Wiener lab.
ACTH
Adrenocorticotropic hormone (CLIA)
Intended Use
Chemiluminescent Immunoassay (CLIA) for
the quantitative determination of
adrenocorticotropic hormone (ACTH) in
plasma.
Summary
Adrenocorticotropic hormone (ACTH) is a
polypeptide tropic hormone consisting of 39
amino acids. It is secreted by the anterior
pituitary gland.
ACTH is an important component of
hypothalamic-pituitary-adrenal axis. It is often
produced in response to biological stress along
with its precursor corticotropin releasing
hormone (CRH) from the hypothalamus, and
stimulates formation and secretion of
glucocorticoids (especially cortisol) by the
adrenal cortex. High concentration
glucocorticoids in the blood inhibit secretion of
CRH and ACTH via a negative feedback
mechanism.
ACTH determination is valuable in the
differential diagnosis of pituitary Cushing’s
disease, autonomous ACTH producing
pituitary tumors (e.g. Nelson’s syndrome),
hypopituitarism with ACTH deficiency and
ectopic ACTH syndrome. In addition to cortisol
measurement, ACTH determination can be
used together with functional or stimulation
tests to diagnose the origin of glucocorticoid
overproduction. ACTH determination can also
help to facilitate differential diagnosis of
adrenocortical insufficiency (Addison’s
disease).
Plasma ACTH concentration show a diurnal
variation with high levels in the morning and
low levels in the evening. Therefore, as with
cortisol, it is important to know the collection
time of the plasma sample for interpretation
of the results.
Principle
Adrenocorticotropic hormone (CLIA) is a
sandwich assay to quantitatively determine
adrenocorticotropic hormone (ACTH) in
plasma.
In the first step, sample and paramagnetic
microparticles coated with anti-ACTH
antibody are added into a reaction cuvette.
After incubation, ACTH present in the sample
binds to anti-ACTH antibody coated
microparticles. Microparticles are
magnetically captured while other unbound
substances are removed by washing.
In the second step, anti-ACTH
antibody-alkaline phosphatase conjugate is
added into the reaction cuvette. After
v. 000 UR16/10/11 P/N:046-010122-00(1.0)
incubation, the conjugate binds to ACTH that
has bound to the paramagnetic microparticles
coated with monoclonal anti-ACTH antibody to
form a sandwich complex. Microparticles are
magnetically captured while other unbound
substances are removed by washing.
In the third step, the Substrate Solution is
added to the reaction cuvette. The resulting
chemiluminescent reaction is measured as
relative light units (RLUs). The amount of
ACTH present in the sample is proportional to
the relative light units (RLUs) generated
during the reaction. The ACTH concentration
can be determined via a calibration curve.
Provided Reagents
Paramagnetic microparticles coated
Ra with monoclonal anti-ACTH
antibody in TRIS buffer.
Monoclonal anti-ACTH
Rb antibody-alkaline phosphatase
conjugate in MES buffer.
The position of each reagent component is
shown in the figure below:
Non-provided Reagents
- ACTH Calibrators
- ACTH Control (L)
- ACTH Control (H)
- Wash Buffer
- Substrate Solution
The reagents are provided separately by
Wiener lab.
Instructions for use
The reagents are ready to use
Warnings
- For “in vitro” diagnostic use.
- Always keep the reagent kit in the upright
position to ensure no microparticle has been
lost prior to use.
- Do not use reagents from other source.
- Do not use reagents beyond the expiration
date.
- Do not exchange reagents from different
lots.
- All patient samples should be handled as
capable of transmitting infection.
- Use the reagents following the usual work
precautions in the clinical laboratory.
- All reagents and samples should be
discarded in accordance with the local
regulations.
1/2
Stability and Storage Instructions
The kit is stable at 2-8°C up to the expiration
date stated on the box.
Required Material (non-provided)
Wiener lab. CLIA series chemiluminescence
analyzer
Cooled centrifuge.
Sample
Plasma
a) Collection: collect blood samples into
pre-cooled collection tubes. Only plastic tubes
or siliconized glass tubes should be used. Do
not use non-siliconized glass tubes as ACTH
might adsorb to glass tubes and thereby lower
sample ACTH values might occur. After
drawing the blood, put the vials immediately
on ice.
Avoid using strongly hemolized or
heat-inactivated samples.
b) Additives: use EDTA, as anticoagulant.
c) Centrifuge samples and separate plasma
within two hours. Use a cooled centrifuge
d) Stability and Storage Instructions:
samples should be preferably fresh. If not
processed within 2 hours after collection, they
should be frozen at -20ºC or below.
Avoid repeated freeze and thaw cycles.
Procedure
Before loading the reagents on the instrument
for the first time, unopened reagent bottle
should be inverted gently for at least 30 times
to resuspend the microparticles that have
settled during storage. Visually inspect the
bottle to ensure the microparticles have been
resuspended. If the microparticles remain
adhered to the bottle, continue inverting until
they have been completely resuspended. If
the microparticles cannot be resuspended, it
is recommended to discard the bottle.
This assay requires 50 μL sample. This volume
does not include the dead volume of the
sample container.
Calibration
The Adrenocorticotropic hormone (CLIA)
kit has been standardized against a
commercial ACTH assay (CLIA).
The specific information on the master
calibration curve is included in the provided
bidimensional code. It is used together with
the calibrators for the calibration of a specific
reagent lot. When performing the calibration,
scan the information from the master
calibration curve from the code into the
system first. Then use the calibrators at three
levels. Valid calibration curve is required
before any ACTH test. Recalibration is
recommended every 4 weeks or when a new
reagent lot is used, or the quality controls are
out of the specified range. For detailed
instructions on calibration, refer to the
analyzer operation manual.
Quality Control
ACTH Control (L) and ACTH Control (H)
from Wiener lab.
Calculation
The analyzer automatically calculates the
analyte concentration of each sample on the
master calibration curve read from the code,
and a 4-Parameter Logistic Curve Fitting
(4PLC) with the relative light units (RLUs)
generated from 3 calibrator levels. The results
are shown in pg/mL.
Expected values
A study on a cohort of 384 healthy individuals
(samples collected at 7:00-10:00 a.m.) has
determined the following reference range.
Number of 5-95%
Category
Samples Percentile
Healthy 7.0~65.0
384
individuals pg/mL
It is recommended that each laboratory
establish its own reference range.
Procedure Limitations
The upper limit of this assay is 2000 pg/mL. A
sample with ACTH concentration lower than
the upper limit can be quantitatively
determined, while a sample with a
concentration higher than the upper limit will
be reported as >2000 pg/mL.
The concentration of ACTH in a given sample,
determined with assays from different
commercial kits, can vary due to differences in
assay methods, calibration, and reagent
specificity. The assay results should be used in
conjunction with other data, such as
symptoms, results of other tests, clinical
history.
Samples from individuals who have been
exposed to mouse monoclonal antibodies may
contain human anti-mouse antibodies (HAMA).
Such samples may show either falsely
elevated or falsely depressed values with
assay kits employing mouse monoclonal
antibodies. However, no obvious interference
of HAMA has been observed in this assay.
Performance
a) Analytical Sensitivity: ≤1 pg/mL.
b) Measuring Range: 1 - 2000 pg/mL.
c) Specificity:
English-1
 Wiener lab.
- No interference is observed by hemoglobin samples. The statistical data obtained are H Use by
up to 500 mg/dL, bilirubin up to 10 mg/dL, summarized in the table below.
triglycerides up to 1500 mg/dL, total protein h Catalog number
up to 6 g/dL, rheumatoid factor up to 200 Correlati
IU/mL or antinuclear antibody. Concentration Interce on F Biological risks
Slope
- No obvious cross-reactivity was observed Range（pg/mL） pt Coefficie
when the substances stated in the following
Cont. Contents
nt
table were added to Calibrator C0 of ACTH 1.0~2000 0.9848 2.1948 0.9934
Calibrators. Results did not show differences
over 1.0% in ACTH assay with the stated Wiener lab. provides M SHENZHEN MINDRAY BIO-MEDICAL
levels. ELECTRONICS CO., LTD.
- 2 x 50 tests (code 1001009)
Cross- - 2 x 100 tests (code 1001010) Mindray building. Keji 12th Road South.
Substanc Concentrat Acceptanc
reactivit
e ion e Criteria References Hi-tech Industrial Park.
y
(pg/mL)
ACTH - Talbot JA, Kane JW, White A. Ann Clin
500000 0.01%
1-10 Biochem, 2003, 40:453-471.
Manufactured for:
ACTH - Jacobson L. Endocrinol Metab Clin North
500000 0.00% Wiener Laboratorios S.A.I.C.
11-24 Am, 2005, 34:271-292.
β-MSH 500000 0.00% Riobamba 2944
- Arlt W, Stewart PM. Endocrinol Metab Clin
β-Endorph 2000 Rosario - Argentina
500000 0.01% North Am, 2005, 34:293-313.
in
ACTH - Beauregard C, Dickstein G, Lacroix A. http://www.wiener-lab.com
500000 0.01% Endocrinol, 2002, 1:79-94.
1-17 ≤1% A.N.M.A.T. Registered product
ACTH - Lindsay JR, Nieman LK.. Endocrinol Metab
500000 0.01% PM-1102-141
1-24 Clin North Am, 2005, 34:403-421.
ACTH Tech. Dir.: Viviana E. Cétola
500000 0.01% - Oliver RL, Davis JR, White A. Pituitary,
18-39
2003, 6:119-126. Biochemist
ACTH
500000 0.01% - Boscato LM, Stuart MC. Clin Chem, 1988,
22-39
α-MSH 34:27-33.
500000 0.01%
1-13 - Kricka L. Clin Chem, 2000, 46:
d) Accuracy: 1037-1038.
Two controls with traceable and defined - Bjerner J, et al. Clin Chem, 2002, 48:
values were used to verify the accuracy of this 613-621.
assay. The results showed that the relative
- CLSI. EP5-A2: Vol. 24, No. 25, Evaluation
deviations were less than ±10%. The results
of Precision Performance of Quantitative
are summarized in the table below.
Measurement Method; Approved
Measured Defined
Relative Guideline –Second Edition.
Sample ACTH ACTH
Deviation -
(pg/mL) (pg/mL)
Level 1 106.94 105.93 0.95% SYMBOLS
Level 2 1009.23 980.65 2.91%
e) Precision: C This product fulfills the requirements of the
Precision was determined by following European Directive 98/79 EC for "in vitro"
National Committee for Clinical Laboratory diagnostic medical devices
Standards (NCCLS) Protocol EP5-A2. Two
levels of quality controls were tested in P Authorized representative in
duplicate in two separate runs per day, for a the European Community
total of 20 days.
Mean Intra- Inter-
Total M Manufactured by:
Sample value assay assay
CV
(pg/mL) CV CV V "In vitro" diagnostic medical device
1 101.89 3.19% 2.13% 3.19%
2 1025.82 3.16% 2.41% 3.28% i Consult instructions for use
f) Linearity: the reaction is linear in the U This side up
range 1.0-2000 pg/mL.
g) Correlation:
The Adrenocorticotropic hormone (CLIA)
l Temperature limitation (store at)
kit from Wiener lab. was compared with a
commercial kit of similar features, using 379
g Batch code
v. 000 UR16/10/11 P/N:046-010122-00(1.0) 2/2 English-1
 Wiener lab.
ACTH
Adrenocorticotropic hormone (CLIA)
Uso pretendido
Imunoensaio quimioluminescente (CLIA) para a
determinação quantitativa de hormônio
adrenocorticotrópico (ACTH) em plasma.
Significado clí
nico
O hormônio adrenocorticotrópico (ACTH), também
conhecido como corticotropina, éum hormônio
trópico de polipeptí
deo que consiste em 39
aminoácidos. Ésegregado pela glândula pituitária
anterior como parte da molécula precursora
pró-opiomelanocortina (POMC).
O ACTH éum componente importante do eixo
hipotalámico-pituitário-adrenal. Com frequência, ele
éproduzido em resposta ao estresse biológico junto
com seu precursor hormônio de liberação de
corticotropina (CRH) do hipotálamo, e estimula a
formação e a secreção de glucocorticóides
(especialmente cortisol) pelo córtex adrenal. Os
glucocorticóides de alta concentração no sangue
inibem a secreção de CRH e ACTH por meio de um
mecanismo de feedback negativo.
A determinação do ACTH évaliosa no diagnóstico
diferencial da doença de Cushing pituitária
(hipersecreção de ACTH), tumores pituitários de
produção de ACTH autônomo (por exemplo,
síndrome de Nelson), hipopituitarismo com
deficiência de ACTH e sí ndrome de ACTH ectópica.
Além da medição de cortisol, a determinação do
ACTH pode ser usada junto com testes funcionais ou
de estimulação para diagnosticar a origem da
superprodução de glicocorticoide. A determinação
do ACTH também pode ajudar a facilitar o
diagnóstico diferencial da insuficiência
adrenocortical (doença de Addison).
A concentração de ACTH do plasma mostra uma
variação diurna com altos ní veis de manhãe ní veis
baixos ànoite. Assim como ocorre com o cortisol, é
importante saber o tempo de coleta da amostra
plasmática para interpretação dos resultados.
Fundamento do método
O Adrenocorticotropic hormone (CLIA) éum
ensaio sanduí che para a determinação quantitativa
de hormônio adrenocorticotrópico (ACTH) em
plasma.
Na primeira etapa são adicionadas em uma cubeta
de reação, a amostra e as micropartí culas
paramagnéticas revestidas com anticorpo anti-ACTH.
Após a incubação, o ACTH presente na amostra se
liga às mircropartículas revestidas de anticorpo
anti-ACTH. As micropartí culas são capturadas
magneticamente, enquanto as substâncias não
ligadas são removidas por lavagem.
Na segunda etapa éadicionado àcubeta de reação, o
conjugado anti-ACTH-fosfatase alcalina. Após a
incubação, o conjugado se liga àACTH ligada às
micropartí culas revestidas com anticorpo anti-ACTH
para formar um complexo sanduí che. As
v. 000 UR16/10/11 P/N:046-010122-00(1.0)
micropartículas são capturadas magneticamente,
enquanto outras substâncias não ligadas são
removidas por lavagem.
Na terceira etapa, a solução do substrato (Substrate
Solution) éadicionada àcubeta de reaç ão. A reação
de quimiluminescência resultante émedida como
unidades relativas de luz (RLUs). A quantidade de
ACTH presente na amostra éproporcional nas
unidades de luz relativas (RLUs) geradas durante a
reação. A concentração de ACTH pode ser
determinada via uma curva de calibração.
Reagentes fornecidos
Micropartí
culas paramagnéticas revestidas com
Ra
anticorpo monoclonal anti-ACTH em tampão TRIS.
Conjugado de anticorpo monoclonal anti-ACTH e
Rb
fosfatase alcalina em tampão MES.
A posição de cada componente do reagente é
mostrada na figura:
Reagentes não fornecidos
- ACTH Calibrators
- ACTH Control (L)
- ACTH Control (H)
- Wash Buffer
- Substrate Solution
Estes reagentes são fornecidos por separado pela
Wiener lab.
Instruções de uso
Os reagentes são prontos para uso.
Precauções
- Para uso diagnóstico “in vitro”.
- Manter o kit de reagentes na posição vertical a fim
de garantir que não sejam perdas as micropartí culas
antes do seu uso.
- Não utilizar reagentes de outra origem.
- Não utilizar os reagentes após a data de validade.
- Não intercambiar reagentes de distintos lotes.
- Todas as amostras de pacientes devem ser
manipuladas como se fossem capazes de transmitir
a infecção.
- Todos os reagentes e as amostras devem-se
descartar conforme àregulação local vigente.
- Utilizar os reagentes observando as precauções
habituais de trabalho no laboratório bioquímico.
Estabilidae e instruções de armazenamento
O kit éestável a 2-8°C atéa data de validade
indicada na embalagem.
1/2
Material necessário (não fornecido)
Analisador de quimioluminscência Wiener lab. CLIA
series.
Centrí
fuga refrigerada.
Amostra
Plasma
a) Coleta: obter a amostra em tubos de coleta
pré-refrigados. Apenas tubos de plástico ou de vidro
siliconados devem ser usados. Não use tubos de
vidro não siliconados, jáque a ACTH pode ficar
aderida ao ví dro causando resultados errôneos.
Depois de coletar o sangue, coloque os frascos no
gelo imediatamente.
Não use amostas fortemente hemolisadas, nem
inativadas por calor.
b) Aditivos: utilize EDTA como anticoagulante.
c) Centrifugue as amostras e separe o plasma
dentro das duas horas. Utilize centrí
fuga refrigerada.
d) Estabilidade e instruções de
armazenamento: as amostras devem ser
preferívelmente frescas. Se a testagem não for
realizada em 2 horas, as amostras deverão ser
congeladas a 20°C ou abaixo. Evite ciclos de
congelamento e descongelamento repetidos.
Procedimento
Antes de carregar os reagentes no analisador pela
primeira vez, devem ser invertidos suavemente por
pelo menos 30 vezes para ressuspender as
micropartículas que se assentaram durante o
armazenamento. Inspecione visualmente o frasco
para assegurar que as micropartí culas foram
ressuspensas. Se as mesmas permanecerem
aderidas ao frasco, continue invertendo atéque as
micropartículas sejam completamente
ressuspendidas. Se as micropartí culas não puderem
ser novamente ressuspensas, recomenda-se não
usar este frasco de reagente. Este ensaio necessita
de 50 μL de amostra para um único teste. Esse
volume não inclui o volume morto do recipiente da
amostra.
Calibração
O kit Adrenocorticotropic hormone (CLIA) foi
padronizado em conformidade com um teste de
ACTH comercial (CLIA).
A informação especí fica da curva mestre de
calibração écontida no código bidimensional
fornecido. Éusado em conjunto com os calibradores
para a calibração do lote de reagentes especí fico. Ao
realizar a calibração, primeiro digitalize a informação
da curva mestre de calibração a partir do código
bidimensional no sistema, e, em seguida, use os
calibradores em três ní veis. Uma curva de calibração
válida énecessária antes de qualquer teste de ACTH.
A recalibração érecomendada a cada quatro
semanas, ou quando um novo lote de reagentes
for usado, ou quando os controles de qualidade
estiverem fora do intervalo especificado. Para
instruções detalhadas de calibração, consulte
o manual de operações do sistema.
Controle de qualidade
ACTH Control (L) e ACTH Control (H) da Wiener
lab.
Cálculo dos resultados
O analisador calcula automaticamente a
concentração do analito de cada amostra na curva
mestre de calibração lida a partir do código
bidimensional, e um ajuste da curva logí stica de 4
parâmetros (4PLC) com as RLU geradas a partir dos
três ní
veis de calibradores. Os resultados são
mostrados em pg/mL.
Valores esperados
Um estudo realizado sobre uma populaç ão de 384
indiví
duos saudáveis (amostas coletadas às
7:00-10:00) determinou o seguinte intervalo de
referência:
Número de
Categoria Percentil 5-95%
amostras
Indiví
duos saudáveis 384 7,0~65,0 pg/mL
Érecomendável que cada laboratório estabeleça seu
próprio intervalo de referência.
Limitações do procedimento
O limite superior do ensaio é2000 pg/mL. Uma
amostra com uma concentração de ACTH menor do
que o limite superior pode ser determinada
quantitativamente, enquanto que uma amostra com
uma concentração maior do que o limite superior
seráreportada como >2000 pg/mL.
A concentração de ACTH numa dada amostra,
determinada com ensaios de diferentes fabricantes,
pode variar devido a diferenças nos métodos de
ensaio, calibração e especificidade dos reagentes. Os
resultados do ensaio devem ser utilizados em
conjunto com outros dados, tais como sintomas,
resultados de outros testes, histórico clínico, etc.
Amostras de indiví duos que foram expostos a
anticorpos monoclonais de rato podem conter
anticorpos humanos anti-rato (HAMA). Estas
amostras podem apresentar valores falsamente
elevados ou baixos com kits de ensaio empregando
anticorpos monoclonais de rato. No entanto,
nenhuma interferência evidente de HAMA foi
observada neste ensaio.
Caracterí
sticas de desempenho
a) Sensibilidade analí
tica: ≤1,0 pg/mL
b) Faixa de medição: 1-2000 pg/mL.
c) Especificidade:
- Não foram observadas interferências por
hemoglobina até500 mg/dL, bilirrubina até10
mg/dL, triglicerí
deos até1500 mg/dL, proteí nas
totais até6,0 g/dL, fator reumatóide até200 UI/mL,
nem anticorpo anti-núcleo.
- Não foi observada reatividade cruzada significativa
Português-2
 Wiener lab.
quando foram adicionadas ao calibrador C0 de ACTH - 2 x 100 testes (cód. 1001010) Fabricado para:
-
Calibrators, as substâncias indicadas na tabela Wiener Laboratorios S.A.I.C.
abaixo. Riobamba 2944
Referências
Os resultados não mostraram diferenças de mais do 2000 Rosario - Argentina
que 1,0% no ensaio de ACTH com os ní veis indicados - Talbot JA, Kane JW, White A. Ann Clin Biochem, http://www.wiener-lab.com
2003, 40:453-471. Producto Autorizado por A.N.M.A.T.
Concentração Reatividade Critério de PM-1102-141
Substância - Jacobson L. Endocrinol Metab Clin North Am, 2005,
(pg/mL) cruzada aceitação Dir. Téc.: Viviana E. Cétola
34:271-292.
ACTH 1-10 500000 0,01% Bioquí mica
- Arlt W, Stewart PM. Endocrinol Metab Clin North
ACTH 11-24 500000 0,00%
Am, 2005, 34:293-313.
β-MSH 500000 0,00%
β-endorfina 500000 0,01% - Beauregard C, Dickstein G, Lacroix A. Endocrinol,
ACTH 1-17 500000 0,01% ≤1% 2002, 1:79-94.
ACTH 1-24 500000 0,01% - Lindsay JR, Nieman LK.. Endocrinol Metab Clin
ACTH 18-39 500000 0,01% North Am, 2005, 34:403-421.
ACTH 22-39 500000 0,01%
- Oliver RL, Davis JR, White A. Pituitary, 2003,
α-MSH 1-13 500000 0,01%
6:119-126.

d) Exatidão: - Boscato LM, Stuart MC. Clin Chem, 1988,

Dois controles de veracidade com valores rastreáveis
e definidos foram usados para verificar a exatidão
desse ensaio. Os resultados mostraram que os
desvios relativos foram menores que ±10%. Os
resultados estão resumidos na tabela abaixo.
ACTH medida ACTH definida
Amostra
(pg/mL) (np/mL)
34:27-33.
- Kricka L. Clin Chem, 2000, 46: 1037-1038.
- Bjerner J, et al. Clin Chem, 2002, 48: 613-621.
- CLSI. EP5-A2: Vol. 24, No. 25, Evaluation of
Precision Performance of Quantitative
Measurement Method; Approved Guideline
Desvio
–Second Edition.
Relativo

Ní
vel 1 106,94 105,93 0,95% SÍMBOLOS
Ní
vel 2 1009,23 980,65 2,91%
C Este produto preenche os requisitos da
f) Precisão: Diretiva Europeia 98/79 CE para dispositivos
A precisão foi determinada de acordo com o
médicos de diagnóstico "in vitro"
Protocolo EP5-A2 do ComitéNacional para Padrões
de Laboratório Clínico (NCCLS). Dois níveis de P Representante autorizado
controles de qualidade foram testados em duplicado na Comunidade Européia
em duas séries separadas por dia, por um total de 20
dias M Elaborado por

Amost
Valor CV CV V Uso médico-diagnóstico "in vitro"
médio intra-ensai inter-ensai CV total
ra
(pg/mL) o o
i Consultar instrucciones de uso
1 101,89 3,19% 2,13% 3,19%
U Este lado para cima
2 1025,82 3,16% 2,41% 3,28%

l Limite de temperatura (conservar a)

g) Linearidade: a reação élinear na faixa 1,0-2000
pg/mL g Número de lote
h) Correlação: H Data de validade
O kit Adrenocorticotropic hormone (CLIA) da
Wiener lab. foi comparado com um kit comercial de h Número de catálogo
caracterí
sticas semelhantes, utilizando 379
amostras. Os dados estatísticos obtidos são F Risco biológico
mostrados na tabela abaixo.
Cont. Conteúdo
Coeficient
Intervalo de
Pendent Interseçã e de
concentraçã
e o correlaçã
o (pg/mL)

1,0~2000 0,9848 2,1948

o
0,9934
M SHENZHEN MINDRAY BIO-MEDICAL
ELECTRONICS CO., LTD.
Mindray building. Keji 12th Road South. Hi-tech
Apresentação Industrial Park.

- 2 x 50 testes (cód. 1001009)

v. 000 UR16/10/11 P/N:046-010122-00(1.0) 2/2 Português-2
 Wiener lab.
ACTH
Adrenocorticotropic hormone (CLIA)
Uso previsto
Inmunoensayo quimioluminiscente (CLIA)
para la determinación cuantitativa de
adrenocorticotrofina (ACTH) en plasma
Significación clí nica
La hormona adrenocorticotrofina (ACTH) es una
hormona trópica polipéptida compuesta de 39
aminoácidos, segregada por la hipófisis
anterior.
Es un componente importante del eje
hipotálamo-hipofiso-suprarrenal. Se suele
producir en respuesta al estrés biológico junto
con su precursor, hormona liberadora de
corticotropina (CRH) desde el hipotálamo, y
estimula la formación y segregación de
glucocorticoesteroides (especialmente, cortisol)
por la corteza suprarrenal. Una alta
concentración de glucocorticoesteroides en
sangre inhibe la segregación de CRH y ACTH
mediante un mecanismo de feedbacj negativo.
La determinación de ACTH es importante para el
diagnóstico diferencial de la enfermedad de
Cushing de origen hipofisario que produce
tumores hipofisarios (como el sí ndrome Nelson),
insuficiencia adenohipofisaria con deficiencia de
ACTH y sí ndrome ACTH ectópico. La
determinación de ACTH puede usarse junto con
ensayos funcionales o de estimulación para
diagnosticar el origen de la superproducción de
glucocorticoesteroides. También puede facilitar
el diagnóstico diferencial de insuficiencia
adrenocortical (enfermedad de Addison).
La concentración de ACTH en plasma muestra
una variación diurna con niveles altos durante la
mañana y niveles bajos durante la noche. Por lo
tanto, como con el cortisol, es importante saber
la hora de obtención de la muestra de plasma
para interpretar correctamente los resultados.
Fundamentos del método
Adrenocorticotropic hormone (CLIA) es un
ensayo sandwich para la determinación
cuantitativa de adrenocorticotrofina (ACTH) en
plasma.
En el primer paso se añaden a una cubeta de
reacción, la muestra y las micropartículas
paramagnéticas recubiertas con anticuerpo
anti-ACTH. Luego de la incubación, la ACTH de la
muestra se une a las micropartí culas recubiertas
de anticuerpo anti-ACTH. Las micropartí culas se
capturan magnéticamente y las sustancias sin unir
se eliminan por lavado.
En el segundo paso se añade a la cubeta de
reacción, el conjugado anti-ACTH-fosfatasa
alcalina. Luego de la incubación, el conjugado
se une a la ACTH unida a las micropartí culas
recubiertas con anticuerpo anti-ACTH para
formar un complejo sandwich. Las
v. 000 UR16/10/11 P/N:046-010122-00(1.0)
micropartí culas se capturan magnéticamente y
las sustancias sin unir se eliminan por lavado.
En el tercer paso, se añade la solución de
sustrato (Substrate Solution) a la cubeta de
reacción. La reacción quimioluminiscente
producida por el conjugado se mide como
unidades relativas de luz (RLU). La cantidad de
ACTH presente en la muestra es directamente
proporcional a las RLU generadas durante la
reacción. La concentración de ACTH se
determina mediante una curva de calibración.
Reactivos provistos
Micropartí
culas paramagnéticas recubiertas con
Ra
anticuerpo monoclonal anti-ACTH en buffer TRIS.
Conjugado de anticuerpo monoclonal anti-ACTH y
Rb
fosfatasa alcalina en el buffer MES.
La posición de los componentes del kit se
muestra en la siguiente figura:
Reactivos no provistos
.- ACTH Calibrators
- ACTH Control (L)
- ACTH Control (H)
- Wash Buffer
- Substrate Solution
Estos reactivos son provistos separadamente
por Wiener lab.
Instrucciones para su uso
Los reactivos son listos para usar
Precauciones
- Para uso diagnóstico “in vitro”.
- Mantener el kit de reactivos en posición
vertical para asegurar que no se pierdan
micropartí culas antes del uso.
- No utilizar reactivos de otro origen.
- No utilizar reactivos después de la fecha de
vencimiento.
- No intercambiar reactivos de distintos lotes.
- Todas las muestras de pacientes deben
manipularse como si fueran capaces de
transmitir infección.
- Utilizar los reactivos respetando las
precauciones habituales de trabajo en el
laboratorio bioquí mico.
- Todos los reactivos y las muestras deben
descartarse de acuerdo a la normativa local
vigente.
Estabilidad e instrucciones de
almacenamiento
El kit es estable a 2-8ºC hasta la fecha de
vencimiento indicada en la caja.
1 /2
Material requerido (no provisto)
Analizador de quimioluminiscencia Wiener lab.
CLIA series.
Centrí
fuga refrigerada.
Muestra
Plasma
a) Recolección: obtener la muestra en tubos
de extracción enfriados. Utilizar sólo tubos
plásticos o de vidrio siliconado. No utilizar vidrio
sin siliconar ya que la ACTH podrí a adherirse al
vidrio, provocando resultados erróneos. Luego
de la extracción colocar inmediatamente el tubo
en baño de hielo.
No utilizar muestras fuertemente hemolizadas
ni inactivadas por calor.
b) Aditivos: utilizar EDTA, como
anticoagulante.
c) Centrifugar las muestras y separar el plasma
antes de las dos horas. Utilizar centrí fuga
refrigerada.
d) Estabilidad e instrucciones de
almacenamiento: las muestras deben ser
preferentemente frescas. Si no se procesan
dentro de las 2 horas posteriores a la obtención,
las mismas deben ser congeladas a-20°C o
menos.
Evitar los ciclos de congelado y descongelado.
Procedimiento
Antes de cargar los reactivos en el analizador se
debe invertir suavemente el frasco de reactivos
sin abrir por lo menos 30 veces para
resuspender las micropartí culas sedimentadas
durante el almacenamiento. Realizar una
inspección visual del frasco para asegurar la
resuspensión de las micropartí culas. Si las
mismas continúan adheridas al frasco, seguir
invirtiéndolo hasta su resuspensión completa.
Si aún asílas micropartí culas no se resuspenden,
se recomienda desechar el frasco.
El ensayo requiere 50 μL de muestra. En este
volumen no se incluye el volumen muerto del
contenedor de muestras.
Calibración
El kit Adrenocorticotropic hormone (CLIA)
ha sido estandarizado contra un ensayo ACTH
comercial (CLIA).
La información especí fica de la curva maestra
de calibración estácontenida en el código
bidimensional provisto. Se utiliza junto con los
calibradores para la calibración del lote de
reactivo especí fico. Al realizar la calibración, se
debe escanear primero la información de la
curva maestra de calibración del código
bidimensional en el sistema. A continuación,
utilizar los calibradores a tres niveles. Se
requiere una curva de calibración válida antes
de cualquier prueba de ACTH. Se recomienda
una recalibración cada 4 semanas, cuando se
utilice un nuevo lote de reactivos o los controles
de calidad no se encuentren dentro de los
intervalos especificados. Para obtener
información detallada sobre la calibración,
consulte el manual de funcionamiento del
analizador.
Control de calidad
ACTH Control (L) y ACTH Control (H) de
Wiener lab.
Cálculo de los resultados
El analizador calcula automáticamente la
concentración de analito de cada muestra a
partir de la curva maestra de calibración leí
da
del código bidimensional y un ajuste de la curva
logística de 4 parámetros (4PLC) con las RLU
generadas por los 3 niveles de calibradores. Los
resultados se muestran en pg/mL.
Valores esperados
En un estudio realizado sobre una población de
384 individuos sanos (muestras obtenidas entre
las 7:00 y las 10:00 am) se obtuvo el siguiente
intervalo de referencia:
Categorí
a Número de muestras Percentilo 5-95%
Individuos sanos 384 7,0-65,0 pg/mL
Se recomienda que cada laboratorio establezca
su propio intervalo de referencia.
Limitaciones del procedimiento
El límite superior del ensayo es de 2000 pg/mL.
Se puede determinar cuantitativamente una
muestra con una concentración de ACTH inferior
al límite superior, pero una muestra con una
concentración mayor que el lí mite superior se
informarácomo >2000 pg/mL.
La concentración de ACTH en una muestra
ensayada con distintos kits comerciales, puede
variar debido a diferencias en los métodos de
ensayo, calibración y especificidad de los
reactivos. Los resultados del ensayo se deben
utilizar junto con otros datos, como síntomas,
resultados de otras pruebas, historia clínica,
etc.
Muestras de individuos expuestos a anticuerpos
monoclonales de ratón pueden contener
anticuerpos humanos anti-ratón (HAMA). Estas
muestras pueden mostrar valores falsamente
elevados o bajos con kits que utilicen
anticuerpos de ratones monoclonales. Sin
embargo, no se observaron interferencias
evidentes de HAMA en este ensayo.
Performance
a) Sensibilidad analí
tica: ≤1,0 pg/mL.
b) Rango de medición: 1 - 2000 pg/mL.
c) Especificidad:
- No se observan interferencias por
hemoglobina hasta 500 mg/dL, bilirrubina
hasta 10 mg/dL, triglicéridos hasta 1500 mg/dL,
proteínas totales hasta 6,0 g/dL, factor
reumatoide hasta 200 UI/mL ni anticuerpo
antinuclear.
- No se observóreactividad cruzada significativa
cuando se añadieron al calibrador C0 de ACTH
Calibrators las sustancias indicadas en la tabla
siguiente. Los resultados no mostraron
diferencias de más de 1,0 % en el ensayo de
Español-3
 Wiener lab.
ACTH con los niveles indicados. Referencias Industrial Park.

Concentración Reactividad Criterio de Fabricado para:

Sustancia - Talbot JA, Kane JW, White A. Ann Clin Wiener Laboratorios S.A.I.C.
(pg/mL) cruzada aceptación
Biochem, 2003, 40:453-471. Riobamba 2944
ACTH 1-10 500000 0,01%
2000 Rosario - Argentina
ACTH 11-24 500000 0,00% - Jacobson L. Endocrinol Metab Clin North Am, http://www.wiener-lab.com
β-MSH 500000 0,00% 2005, 34:271-292. Producto Autorizado por A.N.M.A.T.
Β-endorfina 500000 0,01% - Arlt W, Stewart PM. Endocrinol Metab Clin PM-1102-141
Dir. Téc.: Viviana E. Cétola
ACTH 1-17 500000 0,01% North Am, 2005, 34:293-313.
≤ 1% Bioquí mica
ACTH 1-24 500000 0,01%
- Beauregard C, Dickstein G, Lacroix A.
ACTH 18-39 500000 0,01% Endocrinol, 2002, 1:79-94.
ACTH 22-39 500000 0,01%
- Lindsay JR, Nieman LK.. Endocrinol Metab
α-MSH
500000 0,01% Clin North Am, 2005, 34:403-421.
1-13
- Oliver RL, Davis JR, White A. Pituitary, 2003,
d) Exactitud: 6:119-126.
Se usaron dos controles con valores trazables y - Boscato LM, Stuart MC. Clin Chem, 1988,
predefinidos para verificar la exactitud de este
34:27-33.
ensayo. Los resultados demostraron que las
desviaciones relativas eran inferiores a ±10%. - Kricka L. Clin Chem, 2000, 46: 1037-1038.
Los resultados se resumen en la siguiente tabla. - Bjerner J, et al. Clin Chem, 2002, 48:
613-621.
ACTH ACTH
Desví
o - CLSI. EP5-A2: Vol. 24, No. 25, Evaluation of
Muestra medida definida
relativo Precision Performance of Quantitative
(pg/mL) (pg/mL)
Measurement Method; Approved Guideline
Nivel 1 106,94 105,93 0,95%
–Second Edition.
Nivel 2 1009,23 980,65 2,91%

e) Precisión: SÍMBOLOS
La precisión se determinómediante el protocolo
EP5-A2 del ComitéNacional de Estándares de
Laboratorio Clínico (NCCLS). Se probaron dos
C Este producto cumple con los
niveles de controles de calidad por duplicado en requerimientos previstos por la Directiva
dos series independientes por dí a, durante un Europea 98/79 CE de productos sanitarios para
total de 20 días. el diagnóstico "in vitro"

Valor CV P Representante autorizado en la

Muestra medio
CV intra
Inter CV total
Comunidad Europea
ensayo
(pg/ml) ensayo
1 101,89 3,19% 2,13% 3,19%
M Elaborado por
2 1025,82 3,16% 2,41% 3,28%
V Uso diagnóstico "in vitro"
f) Linealidad: la reacción es lineal entre 1,0 y i Consultar instrucciones de uso
2000 pg/mL
U Este lado arriba
g) Correlación:
El kit Adrenocorticotropic hormone (CLIA) l Límite de temperatura (conservar a)
de Wiener lab. se comparócon un kit comercial
de características similares, utilizando 379
muestras. Los datos estadí sticos obtenidos se g Número de lote
muestran en la siguiente tabla.
H Fecha de caducidad
Intervalo de Coeficiente
concentración Pendiente
Interse
de h Número de catálogo
cción
（pg/mL） correlación
1,0~2000 0,9848 2,1948 0,9934
F Riesgo biológico
Cont. Contenido
Presentaciones
- 2 x 50 tests (cód. 1001009)
- 2 x 100 tests (cód. 1001010)
M SHENZHEN MINDRAY BIO-MEDICAL
ELECTRONICS CO., LTD.
Mindray building. Keji 12th Road South. Hi-tech

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