Univerzitet u Zenici

Medicinski fakultet

Laboratorijske tehnike u
mikrobiologiji

Predavač: Doc. dr. sc. Amir Ibrahimagić

 Antigen-antitijelo reakcije sa
obilježenim antitijelima
• ELISA
• RIA
• Westen blot
• Imunoprecipitacija
• Imunohistokemija
• Imunofluorescencija
• Protočna citometrija
• Imunoelektronska mikroskopija
ELISA (enzyme-linked immunosorbent
assay)
• Koristi se za detekciju Ag u tečnim uzorcima ili
At.
• Marker je enzim, a obilježeno je primarno At ili
sekundarno At.
• Dolazi do promjene boje supstrata pod
dejstvom enzima
• Signal se detektuje kolorimetrijski
• Može biti kvalitativna i kvantitativna.
 Serum
Ag

Obilježeno At
Vezano At

Ag
Signal

Sandwich test
 Serum
Ag

Neobilježena
specifična At
 Obilježena
specifična At

Inkubacija
 Dodavanje
supstrata

Kolorimetrijska detekcija
• "Sendvič" ELISA mjeri količinu antigena
između dva sloja At (hvatanje i detekcija
antitijela).
• Antigen koji se određuje mora sadržavati
najmanje dva antigenska mjesta sposobna za
vezanje na At, jer najmanje dva At djeluju u
"sendviču".
• Izmjerena apsorbancija je direktno
proporcionalna koncentraciji analita.
 ELISA detekcija At u serumu

Uzorak seruma

Ag u jažici
Dodatak obilježenih At
 Aparati za ELISA

Analyser IP2

Mikroplate reader
 Interpretacija rezultata
• IgM i IgG negativni – znači nema infekcije
• IgM pozitivan test, IgG negativan test –
početak infekcije
• IgM i IgG pozitivan test – akutna infekcija
• IgM negativan test i IgG visoko pozitivan test –
kasna rekonvalescencija
• IgM negativan test uz nisko pozitivne IgG –
ranije preležana bolest
 Imunofluorescencija
• Koristi se za detekciju Ag u čvrstim uzorcima ili
At u serumu
• Marker je fluorescentna boja (fluorohrom), a
obilježeno je primarno At ili sekundarno At
• Emituje se boja pod dejstvom UV svjetla
• Za detekciju služi fluorescentni mikroskop
• Kvalitativna metoda
• Potrebe – mikroskopske pločice
• Može biti:

Direktna detekcija Ag obilježeno At

detekcija Ag
Indirektna obilježeno
sekundarno At
detekcija At
 Obilježena
primarna At

Fiksirani
uzorak
 Indirektna imunoflorescencija
(detekcija Ag)

Neobilježena At

Fiksirani Ag

Proces inkubacije
 Obilježena
sekundarna At

Inkubacija
1

3
 Indirektna imunofluorescencija
(detekcija At u serumu)

uzorak - serum

Fiksirani
Ag

Proces sličan – dodaju se obilježena spec. At,

inkubacija, ispiranje, ekscitacija i detekcija