LABORATORNÍ CVIČENÍ Z BIOCHEMIE

Jména: Noskova Viktoriia

Kerestes Jan
Lab. skupina: 2

Fakulta: FCHT Ročník: 2 Kroužek: 212

Datum měření: 07.03.2024 Datum odevzdání: 07.03.2024

Název úlohy: Titrační křivky aminokyselin

Princip:,

Metoda spočívá v alkalimetrickém stanovení aminokyseliny, kterou lze takto titrovat,

jelikož se nachází ve své kyselé formě hydrochloridu. Výstupem je titrační křivka, ve
které můžeme sledovat přechody disociovatelných skupin.

Disociovatelné skupiny mají tabelované pKa, na jehož základě můžeme při

pozorování titrační křivky identifikovat jednotlivé aminokyseliny.

Výsledky měření a výpočty:

Tabulku s naměřenými daty a závislostmi pH na objemu NaOH přikládáme v excelu

05 Titrační křivky aminokyselin.

Výpočet koncentrace glycinu

c NaOH V NaOH 0 , 00 2484 ⋅1

c glycin= = =0 , 2 484 mol/l
V glycin 0 , 01

c g =c glycin ⋅ M glycin =0 , 2484 ⋅75 , 1=1 8 , 6 55 g/l = 1,8655 g/100 ml

glycin

Příklad výpočtu bodu ekvivalence (pro glycin)

,,
pH 1 95.25
V BE= ,, ,,
⋅ ( V 2−V 1 ) +V 1 = ∗( 2 , 8−2 , 6 ) +2 , 6=2, 484 ml
pH −pH 1 2
95.25+ 68.75
Příklad výpočtu pKa vzorku C

p H 2−p H 1
pK a1= p H 1 + ( V −V 1) ⋅
V 2−V 1

( 0 , 5 ⋅1 , 875−0 , 8 )∗1 , 94−1 , 72

pK a1=1 , 72+ =1 , 871
1−0 , 8

Tabulka 1: Výpočet volného náboje molekuly

pH do 1,87 1,87-3.9 3.9-9.97 nad 9.97

ɑ-COOH 0 - - -

y-COOH 0 0 - -

ɑ-NH3 + + + 0

volný náboj +1 0 -1 -2

Výpočet pI

1 , 87+3.9
pI = =2.885
2

Závěr:

V této úloze jsme proměřili celou titrační křivku glycinu, ze které jsme odečetli
hodnotu bodu ekvivalence (2,48 ml). Z té jsme vypočítali jeho koncentraci, která
vychází 0,248 mol/l, respektive 1,87g/100 ml.

V druhé části úlohy jsme proměřili titrační křivku neznámého vzorku C, zde nám bod
ekvivalence vyšel při 1.88 ml. Podle hodnot druhých derivací jsme určili pKa 1 = 1,87
(odpovídá ɑ-COOH), pKa2 = 3.9 (odpovídá y-COOH) a pKa3 = 9.97 (odpovídá ɑ-
NH3). Podle těchto hodnot jsme určili, že vzorkem C je aminokyselina glutamová.

Hodnoty pKa vyšly trochu posunuté kvůli tomu, že pH-metr byl častečně kalibrován
pufry.