JurnalSains& Matematika(JSM) . ..

rssN 0854-0675
Volume 17Nomor 2 April2009 ArtikelPenelitian:
90-96

ANALISN KUAIiTITATIF B-KAROTEN DAI\[ UJI AKTTVITAS KAROTENOII)

DALAM ALGA COKLAT TT]RBINARIA DECURRENS

Fransisca Birantir), Muhammad Nursid2), Bambang C"nyooo"

r) LaboratoriumKimia Organik, JurusanKimia MIPA UniversitasDiponegoroJl. hof. Sudarto,Tembalang
Semarang50275, Telp/Faks62(024)76480824,E-mail : bbc_cahyono@Jahoo.com
" Balai BesarRisetPengolahanProdukdan Bioteknologi Kelautandan PerikananJl. K.S. Tubun Petamburan
VI Jakarta10260,E-mail : mnursid@vahoo.co.id

ABSTRACT---One of the Indonesian marine natural resources, brown alga of Turbinaria

decurrens,used in pharmacy in order of carotenoidpigment as sntioxidant. We interestedin analysis p :
caroten in Turbinaria decurrensand antioxidqnt and anti-tumor activity. The methodthat is use to divide
carotenoid is the hierarclry rnaserationrnethodusing n-huane, ethyl acetateand methanoland then using
chromMographycolumn. To analyze the qualitative carotenoid uses HPLC by Crc column and eluen
methanol-acetonitrile(3:I). Meanwhile, the test of bioactivity carotene usesradical DPPH (1I'difenil-2-
pibilhidrozil) to test of antioxidant qnd sitotoksik asscy with MTT [3,(4,5-dimethylthiazol-2yl)-2,5-
diphenyltetrcaoliumbromideJfor HeLa tumor cells to test of anti-tumor. The result of this researchis B -
caroten thqt is in qctract has 0.00387%.Moreover, bioacttvity test showsthat B -carotenfraction doesnot
activeto neutralizeof DPPHfree radical than ascorbicaci{ but it showsthe acttvity to kill HeLa tumor cells.

Keywords: Turblnaria decunens,Carolenoid,Antioksidan, Antitumor

PNFIDAHULUAFI pantai Binangeun Banten dan hampir di

Senyawa antioksidan memiliki peran yang
sangat penting dalam dunia kesehatan
mengr4gat
kemampuannya dalam
menghambat pembentukan radikal bebas
(Ladas dkk., 2004), dalam menhambat
oksidasi asamnukleat, protein, lemak, DNA
sehinggadapatmengurangiberbagaipenyakit
degeneratif serta mencega penyakit tumor
(McGeedkk.,2006).
Penelitian yang mengarah pada penemuan
senyawaantioksidanyang dapatmenghambat
tumor akhir-akhir ini merupakan topic
menarikuntuk dikembangkan,sebagaicontoh
analisismengenaiefek dari biota lauf seperti
spons Pefrosia cf, Nigricans (Nursid dkk.,
2006), spns Sarcophytonglaucum (Zakafia
2006) dan alga coklat seperti Turbinaria
conoides (Sheu dkk., 1999). disinyalir
merupakan bahan yang dapat digunakan
untuk keperluantersebut.
Alga coklat dari spesies Tarbinaria
merupakan salah satu bahan yang banyak
ditemukan di lndonesi4 terutama di daerah
rataan terumbu bagian luar seperti daerah
seluruh pantai yang banyak terkena ombak
langsung (Atmadja, 1996). Hasil penelitian
terakhir menyatakan bahwa alga coklat
Turbinaria sp. memiliki aktivitasterhadapsel
tumor (Wikanta dkk., 2006). Menurut
penelitian Chasanah dkk. Q007), diduga
s€nyawayang berperanbesardalam aktivitas
tersebut berasal dari golongan pigmen
karotenoid yang teroksigenasi dalam
strukturnya,yaitu fucosantin.Selain senyawa
ini, alga coklat secara umum juga
mengandung senyawa violaksantin,
flavosantin serta neosantin a dan b,
sedangkankelompok karotenoidyang umum
ditemukan dalam alga ini adalah p-karoten,
yakni karotenoid yang tidak rnemiliki atom
oksigen dalam strukturnya (Blunt dkk.,
2006). Golongan senyawaini sudahdikenal
memiliki aktivitas antitumor yang baik
(Clevidencedkk., 1997).
Hingga saat ini, suatu penelitian yang
sistematik mengenai kandungan p-karoten
dalamalga coklat Turbinaria decwrens yang
tumbuhdi Indonesiabelum pernahdilakukan.
Penelitian dimulai dengan isolasi dan

FrqnsiscqBirsrti, MuhammadNursid, BambangCalryono:Analisis Kuantitatif... 90 '

'Artikel Penelitian
fraksinasi untuk mendaptkan karotenoid"
diikuti dengan standardisasi dan diakhiri
dengan analisis pemanfaatan sebagai
antioksidandan anti tumor.
BAI{AN DAN METODE
Ekstraksi. Sampel Turbinaria decwrens
sebanyak I7,4 kg dimaserasi bertingkat
(sampai seluruh jaringan terendam) dengan
pelarut z-heksana,etil asetat, dan metanol
kualitas p.a. Filtrat disaring dengan
menggunakan kertas saring Whafrnan,
kemudian pelarut diuapkan kembali dengan
menggunakan rotary evaporator dan sisa
pelarut yang mungkin tertinggal diuapkan
denganLabconco Freeze dry. Ekstrak yang
diperoleh ditimbang dengan menggunakan
neraca analitik, sehingga diperoleh ekstrak
kasar n-heksana, etil asetat dan metanol
(Allen,2003).
Ketiga ekstrak dtuji KLT (Kromatografi
Lapis Tipis) dengan bahan pengemban
Aluminium SheetsSilica Gel Merck, standar
pkaroten, dalam eluen n-heksana-etilasetat
(l/1). Ekstrakyang memiliki hargaRf sama
dengan standar, difraksinasi dengan kolom
kromatografi silika gel 2 x 30 cm dengan
sistem gradient eluen z-heksanadiikuti etil
asetat dan kemudian metanol. Eluat yang
diperoleh ditampung sehinggadiperoleh 45
eluat. Semua eluat terebut kemudian diuji
KLT kembali dengan eluen n-heksana-etil
asetat(1/1),untuk menggabungkan hasileluat
berdasarkan harga Rf-nya. Eluat yang
memiliki spot samadikelompokkanmenjadi
satufraksi.
Fraksi yang diperoleh kemudian diuapkan
pelarutnyadenganrotary evaporatordan sisa
pelarut yang mungkin tersisa diuapkan
dengan Labcorrco Freeze dry kemudian
ditimbang(Wikanta dkk., 2006).
Analisis Kuantitatif, Fraksi yang diperoleh,
diuji dengan KLT menggunakaneluen z-
heksana-etilasetat(20:1) denganstandarp-
karoten, fraksi yang memiliki Rf sama
dengan standar dielusi dengan HPLC
Shimadzu, kolom Princeton Omni Crs,
detector W-VIS PhotodiodeAooy, dengan
fasagerakmetanol-asetonitril(3/1) paAafiow
0,5 pllmenit. Kromatogram fraksi
J. Sains& Mat. Yol 17 No. 2 April2009: 98-104
dibandingkandengankromatogramstandarB-
karoten, dengan konsentrasimasing-masing
25, 50, 100, 250 dan 500 ppm. Data yang
diperoleh adalahwaktu retensi dan luas area
standar, yang kemudian diplotkan menjadi
kurva standarkonsentrasiversus luas'area.
Dari kurva tersebut maka luas area fraksi
diplotkan, sehingga diperoleh hasil
konsentrasi(Zhao,2004).
Uji Aktivitas Antioksidan. Pengujian
dilakukan pada fraksi (ekstrak) dengan
menggunakan DPPH pada microplate 96
wel/. Ekstrak dibuat dalam 5 seri konsentrasi
25,5A,100, 500, 1000pg/ml dalamlarutan
metanol p.a, masing-masing2 kali ulangan.
Sebanyak 160 & ekstrak dari setiap seri
konsentrasidimasukkanke dalammicroplate,
kemudian ditambahkan40 pl larutan DPPH
pada setiap seri konsentrasi.I"arutan DPPH
dibuat dengancaramelarutkan3,2 mg DPPH
dalam l0 mL metanol p.a. Sebagaikontrol
positif di gunakanasamaskorbat(vitamin C)
dengan seri konsentrasi dan volume yang
sama dengan perlakuan ekstrak. Sebagai
blanko digunakanmetanol p.a sebanyak200
pL- Kontrol negatif (tanpaperlakuanekstrak)
dibuat dengan cara menambahkan160 pL
metanol p.a pada 40 F.L DPPH, dan sebagai
kontrol ekstrak, sebanyak 160 pL ekstrak
ditambahkan40 pL metanol p.a. Microplate
kemudian diinkubasi pada suhu ruang dan
tempat yang gelap selama30 menit. Setelah
30 menit absorbansidari tiap sumurandibaca
dengan dynex microplate reader pada
panjang gelombang 510 nm. Persentase
hambatan radikal bebas ditentukan dengan
rumus:
o/olnhibisi= (A- B)-(c - D)
xlOU/o
(A_ B)
Ket A: Absorbansikonfrol negatif (metanol
+ DPPH), B : Absorbansiblanko (metanol),
C: Absorbansiperlakuan(Ekstrak+OPPH),D
: Absorbansi kontrol eksfiak
(Ekstrak+metanol).
Data persentasepenghambatandigunakan
untuk mencarinilai Inhibition Concentration
50 (IC50)dalamFg/mL.Nilai ICsoditentukan
dengananalisisprobit (Tamat 2007).
9l

Uji Aktivitas Antitumor.
Uji sitotoksik menggunakanMTT pada sel
tumor HeLa phasage 30. Pencairansel (cell
thawing) dilakukan dengan cara
mengeluarkantabung berisi sel dari tangki
nitrogen cair dan dibenamkan dalam
waterbatchbersuhu37oC.Seluruhcairan sel
dipipet dan dimasukkan ke dalam tabung
sentrifus dan ditambahkan 5mL medium
RPMI 1640, kemudian disenhifus dalam
kecepatan1500rpm selama5 menit. Setelah
itu supernatan dibuang dan pellet yang
diperoleh disuspensikandalam 6 mL RPMI
suspensisel dipipet dan dimasukkankedalam
labu kultur kemudian diinkubasi gelama24
jam dalam inkubator CO2 pada 37"C. Sel
yang telah berumur 24 jam dikultur dalam
medium RPMI 1640, FBS l0Vo, Fungision
0,5Vodanpenisilin-streptomisin2%.
Ekstak dibuat denganseri konsentrasi12,5,
25, 50 dan 100 lrg/ntL dalam media RPMI
dengan 3 kali ulangan. Sel dimasukkanke
dalam microplate-96well sebanyak100 pL
setaradengan10'seVlO0 pL. Kemudiansel
diinkubasi selama24 jarn pada37oCdengan
aliran COz 5 ml-imenit sampaisel menempel
denganbaik. Setelah24 jant sebanyak100 FL
sampel ditambahkanpada tiap well. Dalam
pengujian ini digunakan 3 kontrol, yaitu
kontrol sel (100 pL sel + 100 pL media),
kontrol media (200 FL media) dan kontrol
sampel(100 pL sampel+ 100 pL media).
Miboplate diinkubasikembali selama24 jam
dalam inkubator CO1 Setelah 24 jam
ditambahkanMTT sebanyak10pL ke dalam
tiap well. Microplate diinkubasi kembali
selama 4 jam, kemudian reaksi MTT
dihentikan dengan cara menambahkan100
& SDS l0o/o. Microplate diinkubasikan
kembali selama12 jam pada suhukamar dan
dalamkeadaangelap.Setelaht2jarn, kondisi
sel di cek denganmikroskop invertedphase-
contrast(Rajeshand Gupta,2007).
HASIL DAI\TPEMBAHASAI\I
Dalam penelitian ini, kshak kasar dari
Turbinaria decuwenstelah diperolehmelalui
ekshaksi kasar z-heksana, etil.asetat dan
metanol. Analisis ketiga ekstrak tersebut
dengan KLT menujukkan bahwa ekstrak
kasar etil asetatmemiliki spot samadengan
standar, jadi karotenoid diduga lebih larut
FransiscaBiranti, MuhammadNursid, BambangCahyono:Analisis Kuantitatif,..
" "- Artikel Penelitian
dalam etil asetatdaripadakedua pelarut lain
yang diaplikasikan, sehingga untuk proses
pengujian selar{ufirya hanya menggunakan
ekstrakkasaretil asetat.
Fraksinasi ekstrak kasar etil asetat dengan
kromatografikolom. diperolehhasil 45 eluat
yang selanjutnya digabung kembali
didasarkan pada kesamaanharga Rf pada
KLT sehinggadiperoleh9 fraksi. Kesembilan
fraksi diuji KLT kembali denganstandarB-
karotendalameluenn-heksana-etil asetat1:1.
Dari spot-spot yang terdapat pada KLT
diperolehhasil fraksi 1 rnemiliki spot dengan
hargaRf yang samadenganstandar.Dilihat
dari sifat fisik fraksi 1 yang berwarnamerah
kekuningan,maka dugaankarotenoidberada
dalam ftaksi tersebutselarasdenganliteratur
yang menyatakan bahwa karotenoid
merupakanpigmen berwama warna kuning,
oranyedanmerah(Gross,1991).
Senyawap-karotendalamfraksi 1 ditentukan
kadarnya dengan metode kromatografi cair
kinerja tinggi atau HPLC dengan standar
eksternal(Zhao, 2004). Untuk mendapatkan
kadar B-karoten, data kromatogram standar
diplotkan pada kurva kalibrasi sebagai
berikut:
Shdarp.hmbn
XunaKalibrrci
0m
m
t400
o
r Ssi€sl
:3m LIlg
jm
100 y:0,83r&+90,s
=0,97S
R2
0
2S 4S
Kurettm{(pprf
Gambar l.
Kurva kalibrasi standar B-karoten
Langkah selanjutnyaekstrak karoten dalam
fraksi I diiqiek ke dalam IIPLC dengan
kondisi yang sama denganstandar,hasilnya
kromatogramberikut:
92
Artikel Penelitian

riq
G
€o rfllr('ner, DrE{(krire)
n

Gambar3. Reaksipenetralanradikal DPPH

Nilai absorbansidikonversi menjadi nilai

tItrdtur*uSlmntl
inhibisi (hambatan). Besarnya nilai persen
inhibisi digunakan sebagai data untuk
Gambar2. KromatogramFraksi 1 Ekstrak menghitung nilai ICso, ya$B ditentukan
Etil asetatTurbinaria decurrens denganmenggunkanaanalisis probit. hobit
merupakanmetode statistik yang digunakan
untuk menentukan hubungan antara dosis
Dari kromatogram maka disimpulkan
(stimultan) dan respon yang dihasilkan.
terdapat 2 senyawa karotenoid yang
Hasilnya kemudiandiplotkan kedalamgraf*
terdeteksi pada par{ang gelombang440nm.
kurva linier log konsentrasi versus probit
Ditinjau dari waktu retensinya, maka area
(gambar4.).
yang mendekati standar adalah puncak 2.
Dengan memplotkan pada persamaanlinier
dari kurva standarp-karoten,diperoleh hasil Aktivihs frahiI
anliohkhn
kadar B-karoten dalam ekstrak etil asetat
456
sebesar38,7Yo. 4,5
1,45
Aktivitas antioksidan karotenoid . 1,1
ditentukan dengan penetralanradikal bebas 5+s o Sedesl
DPPH atau 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil !.4,r UfH
(Wikanta, 2006). Prinsip yang digunakan 425
dalam uji ini adalahabsorbansidari radikal 12
4,15 y=0,2S*+qqB4
yang dinefralkan oleh karotenoid sebanding 1,1 fi2:[,!g44
dengan aktivitas karotenoid sebagai
antioksidan. Uji ini merupakanuji positif-
negatif yang dipilih karena cepat dalam
menentukan aktivitas antioksidan dalam
sampel. Radikal DPPH yang telah dib€ri
ekstrak akan mengalami perubahan warna Gambar4. Kurva linier log konsentrasiVS
dari ungu menjadi kuning perubahanwarna probit fraksi 1 ekstraketil asetatsampel
tersebut diukur absorbansinyapada panjang Turbinaria decurrens
gelombang510 nm karenaabsorbansiDPPH
maksimumpadapanjanggelombang510-520 Dari persamaan linier y : 0,2384x+ 3,8034,
nm (Miliauskas dkk., 2003). Perubahan maka diperoleh ICsodari karotenoid sebesar
warna terjadi karena ada reaksi antara 104543,08 ppm. Sebagai pembanding
molekul 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil(DPPH*) aktivitas antioksidan, digunakan asam
denganatom H yang dilepaskanoleh molekul askorbatdenganhasil nilai IC5s 53,39ppm.
komponen bahan uji (senyawaantioksidan) Altivitas antioksidankar,otenoiddalam alga
sehingga terbentuk senyawa 1,1-difenil-2- coklat Turbinaria dec rens sebesarA,A50A
pikrilhidrazin (DPPH)yang berwarnakuning. aktivitas asamaskorbat.

J. Sains& MaL Vol 17 No.2 April 2009: 90-96 93


Uji aktivitas antitumor dilakuakan dengan
uji sitotoksik denganmenggunakansel tumor
lestariHeLa. Prinsip dari metodeMTT adalah
reaksi reduksi seluler yang didasarkanpada
pemecahan garam tetrazolium MTT yang
berwarna kuning menjadi kristal fonnazan
yang berwarna biru keunguan (Gambar 5).
Enzim suksinat dehidrogenase pada
mitokondriasel hidup mampumemecahMTT
menjadi kristal formazan (Atkin, 1983).
Reaksitersebutmelibatkanpiridin nukleotida
kofaktor NADH dan NADPH yang hanya
dikatalisis oleh sel hidup, sehinggajumlah
formazan yang terbentuk sebandingdengan
jumlah sel yang hidup (Zachary, 2003).
Semakin banyak sel yang hidup, semakin
banyakkristal formazanyangterbentuk.
Gambar5. ReaksipemecahanMTT menjadi
kristal formazan
Sel HeLa merupakan sel tumor ephitelial
pada organ cervical cmcinoma manusia.
Setelah penambahan B-karoten pada sel
HeLa, terlihat bentuk morfologi sel pada
gambar6
Gambar6. Bentukmorfologi sel lestariHeLa
setelahpenambahanFkaroten
FransiscaBiranti, MuhammadNursid, BambangCahyono:Analkis Kuantitatif,,.
' ^' Artikel Penelitian
Dari gambar mikroskopik sel lestari HeLa,
setelah penambahan ekstrak sfuktur
morfologi sel semakin berubah sebanding
dengan kenaikan dosis yang ditambahkan.
Al*ivitas sitotoksik pada fraksi p-karoten
diperkuat dengangambarankristal formazan
yangdisajikanpadagambarberikut:
Gambar7. Kristal Formazanyangterbentuk
setelahpenambahan MTT
Dari gambar7 terlihat hasil kristal formazan
yang terbentuksemakinberkurangsebanding
dengan kenaikan dosis ekstrak yang
ditambahkan pada sel. Jadi B-karoten
memiliki aktivitas sitotoksik pada sel tumor
HeLapadakonsenfasi50-100ppm.
SIMPT'LAI\I
Kadar p-karotendalamalga coklat Turbinoria
decurrens yang diambil dari daerah pasang
surut pantai Binuangeun,Banten pada bulan
Februari 2008, sebesar38,7ppmdari ekstrak
Turbinaria decttrrens. Dalam penelitian ini
karotenoid yang diisolasi dari Turbinafio
decurrens tidak menunjukkan aktivitas
antioksidan ter,hadapradikal DPPH tetapi
menu4iukkanaktivitas sitotoksikterhadapsel
tumorHeLa.
UCAPAI\I TERIMAKASIII
UcapanterimakasihkepadaBalai BesarRiset
Pengolahan Produk dan Bioteknologi
Kelautandan Perikananyang telah mendanai
serta menyediakanseluruh alat dan bahan
yangdigunakandalampenelitianini.
94
Artikel Peneliticnt
DAFTAR PUSTAKA
1. Allen, S.D.,Rusnack,
Michael,R.,2003,
"Process for Extracting Carotenoids
from Fruits and Vegetable Processing
'Waste'',USPatent,USA, No.7I 38152.
2. Atkr& B.M-, 1983, "Preventing Cell
Culture Contamination", Journal of
Forma ScientiJic,No. 1-800-848-3080,
2-6.
3. Atmadja, W.S., Kadi, A., Sulistijo,
Rachmaniar, 1996, "PengenalanJenis-
jenis
Rumput Laut Indonesia",
PuslitbangOseanologi-LPl, Jakart4 56-
57,75-77.
4. Blunt, J.W., Brent R.C., Murray,
H.G.M., Peter, T.N., Michele, R.P.,
2006, *Marine Natural Products", The
Royal Societyof ClrcmistryJ. Nat. Prod.,
(23),26-78.
5. Chasanah,E., Wikanta, T., Sri A.,
Fajarningsih,N.D., Marraskuranto,8.,
Nursid M., Januar,H.L, 2007, "Riset
Isolasi Dan Uji Farmakologi Senyawa
Bioaktif dari Biota Laut', Laporan
Teknis Balai Besar Riset Pengolahan
Produk dan Bioteknologi Kelautan dan
perikanan, Badan Riset Kelautan dan
perikanan, Departemen Kelautan dan
Perikanan,Jakarta.
6. Clevidence,8.A., Khachilq F., Brown,
E.D., Nair, P.P.,Wiley, E.R., Prior, R.I.,
Cao, G., Morel, D.W., Stone, W.,
Ktamer, T.R., 1997, "Human
Consumption of Carotenoid-Rich
Vegetables",AOCS Press,Champaign,
Illinoids.
7. Gross, J., 1991, '?igments In
Vegetables: Chlorophylls and
Carotenoids", Van Nostrand Reinhold,
New York, 90-91,I 01-l 05.
8. McGee,S.A., Sharee,A.W., Janet,D.P.,
2006, *What Advanced Practice About
Free Radicals", T'heIntemet Jownal of
Advance Nursing Practise, Kansas,
Vol.6No.1,l-9.
9. Nursi4 M, Wikanta T. , Fajarningsih,
N.D., Marraskuranto, E., 2006,
"Aktivitas Sitotoksik, Induksi Apoptosis
dan Ekspresi Gen p53 Fraksi Metanol
J. Sains& Mat. Vol 17 No.2 April2009: 90-96
Spons Petrosia cf, nigricans Terhadap
Sel Tumor HeLa", Jarnal Pascapanen
dan Biatebtologi Kelautan dan
Perikanon,Vol.1, No. 2, Desember,103-
11 0 .
10. Rajeslq S. and G.tpta A.K., 2AA7,
"Antimicrobial and Antitumor Activity
of The FractionatedExtracsof Kalimuli
(Curculigo orchioides)'0, hil Green
PharmResearchArticle Departementof
Chemisty Agra College, Agra-Yttar
Pradesh,lndiu2:34-6.
11. Sheu,J.H.,Wang G.H., SungoP.J.,and
Duh, C.Y., 1999, 'T.Iew Cytotoxic
OxygenatedFucosterolfrom the Brown
Algae Turbinaria conoides", J.Nat.
Prod.,62(2),224-227.
12. Tamat, S.R., Wikanta T., Lin4 S.M.,
2007, *Aktivitas Antioksidan dan
ToksisitasSenyawaBioaktif dari Ekstrak
Rumput Laut Hrjau Wva Reticulata
Forsskal", Jurnal llmu Kefarmasimt
Indonesia,Jakarta vol. 5 no. I,3l-36.
13. Wikanta, T., Chasanah,8., Amini, S.,
Nursid, M., Fajarningsih,N.D., Januar,
H.I., Marraskuranto,E., 2006, "Riset
Isolasi dan Uji Farmakologi Senyawa
Bioaktif dari Biota Laut", Laporan
Tefuris Balai Besar Riset Pengolahmt
Produk dm Biotebtologi Kela*an dan
Perilunan, Badan Riset Kelautandan
Perikanan, Departemen Kelautan dan
Perikanan,Jakarta,3,9-I3, 32-36.
14. Wikanta T., Tamat, S.R, Magdalen4
S.M., 2006, "Identifikasi, Uji
Antioksidan,dan Uji ToksisitasSenyawa
Bioaktif dalam Caulerpo sertularioides
(Vahl.) C. Agardooo Jurnal llmu
Kefarmasian Indonesia, Jakart4 JIFI
vol.4 no.1,25-32.
15.Z-akafia,Y.A., 2006,* Uji Sitotoksisitas
Ekstrak Etil Asetat Karang Lunak
Sarcophyton glarcum (Quoy &
Gaimard) terhadap Sel Lestari Tumor
HeLa", Skripsi Universitas Pancasila
FakultasFarmasi,Jakarta.
16. Ztno,B., Su-Yin"T., Jia, I,., Mui, H.L.,
Lionel, K.H.L., Shabbir, M.M., 2004,
"SimultaneusDeterminationof Vitamin
95
 Artikel Penelitian

C, E and Beta Carotene in Human Enviromental Resesrch Institute, DSO

Plasma by High-Performance Liquid National Laboratories, Singapore,Vol.
Chromatographywith PhotodiodeArray 7, No. 2,200-204.
Detectiono'" Journal Medical and

FransiscaBirmti, MuhammadNursid,BambangCahyono:Analisis Kuontitatif... 96'