UPLC - Arc Use Yuqin 170824

UPLC H-Class/Arc系统简介
使用注意要点及维护
余琴沃特世培训中心
8008202676（固话）/4008202676（手机）
china_support@waters.com
2017年8月24日
©2017 Waters Corporation COMPANY CONFIDENTIAL 1

概览
 UPLC H-Class/Arc系统简介
– 溶剂管理系统
– 样品管理系统
– 检测器
 UPLC H-Class/Arc 系统使用注意要点及维护

– 检测器

概览
– 检测器

– 检测器

H-Class 系统
配置优化的HPLC系列检测器
PDA 、PDA eλ、TUV、
FLR、ELSD、
Qda、TQD、SQD
柱温箱
• 标配：室温+5 到 90°C
样品管理器FTN • 多种选配，例如30cm色
• FTN模式，标配15 µL 针谱柱加热/冷却器
• 100 µL 标配进样注射器
• 样品室可控温
溶剂管理器QSM
• 15,000PSI to 2 mL/min
• 四元溶剂混合
• Auto blend plus功能

Arc 系统
配置优化的HPLC系列检测器
2998 PDA
2489 UV/Vis
2475 FLR
2414 RI
2424 ELSD
ACQUITY QDa 柱温箱选择
•30cm CH,
样品管理器FTN-R
•30cm CHC or CH30-A
• FTN模式，标配30 µL 针
•CH30-A可配置eCord
• 100 µL 标配进样注射器
• 可选降温模式
溶剂管理器QSM-R
• 9,500 PSI to 5 mL/min
• 四元溶剂混合
• Auto blend plus功能
• ArcTM 多流路选择

概览
– 检测器

– 检测器

QSM 流路
Primary Head Accumulator Head 100µl Mixer
Vent Valve
Low Pressure Degasser Chambers

Mixing Manifold
Seal Wash Pump
Gradient Proportioning
Valve Pairs
QSM 泵头流路
Primary Head Transducer to Accumulator Head Transducer
Accumulator Check Valve to Vent Valve
I2V Actuator
Low pressure Inlet GPV Outlet to Low Pressure

Manifold to Primary I2V Inlet Manifold
废液管理器
来自于检测器的废液
来自于进样器的废液
来自于密封清洗的废液

Arc QSM-R 正面
压力传感器排液阀
蓄积泵
主动泵
Arc Multi Flow Path Technology™
Flow Path 1 (1100µL) & 2 (700µL)
单向阀
柱塞清洗
过滤滤芯
比例阀脱气机
Arc排液阀流路示意图

梯度滞后体积
预设梯度
UPLC的滞后
UHPLC /
HPLC的滞后
平衡
0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00

Minutes

什么是系统体积（梯度滞后体积）
低 B
色谱柱
溶剂输送阻尼器
压 A C
系统(泵) 混合器
进样器检测器
梯 D
度比例阀
滞后(系统)体积
注意∶滞后体积包括进样器、阻尼死体积/谱带展宽体积
器/混合器及其管路（无色谱柱时）
滞后(系统)体积
溶剂输送
高系统(泵) 色谱柱
压
梯进样器检测器
溶剂输送
度系统(泵)
梯度混合器
泵的系统体积
多泵
较小的系统体积 = 滞后体积
泵1
混合器
进样器色谱柱检测器
泵2
单泵
较大的系统体积 =滞后体积
B
A C 溶剂输送进样器色谱柱检测器
D
比例阀

不同的系统体积对分离的影响
初始系统
较小体积的系统较大体积的系统
(较短的等度维持时间) (较长的等度维持时间)
多流路选择技术
 流路1: 1100µL
– 相当于普通HPLC 系统的延迟体积
 流路2: 700µL
– 提供更低的系统延迟体积

智能梯度起点
 智能梯度起点，能够更好的在
不同的系统间重现方法，不需
要更改原设梯度。H-class也 0.58
具有此功能
0.56
0.54
0.52
10.136
10.090
10.190
0.50
0.48
0.46
0.44
0.42
0.40
0.38
0.36
0.34
0.32
0.30
AU
0.28
0.26
0.24
0.22
0.20
0.18
10.455
10.400
10.355
0.16
0.14
0.12
0.10
0.08
0.06
0.04
0.02
0.00
10.00 10.25 10.50
Minutes

概览
– 检测器

– 检测器

H-Class样品管理器
FTN (Flow Through Needle)
 可变进样体积
– 标配进样体积为10µL
– 最大扩展至250µL 进样
 进样针在流路中的设计
– 选定体积样品进样
– 更低的交叉污染
 覆盖全范围的进样盘和样品瓶
 支持预加载样品和定量环离线功能

样品管理器 FTN正面流路一览
进样阀管路连接
至定量注射阀
的管路连接
单向阀单元
漏液传感器
连接处
清洗溶剂入口管路
(没有脱气)
样品注射器

进样针及扩展定量环
 进样针
– 标配的不锈钢针， 15µL
– 不锈钢针， 30µL
 选配的扩展环
– 50μL 扩展环
– 100μL 扩展环
– 250μL 扩展环

内部流路
针驱动装置
进样针固定卡槽
不锈钢进样针
针密封清洗
集成装置
R-Carriage
End Plate

样品管理器 FTN示意图-洗针
2 1
3 6
4 5

样品管理器 FTN示意图-载样

样品管理器 FTN示意图-进样

Arc样品管理器 FTN-R
 进样针在流路中的设计
– 全体积样品进样
– 更低的交叉污染
 进样量：0.1-50ul，可以扩展至1000ul
 极低的交叉污染
– < 0.002% Caffeine (UV)
 覆盖全范围的进样盘和样品瓶
 支持预加载样品和定量环离线功能

Arc样品管理器 FTN-R
样品盘切换阀
进样阀，可选配
其他体积Loop环
Syringe，100uL
2x 样品盘（每个进样盘共
48位，可换装96位多孔板）

H-Class色谱柱温控制
 温度范围: 室温+5 到 90°C
 2.1 到 4.6mm，标配可接 100mm 色谱柱（含在线过滤器或预柱）
 标配主动预热装置，预热入口溶剂
 主动预加热器
– 确保温度控制的一致性
– 消除环境对色谱柱温度带来的影响
– 减小系统体积以减少额外的色谱柱谱带展宽
– 兼容之前的被动预加热装置

Arc色谱柱加热选项
CH30-A 30-cm CH and CHC
CH30-A (20 – 90 oC) 30 cm CH (20 – 60 oC)

4.6 mm ID (CH30-A); 30 cm CHC (4 – 65 oC)
Up to 7.8 mm ID (30 cm CH / CHC);
概览
– 检测器

– 检测器

H-Class检测器

Arc系统配套的检测器
2998 PDA 2475 FLR

新的低扩散流通池新的低扩散流通池
2489 UV/Vis 2424 ELS

新的低扩散流通池
2414 RI ACQUITY QDa

概览
– 检测器

– 检测器

开机准备
 准备流动相
 准备柱塞杆清洗(Seal Wash)溶液
– 约10%甲醇或乙腈
 准备洗针溶液
– 针外部由Wash Solvent清洗
 准备清除溶液(Purge Solvent)
– 选用流动相初始比例的溶液，但不含缓冲盐,尽量不含酸或碱
– 灌注样品注射器和进样流路,只有在选用自动稀释时，清除溶液才会被用作稀
释溶剂，进入色谱柱

开机操作
 打开计算机电源,进入Windows操作系统，待其通过自检后
 柱温箱有开关的，打开柱温箱开关、样品管理器、四元溶剂管理器，待仪
器自检通过后，登录Empower软件
 先不要开检测器电源（泵开机准备好后，开流速冲洗流通池，再开检测器）

溶剂管理系统的准备(1)
 灌注密封清洗液(Prime Seal wash)
– 每次开机均需要做此操作，选择 Control>Prime Sealwash，Seal wash出口端
确认有液滴流出

溶剂管理系统的准备(2)
 灌注四元溶剂管理器(Prime Solvent)
– 选择 Control> Prime Solvent，用于排除泵头及管路中的气泡，更换从储液
瓶到泵头之间的溶剂

溶剂管理系统使用注意要点（1）
 液相色谱仪器对流动相的要求
– 使用合适的滤膜过滤，脱气，保存在合适的容器中
– 确认所用的试剂符合仪器要求，与系统匹配，使用正相溶剂需更换正相组件
– 不锈钢系统避免用含卤素离子的缓冲盐
– 防止细菌生长，缓冲盐现配现用，并需考察是否析出，水每天更换
 色谱柱对流动相的要求
– 纯度的要求
o 超纯水
o 有机溶剂：色谱纯，并与填料相匹配
– 缓冲液的pH值，在填料的允许范围内（详见色谱柱说明书）
– 缓冲液（盐）的浓度不要太高（详见仪器或色谱柱说明书）
– 考察流动相对样品的溶解度
o 必要时调整有机溶剂和水的比例
o 最好用流动相溶样

溶剂管理系统使用注意要点（2）
 使用过缓冲液后，停泵前要用水清洗泵头，开启Seal Wash冲洗柱塞杆密
封圈约1分钟，冲洗完毕需将Seal Wash溶剂更换为含一定比例的有机溶
剂。
 泵在停用时，应先用水洗去缓冲盐，然后用纯甲醇充满泵头及管路，并保
存在纯甲醇中。
 使用纯水相流动相的管路滤头要放在纯有机溶剂中灌注后放置。
 更换流动相时，要保证两种溶剂的互溶性，如不互溶，要用一种中间溶剂
过渡。
– 正反相互换时用异丙醇过渡
– 含盐流动相与有机溶剂互换需用纯水或水比例高的有机溶剂过渡。

溶剂管理系统的维护
 整套系统建议定期做PM ，更换易耗品，清洁仪器，尤其是各模块的进风
口和出风口。
 溶剂管理系统的维护
– 清洗或更换溶剂滤头，灌注系统冲洗管路（特别是需脱气的管路）
– 清洗或更换单向阀
– 更换密封圈，柱塞杆

溶剂管理系统的维护（1）
 压力波动或不出液
– 清洗或更换溶剂滤头，灌注系统冲洗管路
o Arc溶剂滤头（P/N 700010196）， QSM溶剂滤头（P/N 700003616/Bio
700005378），可用各25%的水、甲醇、异丙醇、乙腈混合溶液超声清洗约15
分钟，可加入适量甲酸。
– 检查单向阀
o 用异丙醇灌注、超声清洗或更换单向阀。 QSM-R主动泵单向阀:P/N 700010664，
收集器单向阀P/N 700005164；QSM主动泵单向阀阀芯P/N 700005165，Bio
700005414；收集器被动单向阀P/N 700005164, Bio 700005415；
溶剂滤头 Arc主动泵单向阀 H-Class/Arc收集器单向阀 H-Class主动泵单向阀

 压力波动或不出液（续2）
– Arc主动泵单向阀前的滤芯脏，拆下来超声清洗或更换。
– H-Class比例阀出口滤芯脏，拆下来超声清洗或更换，P/N 700005173/Bio
700005419。
Arc滤芯 H-class比例阀出口滤芯

 压力高，排查方法从流路后面往前追段拧开排查。泵可能堵塞的部分：
– Arc path1或path2堵，反冲或更换。path1 P/N 700010589, path2 P/N
700010590
– QSM泵出口混合器堵，建议直接更改，P/N 700005119/Bio700005228。
QSM泵出口混合器

 压力波动、偏低
– 泵部分判断是否漏液的方法：在有一定压力情况下，观察seal wash管路废液
流出情况，如果持续有液体流出，则可能泵头漏液
– 除此，还可以通过做渗漏测试或测流速来确认
 确认泵头漏液，建议报修，请工程师上门更换密封圈、柱塞杆。
– QSM-R：密封圈P/N 700010663，柱塞杆P/N 700010661。
– QSM：密封圈P/N 700002599/Bio 700005418，柱塞杆P/N 700002600。

QSM 溶剂管理器流路图

渗漏测试
 QSM渗漏测试
– 用甲醇充分灌注系统，并装上色谱柱冲洗系统最少15min。
– 控制台—四元溶剂管理器—维护—渗漏测试—将压力限制设置为平时使用时最高
压力值，选择用甲醇灌注的流路，结束点选择排放阀。

渗漏测试
 渗漏测试结束后，查看测试报告，显示渗漏测试是否通过。

概览
– 检测器

– 检测器

灌注样品管理器
 选择 Control> Prime ，灌注进样针和样品注射器
– 选择 “ Wash Solvent”，建议设定时间为60秒以上
– 选择 “ Purge Solvent”，设定15个循环
– 单击 OK，当系统状态是 “Idle(待机)”，就表示灌注已经完成

样品管理系统使用注意要点（1）
 样品瓶
– 使用合适的样品瓶，设置正确的样品板类型和位置
– 使用不当往往会出现进样针故障
– 造成定量不准的重要因素
– 色谱图质量不佳的影响因素
– 测试样品与样品瓶的兼容性
– 一些化合物可能会与样品瓶作用，或者吸附在样品瓶表面
 瓶盖
– LectraBondTM 盖垫一体,不使用化学剂和粘合剂（电子焊接法），更小的污染可
能
– 有预开口设计

 样品
– 样品瓶中的样品量不能太少，保证能取到样品。也不要装得太满，应留有一定的
空隙
– 使用内衬管(Insert)时应设定合适的针头高度
– 样品必须能溶于流动相，建议用流动相试溶解度，避免进样时样品在流动相中析
出堵塞管路和色谱柱
– 建议使用流动相溶解样品，尤其是UPLC 系统，避免溶剂效应导致峰形异常。
– 样品溶液要过滤除去微粒及杂质
– 了解样品对色谱柱的基质/填料是否有破坏作用

 进样器的清洗
– 清洗进样针，防止交叉污染
– 清洗注射器，排气泡，使进样重复性更好
– 建议上述两种溶液不含盐，尽量不含酸或碱
 洗针溶剂根据流动相（样品）的不同应有不同
流
动
相洗针溶
剂
缓
冲
溶
液
，反
相5
0
%
水∶5
0
%甲
醇
纯
缓
冲
溶液 1
0
0%
水
非
水
溶
液
，反
相 1
0
0
%甲
醇
正
相流动相
G
P
C 流
动相
离
子
交换对
离
子试
剂的
水溶
液

Arc样品管理系统的维护
 样品管理系统的维护进样针
– 洗针，洗注射器
 样品管理器可能堵塞的配件
– 进样器处堵塞，冲洗或报修针座
o 进样针 P/N 700005279、
o 针座P/N 405011492、
o 底座管路P/N 700010726。
六通阀
o 六通阀 P/N 700006057。

H-Class样品管理系统的维护
 SM-FTN可能堵塞的部件及处理方法
– 在线过滤器堵，P/N 205000343
o 取下超声清洗筛板或者更换
– 进样器处堵塞，冲洗或报修
o 进样针组件 P/N 700005215/Bio 700005421、针座P/N 405011492、
o 底座管路P/N 700005234/Bio 700005682 。
o 六通阀 P/N 700005236/Bio 700005407。
– 低压部分堵塞：样品液相超压
o 六通阀或管路堵，压力传感器故障。

H-Class样品管理器流路图
Wash Purge
Solvent Solvent

概览
– 检测器

– 检测器

检测器的准备
 确保流通池中充满溶剂并且没有气泡，如果流通池中有气泡，检测器可能
不能通过自检。
 打开检测器电源。检测器进行一系列自检，指示灯会不停地闪烁，初始化
大概需要2分钟。灯预热大概需要5分钟。
 当检测器完成自检，指示灯常绿不闪烁时，通过控制台来重设检测器。

检测器需要注意的事项
 检测器串联使用时，将耐压低的检测器连接在流路最后，检测器耐压在
流通池上有标识。
 只有超过4h以上不使用时，建议关闭检测器的灯。
 选择数据采集速率要保证峰上有25-50个数据点。
 根据方法需要选择初始的数字滤波常数，假如速度更重要则从FAST开
始。假如灵敏度更重要则从NORMAL开始
 一旦方法开发完毕再来优化数字滤波常数以兼顾灵敏度和分离度

UV检测器维护
 拆卸灯
1. 关闭检测器电源并拔下电源线
2. 熄灭灯后，使其冷却至少30分钟
3. 断开灯的电源线
4. 松开固定灯的两个螺丝
5. 从灯室中取出灯装置
注意：灯气体处于微负压状态下,为防
止玻璃碎片飞溅，在处理灯时应谨慎,
并请佩戴护目镜。
在处理旧灯之前将其置于新灯的包装材
料中以使其得到合适的缓冲。

UV检测器换灯
 记录新灯序列号---2489检测器
1. 检测器预热后，按<DIAG>键
2. 按<4>,lamp display & keypad(灯、显示屏和键盘)。
3. 按<1>，Change lamp（更换灯）。提示：执行此步骤时，请务必输入9位
灯序列号，而不是输入灯的部件号。
4. 在活动字段中输入新灯的9位序列号。
5. 按<Enter>键存储序列号并移动到 Install date（安装日期）字段
6. 从选择列表中选择月份，然后按两次<Enter>键更新月份，并选择下一指定<
日>的字段
7. 指定安装灯时的日期，然后按<Enter>键输入日期，并移到下一指定年份的字
段

UV检测器换灯
 记录新灯序列号—2489检测器（续）
8. 指定年份（仅后两位数字），然后按<Enter>键更新年份并选择 Hours（小
时）字段。Hours（小时）字段为可选字段，如果使用已记录使用小时的灯，
则输入所使用的小时；如果是新灯，输入0
9. 按<Home>键
10.出现“OK to store”（确定要保存）消息后，按<Enter>保存序列号和安装
日期，或按<Cancel>取消输入
11.出现确认消息后，按<Enter>
12.重启检测器电源，可以正常使用

UV检测器换灯
 记录新灯序列号—2998检测器
1. 在控制台中，选择维护>更换灯
2. 单击“新灯”
3. 键入新灯的序列号(参阅灯连接器线上附加的标签)，单击 “确定”

UV检测器查看能量
 查看灯能量—2489检测器
1. 用甲醇或水冲洗流通池约30分钟
2. 在面板上输入波长230nm
3. 点击<Diag>进入诊断界面
4. 选择<2 >Sample & ref energy
5. 查看sample和Ref能量值，根据
经验,如果样品能量低于参比能量
的70%，建议依次用水-甲醇-异
丙醇清洗流通池
230

UV检测器查看能量
 查看灯能量—2998检测器
1. 用甲醇或水冲洗流通池约30分钟
2. 启用仪器控制台>PDA检测器，点击维护>读取能量
3. 将“波长”修改为约230nm
4. 点击”读取”，”数值”显示的即为灯能量值

小结
 熟悉仪器使用需注意的要点，养成良好的操作习惯
 制定预防维护计划并严格执行
 定期测试系统性能，例如使用startup solution测试或测柱效
 了解仪器原理，遇到问题时，合理的故障排除步骤，能更高效的解决问题
 记录问题及解决方案，供日后参考
*本内容中配件的货号请在购买时再次确认！

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UPLC H-Class/Arc系统简介

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Low Pressure Degasser Chambers

Low pressure Inlet GPV Outlet to Low Pressure

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©2017 Waters Corporation COMPANY CONFIDENTIAL 11

0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00

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©2017 Waters Corporation COMPANY CONFIDENTIAL 14

©2017 Waters Corporation COMPANY CONFIDENTIAL 16

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CH30-A (20 – 90 oC) 30 cm CH (20 – 60 oC)

 UPLC H-Class/Arc 系统使用注意要点及维护

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©2017 Waters Corporation COMPANY CONFIDENTIAL 31

2998 PDA 2475 FLR

2489 UV/Vis 2424 ELS

2414 RI ACQUITY QDa

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©2017 Waters Corporation COMPANY CONFIDENTIAL 42

©2017 Waters Corporation COMPANY CONFIDENTIAL 43

– QSM：密封圈P/N 700002599/Bio 700005418，柱塞杆P/N 700002600。

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o 进样针 P/N 700005279、