Artikel Ilmiah Sidang Sarjana 2021

ISOLASI DAN UJI AKTIVITAS ANTIKOLESTEROL SENYAWA

METABOLIT SEKUNDER DARI FRAKSI n-HEKSANA DAUN SUNGKAI
(Peronema canescens Jack)
Nadya Anastasia Prescilla Pakpahan
08031281722061
Jurusan Kimia FMIPA Universitas Sriwijaya
E-mail : nadyaanastasia35381@gmail.com
ABSTRACT: Sungkai (Peronema canescens Jack) belongs to the Lamiaceae family that mostly
can be found in tropical rainforests. The leaves of P. canescens have been used traditionally to
treat high blood pressure diseases. Scientific information regarding the content of chemical
compounds in P. canescens is very limited. The aims of this research to isolated secondary
metabolite compounds from the n-hexane extract P.canescens leaves and their anti-cholesterol
activity test. Isolation begun with the extraction of 1000 g P. canescens by maceration method
using n-hexane solvent. The separation and purification of compounds were carried out using
chromatography methods. Identification of the isolated compound structure by using FTIR and
NMR spectroscopy (1H-NMR, 13C-NMR, and DEPT 135) and compared with the literature data.
The anti-cholesterol activity was determined using the photometric method by Liebermann-
Burchard reaction. The isolated compound was obtained as a white crystals (11.82 mg). Base on
spectroscopies data analysis the isolated compound was a triterpenoid group, namely betulinic
acid. The isolated compound showed IC50 values of 60.64 µg/mL, while the standard
anticholesterol compound, simvastatin had an IC50 of 23.15 µg/mL. The betulinic acid is reported
here for the first time and identified its anticholesterol activity.

Keywords : Sungkai, P.canescens, betulinic acid, anti-cholesterol, Liebermann-Burchard

ABSTRAK: Sungkai (Peronema canescens Jack) merupakan tumbuhan dari famili lamiaceae
yang banyak ditemukan di hutan hujan tropis. Daun P. canescens telah digunakan masyarakat
secara tradisional untuk penyakit darah tinggi. Informasi ilmiah mengenai kandungan senyawa
kimia dari P. canescens masih sangat terbatas. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi senyawa
metabolit sekunder dari ekstrak n-heksana daun P.canescens dan menentukan aktivitas
antikolesterolnya. Isolasi diawali dengan ekstraksi 1000 g daun P. canescens dengan metode
maserasi menggunakan pelarut n-heksana. Pemisahan dan pemurnian senyawa dilakukan
menggunakan metode kromatografi. Identifikasi struktur senyawa hasil isolasi menggunakan
spektroskopi FTIR dan NMR (1H-NMR, 13C-NMR dan DEPT 135) dan dibandingkan dengan
literatur. Pengujian aktivitas antikolesterol dilakukan menggunakan metode fotometri dengan
reaksi Liebermann-Burchard. Senyawa hasil isolasi yang diperoleh berupa kristal putih sebanyak
11,82 mg. Berdasarkan analisa data spektroskopi senyawa hasil isolasi adalah golongan
triterpenoid yaitu asam betulinat. Senyawa hasil isolasi menunjukkan aktivitas antikolesterol
dengan nilai IC50 60,64 µg/mL, sedangkan standar antikolesterol simvastatin memberikan nilai
IC50 of 23,15 µg/mL. Senyawa asam betulinat untuk pertama kalinya dilaporkan dari daun P.
canesnens dan bersifat antikolesterol.

Kata kunci : Sungkai, P.canescens, asam betulinat, antikolesterol, Liebermann-Burchard

Jurusan Kimia FMIPA UNSRI Halaman 1


PENDAHULUAN
Indonesia merupakan negara tropis
dengan keanekaragaman hayati yang tinggi
sehingga menjadi salah satu sumber potensial
untuk mendapatkan senyawa bioaktif baru.
Hasil survei menunjukkan bahwa banyak
tumbuhan yang telah digunakan oleh
masyarakat untuk pengobatan berbagai
penyakit belum ditunjang dengan informasi
ilmiah yang memadai (Oyebode et al. 2016).
Salah satu tumbuhan obat tradisional
adalah tumbuhan sungkai (Paronema
canescens Jack). Tumbuhan sungkai banyak
ditemukan di Indonesia yaitu di pulau
Sumatera, Kalimantan, sebagian Jawa dan
Sulawesi. Berdasarkan studi pustaka,
masyarakat Indonesia menggunakan air
rebusan daun sungkai sebagai obat demam,
malaria, sakit gigi, dan kurap (Thomas, 1993;
Kusriani dkk, 2015), sedangkan air rebusan
kulit batang sungkai digunakan sebagai obat
cacar (Yani and Putranto, 2014). Di daerah
Sumatera Selatan khususnya penduduk etnis
Musi di Musi Banyuasin menggunakan
tumbuhan ini untuk pengobatan hipertensi
(Muharni dkk, 2016).
Kandungan kimia dan aktivitas biologis
yang terkandung pada daun P. canencens
telah dilaporkan. Ekstrak metanol daun P.
canencens mengandung senyawa akteosida
dan flavonoid glikosida (Simanjuntak, 1996).
Dalam penelitian lain dilaporkan bahwa
ekstrak metanol daun P. canencens memiliki
aktivitas antibakteri terhadap bakteri S.
mutans, S. thyposa, B. subtilis, dan S.aureus.
Ekstrak aseton daun P. canencens
mengandung senyawa β-sitosterol, phytol, β-
amyrin dan tujuh senyawa diterpenoid tipe
klerodan yaitu peronemin B2, A2, B3, A3, Bl,
Cl dan Dl. Senyawa peronemin A3 dan C1
memiliki aktivitas antiplasmodium (Kitagawa
et al. 1994).
Berdasarkan uji fitokimia yang
dilakukan Sitepu (2020) dilaporkan bahwa
ekstrak metanol daun P. canescens
mengandung golongan senyawa alkaloid,
flavonoid, glikosida, terpenoid, steroid, dan
fenolat. Menurut Eddouks et al (2007) steroid,
triterpenoid dan fenolat memiliki efek
Jurusan Kimia FMIPA UNSRI
Artikel Ilmiah Sidang Sarjana 2021
antikarsinogenik dan menurunkan kadar
kolesterol. Berdasarkan hal tersebut
diharapkan daun P. canescens memiliki
aktivitas antikolesterol.
METODOLOGI PENELITIAN
Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan selama
penelitian yaitu seperangkat alat destilasi
(Samheung Energy SH-WB-6GDN), neraca
analitik Ohaus, rotary evaporator
DRAGONLAB RE100-pro, spektrofotometer
UV-Visible (Shimadzu), FTIR (Thermo
Scientific Nicolet iS 10), NMR (JEOL JNM-
ECZ500R), lampu UV (UvOC-02), chamber,
kromatografi cair vakum, kromatografi kolom
gravitasi, dan oven.
Bahan yang digunakan antara lain daun
tumbuhan sungkai (Peronema canescens), n-
heksana teknis, etil asetat teknis, metanol
teknis, akuades, aseton (Merck), kloroform
(Merck), asam sulfat (Merck), anhidrida
asetat (Merck), standar kolesterol,
simvastatin, serium sulfat 2 N, iodium, plat
KLT Merck G60 F254, silika gel 60 G, dan
silika gel G60 (70-230 mesh). Semua pelarut
teknis didestilasi terlebih dahulu sebelum
digunakan.
Prosedur Kerja
Determinasi Tumbuhan
Determinasi tumbuhan dilakukan di
Herbarium Bogoriense Pusat Penelitian
Biologi LIPI, Cibinong.
Preparasi Sampel
Daun tumbuhan sungkai (Peronema
canescens) diambil di desa Mulak, Musi
Banyuasin, Sumatera Selatan. Daun sungkai
segar dibersihkan dari pengotor dan dipotong-
potong dengan ukuran ± 1×0,5 cm.
Ekstraksi dengan Metode Maserasi
Daun segar yang telah dipotong-potong
kecil sebanyak 1 kg dimasukkan ke dalam
botol. Sampel dimaserasi menggunakan
pelarut n-heksana selama 48 jam dan diulangi
Halaman 2

sebanyak tiga kali. Sampel yang telah
dimaserasi kemudian disaring menggunakan
kertas saring sehingga didapatkan filtrat.
Filtrat tersebut kemudian dipekatkan
menggunakan rotary evaporator sehingga
didapatkan ekstrak kental n-heksana. Ekstrak
kering hasil tiga kali maserasi kemudian di
hitung persen rendemen dengan persamaan:
berat ekstrak
% Rendemen = × 100%
berat sampel
Pemisahan dan Pemurnian Menggunakan
Kromatografi Cair Vakum
Ekstrak n-heksana (15 g) dipisahkan
menggunakan kromatografi cair vakum
menggunakan fasa diam silika gel 60. Sampel
disiapkan dengan cara preadsorbsi
menggunakan silika gel G60 (70-230 mesh)
dengan perbandingan 1:1 hingga membentuk
serbuk, kemudian dimasukkan ke dalam
kolom dan dielusi menggunakan eluen dengan
kepolaran meningkat yaitu campuran n-
heksana dan etil asetat (10:1; 9:1; 8:2; 5:5; 4:6
dan 0:1) (Emrizal dkk, 2012). Eluat
ditampung dengan botol ukuran 500 mL,
kemudian dipekatkan menggunakan rotary
evaporator. Hasil pemekatan masing-masing
botol selanjutnya dianalisa menggunakan
KLT G60 F254 yang diamati menggunakan
lampu UV λ 254 nm. Eluat yang memiliki
pola noda yang sama digabung menjadi satu
fraksi. Fraksi yang menunjukkan pola noda
yang sederhana dan pemisahan yang baik
dipilih untuk pemurnian lebih lanjut.
Pemisahan dan Pemurnian Menggunakan
Kromatografi Kolom Gravitasi
Fraksi terpilih (FC) dimurnikan lebih
lanjut menggunakan kromatografi kolom
gravitasi. Sampel dipreadsorbsi terlebih
dahulu menggunakan silika gel G60 (70-230
mesh) dengan perbandingan 1:1. Fasa diam
menggunakan silika gel G60 (70-230 mesh).
Pengelusian dilakukan menggunakan pelarut
dengan kepolaran meningkat (campuran n-
heksana dan etil asetat 10:1; 9:1; 8:2; 5:5; 4:6
dan 0:1). Hasil elusi ditampung ke dalam
botol vial dengan volume ± 10 mL dan
selanjutnya dianalisa menggunakan
Jurusan Kimia FMIPA UNSRI
Artikel Ilmiah Sidang Sarjana 2021
kromatografi lapis tipis G60 F254 dengan eluen
yang sesuai (Pasaribu dkk, 2014). Penampak
noda diamati menggunakan cahaya UV pada
panjang gelombang 254 nm. Hasil KLT eluat
dengan pola kromatogram yang sama akan
digabungkan menjadi satu fraksi. Fraksi
terpilih (FC4) menunjukkan terbentuknya
kristal dan setelah dimurnikan didapatkan
senyawa murni berupa kristal putih (11,82
mg).
Uji Kemurnian
Uji kemurnian kristal senyawa hasil
isolasi dilakukan dengan kromatografi lapis
tipis menggunakan beberapa perbandingan
eluen yaitu n-heksana : etil asetat (8:2 dan 5:5)
serta etil asetat : metanol (9:1) . Setelah dielusi
sampel dideteksi menggunakan lampu
ultraviolet λ 254 nm dan pereaksi penampak
noda cerium sulfat lalu dipanaskan hingga
menimbulkan bercak noda. Bercak noda
tunggal pada berbagai eluen menunjukkan
bahwa senyawa hasil isolasi telah murni
(Pasaribu dkk, 2014).
Identifikasi Senyawa Isolat
Identifikasi senyawa isolat dilakukan
berdasarkan analisa data spektroskopi FTIR
dan NMR 1D (1H-NMR, C –NMR, DEPT)
serta membandingkannya dengan data
senyawa yang sudah dilaporkan pada literatur.
Penentuan Aktivitas Antikolesterol
Ekstrak n-Heksana, Senyawa Isolat
Penentuan aktivitas antikolesterol
dilakukan menggunakan metode fotometri
dengan pereaksi Lieberman-Buchard (Musa et
al. 2019). Ekstrak n-heksana dibuat variasi
konsentrasi uji 50, 100, 200, 300, 400 dan 500
µg/mL. Variasi konsentrasi uji senyawa isolat
yang digunakan yaitu 10; 20; 30; 40; 50; 75
dan 100 µg/mL. Simvastatin sebagai kontrol
positif dengan variasi konsentrasi uji 10; 20;
30; 40 dan 50 µg/mL. Masing-masing
konsetrasi uji diambil 2,5 mL, ditambahkan
2,5 mL larutan kolesterol 100 µg/mL.
Selanjutnya ditambahkan 2 mL anhidrida
asetat dan 0,1 mL asam sulfat pekat. Larutan
didiamkan selama 15 menit di tempat yang
Halaman 3

terhindar dari cahaya. Sebagai blanko adalah
2,5 mL larutan kolesterol 100 µg/mL.
Pengukuran absorbansi larutan uji
menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada
panjang gelombang 420 nm, kemudian dibuat
regresi linear antara absorbansi dengan
konsentrasi (Musa et al. 2019).
Penentuan Nilai IC50 (Inhibitor
Concentration 50%)
Nilai absorbansi larutan baku kolesterol
dan absorbansi sampel yang diperoleh dari
pengukuran menggunakan spektrofotometer
UV-Vis digunakan untuk menghitung %
inhibisi kolesterol dengan rumus:
A-B
Inhibisi (%) = A x 100%
Keterangan:
A : Absorbansi blanko
B : Absorbansi sampel
Pengukuran nilai IC50 dilakukan
menggunakan regresi linear hubungan antara
nilai persen inhibisi (y) dengan variasi
konsentrasi (x) sehingga didapatkan
persamaan:
y = ax + b
(Anggraini dan Nabillah, 2018).
HASIL DAN PEMBAHASAN
Ekstraksi Daun Sungkai
Ekstraksi daun P. canescens segar (1
kg) dipekatkan menggunakan rotary
evaporator hingga didapatkan ekstrak pekat
n-heksana (15,97 g) dengan nilai persen
rendemen sebesar 1,597%. Ekstrak n-heksana
(15 g) dipisahkan menggunakan kromatografi
kolom cair vakum (KCV) dengan eluen n-
heksana (1 L), campuran n-heksana dan etil
asetat 9:1 (1,5 L), 8:2 (2,5 L), 5:5 (500 mL),
4:6 (250 mL) dan etil asetat (500 mL). Eluat
hasil kolom kromatografi vakum ditampung
dalam botol 500 mL, kemudian dianalisis
menggunakan kromatografi lapis tipis (KLT)
menggunakan eluen n-heksana dan etil asetat
(8:2). Eluat dengan pola noda yang sama
digabung menjadi satu fraksi, selanjutnya
dievaporasi menggunakan rotary evaporator
Jurusan Kimia FMIPA UNSRI
Artikel Ilmiah Sidang Sarjana 2021
dan didapatkan 5 fraksi yaitu fraksi FA (2,36
g), FB (2,94 g), FC (4.75 g), FD (0,83 g), dan
FE (1,78 g).
Berdasarkan pola KLT yang
ditunjukkan pada Gambar 1 diketahui bahwa
pada semua fraksi didapatkan noda yang
cendrung tidak terpisah dengan baik seperti
pada fraksi FC didapatkan pola noda yang
lebih nonpolar daripada fraksi FB, hal ini
dapat disebabkan oleh perbedaan ketebalan
dalam penotolan sampel pada plat klt. Pada
fraksi FC menunjukkan terbentuknya padatan
putih, oleh karena itu fraksi FC dipilih untuk
dipisahkan lebih lanjut.
H : E (8:2) H : E (8:2)
FA FB FC FD FE FA FB FC FD FE
(a) (b)
Gambar 1. Pola KLT hasil KCV fraksi n-
heksana menggunakan eluen n-
heksana dan etil asetat (8:2) (a)
dibawah lampu UV λ 254 nm, (b)
dengan penampak noda uap
iodium
Fraksi FC (4 g) dipisahkan lebih lanjut
menggunakan kromatografi kolom gravitasi
(KKG) dengan eluen campuran n-heksana dan
etil asetat dengan kepolaran meningkat (0:1;
9:1; 8:2; 5:5; 4:6 dan 0:1). Pada proses
pemisahan ini menghasilkan 65 vial. Eluat
tersebut selanjutnya dianalisis menggunakan
KLT dengan eluen n-heksana dan etil asetat
(8:2) (Gambar 2). Eluat dengan pola noda
yang sama digabung menjadi satu fraksi dan
didapatkan 4 fraksi yaitu FC1 (0,61 g), FC2
(0,83 g), FC3 (0,46 g) dan FC4 (1,44 g).
Halaman 4

FC1
FC2
FC3
FC4
FC1 FC2 FC3
(a) (b)
Gambar 2. Pola KLT hasil pemisahan fraksi
FC dengan eluen n-heksana: etil
asetat 8:2, dengan penampak
noda lampu UV λ 254 nm (a), dan
pola penggabungan fraksi di
bawah sinar UV λ 254 nm (b).
Fraksi FC4 menunjukkan terbentuk
kristal, selanjutnya kristal tersebut dipisahkan
dari pelarut dan pengotornya. Kemudian
kristal yang didapatkan dicuci menggunakan
etil asetat sehingga didapatkan kristal putih
(11,82 mg).
Uji Kemurnian Senyawa Isolat
Uji kemurnian senyawa hasil isolasi
dilakukan menggunakan analisa kromatografi
lapis tipis yang menggunakan tiga jenis eluen
yang memiliki kepolaran meningkat. Eluen
yang digunakan berupa n-heksana : etil asetat
(8:2) (A), n-heksana : etil asetat (5:5) (B) serta
etil asetat : metanol (9:1) (C). Pola
kromatogram A, B dan C yang ditunjukkan
pada Gambar 3 memiliki pola noda tunggal
dengan nilai Rf berturut-turut 0,2; 0,7 dan
0,82, sehingga senyawa hasil isolasi tersebut
dapat dinyatakan senyawa murni.
H:E E:M
8:2
H:E
5:5 9:1
A B C
Gambar 3. Uji kemurnian senyawa isolat
dengan eluen n-heksana : etil
asetat (8:2) (A), n-heksana : etil
asetat (5:5) (B) serta etil asetat :
Jurusan Kimia FMIPA UNSRI
Artikel Ilmiah Sidang Sarjana 2021
metanol (9:1) (C) dengan
penampak noda serium sulfat.
Identifikasi Senyawa Hasil Isolasi
Identifikasi senyawa isolat dilakukan
berdasarkan analisa data spektroskopi FTIR
dan NMR 1D (1H-NMR, C –NMR, DEPT).
Spektrum IR menunjukkan adanya pita
vibrasi pada bilangan gelombang 2966 cm-1
dan 2877 cm-1 yang menunjukkan adanya
vibrasi untuk C-H stretching alifatik asimetrik
dan simetrik. Serapan pada 1747 cm-1
merupakan serapan untuk gugus karbonil
(C=O) dan pada daerah serapan pada1156 cm-
1
untuk C-O. Pita serapan pada bilangan
gelombang 1658 cm-1 menunjukkan adanya
vibrasi ulur gugus fungsi alkena (C=C), 1419
cm-1 untuk C-H bending dalam bentuk siklik
(CH2)n, dan 1364 cm-1 gugus geminal dimetil.
Gugus C-H stretching alifatik asimetrik dan
simetrik serta geminal dimetil merupakan
karakteristik dari suatu senyawa triterpenoid.
Identifikasi senyawa isolat
menggunakan 1H-NMR 500 MHz dengan
pelarut deuterated methanol (CD3OD).
Analisis spektrum 1H-NMR pada Gambar 4
menunjukkan adanya sinyal yang menumpuk
di bawah daerah 2 ppm dengan integrasi 1 H
atau 2 H dengan multiplisitas multiplet
merupakan sinyal karakteristik untuk proton
CH dan CH2 sikloalifatik pada triterpenoid.
Pada Gambar 4 ditemukan adanya 6 puncak
singlet dengan intensitas kuat dan integrasi 3
proton pada daerah pergeseran kimia δH 0,75
ppm (3H, s), 0,85 ppm (3H, s), 0,96 ppm (3H,
s), 0,97 ppm (3H, s), 1,06 ppm (3H, s) dan
1,70 ppm (3H, s) yang menunjukkan adanya
sinyal untuk proton metil. Umumnya senyawa
triterpenoid memiliki 8 gugus metil, sehingga
diduga 2 gugus metil yang lain telah berubah.
Pada daerah pergeseran kimia δH 4,59
ppm (1H, d, J = 2 Hz) dan 4,71 ppm (1H, d, J
= 2,5 Hz) ditemukan puncak dengan intensitas
doublet yang memiliki nilai konstanta kopling
2 Hz dan 2,5 Hz yang menunjukkan adanya
sinyal untuk proton vinilik pada posisi
geminal. Adanya puncak pada daerah
pergeseran kimia δH 3,11 ppm (1H, dd)
diduga merupakan puncak untuk proton pada
Halaman 5

C sp3 atau H yang terikat dengan C yang
mengikat gugus elektronegatif (C-O). Pada
daerah pergeseran kimia 4,62 ppm (2H, s)
Gambar 4. Spektrum total 1H-NMR δH 0-14 ppm
Analisis spektrum 13C-NMR (125 Hz)
senyawa isolat pada Gambar 5 menunjukkan
jumlah dan jenis karbon pada senyawa isolat.
Setelah dilakukan pelebaran spektrum
didapatkan adanya 30 puncak karbon, yang
merujuk pada rangka dari triterpenoid. Pada
pergeseran kimia di atas 100 ppm terdapat 3
sinyal untuk C sp2. Selain itu juga terdapat
sinyal pada pergeseran kimia 79,7 ppm yang
merupakan sinyal untuk C sp3 yang terikat
dengan gugus elektronegatif (C-O). Sinyal
pada δC 180,1 ppm menunjukkan sinyal atom
Jurusan Kimia FMIPA UNSRI
Artikel Ilmiah Sidang Sarjana 2021
menunjukkan adanya sinyal untuk proton
yang berasal dari objek pengotor pada pelarut
metanol (Fulmer et al. 2010).
C yang khas untuk gugus karboksilat, dan
sinyal pada daerah δC 152 ppm dan 110 ppm
merupakan sinyal untuk C=C vinilik. Sinyal
pada daerah δC 79,7 ppm merupakan sinyal
karbon yang mengikat O yang khas untuk
senyawa triterpenoid yang mengikat O pada
posisi C-3 menunjukkan adanya karbon
alkohol. Selain itu daerah serapan dibawah δC
60 ppm menunjukkan adanya sinyal untuk
metil (CH3), metilen (CH2), metin (CH) dan
karbon kuarterner (C) pada sikloalifatik pada
triterpenoid.
Halaman 6

C=C
C=O
Karboksilat
Gambar 5. Spektrum 13C-NMR senyawa isolat pada daerah δC 0-220 ppm
Identifikasi senyawa hasil isolasi
menggunakan Distortionless Enhancement by
Polarization Transfer (DEPT) 135o berguna
untuk menentukan jenis sinyal karbon seperti
C primer (CH3), sekunder (CH2), tersier (CH),
atau C kuartener. Pada spektrum DEPT 135o
akan muncul puncak ke arah atas untuk C
primer (CH3) dan C tersier (CH), puncak ke
arah bawah untuk C sekunder (CH2), dan
sinyal pada spektrum C-NMR yang tidak
muncul pada spektrum DEPT 135o
merupakan sinyal untuk jenis karbon
kuartener. Analisa spektrum DEPT 135o.
berdasarkan analisis spektrum 13C-NMR dan
DEPT 135o dapat disimpulkan bahwa terdapat
6 sinyal metil (CH3)pada daerah pergeseran
kimia δC 15,1 ppm; 16,2 ppm; 16,7 ppm; 16,8
ppm; 19,6 ppm; dan 28,7 ppm. 11 sinyal
karbon metilen (CH2) pada daerah δC 19,5
ppm; 22,1 ppm; 26,9 ppm; 28,1 ppm; 30,9
ppm; 31,7 ppm; 33,4 ppm; 35,6 ppm; 38,2
ppm; 40,1 ppm dan 110,2 ppm. Terdapat 6
sinyal karbon metin (CH) pada daerah δC 39,7
ppm; 48,6 ppm; 50,5 ppm; 52,0 ppm; 56.9
ppm dan 79,7 ppm, serta 7 puncak untuk C
kuarterner yang didapatkan pada daerah δC
38,4; 40,0; 42,0; 43,6; 57,5; 152,0 dan 180,7
ppm.
Jurusan Kimia FMIPA UNSRI
Artikel Ilmiah Sidang Sarjana 2021
C-OH
Berdasarkan data-data dari analisis
spektrum yang didapatkan, kemudian
dilakukan pembandingan pada literatur-
literatur yang telah ada. Dari hasil studi
literatur yang dilakukan, diusulkan bahwa
senyawa hasil isolasi yang didapatkan berupa
asam betulinat. Data spektrum H-NMR dan
C-NMR senyawa isolat yang didapatkan akan
dibandingkan dengan senyawa asam betulinat
dari penelitian yang telah dilakukan
sebelumnya oleh Hong et al (2015).
Dilihat dari data perbandingan pada
Tabel 1, pergeseran kimia antara senyawa
isolat dan senyawa asam betulinat
menunjukkan nilai yang hampir sama.
Adapun perbedaan pada pergeseran kimia
disebabkan karena perbedaan penggunaan
pelarut untuk analisis NMR, yang mana pada
analisis senyawa isolat menggunakan pelarut
CD3OD sedangkan analisis senyawa asam
betulinat yang dilaporkan oleh Hong et al
(2015) menggunakan pelarut C5D5N. Selain
itu faktor perbedaan kekuatan alat NMR juga
dapat mempengaruhi nilai pergeseran kimia,
dimana kekuatan alat H-NMR yang
digunakan yaitu 500 MHz dan C-NMR 125
MHz, sedangkan yang digunakan Hong et al
(2015) untuk H-NMR yaitu 400 MHz dan C-
NMR 100 MHz.
Halaman 7
 Artikel Ilmiah Sidang Sarjana 2021

Tabel 1. Data perbandingan pergeseran kimia H-NMR dan C-NMR senyawa isolat dengan
literatur
senyawa isolat Hong et al (2015)
Posisi δC δH δH Jenis Karbon
δC (ppm)
(ppm) (∑H, mult, J) (∑H, mult, J)
1,66 (2H, dt, J=3,0; 13,0
1 40,1 39,5 CH2
Hz)
2 28,1 28,3 1,87 (1H, m) CH2
3 79,7 3,11 (1H, dd, J = 5 Hz) 72,3 3,46 (1H, t, J =7,8 Hz) CH
4 40,0 39,3 C
5 56,9 55,9 0,82 (1H, m) CH
2,63 (1H, dt, J=3,0; 12,7,
6 19,5 18,8 CH2
Hz), 1,41 (1H, m)
7 35,6 34,8 1,42 (1H, m), 1,40 (1H, m) CH2
8 42,0 41,1 C
9 52,0 51,0 1,39 (1H, m) CH
10 38,4 37,5 C
11 22,1 21,2 2,68 (1H, m) CH2
12 26,9 26,1 CH2
13 39,7 38,6 2,74(1H, td-like) CH
14 43,6 42,9 C
15 31,7 30,3 1,90 (1H, m), 1,28 (1H, m) CH2
2,63 (1H, dt, J = 3,0, 12,7
16 33,4 32,9 CH2
Hz), 1,56 (2H, m)
17 57,5 56,6 C
18 48,6 49,8 1,76 (1H, t, J=11,4 Hz) CH
19 50,5 47,5 CH
20 152,0 151,3 C
21 30,9 31,2 2,24 (1H, m), 1,52 (1H, m) CH2
22 38,2 37,6 2,26 (1H, m), 1,59 (1H, m) CH2
23 28,7 1,06 (3H, s) 28,7 1,23 (3H, s) CH3
24 16,2 0,95 (3H, s) 16,4 1,06 (3H, s) CH3
25 16,7 0,75 (3H, s) 16,4 0,83 (3H, s) CH3
26 16,8 0,85 (3H, s) 16,3 1,01 (3H, s) CH3
27 15,1 0,96 (3H, s) 14,9 1,07 (3H, s) CH3
28 180,1 178,9 C
4,71 (1H, d, J=2,5 Hz),
29 110,2 109,9 4,95 (1H, s), 4,77 (1H, s) CH2
4,59 (1H, d, J=2 Hz)
30 19,6 1,70 (3H, s) 19,5 1,79 (3H, s) CH3

Senyawa asam betulinat (Gambar 6) Physocarpus intermedium dan Ilex

untuk pertama kalinya dilaporkan dari daun
tumbuhan Peronema canescens. Asam
betulinat merupakan triterpenoid pentasiklik
jenis lupan yang banyak tersebar pada
tumbuhan tinggi (Zhao et al., 2013). Asam
betulinat telah dilaporkan ditemukan pada
ekstrak n-heksana tumbuhan Feretia
canthioides, Tecomella undulata, Quisqualis
fructus dan Orthosiphon stamineus (Egbubine
et al., 2020). Asam betulinat juga dilaporkan
ditemukan dari ekstrak etanol beberapa
spesies seperti Ekstrak metanol tumbuhan
Dillenia indica, Vitex negundo, Combretum
quadrangulare, Eucalyptus camaldulensis,
macropoda serta ekstrak etanol dari tumbuhan
Tovomita krukovii, Ancistrocladus
heyneanus, Anemone raddeana, Doliocarpus
schottianus, dan Syzrgium claviforum
(Yogeeswari and Sriram. 2005; Zhou et al.,
2016; Kumar et al., 2010). Asam betulinat
dilaporkan memiliki aktivitas sebagai
antiinflamasi, antialergi, antituberkolosis,
antiviral, antikanker, anti-HIV serta
antikolesterol (Sami et al., 2006; Soica et al.,
2012; Rastogi et al., 2016; Kumar et al., 2010;
Fujioka et al., 1994)

Jurusan Kimia FMIPA UNSRI Halaman 8

 Artikel Ilmiah Sidang Sarjana 2021

antikolesterol dilakukan menggunakan

Gambar 6. Struktur senyawa hasil isolasi
Uji Aktivitas Antikolesterol
Uji aktivitas antikolesterol dilakukan
terhadap ekstrak n-heksana dan senyawa hasil
isolasi yang dibandingkan dengan simvastatin
sebagai kontrol positif. Pengukuran aktivitas
metode Liebermann-Bunchard yang
didasarkan pada pengukuran nilai absorbansi.
Pengukuran absorbansi dilakukan pada
panjang gelombang 420 nm dengan berbagai
variasi konsentrasi.
Kolesterol akan membentuk ikatan
hidrogen dengan sampel. Kolesterol sisa yang
tidak berikatan hidrogen dengan sampel akan
bereaksi dengan pereaksi Liebermann-
Bunchard membentuk senyawa asam
kolestaheksana sulfonat yang berwarna hijau
(Li et al. 2018). Berdasarkan nilai absorbansi
yang didapatkan, kemudian dicari persen
inhibisi dan nilai IC50. Aktivitas antikolesterol
dinyatakan menggunakan nilai IC50 yang
mana nilai ini menunjukkan besarnya nilai
hambat sebesar 50% (Sadino et al. 2016).

Tabel 2. Nilai persen inhibisi dan IC50 ekstrak n-heksana

Absorbansi
Konsentrasi Absorbansi rata-rata %I IC50 (µg/mL)
I II III
500 0,546 0,544 0,543 0,544 33,12
400 0,597 0,579 0,572 0,583 28,41
300 0,588 0,589 0,588 0,588 27,72
200 0,619 0,620 0,620 0,620 23,87 1115,37
100 0,626 0,638 0,639 0,634 22,07
50 0,656 0,659 0,658 0,658 19,20
Blanko 0,812 0,815 0,815 0,814

Tabel 3. Nilai persen inhibisi dan IC50 senyawa isolat

Absorbansi
Konsentrasi Absorbansi rata-rata %I IC50 (µg/mL)
I II III
100 0,217 0,275 0,218 0,237 71,892
75 0,303 0,309 0,318 0,310 63,183
50 0,419 0,405 0,417 0,414 50,871
40 0,499 0,468 0,518 0,495 41,211
60,64
30 0,603 0,568 0,599 0,590 29,929
20 0,764 0,707 0,749 0,740 12,114
10 0,778 0,79 0,761 0,776 7,799
blanko 0,827 0,848 0,851 0,842

Jurusan Kimia FMIPA UNSRI Halaman 9

 Artikel Ilmiah Sidang Sarjana 2021

Tabel 4. Nilai persen inhibisi dan IC50 simvastatin

Absorbansi IC50
Konsentrasi Absorbansi rata-rata %I
I II III (µg/mL)
50 0,378 0,363 0,338 0,360 59,05
40 0,402 0,401 0,400 0,401 54,34
30 0,426 0,428 0,430 0,428 51,27
23,15
20 0,456 0,455 0,454 0,455 48,19
10 0,462 0,463 0,464 0,463 47,28
Blanko 0,869 0,879 0,887 0,8783

Berdasarkan data pada Tabel 2, 3 dan 4
dinyatakan bahwa nilai IC50 untuk senyawa
hasil isolasi memiliki nilai IC50 sebesar 60,64
µg/mL sedangkan nilai IC50 untuk simvastatin
sebesar 23,15 µg/mL. Senyawa hasil isolasi
memiliki aktivitas antikolesterol yang cukup
kuat, namun aktivitasnya lebih kecil
dibandingkan dengan simvastatin. Hal ini
dikarenakan nilai IC50 senyawa isolat lebih
besar dibandingkan dengan simvastatin.
Aktivitas antikolesterol senyawa isolat hampir
3 kali lebih rendah dibandingkan dengan
simvastatin. Nilai IC50 ekstrak heksana
sebesar 1115,37 µg/mL yang mana lebih besar
dibandingkan dengan IC50 senyawa isolat dan
simvastatin sehingga aktivitas antikolesterol
sangat kecil dibandingkan dengan senyawa
isolat dan simvastatin.
KESIMPULAN
Senyawa triterpenoid asam betulinat
atau asam 3β-hidroksilup-20(29)-en-28-oat
telah berhasil diisolasi dari ekstrak n-heksana
P. canescens, serta menunjukkan aktivitas
antikolesterol yang cukup kuat dengan nilai
IC50 60,64 µg/mL.
DAFTAR PUSTAKA
Anggraini, D. I & Nabillah, L. F. (2018).
Activity test of suji leaf extract
(Dracaena angustifolia Roxb.) on in
vitro cholesterol lowering. Jurnal Kimia
Sains dan Aplikasi. 21(2), 54-58.
Eddouks, M., Ajebli, M & Hebi, M. (2017).
Ethnopharmacological survey of
medicinal plants used in Daraa Tafialet
region (province of Errachidia)
Morocco. Journal of
Ethnopharmacology. 198, 16-530.
Egbubine, C. O., Adeyemi, M. M & Habila, J.
D. (2020). Isolation and
characterization of betulinic acid from
the stem bark of Feretia canthioides
Hiern and its antimalarial potential.
Bulletin of the National Research
Centre. 44(49), 1-7.
Emrizal dkk. 2012. Isolasi senyawa dan uji
aktivitas anti-inflammasi ekstrak
metanol daun puwar kincung (Nicolaia
speciosa Horan). Jurnal Penelitian
Farmasi Indonesia. 1(1), 1-5.
Fujioka, T & Kashiwada, Y. (1994). Anti-
AIDS agents, 11. betulinic acid and
platanic acid as anti-HIV principles
from Syzigium claviflorum, and the anti-
HIV activity of structurally related
triterpenoids. Journal of Natural
Products. 57(2), 243–247.
Fulmer, G. R et al. 2010. NMR chemical
shifts of trace impurities: common
laboratory solvent, organics, and gases
in deuterated solvent relevant to the
organometallic chemist.
Organometallics. 29, 2176-2179.
Hong, E. H., et al. (2015). Anti-influenza
activity of betulinic acid from Zizyphus
jujuba on Influenza A/PR/8 Virus.
Biomolecules & Therapeutics. 23(4),
345-349.

Jurusan Kimia FMIPA UNSRI Halaman 10


Kitagawa, I., et al. (1994). Indonesian
medicinal plants. VII seven new
clerodane-type diterpenoids,
peronemins A2, A3, B1, B2, B3, C1 and
D1 from the leaves of Peronema
canescens (Vebenaceae). Journal of
Chemistry and Pharmautical Bulletin.
42(5), 1050-1055.
Kumar, D. et al. (2010). Phytomedicine Anti-
leukemic activity of Dillenia indica L .
fruit extract and quantification of
betulinic acid by HPLC. Phytomedicine.
17(6), 431–435.
Kusriani, R. H., Nawawi, A & Turahman, T.
(2015). Uji aktivitas antibakteri ekstrak
dan fraksi kulit batang dan daun sungkai
(Peronema Canescens Jack) terhadap
Staphylococcus aureus Atcc 25923 dan
Escherichia coli ATCC 25922. Jurnal
Farmasi Galenika. 2(1), 8-14.
Li, L.H., Dutkiewicz, E. P., Huang, Y. C.,
Zhou, H.B & Hsu, C. C. (2018).
Analytical methods for cholesterol
quantification. Journal of Food and
Drug Analysis. 27(2019), 375-386.
Muharni, Fitrya, & Nurmaliana, R. (2016).
Skrining fitokimia aktifitas antioksidan
dan antibakteri dari tumbuhan obat
tradisional etnis Musi. Palembang.
Laporan Penelitian Ristoja, Departemen
Kesehatan Republik Indonesia.
Musa, W. J. A., Situmeang, B & Sianturi, J.
(2019). Anti-cholesterol triterpenoid
acids from Saurauia vulcani Korth.
(Actinidiaceae). International Journal
of Food Properties. 22(1), 1439-1444.
Oyebode, O. et al. 2016. Use of traditional
medicine in middle-income countries : a
WHO-SAGE study. Health Policy and
Planning, 31(1): 984–99.
Pasaribu, S. P., Erwin dan Istianti, S. 2014.
Isolasi dan identifikasi senyawa
flavonoid daridaun tumbuhan kerahau
(Callicarpa longifolia Lam.). Jurnal
Kimia Mulawarman, 11(2): 80-83.
Jurusan Kimia FMIPA UNSRI
Artikel Ilmiah Sidang Sarjana 2021
Rastogi, S. et al. (2020). Medicinal plants of
the genus Betula-Traditional uses and a
phytochemical-pharmacological review
Subha. Journal of Etnopharmacology.
159(2020), 62–83.
Sadino, A., Sahidin, I and Wahyuni, W. 2016.
Antioxidant activity of ethanol extract
of Polygonum pulchrum Blume.
Pharmacology and Chlinic Pharmacy
Research. 1(2), 48-54.
Sami, A. et al. (2006). Pharmacological
properties of the ubiquitous natural
product betulin. European Journal of
Pharmautical Sciences. 29(2006), 1–13.
Simanjuntak, P. (1996). Studi kimia senyawa
glikosida tumbuhan sungkei, Peronema
canescens (Verbenaceae). Indonesian
Journal of Applied Chemistry. 6(1), 8-
12.
Sitepu, N. (2020). In vitro test of antibacterial
ethanol extract, n-hexane fraction and
ethyl acetate fraction of sungkai leaf
(Peronema canescens) against
Salmonella typhi. Asian Journal of
Pharmaceutical Research and
Development. 8(3), 57-60.
Soica, C. et al. (2014). Betulinic Acid in
Complex with a Gamma-Cyclodextrin
Derivative Decreases Proliferation and
in Vivo Tumor Development of Non-
Metastatic and Metastatic B164A5
Cells. International Journal of
Molecular Sciences. 2014(15), 8235–
8255.
Thomas, A. N. S. (1993). Tanaman obat
tradisional 1. Yogyakarta: Kanisius.
Yani, A. P & and Putranto, M. H. (2014).
Examination of the sungkai’s young leaf
extract (Peronema canescens) as an
antipiretic, immunity, antiplasmodium
and teratogenity in mice (Mus.muculus).
International Journal of Science and
Engineering. 7(1), 30-34.
Yogeeswari, P & Sriram, D. (2005). Betulinic
acid and its derivatives: A review on
Halaman 11
 Artikel Ilmiah Sidang Sarjana 2021

their biological properties. Current

Medicinal Chemistry. 12(6): 657-666.
Zhao G.J, et al. (2013). Antagonism of
betulinic acid on LPS-mediated
inhibition of ABCA1 and cholesterol
efflux through inhibiting nuclear factor-
kappaB signaling pathway and miR -33
expression. PLoS One. 8(9), 1-10.
Zhou, C., Li, J., Li, C & Zhang, Y. (2016).
Improvement of betulinic acid
biosynthesis in yeast employing
multiple strategies. Bio Medical Central
Biotechnology. 16(59),1-9.

Jurusan Kimia FMIPA UNSRI Halaman 12

 Artikel Ilmiah Sidang Sarjana 2021

Indralaya, Mei 2021

Pembimbing I Pembimbing II

Prof. Muharni, M.Si. Fahma Riyanti, M.Si.

NIP. 196903041994122001 NIP.197204082000032001

Mengetahui,

Ketua Jurusan Kimia

Dr. Hasanudin, M. Si.

NIP. 197205151997021003

Jurusan Kimia FMIPA UNSRI Halaman 13