‫ﻟﻤﺰﻳﺪ ﻣﻦ ﺩﺭﻭﺱ ﺍﻟﺘﻤﺎﺭﻳﻦ ﺍﻻﻣﺘﺤﺎﻧﺎﺕ ‪ ...

‬ﻣﻮﻗﻊ ﻗﻠﻤﻲ‬
‫ﻋﻨﺎﺻﺮ اﻹﺟﺎﺑﺔ‬
‫ﺗﻤﺮﯾﻦ ‪ :1‬ﺗﻌﺎﻟﺞ ﺑﻌﺾ أﺷﻜﺎل ﻣﺮض اﻟﺴﻜﺮي ﺑﻮاﺳﻄﺔ ﺣﻘﻦ اﻟﻤﺮﯾﺾ ﺑﺎﻷﻧﺴﻮﻟﯿﻦ ﻋﺪة ﻣﺮات ﻓﻲ اﻟﯿﻮم‪ .‬وھﺬا ﯾﺘﻄﻠﺐ ﺗﻮﻓﯿﺮ ﻛﻤﯿﺎت ھﺎﺋﻠﺔ‬
‫ﻣﻦ اﻷﻧﺴﻮﻟﯿﻦ‪ ،‬اﻟﺸﯿﺊ اﻟﺬي دﻓﻊ اﻟﻌﻠﻤﺎء إﻟﻰ اﻟﺘﻔﻜﯿﺮ ﻓﻲ إﻧﺘﺎج اﻷﻧﺴﻮﻟﯿﻦ ﺑﻔﻀﻞ اﻟﮭﻨﺪﺳﺔ اﻟﻮراﺛﯿﺔ‪ .‬ﺗﻮﺿﺢ اﻟﻮﺛﯿﻘﺔ ‪ 1‬أھﻢ ﻣﺮاﺣﻞ اﻟﺘﻘﻨﯿﺔ‬
‫ﺍﻟﻤﺭﺤﻠﺔ ‪A‬‬ ‫اﻟﻤﻌﺘﻤﺪة ﻓﻲ إﻧﺘﺎج ھﺬا اﻟﮭﺮﻣﻮن‪.‬‬
‫ﻋﺯل ‪L'ARNm‬‬ ‫‪ – 1‬ﺣﺪد اﻟﺪور اﻟﺬي ﯾﻠﻌﺒﮫ ﻛﻞ ﻣﻦ اﻟﻌﻨﺼﺮﯾﻦ ‪ 1‬و ‪ 2‬ﻓﻲ ھﺬه اﻟﺘﻘﻨﯿﺔ‪.‬‬
‫‪ -‬دور اﻟﻌﻨﺼﺮ ‪ = 1‬اﻟﺒﻼﺳﻤﯿﺪ‪ :‬ﻧﺎﻗﻞ ﻟﻠﻤﻮرﺛﺔ اﻟﻤﺮﻏﻮﺑﺔ‪.‬‬
‫‪ -‬دور اﻟﻌﻨﺼﺮ ‪ = 2‬إﯾﺸﯿﺮﯾﺸﯿﺎ ﻛﻮﻟﻲ‪ :‬ﺧﻠﯿﺔ ﻣﻀﯿﻔﺔ ﻟﻠﻤﻮرﺛﺔ اﻟﻤﺮﻏﻮﺑﺔ‪.‬‬
‫ﺒﻨﻜﺭﻴـــﺎﺱ‬ ‫‪AUC‬‬ ‫ﺍﻟﻤﺭﺤﻠﺔ ‪B‬‬ ‫‪ - 2‬وﺿﺢ ﻛﯿﻔﯿﺔ إﻧﺠﺎز ﻛﻞ ﻣﻦ اﻟﻤﺮﺣﻠﺘﯿﻦ ‪ B‬و ‪.C‬‬
‫‪T AG‬‬ ‫ﻨ ﺴ ﺦ ‪L'ADN‬‬ ‫‪ -‬ﻹﻧﺠﺎز اﻟﻤﺮﺣﻠﺔ ‪:B‬‬
‫* ﻧﻨﺴﺦ ﺷﺮﯾﻂ ‪ L’ARNm‬اﻟﻤﺴﺘﺨﻠﺺ إﻟﻰ ﺷﺮﯾﻂ ‪ ADNc‬ﻣﻜﻤﻞ‬
‫‪ATC‬‬ ‫ﻓﻨﺤﺼﻞ ﻋﻠﻰ ‪ ADN‬أﺣﺎدي اﻟﻠﻮﻟﺐ‪ ،‬ﯾﺘﻢ اﺳﺘﺨﺪام أﻧﺰﯾﻢ اﻟﻨﺎﺳﺨﺔ اﻟﻌﻜﺴﯿﺔ‬
‫‪T AG‬‬
‫‪1‬‬ ‫ﺧﻼل ﻋﻤﻠﯿﺔ اﻻﺳﺘﻨﺴﺎخ اﻟﻌﻜﺴﻲ ھﺬه‪.‬‬
‫ﺍﻟﻤﺭﺤﻠﺔ ‪C‬‬ ‫* ﻧﻨﺴﺦ اﻟﺸﺮﯾﻂ اﻟﺜﺎﻧﻲ ﻟـ ‪ L’ADN‬ﻓﻨﺤﺼﻞ ﻋﻠﻰ ‪ ADN‬ﺛﻨﺎﺋﻲ اﻟﻠﻮﻟﺐ‪،‬‬
‫ﺘﻭﻅﻴــﻑ‬
‫ﺍﻟﻤﺴــﺘﻌﻤﺭﺍﺕ‬ ‫ﯾﻤﺜﻞ اﻟﻤﻮرﺛﺔ اﻟﻤﺮﻏﻮﺑﺔ‪.‬‬
‫ـﻰ‬‫ـﺔ ﻋﻠـ‬‫ﺍﻟﻤﺤﺘﻭﻴـ‬ ‫– ﻹﻧﺠﺎز اﻟﻤﺮﺣﻠﺔ ‪:C‬‬
‫ﺍﻟﻤﻭﺭﺜﺔ ﺍﻟﻤﺭﻏﻭﺒــﺔ‬
‫‪2 E.Coli‬‬ ‫ﻜﻤﻌﺎﻤل ﻤﺼﻐﺭﺓ‬ ‫‪ +‬ﻧﻔﺘﺢ اﻟﺒﻼﺳﻤﯿﺪ )ﺑﻌﺪ ﻋﺰﻟﮫ( ﺑﻮاﺳﻄﺔ أﻧﺰﯾﻢ ﻓﺼﻞ‪.‬‬
‫‪ +‬ﻧﺪﻣﺞ اﻟﻤﻮرﺛﺔ اﻟﻤﺮﻏﻮﺑﺔ واﻟﻤﻌﺰوﻟﺔ ﻓﻲ اﻟﺒﻼﺳﻤﯿﺪ اﻟﻤﻔﺘﻮح‪ ،‬ﻧﻮﻇﻒ ﻟﻠﺮﺑﻂ ﻹﻨﺘــﺎﺝ ﺍﻷﻨﺴــﻭﻟﻴﻥ‬
‫ﺍﻟﺒﺸــﺭﻱ‬ ‫أﻧﺰﯾﻤﺎ ﻧﻮﻋﯿﺎ ﯾﺴﻤﻰ أﻧﺰﯾﻢ اﻟﺮﺑﻂ‪ ،‬ﻓﻨﺤﺼﻞ ﻋﻠﻰ ﺑﻼﺳﻤﯿﺪ ھﺠﯿﻦ = ﺑﻼﺳﻤﯿﺪ ﻣﻌﺎد‬
‫ـﺔ ‪1‬‬‫ﺍﻟﻭﺜﻴﻘــ‬ ‫اﻟﺘﺮﻛﯿﺐ‪.‬‬
‫‪ – 3‬اذﻛﺮ إﺟﺮاء آﺧﺮ ﯾﻤﻜﻦ اﻋﺘﻤﺎده ﻟﺘﻌﻮﯾﺾ اﻟﻤﺮﺣﻠﺘﯿﻦ ‪ A‬و ‪.B‬‬
‫ﯾﻤﻜﻦ ﻋﺰل اﻟﻤﻮرﺛﺔ اﻟﻤﺮﻏﻮﺑﺔ ﻣﺒﺎﺷﺮة ﺑﺘﻘﻄﯿﻊ ‪ ADN‬اﻟﺨﻠﯿﺔ اﻟﻤﺎﻧﺤﺔ‪ ،‬ﺑﺪل اﻟﻤﺮور ﻋﺒﺮ ‪.L’ARNm‬‬
‫‪ – 4‬ﺣﺪد اﺳﻢ اﻷﻧﺰﯾﻤﺎت اﻟﻤﺘﺪﺧﻠﺔ ﺧﻼل اﻟﻤﺮﺣﻠﺔ ‪.C‬‬
‫ﺻﻨﻔﯿﻦ ﻣﻦ اﻷﻧﺰﯾﻤﺎت ﯾﺘﻢ اﺳﺘﺨﺪاﻣﮭﻤﺎ ﺧﻼل ھﺬه اﻟﻤﺮﺣﻠﺔ‪:‬‬
‫‪ -‬أﻧﺰﯾﻢ ﻓﺼﻞ ﻧﻮﻋﻲ‪ ،‬ﺑﮫ ﯾﺘﻢ ﻗﻄﻊ )ﻓﺘﺢ( اﻟﺒﻼﺳﻤﯿﺪ ﻓﻲ ﻣﻮاﻗﻊ ﺟﺪ ﻣﺤﺪدة‪.‬‬
‫‪ -‬أﻧﺰﯾﻢ رﺑﻂ ﻧﻮﻋﻲ‪ :‬ﺑﮫ ﯾﺘﻢ اﻟﺮﺑﻂ ﺑﯿﻦ اﻟﻤﻮرﺛﺔ اﻟﻤﺮاد ﺗﻮﻇﯿﻔﮭﺎ واﻟﺒﻼﺳﻤﯿﺪ اﻟﻨﺎﻗﻞ‪.‬‬
‫‪ – 5‬ﺑﯿﻦ ﻟﻤﺎذا ﺗﻮﺻﻒ اﻟﺒﻜﺘﯿﺮﯾﺎ اﻟﻤﺤﺼﻞ ﻋﻠﯿﮭﺎ ﻓﻲ ﻧﮭﺎﯾﺔ اﻟﺘﺠﺮﺑﺔ ﺑﺄﻧﮭﺎ ﻛﺎﺋﻨﺎت ﻣﻌﺪﻟﺔ )ﻣﻐﯿﺮة( وراﺛﯿﺎ )‪.(OGM‬‬
‫ﺗﻜﺘﺴﺐ اﻟﺒﻜﺘﯿﺮﯾﺎ اﻟﻤﻀﯿﻔﺔ )‪ (E coli‬ﻓﻲ ھﺬا اﻟﻤﺜﺎل ﺻﻔﺔ وراﺛﯿﺔ ﺟﺪﯾﺪة )إﻧﺘﺎج اﻷﻧﺴﻮﻟﯿﻦ(‪ ،‬وھﻲ ﺻﻔﺔ ﻟﻢ ﺗﻜﻦ ﺗﻤﺘﻠﻜﮭﺎ ﻓﯿﻤﺎ ﻗﺒﻞ‪.‬‬
‫أﺣﺪث ھﺬا اﻟﺘﻐﯿﺮ ﺑﻌﺪ إدﻣﺎج ﻣﻮرﺛﺔ اﻷﻧﺴﻮﻟﯿﻦ ﻓﻲ اﻟﺪﺧﯿﺮة اﻟﻮراﺛﯿﺔ ﻟﮭﺬه اﻟﺒﻜﺘﯿﺮﯾﺎ ﻟﺪى ﺗﻌﺘﺒﺮ ﻛﺎﺋﻨﺎت ﻣﻌﺪﻟﺔ وراﺛﯿﺎ‪:‬‬
‫‪Organismes génétiquement modifiés = OGM‬‬

‫ﺗﻤﺮﯾﻦ ‪ 2‬ﯾﻤﺜﻞ اﻟﺸﻜﻞ "أ" ﻣﻦ اﻟﻮﺛﯿﻘﺔ ‪ 2‬ﻗﻄﻌﺔ اﻟﺼﺒﻐﻲ اﻟﺤﺎﻣﻞ ﻟﻠﻤﻮرﺛﺔ اﻟﻤﺮاد ﻧﻘﻠﮭﺎ ﻓﻲ إﺣﺪى ﺗﻄﺒﯿﻘﺎت اﻟﮭﻨﺪﺳﺔ اﻟﻮراﺛﯿﺔ وﯾﻤﺜﻞ اﻟﺸﻜﻞ‬
‫"ب" ﺟﺰءا ﻣﻦ اﻟﺒﻼﺳﻤﯿﺪ اﻟﻤﺮﻏﻮب ﺗﻮﻇﯿﻔﮫ أﻣﺎ اﻟﺸﻜﻞ "ج" ﻓﯿﻤﺜﻞ ﻧﻮﻋﯿﻦ ﻣﻦ أﻧﺰﯾﻤﺎت اﻟﻔﺼﻞ اﻟﻤﺨﺘﺼﺔ ﻓﻲ ﻗﻄﻊ ﻣﻮاﻗﻊ ﻣﺤﺪدة ﻣﻦ ﺟﺰﯾﺌﺔ‬
‫‪.L’ADN‬‬
‫ﺍﻟﻭﺜﻴﻘـــﺔ ‪2‬‬ ‫ﺍﻟﻤﻭﺭﺜﺔ ﺍﻟﻤﺭﻏﻭﺒــﺔ‬ ‫"‬‫ﺃ‬ ‫"‬ ‫ـﻜل‬‫ﺍﻟﺸـ‬ ‫‪ - 1‬ﺣﺪد أﻧﺰﯾﻢ اﻟﻔﺼﻞ اﻟﻨﻮﻋﻲ ﻟﻌﺰل ھﺬه‬
‫ﺍﻟﺸــﻜل "ﺏ"‬ ‫‪CGGATCCAAA CG‬‬ ‫‪GAGATGGATCCA‬‬ ‫اﻟﻤﻮرﺛﺔ اﻟﻤﺮﻏﻮﺑﺔ‪ ،‬وﻟﻔﺘﺢ اﻟﺒﻼﺳﻤﯿﺪ ﻋﻠﻞ‬
‫‪GCCTAGGTT T GC‬‬ ‫‪CTCTACCTAGGT‬‬ ‫دواﻋﻲ ھﺬا اﻻﺧﺘﯿﺎر‪.‬‬
‫اﻷﻧﺰﯾﻢ اﻟﺬي ﯾﻤﻜﻦ اﺳﺘﺨﺪاﻣﮫ ﻟﻘﻄﻊ ﻛﻞ ﻣﻦ‬
‫ـﻊ ﺒــﺄﻨﺯﻴﻡ ‪Bam H1‬‬ ‫ـﻊ ﺍﻟﻘﻁـ‬
‫ﻤﻭﺍﻗـ‬ ‫اﻟﻤﻮرﺛﺔ واﻟﺒﻼﺳﻤﯿﺪ ھﻮ ‪ ،BamH1‬ﺣﯿﺚ‬
‫ﯾﻘﻄﻊ ﻣﺘﺘﺎﻟﯿﺔ ﻣﻦ اﻟﻨﯿﻜﻠﯿﻮﺗﯿﺪات ﺗﻮﺟﺪ ﻓﻲ‬
‫‪BamH1‬‬ ‫ـﺩ‬‫ﺍﻟﻘﻭﺍﻋـ‬ ‫ـﺔ‬‫ﻤﺘﺘﺎﻟﻴـ‬ ‫ﺍﻟﺸــﻜل "ﺝ" ﺃﻨﺯﻴﻤﺎﺕ‬ ‫أﻣﺎاﻷﻧﺰﯾﻢ‬ ‫ﺣﺪودي اﻟﻤﻮرﺛﺔ اﻟﻤﺮﻏﻮب ﻧﻘﻠﮭﺎ‪.‬‬
‫ـﻰ‬
‫ـﻡ ﻋﻠـ‬‫ـﺘﻲ ﻴﺘـ‬ ‫ﺍﻟـ‬ ‫‪ HaeIII‬ﻓﻼ ﯾﻤﻜﻦ أن ﯾﻘﻄﻊ ﻓﻲ ﺣﺪود ھﺬه‬
‫ﻤﻭﺍﻗﻊ ﺍﻟﻔﺼــل ﻤﺴﺘﻭﺍﻫﺎ ﺍﻟﻘﻁــﻊ‬
‫ـﻊ‬
‫ﺍﻟﻘﻁـ‬ ‫اﻟﻤﻮرﺛﺔ ﻧﻈﺮا ﻟﻨﻮﻋﯿﺔ ﻗﻄﻌﮫ واﻟﻐﯿﺮ اﻟﻤﺘﻮﻓﺮة‬
‫‪G G CC‬‬ ‫‪HaeIII‬‬ ‫ﻓﻲ ھﺬه اﻟﺤﺎﻟﺔ‪.‬‬
‫‪G GATCC‬‬ ‫‪BamH1‬‬ ‫‪ – 2‬ﺣﺪد ﺑﻮاﺳﻄﺔ ﻗﻠﻢ ﻣﻮاﻗﻊ اﻟﻘﻄﻊ ﺑﻔﻌﻞ ھﺬا‬
‫اﻷﻧﺰﯾﻢ اﻟﻤﺨﺘﺎر‪ .‬اﻧﻈﺮ اﻟﻮﺛﯿﻘﺔ‬
‫‪ – 3‬ﻋﺎدة ﻣﺎ ﻧﺴﺘﺨﺪم ﻧﻔﺲ أﻧﺰﯾﻢ اﻟﻔﺼﻞ ﻟﻘﻄﻊ ﻛﻞ ﻣﻦ اﻟﻤﻮﺛﺔ اﻟﻤﺮﻏﻮﺑﺔ واﻟﺒﻼﺳﻤﯿﺪ‪ :‬ﺑﺮر ﻣﻦ ﺧﻼل ھﺬا اﻟﻤﺜﺎل أھﻤﯿﺔ ھﺬا اﻻزدواج‪.‬‬
‫ﺗﺘﻤﯿﺰ أﻧﺰﯾﻤﺎت اﻟﻔﺼﻞ ﺑﻘﻄﻊ راﺑﻄﺔ ﻣﺤﺪدة ﻓﻲ ﺷﺮﯾﻂ ‪ ،L’ADN‬وﺑﺬﻟﻚ ﺗﺤﺪث ﺗﻘﻄﯿﻌﺎت ﻣﺘﻌﺮﺟﺔ )‪(en zig-zag‬‬
‫ﺑﺤﯿﺚ ﺗﺘﺮك أﻃﺮاﻓﺎ ﻗﺼﯿﺮة أﺣﺎدﯾﺔ اﻟﻠﻮﻟﺐ ﻓﻲ ﻃﺮﻓﻲ ﺟﺰﯾﺌﺔ ‪ .L’ADN‬ﻓﻌﻨﺪ اﺳﺘﺨﺪام ﻧﻔﺲ اﻷﻧﺰﯾﻢ ﻟﻘﻄﻊ ﻛﻞ ﻣﻦ اﻟﻤﻮرﺛﺔ‬
‫واﻟﺒﻼﺳﻤﯿﺪ ﻧﺤﺼﻞ ﻋﻠﻰ أﻃﺮاف ﻣﺘﻜﺎﻣﻠﺔ‪ ،‬ﯾﻤﻜﻦ إﻋﺎدة رﺑﻄﮭﺎ ﻟﻮﺟﻮد اﻟﺘﻜﺎﻣﻞ ﻓﻨﺴﻤﻲ ھﺬه اﻷﻃﺮاف ﺑﺎﻷﻃﺮاف اﻟﻤﻮﺣﺪة‪.‬‬