UNIVERZITET U

TUZLI

FARMACEUTSKI FAKULTET

Obrazac za planiranje i izvoenje vjebi na prvom ciklusu studija farmacije

Opi podaci o vjebi

Nastavni kolegij

BROMATOLOGIJA

Nastavnici na kolegiju:
Voditelj: Dr sc Midhat Jai, red. prof.
Nastavnici:
Asistenti: Mr sc Iva Lamei, dr.vet.med.
Naziv vjebe

INSTRUMENTALNE METODE U MIKROBIOLOKIM I FIZIKO-HEMIJSKIM

ANALIZAMA SIROVOG MLIJEKA

Cilj vjebe
1. Upoznavanje sa postupcima mikrobiolokih i fiziko-hemijskih analiza sirovog mlijeka:
a) protona citometrija
b) fluoro-optoelektronska metoda
c) FTIR spektrofotometrija
- odreivanja sadraja masti
- odreivanja sadraja proteina
- odreivanja sadraja laktoze
- odreivanja sadraja bezmasne suhe tvari
- odreivanja take mrnjenja
Metode izvoenja
1. Upoznavanje sa postupkom pripreme uzorka sirovog mlijeka za analizu.
2. Upoznavanje sa postupkom utvrivanja broja bakterija u sirovom mlijeku protonom
citometrijom.
3. Upoznavanje sa postupkom utvrivanja broja somatskih stanica u sirovom mlijeku
fluoro- optoelektronskom metodom
4. Upoznavanje sa postupkom fiziko-hemijskih analiza sirovog mlijeka FTIR
spektrofotometrijom.

UNIVERZITET U
TUZLI

FARMACEUTSKI FAKULTET

Obrazac za planiranje i izvoenje vjebi na prvom ciklusu studija farmacije

Potrebna oprema i materijal:

Baktoskan, Fosomatik, Milkoskan, vodeno kupatilo, PC , CRM, reagensi za pojedine
aparate prema proizvoakom uputstvu, uzorak mlijeka.
Sadraj toka i vremensko trajanje vjebe (2 h):
UVODNI DIO: (30')
Upoznavanje sa naelima metoda:
a) protona citometrija
b) fluoro-optoelektronska metoda
c) FTIR spektrofotometrija
GLAVNI DIO: (90')
- upoznavanje sa postupkom utvrivanja broja bakterija u sirovom mlijeku protonom
citometrijom.
- upoznavanje sa postupkom utvrivanja broja somatskih stanica u sirovom mlijeku
fluoro- optoelektronskom metodom
- Upoznavanje sa postupkom fiziko-hemijskih analiza sirovog mlijeka FTIR
spektrofotometrijom: odreivanje sadraja masti, odreivanje sadraja proteina, odreivanje
sadraja laktoze, odreivanje sadraja bezmasne suhe tvari i odreivanje take mrnjenja
ZAVRNI DIO: (30')
- zakljuci i diskusija rezultata
- ponavljanje i pitanja za provjeru steenog znanja.

Sadraj vjebe sa teoretskim osnovama i praktinim pitanjima koja treba da vjeba

razjasni
Instrumentalne mikrobioloke i fiziko-hemijske analize sirovog mlijeka obuhvataju pripremu
uzorka mlijeka, pripremu instrumenata za rad, brojanje bakterija, brojanje somatskih stanica,
mjerenje fiziko-hemijskih parametara, obradu podataka i izraavanje rezultata.
Priprema uzorka sirovog mlijeka
Uzorak sirovog mlijeka za analizu se uzima na mjestu proizvodnje (tala) ili na mjestu otkupa
(zadruge, mljekare). Uzima se u sterilne boice od 50 ml koje sadre konzervans (azidiol) ija
je uloga da uspori ili zaustavi proces razmnoavanja mikroorganizama prisutnih u sirovom
mlijeku i oznaava bar kodom koji je jedinstven za svakog proizvoaa mlijeka. U laboratoriji
se uzorak priprema shodno vrsti analize i bit e navedeno u opisu postupka ispitivanja sirovog

UNIVERZITET U
TUZLI

FARMACEUTSKI FAKULTET

Obrazac za planiranje i izvoenje vjebi na prvom ciklusu studija farmacije

mlijeka po svakoj analizi.

Slika 1. Uzorak sirovog mlijeka oznaen bar kodom

1. Odreivanje broja bakterija u sirovom mlijeku metodom protone citometrije
Priprema uzorka sirovog mlijeka za analizu:
Provjeriti da li je uzorak oznaen bar kodom, dobro ga homogenizirati u zatvorenoj boici i
uzeti u postupak. Uzorak ne zagrijavati.
Postupak analize uzorka sirovog mlijeka:
Za izvoenje ove metode koristi se aparat BactoScan FC. Cijeli proces je automatizovan.
Princip rada instrumenta baziranog na metodi protone citometrije zasniva se na:
a) filtriranju mlijeka;
b) mijeanju filtriranog mlijeka sa specifinim inkubacijskim reagensom (pufer, enzim i boja)
pomou kojeg se iz mlijeka izdvajaju sve komponente osim bakterijskih stanica;
c) proticanju uzorka mlijeka u obliku tankih niti kroz cijev koju osvjetljava laserski izvor
svjetlosti;
d) fluoroscenciji DNK obojenih bakterijskih stanica;
e) detektorskom oitanju fluoroscentnih svjetlosnih impulsa;
f) na osnovu jednaine linearne regresije ukupnog izraunatog broja bakterija u mlijeku.
Obojene bakterije broje se kao impulsi i predstavljaju pojedinanu bakterijsku stanicu (IBC), a kupan

UNIVERZITET U
TUZLI

FARMACEUTSKI FAKULTET

Obrazac za planiranje i izvoenje vjebi na prvom ciklusu studija farmacije

broj mikroorganizama izraava se kao broj kolonija utvren klasinom metodom (CFU), jednainom
linearne regresije.
Prije poetka nalize mlijeka ovom metodom potrebno je aparat kontrolirati standardom poznate
koncentracije radi provjere praga detekcije, a prema specifikaciji proizvoaa potrebna je i slijepa
proba.
Postupak je slijedei: Provjeriti koliinu reagenasa u spremnicima aparata. Baktosan se ukljui na
prekidau i pokree se softver. Postavlja se uzorak na pokretnu traku (Conveyor 5000 basic), zadaje se
u programu mjerenje uzorka, nakon zavrenog mjerenja rezultati se eksportuju u odreeni fajl za
sakupljanje svih podata za uzorak sirovog mlijeka. Rezultati se koriste kod izrade izvjetaja o
ispitivanju. Broj bakterija odreuje klasu mlijeka, a na osnovu toga i cijenu mlijeka na tritu.

Slika 2: BactoScan FC

2. Odreivanja broja somatskih stanica u sirovom mlijeku

metodom

fluoro- optoelektronskom

Priprema uzorka:
Za analizu se koristi isti uzorak koji je proao postupak protone citometrije. Prije analize
broja somatskih stanica neophodno je uzorak zagrijati na 40-42 C u vodenom kupatilu oko 10
min, te dobro homogenizirati.

Postupak analize sirovog mlijeka:

UNIVERZITET U
TUZLI

FARMACEUTSKI FAKULTET

Obrazac za planiranje i izvoenje vjebi na prvom ciklusu studija farmacije

Za izvoenje ove metode koristi se aparat Fosomatic Minor. Metoda se zasniva na bojenju somatskih
stanica i njihovo lasersko brojanje u struji fluida koja protie kroz stanicu. Svjetlosni signali se
pretvaraju u elektronske, broje i prikazuju kao broj somatskih stanica u ml mlijeka na PC. Princip je
zasnovan na protonoj citometriji.
Prije poetka nalize mlijeka ovom metodom potrebno je aparat kontrolirati standardom poznate
koncentracije radi provjere praga detekcije, a prema specifikaciji proizvoaa potrebna je i slijepa
proba. Postupak je slijedei: Zagrijani uzorak staviti ispod pipete aparat i pokrenuti program analize na
aparatu. Aparat e automatski izbrojati somatske stanice. Nakon zavrenog mjerenja rezultati se
eksportuju u odreeni fajl za sakupljanje svih podata za uzorak sirovog mlijeka. Rezultati se koriste
kod izrade izvjetaja o ispitivanju. Broj somatskih stanica odreuje klasu mlijeka, a na osnovu toga i
cijenu mlijeka na tritu.

Slika 3: Fosomatic Minor

3. Odreivanje fiziko-hemijskih analiza sirovog mlijeka FTIR spektrofotometrijom

Priprema uzorka sirovog mlijeka:
Za analizu se koristi isti uzorak koji je proao predhodne dvije analize. Prije utvrivanja
fiziko- hemijskih parametara u sirovom mlijeku neophodno je uzorak zagrijati na 40-42 C u
vodenom kupatilu oko 10 min, te dobro homogenizirati.

Postupak analize sirovog mlijeka:

UNIVERZITET U
TUZLI

FARMACEUTSKI FAKULTET

Obrazac za planiranje i izvoenje vjebi na prvom ciklusu studija farmacije

Za izvoenje ove metode koristi se aparat Milko-Scan FT 120. Za odreivanje strukture sastojaka
mlijeka i mlijenih proizvoda koristi se spektroskopija s Furierovom transformacijom infracrvenog
spektra (FTIR). Temelji se na sposobnosti svih hemijske veze da apsorbiraju zraenje valnog broja u
podruju od 4 000 do 400 cm-1, te na osnovu valnih duina odredi sadraj pojedinih organskih tvari u
mlijeku.
Postupak je slijedei: Ukljuiti PC koji je sastavni dio aparata i saekati da starta program FT 120.
Uzorak se stavi ispod pipete aparata koji e automatski odraditi mjerenja sadraja masti, sadraja
proteina, sadraja laktoze, sadraja bezmasne suhe tvari i taku mrnjenja i rezultate prikazati
na monitoru raunara. Nakon zavrenog mjerenja rezultati se eksportuju u odreeni fajl za sakupljanje
svih podata za uzorak sirovog mlijeka. Rezultati se koriste kod izrade izvjetaja o ispitivanju.
Rezultati dobijeni mjerenjima ovim metodama se iz fajla za eksport pridruuju bar kodu uzorka i
nakon toga se tampa rezultat.

Slika 4. Milko-Scan FT 120

Obaveza studenta
Studenti e biti podijeljeni u radne grupe po 5 studenata, svaka radna grupa e u toku
pokaznih vjebi boraviti u Laboratoriji za kontrolu kvaliteta sirovog mlijeka i na licu
mjesta se upoznati sa postupcima analize, nainu izrauna klasa mlijeka i nainu
izvjetavanja o rezultatima ispitivanja. Rezultate dobijene instrumentalnim metodama

UNIVERZITET U
TUZLI

FARMACEUTSKI FAKULTET

Obrazac za planiranje i izvoenje vjebi na prvom ciklusu studija farmacije

e moi koristiti u diskusiji i za izradu izvjetaja koji su duni dostaviti u roku od 4

dana po zavretku vjebi.
Studentski prikaz rezultata vjebe
Zadatak br. 1 Priprema uzorka sirovog mlijeka za analizu.

Zadatak broj 2: Odreivanje broja bakterija u sirovom mlijeku

Zadatak broj 3: Odreivanje broja somatskih stanica u sirovom mlijeku

Zadatak broj 4: Odreivanje hemijskih parametara u sirovom mlijeku

Pitanja za provjeru:
1. Objasniti pripremu uzorka sirovog mlijeka za analizu.
2. Objasniti princip i postupak izvoenja protone citometrije u odreivanju broja
bakterija u sirovom mlijeku.
3. Objasniti princip i postupak izvoenja opto- fluoroelektronske metode u
odreivanju broja somatskih stanica u sirovom mlijeku
4. Objasniti princip i postupak izvoenja FTIR spektrofotometrije

Ime i prezime studenta:

Potpis studenta:

UNIVERZITET U
TUZLI

FARMACEUTSKI FAKULTET

Obrazac za planiranje i izvoenje vjebi na prvom ciklusu studija farmacije

Ovjera asistenta:
Literatura
- Uredba o kvalitetu svjeeg sirovog mlijeka i nainu utvrivanja cijene svjeeg sirovog
mlijeka (Sl. novine Federacije BiH broj 59/2011)
- Pravilnik o sirovom mlijeku (''Slubeni glasnik BiH'' broj 21/11 i 62/14)
- Proizvoako uputstvo za rad na ureaju baktoSkan (FOSS)
- Proizvoako uputstvo za rad na ureaju fosomatic minor (FOSS)
- Proizvoako uputstvo za rad na ureaju milkoScan (FOSS)
- Matijevi B. i Blai M. (2008). Primjena spektroskopskih tehnika i kemometrijskih metoda u
tehnologiji mlijeka
- D. Samarija i suradnici (2004). Utvrivanje ukupnog broja bakterija u sirovom mlijeku metodom
protone citometrije