30
sp28 y sp28
1 Frec
d1 d26 d26 d d
H d26 d26 d26 d26
Y
d23-
15N d d23 d23 d10 d23 d10 GARP
p22 p21
f1 Y pl16
13C´ d d0 d0 d
p14 p13 p14 p13 p14

sp3 sp2 sp3 sp8 sp3
13
Ca
p14 p14 p14
sp5 sp5 sp5
GZ
G3 G3 G4 G5 G6 G7 G7 G8 G8 G2
G1
b_trhncogp3d
y -y Y
1 Frec
H d1 d26 d26 d26 d26 d26 d26
p41 p42 p41 y p43 p43
f1 Y
sp25 sp26 sp27 sp28 YY
sp29
15N d d23 d23 d10 d23 d23-d10
p22 p21
13C´ d0 d0
d d
p14 p13 p14 p13 p14

sp3 sp2 sp3 sp8 sp3
13
Ca
p14 p14 p14
sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G1 G4 G5 G6 G2 G2 G3 G3

b_hncoigp3d
p41
sp27 p43
p41 p42 p44
y p43 sp29 p43
sp25 sp26 sp30
sp28 y sp28
1 d1 d26 Frec
d26 d d
H d26 d26 d26 d26
Y
d23- d25 d23-
15N d d23 d10 d23
d25 d10 GARP
p22 p21 p14 p13 Y pl16
sp7 sp2
13
Ca d d22 d22 d22 d22 d
p14 p13 p24 p13 p14 p24 p13 p14

sp3 sp2 sp9 sp8 f 1 sp7 sp9 sp8 sp3
13C´
d0 d0
p14 p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14

GZ
G3 G3 G4 G5 G6 G7 G7 G8 G8 G2
G1
b_trhncoigp3d
y -y Y
Frec
1 d1 d26 d26 d26 d26 d26 d26
H
p41 p42 p41 p44 p44 p43 p43
15N d23 d25 d23

d d23 +d10 d23 -d10
p22 p21 Y
13
Ca d d22 d22 d22 d22 d
p14 p13 p24 p14 p14 p13 p24 p14

sp2
f1 p13
sp8
13C´
d25 d0 d0
p14 p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14

G1 G1 G4 G5 G6 G2 G2 G3 G3

b_hncagp3d
p41
sp27 p43
p41 p42 p44
y p43 sp29 p43
sp25 sp26 sp30
sp28 y sp28
1 Frec
d1 d26 d26 d d
H d26 d26 d26 d26
Y
d23-
15N d d23 d23 d10 d23 d10 GARP
p22 p21
f1 Y pl16
13
Ca d d0 d0 d
p14 p13 p14 p13 p14

sp3 sp2 sp3 sp8 sp3
13C´
p14 p14 p14

sp5 sp5 sp5
GZ
G3 G3 G4 G5 G6 G7 G7 G8 G8 G2
G1
b_trhncagp3d
y -y Y
1 Frec
H d1 d26 d26 d26 d26 d26 d26
p41 p42 p41 p44 p44 p43 p43
y sp30 sp30 f1 Y
sp25 sp26 sp27 sp28 YY
sp29
15N d d23 d23 d10 d23 d23-d10
p22 p21
13
Ca d d0 d0 d
p14 p13 p14 p13 p14

sp3 sp2 sp3 sp8 sp3
13C´
p14 p14 p14

sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G1 G4 G5 G6 G2 G2 G3 G3

b_hncaigp3d
p41
sp27 p43
p41 p42 p44
y p43 sp29 p43
sp25 sp26 sp30
sp28 y sp28
1 d1 d26 Frec
d26 d d
H d26 d26 d26 d26
Y
d23- d25 d23-
15N d d23 d10 d23
d25 d10 GARP
p22 p21 Y pl16
f1
13
Ca d d0 d0 d d22 d22
p14 p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14

13C´
d22 d22
p14 p13 p14 p13 p14 p14 p13 p13
p14
sp5
GZ
G3 G3 G4 G5 G6 G7 G7 G8 G8 G2
G1
b_trhncaigp3d
y -y Y
Frec
1 d1 d26 d26 d26 d26 d26 d26
H
p41 p42 p41 p44 p44 p43 p43
15N d23 d25 d23

d d23 +d10 d23 -d10
p22 p21 Y
f1
13
Ca d0 d0
p14 p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14
sp3 sp3 sp3
y sp2 sp3 sp8 sp3 sp3 sp3
13C´
d25 d22 d22 d d d22 d22
p14 p13 p14 p14 p13

p14 p13 p14 p13 p14
sp4 sp5 sp4
GZ sp5 sp5 sp6 sp5 sp5 sp6 sp5
G1 G1 G4 G5 G6 G2 G2 G3 G3

b_hncacogp3d
p41
p41 sp27 p44 p43
p42 p43 p43
sp25 y sp30 sp29
sp26 sp28 y sp28
1 Frec
H d1 d26 d26 d26 d26 d26 d26 d d
Y
d23-
15N d d23 d23 d10 d23 d10 GARP
p22 p13 p14
p21
sp8
Y pl16
sp7
13
Ca d d22 d22 d22 d22 d
p14 p13 p14 p14 p13 p14 p13
f1 p14
13C´ d0 d0
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14

GZ
G3 G3 G4 G5 G6 G7 G7 G8 G8 G2
G1
b_trhncacogp3d
y -y
Y
Frec
1 d1 d26 d26 d26
H d26 d26 d26
p41 p42 p41 p44 p44 f1 p43 p43
sp25 sp26 sp27
y sp30 sp30 sp28 sp29
15N
d d23 d23 d10 d23 d23-d10
p22 p21 f1 p14 Y

y sp7
y
13
Ca d22 d22 d22 d22 d
p14 p13 p24 p13 p14 p13 p24 p13 p14
13C´ d0 d0
d
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14
GZ
G1 G1 G4 G5 G6 G2 G2 G3 G3

b_hncocagp3d
p41
p41 sp27 p44 p43
p42 p43 p43
sp25 y sp30 sp29
sp26 sp28 y sp28
1 Frec
H d1 d26 d26 d26 d26 d26 d26 d d
Y
d23-
15N d d23 d23 d10 d23 d10 GARP
p22 p13 p14
p21
sp8
Y pl16
sp7
13C´
d d22 d22 d22 d22 d
p14 p13 p14 p14 p13 p14 p13
f1 p14
13
Ca d0 d0
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14

GZ
G3 G3 G4 G5 G6 G7 G7 G8 G8 G2
G1
b_trhncocagp3d
y -y
Y
Frec
1 d1 d26 d26
H d26 d26 d26 d26
p41 p42 p41 p44 p44 f1 p43 p43
sp25 sp26 sp27
15N
d d23 d23 d10 d23 d23-d10
p22 p21 f1 p14 Y

y sp7
y
13C´
d22 d22 d22 d22 d
p14 p13 p14 p13 p14 p13 p24 p13 p14
13
Ca d d0 d0
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14
GZ
G1 G1 G4 G5 G6 G2 G2 G3 G3

b_hncacbgp3d
p41
p41 sp27 p44 p43
p42 p43 p43
sp25 y sp30 sp29
sp26 sp28 y sp28
1 Frec
H d1 d26 d26 d26 d26 d26 d26 d d
Y
d23-
15N d d23 d23 d10 d23 d10 GARP
p22 p13 p14
p21
sp8
Y pl16
sp3
13
Ca d d28 d28 d0 d0 d28 d28 d
p14 p13 p14 p13 p14 p13
f1 p14
13C´
p14 p14 p14

sp5 sp5 sp5
GZ
G3 G3 G4 G5 G6 G7 G7 G8 G8 G2
G1
b_trhncacbgp3d
y -y
Y
Frec
1 d1 d26 d26 d26
H d26 d26 d26
p41 p42 p41 p44 p44 f2 p43 p43
sp25 sp26 sp27
15N
d d23 d23 d10 d23 d23-d10
p22 p21 f1 p14 -y Y

sp3
13
Cab d d28 d28 d0 d0 d28 d28 d
p14 p13 p14 p13 p13 p14 p13 p14
13C´
p14 p14 p14

sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G1 G4 G5 G6 G2 G2 G3 G3

b_hncacbigp3d
p41
sp27 p43
p41 p42 p44
y p43 sp29 p43
sp25 sp26 sp30
sp28 y sp28
1 Frec
d1 d26 d26 d d
H d26 d26 d26 d26
Y
d23- d25 d23-
15N d d23 d10 d23
d25 d10 GARP
p22 p21 p14 Y pl16
f1 sp3
13
Ca d d28 d28 d0 d0 d d22 d22
p14 p14 p14 p13 p14 p13 p13 p14 p14 p14
13C´
d22 d22
p14 p13 p14 p13 p14 p14 p13 p13
p14
sp5
GZ
G3 G3 G4 G5 G6 G7 G7 G8 G8 G2
G1
b_trhncacbigp3d
y -y Y
Frec
1 d1 d26 d26 d26 d26 d26 d26
H
p41 p42 p41 p44 p44 f2 p43 p43
15N d23 d25 d23

d d23 +d10 d23 -d10
p22 p21 Y
f1
13
Ca d28 d28 d0 d0 d28 d28
p14 p14 p14 p13
y sp2 p14 p13 p14p13 p14 p13 p14 p14 p14
sp3 sp3 sp3 sp3 sp8 sp3sp2 sp3 sp8 sp3 sp3 sp3
13C´
d25 d22 d22 d d d22 d22
p14 p13 p14 p13 p14

p14 p13 p14 p14 p13
sp4 sp5 sp4
GZ sp5 sp5 sp6 sp5 sp5 sp6 sp5
G1 G1 G4 G5 G6 G2 G2 G3 G3

b_hncocacbgp3d
p41
sp27 p43
p41 p42 p44
y p43 sp29 p43
sp25 sp26 sp30
sp28 y sp28
1 Frec
d1 d26 d26 d d
H d26 d26 d26 d26
Y
d23-
15N d d23 d23 d10 d23 d10
GARP
p22 p21 p14 p13 p14 p13 Y pl16

f1 sp7 sp2 sp3 sp8
13C´
d d22 d22 d22 d22 d
p14 p13 p14 p13 p14 p14

13 d28 d28 d0 d0 d28 d28
Ca
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14
GZ
G3 G3 G4 G5 G6 G7 G7 G8 G8 G2
G1
b_trhncocacbgp3d
y -y
Y
1 d26 d26 Frec
d1
H d26 d26 d26 d26
p41 p42 p41 p44 p44 p43
sp26 y f2 p43
15N d23
d d23 d23 d10 d23 -d10
p22 p21 p14 y Y

y sp7
13C´
d22 d22 d22 d22 d
p13 p13
p14 p14
sp8
f1 p14 p13 p14 p13 p14
13
Cab d d28 d28 d0 d0 d28 d28
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14
GZ
G1 G1 G4 G5 G6 G2 G2 G3 G3


BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
AMINO-ACID TYPE_SELECTIVE
MUSIC EXPERIMENTS

General Description:
Amino-Acid Type-Selective Experiments are a set of triple-resonance NMR experiments

alternatives to the conventional experiments, designed to provide specific information
of particular amino-acids. Some of the main features:
1. Sequential and aa-type information is obtained.

2. Reduction of number of peaks and signal overlapping.
3. Unambiguous assignment for some aa.
3. NMR Pulse sequences are mainly based on the original CBCACONH and CBCANH experiments
A. CBCACONH-type experiments provide a single cross-peak from the sequential
inter-residue i+1 correlation due to CO is involved.
B. CBCANH-type experiments provide to different cross peaks, from intra- and
inter-residue connectivites by means of the similar 1J(NCA) and 2J(NCA) coupling pathways.
4. They can be recorded as a 2D 1H-15N or 3D HNCO- or HNCA-type maps (see ZGOPTNS).
5. Main keys are the initial CH2-, CH3- or NH2-selected transfer steps (see MUSIC element) and the use of
specific offset, selective pulses on specific regions and delays optimization.
References of Amino-Acid Type-Selective MUSIC Experiments:

1. P. Schmieder, M. Leidert, M. Kelly & H. Oschkinat, J. magn. Reson. 131, 199-202 (1998).
2. M. Schubert, M. Smalla, P. Schmieder & H. Oschkinat, J. Magn. Reson. 141, 34-43 (1999)
3. M. Schubert, L. Ball, H. Oschkinat & P. Schmieder, J. Biomol. NMR 17, 331-335 (2000)
4. 3. M. Schubert, H. Oschkinat & P. Schmieder, J. Biomol. NMR 20, 379-384 (2001)
5. M. Schubert, H. Oschkinat & P. Schmieder, J. Magn. Reson. 148, 61-72 (2001).
6. M. Schubert, H. Oschkinat & P. Schmieder, J. Magn. Reson. 153, 186-192 (2001)
7. M. Schubert, D. Labudde, D. Leitner, H. Oschkinat & P. Schmieder, J. Biomol. NMR 31, 115-127 (2005).
The MUSIC (Multiplicity Selective In-Phase Coherence Transfer) Element:
Phase Cycles for:

f g CH2 or NH2 selection
1 d2 d2 d2
H f 0º
g 45º,135º225º,315º
rec 0º,180º
X
Ch3 selection
GZ
f 0º
G1 G1 G1 g 30º,90º,150º,210º,270º,330º
rec 0º,180º
d2=1/2J=3.6ms(CH2 or Ch3) or 5.5ms(NH2)

AminoAcid-selective (MUSIC) Experiments
· 3D MUSIC Metionine (Met - M) with CH2 selection (music_cm_3d)

· 3D MUSIC - Metionine (Met - M) with CH2 selection (music_cm_3d_2)
· 3D MUSIC - Glutamic (Glu - E) or Aspartic (Asp - D) with CH2 selection (music_de_3d)

· 3D MUSIC - Glutamic (Glu - E) or Aspartic (Asp - D) with CH2 selection (music_de_3d_2)
· 3D MUSIC - PhenylAlanine (Phe - F)/Hystidine (His-H)/Tyrosine (Tyr-Y) or Triptophan (Trp

- W) with CH2 selection (music_fhyw_3d)
· 3D MUSIC - PhenylAlanine (Phe - F)/Hystidine (His-H)/Tyrosine (Tyr-Y) or Triptophan (Trp
- W) with CH2 selection (music_fhyw_3d_2)
· 3D MUSIC - Glycine (Gly - G) or Asparagine (Asn - N)/Glutamine (Gln - Q) with CH2

selection (music_gly_3d)
· 3D MUSIC - Glycine (Gly - G) or Asparagine (Asn - N)/Glutamine (Gln - Q) with CH2
selection (music_gly_3d_2)
· 3D MUSIC - Serine (Ser - S) with CH2 selection (music_ser_3d)

· 3D MUSIC - Serine (Ser - S) with CH2 selection (music_ser_3d_2)
· 3D MUSIC - Lysine (Lys - K) and/or Arginine (Arg- R) (music_kr_3d)

· 3D MUSIC - Lysine (Lys - K) and/or Arginine (Arg- R) (music_kr_3d_2)
________________________________________________________
· 3D MUSIC - Isoleucine (Ile - I) with CH3 selection (music_ile_3d)
· 3D MUSIC - Isoleucine (Ile - I) with CH3 selection (music_ile_3d_2)
· 3D MUSIC - Leucine (Leu - L)/Alanine (Ala-A) or Valine (Val - V)/Isoleucine (Ile-I)/Alanine

(Ala-A)with CH3 selection (music_lavia_3d)
· 3D MUSIC - Leucine (Leu - L)/Alanine (Ala-A) or Valine (Val - V)/Isoleucine (Ile-I)/Alanine
(Ala-A)with CH3 selection (music_lavia_3d_2)
· 3D MUSIC - Valine (Val - V)/Isoleucine (Ile - I) or Theonine (Thr - T)/Alanine (Ala - A)with
CH3 selection (music_tavi_3d)
· 3D MUSIC - Valine (Val - V)/Isoleucine (Ile - I) or Theonine (Thr - T)/Alanine (Ala - A)with
CH3 selection (music_tavi_3d_2)
________________________________________________________
· 3D MUSIC - Proline (Pro - P) (music_pro_1_3d)
· 3D MUSIC - Proline (Pro - P) (music_pro_1_3d.2)
· 3D MUSIC - Proline (Pro - P) (music_pro_2_3d)
· 3D MUSIC - Proline (Pro - P) (music_pro_2_3d.2)
________________________________________________________
· 3D MUSIC - Glutamine (Gln - Q) or Asparagine (Asn - N) with NH2 selection (music_qn_3d)
· 3D MUSIC - Glutamine (Gln - Q) or Asparagine (Asn - N) with NH2 selection
(music_qn_3d_2)
________________________________________________________
· 2D MUSIC - Triptophan (Trp - W)(music_trpe_2d)

MUSIC-Metionine: (CH2C)CA(CO)NH and (CH2CCA)CONH

Met Met+1 Met Met+1
O O R O O R
N CH C N C N CH C N C
H H
H CH 2 H H CH 2 H
CH 2 CH 2
S S
CH 3 CH 3
music_cm_3d
g
-y
pl19 Frec
d2 -x -x -x
1 d1 d2 d2 d21
H DIPSI-2 y
p1 p2 d26 d26
15N d23-d10 d23+d10 d

GARP
p14 p14 p13 p21 pl16
sp5 sp5 sp2
13C´ d22 d27- d27-
d22
+d0 d22 d10
p8 p8 p14 p13 p14
13 d28
Cab d28
-d2 d25 d25 d24 d24
p13 p8 p8 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14 p14

p13 sp7
GZ G1
G1 G1 G2 G3 G3
p14 p14 p13

sp5 sp5 sp2 ZGOPTNS:
d22 d27 d27 no option: 3D (CH2C)CA(CO)NH NH(Met+1)
p14 p13 LABEL CO: 3D (CH2CCA)CONH NH(Met+1)
sp3 sp8
d24 d22
d0 d24 -d0
p13 p14 p13 p14 p14
sp2 sp3 sp8 sp7 sp7
d2 : 1/(2J(CH) [3.5 msec]

d21: 1/(2J(NH) [5.5 msec]
d22: 1/(4J(CaCO) [4.5 msec]
d23: 1/(4J(NCO) [12.4 msec]
d24: n/(4J(CC) [20 msec]
or 1/(4J(CC) (LABEL_CO) [5.2 msec]
d25: 1/(4J(CC) [6.0 msec]
d26: 1/(4J(NH) [2.3 msec]
d27: 1/(4J(NCO) [12.4 msec]
d28: 1/(4J(CC) [6.0 msec]
Possible breakthrough: Glu, Gly, Lys, Ser, Val

MUSIC-Metionine: (CH2C)CANH
Met Met+1
O O R
N CH C N C
H
H CH 2 H
CH 2
CH 3
music_cm_3d_2
g
pl19
-y
-x -x -x Frec
1 d1 d2 d2 d2 d21
H DIPSI-2 y
p1 p2 d26 d26
15N d23-d10 d21+d10 d

GARP
p14 p14 p21 pl16
sp5 sp5
13C´
p8 p8
p14 p14
sp13 sp13
sp5 sp5
13 d28 d27
Cab d28
-d2 d25 d25 d0 d27 -d0
p13 p8 p8 p13 p14 p13 p14 p13 p14
GZ G1
G1 G1 G2 G3 G3
ZGOPTNS
no option: 3D (CH2C)CANH NH(Met) and NH(Met+1)
d2 : 1/(2J(CH)) [3.5 msec]

d21: 1/(2J(NH) [5.5 msec]
d23: 1/(4J(NCa) [12.4 msec]
d25: 1/(4J(CC) [6.0 msec]
d26: 1/(4J(NH) [2.3 msec]
d27: 1/(4J(CbCa) and 1/(4J(NCa) [8.2 msec]
d28: 1/(4J(CC) [6.0 msec]

MUSIC-Glu/Asp: (CH2COC)CA(CO)NH and (CH2COCCA)CONH
Glu Glu+1 Asp Asp+1
O O R O O R
H H
H CH 2 H H CH 2 H
CH 2
C O
Glu Glu+1 Asp Asp+1
C O
OH
O O R O O R
OH
H H
H CH 2 H H CH 2 H
CH 2
C O
C O
OH
OH
music_de_3d
ZGOPTNS: -DLABEL_CO
g
-y -y
pl19 -x -x -x Frec
1 d1 d2 d2 d21
H DIPSI-2 y DIPSI-2
p1 p2 d26 d26
15N d23-d10 d23+d10 d

GARP
p14 p13 p14 p14 p14
p14 p13 p13 p21 pl16
sp5 sp2 sp5 sp5 sp5
sp5 sp2 sp8
13C´ d22 d23 d23
d27 d27 d d22 +d0 -d22 -d0
p14 p14
p14 p13 p14
sp5 sp3
sp3 sp8 sp3
13
Cab d2 d22 d22 d25 d25 d24 d24
p13 p14 p13 p14 p14 p13 p14 p14 p14 p14 p14
p13 p13 p13
sp2 sp8 sp2
GZ
G1 G1 G1 G4 G2 G3 G3
p24
sp9
ZGOPTNS: -DLABEL_GLU
p14 p14
sp5 sp5
p13
sp2
ZGOPTNS:
d23
no option: 3D (CH2C)CA(CO)NH NH(Asp+1)
d22 d23
LABEL_GLU: 3D (CH2C)CA(CO)NH NH(Glu+1)
p14
d24
sp3 LABEL CO: 3D (CH2CCA)CONH
d24 d0 d22
-d0
p13 p14 p13 p14 p14

sp2 sp3 sp2 sp7 sp7
d2 : 1/(2J(CH) = [4.0 msec] d24: n/(4J(CC) = [20 msec]

d21: 1/(2J(NH) = [5.5 msec] or 1/(4J(CC) (LABEL_GLU) = [9.0 msec]
d22: 1/(4J(CaCO) = [4.5 msec] or 1/(4J(CC) (LABEL_CO) = [4.5 msec]
d23: 1/(4J(NCO) = [12.4 msec] d25: 1/(4J(CC) = [4.5 msec]
d26: 1/(4J(NH) = [2.3 msec]
d27: 1/(4J(NCO(s)) = [16.0 msec]

MUSIC-Glu/Asp: (CH2COC)CANH
Glu Glu+1 Asp Asp+1
O O R O O R
H H
H CH 2 H H CH 2 H
CH 2 C O
C O OH
OH
g
-y
pl19 -y music_de_3d_2
-x -x -x Frec
1 d1 d2 d2 d21
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2
d26 d26
15N d23-d10 d23+d10 d
GARP
p14 p13 p14 p14 p14 p14 p21 pl16
13C´
d27 d27
p14 p14
p14 p13 p14
sp5 sp5
sp3 sp8 sp5
13 d24
Cab d2 d d22 d22 d25 d25 d0 d24 -d0
p13 p14 p13 p13 p14 p14 p13 p14 p13 p14
p13 sp2
sp8
GZ
G1 G1 G1 G4 G2 G3 G3
p24
ZGOPTNS
sp9
no option: 3D (CH2COC)CANH NH(Asp+1) and NH(Asp)
ZGOPTNS: -DLABEL_GLU
LABEL_GLU: 3D (CH2COC)CANH NH(Glu+1) and NH(Glu)
;d2 : 1/(2J(CH)) [4.0 msec]

;d21: 1/(2J(NH) [5.5 msec]
;d22: 1/(4J(COCa) [4.5 msec]
;d23: 1/(4J(NCa) [12.4 msec]
;d24: 1/(4J(CC) [9.0 msec]
;d25: 1/(4J(CC) [4.5 msec]
;d26: 1/(4J(NH) [2.3 msec]
;d27: 1/(4J(NCO(s)) [16.0 msec]

MUSIC-Aromatic: (CH2)CA(CO)NH and (CH2CA)CONH

aa aa+1 aa aa+1
O H O R O H O R
N C C N C N C C N C
H H
H CH 2 H H CH 2 H
Ar Ar
R R
R R
N
HN
NH
OH
Trp
His Phe Tyr
music_fhyw_3d
ZGOPTNS: -DLABEL_CO
g
-y
pl19 -x -x -x Frec
1 d1 d2 d2 d21
H DIPSI-2
p1 p2 d26 d26
15N d23-d10 d23+d10 d

GARP
p14 p14 p13 p13 p21 pl16
sp5 sp5 sp2 sp8
13C´ d22 d27 d27
d22 +d0 -d22 -d0
p14 p14
sp3 sp3
13 d25- d28
Cab d2 d2/2 -d25
d28 d24 d24
p13 p14 p14 p13 p14 p14 p14 p14

p13
Carom.
p23 p23 p23 p23
sp10 sp12 sp10 sp12
GZ
G1 G1 G2 G3 G3
G1
p14 p14 p13

sp5 sp5 sp2
ZGOPTNS:
d22 d27 d27 no option: 3D (CH2C)CA(CO)NH NH((Phe,Tyr,Hys)+1)
p14 LABEL_TRP: 3D (CH2C)CA(CO)NH NH(Trp+1)
sp3
d0 d24
d24
-d0 d22 LABEL_CO: 3D (CH2CCA)CONH
p14 p13 p14 p14
p13
sp3 sp2 sp7 sp7
sp2
d2 : 1/(2J(CH)) [3.5 msec]

d25: 1/(4J(CC) [7.05 msec]
d21: 1/(2J(NH) [5.5 msec]
d26: 1/(4J(NH) [2.3 msec]
d22: 1/(4J(CaCO) [4.5 msec]
d27: 1/(4J(NCO) [11.4 msec]
d23: 1/(4J(NCO) [12.4 msec]
d28: 1/(4J(CC) [7.1 msec]
d24: n/(4J(CC) [20 msec]

MUSIC-Aromatic: (CH2)CANH
aa aa+1
O H O R
N C C N C
H
H CH 2 H
Ar
R R
R R
N
HN
NH
OH
His Phe Trp

Tyr
music_fhyw_3d_2
g
-y
pl19 -x -x -x Frec
1 d1 d2 d2 d21
H DIPSI-2
p1 p2 d26 d26
15N d23-d10 d23+d10 d

GARP
p14 p14 p14 p21 pl16
p14
sp5 sp5 sp5
sp5
13C´
p13
sp2
13 d25- d28 d27
Cab d2 d2/2 -d25 d28 d0 d27
-d0
p13 p14 p13 p14 p14
Carom.
p23 p23 p23 p23
sp10 sp12 sp10 sp12
GZ
G1 G1 G2 G3 G3
G1
ZGOPTNS:
no option: 3D (CH2C)CANH NH((Phe,Tyr,Hys)) and NH((Phe,Tyr,Hys)+1)
LABEL_TRP: 3D (CH2C)CANH NH(Trp) and NH(Trp+1)
)
d2 : 1/(2J(CH)) [3.5 msec]

d21: 1/(2J(NH) [5.5 msec]
d23: 1/(4J(NCa) [12.4 msec]
d25: 1/(4J(CC) [7.05 msec]
d26: 1/(4J(NH) [2.3 msec]
d28: 1/(4J(CC) [7.1 msec]

MUSIC-Arg/Lys: (CH2C)CA(CO)NH and (CH2CCA)CONH
Arg Arg+1 Arg Arg+1

Lys Lys+1 Lys Lys+1
O H O R O H O R
N C C N C N C C N C
H H
H CH 2 H H CH 2 H
CH 2 CH 2
CH 2 CH 2
R R
music_kr_3d
ZGOPTNS: -DLABEL_CO
-y
pl19 -x -x -x Frec
1 d1 d2 d2 d21
H d3 DIPSI-2
p1 p2 d26 d26
15N d23-d10 d23+d10 d

GARP
p14 p13 p21 pl16
p14 p13
sp5 sp2
sp5 sp8
13C´ d23 d23
d22 d22
+d0 -d22 -d0
p35 p14 p14
sp27 sp3 sp3
13
Cab d d28 d28 d25 d25 d25 d25 d25 d25 d24 d24
p34 p35 p14 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14
p35
sp24 sp25 sp3 sp3 sp8 sp3 sp2 sp3 sp8 sp3 sp2 sp7 sp7 sp7 sp7
sp26
GZ
G1 G2 G3 G3
ZGOPTNS: -DLABEL_LYS
p14 p14 p13

sp2
ZGOPTNS sp5 sp5
no options: 3D (HC)CA(CO)NH NH(Arg+1) d22 d23 d23
LABEL_LYS: 3D (HC)CA(CO)NH NH(Arg+1) and NH(Lys+1) p14

sp3
LABEL_CO: 3D (HCCA)CONH NH(Arg+1) and NH(Lys+1) d24
d24 d0 d22
-d0
p14 p13 p14 p14
sp3 sp2 sp7 sp7
d24: n/(4J(CC) [19.5m msec]

d3 : 1/(4J(CH)) [2.1 msec] or 1/(4J(CC) (LABEL_LYS) [8.8 msec]
d4 : 1/(4J(CH)) [2.0 msec] or 1/(4J(CC) (LABEL_CO) [4.5 msec]
d21: 1/(2J(NH) [5.5 msec] d25: 1/(4J(CC) [5.5 msec]
d22: 1/(4J(CaCO) [4.5 msec] d26: 1/(4J(NH) [2.3 msec]
d23: 1/(4J(NCO) [12.4 msec] d28: 1/(8J(CC) [3.5 msec]

MUSIC-Arg/Lys (CH2C)CANH
Arg Arg+1
Lys Lys+1
O H O R
N C C N C
H
H CH2 H
CH2
CH2
music_kr_3d_2
-y
pl19 -x -x -x Frec
1 d1 d2 d2 d21
H d3 DIPSI-2
p1 p2 d26 d26
15N d23-d10 d23+d10 d

GARP
p21 pl16
13C´
p35 p14 p14 p14

p14 sp5
sp27 sp5 sp5
sp5
13 d24
Cab d d28 d28 d25 d25 d25 d25 d25 d25 d0 d24
-d0
p34 p35 p14 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p13 p14
p35 p14
sp26 sp3
GZ
G1 G2 G3 G3
ZGOPTNS: -DLABEL_LYS
ZGOPTNS
no options: 3D (HC)CANH NH(Arg, Arg+1)
LABEL_LYS: 3D (HC)CANH NH(Arg, Arg+1) and NH(Lys, Lys+1)
d3 : 1/(4J(CH)) [2.1 msec]

d4 : 1/(4J(CH)) [2.0 msec]
d21: 1/(2J(NH) [5.5 msec]
d23: 1/(4J(NCa) [12.4 msec]
d25: 1/(4J(CC) [5.5 msec]
d26: 1/(4J(NH) [2.3 msec]
d28: 1/(8J(CC) [3.5 msec]

MUSIC-Glycine: CH2(CO)NH and (CH2)CONH
Gly Gly+1 Gly Gly+1
O H O R O H O R
N C C N C N C C N C
H H
H H H H H H
music_gly_3d
ZGOPTNS: -DLABEL_CO
g
-y
pl19 -x -x -x Frec
1 d1 d2 d2 d21
H DIPSI-2
p1 p2 d26 d26
15N d23-d10 d23+d10 d

GARP
p14 p14 p13 p13 p21 pl16
sp5 sp5 sp2 sp8
13C´ d22 d27 d27
+d0 -d22 -d0
p14 p14
sp3 sp3
13
Cab d2 d
p14 p13 p14 p14 p14 p14
p13
sp2
GZ
G1 G1 G1 G2 G3 G4 G4
p14
sp5 p13
sp2
ZGOPTNS
d27
d22 -d22 d27 no option: 3D (CH2)CA(CO)NH NH(Gly+1)
p14
sp3
LABEL_GLY: 3D (CH2)CA(CO)NH NH(Gly+1)
p14
d24- d24
d22 d0
sp3 LABEL_CO: 3D (CH2CA)CONH
d2-d0 -d22
p14 p14
sp7 sp7
G1
Gln Gln+1 Asn Asn+1
O O R O O R
H H
Also can be observed: H CH 2 H H CH 2 H
CH 2
C O
C O
NH 2
NH 2

Glycine
F1 [ppm]
d2 : 1/(2J(CH)) [3.5 msec]
105
d21: 1/(4J(NH) [2.9 msec]
or 1/(2J(NH) (LABEL_GLY) [5.9 msec]
110
d22: 1/(4J(CaCO) [4.4 msec]
115
d23: 1/(4J(NCO) [12.4 msec]
d24: 1/(4J(NCa) [13.8 msec]
120
d26: 1/(4J(NH) [2.3 msec]
d27: 1/(4J(NCO) [12.4 msec]
125
130
11 10 9 8 F2 [ppm]
MUSIC-Glycine: CH2NH
Gly Gly+1
O H O R
N C C N C
H
H H H
music_gly_3d_2
g
-y
pl19 -x -x -x Frec
1 d1 d2 d2 d21
H DIPSI-2
p1 p2 d26 d26
15N d23-d10 d23+d10 d

GARP
p14 p14 p21 pl16
sp5 sp5
13C´
p14 p14
sp3 p14
sp5 sp5
13 d27-
Cab d2-d0 d27 d0 d
p13 p13 p14

sp2 sp8 sp3
GZ
G1 G1 G1 G2 G3 G4 G4
ZGOPTNS
no option: 3D (CH2)CANH NH(Gly+1) and NH(Gly)
LABEL_GLY: 3D (CH2)CANH NH(Gly+1) and NH(Gly)

MUSIC-SER: (CH2)CA(CO)NH and (CH2CA)CONH
Ser Ser+1 Ser Ser+1
O H O R O H O R
N C C N C N C C N C
H H
H CH 2 H H CH 2 H
OH OH
music_ser_3d
ZGOPTNS: -DLABEL_CO
g
-y
pl19 -x -x -x Frec
1 d1 d2 d2 d21
H DIPSI-2
p1 p2 d26 d26
15N d23-d10 d23+d10 d

GARP
p14 p13 p21 pl16
p14 p13
sp5 sp2
sp5 sp8
13C´ d22 d27 d27
d22 +d0 -d22 -d0
p14 p14
sp3 sp3
13
Cab d2 d24 d24
p13 p24 p13 p24 p13 p14 p14 p14 p14

GZ
G1 G1 G1 G2 G3 G3
p14 p13
p14
sp5 sp2
sp5
ZGOPTNS
d22 d27 d27
no option: 3D (CH2C)CA(CO)NH NH(Ser+1)
p14
sp3 LABEL_CO: 3D (CH2CCA)CONH
d0 d24 d24
d22
-d0
p24 p13 p14 p14
sp9 sp2 sp7 sp7
d21: 1/(2J(NH) [5.5 msec]

d22: 1/(4J(CaCO) [4.5 msec]
d23: 1/(4J(NCO) [12.4 msec]
d24: n/(4J(CC) [17 msec]
d26: 1/(4J(NH) [2.3 msec]
d27: 1/(4J(NCO) [12.4 msec]

MUSIC-SER: (CH2)CANH
Ser Ser+1
d2 : 1/(2J(CH)) [3.5 msec]
O H O R d21: 1/(2J(NH) [5.5 msec]
d23: 1/(4J(NCa) [12.4 msec]
N C C N C
H d26: 1/(4J(NH) [2.3 msec]
H CH 2 H d27: 1/(4J(CbCa) and 1/(4J(NCa) [8.2 msec]
OH
music_ser_3d_2
g
-y
pl19 -x -x -x Frec
1 d1 d2 d2 d21
H DIPSI-2
p1 p2 d26 d26
15N d23-d10 d23+d10 d

GARP
p14 p14 p21 pl16
sp5 sp5
13C´
p14 p14
sp5 sp5
13 d27
Cab d2 d0 d27 -d0
p13 p24 p13 p24 p13 p14
GZ
G1 G1 G1 G2 G3 G3
ZGOPTNS
no options: 3D (CH2C)CANH NH(Ser+1) and NH(Ser)
F1 [ppm]
105
110
115
Serine
120
125
130
11 10 9 8 F2 [ppm]

MUSIC-Isoleucine: (CH3C)CA(CO)NH and (CH3CCA)CONH
Ile Ile+1 Ile Ile+1
O H O R O H O R
N C C N C N C C N C
H H
H HC H H HC H
CH 2 CH3 CH3
CH 2
H 3C H 3C
music_ile_3d
ZGOPTNS: -DLABEL_CO
g
-y
pl19 -x -x -x Frec
1 d1 d2 d2 d21
H DIPSI-2
p1 p2 d26 d26
15N d23-d10 d23+d10 d

GARP
p14 p13 p21 pl16
p14 p13
sp5 sp2
sp5 sp8
13C´ d22 d27 d27
d22 +d0 -d22 -d0
p34 p34 p24 p13
sp2 p14 p14
13
Cab d2 d17 d17 d28 d28 d25 d25 d24 d24
p13 p34 p34 p13 p34 p34 p13 p14 p14 p14
p14 p13 p14 p14
sp3 sp2 sp3 sp7
GZ
G1 G1 G1 G2 G3 G3
p14 p13
p14
sp5 sp2
ZGOPTNS sp5
no option: 3D (CH3C)CA(CO)NH NH(Ile+1) d22 d27 d27
LABEL_CO: 3D (CH3CCA)CONH p14

sp3
d0 d24 d24 d22
-d0
p14 p13 p14 p14
sp3 sp2 sp7 sp7
d2 : 1/(2J(CH)) [4.0 msec]

d17: 1/(4J(CC) [7.0 msec]
d21: 1/(2J(NH) [5.9 msec]
d22: 1/(4J(CaCO) [4.5 msec]
d23: 1/(4J(NCO) [12.4 msec]
d24: n/(4J(CC) [19 msec]
d25: 1/(4J(CC) [4.0 msec]
d26: 1/(4J(NH) [2.3 msec]
d27: 1/(4J(NCO) [12.4 msec]
d28: 1/(4J(CC) [7.0 msec]

MUSIC-Isoleucine: (CH3C)CANH
Ile Ile+1
O H O R
N C C N C
H
H HC H
CH 2 CH3
H 3C
music_ile_3d_2
g
1 -y
H pl19 -x -x -x Frec
d1 d2 d2 d21
DIPSI-2
p1 p2
15N d26 d26
d23-d10 d23+d10 d
GARP
13 p14 p14 p21 pl16
sp5 sp5
C´
p34 p34 p24 p13
p14 p14
sp29 sp29 sp9 sp2
sp5 sp5
13 d27
Cab d2 d17 d17 d28 d28 d25 d25 d0 d27 -d0
p13 p34 p34 p13 p34 p34 p14 p13 p14
p14 p13
sp3 sp8
GZ
G1 G1 G1 G2 G3 G3
ZGOPTNS
no options: 3D (CH3C)CANH NH(Ile+1) and NH(Ile)
d2 : 1/(2J(CH)) [4.0 msec]

d17: 1/(4J(CC) [7.0 msec]
d21: 1/(2J(NH) [5.9 msec]
d23: 1/(4J(NCa) [12.4 msec]
d25: 1/(4J(CC) [4.0 msec]
d26: 1/(4J(NH) [2.3 msec]
d28: 1/(4J(CC) [7.0 msec]

MUSIC-LAVIA: (CH3C)CA(CO)NH and (CH3CCA)CONH
Ala Ala+1
O H O R
N C C N C Leu Leu+1
H
H CH3 H O H O R
Ile Ile+1 N C C N C
Val Val+1 H
O H O R H CH 2 H
N C C N C CH
H
H3 C CH 3
H HC H
CH 2 CH3
R=H Val
R R=Me Ile
music_lavia_3d
ZGOPTNS: -DLABEL_CO
g
-y
pl19 -x -x -x Frec
1 d1 d2 d2 d21
H DIPSI-2
p1 p2 d26 d26
15N d23-d10 d23+d10 d

GARP
p14 p13 p21 pl16
p14 p13
sp5 sp2
sp5 sp8
13C´ d22 d27 d27
d22 +d0 -d22 -d0
p14 p14
sp3 sp3
13
Cab d2 d25 d25 d24 d24
p13 p33 p13 p14 p14 p13 p14 p14 p14 p14
p13
sp2
GZ
G1 G1 G1 G2 G3 G3
p24
ZGOPTNS: -DLABEL_VIA sp9
p14 p13
p14
sp5
sp5 sp2 ZGOPTNS
d22 d27 d27 no option: 3D (CH3C)CA(CO)NH NH((Leu,Ala)+1)
d28 d28 d25 d25
p14 LABEL_VIA: 3D (CH3C)CA(CO)NH NH((Val,Ile,Ala)+1)
sp3
p33 p13 p14 p13 d0 d24 d24 d22 LABEL_CO: 3D (CH3CCA)CONH
sp23 sp2 sp3 sp2 -d0
p14 p13 p14 p14
sp3 sp2 sp7 sp7

Ala Ala+1
O H O R
N C C N C Leu Leu+1
H
H CH3 H O H O R
Ile Ile+1 N C C N C
Val Val+1 H
O H O R H CH 2 H
N C C N C CH
H
H3 C CH 3
H HC H
CH 2 CH3
R=H Val
R R=Me Ile
d2 : 1/(2J(CH)) [4.0 msec]

d21: 1/(2J(NH) [5.9 msec]
d22: 1/(4J(CaCO) [4.5 msec]
d23: 1/(4J(NCO) [12.4 msec]
d24: n/(4J(CC) [19 msec]
or n/(4J(CC) (LABEL_VIA) [17 msec]
d25: 1/(4J(CC) [7.0 msec]
or 1/(8J(CC) (LABEL_VIA) [4.0 msec]
d26: 1/(4J(NH) [2.3 msec]
d27: 1/(4J(NCO) [12.4 msec]
d28: 1/(8J(CC) [3.6 msec]

MUSIC-LAVIA: (CH3C)CANH
Ala Ala+1 Ile Ile+1

Val Val+1
O H O R O H O R
N C C N C N C C N C
H H
H CH 3 H H HC H
CH 2 CH 3
Leu Leu+1 R=H Val
R=Me Ile
R
O H O R
N C C N C
H
H CH 2 H
CH
H 3C CH3
music_lavia_3d_2
g
-y
pl19 Frec
-x -x -x
1 d1 d2 d2 d21
H DIPSI-2
p1 p2 d26 d26
15N d23-d10 d23+d10 d

GARP
p14 p14 p21 pl16
sp5 sp5
13C´
p14 p14
sp5 sp5
13 d27
Cab d2 d25 d25 d0 d27 -d0
p13 p33 p13 p14 p14 p13 p14
p13
sp2
GZ
G1 G1 G1 G2 G3 G3
p24
sp9
ZGOPTNS: -DLABEL_VIA
d2 : 1/(2J(CH)) [4.0 msec]
p14 p14 d21: 1/(2J(NH) [5.9 msec]
sp5 sp5
d23: 1/(4J(NCa) [12.4 msec]
d25: 1/(4J(CC) [7.0 msec]
or 1/(8J(CC) (LABEL_VIA) [4.0 msec]
d28 d25 d25 d0 d27
d27 d26: 1/(4J(NH) [2.3 msec]
d28 -d0
p33 p13 p14 p13 p24 p13
sp23 sp2 sp3 sp2 sp28 sp2 d28: 1/(8J(CC) [3.6 msec]
ZGOPTNS
no options: 3D (CH3C)CANH NH((Leu,Ala)+1) and NH((Leu,Ala))
LABEL_VIA: 3D (CH3C)CANH NH((Val,Ile,Ala)+1) and NH((Val,Ile,Ala))

MUSIC-TAVI: (CH3C)CA(CO)NH and (CH3CCA)CONH
Ile Ile+1
Val Val+1 Ala Ala+1
O H O R
O H O R
N C C N C
H
N C C N C
H
H HC H
H CH 3 H
CH 2 CH 3
R=H Val
R R=Me Ile
Thr Thr+1
O H O R
N C C N C
H
H CH H
H 3C OH
music_tavi_3d
ZGOPTNS: -DLABEL_CO, -DLABEL_ALA

g
-y
pl19
-x -x -x Frec
1 d1 d2 d2 d2 d21
H DIPSI-2 y
p1 p2 d26 d26
15N d23-d10 d23+d10 d

GARP
p14 p13 p21 pl16
sp5 sp2
13C´ d22 d27- d27-
+d0 d22 d10
p14 p13 p14
sp3 sp8 sp3
13
Cab d22 d22
p13 p13 p14 p14 p14 p14

p13 p14 p14
sp2 sp3 sp3
GZ
G1 G1 G1 G2 G3 G3
p24
sp9
d25 d25
ZGOPTNS:
p14 p13 -DLABEL_THR p14 p13
sp3 sp2 sp5 sp2
d27-
no d22 d22 d27
ZGOPTNS:
-DLABEL_ALA p14
sp3
d24 d24
d0 d22 -d22
-d0
p14 p13 p14 p14
sp3 sp2 sp7 sp7
ZGOPTNS
no options: 3D (CH3C)CA(CO)NH NH((Thr,Ala,Val,Ile)+1)
LABEL_ALA: 3D (CH3C)CA(CO)NH NH((Ala+1)
LABEL_THR: 3D (CH3C)CA(CO)NH NH((Thr,Ala)+1)
LABEL_CO: 3D (CH3CCA)CONH

Ile Ile+1
Val Val+1 Ala Ala+1
O H O R
O H O R
N C C N C
H
N C C N C
H
H HC H
H CH 3 H
CH 2 CH 3
R=H Val
R R=Me Ile
Thr Thr+1
O H O R
N C C N C
H
H CH H
H 3C OH
d2 : 1/(2J(CH)) [4.0 msec]

d21: 1/(2J(NH) [5.9 msec]
d22: 1/(4J(CaCO) [4.4 msec]
d23: 1/(4J(NCO) [12.4 msec]
d24: n/(4J(CC) [17 msec]
d25: 1/(4J(CC) [5.5 msec]
d26: 1/(4J(NH) [2.3 msec]
d27: 1/(4J(NCO) [12.4 msec]
F1 [ppm]
105
110
TAVI
115
120
125
10 9 8 F2 [ppm]

MUSIC-TAVI: (CH3C)CANH
Ile Ile+1
Val Val+1 Ala Ala+1
O H O R
O H O R
N C C N C
H N C C N C
H
H HC H
H CH3 H
CH 2 CH3
R
R=H Val
R=Me Ile Thr Thr+1
O H O R
N C C N C
H
H CH H
H3 C OH
music_tavi_3d_2
ZGOPTNS: -DLABEL_ALA
g
-y
pl19 -x -x -x Frec
1 d1 d2 d2 d2 d21
H DIPSI-2 y
p1 p2 d26 d26
15N d23-d10 d23+d10 d

GARP
p14 p14 p21 pl16
sp5 sp5
13C´
p14 p14
sp5 sp5
13 d27
Cab d0 d27
-d0
p13 p14 p13 p14 p13 p14
GZ
G1 G1 G1 G2 G3 G3
p24
d25 d25 sp9 d2 : 1/(2J(CH)) [4.0 msec]
d21: 1/(2J(NH) [5.9 msec]
p14 p13 ZGOPTNS:
sp3 sp2 -DLABEL_THR d23: 1/(4J(NCa) [12.4 msec]
no d25: 1/(4J(CC) [5.5 msec]
ZGOPTNS: d26: 1/(4J(NH) [2.3 msec]
-DLABEL_ALA
ZGOPTNS
no options: 3D (CH3C)CANH NH((Thr,Ala,Val,Ile)+1) and NH(Thr,Ala,Val,Ile)
LABEL_ALA: 3D (CH3C)CANH NH((Ala+1) and NH(Ala)
LABEL_THR3D (CH3C)CANH NH((Thr,Ala)+1) and NH(Thr,Ala)

MUSIC-Proline: (HACACO)N(COCA)NH
Ref: M. Schubert, L. Ball, H. Oschkinat & P. Schmieder, J. Biomol. NMR 17, 331-335 (2000)
Pro-1 Pro
H O H O R
N C N C C N C
H
H R H
music_pro_1_3d
-y y -y
pl19 -x -x -x Frec
1 d1 d4 d4 d21
H d3 DIPSI-2 d21 DIPSI-2
p1 p2
d26 d26
15N d27 d27 d23-d10 d23+d10 d
-d0 +d0 GARP
p14 p14 p13 p14 p21 pl16
sp5 sp5 sp2 sp3
13C´ d
d23 d23 d23 d23 d22
p8 p13 p13 p14 p14
p14 p13 sp13 p14
sp2 sp8 sp5 sp5 sp3
sp3 sp8
13
Cab d d22 d22 d22
d22 d23 d23
p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14
GZ
G3 G4 G5 G6 G6
ZGOPTNS
no options: 3D (HACACO)N(COCA)NH NH(Pro-1)
d3 : 1/(4J(CH)) [2.1 msec]

d4 : 1/(4J(CH)) [1.7 msec]
d21: 1/(2J(NH) [5.5 msec]
d22: 1/(4J(CaCO) [4.5 msec]
d23: 1/(4J(NC) [12.4 msec]
d26: 1/(4J(NH) [2.3 msec]

MUSIC-Proline: (HACACONCO)CANH and (HACACON)CO(CA)NH
Pro-1 Pro Pro-1 Pro
H O H O R H O H O R
N C N C C N C N C N C C N C
H H
H R H H R H
music_pro_1_3d.2
ZGOPTNS: -DLABEL_CO
-y y -y
pl19 -x -x -x Frec
1 d1 d4 d4
H d3 DIPSI-2 DIPSI-2
d21
p1 p2
d26 d26
15N d21 d21 d23-d10 d23+d10 d
GARP
p14 p14 p13 p14 p21 pl16
sp5 sp5 sp2 sp3
13C´ d d23 d23
d23 d23 d22
-d0 -d22
p13 p13 p14 p14
p14 p13 p14
sp2 sp8 sp5 sp5
sp3 sp8 sp3
13 d22
Cab d d22 d22 d22
+d0 d23 d23
p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14 p13 p14 p13 p14
p14
sp7
GZ
G3 G4 G5 G6 G6
p14
ZGOPTNS sp3
no options: 3D (HACACONCO)CANH NH(Pro-1) d23 d23

d22
+d0
LABEL_CO: 3D (HACACON)CO(CA)NH p13 p14 p14
sp8 sp5 sp5
d23 d23
d22
-d22 -d0
p14 p14 p13 p14
sp7 sp7 sp2 sp3
d3 : 1/(4J(CH)) [2.1 msec]

d4 : 1/(4J(CH)) [1.7 msec]
d21: 1/(2J(NH) [5.5 msec]
d22: 1/(4J(CaCO) [4.5 msec]
d23: 1/(4J(NC) [12.4 msec]
d26: 1/(4J(NH) [2.3 msec]

MUSIC-Proline: (HACA)N(CACO)NH
Pro Pro+1
O H O R
H
N C N C C N C
H
H R H
music_pro_2_3d
-y y -y
pl19 -x -x -x Frec
1 d1 d4 d4 d21
H d2 DIPSI-2 d21 DIPSI-2
p1 p2 d26 d26
15N d27 d27 d23-d10 d23+d10 d

-d0 +d0 GARP
p14 p14 p21 pl16
sp5 sp5
13C´ d d22 d23
p8 p13 p14
sp13 p14
sp2 sp3 sp3
13
Cab d d25 d25 d25 d25 d22 d22
p14 p13 p24 p13 p24 p13 p14 p14 p13 p14 p14
p13
sp8
GZ
G3 G4 G5 G6 G6
ZGOPTNS
no options: 3D (HACA)N(CACO)NH NH(Pro+1)
d2 : 1/(2J(CH)) [3.4 msec]

d4 : 1/(4J(CH)) [1.7 msec]
d21: 1/(2J(NH) [5.5 msec]
d22: 1/(4J(CaCO) [4.5 msec]
d23: 1/(4J(NCO) [12.4 msec]
d25: 1/(4J(NCa) [7.0 msec]
d26: 1/(4J(NH) [2.3 msec]

MUSIC-Proline: (HACANCA)CONH and (HACAN)CA(CO)NH
Pro Pro+1 Pro Pro+1
O H O R O H O R
H H
N C N C C N C N C N C C N C
H H
H R H H R H
music_pro_2_3d.2
ZGOPTNS: -DLABEL_CO
-y y -y
pl19
1 d1 d4 d4 -x -x -x Frec
H d2 DIPSI-2 DIPSI-2
d21
p1 p2
d26 d26
15N d21 d21 d23-d10 d23+d10 d
GARP
p14 p14 p21 pl16
sp5 sp5
13C´ d d22 d23 d23
d22
+d0 -d22 -d0
p13 p14 p13 p14
sp2 sp5 sp8 sp3
13
Cab d d25 d25 d25 d25
p14 p13 p24 p13 p13 p13 p14 p14 p14

p24 p14
sp9 sp7
GZ
G3 G4 G5 G6 G6
p14 p14
sp5 sp5
d23
ZGOPTNS
d22 d23
-d22 no options: 3D (HACANCA)CONH NH(Pro+1)
p13
sp2
p14
sp3
LABEL_CO: 3D (HACAN)CA(CO)NH
d25 d25 d22
-d0 -d22 +d0
p13 p24 p13 p14 p14
sp2 sp9 sp8 sp7 sp7
d2 : 1/(2J(CH)) [3.4 msec]

d4 : 1/(4J(CH)) [1.7 msec]
d21: 1/(2J(NH) [5.5 msec]
d22: 1/(4J(CaCO) [4.5 msec]
d23: 1/(4J(NCO) [12.4 msec]
d25: 1/(4J(NCa) [7.0 msec]
d26: 1/(4J(NH) [2.3 msec]

MUSIC-GLN/ASN: (NH2COC)CA(CO)NH and (NH2COCCA)CONH
Gln Gln+1 Asn Asn+1
O H O R O H O R
N C C N C N C C N C
H H
H CH 2 H H CH 2 H
C O
C O NH 2
NH 2
music_qn_3d
ZGOPTNS: -DLABEL_CO
pl19
-y
1 d1 d21 d21 d21 -x -x -x Frec
H DIPSI-2 d21
p1 p2
d26 d26
15N d27 d27 d23-d10 d23+d10 d
-d21 GARP
p13 p21 pl16
sp2
13C´ d22 d23 d23
d27 d27 d22 d22 +d0 -d22 -d0
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14 p14 p14
13
Cab d22 d24 d24 d25 d25 d24 d24
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p14
p14 p14
sp5 sp5
GZ
G1 G1 G1 G2 G3 G3
ZGOPTNS: -DLABEL_GLN
p13
sp2
ZGOPTNS
d23 d23
d22
no options: 3D (NH2COC)CA(CO)NH NH(Asn+1)
p14 p14
p14
LABEL_GLN: 3D (NH2COC)CA(CO)NH NH((Gln,Asn)+1) sp7 sp7
sp3
d24 d24 d0 d22
LABEL_CO: 3D (NH2COCCA)CONH -d0
p13 p14 p13 p14
p14
sp2 sp3 sp2 sp5
sp5
d21: 1/(2J(NH) [5.5 msec]

d22: 1/(4J(CaCO) [4.5 msec]
d23: 1/(4J(NCO) [12.4 msec]
d24: 1/(4J(CC) [5.2 msec]
d25: 1/(4J(CC) [6.8 msec]
d26: 1/(4J(NH) [2.3 msec]
d27: 1/(4J(NCO(s)) [14.2 msec]

MUSIC-GLN/ASN: (NH2COC)CANH
Gln Gln+1 Asn Asn+1
O H O R O H O R
N C C N C N C C N C
H H
H CH 2 H H CH 2 H
CH 2 C O
C O NH 2
NH 2
music_qn_3d_2
pl19 -y
1 d1 d21 d21 d21 -x -x -x Frec
H DIPSI-2 d21
p1 p2
d26 d26
15N d27 d27 d23-d10 d23+d10 d
-d21 GARP
p21 pl16
13C´
d27 d27
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14 p14
sp3 sp3 sp7 sp7 sp7 p14
sp3 sp2 sp8 sp7 sp7
sp7
13 d24 d28
Cab d22 d22
-d22
d24 d25 d25 d0 d28
-d0
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14
GZ
G1 G1 G1 G2 G3 G3
ZGOPTNS: -DLABEL_GLN
ZGOPTNS
no options: 3D (NH2COC)CANH NH(Asn+1)
LABEL_GLN: 3D (NH2COC)CANH NH((Gln,Asn)+1)
d21: 1/(2J(NH) [5.5 msec]

d22: 1/(4J(CaCO) [4.5 msec]
d23: 1/(4J(NCa) [12.4 msec]
d24: 1/(4J(CC) [5.2 msec]
d25: 1/(4J(CC) [6.8 msec]
d26: 1/(4J(NH) [2.3 msec]
d27: 1/(4J(NCO(s)) [14.2 msec]
d28: 1/(4J(CC) [7.0 msec]
or 1/(4J(CC) (LABEL_GLN) [9.0 msec]

MUSIC-TRP: 2D (HENECE)NH
Reference:
M. Schubert, H. Oschkinat & P. Schmieder, J. Magn. Reson. 153, 186-192 (2001)
trp trp+1
O O R
N CH C N C
H
H CH 2 H
music_trpe_2d
y
y -y
pl19 -x -x -x Frec
1 d1 d26 d26 d21
H d d21 DIPSI-2 y
p1 p2 p11
sp1 d26 d26
15N d23 d23 d23-d0 d23+d0 d

GARP
p13 p21 pl16

sp8
13
Carom
p33 p13 p33
sp23 sp2 sp23
GZ
G1 G1 G2 G3 G4 G4
d21: 1/(2J(NH) [5.5 msec]

d23: 1/(4J(NC) [12.4 msec]
d26: 1/(4J(NH) [2.3 msec]

BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
AROMATIC-SPECIFIC
NMR EXPERIMENTS

Aromatic-Specific Experiments
o 2D (HB)CB(CGCD)HD (hbcbcgcdhdgp)
o 2D (HB)CB(CGCDCE)HE (hbcbcgcdcehegp)
o 2D (HB)CB(CGCC-TOCSY)Har (hbcbcgcchargp)
o 3D Har(CC-TOCSY-CGCBCACO)NH (hcccgcbcaconhgp3d)
o 3D Har(CC-TOCSY-CGCBCACO)NH using WATERGATE (hcccgcbcaconhgpwg3d)
o 3D Har(CC-TOCSY-CGCBCACO)NH using TROSY (trhcccgcbcaconhgp3d)
o 3D Har(CC-TOCSY-CGCBCACO)NH using TROSY and echo-antiecho (trhcccgcbcaconhetgp3d)
OH
NH
N NH
CH2 CH2 CH2 CH2
H2N CH C OH H2N CH C OH H2N CH C OH H2N CH C OH
O O O O
Histidine Phenylalanine Tyrosine Tryptophan

(His) (Phe) (Tyr) (Trp)
References:
1. T. Yamazaki, J.D. Forman-Kay & L.E. Kay, J. Am. Chem. Soc. 115, 11054-11055 (1993)
2. F. Loehr, R. Haensel, V.V. Rogov & V. Doetsch,J. Biomol. NMR 37, 205-224 (2007)

2D (HB)CB(CGCD)HD
H C H
N C C
H H O
hbcbcgcdhdgp
1 -x Frec
H d1 d4 d4 d3
DIPSI2 d27
d
d4 d4
p17 p1 p2 p11
pl10 sp1
13
Cb d d22 d22
-d0 +d0
p14 p13 p24 p13 p14 p14
13
Carom d d23 d23 d25 d25 GARP
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14
sp3 sp3 pl12
GZ
G1 G2 G2 G3 G4 G4 G5 G5 G6 G7 G7
d3 : 1/(3J'(HbCb)) [1.8 msec]

d4 : 1/(4J(HbCb)) [1.7 msec]
d21: 1/(4J'(HeCe)) [1.25 msec]
d22: 1/(4J(CbCg)) [4.4 msec]
d23: 1/(4J'(CbCg)) and 1/(4J(CgCd)) [2.7 msec]
d25: 1/(4J'(CgCd)) [2.1 msec]
d27: 1/(4J(HdCd)) [1.4 msec]

2D (HB)CB(CGCDCE)HE
C H
C
C
C H
H C H
N C C
H H O
hbcbcgcdcehegp
1 -x Frec
H d1 d4 d4 d3
DIPSI2 d27
d
d4 d4
p17 p1 p2 p11
pl10 sp1
13
Cb d d22 d22
-d0 +d0
p14 p13 p24 p13 p14 p14
13
Carom d d23 d23 d28 d28 d25 d25 GARP
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14
sp3 sp3 pl12
GZ
G1 G2 G2 G3 G4 G4 G5 G5 G6 G6 G7 G8 G8
d3 : 1/(3J'(HbCb)) [1.8 msec]

d4 : 1/(4J(HbCb)) [1.7 msec]
d21: 1/(4J'(HeCe)) [1.25 msec]
d22: 1/(4J(CbCg)) [4.4 msec]
d23: 1/(4J'(CbCg)) and 1/(4J(CgCd)) [2.7 msec]
d25: 1/(4J'(CdCe)) [2.1 msec]
d27: 1/(4J(HeCe)) [1.4 msec]
d28: 1/(4J'(CgCd)) and 1/(4J(CdCe)) [3.8 msec]

2D (HB)CB(CGCC_TOCSY)Har
H
C H
C
C
H
H C H
N C C
H H O
hbcbcgcchargp
1 d1 Frec
H CW
d4 d4
DIPSI-2
pl32 p1 p2 p46
pl21
13
Cali d d
d23/4 d23/4 d23/4 d23/4
d25/2
-d0 +d0 +d0 -d0
p14 p13 p47 p8 p13 p14 p14
sp3 sp2 p8 sp8
sp19 sp13 sp20 sp20
sp13
13
Carom d24/2 d24/2 DIPSI-2 DIPSI-2 GARP
p13 p48 p45 p46 pl14
sp2 sp21 pl20 pl22
GZ
G1 G2 G2 G3 G4 G4 G5 G5 G6 G7 G7
d4 : 1/(4J(HbCb)) [1.7 msec]

d23: 1/(2J'(CbCg)) and 5/(4J'(HbCb)) [9.0 msec]
d24: 1/(J(CgCd))
Phe, Trp [11.5 msec]
Tyr [15.0 msec]
all [17.4 msec]
d25: 1/(2J(CbCg)) [10.4 msec]
cnst24: Caromatic chemical shift (offset, in ppm) [130 ppm]

cnst30: Cbeta(aro) chemical shift (offset, in ppm) [35 ppm]
cnst51: Calpha(aro) chemical shift (offset, in ppm) [59 ppn]
cnst52: Caromatic chemical shift (offset, in ppm)
Phe [141 ppm]
Trp [111 ppm]
Tyr [129 ppm

3D Har(CC-TOCSY-CGCBCACO)NH
C H
C
C
C H
H C H
N C C
H H O
hcccgcbcaconhgp3d
f1 y
-y y -y
d1 Frec
1 d25d26 d26 d26 d26 d d
H CW
D d0 d0
pl32 p1 p2 p46 pl19
Y
pl21
15N d23-d10 d23+d10
d GARP
p22 p21 pl16
13
CO d27 d27
p14 p14 p13 p14 p13 p14

13
Caro d24
___ d24
___
DIPSI-2 DIPSI-2 2 2
p14 p13 p8 p8
p14 p46 p45
sp3 sp8 sp13 sp13
13 sp3 pl22 pl20
Cali d25
___
2
d25
d ___ d25
___ d25 d22
___
4
d22 d d22
4 2
p14 p14 p13 p14 p14 p14
p13 p14 p13 p14
sp2 sp3 sp2 sp7
GZ
G3 G4 G4 G5 G6 G1 G2
d21: 1/(2J(NH) [5.5 msec]

d22: 1/(4J(CaCO)) [4.6 msec]
d23: 1/(4J(NCO) [12.4 msec]
d24: 1/(J(CgCd)) [17.4 msec]
d25: 1/(2J(CbCg)) [10.4 msec]
d26: 1/(4J'(NH) [2.3 msec]
d27: 1/(4J'(NCO) [11.0 msec]

hcccgcbcaconhgpwg3d
f1
-y y -y d26 d26
d1 -x -x -x Frec
1 d
H CW
D d0 d0
d21
pl32 p1 p2 p46 pl19 p11

pl21 sp1
15N d23-d10 d23+d10
d GARP
p22 pl16
13
CO d27 d27
p14 p14 p13 p14 p13 p14

13
Caro d24
___ d24
___
DIPSI-2 DIPSI-2 2 2
p14 p13 p8 p8
p14 p46 p45
sp3 sp8 sp13 sp13
13 sp3 pl22 pl20
Cali d25
___
2
d25
d ___ d25
___ d25 d22
___
4
d22 d d22
4 2
p14 p14 p13 p14 p14 p14
p13 p14 p13 p14
sp2 sp3 sp2 sp7
GZ
G3 G4 G4 G5 G6 G7 G8 G8
trhcccgcbcaconhgp3d
f1 Y y
-y y -y
d1 -x -x Frec
1
H CW
D d0 d0
d26 d26
pl32 p1 p2 p46 pl19 p11 Y

pl21 sp1
15N d23+d10 d23-d10 d26 d26
d
p22 p21
13
CO d27 d27
p14 p14 p13 p14 p13 p14

13
Caro d24
___ d24
___
DIPSI-2 DIPSI-2 2 2
p14 p13 p8 p8
p14 p46 p45
sp3 sp8 sp13 sp13
13 sp3 pl22 pl20
Cali d25
___
2
d25
d ___ d25
___ d25 d22
___
4
d22 d d22
4 2
p14 p14 p13 p14 p14
p13 p14 p13 p14
sp2 sp3 sp2 sp7
GZ
G3 G4 G4 G5 G6 G7 G7G8 G8

trhcccgcbcaconhetgp3d
f1 Y y
-y y -y
d1 -y -y Frec
1
H CW
D d0 d0
d26 d26 d d
pl32 p1 p2 p46 pl19 p11 Y

y
pl21 sp1
15N d23-d10 d23+d10 d26 d26
d
p22 p21
13
CO d27 d27
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14

13
Caro d24
___ d24
___
DIPSI-2 DIPSI-2 2 2
p14 p13 p8 p8
p14 p46 p45
sp3 sp8 sp13 sp13
13 sp3 pl22 pl20
Cali d25
___
2
d25
d ___ d25
___ d25 d22
___
4
d22 d d22
4 2
p14 p14 p13 p14 p14 p14
p13 p14 p13 p14
sp2 sp3 sp2 sp7
GZ
G4 G5 G5 G6 G7 G8 G8 G9 G9
G1 G2 G3

BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
METHYL-SELECTIVE
NMR EXPERIMENTS

Methyl-selective Experiments
· 3D (Hme)Cm e([C])CA experiment using WATERGATE (hmcm cbcagpwg3d)

· 3D (Hme)Cm e([C]CA)CO experiment using WATERGATE (hmcmcbcacogpwg3d)
· 3D (Hme)Cm e([C]CA)NH experiment using WATERGATE (hmcmcbcanhgpwg3d)
· 3D Hme (Cme[C]CA)NH experiment using WATERGATE (hmcmcbcanhgpwg3d.2)
· 3D (Hme)Cm e([C]CACO)NH experiment using WATERGATE (hmcmcbcaconhgpwg3d)
Also see:
Amino-Acid-Type Experiments with CH3-selection
All Backbone-Sidechain experim ents: (H)CC(CO)NH, CC(CO)NH, CCA(CO)NH, CCANH, CBCACONH,
CBCANH ....
V. Tugarinov & L.E. Kay, J. Am. Chem. Soc. 125, 13868-13878 (2003)
O
O
H 2N CH C OH
H 2N CH C OH
Ala CH CH3 Ile
CH3
CH2
CH3
O O
H 2N CH C OH H 2N CH C OH
Val
CH CH3 CH2
Leu
CH3 CH CH3
CH3
ZGOPTNS options (in eda) In ALL EXPERIMENTS:
no option all methyl groups

LABEL_ALA: one transfer step along sidechain: methyl groups
in Cb position only ( option -DLABEL_ALA)
;LABEL_VAL: two transfer steps along sidechain: methyl groups
in Cg position only (option -DLABEL_VAL)
;LABEL_CG2: refocussing pulse for Ile Cg2 (depending on labelling
scheme) (option -DLABEL_CG2)

3D (Hme)Cme([C]CACO)NH
H
H H H H
C 12 H
C CD 3
H H
CD2 DC C
D 3 12 C
H
D3 C CD CD2 CD
N C CD N N C CD N N C CD N
H H H H
H O O H O
hmcmcbcaconhgpwg3d
y
y -y y -y y -y
-x -x -x -x Frec
1 d1 d4 d4 d d3 d21
H DIPSI-2 d DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p40 p11 pl19
sp1
d26 d26
sp24
15N d23-d10 d23+d10 d
GARP
p14 p22 p21 pl16
sp5
13C´ d
d23 d23
f1 p14 p13 p14 p13 p14

sp5 sp2 sp3 sp8 sp3
13 d24 d24
Cab +d0 -d0
d25 d25 d25 d25 d22 d22 d22
p13 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14
13
C Methyl
p24
sp9
GZ
G1 G1 G2 G3 G4 G5 G6 G6
if “LABEL_ALA” If “LABEL_VAL” if “LABEL_CG2”

13
13C´ d22 d22 13C´
d22 d22
Cab d25 d25
p14 p14 p14 p14 p14

sp5 13 sp3
13
sp5
13
sp5 sp5 C Methyl
Cab Cab d25 d25
p13 p24 p24

p14 p14 p13 p14 p13
sp2 sp9 sp9
sp3 sp3 sp2 sp3 sp8
d3 : 1/(6J'(CH)) [1.52 msec]

d4 : 1/(4J(CH)) [1.8 msec]
d21: 1/(2J(NH) [5.5 msec]
d22: 1/(4J(CaCO)) [4.5 msec]
d23: 1/(4J(NCa) [12.4 msec]
d24: 1/(4J(CmeC)) [7 msec]
d25: 1/(4J'(CC)) [5 msec]
d26: 1/(4J(NH) [2.3 msec]

3D (Hme)Cme([C]CA)NH
H
H H H H
C 12 CD H
C 3
H H
CD2 DC C
D 3 12 C
H
D3 C CD CD2 CD
HN C CD N HN C CD N HN C CD N
H H H
O O O
hmcmcbcanhgpwg3d
y
y -y y -y
-x -x -x -x Frec
1 d1 d4 d4 d d3 d21
H DIPSI-2 d DIPSI-2
p1 p40 p11 pl19
d26 d26
sp24 sp1
15N d23-d10 d23+d10 d
GARP
p21 pl16
13C´ d27 d27
f1 p14 p14
sp5 sp5
13 d24 d24
Cab +d0 -d0
d25 d25 d25 d25 d22
p13 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p24 p14 p24 p13 p14
13
C Methyl
p24
sp9
GZ
G1 G1 G2 G3 G4 G5 G5

13
Cab d25 d25
15N 15N
p14
13 sp3
C Methyl
13C´ 13C´
p24 p24
d27 d27 sp9 sp9
13 13
Cab d27 d27 Cab d25 d25 d22
p14 p13 p14 p13 p24 p14 p24 p13

13 13
C Methyl d22 C Methyl
p24 p24 d3 : 1/(6J'(CH)) [1.52 msec]
sp9 sp9
d4 : 1/(4J(CH)) [1.8 msec]
d21: 1/(2J(NH) [5.5 msec]
d22: 1/(8J'(CC)) [2.7 msec]
d23: 1/(4J(NCa) [12.4 msec]
d24: 1/(4J(CmeC)) [7 msec]
d25: 1/(4J'(CC)) [5 msec]
d26: 1/(4J(NH) [2.3 msec]
d27: 1/(4J'(NCa) [10.0 msec]

3D Hme(Cme[C]CA)NH
H
H H H H
C 12 H
C CD3
H H
CD2 DC C
D3 12 C
H
D 3C CD CD 2 CD
HN C CD N HN C CD N HN C CD N
H H H
O O O
hmcmcbcanhgpwg3d2
y
y -y y -y
d4 (1-k) d4- -x -x -x -x Frec
1 d1 d d3 d21
H +d0 *d0 k*d0 DIPSI-2 d DIPSI-2
p1 p40 p11 pl19
d26 d26
sp24 sp1
15N d23-d10 d23+d10 d
GARP
p21 pl16
13C´ d27 d27
f1 p14 p14
sp5 sp5
13
Cab d24 d24 d25 d25 d25 d25 d22
p13 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p24 p14 p24 p13 p14
13
C Methyl
p24
sp9
GZ
G1 G1 G2 G3 G4 G5 G5

13
Cab d25 d25
15N 15N
p14
13 sp3
C Methyl
13C´ 13C´
p24 p24
d27 d27 sp9 sp9
13 13
Cab d27 d27 Cab d25 d25 d22
p14 p13 p14 p13 p24 p14 p24 p13

13 13
C Methyl d22 C Methyl
p24 p24
sp9 sp9
d23: 1/(4J(NCa) [12.4 msec]

d3 : 1/(6J'(CH)) [1.52 msec] d24: 1/(4J(CmeC)) [7 msec]
d4 : 1/(4J(CH)) [1.8 msec] d25: 1/(4J'(CC)) [5 msec]
d21: 1/(2J(NH) [5.5 msec] d26: 1/(4J(NH) [2.3 msec]
d22: 1/(8J'(CC)) [2.7 msec] d27: 1/(4J'(NCa) [10.0 msec]

3D (Hme)Cme([C])CA
H
H H
H
H
C 12 H
C CD 3
H
H
CD2 DC 12 C
D3 C
H
D3 C CD CD2 CD
HN C C N HN C C N HN C C N
D H D H H
O O O D
hmcmcbcagpwg3d
y
y -y
-x -x -x -x Frec
1 d1 d4 d4 d d3
H DIPSI-2 d3 d
p1 p40 p11 pl19
sp1 d26 d26
sp24
15N
13C´
f1 p14 p14
sp5 sp5
13 d24 d24
Cab d24 d24 d25 d25 d25 d25 d0 d0 d25 d25 d25 d25
-d10 +d10 GARP
p13 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p24 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 pl12
sp2 sp3 sp8 sp3 sp2 sp3 sp8 sp28 sp2 sp3 sp2 sp3 sp2 sp3 sp8 sp3
13
C Methyl
p24
sp9
GZ
G1 G1 G2 G3 G4 G4
If “LABEL_VAL”
13C´ 13C´
13
Cab d25 d25
13 p14 13
Cab d25 d25 13
C Methyl sp3 Cab d25 d25
p14 p13 p13 p14

sp3 sp2 p24 p24 sp8 sp3
sp9 sp9
d3 : 1/(6J'(CH)) [1.52 msec]

d4 : 1/(4J(CH)) [1.8 msec]
d24: 1/(4J(CmeC)) [7 msec]
d25: 1/(4J'(CC)) [5 msec]

3D (Hme)Cme([C]CA)CO
H
H
H H
H
C 12 H
C CD3
H
H
CD 2 DC C
D 312C
H
D 3C CD CD 2 CD
HN C C N HN C C N HN C C N
D H D H H
O O O D
hmcmcbcacogpwg3d
y
y -y y -y y y
-x -x -x -x Frec
1 d1 d4 d4 d d3
H DIPSI-2 DIPSI-2 DIPSI-2 d3 d
p1 p40 p11 pl19
d26 d26
sp24 sp1
15N
p14 p14 p14

sp5 sp5 sp5
13C´
d d0 d0 d
f1 p14 p13 p14 p13

sp5 sp2 sp3 sp8
13 d24 d24
Cab d24 d24 d25 d25 d25 d25 d27 d27 d27 d27 d25 d25
-d10 +d10 GARP
p13 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 pl12
sp2 sp3 sp8 sp3 sp2 sp3 sp8 sp3 sp2 sp7 sp7 sp2 sp3 sp2 sp3 sp2 sp3 sp8 sp3
13
C Methyl
p24
sp9
GZ
G1 G1 G2 G3 G4 G5 G6 G6
If “LABEL_VAL” if “LABEL_ALA” If “LABEL_VAL”

if “LABEL_ALA” if “LABEL_CG2”
13 13C´ 13C´
13C´ 13C´ d27 d27 d27
d27 d27
d27 d27 Cab d25 d25 d27
p14 p14 p13 p14 p14
p14 p14 p14 p14 p13
p14 sp5 sp5 sp8 sp5 sp5
sp5 sp5 sp5 sp5 13 sp8
sp3 13 13
13 13 C Methyl Cab Cab d25
Cab Cab d25 d25 d25
p13 p14 p13 p14 p13 p14

p14 p14 p13 p14 p13 p24 p24 sp2
sp2 sp3 sp3 sp8 sp3
d3 : 1/(6J'(CH)) [1.52 msec]

d4 : 1/(4J(CH)) [1.8 msec]
d24: 1/(4J(CmeC)) [7 msec]
d25: 1/(4J'(CC)) [5 msec]
d27: 1/(4J''(CC)), 1/(4J(CaCO)) [4.75 msec]


BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
2D & 3D CARBON-DETECTED
EXPERIMENTS

Main Features of carbon-detected experiments
Shorter pulse sequences.

No need for solvent suppression techniques.
Avoid radiation damping.
Applied in spectra with low dispersion and on samples with low proton density.
Excellent chemical shift dispersion for carbonyl CO nuclei.
Sample Requirements
Usually applied on doubly-labelled 13C15N-labeled protein. Particular interesting in proteins

showing fast relaxation properties such a paramagnetic or very large proteins. Also useful
for labeled nucleic acids having low proton densities and low spectral dispersion.
Carbon-detected experiments are best performed on a sensitivity-optimized cryoprobe

dedicated for 13C detection but it is not mandatory. In most cases, it is also necessary
triple-resonance (1H, 13C, 15N) and z-gradient capabilities.
Carbon-Detected NMR Experiments
2D Sidechain 3D Sidechain
13 13
2D C- C TOCSY 3D HCC
13 13
2D C- C COSY
3D HCBCA
13 13
2D C- C NOESY
3D HCBCACO
3D HCBCAN
3D
H(CC)CACO
2D 13CO-13Cali NOESY 3D CBCACO
3D CBCAN
2D CACO 3D HACACO
3D intra-CANCO
3D (H)CANCO
3D CANCO
2D NCO
3D HNCO 3D (H)NCOCA
2D NCA
3D HCAN
3D (H)NCACO
3D HNCA
2D Backbone 3D Backbone

Experimental details for carbon-detected experiments
Offsets
1H at 4.7ppm (o2p)
15N at 118ppm (o3p)
13CO at 173ppm (cnst21)
13CA at 55 ppm (cnst22)
13Cali at 39ppm (cnst23)
Decoupling/Mixing
From f2 channel: 1H CPD with 3.0KHz Waltz-16 (pcpd2 at pl12)

From f3 channel: 15N CPD with 1KHz GARP-4 (pcpd3 at pl16)
13C TOCSY with 10KHz FLOPSY-16 (pl10)
Spectral Widths
18-24ppm for CO
42 ppm for 15N
48 ppm for CA
75-80 ppm for Cali
Typical 13C pulses from F1 channel (For 600MHz spectrometer)
p11 sp23: 90º Cali/CO on- resonance (320us (Q5 and Q5tr) )
P12 sp24: 180º Cali/CO on-resonance (256us (Q3))
p11 sp25: retro 90º Cali/CO on-resonance (320us (Q5 and Q5tr) )
p12 sp26: 180º CO/Cali off-resonance with respect to Cali/CO (256us (Q3))
p12 sp27: 180º CO/CA off-resonance with respect to CA/CO (256us (Q3))
p25 sp28: 180º Selective CA on-resonance (1 ms (Q3))
p12 sp29: 180º Cali off-resonance with respect to CA (256us (Q3))
p30 sp30: Simultaneous 180º CA and CO (symmetrically modulated)
p8 sp13: 180º adiabatic for inversion (500us(Chirp) )

p24 sp7: 180º adiabatic for refocusing (2000us(Composite chirp) )
Very Important!!: In all pulse programs the syntax
prosol relations=<triple_c>
is included for automated acquisition/set-up using edprosol/getprosol.

This file is defined in the following directory:
$TOPSPINHOME/conf/instr/spect/prosol/relations/triple_c

2D Carbon-Detected Experiments
· 2D CC COSY
o Conventional (c_cosy)
o Constant-time (c_cosy_ct / c_cosy2_ct)
· 2D CC NOESY
o Conventional (c_ccnoesy)
o 2D CC NOESY (c_ccnoesy2)
o Constant-time (c_ccnoesy_ct)
· 2D CC TOCSY
o Conventional (c_ccflopsy16)
o With DIPAP for virtual decoupling (c_ccflopsy16_ia)
o Constant-time (c_ccflopsy16_ct)
o Constant-time with DIPAP for virtual decoupling (c_ccflopsy16_ctia)
· 2D CACO
o Using HSQC (c_caco)
o with IPAP for virtual decoupling (c_caco_ia)
o with S3E for virtual decoupling (c_caco_s3)
o Using HMQC (c_coca_mq | c_coca_mq.2)
· 2D COCA
o Using HSQC (c_coca)
o with DIPAP for virtual decoupling (c_coca_ia)
· 2D CON
o Using HMQC (c_con_mq)
o Using HSQC (c_con_sq)
o Using HSQC with IPAP for virtual decoupling (c_con_iasq)
o Using HMQC with IPAP for virtual decoupling (c_con_mqia)
· 2D CAN
o Using HMQC (c_can_mq)
o Using HMQC (c_can_mq.2)
o Using HSQC with DIPAP for virtual decoupling (c_can_iasq)

For Backbone Assignments
· 3D HCACO
o (*) With CO detection (c_hcaco_3d)
o With CO detection and with IPAP for virtual decoupling (c_hcaco_ia3d)
o With CO detection and with S3E for virtual decoupling (c_hcaco_s33d)
o With CO detection and using HMQC (c_hacaco_3d)
· 3D HCAN
o (*) With CA detection (c_hcan_3d)
o With CA detection and with DIPAP for virtual decoupling (c_hcan_ia3d)
· 3D CANCO
o (*) With CO detection (c_canco_3d)
o With CO detection and with IPAP for virtual decoupling (c_canco_ia3d)
o With CO detection and with IPAP for virtual decoupling (c_canco_ia3d.2)
o (*) (H)CANCO starting from HA and with CO detection (c_hcanco_3d)
o (H)CANCO starting from HA and with CO detection and with IPAP for virtual
decoupling (c_hcanco_ia3d)
· 3D intra-CANCO
o (*) With CO detection (c_cancoi_3d)
o With CO detection and with IPAP for virtual decoupling (c_cancoi_ia3d)
o (*) Intra-(H)CANCO starting from HA and with CO detection (c_hcancoi_3d)
o Intra-(H)CANCO starting from HA and with CO detection and with IPAP for
virtual decoupling (c_hcancoi_ia3d)
· 3D HNCA
o (*) With CA detection (c_hnca_3d)
o With CA detection and with DIPAP for virtual decoupling (c_hnca_ia3d)
· 3D HNCO
o (*) With CO detection (c_hnco_3d)
o With CO detection and with IPAP for virtual decoupling (c_hnco_ia3d)
· 3D (H)NCACO
o (*) With CO detection (c_hncaco_3d)
o With CO detection and with IPAP for virtual decoupling (c_hncaco_ia3d)
o With CO detection and with S3E for virtual decoupling (c_hncaco_s33d)
· 3D (H)NCOCA
o (*) With CA detection (c_hncoca2_3d)
o With CA detection and with DIPAP for virtual decoupling (c_hncoca2_ia3d)
o (*) (H)N(CO)CACO with CO detection (c_hncoca_3d)
o (H)N(CO)CACO with CO detection and with IPAP for virtual decoupling
(c_hncoca_ia3d)
(*) NOTE: These pulse programs have been moved to pp.dextra directory

For Sidechain Assignments
· 3D HCC CT-TOCSY (c_hccflopsy16_3d)

· 3D HCBCA
o (*) With CA detection (c_hcbca_3d)
o With CA detection and with DIPAP for virtual decoupling (c_hcbca_ia3d)
· 3D HCB(CA)CO
o (*) With CO detection (c_hcbcaco_3d)
o With CO detection and with IPAP for virtual decoupling (c_hcbcaco_ia3d)
o With CO detection and with S3 E for virtual decoupling (c_hcbcaco_s33d)
· 3D CBCACO
o (*) With CO detection (c_cbcaco_3d)
o With CO detection and with IPAP for virtual decoupling (c_cbcaco_ia3d)
o With CO detection and with S3 E for virtual decoupling (c_cbcaco_s33d)
· 3D CCCO
o With CO detection and with IPAP for virtual decoupling (c_ccco_ia3d)
o With CO detection and with S3 E for virtual decoupling (c_ccco_s33d)
· 3D CBCACON
o With CO detection and with IPAP for virtual decoupling (c_cbcacon_ia3d)
· 3D CCCON
o With CO detection and with IPAP for virtual decoupling (c_cccon_ia3d)
· 3D CBCANCO
o With CO detection and with IPAP for virtual decoupling (c_cbcanco_ia3d)
· 3D (H)CBCAN
o (*) With CA detection (c_hcbcan_3d)
o With CA detection with DIPAP for virtual decoupling (c_hcbcan_ia3d)
(*) NOTE: These pulse programs have been moved to pp.dextra directory

13
2D C-13C COSY Experiment
The 2D CC COSY experiment allows to CC-COSY

1
JCC
obtain a homonuclear CC correlation
mapto trace out through-bond
H C H H C H
carbon-carbon connectivities in
13C-labeled proteins N C C N C C
1 O
H O H
H H
C C
t1 t2
Related Experiments
c_cosy
2D COCA
2D CC and 3D HCC TOCSY 13 d0 d0
Cali d1
p11 p12 p11
References: sp23 sp24 sp25
1. T.E. Machonkin, W.M. Westler & J.L Markley, 13
J. Am. Chem. Soc. 124, 3204-3205 (2002) CO
2. W. Bermel, I. Bertini, I.C. Felli, R. Kuemmerle & p12 p12
sp26 sp26
R. Pierattelli, J. Am. Chem. Soc. 125, 16423-16429 1
H
WALTZ
(2003)
pl12
15
N GARP
pl16
d24=1/4J(CC)=5ms
c_cosy_ct
13
c_cosy2_ct
Cali d1 d0 d24 d24-d0
p11 p12 p11
sp23 sp24 sp25
13 13 d1 d24+d0 d24-d0
CO C
p24
p12 p12 sp7
sp26 sp26
1 1
H WALTZ
H
WALTZ
pl12 pl12
15
N GARP
15
N GARP
pl16 pl16

13
2D C-13C NOESY Experiment
CC-NOESY
NOE (13C-13C) C
The 2D CC NOESY experiment allows to
obtain a homonuclear CC correlation H C H H C H
mapto trace out through-space
carbon-carbon interactions in N C C N C C
13C-labeled proteins O O
H H H H
Related Experiments
1
2D CC COSY and 2D CC TOCSY
C C
c_ccnoesy t1 t2
13
c_ccnoesy2
C d1 d0 d0 d8
13
13
C d1 d0 d8
CO
p12 p12 1
1 sp26 sp26 H
H WALTZ WALTZ
WALTZ WALTZ
pl12
pl12 15
15
N GARP GARP
N GARP GARP
pl16
pl16
Gz
Gz G1
G1
c_ccnoesy_ct
d8=NOE mixing time
d27=1/2J(CACB)=13.3ms
13
Cali
d1 d0 d27 d27-d0 d8
p11 p12 p11 p11
sp23 sp24 sp25 sp23
References:
13
CO 1. W. Bermel, I. Bertini, I.C. Felli, R. Kuemmerle &
p12 p12 R. Pierattelli, J. Am. Chem. Soc. 125, 16423-16429
1
H sp26 sp26
(2003)
WALTZ WALTZ 2. I. Bertini, I.C. Felli, R. Kuemmerle, D. Moskau &
pl12
15
N R. Pierattelli, J. Am. Chem. Soc. 126, 464-465
GARP GARP (2004)
pl16
Gz
G1

13
2D C-13C TOCSY Experiment
The 2D CC TOCSY experiment is a 13C-start, 13C-detected TOCSY scheme that allows to trace
out through-bond CC connectivities via 1J(CC) in 13C-labeled proteins. Homonuclear CC
splitting in the acquisition dimension can be removed by selective homonuclear decoupling
during acquisition or virtually using the DIPAP approach (05JMR404).
1
CC-TOCSY
C C
S1JCC
t1 t2
1 2
H C H
C C C
H C H t1 t2
1 2 3
H
N C C
C C C C
H t1 t2
O
NMR Spectrum
The experiment provides a 2D correlation map in which each cross-peak displays a doublet in
the acquisition dimension due to 1J(CC) coupling.
References:
1. A. Eletsky, O.Moreira, H. Kovacs & K. Pervushin, J. Biomol. NMR 26, 167-179 (2003)
2. ;W. Bermel, I. Bertini,L. Duma, I.C. Felli, L. Emsley, R. Pierattelli, P.R. Vasos,
Angew. Chem. Int. Ed. 44, 3089-3092 (2005)
3. L. Duma, S. Hediger, A. Lesage & L. Emsley, J. Magn. Reson. 164, 187-195 (2003) )
Related Experiments
2D CC COSY and 2D CC NOESY

3D carbon-detected HCC TOCSY
3D HCCH-type experiments

c_ccflopsy16
d9
13
C d1 d0 d0 d FLOPSY-16 d
pl10
13
CO
p12 p12
1 sp26 sp26
H
WALTZ WALTZ
pl12
15
N GARP GARP
pl16
Gz
G1 G2
d9=TOCSY mixing time

d27=1/2J(CACB)=13.3ms
or =1/8J(CACB)=3.6ms (DIPAP)
d22=1/4J(COCA)=4.5ms
d23=1/2J(CACB)=13.3ms (DIPAP)
c_ccflopsy16_ct
13 d9
Cali d d
d1 d0 d27 d27-d0 FLOPSY-16
p11 p12 p11 pl10 p11
sp23 sp24 sp25 sp23
13
CO
p12 p12
1
H sp26 sp26
WALTZ WALTZ
pl12
15
N
GARP GARP
pl16
Gz
G1 G2

c_ccflopsy16_ia
p11
d9 sp23
13
Cali d1 d0 d0 d FLOPSY-16 d d27 d27
pl10 p12 p25
sp29 sp28
13
CO d
p12 p12 p12 p12
sp26 sp26 sp27 sp27
1
H
WALTZ WALTZ
pl12
15
N GARP GARP
pl16
Gz
G1 G2
c_ccflopsy16_ctia
p11
sp23
d9
13
Cali d1 d0 d23 d23-d0 d FLOPSY-16 d d27 d27
p11 p12 p11 pl10 p12 p25
13
CO
p12 p12 p12 p12
sp26 sp26 sp27 sp27
1
H WALTZ WALTZ
pl12
15
N GARP GARP
pl16
Gz
G1 G2

2D CAN Experiment
The 2D CAN experiment is a CA-detected experiment that allows the correlation between the
chemical shifts of the CA(i) carbon with the Nitrogen of the same (i) and the next (i+1) residue
in doubly-labeled 13C/15N proteins. Homonuclear CO-CA splitting in the acquisition dimension
can be removed by homonuclear decoupling during acquisition or virtually using the IPAP
approach (05JMR404).
1
JCAN CAN
2
JCAN
H C H H C H
N C C N C C
O O
H H H H
NMR Spectrum
The experiment provides a 2D correlation map in which each CA in the acquisition dimension
is correlated to two different N chemical shifts.
Related Experiments
3D HCAN
References:
W. Bermel, I. Bertini,L. Duma, I.C. Felli, L. Emsley, R. Pierattelli, P.R. Vasos, Angew. Chem. Int. Ed
44, 3089-3092 (2005)
1 2
CA N CA
t1 t2
c_can_mq
13
Ca d1 d23 d23
p11 p12
sp23 sp24
15
N d0 d0 GARP
pl16
1
H WALTZ
pl12

c_can_mq.2
13
Ca d1 d23 d23
p11 p12
sp23 sp24
15
N d0 d0 GARP
pl16
1
H WALTZ
pl12
d27=1/8J(CACB)=3.6ms
d23=1/2J(CAN)=25ms (in mq experiments)
or =1/4J(CAN)=12.4ms (in sq experiments)
c_can_iasq
13 d23- d23- d27+ d27- d27+ d27-

Ca d1 d23 d23 d27*2 d27*2 d22 d22 d22 d22
p11 p12 p11 p8 p11 p25 p12 p25
15
N d0 d0 GARP
pl16
13
CO
p8 p12 p12
sp13 sp26 sp26
1
H WALTZ WALTZ
pl12
Gz
G1

2D CACO Experiment
The 2D CACO experiment is a CO-detected that allows the correlation between the chemical
shifts of the CA and CO carbons of the same residue in 13C-labeled proteins.
Homonuclear CO-CA splitting in the acquisition dimension can be removed by homonuclea
decoupling during acquisition or virtually using the IPAP approach (05JMR404).
1 CACO
JCOCA
H C H H C H
N C C N C C
O O
H H H H
The CACO experiment can be driven in a out-and-stay way (c_caco) or using a

out-and-back transfer (c_coca_mq).
NMR Spectrum
The experiment provides a 2D correlation map in which each cross-peak

displays a doublet in the acquisition dimension due to 1J(CACO) coupling
References:
W. Bermel, I. Bertini,L. Duma, I.C. Felli, L. Emsley, R. Pierattelli, P.R. Vasos, Angew. Chem. Int. Ed.
44, 3089-3092 (2005)
Related Experiments
2D COCA
3D HCACO
CA CO
t1 t2

c_caco
13 d1 d22+d0 d0 d22-2d0
Ca
p11 p25 p11 p12 p12
13
CO d d22 d22
p12 p12 p11 p12
sp26 sp26 sp23 sp24
1
H WALTZ
pl12
15
N GARP
pl16
Gz
G1
c_caco_ia AP
p12 p12
sp27 sp27
13
Ca d1 d22+d0 d0 d22-2d0 IP
p11 p25 p11 p12 p12
13
CO d d22 d22
p12 p12 p11 p12
sp26 sp26 sp23 sp24
1
H WALTZ
pl12
15
N GARP
pl16
Gz
G1
c_caco_s3
13 d1 d22+d0 d0 d22-2d0
Ca
p11 p25 p11 p12 p12
sp28 p11
sp23 sp25 sp27 sp27
sp23
13
CO d d22/2 d22/2
p12 p12 p11 p12 p11
1
H WALTZ
pl12
15
N GARP
pl16
Gz
G1

1 2 References:
1. M. Kostic, S.S. Pochapsky & T.C. Pochapsky,
CO CA CO J. Am. Chem. Soc. 124, 9054-9055 (2002)
t1 t2 2. W. Bermel, I. Bertini, I.C. Felli, R. Kuemmerle &
R. Pierattelli, J. Am. Chem. Soc. 125, 16423-16429 (2003)
c_coca_mq
13
Ca d0 d0
p11 p11
sp23 sp25
13
CO d1 d22*2 d22*2
p11 p12
1 sp23 sp26
H
WALTZ
pl12
15
N GARP
pl16
c_coca_mq.2
13
Ca d0 d0
p11 p12 p11

sp23 sp24 sp25
13
CO d1 d22*2 d22*2
p11 p12 p12 p12
1 sp23 sp26 sp26 sp26
H
WALTZ
pl12
15
N GARP
pl16

2D COCA Experiment
The 2D COCA experiment is the equivalent CA-deteted experiment of the CO-detected CACO experiment
References:
44, 3089-3092 (2005)
1
CO CA
t1 t2
c_coca
13 d1 d22+d0 d0 d22-2d0
CO
p11 p12 p11
sp23 sp24 sp25 p11
sp23
13
Ca d
p12 p12
sp26 sp26
1
H WALTZ
pl12
15
N GARP
pl16
Gz
G1
c_coca_ia
13 d1 d22+d0 d0 d22-2d0
CO
p11 p12 p11 p12 p12
sp23 sp24 sp25 p11 sp27 sp27
sp23
13
Ca d d27 d27
p12 p12 p12 p25
sp26 sp26 sp29 sp28
1
H WALTZ
pl12
15
N GARP
pl16
Gz
G1

2D CON Experiment
The 2D CON experiment is a CO-detected experiment that allows the correlation between the chemical shifts
of the carbonyl CO carbo and the amide N of the next residue in doubly 13C/15N-labeled proteins.
Homonuclear CO-CA splitting (55Hz) in the acquisition dimension can be removed by homonuclear decoupling
during acquisition or virtually using the IPAP approach.
Related Experiments 1 CON

JCON
3D HNCO H C H H C H
N C C N C C
NMR Spectrum
O O
H H H H
The experiment provides a 2D correlation map in which each
cross-peak corresponds to the CO-N bond connectivity
References:
1. M. Kostic, S.S. Pochapsky & T.C. Pochapsky, J. Am. Chem. Soc. 124, 9054-9055 (2002)
2. W. Bermel, I. Bertini,L. Duma, I.C. Felli, L. Emsley, R. Pierattelli, P.R. Vasos, Angew. Chem. Int. Ed.
44, 3089-3092 (2005))
d23=1/2J(NCO)=25ms (in mq experiments)

or =1/4J(NCO)=12.5ms (in sq experiments)
c_con_mq
13
CO d1 d23 d23
1 2 p11 p12
sp23 sp24
CO N CO 15
N d0 d0 GARP
t1 t2
pl16
1
H WALTZ
pl12

c_con_mqia IP
13
CO d23 d23
13
CO d1 d23 d23 p12
p11 p12 p12 IP sp24
sp23 sp24 sp24 AP 13
CA
13
CA p12 p12
sp26 sp26
AP
15
N d0 d0 GARP 13
CO d23 d23
pl16
p12
1 sp24
H WALTZ 13
pl12 CA d22
p12 p12
sp26 sp26
c_con_sq
13
CO d1 d23 d23 d23 d23
p11 p12 p11 p8 p11 p12
15 d d0 d0
N GARP
pl16
1
H WALTZ
pl12
Gz
G1
c_con_iasq
13
CO d1 d23 d23 d23 d23
p11 p12 p11 p8 p11 p12
13 IP
CA AP
p8 p12 p12
sp13 sp26 sp26
15 d d0 d0
N GARP
pl16
1
H WALTZ
pl12
Gz
G1

3D HCC-TOCSY Experiment
The 3D HCC-TOCSY experiment is a C-detected experiment that allows the correlation between
all sidechain 1H and aliphatic 13C of the same residues in 13C-labeled proteins.
HCC-TOCSY
1
JCC+S1JCC
H C H
H C H
H
N C C
H O
NMR Spectrum

correspond to a HC-C connectivity.
C
C
References:
Z. Serber, C. Richter & V. Doetsch, ChemBioChem. 2, 247-251 (2001)
Related Experiments
2D CC COSY and CC-TOCSY experiment

1 2
H C C
t1 t2 t3
c_hccflopsy16_3d
d9
13
C d10 d3/2 d3/2 d10 d3/2 d3/2 d FLOPSY-16 d
p12 pl10
sp24
13
CO
p12 p12
d4+ (1-k) d4- sp26 sp26
1
H d1 d0 d0 kd0 d
WALTZ
pl12
15
N GARP
pl16
Gz
G1 G2 G2 G2 G2 G3 G4
d9 is the TOCSY mixing time

d3=1/6J(CH)=0.95ms
d4=1/4J(CH)=1.8ms

3D HCBCA Experiment
The 3D HCBCA experiment is a carbon-detected experiment that allows to obtain the sidechain
H, CB and CA connectivities in 13C-labeled proteins. Homonuclear CO-CA splitting in the
acquisition dimension can be removed by homonuclear decoupling during acquisition or
virtually using the IPAP approach (05JMR404).
HCBCA
1
JCH+S1JCC
H C H
H C H
H
N C C
H O
NMR Spectrum
The experiment provides a 3D correlation map in which each cross-peak displays a doublet in the
acquisition dimension due to 1J(CACO) coupling
Hali
Cali
CA
References:
1. W. Bermel, I. Bertini,L. Duma, I.C. Felli, L. Emsley, R. Pierattelli, P.R. Vasos, Angew. Chem. Int. Ed.
44, 3089-3092 (2005)
2. L. Duma, S. Hediger, A. Lesage & L. Emsley, J. Magn. Reson. 164, 187-195 (2003)
Related Experiments
2D CC TOCSY
3D HCC TOCSY

1 2
H C C
t1 t2 t3
c_hcbca_3d
13 d10 d25
Cali d25 d25-d10 d25
p12 p11 p12 p11 p12 p11
sp25 p11
sp23
13
CO d
p12 p12
sp26 sp26
1 d4+ (k-1) d4-
H d1 d0 d0 kd0 d d3
WALTZ
pl12
15
N GARP
pl16
Gz
G1 G2
d3=1/6J(CHA)=1.1ms
d4=1/4J(CHA)=1.8ms
c_hcbca_ia3d
p11
sp23
13 d10 d25
Cali d25 d25-d10 d25
p12 p11 p12 p11 p12 p11 p12 p25
13
CO d d27 d27 d27 d27
p12 p12 p12 p12
sp26 sp26 sp27 sp27
1 d4+ (k-1) d4-

H d1 d0 d0 kd0 d d3
WALTZ
pl12
15
N GARP
pl16
Gz
G1 G2

3D HCBCACO Experiment
The 3D HCBCACO experiment is a CO-detected that allows the correlation between the
chemical shifts of the sidechain protons and the CB, CA and CO carbons of the same residue
in 13C-labeled proteins. Homonuclear CO-CA splitting in the acquisition dimension can be
removed by homonuclear decoupling during acquisition or virtually using the IPAP approach.
HCBCACO
1
JCH+S1JCC+1JCACO
H C H
H
N C C
H O
NMR Spectrum
Hali
Cali
CO
References:
W. Bermel, I. Bertini,L. Duma, I.C. Felli, L. Emsley, R. Pierattelli,

P.R. Vasos, Angew. Chem. Int. Ed. 44, 3089-3092 (2005)
Related Experiments
2D CC TOCSY
3D HCC TOCSY and HCBCA experiments
1 2 3 d25=1/8J(CACB)=4.0ms
HB CB CA CO d3=1/6J(CHA)=1.1ms
t1 t2 t3
d4=1/4J(CHA)=1.8ms

c_hcbcaco_3d
13
Cali d10 d25 d25-d10
p12 p11 p12 p11 p12 p11 p12 p12
13
CO d25 d25 d d22 d22
p12 p12 p12 p12 p11 p12
1 d4+ (k-1) d4-
H d1 d0 d0 kd0 d d3
WALTZ
pl12
15
N GARP
Gz pl16
G1 G2
c_hcbcaco_ia3d
AP
p12 p12
sp27 sp27
13
Cali d10 d25 d25-d10 IP
p12 p11 p12 p11 p12 p11 p12 p12
13
CO d25 d25 d d22 d22
p12 p12 p12 p12 p11 p12
1 d4+ (k-1) d4-
H d1 d0 d0 kd0 d d3
WALTZ
pl12
15
N GARP
pl16
Gz
G1 G2
c_hcbcaco_s33d
13
Cali d10 d25 d25-d10
p12 p11 p12 p11 p12 p11 p12 p12
p11
sp23
13
CO d25 d25 d d22/2 d22/2
p12 p12 p12 p12 p11 p12 p11
1 d4+ (k-1) d4-
H d1
d0 d0 kd0 d d3
WALTZ
pl12
15
N GARP
Gz pl16
G1 G2

3D CBCACO Experiment
The 3D CBCACO experiment is a CO-detected experiment that allows the correlation between
the chemical shifts of the sidechain CB, CA and CO carbons of the same residue in 13C-labele
proteins. Homonuclear CO-CA splitting in the acquisition dimension can be removed by
homonuclear decoupling during acquisition or virtually using the IPAP approach (05JMR404)
CBCACO
S1JCC+1JCBCA+1JCACO
H C H
H
N C C
H
O
NMR Spectrum

displays a doublet in the acquisition dimension due to 1J(CACO) coupling
CB
References:
CA
W. Bermel, I. Bertini, L. Duma, I.C. Felli, L. Emsley, R. Pierattelli, CO
& P.R. Vasos, Angew. Chem. Int. Ed. 44, 3089-3092 (2005)
Related Experiments
2D CC COSY and TOCSY

2D CACO
3D HCACO
c_cbcaco_s33d
13 d1 d0 d25 d25-d0 d25+ d25-

Cali d10 d10
p11 p12 p11 p12 p11 p12 p12
sp23 sp24 sp25 sp24 sp27 sp27 p11
sp23
sp23
13
CO d d22/2 d22/2
p12 p12 p12 p12 p11 p12 p11
1
H WALTZ WALTZ
pl12
15
N GARP GARP
pl16
Gz
G1

1 2
CB CA CO
t1 t2 t3
c_cbcaco_3d
13 d0 d25 d25+ d25-

Cali d1 d25-d0
d10 d10
p11 p12 p11 p12 p11 p12 p12
13
CO d d22 d22
p12 p12 p12 p12 p11 p12
1
H WALTZ WALTZ
pl12
15
N GARP GARP
pl16
Gz
G1
c_cbcaco_ia3d AP
p12 p12
sp27 sp27
13 d1 d0 d25 d25-d0 d25+ d25- IP
Cali d10 d10
p11 p12 p11 p12 p11 p12 p12
13
CO d d22 d22
p12 p12 p12 p12 p11 p12
1
H WALTZ WALTZ
pl12
15
N GARP GARP
pl16
Gz
G1

3D CCCO Experiment
CCCO W. Bermel, I. Bertini, I.C. Felli, R. Kuemmerle

& R. Pierattelli, J. Magn. Reson. 178, 56-64 (2006)
S1JCC+1JCACO
1 2 3
H C H
CD CB CA CO
H C H
t1 t1 t2 t3
H
N C C
H O d22: 1/(4J(COCa)) [4.5 msec]
c_ccco_ia3d AP
p12 p12
sp27 sp27
d22- d22-
13
Cali d1 d0 d0 d FLOPSY-16 d d10 d10
IP
p11 p12 p11 d9 p11 p25 p11 p12 p12
sp23 sp24 sp25 p6 sp23 sp28 sp25 sp27 sp27
pl10
13
CO d d22 d22
p12 p12 p12 p12 p11 p12
1
H WALTZ WALTZ
WALTZ
pl12
15
N GARP
pl16
Gz
G1 G2 G3
c_ccco_s33d
13 d0 d0 d22- d22-
Cali d1 d d
FLOPSY-16 d10 d10
p11 p12 p11 d9 p11 p25 p11 p12 p12
sp23 sp24 sp25 p11
p6 sp23 sp28 sp25 sp27 sp27
sp23
pl10
13
CO d d22/2 d22/2
p12 p12 p12 p12 p11 p12 p11
1
H WALTZ WALTZ
WALTZ
pl12
15
N GARP
pl16
Gz
G1 G2 G3

3D CCCON Experiment
CCCON
C
1
JCC+1JCACO+1JNCO W. Bermel, I. Bertini, I.C. Felli, R. Kuemmerle
H C H & R. Pierattelli, J. Magn. Reson. 178, 56-64 (2006)
H
H
N C C N
H
O
1 2 3 4 5
CD CB CA CO N CO
t1 t1 t2 t3
c_cccon_ia3d
AP
p12 p12
sp27 sp27
13 d1 d0 d0 IP
Cali d FLOPSY-16 d d22 d22 d22
p11 p12 p11 d9 p11 p25 p11 p12 p12 p12 p12
sp23 sp24 sp25 p6 sp23 sp28 sp25 sp27 sp27 sp27 sp27
pl10
13
CO d d23 d23 d22 d22
p12 p12 p12 p12 p11 p12 p11 p8 p11 p12
1
H WALTZ WALTZ d WALTZ
WALTZ
pl12
15
N d10 d10 GARP
pl16
Gz
G1 G2 G3 G4
d22: 1/(4J(COCa)) [4.5 msec]

d23: 1/(4J(NCO)) [12.5 msec]
d9 : TOCSY mixing time [12 msec]

3D CBCACON Experiment
The 3D CBCACON experiment is a CO-detected experiment that allows to assign intra-residue CA,
CB, CO and N chemical shifts in doubly-labeled 13C/15N proteins. Homonuclear CO-CA splitting in
the acquisition dimension can be removed by homonuclear decoupling during acquisition
or virtually using the IPAP approach.
W. Bermel, I. Bertini, I.C. Felli, R. Kuemmerle & R. Pierattelli, J. Magn. Reson. 178, 56-64 (2006)
1 2 3 4
CBCACON
CB CA CO N CO
1 t1 t1 t2 t3
JCBCA+1JCACO+1JNCO
H C H H
H
N C C N NMR Spectrum
H
O
CB/CA
d23=1/4J(CON)=12.5ms N
d25=1/8J(CACB)=5.0ms CO
c_cbcacon_ia3d AP
p12 p12
sp27 sp27
d25
13
Cali d1 d0 d25 -d0 d25 d25
d22
IP
p11 p12 p11 p12 p11 p12 p12 p12 p12
13
CO d d23 d23 d22 d22
p12 p12 p12 p12 p11 p12 p11 p8 p11 p12
sp26 sp26sp26 sp26 sp23 sp24 sp25 sp13 sp23 sp24
1
H WALTZ WALTZ WALTZ
pl12
15
N d10 d10 GARP
pl16
Gz
G1 G2

3D (H)CBCAN Experiment
The 3D (H)CBCAN experiment is a CA-detected experiment that allows to assign intra-residue CA,
CB and N chemical shifts in doubly-labeled 13C/15N proteins. Homonuclear CO-CA splitting in
the acquisition dimension can be removed by homonuclear decoupling during acquisition
or virtually using the IPAP approach.
References:
44, 3089-3092 (2005)
HCBCAN
1 2 3 4
1
JCH+S1JCC+1JCAN
HB CB CA N CA
H C H t1 t2 t3
N C C
H H O
NMR Spectrum
CB
N
CA
Related Experiments
3D HCC TOCSY

c_hcbcan_3d
13
Cali d0 d25 d25-d0 d25 d25 d d23 d23 d23 d23
p12 p11 p12 p11 p12 p11 p11 p25 p11 p8 p11 p25
13
CO
p12 p12 p8
sp26 sp26 sp13
1
H d1 d4 d4 d d3
WALTZ
pl12
15 d d10 d10 d
N GARP
pl16
Gz
G1 G2 G3 G4
d23=1/4J(NCA)=12.4ms
d27=1/8(CACB)=3.6ms
d3=1/6J(CHA)=1.1ms
d4=1/4J(CHA)=1.8ms
c_hcbcan_ia3d
13 d23- d23-
Cali d0 d25 d25-d0 d25 d25 d d23 d23 2d27 2d27 2d27 2d27
p12 p11 p12 p11 p12 p11 p11 p25 p11 p8 p11 p25 p12 p25
sp24 sp23 sp24 sp25 sp24 sp23 sp23 sp28 sp25 sp13 sp23 sp28 sp29 sp28
13
CO
p12 p12 p8 p12 p12
1
H d1 d4 d4 d d3
WALTZ
pl12
15 d d10 d10 d
N GARP
pl16
Gz
G1 G2 G3 G4

3D CO-Detected HCACO Experiment
The 3D HCACO experiment is a CO-detected experiment that allows the correlation between
the chemical shifts of the CA and CO carbons of the same residue in 13C-labeled proteins.
Homonuclear CO-CA splitting in the acquisition dimension can be removed by homonuclear
decoupling during acquisition or virtually using the IPAP approach (05JMR404).
Related Experiments 1
JHACA + 1JCACO HACACO
2D COCA H C H H C H
3D HA-detected HCACO
N C C N C C
NMR Spectrum
O O
H H H H
The experiment provides a 3D
correlation map in which each
cross-peak displays a doublet in the acquisition dimension due to 1J(CACO) coupling.
References:
1. Z. Serber, C. Richter, D. Moskau, J.-M. Boehlen, T. Gerfin, D. Marek, M. Haeberli, L. Baslgia,

F. Laukien, A.S. Stern, J.C. Hoch & V. Doetsch, J. Am. Chem. Soc. 122, 3554-3555 (2000)
2. W. Bermel, I. Bertini,L. Duma, I.C. Felli, L. Emsley, R. Pierattelli, P.R. Vasos, Angew. Chem.
Int. Ed. 44, 3089-3092 (2005).
3. K. Pervushin & A. Eletsky, J. Biomol. NMR 25, 147-152 (2003)
c_hcaco_3d
13
Ca d10 d22 d10 d22-2*d10
p12 p11 p25 p11 p12 p12
13
CO d d22 d22
p12 p12 p11 p12
sp26 sp26 sp23 sp24
1 d4 (k-1) d4-
H d1
+d0 d0 kd0
d
WALTZ
pl12
15
N GARP
pl16
Gz
G1 G2

1 2
HA CA CO
t1 t2 t3
c_hcaco_ia3d AP
p12 p12
sp27 sp27
13
Ca d10 d22 d10 d22-2*d10 IP
p12 p11 p25 p11 p12 p12
13
CO d d22 d22
p12 p12 p11 p12
sp26 sp26 sp23 sp24
1 d4 (k-1) d4-
H d1
+d0 d0 kd0 d
WALTZ
pl12
15
N GARP
pl16
Gz
G1 G2
d2=1/2J(CHA)=3.2ms
d3=1/6J(CHA)=1.1ms
d4=1/4J(CHA)=1.8ms
HA
CA
CO

c_hcaco_s33d
13
Ca d10 d22 d10 d22-2*d10
p12 p11 p25 p11 p12 p12
sp24 sp25 sp27 sp27 p11
sp23 sp28
sp23
13
CO d d22/2 d22/2
p12 p12 p11 p12 p11
1 d4 (k-1) d4-
H d1
+d0 d0 kd0 d
WALTZ
pl12
15
N GARP
pl16
Gz
G1 G2
c_hacaco_3d
13
Ca d22-d10 d22 d10
p11 p30 p11
sp23 sp30 sp25
13
CO
p11
sp23
1
H d1 d2 d0 d22-d0
p13 p13
sp19 sp20
15
N GARP
pl16

3D HCAN Experiment
The 3D HCAN experiment is a CA-detected experiment that correlates the CA-HA of a given
residue with the N chemical shift of the same and the next residue in doubly-labeled 13C/15N
proteins.
1
JCAHA +1JCAN HCAN
1
JCAHA +2JCAN
H C H H C H
N C C N C C
O O
H H H H
Related Experiments
2D CAN
3D HNCA
NMR Spectrum
A 3D H,N,C map is obtained
HA
N
CA
References:
1. W. Bermel, I. Bertini,L. Duma, I.C. Felli, L. Emsley, R. Pierattelli,

P.R. Vasos, Angew. Chem. Int. Ed. 44, 3089-3092 (2005)

1 2 3
HA CA N CA
t1 t2 t3
c_hcan_3d
13
Ca d23 d23 d23 d23
p12 p11 p25 p11 p8 p11 p25
1 d4 (k-1) d4-
H d1 +d0 d0 kd0 d d3
WALTZ
pl12
15 d d10 d10 d
N GARP
pl16
Gz
G1 G2 G3
d23=1/4J(NCA)=12.4ms
d3=1/6J(CHA)=1.1ms
d4=1/4J(CHA)=1.8ms
c_hcan_ia3d
13
Ca d23 d23 d23 d23 2d27 2d27
p12 p11 p25 p11 p8 p11 p25 p12 p25
13
CO
p12 p12
sp26 sp26
1 d4 (k-1) d4-
H d1
+d0 d0 kd0 d d3
WALTZ
pl12
15 d d10 d10 d
N GARP
pl16
Gz
G1 G2 G3

3D CANCO Experiment
The 3D CANCO experiment is a CO-detected experiment that allows the correlation betwee
the chemical shifts of the CA and the CO of the same and the previous residues and the N of
the same and the next residue in doubly-labeled 13C/15N proteins.
Homonuclear CO-CA splitting in the acquisition dimension can be removed by
homonuclear decoupling during acquisition or virtually using the IPAP approach.
1
JCAN + 1JNCO
2
JCAN + 1JNCO CANCO
H C H H C H
C N C C N C C
O O O
H H H H
Related Experiments
3D HNCACO experiment
3D intra-CANCO and (H)CANCO experiments
NMR Spectrum
CA
The experiment provides a 3D correlation map in which each
CA nucleus displays two different connectivities
References:
N
CO
1. I. Bertini, L. Duma, I.C. Felli, M. Fey, C. Luchinat, R. Pierattelli & P. Vasos,
Angew. Chem. Int. Ed. 43, 2257-2259 (2004)
2. W. Bermel, I. Bertini,L. Duma, I.C. Felli, L. Emsley, R. Pierattelli, P.R. Vasos,
Angew. Chem. Int. Ed. 44, 3089-3092 (2005)
1 2 d23=1/4J(NCA)=12.4ms
CA N CO d27=1/4J(NCO)=16.0ms
t1 t2 t3 d3=1/6J(CHA)=1.1ms
d4=1/4J(CHA)=1.8ms

c_canco_3d
13 d1 d0 d23 d23-d0
Ca
p11 p25 p11 p12
sp23 sp28 sp25 sp27
13
CO d27 d27
p12 p12 p12 p11 p12
1
H WALTZ WALTZ WALTZ
pl12
15 d d10 d27 d27-d10 d

N GARP
pl16
Gz
G1 G2
d27-
AP d22 d22
c_canco_ia3d
p12
sp27
13 d1 d0 d23 d23-d0
Ca IP d27/2 d27/2 d27/2 d27/2
p11 p12 p11 p12 p12 p12
13
CO
p12 p12 p12 p11 p12
1
H WALTZ WALTZ WALTZ
pl12
15 d d10 d27 d27-d10 d

N GARP
pl16
Gz
G1 G2
d27-
c_canco_ia3d.2 AP d22 d22
p12
sp27
13 d1 d0 d23 d23-d0
Ca IP d27/2 d27/2 d27/2 d27/2
p11 p12 p11 p12 p12 p12
13
CO
p12 p12 p12 p11 p12
1
H WALTZ WALTZ WALTZ
pl12
15 d d10 d27 d27-d10 d

N GARP
pl16
Gz
G1 G2

3D (H)CANCO Experiment
1
JCAHA +1JCAN + 1JNCO
1
Variant of the CANCO experiment JCAHA2JCAN + 1JNCO (H)CANCO
that starts from the HA protons.
H C H H C H
1 2 3 C N C C N C C
HA CA N CO O O O
H H H H
t1 t2 t3
c_hcanco_3d
13 d0 d23 d23-d0
Ca
p12 p11 p25 p11 p12
13
CO d27 d27
p12 p12 p12 p11 p12
1 d4 d4
H d1 d3
WALTZ WALTZ
pl12
15
N d d d10 d27 d27-d10 d
GARP
pl16
Gz
G1 G2 G3
c_hcanco_ia3d d27-
AP d22 d22
p12
sp27
13 d23-d0
Ca d0 d23 IP d27/2 d27/2 d27/2 d27/2
p12 p11 p12 p11 p12 p12 p12
13
CO
p12 p12 p12 p11 p12
1 d4 d4
H d1 d3
WALTZ WALTZ
pl12
15
N d d d10 d27 d27-d10 d
GARP
pl16
Gz
G1 G2 G3

3D intra-CANCO Experiment
2
JCAN + 1JNCO intra-CANCO
Variant of the CANCO experiment that
provides exclusively intra-residue
CANCO connectivities. H C H H C H
C N C C N C C
1. W. Bermel, I. Bertini, I.C. Felli, R. Pierattelli &
P. Vasos, J. Magn. Reson. 172, 324-328 (2005) O O O
H H H H
2. W. Bermel, I. Bertini,L. Duma, I.C. Felli, L. Emsley,
R. Pierattelli, P.R. Vasos, Angew. Chem. Int. Ed. 44,
3089-3092 (2005)
1 2 d22: 1/(4J(COCa)) = [4.5 msec]
d23: 1/(4J(NCa)) and 1/(2J(CaCb)) = [13.3 msec]
CA N CO d27: 1/(4J(NCO)) = [16.0 msec]
t1 t2 t3
c_cancoi_3d
13 d1
Ca d22+d0 d23-d22 d23-d0 d22
p11 p25 p11 p8 p12 p12
13
CO d27 d27
p12 p12 p8 p11 p12
1
H WALTZ WALTZ
WALTZ
pl12
15 d d10 d10 d
N GARP
pl16
Gz
G1 G2
d27-
AP d22 d22
c_cancoi_ia3d
p12
sp27
13 d1
Ca d22+d0 d23-d22 d23-d0 IP d27/2 d27/2 d27/2 d27/2
p11 p12 p11 p8 p12 p12
13
CO
p12 p12 p8 p11 p12
1
H WALTZ WALTZ WALTZ
pl12
15 d d10 d10 d
N GARP
pl16
Gz
G1 G2

1
JCAHA +2JCAN + 1JNCO intra-(H)CANCO
3D intra-(H)CANCO Experiment
Experiment Description H C H H C H
C N C C N C C
Variant of the intra-CANCO experiment
that starts from the HA protons. O O O
H H H H
;d3 : 1/(6J(HCa)) [1.1 msec]

1 2 3
;d4 : 1/(4J(HCa)) [1.8 msec]
CA ;d22: 1/(4J(COCa)) [4.5 msec]
HA N CO
;d23: 1/(4J(NCa)) and 1/(2J(CaCb)) [13.3 msec]
t1 t2 t3
;d27: 1/(4J(NCO)) [16.0 msec]
c_hcancoi_3d
13
Ca d0 d22 d23-d22 d23-d0 d22
p12 p11 p25 p11 p8 p12 p12
13
CO d27 d27
p12 p12 p8 p11 p12
1
H d1 d4 d4 d
WALTZ
pl12
15 d d10 d10 d
N GARP
pl16
Gz
G1 G2 G3
c_hcancoi_ia3d
AP
IP
13
Ca d0 d22 d23-d22 d23-d0 d22
p12 p11 p12 p11 p8 p12 p12
13
CO d27 d27
p12 p12 p8 p11 p12
1 d1 d4 d4
H WALTZ
pl12
15 d d d10 d10 d
N GARP
pl16
Gz
G1 G2 G3

3D CBCANCO Experiment
Variant of the CANCO experiment CBCANCO

incorporating an initial CB-CA transfer 1
JCBCA+1JCAN+1JNCO
The experiment
1
provides intra- and inter-residue JCBCA+2JCAN+1JNCO H C H H
between CB,CA and CO,N connectivities
C N C C N
References:
O H H
O
W. Bermel, I. Bertini, I.C. Felli, R. Kuemmerle
& R. Pierattelli, J. Magn. Reson. 178, 56-64 (2006)
1 2 3
CB CA N CO
t1 t1 t2 t3
d23=1/4J(NCA)=12.4ms
d22=1/4J(COCA)=4.5ms CB/CA
d27=1/4J(NCO)=16.0ms
d3=1/6J(CHA)=1.1ms
d4=1/4J(CHA)=1.8ms N
CO
d27-
c_cbcanco_ia3d AP d22 d22
p12
sp27
13 d1 d0 d25 d25
Ca -d0
d23 d23 IP d27/2 d27/2 d27/2 d27/2
p11 p12 p11 p12 p11 p12 p12 p12
13
CO
p12 p12 p12 p11 p12
1
H WALTZ WALTZ WALTZ
pl12
15 d d10 d27 d27-d10 d

N GARP
pl16
Gz
G1 G2

3D CA-detected HNCA Experiment
The 3D CA-detected HNCA experiment is an out-and-stay version of the conventional

HNCA experiment
1 2
H N CA
t1 t2 t3
1
JHN + 1JNCA HNCA
1 2
JHN + JNCA
H C H H C H
N C C N C C
O O
H H H H
NMR Spectrum
The experiment provides the same 3D HNCA correlation map

HN
N
CA
References:
44, 3089-3092 (2005)
Related Experiments.
3D HA-Detected HNCA

c_hnca_3d
y
y -y y
1 d26+ d0 d26-
H d1
d0 (k-1) kd0 d d21
WALTZ WALTZ
p29 p26 pl12
sp11
15N d23/2 d23/2 d23/2 d23/2
d
+d10 +d10 -d10 -d10 GARP
pl16
13
Ca d23 d23
p12 p11 p12

sp24 sp23 sp24
13C´
p12 p12
sp26 sp26
GZ
G1 G2
d21=1/2J(NH)=5.5ms
d23=1/4J(NCA)=12.4ms
d26=1/4J(NH)=2.3ms
d27=1/8(CACB)=3.6ms
c_hnca_ia3d
y
y -y y
1
H d1 d26+ d0 d26- d d21
d0 (k-1) kd0 WALTZ WALTZ
p29 p26 pl12
sp11
15N d23/2 d23/2 d23/2 d23/2
d
+d10 +d10 -d10 -d10 GARP
pl16
13
Ca d23- d23-
2d27 2d27
2d27 2d27
p12 p25 p12 p25
p11
13C´
p12 p12 p12 p12

sp26 sp26 sp26 sp26
GZ
G1 G2

3D CO-detected HNCO Experiment
The 3D CO-detected HNCO experiment is an out-and-stay version of the conventional

HNCO experiment
1 2
H N CO
t1 t2 t3
1
JHN + 1JNCO HNCO
H C H H C H
N C C N C C
O O
H H H H
NMR Spectrum
The experiment provides the same 3D HNCO correlation map

HN
N
CO
References:
44, 3089-3092 (2005)
3D HN-Detected HNCO

c_hnco_3d
y
y -y y
1
H d1 d26+ d0 d26- d d21
p29 p26 pl12
sp11
15N d23/2 d23/2 d23/2 d23/2
d
+d10 +d10 -d10 -d10 GARP
pl16
13C´
d23 d23
p12 p11 p12

sp24 sp23 sp24
13
Ca
p12 p12
sp26 sp26
GZ
G1 G2
d21=1/2J(NH)=5.5ms
d23=1/4J(NCA)=12.4ms
d27=1/8(CACB)=3.6ms
c_hnco_ia3d
y
y -y y
1
H d1 d26+ d0 d26- d d21
p29 p26 pl12
sp11
15N d23/2 d23/2 d23/2 d23/2
d
+d10 +d10 -d10 -d10 GARP
pl16
13C´
d23 d23
p12 p11
p12
sp24 sp23
IP sp24
13
Ca
p12 p12 p12 p12
sp26 sp26 sp26 sp26
d22 AP
GZ p12
sp26
G1 G2

3D CO-detected (H)NCACO Experiment
1
JHN + 1JNCA + 1JCOCA
The 3D CO-detected HNCACO 1
JHN + 2JNCA + 1JCOCA (H)NCACO
experiment is an out-and-stay version
of the conventional1H-detected
H C H H C H
HNCACO experiment. Each nitrogen
is correlated to CA and CO carbons
N C C N C C
of the same and the previous residue.
O O
H H H H
NMR Spectrum
CA
References: CO
44, 3089-3092 (2005)
3D HN-Detected HNCACO
c_hncaco_3d
y
y -y y -y y
1
H d1 d26 d26 d d21 WALTZ WALTZ WALTZ
p29 p26 pl12
sp11
15N d23/2 d23/2 d23/2 d23/2
d
+d0 +d0 -d0 -d0 GARP
pl16
13
Ca d22+
d10
d23-
d22
d23-
d10 d
p12 p11 p25 p11 p12 p12

13C´
d22 d22
p12 p12 p12 p12 p11 p12

GZ
G1 G2 G3

1 2 3
d21=1/2J(NH)=5.5ms
H N CA CO d23=1/4J(NCA)=12.4ms
d26=1/4J(NH)=2.3ms
t1 t2 t3
c_hncaco_ia3d
y
y -y y -y y
1
p29 p26 pl12
sp11
15N d23/2 d23/2 d23/2 d23/2
d
pl16
AP
p12 p12
sp27 sp27
13
Ca d22+
d10
d23-
d22
d23-
d10 d IP
p11
p12 p12
p12 p11 p25
13C´
d22 d22
p12 p12 p12 p12 p11 p12

GZ
G1 G2 G3
c_hncaco_s33d
y
y -y y -y y
1
p29 p26 pl12
sp11
15N d23/2 d23/2 d23/2 d23/2
d
pl16
13
Ca d22+
d10
d23-
d22
d23-
d10 d
p12 p11 p25 p11 p12 p12 p11

13C´
d22/2 d22/2
p12 p12 p12 p12 p11 p12 p11

GZ
G1 G2 G3

3D CO-detected (H)NCOCA Experiment
The 3D (H)N(CO)CACO is the CO-detected equivalent of the HNCOCA experiment,

in which a nitrogen nucleus is correlated to the CO and CA carbons of the previous
residue.
1
JHN + 1JNCO + 1JCOCA
(H)N(CO)CACO
H C H H C H
N C C N C C
O O
H H H H
NMR Spectrum
CA
CO
References:
44, 3089-3092 (2005)
3D HN-Detected HNCOCA
CA-detected (H)NCOCA

1 2 3 4 d21=1/2J(NH)=5.5ms
H N CO CA CO d23=1/4J(NCO)=12.4ms
t1 t2 t3 d26=1/4J(NH)=2.3ms
c_hncoca_3d
y
y -y y -y y -y y
1
H d1 d26 d26 d d21 WALTZ WALTZ WALTZ WALTZ
p29 p26 pl12
sp11
15N d23/2 d23/2 d23/2 d23/2
d
pl16
13C´ d23-
d22 d22 d23 d d22 d22
p12 p11 p12 p11 p12 p12 p11 p12

13
Ca d10 d10 d
p12 p12 p12 p12 p11 p12 p11 p12 p12

GZ
G1 G2 G3 G4
c_hncoca_ia3d
y
y -y y -y y -y y
1
H d1 d26 d26 d d21
WALTZ WALTZ WALTZ WALTZ
p29 p26 pl12
sp11
15N d23/2 d23/2 d23/2 d23/2
d
pl16
13C´ d23-
d22 d22 d23 d d22 d22
p12 p11 p12 p11 p12 p12 p11 p12

13
Ca d10 d10 d IP
p12 p12 p12 p12 p11 p12 p11 p12 p12
AP
GZ p12
sp26
p12
sp26
G1 G2 G3 G4

3D CA-detected (H)NCOCA Experiment
The 3D CA-detected HNCOCA experiment is an out-and-stay version of the conventional

1H-detected HNCOCA experiment. Each nitrogen is correlated to CA and CO carbons
of the same and the previous residue.
1
(H)NCOCA
H C H H C H
N C C N C C
O O
H H H H
NMR Spectrum
CO
CA
References:
44, 3089-3092 (2005)
Related Experiments
1H-detected HNCOCA
CO-detected (H)NCOCA
CANCO and i-CANCO

d21=1/2J(NH)=5.5ms
1 2 3 d22=1/4J(COCA)=4.5ms
d23=1/4J(NCA)=12.4ms
H N CO CA d26=1/4J(NH)=2.3ms
t1 t2 t3 d27=1/8(CACB)=3.6ms
c_hncoca2_3d
y
y -y y -y y
1
p29 p26 pl12
sp11
15N d23/2 d23/2 d23/2 d23/2
d
pl16
13C´ d22+ d23-

d10 d23 d10 d
p12 p11 p12 p11 p11

13
Ca
p12 p12 p12 p12
sp26 sp26 sp26 sp26
GZ
G1 G2 G3
c_hncoca2_ia3d
y
y -y y -y y
1
H d1 d26 d26 d d21
WALTZ WALTZ WALTZ
p29 p26 pl12
sp11
15N d23/2 d23/2 d23/2 d23/2
d
pl16
13C´ d22+ d23-

d10 d23 d10 d
p12 p11 p12 p11 p11 p12 p12

13 d27+ d27-
Ca d27+ d27-
d22/2 d22/2 d22/2 d22/2
p12 p12 p12 p12 p12 p25
GZ
G1 G2 G3

Summary of C-detected backbone CN experiments
1
JHN + 1JNCO HNCO
H C H H C H
N C C N C C
O O
H H H H
1
JHN + 1JNCA HNCA 1
JCAHA +1JCAN HCAN
1
JHN + 2JNCA 1
JCAHA +2JCAN
O O H O H
O
H H H H H H
1
1
JCAN + 1JNCO JHN + 1JNCA + 1JCOCA
2 1 1
JCAN + JNCO CANCO JHN + 2JNCA + 1JCOCA (H)NCACO
C N C C N C C C C
N C C N
O O O
H H H H O O
H H H H
1
2
JCAN + 1JNCO intra-CANCO
(H)NCOCA
C N C C N C C
N C C N C C
O O O
H H H H O
O H
H H H

BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
2D HSQC EXPERIMENTS FOR

THE MEASUREMENT OF T1, T2, T1RHO
RELAXATION TIMES AND
HETERONUCLEAR NOEs.

NMR Experiment: Relaxation Rates Measurement

Pulprog (3D mode) Parameter Set pp (2D mode) TROSY version
A1. hsqct1etf3gpsi3d HSQCT1ETF3GPSI3D hsqct1etf3gpsi3d trt1etf3gpsi3d
A2. hsqct1etf3gpsi3d.2 HSQCT1ETF3GPSI3D.2 hsqct1etf3gpsi3d.2
B1. hsqct2etf3gpsi3d HSQCT2ETF3GPSI3D hsqct2etf3gpsi3d trt2etf3gpsi3d
C1. hsqctretf3gpsi3d HSQCTRETF3GPSI3D hsqctretf3gpsi3d
C2. hsqctretf3gpsi3d.2 HSQCTRETF3GPSI3D.2
General Scheme
y y
Frec
1 d26 d26 d
H d24 d24 d26 d26 d d
p11
F1 Y
sp1
d25 d25
RELAX d25 d0 d0 d25
15
N BLOCK GARP
pl16
13
C optional
p8
sp13
Gz
G1 G3
G2 G2
A1 A2 B1 C1 C2
y -y
1
H DIPSI-2
d
pl19 d21
y y
15 d7 d d7 d
N d21 d21 d
loop loop cpds8

13 d20 d20 t1rho
C pl23 pl25
p30 p25
Gz
G4 G4 G5 G4

2D HSQC experiments for 1 3C Relaxation Measurements

(from f2 channel)
13
· Heteronuclear C-1 H NOEs:
Phase sensitive ge-2D 1 H-13 C HSQC to measure heteronuclear 13 C -1 H NOEs using PEP
(hsqcnoegpsi | HS QCN OEGP SI )
Phase sensitive ge-2D 1 H-13 C HSQC to measure heteronuclear 13 C -1 H NOEs using PEP and
refocusing adiabatic 13C pulses (hsqcnoegpsi.2 | HS Q CNOEG PSI )
· T1 (C):
Phase-sensitive ge-2D 1 H-13 C HSQC to measure 13 C T1 relaxation times using PEP, 180º 1 H pulses
and acquired as pseudo-3D (hsqct1etgpsi3d).
Phase-sensitive ge-2D 1 H-13 C HSQC to measure 13 C T1 relaxation times using PEP,180º 1 H pulses,
refocusing adiabatic 13C pulses and acquired as pseudo-3D (hsqct1etgpsi3d.2).
· T2 (C):
Phase-sensitive ge-2D 1 H-15 N HSQC to measure 13 C T2 relaxation times using PEP and refocusing
adiabatic 13C pulses (hsqct2etgpsi3d.2)
Also see:
T1 & T2 Relaxation
3D HNCO for Relaxation Measurements

hsqcnoegpsi
120º on y y
Frec
1
H d24 d24 d4 d4 d d
off
d1
y Y
13 d d25 d0 d0 d25
C GARP
p8 pl12
sp13
15
N optional
Gz
G3 G4 G2
G1 G1
hsqcnoegpsi.2
120º on y y
Frec
1
H d24 d24 d4 d4 d d
off
d1
y Y
13 d d25 d0 d0 d25
C GARP
p24 p24 p8 pl12
sp7 sp7 sp13
Gz
G3 G4 G2
G1 G1

hsqct1etgpsi3d
y -x -x y
Frec
1 d1 d4 d4 d
H d d24 d24 d4 d4 d d
F1 y y Y
13 d25 d25 d7 d25 d0 d0 d25

C GARP
p8 p8 pl12
sp13 sp13
15
N optional
Gz
G3 G4 G2
G1 G1
hsqct1etgpsi3d.2
y -x -x y
Frec
1 d1 d4 d4 d
H d d24 d24 d4 d4 d d
F1 y y Y
13 d25 d25 d7 d25 d0 d0 d25

C GARP
p14 p24 p24 p24 p8 pl12
Gz
G3 G4 G2
G1 G1
hsqct2etgpsi3d.2
y y
Frec
1 d1 d4 d4 d
H d24 d24 d4 d4 d d
F1 Y
13 d25 d25 d21 d21 d25 d10 d10 d25

C GARP
p14 p14 loop p14 p24 p14 pl12
sp3 sp3 d21 sp3 sp7 sp3
Gz d31
vclist
G3 G2
G1 G1

15
2D HSQC experiments for N Relaxation Measurements (from f3 channel)
15
· Heteronuclear N-1 H NOEs:
Phase sensitive ge-2D 1 H-15 N HSQC to measure heteronuclear 15 N-1 H NOEs using PEP
(hsqcnoef3gpsi | HS Q CNOEF3GP SI )
Phase sensitive ge-2D 1 H-15 N HSQC to measure heteronuclear 15 N-1 H NOEs using TROSY
(trnoef3gpsi | T RNOEF3GP SI )
· T1 (N):
Phase-sensitive ge-2D 1 H-15 N HSQC to measure 15 N T 1 relaxation times using PEP:

Using 1H-decoupling (hsqct1etf3gpsi | HS QCT 1ETF3G PS I)
Using 1H-decoupling acquired as pseudo-3D (hsqct1etf3gpsi3d | HSQ CT1ET F3GP SI 3D)
Using 180 1H pulses (hsqct1etf3gpsi.2 | HSQ CT1ET F3GP SI .2 )
Using 180 1H pulses acquired as pseudo-3D (hsqct1etf3gpsi3d.2 | HSQ CT1ET F3GP SI 3D.2 )
Phase sensitive ge-2D 1 H-15 N HSQC to measure 15N T 1 relaxation times using TROSY:
Using 1H-decoupling (trt1etf3gpsi | T RT1ET F3GP SI )
Using 1H-decoupling acquired as pseudo-3D (trt1etf3gpsi3d)
Using 180 1H pulses acquired as pseudo-3D (trt1etf3gpsi3d.2)
· T2 (N):
1 15 15
Phase-sensitive ge-2D H- N HSQC to measure N T 2 relaxation times using PEP:
Acquired as individual 2D data (hsqct2etf3gpsi | HSQ CT2ET F3GP SI ):
Acquired as pseudo-3D (hsqct2etf3gpsi3d | HS Q CT2ET F3GPS I3D )
Phase sensitive ge-2D 1 H-15 N HSQC to measure 15N T 2 relaxation times using TROSY:
Acquired as individual 2D (trt2etf3gpsi | T RT2ET F3GP SI )
Acquired as pseudo-3D (trt2etf3gpsi3d)
· T1rho (N):
Phase-sensitive ge-2D 1 H-15 N HSQC to measure 15 N T 1rho relaxation times using PEP:
Acquired as individual 2D data (hsqctretf3gpsi | HS QCT RET F3GPS I )
Acquired as pseudo-3D (hsqctretf3gpsi3d | HSQ CT RETF3G PS I3D )
With adiabatic ramping and acquired as pseudo-3D (hsqctretf3gpsi3d.2 |
HSQ CT RETF3G PS I3D .2 )
Phase-sensitive ge-2D 1 H-15 N HSQC to measure 15 N T 1rho relaxation times using TROSY:
Acquired as pseudo-3D (trtretf3gpsi3d)
· Rexcha nge (N):
Phase sensitive ge-2D 1 H-15 N HSQC to measure 15N-R(exchange) using PEP and Relaxation-
dispersion (hsqcrexetf3gpsi3d | HSQ CT REXE TF3GP SI 3d )
Phase sensitive ge-2D 1 H-15 N HSQC to measure 15N-R(exchange) using TROSY and Relaxation-
dispersion (trrexetf3gpsi3d)
Phase sensitive ge-2D 1 H-15 N HSQC to measure 15N-exchange
Using PEP (hsqcetexf3gp)
Using WATERGATE (hsqcexf3gpwgph)
Using TROSY (tretexf3gp)
· Cross-correlation:
Phase-sensitive ge-2D 1 H-15 N HSQC to measure N-15 / H-1 cross correlation (hsqcccf3gpphwg)

hsqcnoef3gpsi
120º on y
Frec
1
H d24 d24 d26 d26 d d
off
d1
y Y
p11
15 sp1 d d25 d0 d0 d25
N GARP
pl16
13
C optional
p8
sp13
Gz
G1 G3
G2 G2
trnoef3gpsi
y
Frec
120º on/off d26 d26 d26 d26
1 d y -x -x -x
H
d1 p11
y sp1 Y
15 d e d0 d0
N GARP
pl16
13
C optional
p8
sp13
Gz
G1 G2 G3 G3 G4 G4

hsqct1etf3gpsi3d
hsqct1etf3gpsi
y y
y -y Frec
1 d1 d26 d26 d DIPSI-2
H d24 d24 d26 d26 d d
p11 pl19
F1 y Y
sp1
15 d25 d25 d7 d d25 d0 d0 d25
N GARP
pl16
13
C optional
p8
sp13
Gz
G1 G4 G3
G2 G2
hsqct1etf3gpsi3d.2
hsqct1etf3gpsi.2
y y
Frec
1 d1 d26 d26 d
H d d24 d24 d26 d26 d d
p11
F1 y Y
sp1
15 d25 d25 d7 d25 d0 d0 d25

N GARP
pl16
13
C optional
p8
sp13
Gz
G1 G4 G3
G2 G2

trt1etf3gpsi
trt1etf3gpsi3d
y y
p11 Frec
sp1 d26 d26 d26 d26
1 d1 d26 d26 DIPSI-2 y -x -x -x
H
F1 pl19
y Y
15 d d25 d25 d7 d e d0 d0
N
13
C optional
p8
sp13
Gz
G1 G2 G2 G3 G3 G4 G5 G5 G6 G6
trt1etf3gpsi3d.2
y -y x/-x y
p11 Frec
sp1 d26 d26 d26 d26
1 d1 d26 d26 y -x -x -x
H
F1 y F2 Y
15 d d25 d25 d7 d e d0 d0
N
13
C optional
p8
sp13
Gz
G1 G2 G2 G3 G3 G4 G5 G5 G6 G6

hsqct2etf3gpsi
y y
Frec
1 d26 d26 d
H d24 d24 d26 d26 d d
pl23 F1 Y
15 d1 d25 d25 d21 d21 d25 d0 d0 d25

N GARP
loop pl16
loop d20
13 pl23
C optional
p30
p8
sp13
Gz
G1 G3
G2 G2
hsqct2etf3gpsi3d
y y
Frec
1
H d1 d26 d26 d d24 d24 d26 d26 d d
F1 Y
15
N d25 d25 d21 d21 d25 d10 d10 d25
GARP
loop pl16
d20
13
C optional pl23
p30
p8
sp13
Gz
G1 G3
G2 G2

trt2etf3gpsi
y y
Frec
1
-x d26 d26 d26 d26
H d26 d26 y -x -x -x
d
p11 F1
pl23 y y y y yy y y y yy y Y
sp1
15
N d1 d d25 d25 d21 d21 e d0 d0
loop
loop d20
13
C optional pl23
p30
p8
sp13
Gz
G1 G2 G2 G3 G4 G4 G5 G5 G6 G6
trt2etf3gpsi3d
y y
Frec
-x d26 d26 d26 d26
1 d26 d26 y -x -x -x
H d
p11 F1
y y y y yy y y y yy y Y
sp1
15 d1 d d25 d25 d21 d21 e d0 d0
N
loop
d20
13
C optional
pl23
p30
p8
sp13
Gz
G1 G2 G2 G3 G4 G4 G5 G5 G6 G6

hsqctretf3gpsi
y y
Frec
1 d26 d26 d
H d24 d24 d26 d26 d d
p11 d21
F1 Y
sp1
p25
15 pl25 d1 d25 d25 d25 d0 d0 d25
N GARP
loop pl16
loop d20
13 pl25
C optional
p25
p8
sp13
Gz
G1 G3
G2 G2
hsqctretf3gpsi3d
y y
Frec
1
H d1 d26 d26 d d24 d24 d26 d26 d d
p11 d21
F1 Y
sp1
15
N d25 d25 d25 d10 d10 d25
GARP
loop pl16
d20
13
C optional pl25
p25
p8
sp13
Gz
G1 G3
G2 G2

hsqctretf3gpsi3d.2
y y
Frec
1 d1 d26 d26 d
H d24 d24 d26 d26 d d
p11
F1 Y
sp1
15 d25 d25 d d d25 d10 d10 d25
N GARP
cpds8 pl16
t1rho
13
C optional
p8
sp13
Gz
G1 G5 G4 G6 G6 G7 G7 G3
G2 G2
trtretf3gpsi3d
y y
Frec
-x d26 d26 d26 d26
1 d26 d26 y -x -x
H d
-x
p11 F1
y y Y
sp1
15 d1 d d25 d25 e d0 d0
N
loop
d20
13
C optional pl25
p25
p8
sp13
Gz
G1 G2 G2 G3 G4 G4 G5 G5 G6 G6

hsqcrexetf3gpsi3d
y y
Frec
1 -x -x
H d1 d26 d26 d d24 d24 d26 d26 d d
F1 Y
15
N d25 d25 d d25 d10 d10 d25
GARP
pl16
13
C optional
p8
sp13
Gz
G1 G4 G4 G5 G3
G2 G2
trrexetf3gpsi3d
y y
Frec
-x -x -x d26 d26 d26 d26
1 d26 d26 y -x -x -x
H d
p11 F1
y Y
sp1
15 d1 d d25 d25 d e d0 d0
N
13
C optional
p8
sp13
Gz
G1 G2 G2 G3 G4 G4 G5 G5 G5 G6 G6

hsqcetexf3gp
y -x -x -x y
Frec
1 d1 d26 d26 d
H d24 d24 d26 d26 d d
p11
F1 Y
sp1
15 d25 d0 d0 d25 d25 d25
N GARP
pl16
13
C optional
p8
sp13
Gz
G1 G4 G3
G2 G2
hsqcexf3gpwgph
y -x -x -x
-x d26 Frec
d26
1 d1 d26 d26 d -x -x
H d
p11
F1
sp1
d26 (1-k) d26-
15 d25 d25
N +d0 *d0 k*d0
GARP
pl16
13
C optional
p8
sp13
Gz
G1 G2 G3 G4 G4

tretexf3gp
y -x -x -x y
Frec
d26 d26 d26 d26
1 d1 d d26 d26 y -x -x -x
H
p11
F1 Y
sp1
15 d25 d0 d0 d25
N
13
C optional
p8
sp13
Gz
G1 G2 G2 G3 G3 G4 G5 G5 G6 G6
hsqcccf3gpphwg
y
d26 d26 Frec
1 d1 d26 d26 -x -x
H
y F1 p11
sp1
15
N d d23 d23 d d25 d25 d0 d0 d
GARP
pl16
Gz
G1 G2 G2 G3 G4 G5 G5

BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
3D HNCO EXPERIMENTS FOR

THE MEASUREMENT OF T1, T2 AND T1RHO
RELAXATION TIMES.

15
3D HNCO experiments for N Relaxation Measurements
15
o Heteronuclear N-1 H NOEs:
3D HNCO to measure heteronuclear 15 N-1H NOEs using PEP (hnconoef3gpsi)
o T1 (N):
3D HNCO to measure 15 N T 1 relaxation times

Using PEP (hncot1f3gpsi)
Using TROSY (trhncot1f3gp)
o T2 (N):
3D HNCO to measure 15 N T 2 relaxation times

Using PEP (hncot2f3gpsi)
Using TROSY (trhncot2f3gp)
o T1rho (N):
3D HNCO to measure 15 N T 1rho relaxation times

Using PEP (hncotrf3gpsi)
Using TROSY (trhncotrf3gp)
o Rexcha nge (N):
3D HNCO to measure 15 N R exhan ge

Using PEP (hncorexf3gpsi)
Using TROSY (trhncorexf3gp)
Also see:
T1 & T2 Relaxation
2D HSQC Experiments for Relaxation Measurements

hnconoef3gpsi
120º on
y
y -y y -y
Frec
1 d d21 d26 d26 d26 d26 d d
H off
DIPSI-2 DIPSI-2
pl19 p26
d1 Y
p11
15N sp1 d23 d23 d23-d10 d23+d10
GARP
pl16
f1
13C´ d d0 d0 d
p14 p13 p14 p13 p14

sp3 sp2 sp3 sp8 sp3
13
Ca
p14 p14 p14 p14
sp5 sp5 sp5 sp5
GZ
G3 G4 G5 G1 G2
References:
V. Tugarinov, W.-Y. Choy, E. Kupce & L.E. Kay, J. Biomol. NMR 30, 347-352 (2004)

hncot1f3gpsi
-x -x
y y
y -y y -y
Frec
1 d1 d26 d26 d d d21 d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2 DIPSI-2
y pl19 p26
p1 p2 p11 -y Y
sp1
15N d25 d25 d7 d23 d23 d23-d10 d23+d10
GARP
p22 pl16
f1
13C´ d d0 d0 d
p14 p13 p14 p13 p14

sp3 sp2 sp3 sp8 sp3
13
Ca
p14 p14 p14 p14
sp5 sp5 sp5 sp5
GZ
G3 G4 G5 G6 G1 G2
trhncot1f3gp
-y -x -x -y
d26 d26 d26 d26 d26 d26 Frec

1 d1 -x -y -x -x
H d
p1 p11 p2 y f1 -y
-y
sp1
15N d25 d25 d7 d23 d23 d10 d23 d23-d10
p22 p21
13C´ d0 d0
p14 p14 p13 p14

sp3 sp3 sp8 sp3
13
Ca
p14 p14 p14
sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G1 G4 G2 G2G3 G3

hncot2f3gpsi
y y
y -y y -y
Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 y pl19 p26
Y
sp1
15N d25 d25 d23 d23 d23-d10 d23+d10
GARP
d28 p22 loop pl16

f1
p30 d28
13C´ pl23 p30 d d0 d0 d
pl23
p14 p13 p14 p13 p14
sp3 sp2 sp3 sp8 sp3
13
Ca
p14 p14 p14 p14
sp5 sp5 sp5 sp5
GZ
G3 G4 G5 G6 G1 G2
trhncot2f3gp
-y -y
d26 d26 d26 d26 d26 d26 Frec

1 d1 -x -y -x -x
H
p1 p11 p2 f1 -y
y
sp1
15N d25 d25 d d23 d23 d10 d23 d23-d10
d28 p22 p21 loop

p30 d28
13C´ d0 d0
pl23 p30
pl23
p14 p14 p13 p14
sp3 sp3 sp8 sp3
13
Ca
p14 p14 p14
sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G1 G4 G2 G2G3 G3

hncotrf3gpsi
y y
y -y y -y
Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 y pl19 p26
Y
sp1
15N d25 d25 d d23 d23 d23-d10 d23+d10
GARP
p22 loop pl16
f1
d20
13C´ pl25 d d0 d0 d
p25
p14 p13 p14 p13 p14
sp3 sp2 sp3 sp8 sp3
13
Ca
p14 p14 p14 p14
sp5 sp5 sp5 sp5
GZ
G3 G4 G5 G6 G1 G2
trhncotrf3gp
-y -y
d26 d26 d26 d26 d26 d26 Frec

1 d1 -x -y -x -x
H
p1 p11 p2 f1 -y
y
sp1
15N d25 d25 d d23 d23 d10 d23 d23-d10
p22 p21 loop

d20
13C´ pl25 d0 d0
p25
p14 p14 p13 p14
sp3 sp3 sp8 sp3
13
Ca
p14 p14 p14
sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G1 G4 G2 G2G3 G3

hncorexf3gpsi
y y
y -y y -y
-x -x Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 y pl19 p26
Y
sp1
15N d25 d25 d d23 d23 d23-d10 d23+d10
GARP
p22 p25 p25 pl16
f1
pl23 pl23
13C´ d d0 d0 d
p14 p13 p14 p13 p14

sp3 sp2 sp3 sp8 sp3
13
Ca
p14 p14 p14 p14
sp5 sp5 sp5 sp5
GZ
G3 G7 G7 G4 G5 G6 G1 G2
trhncorexf3gp
-y -y
d26 d26 -x -x d26 d26 d26 d26 Frec

1 d1 -x -y -x -x
H
p1 p11 p2 y f1 -y
sp1
15N d25 d25 d d23 d23 d10 d23 d23-d10
p22 p21 p25 p25

pl23 pl23
13C´ d0 d0
p14 p14 p13 p14

sp3 sp3 sp8 sp3
13
Ca
p14 p14 p14
sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G1 G4 G4 G5 G2 G2G3 G3


BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
PROTEIN NMR
COUPLING CONSTANTS


c2
f 3
J(CA-CD)
3
J(HN-HA) 3D HN(CO)Cali
3
c1
3D HNHA 3D HNCA[HA]-E.COSY J(HB-CD)
3
3
J(HB-HG) J(N-HB)
3D HNCA-DQZQ 2D CT-HMQC-J
3 3D HNHB
3 J(CA-HG)
J(HN-CB) 3
J(HA-HB)
3D HNHB[CB]-E.COSY Cd 3D HACAHB-COSY
3D HNCA[CB]-E.COSY
3D (H)CCH[HB]-E.COSY
H Cg H
3 3
J(HN-CO) c2 J(CO-CG)
3D (H)CANNH[CO]-E.COSY
H Cb H 3D HN(CO)C
c1
3D HNCA[CO]-E.COSY C N Ca C N Ca 3D (H)C(C)CH[CO]-E.COSY
3 f y w 3
J(N-CG)
J(CO-CB) O O
H H H
3D HNCG
3D HNCACB[CO]-E.COSY
y w
3
J(CO-HB)
3
J(CO-HA) 3 3D HC(C)H[CO]-E.COSY
J(N-N) 3
J(CA-CA)
3D (H)NCAHA[CO]-E.COSY 3
3D (H)NNH-TOCSY
3D HN(COCA)CA J(HA-CG)
3
3
J(CO-CO) J(HA-N) 3
J(CA-HN)
3D HCACO[N]-E.COSY
3D (HN)CO(CO)NH
3D HNCO[CA]-E.COSY
3D HNHB
3
J(CB-N)

PROTEIN NMR
COUPLING CONSTANTS
Phi Backbone Coupling Constant
· 3D HNHA experiment (hnhagp3d | HNHA G P3D ) - 3J(HN-HA) via quantitative-J

· 3D HNCA[HA,CB]-E.COSY (hncaecosgp3d | HN CA ECOSG P3D ) - 3J[H(N)-HA] and 3J[H(N)-CB]
via E.COSY
· 3D HNCA[HA]-E.COSY (hncaecosgp3d2 | HN CAEC OSG P3D 2 ) - 3J[H(N)-HA] via E.COSY
· 3D DQ/ZQ HNCA (hncadqzqgp3d | HNCA D QZ Q GP 3D ) - 3J[H(N)-HA] and 3J[H(N)-CB] via
DQ/ZQ
· 2D CT-HMQC-J (hmqcjgp | HMQ CJG P) - 3J[H(N)-HA] via J-modulation
· 3D HNHB[CB]-E.COSY (hnhbecosgp3d | HNHBECO SGP 3D ) - 3J[H(N)-CB] via E.COSY
· 3D HNCA[CB]-E.COSY (hncajcgp3d | HNCA JCG P3D ) - 3J[H(N)-CB] via E.COSY
· 3D (H)CANNH[CO]-E.COSY (hcannhgp3d | HCA NNHGP 3D ) - 3J[H(N)-CO] via E.COSY
· 3D HNCA[CO]-E.COSY (hncacosygp3d | HNCA COS YGP 3D) - 3J[H(N)-CO] via E.COSY
· 3D HNCACB[CO]-E.COSY (hncacbgpjc3d | HNCA CBGP JC3D ) - 3J[CO-CB] via E.COSY
· 2D spin-echo difference CT-HSQC (hsqccte tgpjclr | HSQ CCTET GP JCL R) - 3J[CO-CB] via spin-
echo difference
· 3D (H)NCAHA[CO]-E.COSY (hncahagp3d | HNCA HAG P3D ) - 3J[HA-CO] via E.COSY
· 3D (HN)CO(CO)NH (hncocogp3d | HN COCOGP 3D) - 3J[CO-CO] via quantitative-J
Psi Backbone Coupling Constant
· 3D (H)NNH-TOCSY (hnnhdigp3d | HNNHD I GP 3D ) - 3J[N-N] via quantitative-J

· 3D HCACO[N]-E.COSY (hcacogpjc3d | HCA COGP JC3D ) - 3J[HA-N] via E.COSY
· 3D HNHB (hnhbgp3d | HN HBGP3D ) - 3J[HN-HA] and 3J[HN-HB] via quantitative-J
Omega Backbone Coupling Constant
· 3D HN(COCA)CA (hncocacagp3d | HNCOCA CA GP 3D) - 3J[CA-CA] via quantitative-J

· 3D HNCO[CA]-E.COSY (hncoe cosgp3d | HNCOECOS GP 3D) - 3J[H(N)-CA] via E.COSY
Chi1 Sidechain Coupling Constant

· 3D HACAHB-COSY (hacahbcosygp3d | HACA HBCOS YGP 3D) - 3J[HA-HB] via quantitative-J
· 3D HN(CO)C (hncocgp3d | HNCOCG P3D ) - 3J[CG-CO] via quantitative-J
· 3D HC(C)H[HA]-E.COSY (hcchecosgp3d | HCCHECOS GP 3D) - 3J[HA-HB] via E.COSY
· 3D HC(C)H[CO]-E.COSY (hcchcosygp3d | HCCHCOS YGP 3D ) - 3J[CO-HB] via E.COSY
· 3D (H)C(C)CH[CO]-E.COSY (hccccosygp3d | HCCCCOSYG P3D ) - 3J[CG-CO] via E.COSY
· 3D HNCG (hncggp3d.1 | HN CGG P3D .1 ) - 3J[N-CG] via quantitative-J
· 2D spin-echo difference CT-HSQC (hsqcetfpf3gpjcsi | HS QCET FPFG PJCS I ) - 3J[N-CG] via
spin-echo difference
· 3D HN(CO)CACali (hncocacgp3d | HNCOCA CG P3D ) - 3J[CA-CD] via quantitative-J

BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
PROTEIN NMR
COUPLING CONSTANTS
PHI BACKBONE ANGLE

Backbone f Angle
3
JHN-HA
3J
HN-CB H C H
3
JHN-CO
3 C N C C
JCO-HA
3 f
JCO-CB O O
H H
3J
CO-CO
Phi Backbone Coupling Constant
· 3D HNHA experiment (hnhagp3d | HNHA G P3D ) - 3J(HN-HA) via quantitative-J

· 3D HNCA[HA,CB]-E.COSY (hncaecosgp3d | HN CA ECOSG P3D ) - 3J[H(N)-HA] and 3J[H(N)-CB]
via E.COSY
· 3D HNCA[HA]-E.COSY (hncaecosgp3d2 | HN CAEC OSG P3D 2 ) - 3J[H(N)-HA] via E.COSY
· 3D DQ/ZQ HNCA (hncadqzqgp3d | HNCA D QZ Q GP 3D ) - 3J[H(N)-HA] and 3J[H(N)-CB] via
DQ/ZQ
· 2D CT-HMQC-J (hmqcjgp | HMQ CJG P) - 3J[H(N)-HA] via J-modulation
· 3D HNHB[CB]-E.COSY (hnhbecosgp3d | HNHBECO SGP 3D ) - 3J[H(N)-CB] via E.COSY
· 3D HNCA[CB]-E.COSY (hncajcgp3d | HNCA JCG P3D ) - 3J[H(N)-CB] via E.COSY
· 3D (H)CANNH[CO]-E.COSY (hcannhgp3d | HCA NNHGP 3D ) - 3J[H(N)-CO] via E.COSY
· 3D HNCA[CO]-E.COSY (hncacosygp3d | HNCA COS YGP 3D) - 3J[H(N)-CO] via E.COSY
· 3D HNCACB[CO]-E.COSY (hncacbgpjc3d | HNCA CBGP JC3D ) - 3J[CO-CB] via E.COSY
· 2D spin-echo difference CT-HSQC (hsqccte tgpjclr | HSQ CCTET GP JCL R) - 3J[CO-CB] via spin-
echo difference
· 3D (H)NCAHA[CO]-E.COSY (hncahagp3d | HNCA HAG P3D ) - 3J[HA-CO] via E.COSY
· 3D (HN)CO(CO)NH (hncocogp3d | HN COCOGP 3D) - 3J[CO-CO] via quantitative-J

3D HNCA[HA,CB]-E.COSY Experiment
1
JHN + 1JNCA HNCA[HA,CB]
1
JHN + 2JNCA
H C H H C H J(HN-HA)
J(HN-CB)
N C C N C C
E.COSY
O O
H H H H
hncaecosgp3d
y y
y -y
Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21/2 d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19 Y
sp1
15N d23 d23 d10 d23 d23-d10
GARP
p22 p21 pl16
f1
13
Ca d0 d0
mlevsp180.p30
p14 p13 p14 p13 p14 pl29
sp3 sp2 sp3 sp8 sp3 sp30 p30
13C´
mlevsp180.p30
p14 p14 p14
sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G2 G3
ppm
ppm
J(HNHA)+J(HNCB) 52
45
54
56 50
J(CAHA) 7.5 7.4 ppm
+ CA
J(CACB) 55
HN 60
65
9.5 9.0 8.5 8.0 7.5 7.0 6.5 6.0 ppm
R.Weisemann, H. Rueterjans, H. Schwalbe, J. Schleucher, W. Bermel &

C. Griesinger, J. Biomol. NMR 4, 231-240 (1994)

3D HNCA[HA]-E.COSY Experiment
1
JHN + 1JNCA HNCA[HA]
1
JHN + 2JNCA
H C H H C H d21: 1/(2J(NH) [5.5 msec]
d23: 1/(4J(NCa) [12 msec]
N C C N C C d26: 1/(4J'(NH) [2.3 msec]
O O d27: constant time delay T(C) [13.3 msec]
H H H H
J(HN-HA)
hncaecosgp3d2
E.COSY
y y
y -y
Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21/2 d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19 Y
sp1
15N d23 d23 d10 d23 d23-d10
GARP
p22 p21 pl16

f1
13
Ca d0 d27 d27-d0
mlevsp180.p30
p14 p13 p14 p13 p14 pl29
sp3 sp2 sp3 sp8 sp3 sp30 p30
13C´
mlevsp180.p30
p14 p14 p14
sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G2 G3
ppm
ppm
J(HNHA)
52
45
54
56 50
7.5 7.4 ppm
J(CAHA) CA 55
60
HN 65
9.5 9.0 8.5 8.0 7.5 7.0 6.5 6.0 ppm

C. Griesinger, J. Biomol. NMR 4, 231-240 (1994).
See original 3D HNCA Experiment

3D HNCA[CB]-E.COSY Experiment
1
JHN + 1JNCA HNCA[CB]
1
JHN + 2JNCA
H C H H C H d21: 1/(2J(NH) [5.5 msec]
d23: 1/(4J(NCa) [12 msec]
N C C N C C d26: 1/(4J'(NH) [2.3 msec]
O O
H H H H
J(HN-CB)
E.COSY
hncajcgp3d
y y
y -y
Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19 Y
sp1
15N d23 d23 d23-d10 d23+d10
GARP
p22 p21 pl16
f1
13
Ca d0 d0
p14 p23 p14 p23 p14

13C´
p14 p14 p14 p14

sp5 sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G2 G3
J(HNCB)
J(CACB) CA
HN
A.C. Wang & A. Bax, J. Am. Chem. Soc. 118, 2483-2494 (1996)

3D HNCA[CO]-E.COSY Experiment
1
HNCA[CO]
JHN + 1JNCA
1
JHN + 2JNCA d21: 1/(2J(NH) [5.5 msec]
H C H H C H d23: 1/(4J(NCa) [12 msec]
d26: 1/(4J'(NH) [2.3 msec]
N C C N C C
d27: constant time delay T(C) [13.3 msec]
O O
H H H H
J(HN-CO)
hncacosygp3d
E.COSY
y y
y -y
Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19 Y
sp1
15N d23 d23 d23-d10 d23+d10
GARP
p22 p21 pl16
f1
13
Ca d0 d27 d27-d0 mlevsp180.p31
p14 p13 p14 p13 pl28
sp3 sp2 sp3 sp8 p31
13C´ sp15
p14 p14
sp5 sp5
GZ
G1 G2 G3
ppm
ppm
J(HNCO)
52
45
54
56 50
7.5 7.4 ppm
J(CACO) CA 55
60
HN
65
References: 9.5 9.0 8.5 8.0 7.5 7.0 6.5 6.0 ppm

C. Griesinger, J. Biomol. NMR 4, 231-240 (1994)
See original 3D HNCA experiment

3D DQ/ZQ-HNCA Experiment
J(HN-HA) and J(HN-CB)

DQ/ZQ
hncadqzqgp3d
y f2 y
Frec
1 d1 d26 d26 d n*d0 n*d0 d26 d26 d26 d26 d d
H
p1 p2 y y Y
15N d23 d23 d10 d23 d23-d10
GARP
p22 p21 pl16
f1
13
Ca d0 d0
p14 p13 p14 p13 p14

sp3 sp2 sp3 sp8 sp3
13C´
p14 p14 p14

sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G2 G3
d23: 1/(4J(NCa) [13.5 msec]

d26: 1/(4J'(NH) [2.6 msec]
Acquisition and Processing
DQ+ZQ and DQ-ZQ Data are recorded in interleaved mode

Processing:
use AU-program split [ipap 2]
References: CA
A. Rexroth, P. Schmidt, S. Salma, T. Geppert, H. Schwalbe &
C. Griesinger, J. Am. Chem. Soc. 117, 10389-10390 (1995)
N
Related Experiments: HN

2D J-Modulated CT-HMQC Experiment
J(HN-HA) hmqcjgp
J-modulation
1 d1 d21 d21
Frec
d29 d19
H presat
pl32 F1
d23/4 d23/4 d23/4 d23/4
15 -d21/2
N -d21/2 -d21/2 -d21/2
-d0
-d0 +d0 +d0 GARP
pl16
Gz
G1 G2 G2 G2 G2 G1 G3
d21: 1/(2J(NH) [5.3 msec]

d23: overall constant time for J-modulation : 4*T + 2*d21
d29: z-filter delay (delta) [2 msec]
References:
H. Kuboniwa, S. Grzesiek, F. Delaglio & A. Bax, J. Biomol NMR 4, 871-878 (1994)
See original 2D HMQC and CT-HMQC experiments

3D HNHB[CB]-E.COSY Experiment
J(HN-CB)
E.COSY
hnhbecosgp3d
y
Frec
1 d1 d26 d26 d d10 d10 e d26 d26 d26 d26 d d
H
F1 Y
15 d23-d0
N d0 d23
GARP
pl16
13
C
p8
Gz sp3
G1 G3
G2
d23: constant time delay T(N) [37.8 msec]

d26: 1/(4J'(NH) [2.3 msec]
J(HNHB)
H
J(CBHB) HB
C
HN C
References:
F. Loehr & H. Rueterjans, J. Biomol. NMR 13, 263 - 274 (1999)
See original 3D HNHB experiment

3D HNHA Experiment
J(HN-HA)
J-quantitative
hnhagp3d
F1 y
-x -x Frec
1 d1 d23 d23 d10 d10 e d23 d23 d d
H
d23 d23
15
N d24 d23-d24 d24/2 -d24/2 -d24/2 d24/2 d23-d24 d24
-d0 -d0
+d0 +d0 GARP
pl16
13
C optional
p8
Gz sp13
G1 G2 G3 G3 G2 G1 G4 G4
d23: 1/(4J(HNHa)) [13.05 msec]

d24: 1/(2J(NH)) [4.5 msec] N
HA+HN
HN
References:
1. G.W. Vuister & A. Bax, J. Am. Chem. Soc. 115, 7772-7777 (1993)
2. G.W. Vuister & A. Bax, J. Biomol NMR 4, 193-200 (1994)

3D (H)CANNH[CO]-E.COSY Experiment
1
JHACA + 1JNCA + 1JNH (HA)CANH[CO]
1 2 1
JHACA + JNCA + JNH
d3 : 1/(3.4J(CH) [2.0 msec]
H C H H C H d4 : 1/(4J(CH) [1.7 msec]
d21: 1/(2J(NH) [5.5 msec]
N C C N C C d23: 1/(4J(NCa) [12 msec]
O O d26: 1/(4J'(NH) [2.3 msec]
H H H H d27: constant time delay T(C) [13.3 msec]
J(HN-CO) hcannhgp3d
E.COSY
y y
y -y
1 pl19 Frec
H d1 d4 d4 d d3 d21d26 d26 d26 d26 d d
DIPSI-2
p1 p2 Y
15N d23-d10 d23+d10

GARP
p22 p21 pl16
13
C´
f1 p14 p14
13 sp5 sp5
d27 d27
Ca/ali +d0 -d0 mlevsp180.p31
p14 p23 p14 p23 p14 pl28
GZ sp15
G1 G2 G3
J(HNCO)
CA
J(CACO) CA
N
HN HN
References:
F. Loehr & H. Rueterjans, J. Biomol. NMR 5, 25-36 (1995)
See original 3D HACANH experiment

3D HNCACB[CO] Experiment
1
JNH + 1JCAN + 1JCC
1
JNH + 2JCAN + 1JCC HNCACB[CO]
H C H H C H
N C C N C C
O O
H H H H
J(CO-CB)
E.COSY
hncacbgpjc3d
y y
y -y
Frec
1 d26 d26 d d21 d21 d26 d26 d26 d26 d d
H d1
DIPSI-2
p1 p2 p11 f1 p26 pl19
2 Y
sp1
15N d22+d10 d22-d10 d22-d10 d22+d10
GARP
p22 p21 pl16
13
Cab d28 d23 d23 d0 d0 d23 d23 d28
GARP
p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 pl12
GZ
G1 G3
G2
J(CBCO)
d21: 1/(2J(NH) [5.5 msec]

d22: T(N) [17.6 msec]
J(NCO) d23: 1/(4J(CaCb) [6.7 msec]
N
d26: 1/(4J'(NH) [2.3 msec]
d28: T(N) - [1/(4J(NCa)opt] [2.1 msec]
CB
References:
F. Loehr & H. Rueterjans, J. Biomol. NMR 13, 263-274 (1999) Cali

J.-S. Hu & A. Bax, J. Biomol. NMR 11, 199-203 (1998)
N
HN
See original 3D HNCACB experiment

2D Spin-echo Difference CT-HSQC Experiment
J(CO-CB)
hsqcctetgpjclr
y
Frec
p28
1 d1 d4 d4 d4
H
F1 p14
sp3
13 d d0 d23 d23-d0
C GARP
p14 pl12
13 sp5
CO d d
p14 p14
sp5 sp5
15
N
Gz
G3 G4 G4 G2
G1
d4 : 1/(4J)CH [1.7 msec]

d23: constant time delay T(C) [28.7 msec]
2T = n/1J(CC)
d31: effective delay for J-evolution
References:
S. Grzesiek, G.W. Vuister & A. Bax, J. Biomol. NMR 3, 487-493 (1993)
See original 2D CT-HSQC experiment
Processing:
Two data are recorded in an interleaved mode.

Use AU-program split [2] to split data

3D (HN)CO(CO)NH Experiment
1
JNH + 1JNCO + 3 JCOCO
(HN)CO(CO)NH
H C H H C H
N C C N C C N
O O
H H H H H
J(CO-CO)
J-quantitative
hncocogp3d
y
y -y
Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19 Y
sp1
15N d23 d23 d23-d10 d23+d10
GARP
p22 p21 pl16
f1
13C´ d23-d0 d0
d23 d23 d23
DIPSI-3
p14 p13 p14 p9 p14 p13 p14
sp3 sp2 sp3 pl15 sp3 sp8 sp3
13
Ca
p14 p14 p14 p14
sp5 sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G2 G3
d21: 1/(2J(NH) [5.5 msec]

d23: 1/(4J(NCO) [13.5 msec]
d26: 1/(4J'(NH) [2.3 msec]
d31: length of DIPSI-3 cycle
CO
References:
N
S. Grzesiek & A. Bax, J. Biomol. NMR 9, 207-211 (1997) HN
J.-S. Hu & A. Bax, J. Am. Chem. SOc. 118, 8170-8171 (1996)

3D (H)NCAHA[CO]-E.COSY Experiment
1
JNH+ 1JNCA+ 1JHACA (H)NCAHA[CO]
1 2 1
JNH+ JNCA+ JHACA
H C H H C H
N C C N C C
O O
H H H H J(HA-CO)
E.COSY
hncahagp3d
y y
y -y y -y
Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d3 d24 d24 d4 d4 d d
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 pl19 p17
sp1
15N d0 d23 d23-d0
GARP
p22 p21 pl16
f1 Y
13
Ca d d10 d27 d27-d10
mlevsp180.p31
p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 pl28
sp3 sp2 sp7 sp8 sp3 sp2 sp3 p31
13C´ sp15
p14 p14
sp5 sp5
GZ
G1 G2 G3 G4
J(CACO) d3 : 1/(3.2J(CH) [2.1 msec]

d4 : 1/(4J(CH) [1.7 msec]
d21: 1/(2J(NH) [5.5 msec]
d23: 1/(4J(NCa) [15.5 msec]
J(NCO) N d24: 1/(8J)CH for all multiplicities
1/(4J)CH for CH
d26: 1/(4J'(NH) [2.3 msec]
HA d27: constant time delay T(C) [13.3 msec]
References:
F. Loehr & H. Rueterjans, J. Biomol. NMR 5, 25 - 36 (1995)

N
Related Experiment:
See the original HNCAHA Experiment CA

HA

BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
PROTEIN NMR
COUPLING CONSTANTS
PSI BACKBONE ANGLE

Backbone y Angle
3J H C H
CB-N
3J
HA-N N C C N
3 y
JN-N
O H
H H
Psi Backbone Coupling Constant
· 3D (H)NNH-TOCSY (hnnhdigp3d | HNNHD I GP 3D ) - 3J[N-N] via quantitative-J

· 3D HCACO[N]-E.COSY (hcacogpjc3d | HCA COGP JC3D ) - 3J[HA-N] via E.COSY
· Also see in Ch1 Sidechain Coupling Constants:
3D HNHB (hnhbgp3d | HN HBGP3D ) - 3J[HN-HA] and 3J[HN-HB] via quantitative-J

3D HACACO[N]-E.COSY Experiment
HACACO[N]
1 1
JHACA + JCACO
H C H H C H
N C C N C C
J(HA-N) O O
H H H H
E.COSY
hcacogpjc3d
y
Frec
1
H d1 d4 d4 d21 d21 d4 d4
p24 p13 p14 p14 p24 p13

sp9 sp8 sp7 sp7 F1 sp9 sp8
13
C d22 d22 d22 d10 d22 d10
GARP
p14 p13 p14 p13 p14
sp2 pl12
13 sp3 sp2 sp5 sp3
CO d0 d0
p14 p13 p14 p13 p14 p14
15
N
Gz
G1 G2 G3 G4
J(HAN)
d4 : 1/(4J(HCa)) [1.7 msec]
d21: 1/(4J`(HCa)) for CH [1.7 msec]
1/(6J`(HCa)) for CH and CH2 [1.2 msec]
d22: 1/(4J(CaCO)) [4.5 msec] J(CON) CO
HA
References:
A.C. Wang & A. Bax, J. Am. Chem. Soc. 117, 1810-1813 (1995))
;(L.E. Kay et al., J. Magn. Reson 89, 496 - 514 (1990)
CO
See the original 3D HCACO Experiment CA

HA

3D (H)NNH-TOCSY Experiment
1
JNH + 3JNN (H)NNH-TOCSY
H C H H C H
N C C N C C N
O O
H H H H H
J(N-N)
J-quantitative
hnnhdigp3d
y y
Frec
1
H d1 d26 d26 d26 d26 d26 d26 d d
F1 y y Y
d25 d25
15 d
N d0 d25 d28 +d28 d d +d29 d29 d25 d10
-d0 DIPSI-3 -d10 GARP
p24 pl16
pl27
13
C optional
p8 p8
sp13 sp13
Gz
G1 G1 G2 G4 G4 G5 G5 G6
G3
d25: 1/(4J(NH) [2.75 msec]

d26: 1/(4J'(NH) [2.3 msec] N
d31: length of DIPSI-3 cycle
N
HN
References:
F. Loehr & H. Rueterjans, J. Magn. Reson. 132, 130-137 (1998)

K. Theis, A.J. Dingley, A. Hoffmann, J.G. Omichinski & S. Grzesiek, J. Biomol. NMR 10, 403-408 (1997)

BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
PROTEIN NMR
COUPLING CONSTANTS
OMEGA BACKBONE ANGLE

Backbone w Angle
H C H
3
JCA-CA
3J N C C N C
CA-HN
w
O H H
H H
Omega Backbone Coupling Constant
· 3D HN(COCA)CA (hncocacagp3d | HNCOCA CA GP 3D) - 3J[CA-CA] via quantitative-J

· 3D HNCO[CA]-E.COSY (hncoe cosgp3d | HNCOECOS GP 3D) - 3J[H(N)-CA] via E.COSY

3D HNCO[CA]-E.COSY Experiment
HNCO[CA] J(HN-CA)
1 1
JHN + JNCO E.COSY
H C H H C H
d21: 1/(2J(NH) [5.5 msec]
N C C N C C d23: 1/(4J(NCO) [12 msec]
d26: 1/(4J'(NH) [2.3 msec]
O O
H H H H
hncoecosgp3d
y y
y -y y -y
Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19
Y
sp1
15N d23 d23 d23-d10 d23+d10
GARP
p22 p21 pl16
f1
13C´ d d0 d0 d
mlevsp180.p31
p14 p13 p14 p13 p14 pl28

13 sp15
Ca
p14 p14
sp5 sp5
GZ
G1 G2 G3 G4 G5
HNCO[CA]-E.COSY
ppm ppm
J(HNCA) 169
174.6
170
171 174.8
172
175.0
173
8.70 8.65 ppm
J(COCA) CO
174
175
176
177
178
HN 179
10.0 9.5 9.0 8.5 8.0 7.5 7.0 6.5 ppm
References:
M. Hennig, W. Bermel, H. Schwalbe & C. Griesinger, J. Am. Chem. Soc.

122, 6268-6277 (2000) CO
N
See original 3D HNCO experiment HN

3D HN(COCA)CA Experiment
1
JNH + 1JNCO + 1JNCA + 3 JCACA
HN(COCA)CA
H C H H C H
N C C N C C N
O O
J(CA-CA) H H H H H
J-quantitative
hncocacagp3d
y y
y -y y -y y -y y -y y -y
Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2 DIPSI-2 DIPSI-2 DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 f1 pl19 Y
sp1
d23 d23
15N d d23 d23 d
-d10 +d10 GARP
p22 p21 p14 pl16
sp7
13C´ d d22 d22 pl13
d d22 d22
p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14

13
Ca d d27 d27 d0 d0 d27 d27
p14 p14 p13 p24 p13 p14 p13 p24 p13 p14 p14 p14 p14
GZ
G1 G2 G3 G4 G5 G4 G7
G6
d21: 1/(2J(NH) [5.5 msec]

d22: 1/(4J(COCa) [4.55 msec]
d23: 1/(4J(NCO) [12.8 msec]
d26: 1/(4J'(NH) [2.4 msec]
d27: 1/(4J'(CaCa) [28.6 msec]
References:
M. Hennig, W. Bermel, H. Schwalbe & C. Griesinger, J. Am. Chem. Soc.

122, 6268-6277 (2000) CA
N
See original 3D HNCOCA experiment HN

BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
PROTEIN NMR
COUPLING CONSTANTS
CHI1 SIDECHAIN ANGLE

Side Chain c1 Angle

3
JN-HB
3
H C H
JN-CG
3
JHA-HB H C H
3
c1
JHA-CG
N C C
3
JCO-HB
3 O
JCO-CG H H

· 3D HACAHB-COSY (hacahbcosygp3d | HACA HBCOS YGP 3D) - 3J[HA-HB] via quantitative-J
· 3D HN(CO)C (hncocgp3d | HNCOCG P3D ) - 3J[CG-CO] via quantitative-J
· 3D HC(C)H[HA]-E.COSY (hcchecosgp3d | HCCHECOS GP 3D) - 3J[HA-HB] via E.COSY
· 3D HC(C)H[CO]-E.COSY (hcchcosygp3d | HCCHCOS YGP 3D ) - 3J[CO-HB] via E.COSY
· 3D (H)C(C)CH[CO]-E.COSY (hccccosygp3d | HCCCCOSYG P3D ) - 3J[CG-CO] via E.COSY
· 2D spin-echo difference CT-HSQC (hsqcetfpf3gpjcsi | HS QCET FPFG PJCS I ) - 3J[N-CG] via

3D HNHB Experiment
J(N-HB), J(N-HA)
J-quantitative
hnhbgp3d
y
Frec
1 d1 d26 d26 d10 d10 d10 d10 e d26 d26 d26 d26 d d
H
p11 Y
F1
sp1
15
N d d0 d23-d0 d23
GARP
pl16
13
C
p8 p8 p8
Gz sp13 sp13 sp13
G1 G3
G2
d23: constant time delay T(N) [37.8 msec]

d26: 1/(4J'(NH) [2.3 msec]
References:
1. S.J. Archer, M. Ikura, D.A. Torchia & A. Bax,

J. Magn. Reson. 95, 636-641 (1991)
2. P.Duex, B. Whitehead, R. Boelens, R. Kaptein & G.W. Vuister, N
J. Biomol. NMR 10, 301-306 (1997)
3. F. Loehr & H. Rueterjans, J. Biomol. NMR 13, 263 - 274 (1999)
H
Related Experiments: HN
See also: 3D HNHB-E.COSY experiment

3D HACAHB-COSY Experiment
J(HA-HB)
J-quantitative
hacahbcosygp3d
Frec
1
H d1 d d23 d23 d10 d10 d10 d10 e d23 d23 d
presat
pl9 p14
d23 F1 d23 sp3
d23 d23
13 -d2/2 -d2/2
C d2
+d0
-d2/2
+d0
-d2/2 d2
-d0 -d0 GARP
p14 p14 p14 p14
p13 sp5 p14 p14 sp5 p13 pl12
sp5 sp5
13 sp2 sp3 sp3 sp8
d23 d23
CO d0 -d2/2 d0 -d2/2
d
p14 p14
15 sp5 sp5
N
Gz
G8 G1 G2 G3 G4 G5 G6 G7
d2 : 1/(2J(CH)) [3.4 msec]

d23: 1/(4J'(HaHb)) [8.7 msec]
CA
HA
References:
S. Grzesiek, H. Kuboniwa, A.P. Hinck & A. Bax, J. Am. Chem. Soc.

117, 5312-5315 (1995)

3D HN(CO)C Experiment
J(CG-CO)
J-quantitative
hncocgp3d
y y
y -y y -y y -y
Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d26 d26 d26 d26 d d
p1 p2 p11 pl19
sp1
d27 d27 d23 d23
15N
-d10 +d10 GARP
p14 p13 p14 p13 p14 p13 pl16
p22 p21
13C´ d d25/2 d25/2 d25/2 d25/2 d
p14 p13 f1 p14 p14

sp3 sp2 sp7 sp3
13
Cali d0 d0
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14

GZ
G1 G2 G3 G4 G5
d21: 1/(2J(NH)) [5.4 msec]

d23: 1/(4J(NCO)) [13.8 msec]
d25: cross peak experiment: 1/(2J(CgCO) [56.1 msec]
reference exepriment: [46.7 msec]
d26: 1/(4J'(NH)) [2.3 msec]
d27: 1/(4J'(NCO)) [12.5 msec]
Cali
N
HN
References:
J.-S. Hu & A. Bax, J. Am. Chem. Soc. 119, 6360 - 6368 (1997)

3D (H)C(C)CH[CO]-E.COSY Experiment
(H)C(C)CH[CO]
1 1 1 1
HACA + JCACB + JCBCG + JCGHG
H C H
H C H
N C C N
O H
H H
J(CG-CO)
hccccosygp3d
E.COSY
y
Frec
d1
1 d4 d4 d4*2 d4 d4
H presat DIPSI-2
pl9 p28 pl19
F1
13 d23
d d0 d23 d24 d24 d21 d10 d10 d21
Cali -d10 GARP
p24 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 pl12
15
N GARP
pl16
Gz G2
G1 G3
J(CGCO)
d21: 1/(5J'(CH)) [1.38 msec]

d23: 1/(4J(CC)) [7.2 msec]
d24: 1/(6.65J'(CC)) [4.3 msec]
J(CACO) CA
CG
References:
H
1. H. Schwalbe, A. Rexroth, U. Eggenberger, T. Geppert &
C. Griesinger, J. Am. Chem. Soc. 115, 7878-7879 (1993)
2. Y. Karimi-Nejad, J.M. Schmidt, H. Rueterjans, H. Schwalbe & CA
C. Griesinger, Biochemistry 33, 5481-5492 (1994) HA

3D HC(C)H[HA]-E.COSY Experiment
HC(C)H[HA]
1 1
HACA + JCACB + 1JCBHB
H C H
H C H
N C C N
J(HB-HA) O
H H H
E.COSY
hcchecosgp3d
y b
Frec
d1
1 d4+d0 d0 d4 d21 d4 d4
H presat
pl9 p28
F1 y
13 d d10 d23 d23
Cali -d10 d24 d24
GARP
p24 p13 p14 p13 p14 p13 p14 pl12
13
CO
GARP
p14 p14
sp5 sp5
15
N GARP
pl16
Gz G2
G1 G3
J(HBHA)
d4 : 1/(4J(CH)) [1.7 msec]

d21: 1/(8J'(CH)) [0.85 msec]
J(CAHA) d23: 1/(4J(CC)) [7.2 msec]
CA
d24: 1/(4J'(CC)) [3.6 msec]
HB
References:
1. Y. Karimi-Nejad, J.M. Schmidt, H. Rueterjans, H. Schwalbe & H

C. Griesinger, Biochemistry 33, 5481-5492 (1994)
2. ;U. Eggenberger, Y. Karimi-Nejad, H. Thuering, H. Rueterjans &
C. Griesinger, J. Biomol. NMR 2, 583-590 (1992) C
H

3D HC(C)H[CO]-E.COSY Experiment
HC(C)H[CO]
1 1
HACA + JCACB + 1JCBHB
H C H
H C H
N C C N
J(HB-CO) O
H H H
E.COSY
hcchcosygp3d
y
Frec
d1
1 d4+d0 d0 d4 d21 d21 d4 d4
H presat DIPSI-2
pl9 p28 pl19
F1 y
13 d d10 d23 d23
Cali -d10 d24 d24
GARP
p24 p13 p14 p13 p14 p13 p14 pl12
15
N GARP
pl16
Gz G2
G1 G3
J(HBCO)
d4 : 1/(4J(CH)) [1.7 msec]

d21: 1/(4J'(CH)) [1.7 msec]
J(CACO) d23: 1/(4J(CC)) [7.2 msec]
CA d24: 1/(4J'(CC)) [3.6 msec]
HB
References:
H
1. Y. Karimi-Nejad, J.M. Schmidt, H. Rueterjans, H. Schwalbe &
C. Griesinger, Biochemistry 33, 5481-5492 (1994)
2. U. Eggenberger, Y. Karimi-Nejad, H. Thuering, H. Rueterjans &
C. Griesinger, J. Biomol. NMR 2, 583-590 (1992) C
H

3D HNCG Experiment
J(N-CG)
J-quantitative
hncggp3d.1
Reference experiment
y
y -y y -y y -y Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2 DIPSI-2 DIPSI-2 d21
p1 p2 p11 pl19
F1 Y
sp1
15
N d23/2 d23/2 d d d23/2+d10 d23/2-d10
GARP
p22 p21 pl16
13
Cali d23/4
p24 p8 p24 p14 p14 p24 p8 p24

13
CO d0 d0 e
p24 p24 p24 p24
Gz sp17 sp17 sp17 sp17
G1 G2 G3 G5
G4
d21: 1/(2J(NH) [5.5 msec]

J(N-CG)
d23: 1/(2J(NCg) = 2*T(N) [66.6 msec]
d26: 1/(4J'(NH) [2.3 msec] J-quantitative
Cross-peak experiment
hncggp3d.2
y
y -y y -y y -y Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2 DIPSI-2 DIPSI-2 d21
p1 p2 p11 pl19
F1 Y
sp1
15
N d23/2 d23/2 d d d23/2+d10 d23/2-d10
GARP
p22 p21 pl16
13
Cali d23/4
p24 p8 p24 p24 p8 p24

13
CO d0 d0 e
Gz
G1 G2 G3 G5
G4
References:
1. J.-S. Hu & A. Bax, J. Biomol. NMR 9, 323-328 (1997)

CO
2. R. Konrat, D.R. Muhandiram, N.A. Farrow & L.E. Kay,
J. Biomol. NMR 9, 409-422 (1997)
N
HN
2D Spin-Echo Difference CT-HSQC Experiment
J(N-CG)
hsqcetfpf3gpjcsi
y y
Frec
y pl19 -y
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2
F1 Y
15
N d0 d23 d23-d0
GARP
pl16
p24
13
Cg sp9
p24
p24 sp9
13
Ca sp16
13
CO
p14
sp5
Gz
G1 G3
G2
d21: 1/(2J(NH) [5.5 msec]

d23: constant time delay T(N) [100 msec]
d26: 1/(4J'(NH) [2.3 msec]
References:
J.-S. Hu & A. Bax, J. Biomol. NMR 9, 323-328 (1997)
Also See the original 2D CT-HSQC Experiment
Processing:
Two data are recorded ina interleaved mode

Use AU-program split [2] to split data

BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
PROTEIN NMR
COUPLING CONSTANTS
CHI2 SIDECHAIN ANGLE

Side Chain c2 Angle

H C H
3 H C H
JHB-CD c2
3
JHB-HG H C H
3
JCA-HG
N C C
3
JCA-CD
H H O
· 3D HN(CO)CACali (hncocacgp3d | HNCOCA CG P3D ) - 3J[CA-CD] via quantitative-J
d21: 1/(2J(NH)) [5.5 msec]

d22: 1/(4J(COCa)) [4.5 msec]
d23: 1/(4J(NCO)) [15 msec]
J(CA-CD) d26: 1/(4J'(NH)) [2.5 msec]
J-quantitative d28: 1/(4J(CaCd)) [28.2 msec]
hncocacgp3d
y y
y -y
Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2
p1 p2 p11 f2 f3
sp1
d23 d23
15N d23 d23
-d10 +d10 GARP
p22 p21 p14 pl16
f1 sp7
13C´ d22 d22 d22 d22
p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14

13 d28 d28 d0 d0 d28 d28
Ca
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14
GZ
G1 G3
G2
References:
M. Hennig, D. Ott, P. Schulte, R. Loewe, J. Krebs, T. Vorherr,

W. Bermel, H. Schwalbe & C. Griesinger, J. Am. Chem. Soc. 119, 5055-5056 (1997)

BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
3D IPAP-HNCO & -IPAP-HNCA

FOR RDC MEASUREMENTS

3D HNCO and HNCA experiments for RDC measurements:
o 3D IPAP-HNCO to measure 1J(NH) (hncogpia)

o 3D IPAP-J-HNCO to measure 1 J(CA-CO) and 3 J(HN-CA):
Using PEP (hncogprc3d1 | HNCOG RPC3D 1 )
Using WATERGATE (hncogprcwg3d1 | HN COGRP CW G3D 1 )
Using TROSY (trhncogprc3d1 | T RHNCOG RPC3D 1 )
o 3D IPAP-J-HNCO to measure 1,2 J(N-CA) and 3 J(HN-CA):
o 3D IPAP-J-HNCO to measure 1 J(N-CO):
o 3D J-HNCO (CA) to measure 1 J(CA-CB):
o 3D IPAP-J-HNCO (CA) to measure 1 J(CA-HA) and 1 J(CA-CB):
o 3D IPAP-J-HNCO to measure 1 J(H-N) and 3J(HN-CA):
o 3D IPAP-J-HNCO to measure 1 J(N-CO):
Using PEP (hncogprc3d7)
Using WATERGATE (hncogprcwg3d7)
Using TROSY (trhncogprc3d7)
o 3D IPAP-J-HNCA to measure 1 J(CA-HA):

Using PEP (hncagprc3d1)
Using WATERGATE (hncagprcwg3d1)
Using TROSY (trhncagprc3d1)
1
D
C B0
5
2
N C 5 C 3 N C
25
O H b
H
2
D or 3D 1H
C 1 Ca r
N C C N C 15
N
25
H
O 8
H
7 Dij a <3cos2b-1>
5
C'

3D IPAP-HNCO: J(NH)
1
JHN + 1JNCO HNCO
H C H H C H
N C C N C C
O O
H H H H
hncogpia
y on/off
-x -x Frec
1 d1 d26 d26 d d21/2
H
p1 p2 y d26 d26
15N d d23 d23 d23 d23 d

GARP
p22 p21 pl16
f1
13C´ d d0 d0 d
p14 p13 p14 p13 p14

sp3 sp2 sp3 sp8 sp3
13
Ca
p14 p14
sp5 sp5
GZ
G1 G2 G3 G3G4 G5 G6 G7 G7
Processing:
Two data are recorded in a interleaved mode.

Use AU-program split [ipap 2] to split data d21: 1/(2J(NH) [5.3 msec]
d23: 1/(4J(NCO) [13.5 msec]
Reference: d26: 1 /(4J'(NH) [2.5 msec]
M.Ottiger, F. Delaglio & A. Bax, J. Magn. Reson.

131, 373-378 (1998)

3D IPAP-J-HNCO: 1J(CA-CO) and 3J(HN-CA)
J(COCA)
d26=1/4J(NH)=2.3m
d21=1/2J(NH)=5.5m
J(HN-CA) d23=1/4J(NCO)=12m
NH (F3)
d22=1/4J(COCA)=4.3m
CO
(F1)
hncogprc3d1
y y
y -y -y y y -y -y y
Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2 DIPSI-2 DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19
Y
sp1
15N d23 d23 d23-d10 d23+d10
GARP
p22 pl16
f1
13C´ d d d0 d0 d
d22 d22
p14 p13 p14 p13 p13 p14 p13 p14 p13
13
Ca
p14 p14 p14 p14
sp5 sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G4 G5 G6 G2 G3
S3 Editing of CA prior to CO evolution

F1(H) -> F3(N) -> F2(C=O,J(Ca),t1) -> F3(N,t2) -> F1(H,t3).
Processing:
Two data (IP and AP) are recorded in a interleaved mode.

Use AU-program split [ipap 2] to split data (IP+AP amd IP-AP)
Reference:
P. Permi, P.R. Rosevear & A. Annila, J. Biomol. NMR 17, 43-54 (2000)

hncogprcwg3d1
y
y -y -y y
-x -x -x Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19
d26 d26
sp1
15N d23 d23 d23-d10 d23+d10
GARP
p22 pl16
f1
13C´ d0 d0 d
d22 d22
p14 p13 p14 p13p13 p14 p13 p14
13
Ca
p14 p14 p14 p14
sp5 sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G2 G3 G4 G4
trhncogprc3d1
-y -y
d26 d26 d26 d26 d26 d26 Frec

1 -x -y -x -x
H d1
p1 p11 p2 -y
sp1
15N d23 d23 d10 d23 d23-d10
p22 p21 f1
13C´
d d0 d0 e
d22 d22
p14 p13 p14 p13 p13 p14 p13 p14
13 sp3
Ca
p14 p14 p14
sp5 sp5
GZ sp5
G1 G1 G2 G3 G3G4 G4

3D IPAP-J-HNCO: 1J(N-CA), 2J(N-CA) and 2J(HN-CA), 3J(HN-CA)
k*J(NCA)
d26=1/4J(NH)=2.3m
d21=1/2J(NH)=5.5m
d23=1/4J(NCO)=12m
J(HNCA) NH (F3) d22=1/4J(COCA)=4.3m
N
(F2)
hncogprc3d2
y y
y -y -y y y -y -y y
Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d26 d26 d26 d26 d d
p1 p2 p11 p26 pl19
Y
sp1
15N d23 d23 d23-d10 d23+d10
GARP
p22 pl16
f1
13C´ k*
d d0 d0 d d22 d22 d10
p14 p13 p14 p13 p13 p14 p13 p14 p13
13 k*
Ca d10
p14 p14 p14 p14 p14 p14
GZ
G1 G4 G5 G6 G2 G3
S3 Editing of CA prior to NH evolution.

F1(H) -> F3(N) -> F2(C=O,t1) -> F3(N,t2,J(Ca)) -> F1(H,t3)
Processing:

Use AU-program split [ipap 2] to split data (IP+ap and IP-AP)
Reference:

hncogprcwg3d2
y
y -y y -y
1 -x -x -x Frec
d1 d26 d26 d d21 d21 d
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19
d26 d26
sp1
15N d23 d23 d23-d10 d23+d10
GARP
p22 pl16
f1
13C´ k*
d0 d0 d d10
d22 d22
p14 p13 p14 p13 p13 p14 p13 p14
k*
sp3
Ca d10
p14 p14 p14 p14 p14 p14

GZ
G1 G2 G3 G4 G4
trhncogprc3d2
-y -y
d26 d26 d26 d26 d26 d26 Frec

1 -x -y -x -x
H d1
p1 p11 p2 -y
sp1
15N d23 d23 l* d23 l* d23
d10 -d10 d10 +d10
p22 p21 f1
13C´
d d0 d0 e d22 d22
p14 p13 p14 p13p13 p14 p13
p14
sp3
13
Ca
p14 p14 p14 p14 p14
p14
sp5 sp5 sp5 sp5 sp5
GZ sp5
G1 G1 G2 G3 G3G4 G4

3D IPAP-J-HNCO: 1J(N-CO)
k*J(CON)
d21: 1/(2J(NH)) [5.5 msec]

d23: 1/(4J(NCO)) [12 msec]
d26: 1/(4J'(NH)) [2.3 msec]
HN (F3)
CO
(F1)
hncogprc3d3
y y
y -y -y y
Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2 d21 d d21 d21 d d21 DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19
Y
sp1
15N d23 d23 d23-d10 d23+d10
GARP
p22 pl16
f1
13C´ d0 d0 k* k* d
d0 d0
p14 p13 p14 p13 p14 p13
13
Ca
p14 p14 p14 p14
sp5 sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G4 G7 G7 G5 G6 G2 G3
Editing of N prior to CO evolution.

F1(H) -> F3(N) -> F1(H,J(N)) -> F2(C=O,t1) -> F3(N,t2) -> F1(H,t3)
Processing:

Reference:

hncogprcwg3d3
y
y -y -y y
-x -x -x Frec
1 d26 d26 d d21 d21 d
H d1 DIPSI-2 d21 d21 d21 d21 DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 pl19
d26 d26
sp1
15N d23 d23 d23-d10 d23+d10
GARP
p22 pl16
f1
13C´
d0 d0 k* k* d
d0 d0
p14 p13 p14 p13 p14
sp3 sp2 sp3 sp8 sp3
13
Ca
p14 p14 p14 p14
sp5 sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G5 G5 G2 G3 G4 G4
trhncogprc3d3
-y -y
y -y d26 d26 d26 d26
1 d26 d26 Frec
-x -x -x
H d1 -y d21
DIPSI-2 d21 d21 d21 d
p1 p11 p2 p26 pl19 -y
sp1
15N
d23 d23 d10 d23 d23-d10
p22 p21 f1
13C´
d0 d0 k* k*
d0 d0
p14 p13 p14 p13 p14
Ca
p14 p14 p14
GZ sp5 sp5 sp5
G1 G1 G5 G5 G2 G3 G3G4 G4

3D J-HNCO: 1J(CA-CB)
k*J(CACB)
d21: 1/(2J(NH)) [5.5 msec]

d22: 1/(4J(COCa)) [4.5 msec]
HN d23: 1/(4J(NCO)) [12 msec]
(F3) d26: 1/(4J'(NH)) [2.3 msec]
CO
(F1)
hncogprc3d4
y y
y -y y -y y -y y -y
Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d26 d26 d26 d26 d d
p1 p2 p11 p26 pl19
Y
sp1
15N d23 d23 d23-d10 d23+d10
GARP
p22 pl16
f1
13C´ d0 d22 d0 d22-
d22 d22 d d (1-l) l*d0 d
p14 p13 p14 p13 p13 p14 p13
13 K* K*
Ca d0 d0
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14
GZ
G1 G4 G5 G6 G2 G3
Editing of N prior to CO evolution.

F1(H) -> F3(N) -> F2(C=O) -> F2(Ca,J(Cb)) -> F2(C=O,t1) -> F3(N,t2) -> F1(H,t3)
Processing:

Reference:

hncogprcwg3d4
y
y -y y -y y -y
-x -x -x Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d
p1 p2 p11 p26 pl19 d26 d26
sp1
15N d23 d23 d23-d10 d23+d10
GARP
p22 pl16
f1
13C´ d0 d22 d0 d22-
d22 d22 d (1-l) l*d0 d
p14 p13 p14 p13 p13 p14 p13
13 K* K*
Ca d0 d0
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14
GZ
G1 G5 G2 G3 G4 G4
trhncogprc3d4
-y -y
d26 d26 d26 d26 d26 d26 Frec

1 -x -y -x -x
d1
H
p1 p11 p2 -y
sp1
15N d23 d23 d10 d23 d23-d10
p22 p21
f1
13C´ d0 d22 d0 d22-
d22 d22 (1-l) l*d0
p14 p13 p14 p13 p13 p14 p13 p14
13 K* K* d
Ca d0 d0
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14
GZ
G1 G1 G2 G3 G3G4 G4

3D IPAP-J-HNCO: 1J(CA-HA) and 1J(CA-CB)
k*J(CACB)
k*J(CAHA)
d21: 1/(2J(NH)) [5.5 msec]

d22: 1/(4J(COCa)) [4.5 msec]
d23: 1/(4J(NCO)) [12 msec]
HN (F3) d26: 1/(4J'(NH)) [2.3 msec]
CO
(F1)
hncogprc3d5
y y
y -y y -y -y y
Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21d26 d26 d26 d26 d d
p26 pl19
p1 p2 p11
Y
sp1
15N d23 d23 d d23-d10 d23+d10
GARP
p22 f1 pl16
13C´ d0 d22 d0 d22-

(1-l) l*d0 d22 d22
p14 p13 p14 p13 p13 p14 p13 p14
13 K* K*
Ca d d4 d4 d0 d0 d
p14 p14 p13 p14 p13 p13 p14 p13 p14 p14
p14 p14
sp5 sp5
GZ
G1 G4 G5 G6 G2 G3
Editing of CA after the CO evolution.

F1(H) -> F3(N) -> F2(C=O,t1) -> F2(Ca,J(Ha)) -> F2(C=O) -> F3(N,t2) -> F1(H,t3)
Processing:

Reference:
D. Yang, J.R. Tolman, N.K. Goto & L.E. Kay, J. Biomol. NMR 12, 325-332 (1998)

hncogprcwg3d5
y
y -y y -y -y y
-x -x -x Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d
p26 pl19
p1 p2 p11 d26 d26
sp1
15N d23 d23 d d23-d10 d23+d10
GARP
p22 f1 pl16
13C´ d0 d22 d0 d22-

(1-l) l*d0 d22 d22
p14 p13 p14 p13 p13 p14 p13 p14
13 K* K*
Ca d d4 d4 d0 d0
p14 p14 p13 p14 p13 p13 p14 p13 p14 p14 p14 p14
GZ
G1 G5 G2 G3 G4 G4
trhncogprc3d5
-y -y
d26 d26 d26 d26 d26 d26 Frec

1 -x -y -x -x
H d1
p1 p11 p2 -y
sp1
15N d23 d23 d10 d23 d23-d10
p22 p21 f1
13C´
d d0 d22 d0 d22-
(1-l) l*d0 d22 d22
p14 p13 p14 p13 p13 p14 p13 p14
13
Ca d4 d4
K* K*
d0 d0
p14 p14p13 p14 p13 p13 p14 p13p14 p14 p14
GZ
G1 G1 G2 G3 G3G4 G4

3D IPAP-J-HNCO: 1J(HN)
J(NH)
d21: 1/(2J(NH)) [5.5 msec]

d22: 1/(4J(COCa)) [4.5 msec]
HN (F3) d23: 1/(4J(NCO)) [12 msec]
d26: 1/(4J'(NH)) [2.3 msec]
N
(F2)
hncogprc3d6
y y
y -y
y -y Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2 d21
p1 p2 p11 p26 pl19
Y
sp1
15N d23 d23 d d23-d10 d23+d10
d d21 d21
GARP
p22 pl16
f1
13C´ d d0 d0
p14 p13 p14 p13 p14 p13

13
Ca
p14 p14 p14 p14
sp5 sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G4 G5 G6 G2 G3
Editing of HN pior to N evolution.

F1(H) -> F3(N) -> F2(C=O,t1) -> F3(N,J(H(N),t2) -> F1(H,t3)
Processing:

Reference:

hncogprcwg3d6
y
y -y
y -y -x -x -x Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d
H DIPSI-2 d21
p1 p2 p11 p26 pl19
d26 d26
sp1
15N d23 d23 d d21 d21 d d23-d10 d23+d10
GARP
p22 pl16
f1
13C´ d0 d0
p14 p13 p14 p13 p14

sp3 sp2 sp3 sp8 sp3
13
Ca
p14 p14 p14 p14
sp5 sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G2 G3 G4 G4
trhncogprc3d6
-y -y
y -y
1 d26 d26 -y d26 d26 d26 d26 Frec
-x -x -x
H d1 -y d21
DIPSI-2 d21
p1 p11 p2 p26 pl19 -y
sp1
15N d23 d23
d21 d21 d d10 d23 d23-d10
p22 p21 f1
13C´
d d0 d0
p14 p13 p14 p13

p14
13 sp3 sp2 sp3 sp8
sp3
Ca
p14 p14 p14
GZ sp5 sp5 sp5
G1 G1 G2 G6 G3 G3G4 G4

3D IPAP-J-HNCO: 1J(NCO) and 2J(HNCO)
k*J(NCO)
d21: 1/(2J(NH) [5.5 msec]

d23: 1/(4J(NCO) [12 msec]
J(HNCO) d26: 1/(4J'(NH) [2.3 msec]
CO (F1)
N
(F2)
hncogprc3d7
y y
y -y y -y y -y
Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d26 d26 d26 d26 d d
p1 p2 p11 p26 pl19
Y
sp1
k* k*
15N d23 d23 d23 d23 d
d10 d10 d10 d10
GARP
p22 pl16
f1
13C´ d0 d0 d21
d
p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14
13
Ca
p14 p14 p14
sp5 sp5 sp5
GZ
G3 G4 G5 G2
G1
Editing of CO pior to N evolution.

F1(H) -> F3(N) -> F2(C=O,t1) -> F3(N,J(C'),t2) -> F1(H,t3)
Processing:

Reference:

hncogprcwg3d7
y
y -y y -y y -y
-x -x -x Frec
1 d1 d26 d26 d d21
p1 p2 p11 p26 pl19
d26 d26
sp1
15N d23 d23 d10 d10k* k* d d23 d23 d
d10 d10 GARP
p22 pl16
f1
13C´ d0 d0 d
p14 p13 p14 p13 p14 p14 p14
13
Ca
p14 p14 p14
sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G2 G5 G3 G4 G4
trhncogprc3d7
-y
1 d26 d26 d26 d26 d26 d26 Frec

-x -x -x -x
H d1 -y -x
p1 p11 p2 -y
sp1
15N d23 k* k*
d23 d23 d23 d d10 d10d10 d10
p22 p21 f1
13C´
d0 d0
p14 p13 p14 p13p14 p14 p14

Ca
p14 p14 p14
GZ sp5 sp5 sp5
G1 G1 G4 G2 G2G3 G3

3D IPAP-J-HNCA: 1J(CA-HA) and 1J(CACB)
k*J(CACB)
k*J(CAHA)
d21: 1/(2J(NH) [5.5 msec]
d23: 1/(4J(NCa) [12 msec]
d26: 1/(4J'(NH) [2.3 msec]
J(HNHA) HN (F3)
CA
(F1)
hncagprc3d1
y y
y -y -y y
Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 p26
Y
sp1
15N d23 d23 d23-d10 d23+d10
GARP
p22 f1 pl16
13 K*
Ca d4 d4
K*
d0 d0 d0 d0
p14 p13 p14 p13 p13 p14 p13 p14
13C´
p14 p14 p14 p14

sp5 sp5 sp5 sp5
GZ
G3 G1 G2
S3 Editing of HA pior to CA evolution.

F1(H) -> F3(N) -> F2(Ca,J,t1) -> F3(N,t2) -> F1(H,t3)
Processing:

Reference:
P. Permi, J. Biomol. NMR 27, 341-349 (2003)

hncagprcwg3d1
y y
y -y -y
-x -x -x Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 p26 d26 d26
sp1
15N d23 d23 d23-d10 d23+d10 d
GARP
p22 f1 pl16
13 K*
Ca d4 d4 d
K*
d0 d0 d0 d0
p14 p13 p14 p13 p13 p14 p13 p14
13C´
p14 p14 p14 p14

sp5 sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G5 G2 G3 G4 G4
trhncagprc3d1
-y
1 d26 d26 d26 d26 d26 d26 Frec

H -x -y -x -x
d1
p1 p11 p2 -y
sp1
15N d23 d23 d23+d10 d23-d10
p22 p21 f1
13
Ca d4 d4 d
K*
d0 d0 d0
K*
d0
p14 p13 p14 p13 p13 p14 p13 p14
13C´
p14 p14 p14

sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G1 G4 G2 G2G3 G3


BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
PROTEIN NMR
COUPLING CONSTANTS
THROUGH-HYDROGEN BONDS

Through-Hydrogen-bond 3D HNCO experiments
· 3D Hydrogen bond-HNCO (hncogphb3d | HNCOGPHB3D)

· 3D Hydrogen bond-HNCO with 13 C decoupling (hncogphb3d.2)
· 3D Hydrogen bond-HNCO without decoupling to enhance TROSY effect without spin-state
selection (hncogphb3d2 | HNCOGPHB3D2)
· 3D Hydrogen bond-HNCO using TROSY (trhncogphb3d)
Also see:
The original 3D HNCO Experiment.
d21: 1/(2J(NH) [5.5 msec]

CO d23: 1/(1J(NCO) [66.6 msec]
d25: 1/(4J(NCO) [16.6 msec]
d26: 1/(4J'(NH) [2.3 msec]
N
HN
References:
1.F. Cordier & S. Grzesiek, J. Am. Chem. Soc. 121, 1601-1602 (1999)

hncogphb3d
y y
y -y y -y
Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 pl19 Y
sp1
15N d23 d23 d10 d23 d23-d10
GARP
p22 p21 pl16
f1
13C´ d25 d d0 d0 d d25
p14 p13 p14 p13 p14

sp3 sp2 sp3 sp8 sp3
13
Ca
p14 p14 p14
sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G2 G3 G4 G5
hncogphb3d.2
y y
y -y y -y
Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d26 d26 d26 d26 d d
H DIPSI-2 DIPSI-2
p1 p2 p11 pl19 Y
sp1
15N d23 d23 d10 d23 d23-d10
GARP
p22 p21 pl16
f1
d25 d25
13C´ d d0 d0 d
mlevsp180.31 mlevsp180.31
pl28 p14 p13 p14 p13 p14
sp3 sp2 sp3 sp8 sp3
13
Ca
p14 p14 p14
sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G2 G3 G4 G5

hncogphb3d2
y y
Frec
1 d1 d26 d26 d26 d26 d26 d26 d d
H
p1 p2 Y
15N d23 d23 d10 d23 d23-d10
p22 p21
f1
13C´ d25 d d0 d0 d d25
GARP
p14 p13 p14 p13 p14 pl12
sp3 sp2 sp3 sp8 sp3
13
Ca
p14 p14 p14
sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G2 G4 G4 G5 G5 G6
G3
trhncogphb3d
y -y
1 -x -y d26 d26 -x -x
d1
H
p11 p11 p11
sp1
Y
sp1 sp1
15N d23 d23 d10 d23 d23-d10
f1
13C´ d25 d0 d0 d25
p14 p13 p14 p13 p14

sp3 sp2 sp3 sp8 sp3
13
Ca
p14 p14 p14
sp5 sp5 sp5
GZ
G1 G1 G2 G2 G3 G3

BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
2D & 3D NUCLEIC-ACID
NMR EXPERIMENTS.
INTRODUCTION

References:
1. S.S. Wijmenga and B.N.M. van Buuren, "The use of NMR methods for conformational studies
of nucleic acids, Prog. Nucl. Magn. Reson., 32, 287-387 (1998).
2. B. Fürtig, C. Richter, J. Wöhnert, and H. Schwalbe, "NMR of RNA", ChemBioChem, 4, 936-962(2003).
1. Sugar Assignment
H and H/C experiments

Sugar puckering
Measurement of J(CH) and J(HH)
2. Sequential assignment via phosphodiester linkage
H/P and H/C/P experiments

Measurement of J(PH) and J(PC)
NOE contacts
3. Sugar-to-base connectivities
H/C/N experiments
NOE contacts
4. Intra-base assignment
H/N, H/C and H/C/N experiments
5. Base-pairing identification
Through-hydrogen-bond H/N experiments

NOE contacts

O NH2
4
5 4 3NH 5 N3
2 6 2
H 5'' 6 H 5''
RO N O
RO 1N O 1
O
O H
H 5' H 3' H 2'
5' H 3' H 2'
H 4' H 4' H1'

H1'
H 2'' RO H 2''
RO
Uridine Cytosine, C
NH2 O
6 7 1 7
5 N 5 N
1 HN 6
N
8 8
2
2 N9 H2N N 4 N 9
N 4
H 5'' 3
3 H 5''
RO RO
O O
H H
5' H 3' H 2' 5' H 3' H 2'
H 4' H1' H 4' H1'

RO H 2'' RO H 2''
Adenine, A Guanine, G
N1 C2 N3(H) C4 C5(H5) C6(H6) N(H2)
U 142-146 154 156-162 169 102-107 137-144 -

(13-14) (5.0-6.0) (6.9-7.9)
C 150-156 159 210 166-168 94-99 136-144 94-98

(5.0-6.0) (6.9-7.9) (6.7-7.0 &
8.1-8.8)
N1(H) C2(H2) N3 C4 C5 C6 N7 C8(H8) N9 N(H2)
214-216 152-156 220-226 149-151 119-121 157-158 224-232 137-142 166-172 82-84
A (7-8) (7.7-8.5) (5-6 &
7.8)
146-149 156 167 152-154 117-119 161 228-238 131-138 166-172 72-76
G (12-13.6) (7.5-8.3) (5-6 &
8-9)
C1' C2' C3' C4' C5'
Sugar 87-94 70-78 70-78 82-86 63-68

(5-6 4.4-5.0 4.4-5.0 3.8-4.3 3.8-4.3)

Main Features of nucleic acid (NA) experiments
NAs usually present poor degeneracy and important conformational flexibility. Thus, 1H NMR
spectra of NAs can be difficult to analyze because of their low proton density and important
resonance overlapping due to poor 1H chemical shift dispersion. However, small NAs can be studied
using the same1D and 2D NMR experiments dedicated to study natural-abundance
organic molecules. Higher NAs would require double- and triple-resonance NMR experiments
involving low-sensitive 13C or 15N nuclei.
Sample Requirements
Unlabeled NAs can be analyzed with typical 1D and 2D NMR homo- and heteronuclear NMR
experiments. In compllex NAs, more sophisticated and specifically designed 15N and Triple-resonance
HCX experiments can require selective 13C/15N labeling or 13C15N-doubly labeled samples.
NAs experiments are best recorded on triple-resonance 1H,13C,15N or 1H,13C,31P inverse

probeheads with z-gradients capabilities.
Double-Resonance Triple-Resonance
Homonuclear
(HC, HN or HP) (1H-13C-15N or 1H-13C-31P)
Dynamics HNC HNCCH
HCCNH
TROSY
HN HCNH
NOE HSQC HN(H)CH
NOESY NOESY-HMQC HCN HCNC HCNCH

NOESY-NOESY HMQC-NOESY
HMBC
N
TOCSY-NOESY HMQC HCCH-TOCSY
NOESY-TOCSY C HC HSQC HCCH-COSY
CHEMICAL CCH
SHIFT H
P
TOCSY-HSQC
HSQC-TOCSY
PCCH-TOCSY
TOCSY HETCOR
COSY HP
HCP
HCP HCP-CCH-TOCSY
HCPCH
PCH
HP(H)CH

Experimental details for nucleic-acid experiments
Offsets
F1 channel: 1H (o1p)
F2 channel: 13C (o2p)
F3 channel: 15N (o3p) in HN-type or HCN-type experiments
F3 channel: 31P (o3p) in HP-type or HCP-type experiments
Mixing/Decoupling
From f2 channel:
13C CPD with GARP (pcpd2=80us at pl12)
13C-13C TOCSY with FLOPSY-16 (p9 at pl15)
From f3 channel:
15N CPD with GARP (pcpd3=200us at pl16)
31P CPD with GARP (pcpd3 at pl16)
Typical 13C pulses from F2 channel
p13 sp2: 90º C on- resonance (320us , spnam2=Q5.1000 )

P14 sp3: 180º C on-resonance (256us, spnam3= Q3.1000 )
p13 sp8: retro-90º C on-resonance (320us, spnam8= Q5tr.1000 )
p14 sp5: 180º C off-resonance (256us, spnam5=Q3.1000 )
p8 sp13: 180º adiabatic for inversion (500us using CHIRP , spnam13=Crp60,0.5,20.1 )
Typical 15N pulses from F3 channel
p30 sp9: 180º N1/N9 on- resonance (700us , spnam9=Q3.1000 )
Very Important!!: In all pulse programs the syntax
prosol relations=<triple_na>
is included for automated acquisition/set-up using edprosol/getprosol.

This file is defined in the following directory:
$TOPSPINHOME/conf/instr/spect/prosol/relations/triple_na

Specific Nucleic Acid NMR
· 3D HC and HN NOESY Experiments:
3D 1H-13C NOESY-CT-HSQC using echo-antiecho (na_noesyhsqcctetgp3d)

3D 1H-13C NOESY-HSQC using WATERGATE and refocusing of J(C5C6) during t1
(na_c6noesyhsqcgp3d)
3D 1H-15N NOESY-HSQC using WATERGATE (na_noesyhsqcf3gpwg3d)
· 2D and 3D HCN-Type Experim ents:
HCN experiment
3D using echo-antiecho (na_hcnetgpsi3d | NA _HCNE TGP SI 3D )
3D using echo-antiecho and selective pulses (na_hcnetgpsisp3d | NA _HCNET GPS IS P3D )
3D using MQ (na_hcnmq3d)
3D using MQ and selective 1H pulses (na_hcnmqsp3d)
3D using TROSY (na_trhcnph3d)
3D using TROSY and gradient selection (na_trhcnetsi3d)
2D H(C)N using TROSY (na_trhcnph)
2D H(C)N using TROSY and gradient selection (na_trhcnet)
2D H(C)N using MQ (na_hcnmqgpphpr | NA _HCNM Q GPP HPR )
HCNCH experiment
2D H(CNC)H (na_hcnchgpjrphsp | NA _HCNCHG PJ RPHS P)
3D H(C)N(C)H using MQ (na_hcnchgpmqsp3d)
3D H(C)N(C)H using MQ and TROSY (na_trhcnchmqsp3d)
3D H(C)N(C)H using MQ, TROSY and WATERGATE (na_trhcnchmqspwg3d)
3D (H)CN(C)H using MQ, TROSY and WATERGATE (na_trhcnchmqspwg3d2)
3D (HC)N(C)CH-COSY using MQ (na_hcncchcomq3d)
3D (HC)N(C)CH-TOCSY using MQ (na_hcncchdimq3d)
2D H(CN)H using WATERGATE (na_hcnhgpph19 | NA _HCNHG PP H19 )
2D H(CN)C (na_h68c68n19c42)
HCCNH experiment
3D H(6/8)(CCC)NH (na_hccnhdigpwg3d | NA _HCCNHD I GPW G 3D)
3D H(CC)NH-COSY (na_h5c5c4n3h_3d)
3D H(CC)NH-TOCSY (na_h56c56c4n3h_3d)
3D (H)C(C)NH-TOCSY (na_h56c56c4n3h_3d2)
2D H(NC6)C5 (na_hnc6c5etgpsi)
3D (H)N(C)CH (na_hncch3d)
3D TROSY-(H)CCH-COSY for intra-base correlation (na_trhcchco3d)
· Observation HN-N hydrogen bonds:
2D HNN-COSY (na_hnncosygpphwg | NA _HNN COSYG PP HWG )

2D HNN-COSY using shaped 15N 180º pulses (na_hnncosygpphspwg)
2D HNN-COSY using TROSY and shaped 15N 180º pulses (na_trhnncosygpphspwg)
· 2D and 3D HC Experiments to determine J(HH) and J(CH) :
3D H(C)CH-E.COSY experiment (na_hcchecgp3d | NA _HCCHECGP 3D)

3D HCC-TOCSY-CCH-COSY experiment (na_hcchfwdigp3d | NA _HCCHFW DI GP 3D )
3D HCC-TOCSY-CCH-E.COSY experiment (na_hcchfwdiecgp3d | N A _HCCHFWD I ECGP3D )
3D HCC-TOCSY-CCH-E.COSY experiment using jump-and-return (11) (na_hcchfwdiecgpjr3d)
3D forward directed quantitative gamma HCCH-TOCSY (na_ghcchfwdigp3d | NA _GHCCHFW D IG P3D )
2D 1H-13C HSQC for measuring JCH in sugars (na_hsqcetgpjcsp | NA _HSQ CET GP JCSP )

· 2D and 3D HP Experiments:
2D CT HH-{ 31 P}-COSY with presaturation to measure J(H3’-P) (na_hpcosyphpr | NA _HP COSY PHPR )
2D 1H-31P HETCOR experiment

Using echo-antiecho (na_xhcoetf3gp)
Constant-time using echo-antiecho (na_xhcoctetf3gp)
Constant-time without gradient selection (na_hpctco)
Constant-time without gradient selection using jr (na_hpctcojr)
2D 1H-31P HSQC experiment

Using CPMG (na_hsqcetf3gpxy)
Using CPMG and jump-and-return (na_hsqcf3gpjrphxy)
2D 1H-31P Hetero-TOCSY using cross-polarization (na_hpdi)
2D 1H-31P HSQC-NOESY using CPMG (na_hsqcf3gpnophxy)
2D 1H-31P Hetero-TOCSY-NOESY
Using cross-polarization (na_hpdino)
Using WATERGATE and cross-polarization (na_hpdino19)
3D using cross-polarization (na_hpdino3d)
3D using WATERGATE and cross-polarization (na_hpdino193d)
· 2D and 3D HCP Experiments:
HCP Experiment
3D HCP using sensitivity-enhancement (na_hcpetgpsi3d | NA _HCPET GP SI 3D)
3D HCP-TOCSY
Using CC TOCSY and presaturation (na_hcpdigp3d)
Using CC TOCSY and jump-and-return (11) (na_hcpdigpjr3d)
Using CC TOCSY and echo-entiecho (na_hcpdietgp3d)
Using CC TOCSY and sensitivity-enhancement (na_hcpdietgpsi3d | NA _HCP DI ETG PS I3D )
PHCH Experiment
3D P(H)CH using HMQC and echo-antiecho (na_hpccoetf3gp3d)
3D Constant-time P(H)CH using HMQC (na_hpcctco3d)
3D Constant-time P(H)CH using HMQC and echo-antiecho (na_hpccoctetf3gp3d)
3D Hetero-TOCSY-COSY using HMQC and cross-polarization (na_hpdico3d)
PCH Experiment
2D P(C)H using HC INEPT transfer (na_pcchco)
2D P(C)H using HC cross-polarization (na_pcchdi)
2D P(CCC)H using CC TOCSY and HC cross-polarization (na_pcchdi2)
2D quantitative HC(P) for determination of J(CP) (na_hcpqetgpsi.1 | NA _HCPQ ETG PS I.1 an d

na_hcpqetgpsi.2 | N A_HCP Q ETG PS I.2 )
2D P-FIDS experiment to measure J(HP) and J(CP) (na_pfidse tgpsi | N A_ PFI DS ETG PS I)

All NMR spectra shown in this chapter correspond

to a 1mM sample of doubly-labeled 13C/15N RNA
14-mer 5'-GGCACUUCGGUGCC-3' (commercially
available from Silantes) dissolved in
90% H2O/10% D2O (courtesy from Dr. W. Bermel
- Bruker Biospin, Kalshruhe). Experiments were
recorded in a 600MHz AVANCE spectrometer
equipped with a 5mm TXI probehead.
A) 1H spectrum using presaturation (zgpr)

B) 1H spectrum using water suppression using WATERGATE and heteronuclear 15N
decoupling during 1H acquisition.
AROMATIC &
AMINO
IMINO
PROTONS SUGAR
PROTONS
PROTONS
B)
A)

Expansions of the lowfield imino NH region.
G:C base pairs G:U base pairs
G9
U11 G10 G12
G2
U6
B) G1
U7
A)
Important classical 2D experiments to study NAs:
- 2D 1H-1H COSY and TOCSY experiments for assignment of ribose spin systems
- 2D 1H-1H NOESY experiment for intra- and inter-residue connectivities, and also
for base pairing
- 2D 1H-13C and 1H-15N HMQC i HSQC experiments to identify directly-attached

CH and NH spin systems.
- 2D 1H-13C HMBC and 2D long-range optimized HSQC to trace out two- and
three-bond away proton-carbon and proton-nitrogen connectivities. Very useful
for the assignment of non-protonated carbon and nitrogen in the base noiety.

2D NOESY Experiment
NOESY experiment is an important tool for conformational studies of

nucleic acids. It can be run on unlabeled and labeled nucleic acids. Important NOE contacts
for sequential assignments are imino-to-imino, imino-to-amino, and imino-to-nonechangeable
proton regions. Information on base pairing and hydrogen bonding can be also extarcted
from NOE imino cross-peaks.
See all available NOESY schemes in the 2D NOESY chapter or also 3D X-edited NOESY experiments.
NOE
H H
t1 t2
noesyfpgpphwg
-y
p29
sp11
1 d1 d0 -x d y y d
H
p11
d8
sp1
Gz
G1 G2 G2

BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
NUCLEIC-ACID NMR
2D & 3D HCN EXPERIMENTS

2D Constant-time HSQC/HMQC Experiment
1H-13C correlation experiments can be recorded as usual for

both unlabeled and 13C-labeled NAs. IN the later, constant-time experiments are
recommended to refocus J(CC) during the indirect F1 dimension. See the corresponding
2D HSQC and HMQC chapters for all availables pulse programs.
1 2
H C H
t1 t2
hsqcctetgpsp.2
y
Frec
1 d1 d4 d4 p28
H d4 d4
F1
13
C d0 d23 d23-d0
GARP
p8 p8 pl12
sp13 sp13
15
N optional
Gz
G2
G1
H5'/H5''
H2´/H3'
H4'
H1´
H5(C) d1=1.5s
d4=1/4J(CH)=1.72ms
H5(U) (optimized to cnst2=145Hz)
d23=CT(C) period=8.8ms
For a complete assignment,

H8(A,G)/H6(U,C) See Fig. 6 in 04jb69-28
H2(A)

hmqcctetgp
Frec
1 d1 d4 d4
H d4 d4
F1
13
d23/2 d23/2
C -d0 -d0 d0 d0
GARP
p14 p14 pl12
sp3 sp3
15
N optional
Gz
G3 G4 G2
G1 G1
d1=1.5s
d4=1/4J(CH)=1.72ms
(optimized to cnst2=145Hz)

3D Constant-time 1H-13C NOESY-HSQC Experiment
Constant-time version of the 3D NOESY-HSQC experiment to be

applied on 13C-labeled NAs. Useful to remove J(CC) splitting from the indirect C dimension.
The experiment allows to detect intra-residue 1H-1H NOE contacts between individual sugar
rings and their connected bases.
1
JCH NOE
2 3
H H NOE
H H C H
C
t1 t2 t3
na_noesyhsqcctetgp3d
y y
1
H d1 d0 d0 d8 d4 d4 d4 d4
F1
13 d10 d23 d23-d10

C GARP
p8 p8 p8 pl12
sp13 sp13 sp13
15
Noptional
Gz
G3 G1 G2
C
H(C)
d1=1.5s
d8=NOESY mixing time=100ms
d4=1/4J(CH)=1.72ms
(optimized cnst2=145Hz)

Non-constant-time version of the 3D NOESY-HSQC experiment with selective

refocusing of the H(C6C5) coupling constant by means of 180º 13C selective pulses
(p14=1ms, spnam3=Q3)) on C5 during the indirect d10 period.
na_c6noesyhsqcgp3d
y y
1 d1
H d0 d0 d8 d4 d4 d4 d4
CW
pl32 F1
13
d d10 d10
C GARP
p8 p8 p14 p8 pl12
sp13 sp13 sp3 sp13
C5
p14 p14
sp5 sp5
15
N
optional
Gz
G3 G4 G5 G5
d1=1.5s
d8=NOESY mixing time=100ms
d4=1/4J(CH)=1.25ms (optimized to cnst2=200Hz)
SW in the C dimension reduced to 16.5ppm

2D 1H-15N HSQC Experiment
Assignment of exchangeable imino and amino protons with their directly-attached nitrogen nuclei in H2O.
1 2
H N H
t1 t2
hsqcfpf3gpphwg
y
d26 d26 Frec
1 -x
H d1 d26 d26 -x -x
p11 F1
sp1
15
N d d0 d0 e d
GARP
pl16
13
C
p8
sp13
Gz
G1 G2 G3 G3
N2(G)
N6(A)
NH2
region N4(C)
Full assignment:
Fig. 5 in 04jb69-28
N1(G)
N3(U)
d1=1.5s
p11=90º water selective=1ms (Squa100.1000)
d26=1/4J(NH)=2.77ms

1 15
3D H- N NOESY-HSQC Experiment
Sequential assignment of exchangeable imino and amino groups via NOE contacts.Three important connectivities:
imino-to-imino, imino-to-amino, and amino-to-non exchangeable aromatic and sugar protons
1
JNH NOE
H H 2 3
NOE
N H H N H
t1 t2 t3
na_noesyhsqcf3gpwg3d
y y y
-x -x d26-x -x Frec
1
H d1 d0 d0 d8 d26 d26 d26
CW
pl32 p29 F1
sp11
15 d10 d10
N GARP
pl16
13
C optional
p8 p8
sp13 sp13
Gz
G3 G4 G4 G5 G5 G6 G6
N
H(N)
d1=1.5s
d8=NOE mixing time=100ms
p11=water selective=1ms (Squa100.1000)
p29=water selective=2ms (sinc1.1000)
d26=1/4J(NH)=2.77m
(optimized cnst4=90Hz) HN-H plane HN-N plane
ZGOPTNS=-DLABEL_CN

3D HCN Experiment
Experiment Description:
This experiment provides sugar-to-base and intrabase HCN connectivities in isotopically

labeled nucleotides. Several 2D and 3D versions of this out-and-back HCN experiment
incorporating SQC, MQC and TROSY effects are available.
HN
R R
R N
N HN
RO N(H)
H C C
O R N H
N N
H H C
H H
OR OH
HbCbNb
HsCsNb
NMR Spectrum
The experiment provides a 3D correlation map. As a function of experimental conditions,

both type of correlations can be observed in the same spectrum. Otherwhise, selective
HsCsNb or HbCbNb spectra can also be obtained.
C
H
References:
V. Sklenar, R.D. Peterson, M.R. Rejante & J. Feigon, J. Biomol. NMR 3, 721 - 727 (1993)
Related Experiments
HCNCH
HCNH

1 2 3 4
H C N C H
t1 t2 t3
na_hcnetgpsi3d
y y
Frec
1 p28
H d1 d4 d4 d4 d4 d4 d4 d d
y Y
13 d d22 d22 d10 d22 d22-d10

C GARP
F1 pl12
15 d0 d0 e d
N GARP
pl16
Gz
G1 G2 G2 G5 G4
G3 G3
na_hcnetgpsisp3d
y y
Frec
1 p28
H d1 d4 d4 d4 d4 d4 d4 d d
p14 y y p14 Y
sp3 sp3
13
C d d22 d22 d10 d22 d22-d10
GARP
F1
pl12
15
N d0 d0 e d
GARP
p30 p30
sp9 pl16
sp9
Gz
G1 G2 G2 G5 G4
G3 G3

The 2D HC(N) plane can be separated in two areas: A) sugar area (blue) displaying the
anomeric H1'-C1' correlations; and B) base area (red) displaying the olefinic H6C6(U,C) and
H8C8(A,G) correlations.
The 2D H(C)N plane displays four different sugar-to-base correlations C) H1'-to-N1(U,C)
(blue area); D) H1'-to-N9(A,G) (green area); E) H6(U,C)-to-N1(U,C) (yellow area); and F)
H8(A,G)-to-N9(A,G) (red area).
A d1=1.5s
E C d4=1/4J(CH)=1.40ms for all J(HC) ,
J(H8C8) and J(H6C6)
d22=1/4J(CN)=17.5ms for all J(N1C1'), J(N9C1'),
J(N1C6), and J(N9C8)
p14=2.6ms (spnam3=q3_rna_c68c1.256)
F D o2p=113.45ppm
B p30=700us(spnam9=Q3.1000)
d1=1.5s
d4=1/4J(CH)=1.56ms for J(H1'C1')
d22=1/4J(CN)=15ms for J(N1C1'), J(N9C1')
p14=1.0ms (spnam3=Q3.1000)
o2p=89.19ppm
p30=700us(spnam9=Q3.1000)
Reduced SW in the C dimension=16.5ppm
d1=1.5s
d4=1/4J(CH)=1.25ms for J(H8C8) and J(H6C6)
d22=1/4J(CN)=15ms for J(N1C6), and J(N9C8)
p14=1.0ms (spnam3=Q3.1000)
o2p=137.7ppm
p30=700us(spnam9=Q3.1000)

3D MQ-HCN Experiment
Version of the HCN experiment that involves multiple-quantum coherences (MQC) instead
of SQC to enhance relaxation features.
J.P. Marino, J.L. Diener, P.B. Moore & C. Griesinger, J. Am. Chem. Soc. 119, 7361-7366 (1997)
1 2 3 4
H C N C H
t1 t2 t3
na_hcnmq3d
y
Frec
1
H d1 d4 d4 d4 d4
13 d22 d22 d22 d22 d22/4 d22/4 d22/4 d22/4

C /4 /4 /4 /4 -d10 -d10 +d10 +d10
GARP
p14 p14 p8 p14 p14 pl12
15
N d d0 d0 d
GARP
p30 p30
pl16
sp9 sp9
Gz
G3 G3 G4 G4 G4 G4 G5 G6 G7 G7 G7 G7 G8 G8
na_hcnmqsp3d
y
Frec
1 d1
H d4 d4 d4 d4
CW
pl32 p12 p12 y p12 p12
sp23 sp23 sp23 sp23
13 d22 d22 d22 d22 d22/4 d22/4 d22/4 d22/4
C /4 /4 /4 /4 -d10 -d10 +d10 +d10
GARP
p14 p14 p8 p14 p14 pl12
15
N d d0 d0 d
GARP
p30 p30
pl16
sp9 sp9
Gz
G3 G3 G4 G4 G4 G4 G5 G6 G7 G7 G7 G7 G8 G8

d1=1.5s
d4=1/4J(CH)=1.40ms for all J(H1'C1') ,
J(H8C8) and J(H6C6)
d22=1/4J(CN)=16.0ms for all J(N1C1'), J(N9C1'),
p14=2.6ms (spnam3=q3_rna_c68c1.256)
o2p=113.45ppm
p30=700us(spnam9=Q3.1000)
p12=1.65ms (spnam23=reburp.1000)
d1=1.5s
d4=1/4J(CH)=1.56ms for J(H1'C1')
d22=1/4J(CN)=16ms for J(N1C1'), J(N9C1')
p14=1.0ms (spnam3=Q3.1000)
o2p=89.19ppm
p30=700us(spnam9=Q3.1000)
d1=1.5s
p14=1.0ms (spnam3=Q3.1000)
o2p=137.7ppm
p30=700us(spnam9=Q3.1000)

3D TROSY-HCN Experiment
Version of the HCN experiment that involves multiple-quantum coherences (MQC) and TROSY
effects instead of SQC to enhance relaxation features.
1. R. Fiala, J. Czernek & V. Sklenar, J. Biomol. NMR 16, 291-302 (2000)

2. R. Riek, K. Pervushin, C. Fernandez, M. Kainosho & K. Wuethrich, J. Am. Jacs. Soc. 123, 658-664 (2001)
3. B. Brutscher & J.-P. Simorre, J. Biomol. NMR 21, 367-372 (2001)
na_trhcnetsi3d
y Y=-y
Frec
1 d1
H CW
d4 d4 d4 d4 d4 d4
pl32 p23
sp0
13 d22-d4
C d22-d4
+d0 -d0 GARP
p8 p8 pl12
sp13 sp13
15
N d10
GARP
p30 pl16
sp9
Gz
G3 G3 G4 G4
G1 G2
na_trhcnph3d
y
Frec
1
d1
H CW
d4 d4 d4 d4
pl32 p23 p28

sp0
13
C d22+d0 d22-d0
GARP
p8 p8 pl12
sp13 sp13
15 d10
N
GARP
pl16
Gz
G3 G3 G4 G4 G5 G5
d1=1.5s
d4=1/4J(CH)=1.40ms for all J(H1'C1') ,
J(H8C8) and J(H6C6)
d22=1/2J(CN)=30ms for all J(N1C1'), J(N9C1'),
p23=0ms (spnam3=q3_rna_c68c1.256)
o2p=113.45ppm
p30=700us(spnam9=Q3.1000)

2D TROSY-H(C)N Experiment
2D TROSY version of the HCN experiment in which the 2D H(C)N plane is obtained
References:
R. Fiala, J. Czernek & V. Sklenar, J. Biomol. NMR 16, 291-302 (2000)
HN
R R
R N N HN
N(H)
RO
H C C
O R N H
N N
H H C
H H
OR OH
Hb(Cb)Nb
Hs(Cs)Nb
The same acquisition parameters as discussed

in the 3D HCN experiments

1 2 3 4
H C N C H
t1 t2
na_trhcnet
y
Frec
d1
1 d4
H CW
d4 d4 d4
pl32 y y
13
C d d22/2 d22/2 d22/2 d22/2 d
GARP
p8 p14 p8 p14 p14 pl12
15
N d0 d0 d0 d0 d GARP
p30 p30 pl16
sp9 sp9
Gz
G3 G3 G4 G5 G5 G6 G7 G7 G8
G1 G2 G1
na_trhcnph
y
Frec
d1
1 d4
H CW
d4 d4 d4
pl32 y y
13
C d d22/2 d22/2 d22/2 d22/2 d
GARP
p8 p14 p8 p14 p14 pl12
15
N d0 d0 d0 d0 d GARP
p30 p30 pl16
sp9 sp9
Gz
G3 G3 G4 G5 G5 G6 G7 G7 G8 G9 G9

2D MQ-H(C)N Experiment
2D MQ version of the HCN experiment in which the 2D H(C)N plane is obtained.
References:
1. J.P. Marino, J.L. Diener, P.B. Moore & C.Griesinger, J. Am. Chem. Soc. 119, 7361 - 7366 (1997)
2. V. Sklenar, T. Diekmann, S.E. Butcher & J.Feigon, J. Magn. Res. 130, 119 - 124 (1998)
1 2 3 4
H C N C H
t1 t2
na_hcnmqgpphpr
y y
Frec
1 d1
H d4 d4 d4 d4
presat
pl9 p14 y y p14
sp5 sp5
13
C d22 d22 d22 d22
GARP
F1 pl12
15 d d0 d0 e d
N GARP
p30 p30 pl16
sp9 sp9
Gz
G1 G1 G2 G2 G2 G2 G3 G4 G5 G5 G5 G5 G6 G6
The same acquisition parameters as discussed

in the 3D HCN experiments

2D H(CNC)H Experiment
R
Experiment Description R
N
N(H) HN
2D version of the HCNCH experiment H
that allows to correlate the anomeric N N R N H
proton of the sugar ring with the H6/H8 RO RO
of the connected base in isotopically O
O
labeled oligonucleotides. H H
H H
H H
OR OH H H
References: OR OH
V. Sklenar, R.D. Peterson, M.R. Rejante, E. Wang & J. Feigon,

J. Am. Chem. Soc. 115, 12181 - 12182 (1993)
1 2 3 4
H C N C H
t1 t2
na_hcnchgpjrphsp
y -x -x
Frec
1
H d1 d0 d4 d0 d4 d27 d d19 d27 d19 d19 d27
F1 p14 p14 p14

sp5 sp0 sp3
13
C d d4 d4 d4 d4 d25 d25
GARP
pl12
15
N d23 d23 d
GARP
p30 pl16
sp9
Gz
G1 G2 G2 G3 G3 G4 G5 G6 G7 G7
d1=1.5s
d4=1/4J(CH)=1.56ms
d23=1/4J(CN)=17ms
d25=1/4J(CN)=16ms
d27=1/4J/CH)=1.25ms
d19=134us
p14=1ms (spnam3=spnam5=Q3.1000
and spnam0=q3_rna_c68c1.1000)
o2p=113.5 ppm

3D H(C)N(C)H Experiment
3D version of the HCNCH experiment that allows to correlate the

two different HCN correlations observed in the HCN experiment. The experiment starts from
the H1'-C1' ribose pair, N1/9 is allowed to evolve in an indirect dimension and finally the
H6C6/H8C8 base proton is detected.
R
R
N
N(H) HN
H
N N R N H
RO RO
O O
H H H H
H H
OR OH H H
OR OH
NMR Spectrum
The experiment provides a 3D correlation map
H1' (ribose)
N
H
(base)
References:
R. Fiala, F. Jiang & V. Sklenar, J. Biomol. NMR 12, 373-383 (1998)
Related Experiments
HCN experiment

1 2 3 4
H C N C H
t1 t2 t3
na_hcnchmqsp3d
y
Frec
1 d1 d4 d27
H CW -d0 d0 d4 d4
*2
d27 d27
*2
pl32 p8 p12 p12 p12 p14 p12
p23 sp24
sp0
13 d22 d22 d22/2 d22 d25 d25/2 d25 d25
C /2 /2
d4
-d4 /2 /2 -d27 d27 /2 /2
GARP
p14 p8 pl12
sp3 sp13
15 d23
N d d10 d23 -d10 d
GARP
p30 pl16
sp9
Gz
G3 G3 G4 G4 G4 G4 G5 G6 G7 G7 G7 G7 G8 G8
d1=1.5s
d4=1/4J(C1'H1')=1.6ms
d22=1/4J(C1'N)=18ms
d23=1/4J(C1'N, C6/8N)=17ms
d25=1/4J(C6/8N)=16ms
d27=1/4J/C6/8H6/8)=1.25ms
p12=3.3ms (spnam23=spnam24=reburp.1000)
p14=1ms (spnam3=spnam5=Q3.1000
p23=0 (spnam0=q3_rna_c68c1.1000)
cnst21=89.19 (C1' chemical shift)
cnst22=137.7 (C6C( chemical shift)

3D TROSY MQ-H(C)N(C)H Experiment
R. Fiala, J. Czernek & V. Sklenar, J. Biomol. NMR 16, 291-302 (2000)
1 2 3 4
H C N C H
t1 t2 t3
na_trhcnchmqsp3d
y
Frec
1 d1
H CW
d4-d0 d0 d4 d4*2 d27 d4 d4
pl32 p8 p12 p12 p23 p14

13 d22 d22 d22/2 d22
C /2 /2
d4
-d4 /2
d25 d25
GARP
p14 p8 pl12
sp3 sp13
15
N d d10 d23-d10 d
GARP
p30 pl16
sp9
Gz
G3 G3 G4 G4 G4 G4 G5 G6 G7 G7 G8 G8
na_trhcnchmqspwg3d
y
Frec
1 d1
H CW
d4-d0 d0 d4 d4*2 d27 d4 d4
pl32 p8 p12 p12 p23 p14

13 d22 d22 d22/2 d22
C /2 /2
d4
-d4 /2
d25 d25
GARP
p14 p8 pl12
sp3 sp13
15
N d d10 d23-d10 d
GARP
p30 pl16
sp9
Gz
G3 G3 G4 G4 G4 G4 G5 G6 G7 G7 G8 G8

3D TROSY (H)CN(C)H Experiment

R
R
TROSY version of the 3D HCNCH
N
experiment in which C1' chemical N(H) HN
shift evolves instead of the H
H1' chemical shift. N N R N H

RO RO
R. Fiala, J. Czernek & V. Sklenar, O O
J. Biomol. NMR 16, 291-302 (2000) H H H H
H H
OR OH H H
OR OH
1 2 3 4
H C N C H
t1 t2 t3
na_trhcnchmqspwg3d2
y
Frec
1 d1
H CW
d4 d4 d4*2 d27 d4 d4
pl32 p8 p12 p12 p23 p14

13 d22/2 d22 d22/2 d22/2
C -d0 /2 d4 -d4 +d0
d25 d25
GARP
p10 p14 p10 p8 pl12
sp25 sp3 sp25 sp13
15
N d d10 d23-d10 d
GARP
p30 pl16
sp9
Gz
G3 G3 G4 G4 G4 G4 G5 G6 G7 G7 G8 G8
The experiment yields a 3D map correlation the sugar C1' carbno

with the N1/N9 nitrogen and the H2/H8 protons of the connected base.
C1' (ribose)
N
H
base
d1=1.5s p12=3.3ms (spnam23=spnam24=reburp.1000)

d4=1/4J(C1'H1')=1.6ms p14=1ms (spnam3=spnam5=Q3.1000
d22=1/4J(C1'N)=18ms p23=0 (spnam0=q3_rna_c68c1.1000)
d23=1/4J(C1'N, C6/8N)=17ms cnst21=89.19 (C1' chemical shift)
d25=1/4J(C6/8N)=16ms cnst22=137.7 (C6C8 chemical shift)
d27=1/4J/C6/8H6/8)=1.25ms cnst23=72 (C2' chemical shift)

3D MQ-(HC)N(C)CH-COSY Experiment
This experiment (HCN-CCH COSY) uses the good chemical shift dispersion of N1/N9 to assign
the ribose spin system via a C1' to C2' COSY transfer after an initial HCNC transfer.
N
N(H)
H
N N
RO
O
H H
H H
OR OH
NMR Spectrum
C1'/C2' (ribose)
H1'/H2'
References:
(ribose)
W. Hu, L. Jiang & Y.Q. Gosser, J. Magn. Reson. 145, 147-151 (2000)
Related Experiments
HCN-CCH TOCSY

1 2 3 4 5
H C N C C H
t1 t2 t3
na_hcncchcomq3d
y
Frec
1 d1 d4 d4
H CW *2 *2
d4 d4 d4 d4 d4 d d
pl32 y y Y=-y
d23/2 d23/2 d23 d23 d25 d25 d25/2 d25/2 d27

d27 d10
C +d4 -d4 /2 /2 /2 /2 -d4 -d4 -d10
GARP
p14 p8 pl12
sp3 sp13
15
N d d0 d0 d
p30 p30
sp9 sp9
Gz
G3 G4 G5 G5 G5 G5 G2
G1
d1=1.5s
d4=1/4J(C1'H1')=1.56ms
d23=1/4J(C1'N)=18ms
d25=1/4J(C1'N)=15ms
d27=1/8J/C1'C2')=3.25ms
cnst21=C1' chemical shift=90ppm
cnst23=C2' chemical shift=72 ppm
o2p=79ppm
p14=1ms (spnam3=Q3.1000)
o3p=160 ppm
p30=700us (spnam9=Q3.1000)
HN plane HC plane

3D MQ-(HC)N(C)CH-TOCSY Experiment
This experiment (HCN-CCH TOCSY) uses the good chemical shift dispersion of N1/N9 to assign
the ribose spin system via a C1' to Cn' TOCSY transfer after an initial HCNC transfer.
N
N(H)
H
N N
RO
O
H H
H H
OR OH
NMR Spectrum
Cn' (ribose)
Hn'
(ribose)
References:
W. Hu, L. Jiang & Y.Q. Gosser, J. Magn. Reson. 145, 147-151 (2000)
Related Experiments
HCN-CCH COSY

1 2 3 4 5
H C N C C H
t1 t2 t3
na_hcncchdimq3d
y
Frec
1 d1 d4
H CW *2
d4 d4 d4 d4 d d
pl32 y y y Y=y
d23/2 d23/2 d23 d23 d25 d4 d15

C d25 d10 d3 d10 d3
+d4 -d4 /2 /2 -d4*2 *2 DIPSI-3 d GARP
p14 p8 p14 pl15 pl12
sp3 sp13 sp3
15
N d d0 d0 d
p30 p30
sp9 sp9
Gz
G3 G4 G5 G6 G6 G6 G6 G2
G1
d1=1.5s
d4=1/4J(C1'H1')=1.56ms
d3=1/4J(C'H')=0.95ms
d15= CC TOCSY= 12 ms
d23=1/4J(C1'N)=18ms
d24=1/8J(C'H')=0.78ms
d25=1/4J(C1'N)=15ms
d27=1/8J/C1'C2')=3.25ms
cnst21=C1' chemical shift=90ppm
cnst23=C2' chemical shift=72 ppm
o2p=79ppm
p14=1ms (spnam3=Q3.1000)
o3p=160 ppm
p30=700us (spnam9=Q3.1000)

2D H(CN)H Experiment
Experiment alternative to the HCNCH experiment that R

allows to correlate the H1' ribose proton with the base
H6/8 protons via 2J(N1/9-H6/8) coupling constant N
N(H)
H
S .Tate, A. Ono & M. Kainosho, J. Am. Chem. Soc. 116,
N N
5977 - 5978 (1994).
RO
O
1 2 3
H H
H H
H C N H OR OH
t1 t2
Hs(CsNb)Hb
na_hcnhgpph19
y
Frec
1
H d1 d0 d4 d0 d4 d4 d26 d26 d26
p14 p14
F1
sp3 sp3
13
C d d22 d22
GARP
pl12
15
N d d22 d22 d
GARP
pl16
Gz
G1 G2 G2 G3 G4 G4 G5 G6 G6
d1=1.5s
d4=1/4J(CH)=1.56ms
d22=1/4J(CN)=18.0ms
d26=1/4J(NH)=15ms (long-range)
p14=1ms (spnam3=Q3.1000)
o2p=89.19ppm

3D TROSY-(H)CCH-COSY Experiment
Experiment that correlates the adenine H2 and H8 protons in 13C-labeled NAs molecules.
The experiment provides 13C chemical shifts of all carbon nuclei in the adenine base and also
thelong-range H8-C4/C5/C8 correlation in guanines ( 01jb173-20).
NH2 NH2
C C N
N N C
N C
C H C H
C C C C
N H N N
H N
R R
NMR Spectrum
C
H
References:
B. Simon, K. Zanier & M. Sattler, J. Biomol. NMR 20, 173-176 (2001)
Related Experiments
2D 1H-13C HMBC

1 2 3 4
H C C C H
t1 t2 t3
na_trhcchco3d
y Y y -x
Frec
1 d1 d4 d4 d22 d4 d4 d4 d4
H
y y
y
d22
d22 -d4
13 d d25 d25 d27 d27 d0 d0 d27 d27 d10
C -d4 -d10 GARP
p8 p15 p15 p8 pl12
sp13 sp10 sp10 sp13
15
N
Gz
G3 G4 G4 G5 G5 G6 G6 G2
G1 G1
d1=1.5s
d4=1.25ms
H8(A) cnst28=4.69 C5 offset
d22=1/4J(C2C5) and
1/4(C8C4/C6)=14.2ms
H2(G) d25=1/2J(C5C6)=7.12ms
d27=1/4J(C5C4/C6)=1ms
o2p=140ppm
p15=90 pulse C5 off-resonance
H2(A)

2D H(CN)C Experiment
NH2 O
The H(CN)C experiment (also
referred as H(6/8)C(6/8)N(1/9)C(2/4)) N
N
correlates the aromatic H6/8 protons NH
of the base with the non-protonated H C
C2/4 carbons via the C6/8 and N1/9 O N H
centers.
N N NH2
s
References: s
B. Fuertig, C. Richter, W. Bermel & H. Schwalbe,

J. Biomol. NMR 28, 69-79 (2004)
1 2 3 4 5 6
H C N C N C H
t1 t2
na_h68c68n19c42
y y
Frec
1 p28
H d1 d4 d4 d4 d4 d4 d4 d d
p10 p10 p15 p15 p10 p10 Y

13
C d d23 d23
d0 d0 d0 d0
d23 d23
GARP
p8 p10 p8
sp25 pl12
sp13 sp13
15
N d25 d25 d25 d25
GARP
p30 p30 p30 p30 p30
sp9 sp9 sp9 sp9 sp9 pl16
Gz
G3 G4 G1 G2
d1=1.5s
C4 in G d25=1/4J(CN)=15ms for J(N1C2), and J(N9C4)
C2 in U o2p=cnst27=152ppm
cnst22=137.7=chemical shift C6(CU)/C8(AG)
p30=700us(spnam9=Q3.1000)
p10=
C2 in C p15=

3D H(6/8)(CCC)NH Experiment
Experiment Description: O
O H
The HCCNH-TOCSY experiment N
allows the correlation between H C N
the exchangeable imino NH N C C
C H H N O
groups with H8 in guanines and
C
H6 in uridines. H2N N N
H R
References: R
G U
V. Sklenar, T. Dieckmann, S. E.Butcher & J. Feigon,
J. Biomol. NMR 7, 83 - 87 (1996)
1 2 3 4
H C C N H
H(C)
t1 t2 t3
N
HN
na_hccnhdigpwg3d
y
Frec
d1 d26 d26
1 -x
H CW
d4+d0 d0 d4 -x -x
pl32 p29 p11

F1
sp11 sp1
13
C d d4 d4
DIPSI-3 y
pl26 y
p25
15
N DIPSI-3 y d26 d10 d10 d26 d GARP
pl23 pl16
p25
Gz
G1 G2 G3 G3
d1=1.5s
d4=1/4J(CH)=12.5ms
optimized for cnst2=200Hz
d26=1/4J(NH)=2.77ms
optimized for cnst4=90Hz
p29=p11=1ms (Squa100.1000)
p25=245us
l1=1
l1=3
o2p=149 ppm

3D H(CC)NH-COSY Experiment
The HCCNH experiment allows the correlation of the exchangeable NH and NH2 spin systems
with the H5 and H6 protons in U and C via a CC COSY transfer.
The experiment starts from the aromatic CH spin system and detects H(N). It can be separately
optimized for imino NH or for amino NH2 groups.
References:
J. Woehnert, R. Ramachandran, M. Goerlach & L.R. Brown, J. Magn. Reson. 139, 430-433 (1999)
1 2 3 4
H C C N H
t1 t2 t3
na_h5c5c4n3h_3d
y
d26 Frec
d26
1 d4 -x -x
H d1 -d0 d0 d4 d d4
p14 p14 p13 p14 p14 p11

C5 d23 d23 d23
p13
sp2
C4 d25 d25
p14 p14 p13 p14 p13 p14

15 d24 d25 d25
N d +d10 -d24 -d10
d
GARP
p30 p30
pl16
sp9 sp9
Gz
G3 G4 G4 G5 G5

d1=1.5s
d4=1/4J(C5H5)=1.25ms
d23=1/4J(C5C4)=4.1ms
O
d24=1/4J(NH) for U=2.78ms
H C H
d25=1/4J(C4N)=10ms
C N
d26=1/4J(NH)=2.5ms
C p11=1 ms (spnam1=Squa100.1000)
N O p13=1ms (spnam2=Q5.1000 and spnam8=Q5tr.1000)
p14=1ms (spnam3/5/7=Q3.1000)
R
cnst24=C4(C/U) chemical shift=169ppm
U
o3p=160ppm (for U)
p30=700us (spnam9=Q3.1000)
H5
N
H(N)
d1=1.5s
H H d4=1/4J(C5H5)=1.25ms
N d23=1/4J(C5C4)=4.1ms
H d24=1/8J(NH) for C=1.39ms
H C
C N d25=1/4J(C4N)=10ms
d26=1/4J(NH)=2.5ms
C p11=1 ms (spnam1=Squa100.1000)
N O p13=1ms (spnam2=Q5.1000 and spnam8=Q5tr.1000)
p14=1ms (spnam3/5/7=Q3.1000)
R
C o3p=100ppm (for C)
p30=700us (spnam9=Q3.1000)

3D H(CC)NH-TOCSY Experiment
The HCCNH-TOCSY experiment allows the correlation of the exchangeable NH and NH

spin systems with the H5 and H6 protons in U and C via a CC TOCSY transfer.
References:
J. Woehnert, M. Goerlach & H. Schwalbe, J. Biomol. NMR 26, 79-83 (2003).

1 2 3 4
H C C N H
t1 t2 t3
na_h56c56c4n3h_3d
y
d26 Frec
d26
1 d4 -x -x
H d1 -d0 d0 d4 d
p11
sp1
d15
C5/6 d4 d4
DIPSI-3 d25 d25
p13 p14 p13 p14
p8 p8 pl15 sp2 sp3 sp8 sp3
sp13 sp13
15 d24 d25 d25

N d +d10 -d24 -d10
d
GARP
p30 p30
pl16
sp9 sp9
Gz
G3 G4 G4 G5 G5
H5/H6
N
H(N)

H H
O N
H C H H C H
C N C N
C C
N O N O
H H
R R
U C

o3p=160ppm (for U)
d1=1.5s
d4=1/4J(C5H5)=1.25ms
d24=1/4J(NH) for U or 1/8J(NH) for C
d25=1/4J(C4N)=10ms
d26=1/4J(NH)=2.5ms
d15=CC TOCSY=19.5ms
p13=1ms (spnam2=Q5.1000 and spnam8=Q5tr.1000)
p14=1ms (spnam3=Q3.1000)
p30=700us (spnam9=Q3.1000)
cnst24=169ppm (C4 in C/U)
o2p=89.19ppm
o3p=160ppm (for U) or 100ppm(for C)

o3p=100ppm (for C)

3D (H)C(C)NH-TOCSY Experiment
The HCCNH-TOCSY experiment allows the correlation of the exchangeable NH and NH

spin systems with the C6 carbons in U and C via a CC TOCSY transfer.
References:
J. Woehnert, M. Goerlach & H. Schwalbe,J. Biomol. NMR 26, 79-83 (2003)
1 2 3 4
H C C N H
t1 t2 t3
na_h56c56c4n3h_3d2
y
d26 Frec
d26
1 -x -x
H d1 d4 d4
p11
sp1
d15
d4+
C5/6 d d0 d0 d4
DIPSI-3 d25 d25
p8 p13 p14 p13 p14

pl15 sp2 sp3 sp3
sp13 sp8
15 d24 d25 d25

N d +d10 -d24 -d10
d
GARP
p30 p30
pl16
sp9 sp9
Gz
G3 G4 G4 G5 G5
C5/C6
N
H(N)

H H
O N
H C H H C H
C N C N
C C
N O N O
H H
R R
U C

o3p=160ppm (for U)
d1=1.5s
d4=1/4J(C5H5)=1.25ms
d25=1/4J(C4N)=10ms
d26=1/4J(NH)=2.5ms
d15=CC TOCSY=19.5ms
p13=1ms (spnam2=Q5.1000 and
spnam8=Q5tr.1000)
p14=1ms (spnam3=Q3.1000)
p30=700us (spnam9=Q3.1000)
cnst22=137ppm (C6 in C7U)
o2p=121.35ppm
d24=1/8J(NH) for C=1.39ms

o3p=100ppm (for C)

2D H(NC)C Experiment
O
The H(NC)C experiment allows the assignment of
C5 carbon in G residues from imino NH proton H
N
via the C6 carbon (04jb69). The pulse scheme is N
a variant of the out-and-back HNCOCA experiment. H C
N N NH2
References:
s
B. Fuertig, C. Richter, W. Bermel & H. Schwalbe,
J. Biomol. NMR 28, 69-79 (2004)
1 2 3 4 5 6
H N C C C N H
t1 t2
na_hnc6c5etgpsi
y y
y -y y -y y -y
-x -x -x Frec
1 d1 d26 d26 d d21 d21 d
p1 p2 p11 p26 pl19
d26 d26
sp1
15N d23 d23 d23 d23
GARP
p22 p21 pl16
f1
C6 d25 d25
d d25 d25
p14 p13 p14 p13 p14 p14 p13 p14 p13 p14
sp3 sp2 sp3 sp8 sp7 sp7 y sp2 sp3 sp8 sp3
C5 d0 d0
p14 p14 p13 p14 p13 p14 p14

GZ
G5 G4
G3 G3 G4 G5 G6 G6
d1=1.5s
d26=1/4J(NH)=2.78ms
d23=1/4J(C6N)=25ms
d25=1/4J(C6C5)=2.8ms
d21=1/2J/NH)=5.56ms
p11=1s (spnam1=Squa100.1000)
p14=1ms (spnam3/5/7=Q3.1000)
p13=1ms (spnam2=Q5.1000 and spnam8=Q5tr.1000)
cnst25=C6(G) chemical shift=160ppm
cnst26=C5(G) chemical shift=119ppm
o2p=C5 chemical shift=165ppm
o3p=160ppm

3D (H)N(C)CH Experiment
The 3D HNCCH experiment allows the correlation of the imino N nitrogen with the
H2/C2 and H8/C8 spin systems in adenines.
References:
J.-P. Simorre, G.R. Zimmermann, L. Mueller & A. Pardi, J. Am. Chem. Soc. 118, 5316-5317 (1996)
H H
H H N
N
N
N N
N H C
H C
N N H
N N H
s
s
The experiment uses three different cross-polarization transfer schemes. First, a

heteronuclear cross-polarization (HCP) transfer from 1H to 15N. Then, another HC
transfer from N to C followed by a homonuclear TOCSY CC transfer
na_hncch3d
y
d4 d4
-x -x Frec
1 d1
H DIPSI-3 d
p25 yy p29 p11
pl25 sp11 sp1
15N
DIPSI-3 d0 d0 DIPSI-3 GARP
p25 p25 y y pl16
pl23 pl23
13 d22 d21
C d10 d4 d10 d4
DIPSI-3 FLOPSY-8 d GARP
p25 p7 pl12
pl26 pl20
GZ
G3 G4 G5 G5

1 2 3 4
H N C C H
t1 t2 t3
C
H
H8/C8
H2/C2
d1=1.5s
d4=1/4J(CH)=1.25ms
p11=p29=1s (spnam1=Squa100.1000)
p25=226us
d21=CC TOCSY=38ms
d22=CN TOCSY=45ms
o1p=cnst18=4.7ppm
cnst19=NH chemical shift
cnst25=C6 chemical shift=160ppm
o2p=cnst29=145 ppm (Caro)
o3p=cnst31=81ppm (NH2)

3D hydrogen-bond HNN Experiment
Experiment to detect hydrogen-bond NH-N connectivities (98jacs8293, 20NAR1585-28).
References:
A.J. Dingley & S. Grzesiek, J. Am. Chem. Soc. 120, 8293 - 8297 (1998)
GC Watson-Crick AT Watson-Crick
H
H
N O H Me
6 N N H O
4 N 6
N 1N H 4
N 3 1N H N 3
N N
2 2 N
N N N
H O H O
H
1 2 3 4
H N N N H
t1 t2
na_hnncosygpphwg
y
d26 d26 Frec
-x -x
1 -x
H d1 d26 d26
p11
F1 sp1
15
N d d23 d23 d0 d0 e d23 d23 d
GARP
pl16
Gz
G1 G2 G3 G3

d1=1.5s
p11=90º water selective
=1ms (Squa100.1000)
d26=1/4J(NH)=2.25ms
d23=1/4J(NN)=15ms
na_hnncosygpphspwg
y
d26 d26 Frec
1 -x p29 p29 -x -x -x
H d1 d26 d26 sp11 sp11
p11
F1 sp1
15
N d d27 d27 d27 d27 d0 d0 d0 d0 d27 d27 d27 d27 d
/2 /2 /2 /2 /2 /2 /2 /2 GARP
p32 p32 p32 p32 p32 p32 pl16
13
C
Gz
G1 G1 G2 G4 G4 G4 G4 G5 G5 G5 G5 G2 G3 G3
na_trhnncosygpphspwg
y y y
1 -x p29 y -x -x
H d1 d26 d26 sp11
p29 p11
F1 -y y sp1
sp11
15
N d d27 d27 d27 d27 d0 d27 d27 d27 d27
/2 /2 /2 /2 /2 /2 /2 /2 d
p32 p32 p32 p32 p32 p32

13
C
Gz


BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
NUCLEIC-ACID NMR
2D & 3D HCP EXPERIMENTS

2D 31P-1H HETCOR or HP COSY Experiment
Experiment to achieve sequential backbone assignment via through-bond J(H3´(i)P(i)) and J(H5'/H5''(i+1)P(i))
connectivities in unlabeled and 13C-labeled NAs.
The pulse sequence uses a direct 31P-to-1H INEPT-like transfer and can be also driven in a
constant-time mode..
Base
RO
O
C H H
C
H H
O H
H
O P O H
Base
- C
O O
H H
H H
OR H
P H
t1 t2
na_xhcoetf3gp
1 d1
H d d
CW
pl32
31
P d0 d0 d3 d3
13
C optional
GARP d1=1.5 s
p8 pl12 d3=1/6J(PH)=16.6 ms
sp13
(optimized cnst2=10Hz with cnst11=6)
Gz G1
o3p=0 ppm
G2 o2p=77 ppm

2D Constant-time HP COSY Experiment
Constant-time version of the na_xhcoctetf3gp

1H-31P HETCOR or HP-COSY
experiment 1
H d1 d d
CW
pl32
1 31
P d0 d21 d21-d0
P H
t1 t2 13
C optional
GARP
p8 pl12
sp13
Gz
G1 G2
na_hpctco
d1
1
H d
d
31
P d0 d21 d21-d0
13
C optional
GARP
p8 pl12
sp13
Gz
G1 G2G2 G3
na_hpctcojr
d1
1
H d
d d19
d1=1.5 s
d21=1/4J(PH)=22 ms
31
P d0 d21 d21-d0 (optimized cnst4=11Hz)
o3p=0 ppm
o2p=77 ppm
13
C optional
GARP
p8 pl12
sp13
Gz
G1 G2G2 G3

3D CT PHCH Experiment
Base
RO
O
The 3D constant-time version of the
C H H
P(H)CH experiment extends the backbone
C
assignment of the HP experiment to C3'(i) H H
and C5'(i+1) carbons by means a O H
1H-13C HMQC building block. H
O P O H
Base
C
References: O- O
H H
1. T. Carlomagno, M. Hennig & J.R. Williamson,
J. Biomol. NMR 22, 65-81 (2002) H H
OR H
2. G. Varani, F. Aboul-ela, F. Allain & C.C. Gubser,
J. Biomol. NMR 5 315-320 (1995) )
na_hpcctco3d
d1
1
H d
d d2 d2
31
P d0 d21 d21-d0
13
C optional d10 d10
GARP
p8 pl12
sp13
Gz
G1 G2G2 G3
G3G4 G4
d1=1.5 s
d21=1/4J(PH)=22.7ms
(optimized cnst4=J(PH)=11Hz)
d2=1/2J(CH)=3.44ms
(optimized cnst2=J(CH)=145Hz)

1 2 3
P H C H
t1 t2 t3
na_hpccoctetf3gp3d
1
H d1 d2 d2
31
P d0 d21 d21-d0
13
C d10 d10
GARP
p8 pl12
sp13
Gz
G2
G1
na_hpccoetf3gp3d
1
H d1 d2 d2
31
P d0 d0 d21 d21
13
C d10 d10
GARP
p8 pl12
sp13
Gz
G2
G1

2D P(C)H Experiment
Base
RO
Experiment to achieve backbone PH O
assignment by through-bond coherence C H H
transfer P-to-C via J(C4'(i)-P(i)) and C
H H
J(C4'(i+1)-p(i)) followed by an INEPT or
O H
cross-polarization C-to-H transfer.
H
O P O H
References: Base
C
O- O
S.S. Wijmenga, H.A. Heus, H.A.E. Leeuw, H. Hoppe, H H
M. van der Graaf & C.W. Hilbers, J. Biomol. NMR
H H
5, 82-86 (1995) OR H
1 2
P C H
t1 t2
na_pcchco
d1
1
H d
d4 d4 d19*2 d4
31
P d0 d0 d22 d22
13
C d d22 d22
GARP
pl12
Gz
G1 G2 G3G4 G4
na_pcchdi
d1
1
H d DIPSI-3
p6
pl10
31
P d0 d0 d22 d22
13
C d d22 d22
DIPSI-3 GARP
pl15 pl12
Gz
G1 G2

2D P(CC)H Experiment
Extension of the P(C)H experiment in which after the P-to-C transfer, a C-C TOCSY transfer
relays the information through all carbons of the ribose ring and, finally, a C-to-P
cross-polarization scheme allows to detect all ribose protons
References:
Base
S.S. Wijmenga, H.A. Heus, H.A.E. Leeuw, H. Hoppe,

M. van der Graaf & C.W. Hilbers, J. Biomol. NMR RO
O
5, 82-86 (1995).
H H
C
H H
O H
Base
H
O P O H
1 2 3
C
O- O
P C C H
H H
t1 t2
H H
OR H
na_pcchdi2
d1
1
H d DIPSI-3
p6
pl10
31
P d0 d0 d22 d22
13 d15
C d d22 d22
DIPSI-3 GARP
pl15 pl12
Gz
G1 G2
d15: TOCSY mixing time (CC) [13 msec]

d22: 1/(4J(CP)) [12.5 msec]

3D HCP Experiment Base
RO
Experiment Description: O
C H H
Out-and-back pulse scheme to correlate C
H H
backbone P, C and H in a 3D experiment O H
(94jacs6472).
H
O P O H
Base
References: C
O- O
H H
J.P. Marino, H. Schwalbe, C. Anklin, W. Bermel, D.M. Crothers
& C. Griesinger, J. Am. Chem. Soc. 116, 6472 - 6473 (1994) H H
OR H
1 2 3 4
H C P C H
t1 t2 t3
na_hcpetgpsi3d
y y
Frec
1 d1 d4 d4
H d24 d24 d4 d4 d d
y y Y
13 d d22 d22 d10 d22 d22-d10

C GARP
F1 pl12
31 d0 d0 e d
P GARP
pl16
Gz
G1 G2 G2 G1 G4
G3 G3
C
H
d1=1.5 s
d4=1/4J(CH)=1.6 ms (optimized cnst2=J(CH)=155Hz)
d22=1/8J(CP)=12.5ms (optimized cnst5=J(CP)=10Hz)
d24=0.8 ms (optimized cnst11=8)

3D HCP-TOCSY Experiment
Base
Variant of the 3D HCP experiment in
which a CC TOCSY transfer has been RO
O
included to involve all carbons and
H H
protons of the ribose ring (95JB87-5), in
C
particular, the well dispersed anomeric H H
O H
H1' protons. Base
H
O P O H
References:
O- C
O
J.P. Marino, H. Schwalbe, C. Anklin, W. Bermel, H H
D.M. Crothers & C. Griesinger, J. Biomol. NMR
H H
5, 87 - 92 (1995) OR H
NMR Spectrum
The out-and-back experiment provides a 3D

1H, 13C, 31P correlation map
C
H
d1=1.5 s
d4=1/4J(CH)=1.6 ms
(optimized cnst2=J(CH)=155Hz)
d22=1/8J(CP)=12.5ms
(optimized cnst5=J(CP)=10Hz)
d15=CC TOCSY mixing=11 ms

1 2 3 4 5
H C P C C H
t1 t2 t3
na_hcpdigp3d
y
Frec
1 d1
H d4 d4 d4 d4 d4
CW
pl32 p10
sp25
d15
13 d d22 d22 d22 d22 d10 d4 d10 d4 d
C DIPSI-3 GARP
F1 p9 p10 pl12
pl15 sp25
31
P d d0 d0 e d
GARP
pl16
Gz
G1 G2 G2 G3 G4 G5
na_hcpdigpjr3d
y -x -x
Frec
1 d19
H d1 d4 d4 d4 d19 d4
*2
d4
p10
sp25
d15
13 d d22 d22 d22 d22 d10 d4 d10 d4 d
C DIPSI-3 GARP
F1 p9 p10 pl12
pl15 sp25
31
P d d0 d0 e d
GARP
pl16
Gz
G1 G2 G2 G3 G4 G5 G6 G6

na_hcpdietgp3d
y
Frec
1 d4 d4 d4
H d1 d4 d4
p10
sp25
d15
13 d d22 d22 d22 d22 d10 d4 d10 d4
C DIPSI-3 GARP
F1 p9 p10 pl12
pl15 sp25
31 d d0 d0 e d
P GARP
pl16
Gz
G1 G2 G2 G3 G4 G6
G5
na_hcpdietgpsi3d
y y
Frec
1 d4 d4 d4 d24 d24 d4 d4 d d
H d1
p10 Y
sp25
d15
13 d d22 d22 d22 d22 d10 d4 d10 d4
C DIPSI-3 GARP
F1 p9 p10 pl12
pl15 sp25
31 d d0 d0 e d
P GARP
pl16
Gz
G1 G2 G2 G3 G4 G6
G5

2D 1H-31P HSQC using CPMG-XY16 Experiment
Modified version of the long-range optimized 1H-31P HSQC experiment in which a CPMG-XY16 pulse train
is included to avoid 1H-1H mpdulation
na_hsqcetf3gpxy
and exchange processes.
xy16 y xy16
References:
Frec
1 d31 d31 d31 d31
H d1 d d d
/2 /2 /2 /2
B. Luy & J.P. Marino,
J. Am. Chem. Soc. 123, xy16 F1 xy16
11306-11307 (2001) 31
P d0 d0 d d
GARP
loop loop pl16
13
C optional
GARP
p8 pl12
Gz sp13
G1 G3
G2
1 2 na_hsqcf3gpjrphxy
H P H xy16 y xy16
Frec
t1 t2 1 d31 d31 d31 d31 d d19
H d1 d
/2 /2 /2 /2 *2
xy16 F1 xy16
31
P d d0 d0 d
GARP
loop loop pl16
13
C optional
GARP
p8 pl12
Gz sp13
G3 G4 G5 G5
d1=1.5 s
d26=1/4J(PH)=12.5 ms
(optimized cnst4=J(PH)=J(20Hz)
d21=delay in CY16-CPMG=100us
hsqcetf3gp vs hsqcetf3gpxy

2D 1H-31P HSQC-NOESY using CPMG-XY16 Experiment
Modified HSQC-NOESY pulse scheme involving CPMG-XY16 transfer during the INEPT periods.
References:
1 2
NOE
B. Luy & J.P. Marino, P H H
H
J. Am. Chem. Soc. 123,
11306-11307 (2001) t1 t2
na_hsqcf3gpnophxy
xy16 y xy16
d1 d8 Frec
1 d31 d31 d31 d31
H CW /2 /2 /2 /2 CW
pl32 pl9
xy16 F1 xy16
31
P d d0 d0 d
GARP
loop pl16
loop
13
C optional GARP
p8 pl12
Gz sp13
G3 G4 G5
hpdino vs hsqcetf3gpnoxy
d1=1.5 s
d26=1/4J(PH)=12.5ms
(optimized cnst4=J(PH)=20Hz)
d21=delay in CY16-CPMG=100us
d8=NOE mixing time

2D 1H-31P HeteroTOCSY Experiment
Experiment to correlate 31P and 1H chemical shifts that uses Heteronuclear cross-polarization for
magnetization transfer from 31P to 1H via J(PH).
References:
1
G.W. Kellogg, J. Magn. Reson. 98, 176-182 (1992)
P H
t1 t2
na_hpdi
d1
1
H d DIPSI-2
p25
pl25
31 d21
P d0 d0
DIPSI-2 GARP
p25 pl16
pl23
13
C optional
GARP
pl12
Gz
G1
d1=1.5 s
d21=1/6J(PH)=20 ms
(heteroTOCSY mixing)

2D HeteroTOCSY-NOESY Experiment
2D Cross-polarization version of a 31P-edited NOESY experiment.
References:
G.W. Kellogg, A.A. Szewczak & P.B. Moore, J. Am. Chem. Soc. 114, 2727-2728 (1992)
1
NOE
P H H
t1 t2
na_hpdino
d1
1 d8
H DIPSI-2 CW
p25 pl32
pl25
31 d21
P d0 d0
DIPSI-2 GARP
p25 pl16
pl23
13
C optional
GARP
pl12
Gz d1=1.5 s
G1 d21=1/6J(PH)=20 ms
(heteroTOCSY mixing)
na_hpdino19
d1
1 d8
H DIPSI-2
d d
CW
p25 pl32
pl25
31 d21
P d0 d0
DIPSI-2 GARP
p25 pl16
pl23
13
C optional
GARP
pl12
Gz
G1G2 G2

3D HeteroTOCSY-NOESY Experiment
3D Cross-polarization version of a P-edited 1H-1H NOESY experiment

that provides a 3D P,H,H map.
References: P
G.W. Kellogg & B.I. Schweitzer, J. Biomol. NMR 3, 577-595 (1993)

H
1 H
NOE
P H H
t1 t2 t3
na_hpdino3d
d1
1 d8
H DIPSI-2
d10 d10
CW
p25 pl32
pl25
31 d21
P d0 d0
DIPSI-2 GARP
p25 pl16
pl23
13
C optional GARP
p8 pl12
sp13
Gz
G1
na_hpdino193d
d1
1 d8 d d
H DIPSI-2
d10 d10
CW
p25 pl32
pl25
31 d21
P d0 d0
DIPSI-2 GARP
p25 pl16
pl23
13
C optional GARP
p8 pl12
sp13
Gz
G1G2 G2

3D HeteroTOCSY-COSY Experiment
3D version of the PHCH experiment that uses cross-polarization for P-to-H transfer. The
experiment provides a 3D correlation P;C;H map.
References:
G. Varani, F. Aboul-ela, F. Allain & C.C. Gubser,

J. Biomol. NMR 5 315-320 (1995) P
C
H
1 2 3
P H C H
t1 t2 t3
na_hpdico3d
d1
1
H DIPSI-2 d2 d2
p25
pl25
31 d21
P d0 d0
DIPSI-2 GARP
p25 pl16
pl23
13 d10
C optional d10
GARP
pl12
Gz
G1 G1


BRUKER
PULSE PROGRAM
CATALOGUE
NMRGuide
NUCLEIC-ACID NMR
EXPERIMENTS TO MEASURE J

Important Dihedral angles in nucleic acids:
Base
5'
RO
O
4' H H 1'
3' 2'
C
H e H
O OH
z H
Base
O P
aO H
c
O-
b C
g O
H H
d
H H
OR H
b g e c
3 3J 3 3
JP5'-H5'(H5'') H4'-H5'(H5'') JP3'-H3' JH1'-C6 (U,C,T)
3 3 3J 3J
JP5'-C4' JC3'-H5'(H5'') P3'-C2' H1'-C2 (U,C,T)
3 3
JP3'-C4' JH1'-C8 (A,G)
3
JH1'-C4 (A,G)
H
H
Base
RO
C n4 O n0
H H
n3 n1
H n2 H
OR H

2D HSQC Experiment for measuring J(CH)
Modified sensitivity-improved HSQC pulse scheme for the stereospecific assignment of

H5'/H5'' diastereotopic protons in NAs by measurement o fhomonuclear J(H4'H5') and
heteronuclear J(C4'H5') coupling constants.
Also useful for measurement of J(C2'H1') via N in 13C/15N labeled Nas
References:
J.P. Marino, H. Schwalbe, S.J. Glaser, C. Griesinger,J. Am. Chem. Soc. 118, 4388 - 4395 (1996) .
Also see the original 2D HSQC experiment.
na_hsqcetgpjcsp
y y
Frec
1 d1 d4 d4 p28
H d24 d24 d4 d4 d
F1 Y
C5 d d0 d0 d d
mlevsp180
p15 p10 p15 p15 pl28
sp10 sp25 sp12 sp10
31
P GARP
pl16
Gz
G3 G2
G1
p15=2 ms (Q5/Q5tr)
p10=2 ms (Q3)
pl28= Selective C5 decoupling

3D H(C)CH-E.COSY Experiment
Modified HCCH-COSY pulse scheme to measure J(CH) in ribose rings.
References:
1. L.E. Kay, G.Y. Xu, A.U. Singer, D.R. Muhandiram & J. D. Forman-Kay J. Magn. Reson. B 101, 333 - 337 (1993)
2. H. Schwalbe, J.P. Marino, G.C. King, R. Wechselberger, W. Bermel & C. Griesinger,
J. Biomol. NMR 4, 631 - 644 (1994)
Also see other HCCH-type experiments
1 2 3 4
H C C C H C
H
t1 t2 t3
na_hcchecgp3d
y
p17 Frec
pl10
1 d1 d0 d4 d0 d4 d d2 d2
H
F1 y y
d22/2 d23
13 d d3 d3 d d10 d22/2 d23
C -d10 GARP
pl12
31
P GARP
pl16
Gz
G1 G2 G2
d2=1/2J(CH)
d4=1/4J(CH)=1.6ms
d3=1/4J(CH)
d23=1/8J(CC)=3.1ms
d22=Constant-time C period.
For all correlations 3/4J(CC)=18.8ms
For C1' and C5' 1/2J(CC)=12.5ms

3D H(C)CH-TOCSY Experiment
H
Specific HCCH-TOCSY experiment to identify all 1H RO
and 13C nuclei belonging to the same sugar ring in Base
13C-labeled NAs. Alternative to classical COSY and H O
TOCSY experiment. ALso see other HCCH-COSY and H H
HCCH-TOCSY experiments.
H H
References: OR OH
L.E. Kay, G.Y. Xu, A.U. Singer, D.R. Muhandiram

& J. D. Forman-Kay J. Magn. Reson. B 101, 333 - 337 (1993)
2. H. Schwalbe, J.P. Marino, S.J. Glaser & C.Griesinger,
J. Am. Chem. Soc. 117, 7251 - 7252 (1995)
3. J.P. Marino, H. Schwalbe, S.J. Glaser & C.Griesinger, H
J. Am. Chem. Soc. 118, 4388 - 4395 (1996)
4. S.J. Glaser, H. Schwalbe, J.P. Marino & C. Griesinger,
J. Magn. Res. B 112, 160 - 180 (1996).
C
H
1 2 3 4
H C C C H
t1 t2 t3
na_hcchfwdigp3d
y
Frec
y
1 d1 d0 d4 d0 d4 d d2 d2
H
F1 p17
pl10 y
d22/2
13
d d3 d3 d d10 d22/2 d23 d23
-d10
C DIPSI-3 GARP
p9 pl12
pl15
31
P GARP
pl16
Gz
G1 G2 G2 G3 G3
d2=1/2J(CH)
d4=1/4J(CH)=1.6ms
d3=1/4J(CH)
d23=1/8J(CC)=3.1ms

3D H(C)CH-TOCSY E.COSY Experiment
E.COSY version of the HCCH-TOCSY experiment to measure J(H4'H5') coupling

constants (96jacs4388)
References:
L.E. Kay, G.Y. Xu, A.U. Singer, D.R. Muhandiram & J. D. Forman-Kay J. Magn. Reson. B 101, 333 - 337 (1993)
H. Schwalbe, J.P. Marino, S.J. Glaser & C.Griesinger, J. Am. Chem. Soc. 117, 7251 - 7252 (1995)
J.P. Marino, H. Schwalbe, S.J. Glaser & C.Griesinger, J. Am. Chem. Soc. 118, 4388 - 4395 (1996)
S.J. Glaser, H. Schwalbe, J.P. Marino & C. Griesinger, J. Magn. Res. B 112, 160 - 180 (1996)
C
H
E.COSY pattern
in the C dimension
of the 2D HC plane
d1=1.5s
d3=1/4J(CH)=1.55ms
d4=1/4J(CH)=1.56ms
d22=CT(C)=7.6ms
d23=1/8J(CC)=3.1ms
(optimized for cnst8=38Hz)
l1=2 for CC TOCSY=9.2ms using p9=26us

1 2 3 4
H C C C H
t1 t2 t3
na_hcchfwdiecgp3d
y
Frec
y
1
d1 d0 d4 d0 d4 d d2 d2
H
p17
F1 y
pl10
d d3 d3 y d d10 d22/2
d22/2
d23 d23
13 -d10
C DIPSI-3 GARP
p9 pl12
pl15
31
P GARP
pl16
Gz
G1 G2 G2 G3 G3
na_hcchfwdiecgpjr3d
y
Frec
d1
1 d0 d4 d0 d4 d2 d19 d
H CW
pl32 F1
d22/2
13 d d3 d3 d10 d22/2 d23 d23 d
C DIPSI-3
-d10
GARP
p9 pl12
pl15
31
P GARP
pl16
Gz
G1 G2 G2 G3 G3

Forward-directed quantitative 3D H(C)CH-TOCSY Experiment
Modified HCCH-TOCSY version to measure J(HH) and J(CH) coupling constants
References:
1. I.C. Felli, C. Richter, C. Griesinger & H. Schwalbe, J. Am. Chem. Soc. 121, 1956 - 1957 (1999)
2. C. Richter, C. Griesinger, I.C. Felli, P.T. Cole, G. Varani & H.Schwalbe, J. Bimol. NMR 15, 241 - 250 (1999)
1 2 3 4
H C C C H H
t1 t2 t3
C
H
na_ghcchfwdigp3d
F2 y
Frec
y
1 d1 d0 d4 d0 d4 d d4 d4
H
p17
F1 y y
pl10
13 d22/2 d25/2 d25/2
C d4 d4 d d10 d22/2 d23 d23
DIPSI-3 -d10 +d27/2 +d27/2 GARP
p9 pl12
pl5
31
P GARP
pl16
Gz
G1 G1 G2 G2 G3 G3
d4=1/4J(CH)=1.6ms
d23=1/8J(CC)=3.1ms
d25=development of cross-correlated relaxation=25ms
For reference experiment d27=1/2J(CH)=3.1ms

For cross-peak experiment d27=0

2D Constant-time HH-{31P} COSY Experiment
Constant-time 1H-1H COSY experiment for the measurement of J(H3-P) coupling

constants in NAs (98jmr164-134). Two experiments are recorded varying the position
of the 180º 31P pulse.
References:
G.M. Clore, E.C. Murphy, A.M. Gronenborn & A.Bax, J. Magn. Res. 134, 164 - 167 (1998)
na_hpcosyphpr
1 d1
H presat
d0 d22 d22-d0
pl9
31
P CPD
pl16
d22: constant time delay T [25 msec]

2D quantitative HC(P) Experiment
Modified 2D version of the put-and-back HCP experiment to measure J(CP) coupling constants. Independent
reference-peak and a cross-peak experiment are separately recorded.
1 2 3
C. Richter, B. Reif, K. Woerner, S. Quant, J.P. Marino, J.W. Engels,
C.Griesinger & H.Schwalbe, J. Biomol. NMR 12, 223-230 (1998) H C C H
t1 t2
na_hcpqetgpsi.1
y y
Frec
1
H d1 d4 d4 d24 d24 d4 d4 d d
y y Y
13
C d d22 d22 d0 d22 d22-d0
GARP
F1
pl12
31
P GARP
pl16
Gz
G1 G2 G2 G4
G3 G3
na_hcpqetgpsi.2
y y
Frec
1
H d1 d4 d4 d24 d24 d4 d4 d d
y y Y
13 d d22 d22 d0 d22 d22-d0

C GARP
F1
pl12
31
P GARP
pl16
Gz
G1 G2 G2 G4
G3 G3
d1=1.5s
d4=1/4J(CH)=1.6ms
cnst2=J(CH)
cnst5=J(CP)
d22=CT(1/J(CC) for J(CC)=40Hz and

1/4J(C4'-P)=12.5ms
1/4J(C5'-P)=25ms

2D P-FIDS Experiment
Modified HSQC experiment to measure J(HP) and J(CP) in Nas.

Two experiments are recorded with optional 31P decoupling during 1H acquisition.
References:
1. H. Schwalbe, W. Samstag, J.W. Engels, W. Bermel & C.Griesinger, J. Biomol. NMR 3, 479 - 486 (1993)
2. H. Schwalbe, J.P. Marino, G.C. King, R. Wechselberger, W. Bermel &
C. Griesinger, J. Biomol. NMR 4, 631 - 644 (1994)
1 2
H C H
t1 t2
na_pfidsetgpsi
y y
Frec
1 d1 d4 d4
H d24 d24 d4 d4 d d
F1 Y
13 d d0 d20 d20
C -d0 GARP
pl12
31
P GARP
off/on
pl0/pl16
Gz
G1 G3
G2
d4=1/4J(CH)
d24 optimized as a function of CHn multiplicity
d20=1/2J(CC)=12.5ms or 3/2J(CC)=37.5ms


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PULSE PROGRAM

Copyright © 2010 by Bruker BioSpin GmbH

VOLUME I: 1D & 2D NMR EXPERIMENTS.............................................................. 1-466

VOLUME II: BIOMOLECULAR NMR EXPERIMENTS

• Table of Contents............................................................................................................. 467

© 2010 BRUKER Biospin, Teodor Parella. 467

3D w1-13C/15N-Doubly Filtered NOESY-15N-HSQC

© 2010 BRUKER Biospin, Teodor Parella. 468

© 2010 BRUKER Biospin, Teodor Parella. 469

© 2010 BRUKER Biospin, Teodor Parella. 470

© 2010 BRUKER Biospin, Teodor Parella. 471

© 2010, BRUKER Biospin, Teodor Parella 473

General Scheme for 3D Homonuclear Experiments

© 2010, BRUKER Biospin, Teodor Parella 474

· 3D TOCSY-NOESY experiment (mlevnoesy3d)

Also see related 2D NOESY, 2D ROESY and 2D TOCSY experiments

© 2010, BRUKER Biospin, Teodor Parella 475

© 2010, BRUKER Biospin, Teodor Parella 476

© 2010, BRUKER Biospin, Teodor Parella 477

3D Basic X-edited TOCSY

· 3D 1H-13C TOCSY-HMQC experiment using presaturation (mlevhmqcpr3d)

· 3D 1H-13C HSQC-TOCSY experiment using echo/antiecho, adiabatic pulses and MLEV-17

Other Protein NMR experiments involving TOCSY:

© 2010, BRUKER Biospin, Teodor Parella 478

© 2010, BRUKER Biospin, Teodor Parella 479

© 2010, BRUKER Biospin, Teodor Parella 480

© 2010, BRUKER Biospin, Teodor Parella 481

Gradient-enhanced from f2 channel:

Gradient-enhanced from f3 channel:

· ge-3D 1 H-15 N TOCSY-HSQC with MLEV using echo-antiecho (mlevhsqcetf3gp3d |

© 2010, BRUKER Biospin, Teodor Parella 482

© 2010, BRUKER Biospin, Teodor Parella 483

9.5 9.0 8.5 8.0 7.5 7.0 6.5 ppm

© 2010, BRUKER Biospin, Teodor Parella 484

© 2010, BRUKER Biospin, Teodor Parella 485

ge-2D w1 - 13 C,15 N-filtered TOCSY experiment

· ge-2D w1 -13 C, 15N-filtered TOCSY using DIPSI2 and WATERGATE (dipsi2gpphwgx1)

ge-2D w2 - 13 C,15 N-filtered TOCSY experiment

· ge-2D w2 -13C,15N-filtered TOCSY using DIPSI2 and WATERGATE (dipsi2gpphwgx2)

ge-2D w1 ,w2 -13 C,15N-filtered TOCSY experiment

· Phase-sensitive ge-2D w1,w2 13 C, 15 N -filtered TOCSY using DIPSI2 and WATERGATE

1. A.L. Breeze, Prog. NMR Spectrosc. 36, 323-372 (2000).

1H-13C -Iy -2IySz -2IzSy Gradient G3 removes

© 2010, BRUKER Biospin, Teodor Parella 486

1 d1 d26 d26 d d26 d26 d d0 -x -x

© 2010, BRUKER Biospin, Teodor Parella 487

1 d1 d26 d26 d d26 d26 d d0 d26 d26 d d26 d26 d -x -x

p15 p15 p15 p15

© 2010, BRUKER Biospin, Teodor Parella 488

© 2010, BRUKER Biospin, Teodor Parella 489

3D HC(C)H-COSY experiment (hcchcogp3d | HCCHCOG P3D )

4D HCCH-COSY experiment (hcchcogp4d)

3D HC(C)H-TOCSY experiment (hcchdigp3d | HCCHDI GP 3D)

4D HCCH-TOCSY experiment (hcchdigp4d)

o ge-2D Long-range HCCH correlation

Phase-sensitive ge-2D Long-range (H)C(C)H using echo-antiecho (hcchetgplr)

Also see 3D HCCH-E.COSY experiments for J measurement

o 3D HC(C)H[HA]-E.COSY (hcchecosgp3d | HCCHECOS GP 3D) - 3J[HA-HB] via E.COSY

Also see HCCH-type experiments in “Nucleic Acids Experiments”

o 3D TROSY-(H)CCH-COSY for intra-base correlation (na_trhcchco3d)

© 2010, BRUKER Biospin, Teodor Parella 490

1 2 3 d4 : 1/(4J(CH)) - tau a [1.6 msec]

13 d4/2 d4/2 d0 d23-d0 d22-d10 d22 d10 d