1. UD.

BIOLOGIA MOLEKULARREKO ETA ZITOGENETIKAKO LABORATEGIAK

Miriam Aguado Atorrasagasti

 ud 1. biologia molekularrekoeta zitogenetikako
laborategiak
1.1 BIOLOGIA MOLEKULARRA ETA ZITOGENETIKA

1.2. BIOLOGIA MOLEKULARREKO LABORATEGIA

1.3. ZITOGENETIKAKO ETA KULTIBO ZELULARREN LABORATEGIA

1.4. SEGURTASUNA LABORATEGIAN

 1.1 biologia molekularra eta zitogenetika
Biologia molekularraren definizioa:

Biologikoki garrantzitsuak diren molekulen osaera, egitura

eta funtzioa ikertzen duen biologiaren atala, baita
inplikatuta dauden prozesuena ere.
 1.1 biologia molekularra eta zitogenetika

Bilogia molekularra→ Azido nukleikoen

ikerketa

Proteomika→ Proteinen ikerketa

 1.1 biologia molekularra eta zitogenetika
Zitogenetika

Metafasean dauden kromosomen egitura, funtzioa eta portaera

ikertzen duen genetikaren atala.
 1.1 biologia molekularra eta zitogenetika

1277/2003 Errege Dekretua, urriaren 10ekoa

Genetikako Unitatea

Prestakuntza egokia duen medikuaren erantzukizunpean helburu

diagnostikoa duten proba genetikoak egiteko eta dagozkien
irizpenak igortzeko laguntza unitatea.
 1.1 biologia molekularra eta zitogenetika
Zitogenetikako eta biologia molekularreko laborategiek arazo bat dute...

KUTSADURA

Hori prebenitzeko...

Laborategiak EREMU ZIKINETAN eta EREMU GARBIETAN banatzen dira

 1.2. BIOLOGIA MOLEKULARREKO LABORATEGIA

PCRa (Polimerasaren kate erreakzioa) da oinarrizko teknika:

DNA kopuru txikienetik abiatuz horren milioika kopia berdin
lortzea ahalbidetzen digu.(6UD)
 1.2. BIOLOGIA MOLEKULARREKO LABORATEGIA
Ekipamendu espezifikoa: PCRaren ondotik lortzen diren
produktuen azterketarako.

1. Termoziklatzailea: PCRa gauzatzeko aparatua. Inkubazio

tenperatura eta denbora ezberdinekin hainbat ziklo egitea
ahalbidetzen du, mikroprozesatzaile batekin kontrolatuta.
 1.2. BIOLOGIA MOLEKULARREKO LABORATEGIA
Termoziklatzailearen atal nabarmengarriak:

- Bloke inkubatzailea: hainbat kikara duen metalezko

euskarria, PCR erreakzioko hodiak jartzeko. Tenperatura
tartea 4ºtik 96ºra. Peltier efektua.
- Bloke inkubatzaileko tapakia: Tapaki termostazitatua 102-
105 ºC (kondentsazioa ekiditeko).

Termoziklatzaile berezia: Denbora errealeko termoziklatzailea

Fluoreszentzia eta laserra

 1.2. BIOLOGIA MOLEKULARREKO LABORATEGIA
2. Elektroferesiko ekipamendua

-Elektroferesia gelean, tamaina ezberdinetako azido

nukleikoen molekulak bereizteko.

-Disoluzio tanpoi batean (ph 7,5-7,8) eremu elektriko bat

aplikatzen da, eta bertan AN laginak dituen matrize
(AGAROSA gela edo polakrilamida) bat murgiltzen da.
 1.2. BIOLOGIA MOLEKULARREKO LABORATEGIA
Elektroferesia egiteko, honako hau beharko dugu:

- Plastikozko euskarria
- Elektroferesi kubeta
- Elikatze iturria
 1.2. BIOLOGIA MOLEKULARREKO LABORATEGIA
3. Gel dokumentatzailea

Elektroferesiaren ondoren gelean AN bandak ikusteko eta

argazki bat lortzeko aukera ematen du.

-Zeharkako argiztatzailea

-Argazki kamera
 1.2. BIOLOGIA MOLEKULARREKO LABORATEGIA
Ekipamendu generikoa:

- Biosegurtasun kabina: II klaseko xafla fluxua

- Ura arazteko sistema: II motako ur araztua eta I motako

ur ultrapurua

- Espektrofotometroa: absorbantzia irakurketak (230 eta 320

nm)
 1.2. BIOLOGIA MOLEKULARREKO LABORATEGIA
- Argi transmitituko eta fluoreszentziako mikroskopioa
- Autogakoa
- Inkubagailua edo estufa: mikro edo zelula hazkundeak
- Bainu termostatikoa, termoblokea eta plaka berotzailea:
inkubazioak, digestioak eta tratamendu entzimatikoak
- Zentrifugoa eta mikrozentrifugoa
- Hozkailu izozkailuak -20ºC (erreaktiboak) eta -80ºC (DNA)
- Beste ekipamenduak: vortex, phmetro...
 1.2. BIOLOGIA MOLEKULARREKO LABORATEGIA
Laborategiaren egitura

1. Erreaktiboen prestaketa gela. P positiboa. (Biosegurtasun

kabina)
2. Laginen prestaketa eta DNA ateratzeko gela (biosegurtasun
eta espektrofotometro kabina). P negatiboa.
3. PCR gela: anplifikazio erreakzioa (termoziklagailuak)
4. PCR osteko gela: produktuen azterketa

Lan fluxua soilik norabide batean

 1.2. BIOLOGIA MOLEKULARREKO LABORATEGIA
Lan baldintzak:

Praktika generiko onak → Kutsadura murriztea

- AN arrotzak laginean
- ANa degradatzen duten entzima ez desiratuak (nukleasak)

Kutsadura iturriak

- Gurutzatua
- Produktu anplifikatuekin (carryover)
- Erreaktibo komertzialak eta material suntsikorra
 1.2. BIOLOGIA MOLEKULARREKO LABORATEGIA
Materialak eta erreaktiboak manipulatzeko arauak

- Eremuak bereiztea, norabide bakarreko fluxua

Teknika aseptikoa: kutsadura mikroorganismoekin, AN eta

nukleasekin prebenitzeari bideratutako jarduera multzoa.

- Eskuak garbitzea
- NBEak egoki erabiltzea (eskularruak, bata...)
- Gainazaletatik kutsadura kentzea (DNA away)
- Ingurumen kutsadura prebenitzea
- Carryover-a prebenitzea (norabide bakarrekoa)
 1.2. BIOLOGIA MOLEKULARREKO LABORATEGIA
Baliabideak eraginkorki erabiltzea

- Ekipamenduak eta azpiegiturak: azterketa teknikoa

- Erreaktiboak: trazabilitatea
- Giza Baliabideak: langile berrien prestakuntza
- Teknikak: PNT
- Ingurumenaren kudeaketa: ura aurreztu, birziklatu
 1.3.el. zitogenetikako eta kultibo zelularren
-
laborategia
Kultibo zelularren laborategia:

zelula eukarioten hedapena edo hazkundea

- Zitogenetikako laborategia: zelula eukarioten kromosomen

ikerketa. Kariotipoa eta zitogenetika molekularra.

- Kultibo zelularren arloa→zelulak mitosian lortzea

- Genetikako arloa→kromosoma metafisikoen ikerketa
 1.3.el. zitogenetikako eta kultibo zelularren
laborategia
Kultibo zelularrentzako ekipamendua

- Xafla fluxuen kabina: II klasea, HEPA

- CO2 inkubagailua: tenperaturaren, CO2aren eta
hezetasunaren kontrola
- Mikroskopio iraulia: argia (entzima platinoa)
- Kriogenia ekipamendua: nitrogeno likidoa
 1.3.el. zitogenetikako eta kultibo zelularren
laborategia
Zitogenetikako ekipamendua

- Irudiak aztertzeko ekipamendua: mikroskopio optikoa,

kamera digitala eta software espezifikoa
- Mikroskopio optiko konbentzionala, fluoreszentzia
 1.3.el. zitogenetikako eta kultibo zelularren
laborategia
Ekipamendu arrunta

- Esterilizatzeko ekipamendua
- Ura arazteko sistema
- Hozkailua eta izozkailuak -20ºC eta -80ºC
- Beste batzuk: zentrifugoak, errotoreak...

Laborategiaren egitura (eremu garbiak eta zikinak)

3 gela: kultiboak, laborategi konbentzionala, hotz gela

 1.3.el. zitogenetikako eta kultibo zelularren
laborategia
Lan baldintzak

TEKNIKA ASEPTIKOA
ETA ARAUAK (liburua berrikusi)
 1.4. SEGURTASUNA LABORATEGIAN
Biosegurtasuna

Lan arau, teknika, praktika eta ohiturak, arriskutsuak izan

daitezkeen agente biologikoen ustekabeko eraginpean langileak
jartzea, edo horiek ingurumenera askatzea eragozten
saiatzeko.

178/2004 ED, urtarrilaren 30ekoa

1,2,3,4 mota
 1.4. SEGURTASUNA LABORATEGIAN
Segurtasun kimikoa

363/1995 ED, martxoaren 10ekoa

Liburuko taula (23. or.)

Helburuak: esposizioa prebenitzea, biltegiratze segurua eta

hondakinen kudeaketa

Bateraezintasunen koadroa (24. or.)

 1.4. SEGURTASUNA LABORATEGIAN
Ekipamendua eta segurtasun arauak

- Seinaleztapena
- NBEak
- Armairu sukoiak/armairu korrosiboak
- Hondakinak biltzeko edukiontziak
- Isuriak biltzeko kit-a
- Segurtasun eskuliburuak
- Langileak: eskuak garbitzea, NBEak...
 1.4. SEGURTASUNA LABORATEGIAN
Segurtasun eskuliburuak

Laborategiko langile guztiek derrigor ezagutu beharreko

dokumentua.

Honi buruzko informazioa: arriskuen ebaluazioa, lan ohiturak,

produktuen biltegiratzea, hondakinen suntsipena eta larrialdi
egoeretako arauak.
 1.4. SEGURTASUNA LABORATEGIAN
Hondakinen kudeaketa

- Hondakin biosanitario bereziak

- Hondakin kimikoak
- Hondakin zitotoxikoak
- Hondakin erradiaktiboak

Isuriak

- Neutralizatzea
- Xurgatzea
- Suntsitzea