MALDI - TOF / MS

Matrix Assisted Laser Desorption

Ionisation
Time Of Flight Mass Spectrometry
(MALDI-TOF/MS)

Jonizuje molekule pomou pulsnog lasera

Odvaja molekule na osnovu odnosa mase i

naelektrisanja

Uglavnom se koristi za detekciju velikih biomolekula

Veoma osetljiva metoda !

Granica detekcije 10-15 to 10-18
mol
Tanost 0.1 - 0.01 %.

1988.god

Dizajnirana da pobolja
MS reavanjem dva
glavna problema:
termolabilnost i slabu
isparljivost velikih i tekih
biomolekula

Prof. Franz
Hillenkamp

- Ranije nije postojala metoda kojom bi biomolekuli ija je masa vea

od 1000 D mogli da se transportuju u vakuum bez fragmentacije
- MALDI-TOF omoguava odreivanje onih ija je masa vea ak i od
500 000 D
- osetljivost je ispod 1 fmol

Rastvaranje jedinjenja, dodatak matriksa - nanoenje

Izvlaenje vazduha iz komore sa uzorkom
Delovanje pulsnog lasera na uzorak

Jonizacija

Zasniva se na
mekoj desorpciji
molekula vrstog
uzorka u vakuumu
Prvo se uzorak
prevodi u kristalno
stanje zajedno sa
odgovarajuim
matriksom na
metalnoj ploi
-matriks se dodaje u
velikom viku (100010000 puta).

 Molekuli matriksa bombardovani fotonima iz lasera se ekscituju

i prelaze u gasnu fazu zajedno sa molekulima analita pre nego
to se energija prenese na susedne molekule.
Neki molekuli matriksa i analita se jonizuju tokom ovog procesa
Kada jednom preu u gasnu fazu joni se ubrzavaju do TOF
analizatora primenom elektrinog polja.
Molekuli matriksa mogu da daju protone ili elektrone
molekulima analita
Joni analita koji dominiraju su [M]+ ili kvazi-molekulski joni kao
to je [M + H]+
Koncentracija matriksa je viestruko iznad koncentracije analita
pa nisu mogue interakcija izmeu jona anlita meusobno
MALDI je veoma meka metoda za jonizaciju pa veliki
biomolekuli kao to su proteini, nukleinske kiseline, polisaharidi i
lipidi ostaju celi

MATRIKS
apsorbuje i akumulira energiju zraenja lasera
titi analit od razaranja i fragmentacije
dobar matriks mora da pokae sposobnost
veoma velike apsorpcije odreene talasne duine
lasera
mora da bude potpuno hemijski inertan, stabilan
u vakuumu i da ima sposobnost da u sebe ugradi
analit

Priprema uzorka u obliku suve kapi

matriks je rastvoren u
organskom rastvarau npr.
acetonu

Priprema uzorka u obliku tankog sloja

molekuli analita se absorbuju u kristalu matriksa

moe se ispirati nekoliko puta vodom da bi se isprale neistoe, posebno
alkalni metali

Analizator zasnovan na vremenu preleta

Time-of-Flight Analyser

TOF analizator omoguava visoku rezoluciju i tane mase

odreivanje ak i za jedinjenja ije su molekulske mase veoma
visoke
Joni desorbovani pomou pulsnog lasera se ubrzavaju u
elektrinom polju. Njihova kinetika energija je nekoliko keV. Ulaze
u polje slobodne cevi u kojima se kreu razliitim brzinama u
skladu sa odnosom njihove mase i naelektrisanja.
Na kraju cevi joni udaraju u detektor i otklon vremena za svakog
od njih se meri elektronski sa velikom tanou.

 ne desorbuju se svi molekuli u isto vreme na tano

odreenom mestu pa se dobijaju za potpuno identine
jone razlike u brzini to za osledicu ima irenje pika i lou
rezoluciju
primenjuje se (umesto linearnog) TOF sa refleksijom
U TOF cevi sa refleksijom primenjuju se suprotno
elektrino polje na kraju cevi pa su joni primorani da
menjaju pravac
joni iste mase ali vee kinetike energije (brzine) nalaze
se dublje u oblasti suprotnog polja i zahtevaju vie
vremena za promenu smera
pravilno postavljen detektor u taki fokusiranja daje

PRIMENA
UGLAVNOM SE KORISTI ZA ANALIZU PROTEINA I PEPTIDA, KAO
I NJIHOVIH SMEA
MOLEKULSKA MASA PROTEINA I PEPTIDA MOE DA SE
ODREDI SA VEOMA, VEOMA MALOM KOLIINOM UZORKA
(NEKOLIKO fmol)
MOGU DA SE DOBIJU INFORMACIJE O STRUKTURI SUPSTANCE
STRUKTURA PROTEINA MOE ESTO DA SE ODREDI
DIGESTIJOM ENZIMIMA I ANALIZOM DOBIJENIH FRAGMENATA
PRI ANALIZI NE MORA PRETHODNO DA BUDE IZVRENO
ODVAJANJE
MALDI NE MOE DA SE DIREKTNO POVEE SA LC ILI CE

Prednosti / Mane

Mala koliina
uzorka
Rad sa velikim
biomolekulima
Apsolutno merenje
mase

Pronalaenje
adekvatnog
matriksa
Relaksacija jona
usled kolizije
Osetljiva na
oneienja kao
npr. soli

MALDI TOF-TOF

http://www.youtube.com/watch?v=JToLNxa5InQ

http://www.youtube.com/watch?v=YLkymjoSYQo&feature=related

http://www.youtube.com/watch?v=Jwao0O0_qM&feature=related