Parazitarne infekcije u eri

globalizacije –Laboratorijska
dijagnostika

.

Makroskopski prikaz helminata
Neke nematode mogu uzrokovati crijevnu
opstrukciju.
Enterotomija – Ascaris lumbricoides
Direktna
metoda
Taenia saginata
• Pri makroskopskoj pretrazi stolice tražimo višestanične parazite ili
njihove dijelove (primerice proglotide kod cestoda), krv, sluz.
• Paraziti se mogu izlučivati periodično, u malim količinama. Stoga
uzimamo više uzoraka ili se korisitmo metodama provokacije stolice
gorkim solima.
 Direktna
metoda

Mikroskopski preparati stolice

Entamoeba hystolitica – cista

Lijeva slika: obojeni preparat stolice – Lugol
Desna slika: nativni preparat stolice Cryptosporidium parvum – oociste
Trajno obojeni preparat stolice :
modificirana Ziehl – Neelsen tehnika
• Pri mikroskopskoj pretrazi stolice tražimo jednostanične
parazite, ličinke, ciste, leukocite, eritrocite.

• Često se koriste koncentracijske metode poput MIFC metode

kako bismo povećali osjetljivost testa.
 Direktna
metoda

Perianalni otisak

Uzimanje perianalnog otiska po Grahamu

Mikroskopski preparat gotovo prozirnog
dvostruko asimetričnog jaja Enterobius
vermicularisa
 Direktna
metoda

Kultivacija

• Koprokultura podiže osjetljivost mikroskopske Leishmenia spp. – promastigoti Kultura na

pretrage na ličinku Strongyloides stercoralis NNN mediju: Giemsa bojenje
 Direktna
metoda

Kultivacija

• Kultivacija slobodno živućih ameba.

• Amebe iz roda Acanthamoeba i Naegleria kultiviraju se

na agaru zasijanom bakterijama (primjerice vrstom E.
coli, P. aeruginosa, E. aerogenes ili S. maltophilia).
Nakon 4 – 5 dana inkubacije, u slučaju pozitivna uzorka,
uočavaju se karakteristični trofozoiti i ciste ameba.

• Kultivacija vrste Balamuthia mandrillaris zahtjevnija je,

jer je amebi za rast potrebna kultura stanica.
Acanthamoeba spp. – ciste iz kulture lijevo,
trofozoiti desno, laboratorijski soj, neobojeni
preparat
 Direktna
metoda

Gusta kap i krvni razmaz

Wuchereria bancrofti – mikrofilarija

Gusta kap krvi. Giemsa bojenje P. vivax – stadij prstena P. vivax – stadij prstena
Gusta kap krvi. Giemsa bojenje Krvni razmaz. Giemsa bojene
• Gusta kap se priprema uz razmaz,
budući da paraziti mogu biti rijekti
pa su onda u gustoj kapi
koncentriraniji.
• Radi se i za vrste rodova
Babesia, Trypanosoma.
 Direktna
metoda

Bioptički uzorci

Giardia lamblia - trofozoiti

Bioptički uzorak duodenuma
Leishmenia spp. - amastigoti
Bioptički uzorak lišmenioma
 Direktna
metoda

Brzi testovi
• Plasmodium falciparum – HRP- 2, pLDH
antigeni
• Metode brzih testova temelje se na detekciji
parazitu karakterističnih antigena.
• Temelje se na interakciji protutijela i antigena :
imunokromatografija, imunofluorescencija
(DFA), EIA.

• Antigene dokazujemo i u stolici: Entamoeba

histolytica (EIA), Cryptosporidium spp. (EIA), Giardia
lamblia (EIA).
Brojni komercijalni testovi
 Direktna
metoda

Molekularna dijagnostika
• Temelji se na detekciji nukleinskih kiselina parazita.
• Metode su visoko osjetljive i visoko specifične, ali nisu
široko dostupne.
• Dostupnost je problem za nerazvijene zemlje koje su često
endemska područja za pojedine parazitoze.

Cryptosporidium, Giardia, E. histolytica 
Real Time PCR Detection Kit
• DNA se ekstrahira iz uzoraka, umnožava koristeći Real Time
PCR, a potom detektira blot tehnikama uz pomoć specifičnih
početnica koje su fluorescentno označene.
 Direktna
metoda

Molekularna dijagnostika

multiplex PCR za spolno prenosive bolesti uključujući

uzročnika Trichomonas vaginalis

• PCR se korisiti i u dokazivanju:

Toxoplasma gondii, Leishmania sp., Acanthamoeba
 Indirektna
metoda

Serologija
• Brojne su metode kojima možemo
detektirati protutijela nastala imunosnom
reakcijom bolesnika na određeni antigen
parazita. Uzorak je serumu bolesnika.
IFA –  indirektni imunofluorescentni test
IC – imunokromatografski test
EIA – imunoenzimski test
ELFA- enzimsko fluorescentni test
ISAGA – imunosorbentni test
AV IgG – test avidnosti IgG protutijela
(razlikovanje svježe i starije infekcije)
WB – Western blot
 Indirektna
metoda

Serologija
• Serologija na ehinokokozu (EIA, WB) štedi bolesnika moguće anafilaksije te rasapa pri biopsiji.
• Serologija na cisticerkozu – Taenia solium (EIA, WB), trihinelozu (EIA, WB) štedi bolesnika
biopsije koja ima i nižu osjetljivost od serologije.
• Serologija se koristi kod sumnje na sindrom Larvae migrans visceralis odnosno toksokaroze
(EIA, WB).
• Serologija se koristi u epidemiološkim studijama rasprostranjenosti malarije (IFA) i lišmenioze
(IFA, EIA, WB).
• Serologija se može koristiti i za dokazivanje amebijaze (IFA, EIA), strongiloidoze (EIA),
fascioloze (EIA; WB), šistosomoze (EIA), tripanosomoze (EIA).
• U serologiji testiramo parne uzorke seruma kako bismo pratili dinamiku titra.
• Western blot tehnikom istodobno možemo testirati serum na više vrsta parazita.
 Indirektna
metoda

Serologija

• Test avidnosti IgG protutijela – važnost u razlikovanju akutne i

prošle infekcije Toxoplasma gondii u trudnoći.
Literatura
• https://www.hzjz.hr/sluzba-mikrobiologija/popis-mikrobioloskih-pretr
aga/
• https://www.cdc.gov/dpdx/az.html
• Smilja Kalenić i suradnici: MEDICINSKA MIKROBIOLOGIJA
• M. Sviben, D. Horvat-Krejči, E. Mlinarić Missoni: INFEKCIJE
UZROKOVANE SLOBODNOŽIVUĆIM AMEBAMA -
ETIOLOGIJA, KLINIČKE OSOBITOSTI, DIJAGNOSTIKA,
TERAPIJA I PREVENCIJA