Biologija celice Svetlobni mikroskop (lea steklo), Elektronski mikroskop (lea elektromagnet)

loljivo ime debelina

vir kaj preuujemo kontrastiranje opombe
st (d) mikroskopa preparata
0,2m rutinsko
(200nm 3-10 m pregledovanje
) (objektno trajno in svee HE, azansko
steklo ~ obarvanih barvanje (azokarmin
klasini histolokih in anilinsko modrilo),
1mm barvanje po
svetlobni preparatov; krvne
krovnik Giemsi, barvanje z
celice, spolne celice,
max. celice v kulturi, celice acetokarminom1
0,17mm) ustne sluznice, deli
tankih prosojnih tkiv
(prsna, trebuna mrena)
prozorne strukture dva dodatna dela:
ive neobarvane / kolobarjasta
faznokontras (strukture v celici se
celice in njihove kondenzorjeva
tni razlikujejo v optini
strukture; gibanje gostoti) zaslonka2, fazna
kromosomov med mitozo ploica3
neobarvani
volframova,
temnopoljni bioloki vzorci; ive diskasta zaslonka4
halogenska celice, krvni razmazi
ali je vedno
LED arnica faznokontrastni,
omogoa
fluorescenno
invertni neomejena celice in vitro
mikroskopijo, objektivi
pod objektno mizico,
svetloba pada od
zgoraj, ima kamero5
urejene strukture
(dvolomne); krobno polarizator in
polarizacijski zrno, prenoprogaste
analizator6
miice, kolagenska
vlakna
manji organizmi
v celoti ali en ali dva objektiva,
stereoskopsk
manipulacija s vtis globine
i7
kokom tkiva
(operacija, poskus)
fluorescenni ivo srebro, ve celinih svetloba pada od
 struktur naenkrat, zgoraj
ksenonska
dinamika =epifluorescenca,
arnica
procesov filtrski blok8
3D slika, tokasto
veja prostorska
osvetljevanje
loljivos konfokalni laser ve 100 m razporeditev
preparata, optino
t celinih struktur
rezanje9
kovinski nadgradnja omogoa
10 celina
presevni filament 50-100nm svinev citrat 3D rekonstrukcijo
ultrastruktura
1-2nm (katoda) celinih organelov
elektronska povrina celic in izbijanje elektronov,
vrstini ne kontrastiramo
puka tkiv vtis 3D
1 HE hematoksilin obarva jedra modro-vijolino, eozin pa skupine proteinov
citoplazme ronatoAZANSKO BARVANJE citoplazma rumeno, jedra rdee,
kolagenska vlakna v medcelinini intenzivno modro, sekrecijski produkti lez
razno (rdee, modro, rumeno, vijolino ali ronato)
BARVANJE PO GIEMSI jedra modro-vijolino, eozinofilna zrna v citoplazmi
rdee, nevtrofilna zrna ronato, bazofilna vijolino
ACETOKARMIN barvanje tkiv in kromosomov rdee

2 Prepua le kolobar svetlobe, s katerim osvetlimo preparat

3 Steklena ploica nameena med objektivom in okularjem, ki ima enak

kolobarjast utor kot je kolobar svetlobe, ki ga prepua kolobarjasta
kondenzorska zaslonka, povea fazni zamik (+ ) med direktnimi in
uklonskimi arki, ki znaa (fazni zamik v primeru biolokih preparatov so
majhni ~ ), nae oko to zazna kot razlino mono svetlobo, optino gosteje
strukture vidimo temneje = pozitivni fazni kontrast

4 Ustvari votel stoec svetlobe, ki zadri centralne arke, zato ne padejo v

objektiv. V objektiv , padejo uklonski arki (zunanji kolobar svetlobe osvetli
strukture v preparatu od strani). Vidimo svetle obris na temnem ozadju

5 Na objektno mizico lahko namestimo posebno komoro, v kateri je primerna

atmosfera za gojenje celic in vito, to omogoa dolgotrajneje spremljanje
dinamike celinih procesov- posnamemo gibanje organela

6 Polarizator polarizira svetlobo, s katero osvetljujemo preparat, med

objektivom in okularjem je analizator, nameen pravokotno na polarizator in
zato zadri vso svetlobo, ki jo prepua polarizator.

7 Omogoa modularno zasnovo, osvetlitev je lahko od zgoraj spodaj ali od

strani. Zaradi dodatno vgrajenih prizem dobimo normalno orientacijo. Poveava
tega mikroskopa ni velika od 20 do 540-kratna

8 Sestoji iz vzbujevalnega filtra (med arnico in preparatom prepua samo

tisti del svetlobe, ki v preparatu vzbudi fluorescenco), dikromatskega zrcala
(usmeri vzbujevalno svetlobo v objektiv, ki je hkrati tudi kondenzor) , od koder
potuje v ravnino preparata, nazaj skozi objektiv, preko dikromatskega zrcala
zapornega filtra (prepua le fluorescenne svetlobe ter zadri UV svetlobo
ter nespecifino fluorescenno svetlobo, ki bi nam utegnila pokvariti vid) nato
pa do okularja
9 Mono je zajeti slike ve ravnin preparata. Ima zaslonko z zelo majhno
odprtino.

10 Ultratanke rezine ne reemo s kovinskim ampak z diamantnim noem.

Poznamo pa e metodo zamrzovalnega lomljenja odtis tkiva (jedrne pore iz
ve proteinskih kompleksov membrane). Preparat mora biti dobro fiksiran,
tanek, suh in kontrastiran.

Histoloke tehnike:

alciansko modrilo
feulgenova reakcija
PAS reakcija
osmijev tetroksid
barvila sudan
encimska histokemija presevni, fluorescenni
imunooznaevanje (fluorokromi) presevni, invertmi, fluorescenni, kofokalni
avtoradiografija presevni
in situ hibridizacija presevni, invertni, fluorescenni - FISH, konfokalni, metoda
TUNEL,
GFP invertni