ĐỘNG HỌC TĂNG TRƯỞNG VI SINH VẬT

KỸ THUẬT NUÔI CẤY

1. Nuôi cấy mẻ
1.1. Nuôi cấy bán liên tục trong đó một phần của văn hóa được thu hoạch đều đặn và được
thay thế bằng một thể tích môi trường bằng nhau.
2. Nuôi cấy theo lô trong đó môi trường được nuôi trong môi trường nuôi cấy dẫn đến tăng
khối lượng (xem phần sau)
2.1. Truyền dịch liên tục trong đó một quần thể tế bào bất động được tưới máu với môi
trường tươi và tương đương với hệ thống phản hồi liên tục bên trong.
3. Nuôi cấy liên tục
1. Kỹ thuật nuôi cấy mẻ
- Kỹ thuật nuôi cấy mẻ còn được gọi là hệ thống canh tác khép kín.
- Trong kỹ thuật này, lần đầu tiên dung dịch dinh dưỡng được chuẩn bị và nó được cấy với
inoculum (sinh vật nuôi cấy) và sau đó không có gì được thêm vào bể lên men ngoại trừ sục
khí.
- Trong nuôi cấy mẻ, không có môi trường tươi mới được thêm vào cũng không có môi
trường sử dụng hết được loại bỏ từ bồn canh tác. Do đó khối lượng mẻ vẫn như nhau.
- Vì môi trường tươi không được thêm vào trong quá trình ủ, nồng độ dinh dưỡng giảm
liên tục. Hơn nữa các chất chuyển hóa độc hại khác nhau cũng tích lũy trong bình nuôi cấy.
Do đó, kỹ thuật nuôi cấy mẻ cho đường cong tăng trưởng đặc trưng với pha lag, pha log, pha
ổn định và pha suy giảm.
- Ưu điểm: Cơ hội gây ô nhiễm nuôi cấy là tối thiểu trong kỹ thuật nuôi cấy mẻ
- Nhước điểm: Cho năng suất sản phẩm thấp và nó không phải là phương pháp kinh tế.
2. Kỹ thuật nuôi cấy fed-batch
- Kỹ thuật nuôi cấy theo lô cũng được gọi là hệ thống canh tác nửa kín.
- Trong kỹ thuật này, môi trường dinh dưỡng được chuẩn bị và được cấy với sinh vật nuôi
cấy và sau đó được ủ trong thời gian hạt.
- Trong quá trình ủ, chất dinh dưỡng được thêm vào sau một thời gian cụ thể nhưng không
loại bỏ phương tiện đã sử dụng. Vì vậy, khối lượng nuôi cấy tăng liên tục.
- Trong quá trình lên men, một số chất dinh dưỡng rất cần thiết cho quá trình nhưng khi
cung cấp với nồng độ cao hơn ban đầu cho môi trường nuôi cấy, chúng sẽ ức chế sự phát
triển của vi khuẩn làm kết thúc quá trình lên men. Do đó các chất dinh dưỡng như vậy được
giữ ở nồng độ thấp hơn ban đầu, nó được thêm chậm và liên tục trong quá trình lên men.
- Kỹ thuật nuôi cấy fed-batch được áp dụng trong nhiều loại quy trình lên men.
- Lợi thế: Cho năng suất sản phẩm lớn hơn nuôi cấy mẻ
- Bất lợi: Cơ hội ô nhiễm nuôi cấy là theo đợt cho ăn so với kỹ thuật nuôi cấy mẻ
3. Kỹ thuật nuôi cấy liên tục
- Kỹ thuật nuôi cấy liên tục cũng được gọi là hệ thống canh tác mở.
- Trong kỹ thuật này, môi trường vô trùng tươi được thêm liên tục vào bình và sử dụng hết
môi trường nuôi cấy vi khuẩn được loại bỏ liên tục với cùng tốc độ. Vì vậy, khối lượng và
mật độ vi khuẩn vẫn giữ nguyên trong tàu canh tác.
- Trong kỹ thuật này. vi khuẩn phát triển liên tục trong pha log của chúng. Loại tăng
trưởng này được gọi là trạng thái tăng trưởng ổn định.
- Mật độ tế bào trong nuôi cấy liên tục không đổi và nó đạt được bằng cách duy trì độ pha
loãng và tốc độ dòng không đổi.
Các kiểu nuôi cấy liên tục
Hóa trị

- Đây là loại phương pháp phổ biến nhất kiểm soát mật độ dân số và tăng trưởng nuôi cấy.
- Hai yếu tố được sử dụng trong hóa trị liệu tỷ lệ pha loãng và nồng độ chất dinh dưỡng
giới hạn.
- Trong nuôi cấy liên tục, các sản phẩm cuối cùng không tích lũy và các chất dinh dưỡng
không bị cạn kiệt,
- do đó vi khuẩn không bao giờ đạt được trong giai đoạn đứng yên vì các chất dinh dưỡng
tươi được cung cấp liên tục và các sản phẩm cuối cùng được loại bỏ liên tục.
- Trong hóa trị. môi trường lỏng chứa một số chất dinh dưỡng trong nồng độ giới hạn tăng
trưởng và nồng độ Giới hạn dinh dưỡng quyết định tốc độ tăng trưởng của vi khuẩn.
- Trong quá trình hóa trị trạng thái ổn định. nồng độ chất dinh dưỡng giới hạn không đổi vì
tốc độ bổ sung chất dinh dưỡng bằng với tốc độ mà sinh vật sử dụng cộng với dòng chảy qua
cửa xả.
- Để kiểm tra xem có mật độ tế bào không đổi hay không, nồng độ của chất dinh dưỡng
thiết yếu đó trong vlie được kiểm tra.
- Nếu nồng độ của chất dinh dưỡng đó bị thay đổi thì nó cho thấy mật độ vi khuẩn đang
thay đổi. Trong trường hợp này, tốc độ dòng chảy được điều chỉnh để duy trì mật độ tế bào
không đổi.
Tua bin

- Trong máy đục, một thiết bị quang điện được sử dụng để tăng mật độ tế bào trong tàu
canh tác.
- Thiết bị cảm biến quang đo độ đục (độ hấp thụ) của nuôi cấy trong tàu.
- Nếu nồng độ bị thay đổi, thiết bị quang điện được chú ý và tốc độ dòng chảy được điều
chỉnh thành
- Duy trì mật độ tế bào không đổi trong nuôi cấy.
NUÔI CẤY MẺ
- Nuôi cấy theo mẻ: hệ thống khép kín, chứa một lượng chất dinh dưỡng ban đầu /
giới hạn
- Nuôi cấy theo mẻ sẽ trải qua một số giai đoạn
- Pha trễ:
⸼ Không có sự tăng trưởng diễn ra
⸼ Một thời gian thích nghi
⸼ Trong quy trình thương mại, nên giảm độ dài của pha lag càng nhiều càng tốt và điều
này có thể đạt được bằng cách sử dụng chế phẩm thích hợp
- Pha hàm mũ = Pha log
- Pha log (hàm mũ). Khi vi khuẩn đã thích nghi với môi trường mới của chúng và tổng hợp
các enzyme cần thiết để sử dụng các chất nền có sẵn, chúng có thể bắt đầu phân chia thường
xuyên bằng phân hạch nhị phân. Điều này dẫn đến sự gia tăng theo cấp số nhân được đề cập
trong điều kiện tối ưu, dân số các tế bào sẽ tăng gấp đôi theo thời gian không đổi và có thể dự
đoán được, được gọi là thời gian thế hệ (nhân đôi). Giá trị của vi khuẩn phòng thí nghiệm E.
coli được sử dụng rộng rãi là 20 phút và đối với hầu hết các sinh vật, nó là ít hơn một giờ. là
một số vi khuẩn, tuy nhiên, có thời gian thế hệ là nhiều giờ. Do đó, trong số lượng tế bào có
thể được biểu thị như sau:
n
- Số lượng tế bào: N =N x2
T 0
Acclimatise: thích nghi; utilize: sử dụng; binary fission: trực phân
- Trong đó: No là số lượng tế bào ở thời điểm bắt đầu tăng trưởng theo cấp số nhân, NT là
số lượng tế bào ở thời điểm T, L là độ dài của pha trễ và n là số lần nhân đôi đã trôi qua. Do
đó n = T / Td, trong đó Td là thời gian nhân đôi.
- Thay vào phương trình thứ nhất: NT = N0 x 2T/Td
- Điều này có thể được thể hiện thuận tiện hơn bằng cách sử dụng Iogarithms cho cơ sở 2
T −L
(đừng quá lo lắng về cách thực hiện!): log2 NT = log2 N0 + Td
log 2 N T −log 2 N 0 1
Vì thế:
T −L
= Td
- Do đó, nếu chúng ta biết số lượng ô ở đầu và cuối của một giai đoạn tăng trưởng theo cấp
số nhân, chúng ta có thể tính thời gian nhân đôi. Xem BOX 5.6 để biết ví dụ hoạt động.
- Chúng ta cũng có thể xác định hằng số tốc độ tăng trưởng trung bình (K); đây là thước đo
số lần nhân đôi của dân số trên một đơn vị thời gian và bằng 1 / Td (*)
- Nhiều loại kháng sinh như penicillin (Chương 14) chỉ có hiệu quả khi các tế bào đang
phân chia tích cực, vì chúng phụ thuộc vào việc phá vỡ sự tổng hợp thành tế bào mới.
0.693
* Bạn cũng có thể đi qua tốc độ tăng trưởng tức thời (μ), bằng với
Td
BOX 5.6 Tính toán tăng số lượng vi sinh vật
Ví dụ: Một cấy gồm 107 tế bào vi khuẩn đã được đưa vào một môi trường nuôi cấy và theo
dõi sự tăng trưởng. Không có thay đổi nào được nhìn thấy trong 18 phút (giai đoạn trễ), sau
đó tăng trưởng xảy ra nhanh chóng. Sau 76 phút nữa, dân số đã tăng lên 4,32 x 108 tế bào.
Thời gian nhân đôi (Td) của văn hóa là gì? (Để có được các giá trị của log2, hãy nhân các giá
trị của log 10 với 3.322)

CÔNG THỨC
- Ở đây:
⸼ x là nồng độ sinh khối vi sinh vật,
⸼ t là thời gian, tính bằng giờ
⸼ μ là tốc độ tăng trưởng cụ thể, tính bằng giờ -1
- Trên phương trình tích phân (2.1) cho:

*
lnx T – lnx 0
μ = t−t 0
- Ở đây:
⸼ xo là nồng độ sinh khối gốc
⸼ xt là nồng độ sinh khối sau thời gian khoảng thời gian, t giờ.
⸼ e là cơ sở của logarit tự nhiên.

N (TB/ml) và thời gian canh tác (giờ)

Phương pháp thực nghiệm xác định hằng số μ

Cách 1:
xt = x0e μt => μ= 0.0685 khác với m tức thời (giữa 2 điểm trên đường cong log)
- Ở đây:
⸼ x0 là nồng độ sinh khối ban đầu
⸼ xt là nồng độ sinh khối sau khoảng thời gian, t giờ,
⸼ e là cơ sở của logarit tự nhiên.

- Thật dễ dàng để hình dung sự tăng trưởng theo cấp số nhân của các sinh vật đơn bào
được sao chép bằng phân hạch nhị phân. Thật vậy, tế bào động vật và thực vật trong nuôi cấy
huyền phù sẽ hoạt động rất giống với vi sinh vật đơn bào
- Tổng chiều dài sợi nấm của một sợi nấm và số lượng đầu sợi tăng theo cấp số nhân với
tốc độ xấp xỉ bằng nhau
dx ln ⁡(xt−xo)
dt
=μx => m = (t−¿)
dH ln ⁡(Ht −Ho)
dt
=μH => m = (t−¿)

dA ln ⁡( At −Ao)
dt
=μA => m = (t−¿) LnY (LnX) và thời gian nuôi cấy (h)
Cách 2 Y= b + aX
- Khi lấy logarit tự nhiên, phương trình * trở thành: Phương pháp thực nghiệm xác định
Nên dùng: ln xt = ln x0 + μt hằng số μ
- Do đó, một biểu đồ logarit tự nhiên của nồng độ sinh khối theo thời gian sẽ tạo ra một
đường thẳng, độ dốc sẽ bằng μ. Trong giai đoạn lũy thừa, các chất dinh dưỡng vượt quá mức
và sinh vật đang phát triển với tốc độ tăng trưởng cụ thể tối đa của nó, μmax, trong các điều
kiện phổ biến. Các giá trị tiêu biểu của μmax cho một loạt các vi sinh vật được nêu trong Bảng
2.1.
 Pha giảm tốc

Pha tăng tốc

- Trong môi trường nuôi cấy chìm (bình lắc hoặc thiết bị lên men), một sinh vật sợi nấm có
thể phát triển thành các mảnh sợi nấm phân tán (xem thêm Chương 6 và 9). Sự tăng trưởng
của các viên sẽ theo cấp số nhân cho đến khi mật độ của các viên được tái tạo trong giới hạn
khuếch tán. Trong giới hạn như vậy, sinh khối trung tâm của viên sẽ không nhận được nguồn
cung cấp chất dinh dưỡng, cũng như các sản phẩm độc hại có khả năng khuếch tán ra ngoài.
Do đó, sự tăng trưởng của viên tiến hành từ lớp vỏ sinh khối bên ngoài là vùng sinh trưởng
tích cực và được mô tả bởi Pirt (1975) là:

- Trong đó M0 và M lần lượt là khối lượng sợi nấm tại thời điểm 0 và t. Do đó, một đồ thị
của khối lập phương của khối sợi nấm theo thời gian sẽ cho một đường thẳng, độ dốc bằng k.
- Bản chất của giới hạn tăng trưởng có thể được khám phá bằng cách tăng sinh vật với sự
hiện diện của một loạt nồng độ cơ chất và vẽ biểu đồ nồng độ sinh khối ở pha tĩnh so với
nồng độ cơ chất ban đầu, như trong Hình 2.2. Từ hình 2.2, có thể thấy rằng trên khu vực A
đến B, sự gia tăng nồng độ cơ chất ban đầu làm tăng tỷ lệ sinh khối được tạo ra ở pha tĩnh.
Tình huống có thể được mô tả bởi phương trình:
x
Y=
S r−s
- Trong đó:
⸼ x là nồng độ sinh khối được tạo ra,
⸼ Y là hệ số năng suất (g sinh khối sản xuất chất nền g-1 tiêu thụ),
⸼ SR là nồng độ cơ chất ở thời điểm t
⸼ s là nồng độ cơ chất ban đầu
- Nếu thiếu cơ chất => xmax giảm
- Dư thừa cơ chất => xmax không đổi

Xmax

Nồng độ cơ chất ban đầu trong môi trường

- Hình 2.2 Ảnh hưởng của nồng độ cơ chất ban đầu đến nồng độ sinh khối khi bắt đầu pha
tĩnh, trong nuôi cấy mẻ => Để ước tính chất nền ban đầu trong môi trường
- Trên vùng A-B trong Hình 2.2, s bằng 0 tại điểm dừng tăng trưởng. Do đó, phương trình
có thể được sử dụng để dự đoán sinh khối có thể được tạo ra từ một lượng nhất định của chất
nền, đây là mqh đồng biến, hàm lượng cc bđ và xmax là đồng biến, tăng cc thì xmax sẽ tăng,
A-B nồng độ cơ chất thiếu chưa đủ để xmax đạt đến nồng độ cao nhất của kiểu gen
- Vùng B-C: việc sử dụng chất nền bị ảnh hưởng nghiêm trọng bởi độc tố tích lũy hoặc sự
sẵn có của chất nền khác, là khoảng tốt nhất, hiệu suất cao sản lượng cao
- Vùng C-D: tăng nồng độ cơ chất ban đầu không làm tăng tỷ lệ sinh khối. Điều này có thể
là do sự cạn kiệt của chất nền khác hoặc sự tích tụ của các sản phẩm độc hại, mqh độc lặp,
tăng s ở khoảng này là vô nghĩa, hiệu xuất giảm khi tăng hàm lượng s, nhưng sinh khối, sản
lượng k đổi

- Hệ số năng suất (Y) là thước đo hiệu quả của việc chuyển đổi bất kỳ một chất nền nào
thành sinh khối và nó có thể được sử dụng để dự đoán nồng độ cơ chất cần thiết để tạo ra một
nồng độ sinh học nhất định.
- Tuy nhiên, điều quan trọng là phải đánh giá rằng Y không phải là hằng số - nó sẽ thay đổi
theo tốc độ tăng trưởng, pH, nhiệt độ, chất nền giới hạn và nồng độ của chất nền vượt quá
- Sự giảm tốc độ tăng trưởng và sự ngừng tăng trưởng, do sự suy giảm của chất nền, có thể
được mô tả bằng mối quan hệ giữa và chất nền hạn chế tăng trưởng còn lại, được biểu thị
trong phương trình (2.5) và trong Hình 2.3 (Monod, 1942):

Ở đây:
s là nồng độ cơ chất còn lại => Thông thường, nó là nguồn carbon (glucose)
KS là hằng số sử dụng cơ chất, bằng số với nồng độ cơ chất khi m bằng một nửa, m max
và là thước đo ái lực của sinh vật đối với cơ chất của nó.
 giảm cơ chất => giảm μmax
- Nếu sinh vật có ái lực rất cao đối với chất nền giới hạn (giá trị Ks thấp), tốc độ tăng
trưởng sẽ không bị ảnh hưởng cho đến khi nồng độ cơ chất giảm xuống mức rất thấp.
Do đó, giai đoạn giảm tốc cho một qt nuôi cấy như vậy sẽ ngắn
- Nếu sinh vật có ái lực thấp với chất nền (giá trị Ks cao), tốc độ tăng trưởng sẽ bị ảnh
hưởng nghiêm trọng (đối với) ở nồng độ cơ chất tương đối cao. Do đó, giai đoạn
giảm tốc cho một qt nuôi cấy như vậy sẽ tương đối dài

Dạng đường tuyến tính có được từ pt Michaelis Menten

 Xác định Ks và mmax trong thí nghiệm

Ảnh hưởng của nồng độ cơ chất giới hạn còn lại đến tốc độ tăng trưởng cụ thể của vi khuẩn
giả định

Điều gì sẽ xảy ra nếu dư lượng giới hạn chất nền quá cao? - Sinh khối sẽ giảm vì cơ chất quá
cao sẽ làm tăng áp suất thẩm thấu đến 1 lúc nào đó sẽ gây ức chế lượng sinh khối được sinh ra
- Pha hàm mũ = Pha log
1. Khu A-B
Tương đương với pha theo cấp số nhân trong nuôi cấy theo lô khi nồng độ cơ chất vượt
quá và tốc độ tăng trưởng ở mức tối đa
m = μmax
2. Khu C-A
Tương đương với giai đoạn giảm tốc trong nuôi cấy hàng loạt trong đó sự phát triển của
sinh vật đã dẫn đến sự suy giảm chất nền đến nồng độ giới hạn tăng trưởng sẽ không hỗ trợ
μ< μmax

Nếu sinh vật có ái lực rất cao đối với chất nền giới hạn (giá trị Ks thấp), tốc độ tăng trưởng sẽ
không bị ảnh hưởng cho đến khi nồng độ cơ chất giảm xuống mức rất thấp. Do đó, giai đoạn
giảm tốc cho một qt nuôi cấy như vậy sẽ ngắn
Nếu sinh vật có ái lực thấp với chất nền (giá trị Ks cao), tốc độ tăng trưởng sẽ bị ảnh hưởng
nghiêm trọng (cho) ở nồng độ cơ chất tương đối cao. Do đó, giai đoạn giảm tốc cho một qt nuôi
cấy như vậy sẽ tương đối dài
- Pha ổn định
Giai đoạn đứng yên trong nuôi cấy theo lô là điểm mà tốc độ tăng trưởng đã giảm xuống 0
(m0).
Tuy nhiên, pha tĩnh là một thuật ngữ sai về sinh lý học của sinh vật, vì quần thể vẫn hoạt động
trao đổi chất trong giai đoạn này và có thể tạo ra các sản phẩm gọi là chất chuyển hóa thứ cấp,
không được tạo ra trong giai đoạn theo cấp số nhân.
Giai đoạn này được gọi là giai đoạn dân số tối đa (N max, Xmax). Hoạt động trao đổi chất của giai
đoạn đứng yên đã được ghi nhận trong các mô tả sinh lý của sự phát triển của vi sinh vật
Sản phẩm liên kết tăng trưởng = chất chuyển hóa chính
Biểu thức động học đòi hỏi sản xuất liên quan đến tăng trưởng và liên quan đến bảo trì

mp: tốc độ tạo thành sản phẩm

rp: tỷ lệ thể tích hình thành sản phẩm (kg m-3 s-1)
rx: tỷ lệ thể tích của sự hình thành sinh khối (kg m-3 s-1)
Yp/x: hiệu suất lý thuyết của sản phẩm tính theo sinh khối (gram sp/gram sinh khối)
- Tăng trưởng liên kết
*Được sản xuất cùng lúc với sự phát triển của tế bào
Enzymstitutive (những loại thường có mặt)
+ glucose isomease
Trung gian chuyển hóa
+ pyruvate, citrate, acetate
- Không tăng trưởng liên kết
*Diễn ra trong giai đoạn đứng yên (m = 0)
Chất chuyển hóa thứ hai
+ kháng sinh
- Tăng trưởng liên kết hỗn hợp
*Diễn ra trong giai đoạn tăng trưởng và đứng yên
Sản phẩm phụ chuyển hóa
+ Lactat, ethanol
Chất chuyển hóa thứ hai

Tăng trưởng liên kết Tăng trưởng liên kết hỗn hợp Không tăng trưởng liên kết
 Tăng trưởng liên kết
rp: tỷ lệ thể tích hình thành sản phẩm (kg m-3 s-1)
rx: tỷ lệ thể tích của sự hình thành sinh khối (kg m-3 s-1)
Yp/x: hiệu suất lý thuyết của sản phẩm tính theo sinh khối (gram sp/gram sinh khối)

Sự hình thành sản phẩm có liên quan đến sản xuất sinh khối theo phương trình

mp: tốc độ tạo thành sản phẩm

rp: tỷ lệ thể tích hình thành sản phẩm (kg m-3 s-1)
rx: tỷ lệ thể tích của sự hình thành sinh khối (kg m-3 s-1)
Yp/x: hiệu suất lý thuyết của sản phẩm tính theo sinh khối (gram sp/gram sinh khối)
Cho thấy:
- Tốc độ cụ thể của sự hình thành sản phẩm (qp) tăng => Tốc độ tăng trưởng cụ thể (m) tăng
- Năng suất đạt giá trị tối đa tại mmax
- Năng suất tăng nếu tăng cả m và X

Y’p/x: hiệu suất tạo thành sản phẩm tính theo sinh khối (hiệu quả tạo thành sản phẩm của một
đơn vị sinh khối)
Sản phẩm không tăng trưởng liên kết = chất chuyển hóa thứ cấp
- Liên quan đến sinh khối
- Biomas tăng => Tăng năng suất
Lưu ý: sản phẩm thứ cấp sẽ được sản xuất ở trạng thái sinh lý xác định (bằng chất nền giới hạn
cụ thể)
Thông số năng lượng tăng trưởng của nuôi cấy mẻ
 Tế bào và chất chuyển hóa Sau khi tế bào và các chất Sau khi tế bào và sản xuất
được sản xuất nhiều hay ít chuyển hóa chính được tạo ra, chất nền tăng trưởng hơn nữa
đồng thời các tế bào chuyển đổi chất được chuyển đổi thành chất
chuyển hóa chính thành chất chuyển hóa thứ cấp
chuyển hóa thứ cấp (sp TĐC bậc 1 độc lập hoàn
(sp TĐC bậc 1 càng nhiều -> toàn với sp TĐC bậc 2)
sp TĐC bạc 2 càng nhiều) Sp phụ càng nhiều ->sp chính
càng giảm hiệu suất
Mối quan hệ của con đường TĐC cơ bản để tổng hợp các aa thơm và hình thành một loạt các
chất chuyển hóa thứ cấp có chứa vòng thơm. Lưu ý rằng đây là sơ đồ tổng hợp của các qt xảy ra
ở nhiều loại vsv, không có vsv nào tạo ra all các chất chuyển hóa thứ cấp này.
 Đậm: TĐC B1 Nhạt: TĐC B2
NUÔI CẤY LIÊN TỤC
Nếu môi trường được nuôi liên tục trong môi trường nuôi cấy như vậy với tốc độ phù hợp,
trạng thái ổn định sẽ đạt được một cách ngẫu nhiên, nghĩa là sự hình thành sinh khối mới bằng
cách nuôi cấy được cân bằng do mất tế bào từ bình nuôi cấy.
Tốc độ pha loãng là: D = F/V
F: tốc độ lưu lượng (dm3 h-1)
V: thể tích lên men (dm3 = 1L)
D: Tốc độ phs loãng (h-1)
Sự thay đổi mạng về nồng độ tế bào trong một khoảng thời gian có thể được biểu thị tại:

μ > D  dx/dt > 0 -> X tăng so với thời gian nuôi

μ < D  dx/dt < 0 -> X giảm so với thời gian nuôi
Trong điều kiện trạng thái ổn định, nồng độ tế bào không đổi, do đó dx / dt = 0 và:
 - Trong điều kiện ổn định, tốc độ tăng trưởng cụ thể được kiểm soát bởi tốc độ khử (biến
thực nghiệm)
- Tốc độ khử trùng có thể được sử dụng để kiểm soát tốc độ tăng trưởng của nuôi cấy
Sự tăng truwogr của các tb trong mt nuôi cấy liên tục thuộc loại này đươc kiểm soát bởi sự
sẵn có của tphh giới hạn tăng trưởng của mt và do đó, hệ thống được mô tả như 1 chất hh. Cơ
chế tạo ra hiêu ứng kiểm soát tốc độ pha loãng về cơ bản là mqh được biểu thị trong pt sau:
μ= μmax s/ (Ks + s)
Sau trạng thái ổn định μ = D, và từ đó:
Nồng độ trạng thái ổn định của chất nền trong hóa trị, và 1
Pt trên dự đoán rằng nồng độ cơ chất được xđ bởi tốc độ pha loãng. Trong thực tê, điều này
xảy ra bằng cách tăng trưởng của các tb làm suy giảm chất nền đến nồng độ hỗ trợ tốc độ tăng
trưởng bằng với tốc độ pha loãng
Nếu chất nền bị cạn kiệt dưới mức hỗ trợ tốc độ tăng trưởng được quyết định bởi tốc độ pha
loãng, thì chuỗi sự kiện sau đây sẽ diễn ra:
1. Tốc độ tăng trưởng của các tế bào sẽ nhỏ hơn tốc độ pha loãng (m <D) và chúng sẽ được rửa
sạch khỏi tàu với tốc độ lớn hơn so với chúng được tạo ra, dẫn đến giảm nồng độ sinh khối
2. Nồng độ cơ chất trong tàu sẽ tăng lên vì ít tế bào còn lại trong tàu tiêu thụ nó
3. Nồng độ cơ chất tăng trong tàu tăng trưởng với tốc độ lớn hơn nồng độ pha loãng sẽ tăng
4. Trạng thái ổn định, trạng thái mới, sẽ được thiết lập lại (m = D)
Do đó, 1 bp điều chỉnh hh là 1 hệ thống nuoi cấy tự cb giới hạn dd, có thể được duy trì ở
trạng thái ổn định tring 1 phạm vi rộng của tốc độ tăng trưởng cụ thể dưới mức tối đa
Nồng độ của các tb trong bộ hóa trị ở trạng thái ổn định được mô tả bằng pt:
2
Trong đó:
X là nồng độ tb ở trạng thái ổn định trong bộ hóa trị
S là nồng độ cơ chất ổn định trong chất hh và nồng độ cơ chất S R trong bể chứa tbinh (trong mt
nuôi dưỡng)
Kết hợp các phương trình 1 và 2 :
Do đó, nồng độ sinh khối ở trạng thái ổn định được xđ bởi các biến hoạt động, S R vad D.
Nếu SR tăng, x sẽ tăng nhưng s, nồng độ cơ chất còn lại, sẽ giữ nguyên. Nếu D tăng, μ sẽ tăng
( μ = D) và phần còn lại ở trạng thái ổn định mới sẽ tăng lên để hỗ trợ tốc độ tăng trưởng cao, do
đó, ít chất nền sẽ có sẵn để đượcchuyển thành sinh khối, dẫn đến giá trị trạng thái ổn định thấp
hơn