MAKALE ADI:

Aptamers An Emerging Class of Molecules That Rival Antibodies in Diagnostics 1999

FİKİRLER:
1-Monoclonal antibodies ler sadece spesifik bir hücreye hitap ediyor.Monovalent affinitesi var.
Polyclonal antibodies ler birçok epitopa bağlanıyor.spesifikliği düşük.BU yüxden monoclonal olanlar
therapeutic diagnostic de daha önemli.
2-Hybridoma Technology:bir fareye ya da memeliye antijen enjekte edilir.Farenin ürettiği
antikorlar(monoklonal)(B hücresi) hasat edilir.kültür ortamında multiple myelom hücreleriyle
birleştirilir.Uzun süre saklanabilen antikorlar elde edilmiş olur.
3-Flow cytometry:Heterojen bir hücre popülasyonunda her bir hücrenin şeklini,boyutunu ve
kompleksliliğini ölçme yöntemi.Ayrıca heterojen popülasyonda boyalı ya da işaretli hücreleri de tespit
edebiliyor.
4-Aptamerlerin PCR da kullanılması ile viral ajanların tespitinin daha kolay hale gelmesi
5-Aptamerlerin reversible denaturation özellikleri onları birçok alanda kullanıma açık hale getiriyor.

MAKALE ÖZETİ:
-Ana özeti:aptamers that have been tested in different diagnostic platforms show very encouraging
results
-Farklı platformlarda deneyler yapılmış.Aptamer kullanarak ve aptamer kullanılmadan ortaya çıkan
sonuçlar değerlendirilmiş.
-Antikor üretiminin zorluklarından ve birçok kısıtlamaya maruz kaldıpından bahsedilmiş
In vivo üretim sadece fare ve sıçanda olabilyor
Hayvanlarda immun reaksiyona sebep olabiliyor(toksik etki),
Denatürasyona uğradığında ırreversible bir değişime uğruyor
Üretimindeki parametrelerde değişiklik yapılamıyor
-Aptamerlerin dikkatimi çeken avantajları
Because animals or cells are not involved in aptamer identification, toxins as well as molecules
that do not elicit a good immune responses can be used to generate high-affinity aptamers
Aptamers undergo denaturation, but the process isreversible. Once denatured, functional
aptamers couldbe regenerated easily within minutes. They are stable tolong-term storage and can be
transported at ambienttemperature.
- SELEX process recently was automated to make aptamer discovery even faster and more
economical.
-The counter-SELEX strategy could be a valuable tool inidentifying aptamers aimed at a unique target
in a com-plex mixture, probably even without knowing what the target is
-Aptamerlerin Farklı diagnostic Assay lerde kullanımından bahsedilmiş
Two-Site binding assay
Vesiculial endothelial growht factor VEGF hasta serumunda aptamer sayesinde tespit
edilmiş
Flow cytometry:kullanılarak analiz edilmiş
Full-length aptamers con-taining 29-F-pyrimidines obtained by in vitro transcrip-tion have
been conjugated to either fluorescein or phyco-erythrin to analyze their binding to human
CD4expressed on cell surfaces(40

-Aptamer normal şartlarda monovalent(tek değerlikli).Bazı çalışmalarda çift

değerlikli(bivalent,dimeric) hale getirilmiş ve monovalent formuna göre 10 kat daha fazla affinite
göstermiş target’a karşı.The divalent anti-HNE aptamer showed a 10-fold higheraffinity than the
monovalent form in binding to the targeteither in solution or immobilized on beads(129 )++The
effects of aptamer dimerization on cellular staining wereelegantly studied by Ringquist and
Parma(130) ---who used a DNA aptamer isolated to recognize L-selectin. The aptamer binding to L-
selectin on cells showed a 20-fold affinity improvement upon dimerization.

-Divalent aptamerin divalent antikora göre yarı ömrünün daha uzun olduğu tespit edilmiş.(14 dk vs 5.5
dk)
Sensors
-Normal immunosensor lerin antikor yüzeyinde regeneration u düşük.Fakat aptamer-based
immunosensor lerin regeneration ları oldukça yüksek.çünkü aptamerlerin denatürasyonu
reversible.Ayrıca aptamerlerin rejenerasyonu=Orta pH,sıcaklık,tuz,şelasyon ajanlarıyla oluyor.Sadece
pH duyarlılığı kalıcı etki bırakabiliyor aptamer üzerinde.dikkatli olmak gerekli.

-The third benefit of aptamers is the ease of labeling with a wide range of reporters, enabling t he
design of a variety of detection methods
Fluorescence polarization:Bu yöntem iki molekülün birbiriyle etkileşiminin olup olmadığını
ölçüyor.etkileşimli olan madde weight bakımından daha fazla oluyor daha fazla ışık emilmiş
oluyor.böylece maddeyle etkileşim olup olmadığı anlaşılıyor.

Capillary Electrophoresis:hem kompetitif hem non kompetitif yöntem kullanılyor.Moleküller

yüküne ve boyutuna göre ayrıştırılıyor.Özellikle de yüküne göre.

PCR:
PCR kullanımıyla target DNA dan birçok kopya üretilebiliyor fakat bu aşırı üretimde
istenmeyen kopyalar da fazla oluyor.Aptamerin reversible denaturation özelliğini kullanark Taq
Polymeras’ı =düşük sıcaklıkta aptamer bağlayıp inhibe ediyorlar.Yüksek sıcaklıkta aptamer
innhibe oluyor ve Taq Polymerase aktive oluyor.Bu sayede istenmeyen kopyalar minimuma
indiriliyor.Özellikle viral ajanların tespitinde spesifik kullanıma sahip.

-Aptamerler aynı zamanda anjiogenik maddelerin izoformlarının tespitinde de kullanılıyor.elegant

example of the use of an aptamer to specifically detect an isoform of an angiogenic factor, VEGF. Four
isoforms of VEGF