Professional Documents
Culture Documents
Ve özellikleri
Amino asitler neden önemli?
Proteinler
Özgün şekil
Amino asitler--- protein
• Bütün canlılar aynı 20 çeşit amino asidi
kullanarak proteinlerini oluştururlar
• Bunlar standart veya yaygın amino
asitlerdir
• Buna rağmen olağanüstü farklı sayı ve
çeşitte polipeptid üretilebilmektedir.
Bir hücredeki
329 proteinden
318 i
arasındaki
etkileşim
Proteinlerin işlevleri
1. Kataliz, metabolik tepkimeleri katalizlerler
2. Depo ve taşıma (ör miyoglobin ve hemoglobin
O2 , CO2)
3. Yapı, şekil bütünlük (ör kas, aktin, miyosin)
4. Mekanik iş, hareket, flajella hareketi, kas
kasılması..)
5. Bilgi dönüştürme (DNA kopyalanması, RNA
üretimi)
6. Hormon ve hormon bağlanma yeri (reseptör)
7. Bağışıklık gibi özel işlevler, antikor, antibody
8. Sinirsel uyarıların aktarılması
Amino asitler
• Amino asitler amino grubu bağlanmış
karboksilik asitlerdir.
• ɑ (alfa) karbon atomuna bağlanmış amino
ve karboksil grubu (eski yunan da bir zincirde karboksil
grubun varsa, onun bağlandığı karbona alfa , ondan sonrakine
beta.. İsimler verilir.)
L-serin
Amino asitler
• Biri hariç (glisin) hepsi asimetrik karbon atomu içerir.
• Asimetrik karbon atomu içeren moleküllerin, yada Kiral
(chiral) moleküllerdir zira 4 değişik grup
bağlanmıştır.
• Glisinin yan grubunda H vardır, simetriktir.
• 19 amino asidin steroizomerleri vardır (Stereoisomers)
• Steroizomerler; aynı molekül yapısına sahip ancak
uzayda duruşları, şekilleri farklı moleküllerdir.
• Amino asit steroizomerleri birbirleri üzerine çakışmayan
ayna yansımalarıdır ki böyle steroizomerlere
enantiomer denir
• Yaygın olarak birbirlerinin ayna yansıması bu amino asit
çiftleri
• D (dextro, Latin dexter, right, sağ) ve
• L (levo, Latin laevus, left, sol).
Amino asitler
• Steroizomer olarak çizmek için
amino asidin karboksil grubu
tepesine yazılır.
• Yan gruplar aşağıya yazılır.
• Amino grubu molekülün sağında
kalıyorsa D- solunda kalıyorsa L-
amino asittir.
• Proteinlerde yalnızca L-
aminoasitler yer alır
• Tabiatta birkaç yerde D- Amino asit = L-Amino asit
aminoasit karşımıza çıkar.
• O nedenle alanin denince
kastedilen L-alanin dir.
Amino asitler
• Tüm canlılarda aynı standart
aminoasitlerin olması, tüm canlıların ortak
bir atadan geldiğinin yada akraba
olduklarının delilidir.
• 4 milyar yıl önce dünyada ilk yaşam
belirtileri başladığında, D ve L biçimlerinin
karışımının olduğu ve yine Meteorlarda ve
yıldızlarda hem L hem de D aminoasit
kalıntıları bulunmuş
• Neden L- biçimi canlılar tarafından tercih
edilmiş bilinmemektedir
Amino asitler: Moleküler Yapıları
• 20 çeşit amino asit
• Sadece yan gruplar farklı
• Yan grupları benzer özelliklere sahip olmaya göre
gruplandırılabilir
• Nonpolar veya hidrofobik yan gruba sahip olanlar
• Hidrofilik olanlar (Polar veya nötr pH da iyonlaşabilen
gruba sahip olanlar) 5 tanesi oldukça hidrofobik (mavi)
iken 7 tanesi oldukça hidrofilik (kırmızı)
• Kimyasal gruplarına göre: alifatik, aromatik, kükürt içeren,
alkol, bazik, asidik, ve amid içerenler olarak gruplandırılır
• Yan grubun özellikleri molekülün üç boyutlu biçimini ve
proteinin şeklini belirliyor
• Ör: Hidrofobik yan grupların çoğu proteinin iç kısımlarında
yer alıyor bu nedenle proteine yumaksı yuvarlak bir yığın
biçimi kazanmasına neden oluyor
Amino asitler: Alifatic R Grup
Metiyonin Sistein
Amino asitler: Kükürt içerenler: M
• Metiyonin (Met, M) ve Sistein
(Cys, C) kükürt içerir
• Metiyonin hidrofobik metil
thioether grubu içerir o
nedenle oldukça hidrofobiktir.
• Başlangıç nükleotidi
nedeniyle (AUG) Metiyonin
daima protein zincirinin ilk
aminoasididir.
Amino asitler: Kükürt içerenler: C
• Sistein, Alanine benzer ancak H
atomu S ile yer değiştirmiştir.
• Sistein biraz hidrofobiktir ancak –
SH sülfidril grubu nedeniyle
oldukça reaktiftir.
• Sülfidril grubu polarize olabilir ve
zayıf H bağı kurar
• Sülfidril grubu zayıf asidiktir, H
kaybederek tamamen
iyonlaşabilir negatif yüklü tiolat
iyonu haline gelir
Disüfit Köprüsü
Disüfit Köprüsü
Disüfit Köprüsü
Amino asitler: Disülfit Köprüsü
• Disülfit köprüsü ile bir araya gelmiş iki sistein
molekülüne Sistin (cystine) denir
• Proteinler parçalandığında açığa çıkar
• Okside olan iki sistein birbirlerine böyle
bağlanabilir
• Alkali pH da kolaylıkla okside olurlar
• -SH grupları düşük pH larda iyonlaşmışlardır
• Protein içerisinde –S-S- bağı kurabilmek için
yakın bulunmalıdırlar
• -S-S- köprüleri protein içinde sonradan oluşan
tek kovalent bağdır.
• Protein mimarisinin farklı bölümlerini kelepçe
gibi birbirlerine tutuşturur, mimariye dayanıklılık
kazandırır
• Pekçok hücre dışına sentezlenen protein –S-S-
köprüleri içerir.
• Protein yapısına özellikle sıcaklığa karşı
dayanım kazandırırlar.
Amino asitler: Alkol (-OH) içerenler
• Histidin (His, H), lisin (Lys, K), ve Arginine (Arg, R) hidrofilik bazik
AZOT yan gruba sahiptir. Ve Nötr pH da + yüklüdürler
• Histidin imidazol halkası içerir
• Protonlu yapı imidazolium iyonudur
• Lisin diamino asittir
• Arjinin en bazik aminoasittir ve nerdeyse daima artı yüklüdür.
Amino asitler: Asidik COO- içerenler
Hidrofilik
Az Hidrofobik
Amino asitler: İyonlaşma
• Amino asit amino gruplarının pKa = 9
civarı iken karboksil grupların pKa = 3
civarındadır.
• Hücre içi fizyolojik şartlar altında, (pH 7
civarında), amino grupları (+) karboksil
grupları (-) yüklüdür.
pKa 2,4
pKa 9,9
Alanin’in Titrasyonu
İzoelektrik notka (pI)
• İzo, eşit, dengede demek
• İzo elektrik nokta, elektrik yüklerinin
dengelendiği yani nokta demektir.
• İzoelektrik nokta, NET yükün SIFIR olduğu
noktadır.
Alanin’in Titrasyonu
İzoelektrik notka
• pKCOOH=2,4 pK1 pK 2
• pKNH2 =9,9 pI
2
2,4 9,9
pI 6,15
2
pH 6,15 de bu aminoasit çözeltisindeki aminoasitlerin net yükü nedir?
pH 8,15 de bu aminoasit çözeltisindeki aminoasitlerin net yükü nedir?
pH 4,15 de bu aminoasit çözeltisindeki aminoasitlerin net yükü nedir?
İzoelektrik notka: Histidin
• pKCOOH=1,8
pK NH 2 pK R
• pKNH2 =9,3 pI
2
• pKR =6,0
9,3 6,0
pI 7,65
2
2,1 4,1
pI 3,1
2
Alanin Serin
Alaninilserin
Amino asitler: Peptid bağ oluşumu
• Peptid zincirindeki aminoasit sayısı
• 2, dipeptid, 3 tripeptid, oligopeptid (4-20)
• polipepetid (20 den fazla)
22
21
Peptidler: net yük
-polipeptid’ün yükü?
-Hangi pH da?
-pH 5 deki net yükü nedir?
Amino asitler: Peptid bağ oluşumu
-pH 5 de ~ net +2 yüklüdür
+ - +
+
+
Proteinin aminoasit içeriğinin
belirlenmesi
110°C, 16 - 72 saat
Amino asit türevlendirmesi: PTC
Fenilizotiyosiyonat
Amino asit
fenyltiyokarbamil–amino asit
HPLC Kolonu ayrışması
hidrofobik
Asp+Asn
Glu+Gln
Proteinin aminoasit içeriğinin
belirlendi !
• Ya diziliş sırası?
• Bunu nasıl belirlerim ?
Proteindeki amino asit diziliş
sırasının belirlenmesi
• 1950 Pehr Edman bir teknik geliştirdi
• Proteini Fenilizotiyosiyonat (PITC) kullanarak amino
grubundan tek tek kırarak belirledi
• Burada PITC ile sadece amino ucu tepkimeye
girmektedir
• Feniltiokarbamil-peptid türevi oluşmaktadır.
• Bu madde anhidroz bir asitle muamele edildiğinde (örnek
olarak trifluoroasetik asit) amino ucundan kırılmaktadır.
Anilinotiazolinon türevi oluşmaktadır.
• Bu madde ekstrakte edilirek (butil klorit ile) geri kalan
peptidten ayrılır ve be olduğu belirlenir.
Edman amino asit dizilişi belirleme tekniği
Edman amino asit dizilişi belirleme tekniği
H+
Edman amino asit dizilişi belirleme tekniği
1.
2.
3.
…
Disülfit bağları kırılınca ne olur?
Kır zincirlerini…
Protein dizilişini belirleme: Edman
parçalanması
• Protein zincirindeki disülfit bağlantıları tiol içeren
moleküllerle kırılabilir.
• 2-merkaptoetanol en sıklıkla kullanılır
• Sisteinler oksijen varlığında tekrar oksitlenerek –S-
S- bağı oluşturmasın diye kapatılmalıdır.
• Alkilleme: Ör iodoasetat ile S-karboksimetilsistein
lere dönüştürülür
• Edman parçalanması yolu ile çok pikomol
düzeyindeki proteinlerin bile amino asit dizilişleri
belirlenebilir.
• Ancak zincir uzadıkça işler karışmaya başlayabilir
Diziliş sırasını belirlemede
Edman yöntemine
nasıl yardımcı olabiliriz?
Proteazlarla büyük protein
molekülü küçük peptidlere ayrılabilir
proteaz
Protein dizilişini belirleme: Proteaz
parçalaması
• Proteinleri parçalayan enzimlerle proteinleri
küçültebiliriz.
• Proteazlar proteindeki peptid bağlarını parçalar
• Çeşitli proteazlar proteini farklı noktalardan keserler
• Bu parçacıklar tek tek Edman parçalanması ile amino asit
dizilişleri belirlenir.
• Sonra tüm protein parçaları bir araya getirilir
• Tripsin, lys ve arginine yan grupları arasından proteini kırar
• Staphylococcus aureus V8 proteazı Glu ve Asp yan
gruplarının yanından keser
• Kimotripsin, aromatik veya hidrofobik yan grupların
yanından keser (Phe, Tyr, Trp gibi)
Protein dizilişini belirleme: Proteaz parçalaması
Protein dizilişini belirleme: başka nasıl
bir yol olabilir?
DNA---Protein
DNA--Protein
• Doğrudan protein zincirinin belirlenmesine ek olarak
• Dolaylı olarak DNA veya Gen dizilişinden protein zinciri
çıkarılabilir
• Ör: Triptofan aminoasidi yeri ve miktarı doğrudan bulunabilir
• Yine Asp ve Asn yerleri belirlenebilir
• Nasıl?
• Tek bir kodonla belirleniyor.
• Diğer aminoasitler birden fazla kodonla belirlenebildiğinden
olasılıklar söz konusu oluyor
• Sonradan değiştirilen amino asitler belirlenemiyor
• Veya zincirin bir kısmı sonradan kesilerek uzaklaştırılmış ise gen
de yararlanarak protein zinciri sadece ham olarak belirlenebiliyor
Frederick Sanger
• 1953 Frederick
Sanger bir proteinin
(insulin) protein
dizilişini bulduğu için
1956 da Nobel
Ödülünü aldı
• 1980 Yılında DNA’nın
zincir sıralamasını
belirleme yöntemi
geliştirdiği için 2. Frederick Sanger (1918– )
Nobel ödülünü aldı.
Proteinler Bugün…
• Binlercesinin dizilişi belirlendi,
• Binlercesinin 3 boyutlu biçimsel
mimarisi belirlendi,
• Veri tabanı oluşturuldu,
Protein Data Bank
Protein dizilişini belirlemek
Neler sağlar?
Protein dizilişi
• Aynı protein bir çok canlıda belirlendi
• Bunlar birbiriyle kıyaslandığında
• Bunların tarihsel akrabalıkları ortaya çıktı
• Protein zincir benzerliğinden yola çıkarak
türler birbiriyle ilişkilendirildi
• Daha sonra yaşamın ağacı oluşturuldu..
• Farklılıklardan yararlanarak ne tür özellikler
kazanıldığı veya kaybedildiği belirlendi
Sitokrom c Filogenetik ağacı (Evrim Ağacı): Schwartz, R. M., and Dayhoff, M.
O. (1978). Origins of prokaryotes, eukaryotes, mitochondria, and chloroplasts.
Science 199:395–403.]