Wiener lab.
AFP
Alpha-fetoprotein (CLIA)
Intended Use
Chemiluminescent immunoassay (CLIA) for
quantitative determination of alpha-fetoprotein
(AFP) in serum or plasma
Summary
Alpha-fetoprotein (AFP) is an embryo-specific
alpha-globulin. It is a single polypeptide chain
glycoprotein with a molecular weight of
approximately 70,000 Daltons. It is the main
protein in fetal circulation as well as albumin.
AFP synthesis occurs mainly in the yolk sac,
liver and gastrointestinal tract of the fetus. It
can be detected in the fetal circulation as early
as 30 days after gestation. It reaches a peak at
about 13 weeks of gestation and gradually
declining thereafter. Elevated AFP levels are
found during pregnancy and in several
malignant diseases. Elevated AFP levels can be
detected in about 80% of patients with hepatic
carcinoma and 50% of patients with germ cell
tumors. It can also be detected in other patients
with gastrointestinal tumors. AFP synthesis is
elevated in liver carcinomas, even though the
corpus carcinosus were very small. This allows
early AFP detection, in conjunction with some
other tests. It has also been discovered that AFP
is elevated in diseases such as acute viral
hepatitis, chronic active hepatitis and cirrhosis,
but not as high as in hepatic carcinoma. The
level of serum AFP in patients with cirrhosis is
usually between 25 and 200 ng/mL. High level
of serum AFP normally accompanies high levels
of transaminases. If AFP level is high while
transaminases level is low, or AFP level is more
than 500 ng/mL, the presence of hepatic
carcinoma is highly possible.
Principle
Alpha-fetoprotein (CLIA) is a sandwich
assay for the quantitative determination of AFP
in serum or plasma.
In the first step, sample, paramagnetic
microparticles coated with anti-AFP antibody
and anti-AFP-alkaline phosphatase conjugate
are added to a reaction cuvette. After incubation,
the sandwich complex formed in the presence of
AFP is magnetically captured. Unbound
substances are removed by successive washes.
In the second step, the Substrate Solution is
added to the reaction cuvette. The
chemiluminescent reaction produced by the
conjugate is measured as relative light units
(RLU). The amount of AFP present in the sample
is directly proportional to the RLU generated
during the reaction. AFP concentration is
determined via a calibration curve.
Provided Reagents
Paramagnetic microparticles coated
Ra with anti-AFP monoclonal antibody in
TRIS buffer.
Rb Monoclonal anti-AFP antibody-alkaline
v. 000 UR16/10/11 P/N:046-010069-00(1.0)
phosphatase conjugate in PBS buffer.
Rc TRIS Buffer.
The position of the kit components is shown in
the following figure:
Non-provided Reagents
.- AFP Calibrators
- Tumor Marker Multi Control (L)
- Tumor Marker Multi Control (H)
- Wash Buffer
- Substrate Solution
These reagents are provided separately by
Wiener lab.
Instructions for Use
The reagents are ready to use.
Warnings
- For "in vitro" diagnostic use.
- Keep the reagent kit in the upright position to
ensure no microparticles have been lost prior to
use.
- Avoid using reagents from another source.
- Avoid using reagents after the expiration date.
- Do not exchange reagents from different lots.
- All patient samples should be handled as if
capable of transmitting infection.
- Use the reagents keeping the usual work
precautions in the clinical laboratory.
- All reagents and samples should be discarded
according to local regulations.
Stability and Storage Instructions
The kit is stable at 2-8°C until the expiration
date shown on the box.
Required material (non-provided)
Wiener lab. CLIA series chemiluminescence
analyzer
Sample
Serum or plasma
a) Collection: obtain the sample in the usual
way.
b) Additives: when using plasma, the use of
EDTA, sodium heparin or lithium heparin as
anticoagulants is recommended.
c) Centrifuge samples and separate serum or
plasma within 2 hours.
d) Stability and storage instructions:
samples should be tested as soon as
possible after sample collection. If testing
is not completed within 8 hours, samples should
be tightly capped and refrigerated at 2-8°C. If
1 /2
testing will be delayed for more than 72 hours,
samples should be frozen at -20°C or below.
Avoid repeated freezing and thawing.
Procedure
Before loading the reagents into the analyzer for
the first time, gently invert the bottle of
unopened reagents at least 30 times to
resuspend microparticle sediments settled
during storage. Visually inspect the bottle to
ensure microparticle resuspension. If they
remain adhered to the bottle, continue inverting
until complete resuspension. If microparticles
are still not resuspended, discard the bottle.
The assay requires 15 μL sample for a single
test. This volume does not include the dead
volume of the sample container.
Calibration
The Alpha-fetoprotein (CLIA) kit has been
standardized according to the WHO
international standard for alpha-fetoprotein
(NIBSC code: AFP).
The specific information on the master
calibration curve is included in the provided
bidimensional code. It is used together with the
calibrators for the calibration of a specific
reagent lot. When performing the calibration,
scan the information from the master
calibration curve from the code into the system
first. Then use the calibrators at three levels.
Valid calibration curve is required before any
AFP test. Recalibration is recommended every 4
weeks or when a new reagent lot is used, or the
quality controls are out of the specified range.
For detailed instructions on calibration, refer to
the analyzer operation manual.
Quality Control Method
Tumor Marker Multi Control (L) and Tumor
Marker Multi Control (H) from Wiener lab.
Calculations
The analyzer automatically calculates the
analyte concentration of each sample from the
master calibration curve read from the code and
a 4-parameter logistic curve fitting (4PLC) with
the relative light units (RLU) generated by the 3
levels of calibrators. The results are shown in
ng/mL.
Conversion factors: ng/mL x 0.83 = IU/mL
IU/mL x 1.21 = ng/mL
Expected Values
In a study of a population of 736 healthy
individuals (345 males and 391 females) the
following reference range was obtained:
Category N 97,5% Percentile
Male 345 < 7.2 ng/mL
Female 391 < 7.4 ng/mL
Total 736 < 7.0 ng/mL
It is recommended that each laboratory
establish its own reference range.
Procedure Limitations
This kit is not intended to be used for the risk
evaluation of trisomy 21.
The upper limit of the assay is 1210 ng/mL. A
sample with AFP concentration lower than the
upper limit can be quantitatively determined,
while a sample with a concentration higher than
the upper limit will be reported as >1210 ng/mL.
AFP concentration in a sample tested with
various commercial kits can vary due to
differences in test methods, calibration and
reagent specificity. The test results should be
used along with other data such as symptoms,
results of other tests, clinical history, etc.
Samples from individuals exposed to mouse
monoclonal antibodies may contain human
anti-mouse antibody (HAMA). These samples
may show either falsely high or low values with
kits using mouse monoclonal antibodies.
However, no obvious interference of HAMA was
observed in this assay.
Performance
a) Analytical sensitivity: ≤0.5 ng/mL.
b) Measuring range: 0.5 to 1210 ng/mL.
c) Specificity:
- Hemoglobin up to 500 mg/dL, bilirubin up to
20 mg/dL, triglycerides up to 520 mg/dL, total
protein up to 10.0 g/dL, rheumatoid factor up to
1500 IU/mL or antinuclear antibody up to 4000
IU/L will not interfere with the assay.
- No significant cross-reactivity was observed
when the substances listed in the table below
were added to the C0 calibrator of AFP
Calibrators. The results showed no more than
2.0 ng/mL in the AFP assay at the levels
indicated below.
Substance Concentration
HCG 1000 mIU/mL
α-1-acid
2 mg/mL
glycoprotein
Transferrin 400 mg/dL
α-1-antitrypsin 500 mg/dL
PRL 50,000 mIU/mL
- Interference tests were performed with
commonly used pharmaceuticals. These
compounds showed less than 10% interference
in the AFP assay at the levels indicated below.
Substance Concentration
Acetaminophen 200 μg/mL
Acetylsalicylic acid 0.50 mg/mL
Cisplatin 100 μg/mL
Ascorbic acid 1000 μg/mL
Cyclophosphamide 25 mg/dL
Vincristine 70 mg/dL
- Calibrator C0 of AFP Calibrators from Wiener
lab. was supplemented with other tumor
markers listed in the following table. No evident
cross-reactivity was observed, since all results
were ≤5,0 ng/mL
English-1
 Wiener lab.
Obtained - Palomaki GE, Hill LE, Knight GJ, et al. Second
Tumor AFP Acceptance Trimester Maternal Serum Alpha-Fetoprotein Contents
Concentration Cont.
Marker Criteria Levels in Pregnancies Associated with
(ng/ml)
Gastroschisis and Omphalocele. Obstet Gynecol
PSA 100 ng/mL 0.00 1988; 71:906-9.
CA 125 1000 IU/mL 0.01 M SHENZHEN MINDRAY BIO-MEDICAL
CA 15-3 100 IU/mL 0.01 Obtained - Gitlin D, Perricelli A, Gitlin GM. Synthesis of ELECTRONICS CO., LTD.
AFP ≤5.0 a-fetoprotein by liver, yolk sac, and Mindray building. Keji 12th Road South. Hi-tech
CA 19-9 1000 IU/mL 0.00
ng/mL gastrointestinal tract of the human conceptus. Industrial Park.
CEA 1000 ng/mL 0.00 Cancer Res 1972; 32: 979.
FERR 1000 ng/mL 4.61 Manufactured for:
- Nelson LH, Bensen J, Burton BK. Outcomes in Wiener Laboratorios S.A.I.C.
Patients with Unusually High Maternal Serum Riobamba 2944
d) Prozone effect: no prozone effect was Alpha-fetoprotein Levels. Am J Obstet Gynecol 2000 Rosario - Argentina
observed up to 120,000 ng/mL AFP. 1987; 157(3):572–5. http://www.wiener-lab.com
e) Accuracy: A.N.M.A.T. Registered product
A sample of WHO International Standard - Taketa K. Alpha-Fetoprotein in the 1990s. En: Cert. Nº
Alpha-fetoprotein (AFP NIBSC code) with Sell SS. Serological cancer markers. Humana Tech. Dir.: Viviana E. Cétola
defined and traceable value was used to verify Press 1992: 31–46, ISBN: 0-89603-209-4. Biochemist
the accuracy of the assay. The results showed
that the relative deviation was less than ± 10%. - Silver HKB, Gold P, Feder S, Freedman SO,
The results are listed in the following table. Shuster J. Radioimmunoassay for human
alpha-fetoprotein. Proc Natl Acad Sci U.S.A.
1973; 70: 526-30.
Defined
Measured AFP Relative
Sample - Perlin E, Engeler JE, Edson M, Karp D, McIntire
AFP (ng/mL) Deviation
(ng/mL) KR, Waldmann TA. The value of serial
WHO AFP 112.64 116.83 -3.59% measurement of both human chorionic
gonadotropin and alpha- fetoprotein for
monitoring germinal cell tumors. Cancer 1976;
f) Precision: 37: 215-9.
Precision was determined by EP5-A2 Protocol of
the National Committee for Clinical Laboratory - Endo Y, Kanai K, Oda T, Mitamura K, Iino S,
Standards (NCCLS). Two levels of quality Suzuki H. Clinical significance of a-fetoprotein in
control were tested in duplicate in two separate hepatitis and liver cirrhosis. Ann NY Acad Sci
runs per day, for a total of 20 days. 1975; 259: 234.

- NCCLS. EP5-A2 Evaluation of precision

Mean CV CV performance of quantitative measurement
Total
Sample intra- inter- method; approved guideline-second edition.
(ng/mL) assay CV
assay 2004.
1 10.32 2.92% 3.17% 4.57%
2 104.22 2.99% 2.52% 3.98%
SYMBOLS
g) Linearity: reaction is linear in the range of
0.5 to 400 ng/mL. C This product fulfills the requirements of the
h) Correlation: European Directive 98/79 EC for "in vitro"
The Alpha-fetoprotein (CLIA) kit from diagnostic medical devices
Wiener lab. was compared with a commercial kit
of similar characteristics, using 1287 samples.
The statistical data obtained are summarized in
P Authorized representative in the
European Community
the following table.

Concentration M Manufactured by:

Interval Correlation
Slope Intercept
(ng/mL)
coefficient V "In vitro" diagnostic medical device
0.13-1476.15 0.949 0.115 0.996
i Consult instructions for use
Wiener lab Provides U This side up
- 2 x 50 tests (code 1001012)
- 2 x 100 tests (code 1001013)
l Temperature limitation (store at)
g Batch code
References
H Use by
- Ruoslahti E, Seppala M. Studies of
carcino-fetal proteins: physical and chemical
properties of human a-fetoprotein. Int. J. h Catalog number
Cancer 1971; 7: 218.
F Biological risks
v. 000 UR16/10/11 P/N:046-010069-00(1.0) 2 /2 English-1
 Wiener lab.
AFP
Alpha-fetoprotein (CLIA)
Uso pretendido
Imunoensaio quimioluminescente (CLIA) para a
determinação quantitativa de alfa-fetoproteí
na (AFP)
em soro ou plasma.
Significado clí
nico
A alfa-fetoproteí na (AFP) éuma alfa-globulina
especí fica do embrião. Éuma glicoproteí na de uma
sócadeia polipeptí dica com um peso molecular de
70.000 daltons. Éa principal proteí na na circulação
fetal, bem como a albumina. A sí ntese da AFP ocorre
principalmente no trato do saco vitelino, fí gado
e gastro-intestinal do feto. Pode ser detectada na
circulação fetal tão precocemente quanto até30 dias
após a gestação. Ela atinge um pico em cerca de 13
semanas de gestação e gradualmente declinando em
seguida. Ní veis séricos elevados de AFP aparecem
durante a gravidez e em diversas doenças malí gnas.
Níveis de AFP elevados podem ser detectados em
cerca de 80% dos pacientes com carcinoma hepático
e 50% dos pacientes com tumores de células
germinativas. Também pode ser detectada em
outros pacientes com tumor gastro-intestinal. A
síntese da AFP éelevada no carcinoma hepático
embora o corpus carcinosus seja muito pequeno.
Assim, o carcinoma hepático pode ser detectado tão
cedo quanto possí vel, por detecção de AFP, em
conjunto com alguns outros testes. A AFP também
foi encontrada em ní veis elevados em doenças tais
como a hepatite viral aguda, hepatite crónica ativa e
cirrose, mas não tão elevada como no carcinoma
hepático. O ní vel de AFP no soro de pacientes com
cirrose égeralmente entre 25 e 200 ng/mL. O
elevado ní vel de AFP geralmente acompanha um
elevado ní vel das transaminases. Se o ní vel da AFP
no soro for elevado, enquanto o ní vel das
transaminases for menor, ou o ní vel da AFP for
superior a 500 ng/mL, éaltamente sugestivo de
carcinoma hepático.
Fundamento do método
O Alpha-fetoprotein (CLIA) éum ensaio
sanduí che para a determinação quantitativa de AFP
em soro ou plasma.
No primeiro passo são acrescentados a uma cubeta
de reação: a amostra, as micropartí culas
paramagnéticas revestidas com anticorpo anti-AFP e
conjugado anti-AFP-fosfatase alcalina. Após a
incubação, o complexo sanduí che formado na
presença de AFP écapturado magnéticamente. As
substâncias não ligadas são removidas por
sucessivas lavagens.
No segundo passo, a solução de substrato (Substrate
Solution) éadicionada àcubeta de reaç ão. A reação
de quimioluminescência produzida por o conjugado é
medida como unidades relativas de luz (RLU). A
quantidade de AFP presente na amostra é
proporcional às RLU geradas durante a reação. A
concentração de AFP édeterminada através de uma
curva de calibração.
v. 000 UR16/10/11 P/N:046-010069-00(1.0)
Reagentes fornecidos
Micropartí
culas paramagnéticas revestidas com
Ra
anticorpo monoclonal anti-AFP em tampão TRIS.
Conjugado de anticorpo monoclonal anti-AFP e
Rb
fosfatase alcalina em tampão PBS.
Rc Tampão TRIS.
A posição de cada componente do reagente é
mostrada na figura:
Reagentes não fornecidos
.- AFP Calibrators
- Tumor Marker Multi Control (L)
- Tumor Marker Multi Control (H)
- Wash Buffer
- Substrate Solution
Estes reagentes são fornecidos por separado pela
Wiener lab.
Instruções de uso
Os reagentes são prontos para uso.
Precauções
- Para uso diagnóstico “in vitro”.
- Manter o kit de reagentes na posição vertical a fim
de garantir que não sejam perdas as micropartí culas
antes do seu uso.
- Não utilizar reagentes de outra origem.
- Não utilizar os reagentes após a data de validade.
- Não intercambiar reagentes de distintos lotes.
- Todas as amostras de pacientes devem ser
manipuladas como se fossem capazes de transmitir
a infecção.
- Todos os reagentes e as amostras devem-se
descartar conforme àregulação local vigente.
- Utilizar os reagentes observando as precauções
habituais de trabalho no laboratório bioquímico.
Estabilidae e instruções de armazenamento
O kit éestável a 2-8°C atéa data de validade
indicada na embalagem.
Material necessário (não fornecido)
Analisador de quimioluminscência Wiener lab. CLIA
series.
Amostra
Soro ou plasma
a) Coleta: obter a amostra da maneira habitual.
1/2
b) Aditivos: se a amostra for plasma é
recomendado o uso de EDTA, heparina lí tica e ou
sódica como anticoagulantes.
c) Centrifugue as amostras e separe o soro ou o
plasma dentro das duas horas.
d) Estabilidade e instruções de
armazenamento: as amostras devem ser
preferívelmente frescas. Se o ensaio não for
realizado dentro das 8 horas posteriores àcoleta, as
amostras devem ser refrigeradas bem fechadas a
2-8ºC. Se o ensaio éadiado por mais de 72 horas, as
amostras devem ser congeladas a -20°C ou menos.
Evite ciclos de congelamento e descongelamento
repetidos.
Procedimento
Antes de carregar os reagentes no analisador pela
primeira vez, devem ser invertidos suavemente por
pelo menos 30 vezes para ressuspender as
micropartículas que se assentaram durante o
armazenamento. Inspecione visualmente o frasco
para assegurar que as micropartí culas foram
ressuspensas. Se as mesmas permanecerem
aderidas ao frasco, continue invertendo atéque as
micropartículas sejam completamente
ressuspendidas. Se as micropartí culas não puderem
ser novamente ressuspensas, recomenda-se não
usar este frasco de reagente. Este ensaio necessita
de 15 μL de amostra para um único teste. Esse
volume não inclui o volume morto do recipiente da
amostra.
Calibração
O kit Alpha-fetoprotein (CLIA) foi padronizado
em conformidade com o Padrão Internacional da
OMS para alfafetoproteí na (código NIBSC: AFP).
A informação especí fica da curva mestre de
calibração écontida no código bidimensional
fornecido. Éusado em conjunto com os calibradores
para a calibração do lote de reagentes especí fico. Ao
realizar a calibração, primeiro digitalize a informação
da curva mestre de calibração a partir do código
bidimensional no sistema, e, em seguida, use os
calibradores em três ní veis. Uma curva de calibração
válida énecessária antes de qualquer teste de AFP. A
recalibração érecomendada a cada quatro semanas,
ou quando um novo lote de reagentes for usado, ou
quando os controles de qualidade estiverem fora do
intervalo especificado. Para instruções detalhadas de
calibração, consulte o manual de operações do
sistema.
Controle de qualidade
Tumor Marker Multi Control (L) e Tumor Marker
Multi Control (H) da Wiener lab.
Cálculo dos resultados
O analisador calcula automaticamente a
concentração do analito de cada amostra na curva
mestre de calibração lida a partir do código
bidimensional, e um ajuste da curva logí stica de 4
parâmetros (4PLC) com as RLU geradas a partir dos
três ní
veis de calibradores. Os resultados são
mostrados em ng/mL.
Fatores de conversão:
ng/mL x 0,83 = UI/mL
UI/mL x 1,21 = ng/mL
Valores esperados
Um estudo realizado sobre uma populaç ão de 736
indiví
duos saudáveis (345 homens e 391 mulheres)
determinou o seguinte intervalo de referência:
Categoria N Percentil 97,5%
Masculino 345 < 7,2 ng/mL
Feminino 391 < 7,4 ng/mL
Total 736 < 7,0 ng/mL
Érecomendável que cada laboratório estabeleça
seu próprio intervalo de referência.
Limitações do procedimento
O kit não édesenvolvido para a avaliação do risco de
trissomia 21.
O limite superior do ensaio é1210 ng/mL. Uma
amostra com uma concentração de AFP menor do
que o limite superior pode ser determinada
quantitativamente, enquanto que uma amostra com
uma concentração maior do que o limite superior
seráreportada como >1210 ng/mL.
A concentração de AFP numa dada amostra,
determinada com ensaios de diferentes fabricantes,
pode variar devido a diferenças nos métodos de
ensaio, calibração e especificidade dos reagentes. Os
resultados do ensaio devem ser utilizados em
conjunto com outros dados, tais como sintomas,
resultados de outros testes, histórico clínico, etc.
Amostras de indiví duos que foram expostos a
anticorpos monoclonais de rato podem conter
anticorpos humanos anti-rato (HAMA). Estas
amostras podem apresentar valores falsamente
elevados ou baixos com kits de ensaio empregando
anticorpos monoclonais de rato. No entanto,
nenhuma interferência evidente de HAMA foi
observada neste ensaio.
Caracterí
sticas de desempenho
a) Sensibilidade analí
tica: ≤0,5 ng/mL.
b) Faixa de medição: 0,5-1210 ng/mL.
c) Especificidade:
- Não foram observadas interferências por
hemoglobina até500 mg/dL, bilirrubina até20
mg/dL, triglicerídeos até520 mg/dL, proteínas totais
até10,0 g/dL, fator reumatóide até1500 UI/mL,
nem anticorpo anti-núcleo até4000 UI/L
- Não foi observada reatividade cruzada significativa
quando foram adicionadas ao calibrador C0 de AFP
Calibrators, as substâncias indicadas na tabela
abaixo. Os resultados não mostraram diferenças de
mais do que 2,0 ng/mL no ensaio de AFP com os
níveis indicados
Substância Concentração
HCG 1000 mUI/mL
α-1 glicoproteí
na ácida 2 mg/mL
Transferrina 400 mg/dL
Português-2
 Wiener lab.
α-1 antitripsina 500 mg/dL
Prolactina 50.000 mUI/L
g) Linearidade: a reação élinear na faixa 0,5-400 C Este produto preenche os requisitos da
ng/mL Diretiva Europeia 98/79 CE para dispositivos
médicos de diagnóstico "in vitro"
- Foram realizadas provas de interferência com h) Correlação:
drogas normalmente utilizadas. Estes compostos
apresentaram interferência inferior a 10% no ensaio
O kit Alpha fetoprotein (CLIA) da Wiener lab. foi
comparado com um kit comercial de caracterí sticas
P Representante autorizado
de AFP aos ní veis indicados a seguir. na Comunidade Européia
semelhantes, utilizando 1287 amostras. Os dados

Composto Concentração
estatísticos obtidos são mostrados na tabela abaixo. M Elaborado por
Acetaminofeno
Ácido acetilsalicí
lico
200 μg/mL
0,50 mg/mL
Intervalo de
Pendent Interseçã
Coeficient
e de
V Uso médico-diagnóstico "in vitro"
concentraçã
Cisplatina 100 ug/mL o (ng/mL)
e o correlaçã i Consultar instrucciones de uso
o
Ácido ascórbico 1000 μg/mL
Ciclofosfamida 25 mg/dL
0,13-1476,15 0,949 0,115 0,996 U Este lado para cima
Vincristina 70 mg/dL
Apresentação
l Limite de temperatura (conservar a)
- O Calibrador C0 de AFP Calibrators da Wiener lab.
foi suplementado com outros marcadores tumorais
- 2 x 50 testes (cód. 1001012) g Número de lote
- 2 x 100 testes (cód. 1001013)
indicados na tabela abaixo. Não foi observada
reatividade cruzada evidente visto que todos os
H Data de validade
resultados foram ≤5,0 ng/mL Referências
h Número de catálogo
- Ruoslahti E, Seppala M. Studies of carcino-fetal
Marcador
Concentração
AFP obtida Critério de proteins: physical and chemical properties of F Risco biológico
tumoral (ng/mL) aceitação human a-fetoprotein. Int. J. Cancer 1971; 7: 218.
PSA 100 ng/mL 0,00 - Palomaki GE, Hill LE, Knight GJ, et al. Second Cont. Conteúdo
CA125 1000 UI/mL 0,01 Trimester Maternal Serum Alpha-Fetoprotein
CA15-3 100 UI/mL 0,01 AFP obtida Levels in Pregnancies Associated with
CA19-9
CEA
1000 UI/mL
1000 ng/mL
0,00
0,00
≤5,0 ng/mL Gastroschisis and Omphalocele. Obstet Gynecol
1988; 71:906-9. M SHENZHEN MINDRAY BIO-MEDICAL
- Gitlin D, Perricelli A, Gitlin GM. Synthesis ELECTRONICS CO., LTD.
FERR 1000 ng/mL 4,61
of a-fetoprotein by liver, yolk sac, and Mindray building. Keji 12th Road South. Hi-tech
gastrointestinal tract of the human conceptus. Industrial Park.
d) Efeito prozona: não foi observado efeito Cancer Res 1972; 32: 979.
Fabricado para:
prozona até120.000 ng/mL de AFP.
- Nelson LH, Bensen J, Burton BK. Outcomes in Wiener Laboratorios S.A.I.C.
Patients with Unusually High Maternal Serum Riobamba 2944
e) Exatidão: Alpha-fetoprotein Levels. Am J Obstet Gynecol 2000 Rosario - Argentina
Uma amostra de Alfafetoproteí na de Padrão 1987; 157(3):572–5. http://www.wiener-lab.com
Internacional da OMS (código NIBSC: AFP) com Producto Autorizado por A.N.M.A.T.
- Taketa K. Alpha-Fetoprotein in the 1990s. Em: Sell
valor rastreável e definido foi utilizado para verificar Cert. Nº
a exatidão deste ensaio. Os resultados mostraram SS. Serological cancer markers. Humana Press Dir. Téc.: Viviana E. Cétola
que o desvio relativo foi inferior a ±10%. Os 1992: 31–46, ISBN: 0-89603-209-4. Bioquí mica
resultados são mostrados na tabela abaixo: - Silver HKB, Gold P, Feder S, Freedman SO,
Shuster J. Radioimmunoassay for human
Desvio alpha-fetoprotein. Proc Natl Acad Sci U.S.A. 1973;
AFP medida AFP definida
Amostra Relativo 70: 526-30.
(ng/mL) (ng/mL)
- Perlin E, Engeler JE, Edson M, Karp D, McIntire KR,
AFP OMS 112,64 116,83 -3,59% Waldmann TA. The value of serial measurement of
both human chorionic gonadotropin and alpha-
f) Precisão: fetoprotein for monitoring germinal cell tumors.
A precisão foi determinada de acordo com o Cancer 1976; 37: 215-9.
Protocolo EP5-A2 do ComitéNacional para Padrões - Endo Y, Kanai K, Oda T, Mitamura K, Iino S, Suzuki
de Laboratório Clínico (NCCLS). Dois níveis de
H. Clinical significance of a-fetoprotein in hepatitis
controles de qualidade foram testados em duplicado
and liver cirrhosis. Ann NY Acad Sci 1975; 259:
em duas séries separadas por dia, por um total de 20
234.
dias
- NCCLS. EP5-A2 Evaluation of precision
performance of quantitative measurement
Valor CV CV
method; approved guideline-second edition.
Amostra médio intra-ensa inter-ensa CV total
2004.
(ng/mL) io io

1 10,32 2,92% 3,17 % 4,57 %

2 104,22 2,99% 2,52 % 3,98 %
SÍMBOLOS

v. 000 UR16/10/11 P/N:046-010069-00(1.0) 2/2 Português-2

 Wiener lab.
AFP
Alpha-fetoprotein (CLIA)
Uso previsto
Inmunoensayo quimioluminiscente (CLIA)
para la determinación cuantitativa de
alfafetoproteí
na (AFP) en suero o plasma
Significación clí nica
La alfafetoproteí na (AFP) es una alfaglobulina
especí fica del embrión. Es una glicoproteí na de
cadena polipeptí dica única con un peso
molecular de aproximadamente 70.000 daltons.
Es la proteína principal de la circulación fetal, así
como la albúmina. La sí ntesis de AFP se produce
principalmente en el saco vitelino, hí gado y
tracto gastrointestinal del feto. Se puede
detectar en la circulación fetal a los 30 dí as de
gestación. Alcanza un pico aproximadamente
a las 13 semanas de gestación y disminuye
gradualmente a partir de ahí . Se encuentran
niveles elevados de AFP durante el embarazo y
en varias enfermedades malignas. Se pueden
detectar niveles elevados de AFP en
aproximadamente un 80% de pacientes con
carcinoma hepático y un 50% de pacientes con
tumores de células germinales. También se
puede detectar en otros pacientes con tumores
gastrointestinales. La síntesis de AFP es elevada
en los carcinomas hepáticos, incluso aunque el
cuerpo del carcinoma sea muy pequeño. Esto
permite una detección temprana de AFP, junto
con algunas otras pruebas. También se ha
descubierto que la AFP es elevada en
enfermedades como hepatitis viral aguda,
hepatitis activa crónica y cirrosis, pero no tan
elevada como en el carcinoma hepático. El nivel
de AFP en suero en pacientes con cirrosis suele
estar entre 25 y 200 ng/mL. El nivel elevado de
AFP normalmente acompaña a un nivel elevado
de transaminasas. Si el nivel de AFP en suero es
elevado mientras que el nivel de transaminasas
es reducido, o bien el nivel de AFP es superior a
500 ng/mL, es muy posible que exista un
carcinoma hepático.
Fundamentos del método
Alpha-fetoprotein (CLIA) es un ensayo
sandwich para la determinación cuantitativa de
AFP en suero o plasma.
En el primer paso se agregan a una cubeta de
reacción: muestra, micropartí culas
paramagnéticas recubiertas con anticuerpo
anti-AFP y conjugado anti-AFP-fosfatasa
alcalina. Luego de la incubación, el complejo
sandwich formado ante la presencia de AFP es
capturado magnéticamente. Las sustancias no
fijadas se eliminan mediante sucesivos lavados.
En el segundo paso, se añade la solución de
sustrato (Substrate Solution) a la cubeta de
reacción. La reacción quimioluminiscente
producida por el conjugado se mide como
unidades relativas de luz (RLU). La cantidad de
AFP presente en la muestra es directamente
proporcional a las RLU generadas durante la
reacción. La concentración de AFP se determina
mediante una curva de calibración.
v. 000 UR16/10/11 P/N:046-010069-00(1.0)
Reactivos provistos
Micropartí
culas paramagnéticas recubiertas de
Ra
anticuerpo monoclonal anti-AFP en buffer TRIS.
Conjugado de anticuerpo monoclonal anti-AFP y
Rb
fosfatasa alcalina en buffer PBS.
Rc Buffer TRIS.
La posición de los componentes del kit se
muestra en la siguiente figura:
Reactivos no provistos
.- AFP Calibrators
- Tumor Marker Multi Control (L)
- Tumor Marker Multi Control (H)
- Wash Buffer
- Substrate Solution
Estos reactivos son provistos separadamente
por Wiener lab.
Instrucciones para su uso
Los reactivos son listos para usar
Precauciones
- Para uso diagnóstico “in vitro”.
- Mantener el kit de reactivos en posición
vertical para asegurar que no se pierdan
micropartí culas antes del uso.
- No utilizar reactivos de otro origen.
- No utilizar reactivos después de la fecha de
vencimiento.
- No intercambiar reactivos de distintos lotes.
- Todas las muestras de pacientes deben
manipularse como si fueran capaces de
transmitir infección.
- Utilizar los reactivos respetando las
precauciones habituales de trabajo en el
laboratorio bioquí mico.
- Todos los reactivos y las muestras deben
descartarse de acuerdo a la normativa local
vigente.
Estabilidad e instrucciones de
almacenamiento
El kit es estable a 2-8ºC hasta la fecha de
vencimiento indicada en la caja.
Material requerido (no provisto)
Analizador de quimioluminiscencia Wiener lab.
CLIA series
Muestra
Suero o plasma
a) Recolección: obtener la muestra de la
1 /2
manera habitual.
b) Aditivos: en caso de utilizar plasma, se
recomienda el uso de EDTA, heparina sódica o
heparina de litio como anticoagulantes.
c) Centrifugar las muestras y separar el suero o
plasma antes de las dos horas.
d) Estabilidad e instrucciones de
almacenamiento: las muestras deben ser
preferentemente frescas. Si no se procesan
dentro de las 8 horas posteriores a la
recolección, deben conservarse bien tapadas y
refrigeradas a 2-8°C. Si el ensayo se posterga
por más de 72 horas, las muestras deben ser
congeladas a-20°C o menos.
Evitar los ciclos de congelado y descongelado.
Procedimiento
Antes de cargar los reactivos en el analizador se
debe invertir suavemente el frasco de reactivos
sin abrir por lo menos 30 veces para
resuspender las micropartí culas sedimentadas
durante el almacenamiento. Realizar una
inspección visual del frasco para asegurar la
resuspensión de las micropartí culas. Si las
mismas continúan adheridas al frasco, seguir
invirtiéndolo hasta su resuspensión completa.
Si aún asílas micropartí culas no se resuspenden,
se recomienda desechar el frasco.
El ensayo requiere 15 μL de muestra. En este
volumen no se incluye el volumen muerto del
contenedor de muestras.
Calibración
El kit Alpha-fetoprotein (CLIA) ha sido
estandarizado de acuerdo con el estándar
internacional de la OMS de alfafetoproteí na
(código NIBSC: AFP).
La información especí fica de la curva maestra
de calibración estácontenida en el código
bidimensional provisto. Se utiliza junto con los
calibradores para la calibración del lote de
reactivo especí fico. Al realizar la calibración, se
debe escanear primero la información de la
curva maestra de calibración del código
bidimensional en el sistema. A continuación,
utilizar los calibradores a tres niveles. Se
requiere una curva de calibración válida antes
de cualquier prueba de AFP. Se recomienda una
recalibración cada 4 semanas, cuando se utilice
un nuevo lote de reactivos o los controles de
calidad no se encuentren dentro de los
intervalos especificados. Para obtener
información detallada sobre la calibración,
consulte el manual de funcionamiento del
analizador.
Control de calidad
Tumor Marker Multi Control (L) y Tumor
Marker Multi Control (H) de Wiener lab.
Cálculo de los resultados
El analizador calcula automáticamente la
concentración de analito de cada muestra a
partir de la curva maestra de calibración leí
da
del código bidimensional y un ajuste de la curva
logística de 4 parámetros (4PLC) con las RLU
generadas por los 3 niveles de calibradores. Los
resultados se muestran en ng/mL.
Factores de conversión:
ng/mL x 0,83 = UI/mL
UI/mL x 1,21 = ng/mL
Valores esperados
En un estudio realizado sobre una población de
736 individuos sanos (345 hombres y 391
mujeres) se obtuvo el siguiente intervalo de
referencia:
Categorí
a N Percentilo 97,5%
Hombre 345 < 7,2 ng/mL
Mujer 391 < 7,4 ng/mL
Total 736 < 7,0 ng/mL
Se recomienda que cada laboratorio establezca
su propio intervalo de referencia.
Limitaciones del procedimiento
El kit no estádiseñado para la evaluación de
riesgo de la trisomí a 21.
El límite superior del ensayo es de 1210 ng/mL.
Se puede determinar cuantitativamente una
muestra con una concentración de AFP inferior
al límite superior, pero una muestra con una
concentración mayor que el lí mite superior se
informarácomo >1210 ng/mL.
La concentración de AFP en una muestra
ensayada con distintos kits comerciales, puede
variar debido a diferencias en los métodos de
ensayo, calibración y especificidad de los
reactivos. Los resultados del ensayo se deben
utilizar junto con otros datos, como síntomas,
resultados de otras pruebas, historia clínica,
etc.
Muestras de individuos expuestos a anticuerpos
monoclonales de ratón pueden contener
anticuerpos humanos anti-ratón (HAMA). Estas
muestras pueden mostrar valores falsamente
elevados o bajos con kits que utilicen
anticuerpos de ratones monoclonales. Sin
embargo, no se observaron interferencias
evidentes de HAMA en este ensayo.
Performance
a) Sensibilidad analí
tica: ≤0,5 ng/mL.
b) Rango de medición: 0,5 - 1210 ng/mL.
c) Especificidad:
- No se observan interferencias por
hemoglobina hasta 500 mg/dL, bilirrubina
hasta 20 mg/dL, triglicéridos hasta 520 mg/dL,
proteínas totales hasta 10,0 g/dL, factor
reumatoide hasta 1500 UI/mL ni anticuerpo
antinuclear hasta 4000 UI/L.
- No se observóreactividad cruzada significativa
cuando se añadieron al calibrador C0 de AFP
Calibrators las sustancias indicadas en la tabla
siguiente. Los resultados no mostraron
diferencias de más de 2,0 ng/mL en el ensayo
de AFP con los niveles indicados.
Sustancia Concentración
HCG 1000 mUI/mL
α-1-glicoproteí
na ácida 2 mg/mL
Transferrina 400 mg/dL
Español-3
 Wiener lab.
α-1-antitripsina 500 mg/dL 400 ng/mL
Prolactina 50.000 mUI/mL C Este producto cumple con los
h) Correlación: requerimientos previstos por la Directiva
- Se llevaron a cabo pruebas de interferencia El kit Alpha-fetoprotein (CLIA) de Wiener lab. Europea 98/79 CE de productos sanitarios para
con fármacos utilizados habitualmente. Estos se comparócon un kit comercial de el diagnóstico "in vitro"
compuestos mostraron una interferencia caracterí sticas similares, utilizando 1287
muestras. Los datos estadí sticos obtenidos se
inferior al 10% en el ensayo de AFP con los
niveles indicados a continuación. muestran en la siguiente tabla. P Representante autorizado en la
Comunidad Europea
Intervalo de Coeficiente
Compuesto Concentración
concentración Pendiente Intersección de
M Elaborado por
Acetaminofeno 200 μg/mL
(ng/mL) correlación
Ácido acetilsalicí
lico 0,50 mg/mL
0,13-1476,15 0,949 0,115 0,996
V Uso diagnóstico "in vitro"
Cisplatina 100 μg/mL
Ácido ascórbico 1000 μg/mL i Consultar instrucciones de uso
Ciclofosfamida 25 mg/dL Presentaciones
Vincristina 70 mg/dL - 2 x 50 tests (cód. 1001012) U Este lado arriba
- 2 x 100 tests (cód. 1001013)
- El calibrador C0 de AFP Calibrators de l Límite de temperatura (conservar a)
Wiener lab. se complementócon otros
marcadores tumorales indicados en la tabla
siguiente. No se observóreactividad cruzada
Referencias g Número de lote
evidente, dado que todos los resultados fueron - Ruoslahti E, Seppala M. Studies of
≤5,0 ng/mL carcino-fetal proteins: physical and chemical
H Fecha de caducidad
properties of human a-fetoprotein. Int. J.
AFP Cancer 1971; 7: 218. h Número de catálogo
Marcador Criterio de
Concentración obtenida
tumoral
(ng/mL)
aceptación - Palomaki GE, Hill LE, Knight GJ, et al. Second F Riesgo biológico
Trimester Maternal Serum Alpha-Fetoprotein
PSA 100 ng/mL 0,00 Levels in Pregnancies Associated with Cont. Contenido
CA 125 1000 UI/mL 0,01 Gastroschisis and Omphalocele. Obstet Gynecol
CA 15-3 100 UI/mL 0,01 AFP obtenida
1988; 71:906-9.
CA 19-9
CEA
1000 UI/mL
1000 ng/mL
0,00
0,00
≤5,0 ng/mL
- Gitlin D, Perricelli A, Gitlin GM. Synthesis of M SHENZHEN MINDRAY BIO-MEDICAL
a-fetoprotein by liver, yolk sac, and ELECTRONICS CO., LTD.
FERR 1000 ng/mL 4,61 gastrointestinal tract of the human conceptus. Mindray building. Keji 12th Road South. Hi-tech
Cancer Res 1972; 32: 979. Industrial Park.
d) Efecto prozona: no se observóefecto - Nelson LH, Bensen J, Burton BK. Outcomes in Fabricado para:
prozona hasta 120.000 ng/mL de AFP. Patients with Unusually High Maternal Serum Wiener Laboratorios S.A.I.C.
Alpha-fetoprotein Levels. Am J Obstet Gynecol Riobamba 2944
e) Exactitud: 1987; 157(3):572–5. 2000 Rosario - Argentina
Se utilizóuna muestra del estándar http://www.wiener-lab.com
- Taketa K. Alpha-Fetoprotein in the 1990s. En: Producto Autorizado por A.N.M.A.T.
internacional de la OMS de alfafetoproteí na Sell SS. Serological cancer markers. Humana
(código NIBSC: AFP) con un valor definido y Cert. Nº
Press 1992: 31–46, ISBN: 0-89603-209-4. Dir. Téc.: Viviana E. Cétola
trazable para verificar la exactitud del ensayo.
Los resultados mostraron que la desviación - Silver HKB, Gold P, Feder S, Freedman SO, Bioquí mica
relativa era inferior a ±10%. Los resultados se Shuster J. Radioimmunoassay for human
muestran en la siguiente tabla. alpha-fetoprotein. Proc Natl Acad Sci U.S.A.
1973; 70: 526-30.
AFP
AFP medida Desví
o - Perlin E, Engeler JE, Edson M, Karp D, McIntire
Muestra definida
(ng/mL)
(ng/mL)
relativo KR, Waldmann TA. The value of serial
measurement of both human chorionic
AFP de la OMS 112,64 116,83 -3,59%
gonadotropin and alpha- fetoprotein for
monitoring germinal cell tumors. Cancer 1976;
f) Precisión: 37: 215-9.
La precisión se determinómediante el protocolo
EP5-A2 del ComitéNacional de Estándares de - Endo Y, Kanai K, Oda T, Mitamura K, Iino S,
Laboratorio Clínico (NCCLS). Se probaron dos Suzuki H. Clinical significance of a-fetoprotein in
niveles de controles de calidad por duplicado en hepatitis and liver cirrhosis. Ann NY Acad Sci
dos series independientes por dí a, durante un 1975; 259: 234.
total de 20 días.
- NCCLS. EP5-A2 Evaluation of precision
CV CV performance of quantitative measurement
AFP media
Muestra intra-ensay inter-ens CV Total method; approved guideline-second edition.
(ng/mL)
o ayo 2004.
1 10,32 2,92% 3,17 % 4,57 %
2 104,22 2,99% 2,52 % 3,98 %
SÍMBOLOS
g) Linealidad: la reacción es lineal entre 0,5 y
v. 000 UR16/10/11 P/N:046-010069-00(1.0) 2 /2 Español-3