lOMoARcPSD|7689077

EXAMEN CURS 2012-2013

1. Realitza els següents càlculs:

a) Preparem mostra per carregar a un gel d’electroforesi SDS-PAGE.

Quina quantitat de volum de tampó de càrrega x5 has d’afegir si tens
15 μL de mostra? (0.5 punts)

b) Quin és el percentatge de saturació final de sals en una precipitació

que es realitza barrejant 10 mL de mostra i 5 mL de sulfat amònic
saturat? (0.5 punts)

c) Com preparem 850 mL de tampó d’elució d’electroforesi si tenim una

mare de tampó d’elució x10? (0.5 punts)

d) Tenim un substrat a 0,8 mM i volem preparar 2 mL d’una solució de

substrat 150 μM amb tampó d’activitat Tris-HCl pH=7,5. Com la
prepararies? (0.5 punts)

Descarregat per Mei Rosell (larameirosell@gmail.com)

 lOMoARcPSD|7689077

2. A partir dels següents resultats d’electroforesi:

Carril A Carril B Carril C

Proteïna Pes Molecular

A. β-lactoglobulina 18300 Da

B. β-galactosidasa 116 kDa

C. Lactat deshidrogenasa 35 kDa

D. Lisozim 14.7 kDa

E. Albúmina Sèrica Bovina 66200 Da

F. Ovoalbúmina 45000 Da

G. Mioglobina 17200 Da

H. RNasa A 13.7 kDa

I. Aprotinina 6500 Da

J. Miosina 200 kDa

a) Assigna a cada proteïna del llistat a les bandes que es veuen en el

carril A del següent gel d’electroforesi SDS-PAGE. Dibuixa en el carril
C on hauries d’observar una proteïna de 90 kDa (1 punt)

b) Fas una cromatografia de gel filtració de la barreja de proteïnes de

l’exercici anterior. Tenint en compte que el marge de fraccionament de
la reïna utilitzada és de 15.000 a 50.000 Da, dibuixa el cromatograma
que esperaries obtenir. Indica en el gràfic on són cadascuna de les
proteïnes de la barreja. (2 punts)

Descarregat per Mei Rosell (larameirosell@gmail.com)

 lOMoARcPSD|7689077

c) Explica com determinaries experimentalment la massa molecular de la

proteïna del carril B utilitzant els resultats de l’apartat anterior. (1 punt)

d) Representa el resultat que s’esperaria trobar en realitzar una

electroforesi en acetat de cel·lulosa a pH 6,0 si es carregués en el
centre de la tira d’acetat algunes de les proteïnes de la barreja (les de
la següent taula). Raona la resposta en base als fonaments de la
tècnica (per quin principi es separen aquestes proteïnes?) (1 punt)

Proteïna Pes Molecular

18300 Da
β-lactoglobulina

Lisozim 14.7 kDa

Mioglobina 17200 Da

RNasa A 13.7 kDa

Aprotinina 6500 Da

Descarregat per Mei Rosell (larameirosell@gmail.com)

 lOMoARcPSD|7689077

3. Es fa un estudi de l’activitat de la polifenol oxidasa (PPO) de còrtex de patata.

Aquest enzim catalitza l’oxidació d’un difenol a la seva quinona
corresponent.

L’assaig es realitza barrejant en una cubeta d’espectrofotòmetre:

425 μL de solució de prolina 5 mg/mL en tampó fosfat oxigenat (actua
com un agent estabilitzador de l’enzim)
425 μL de solució de catecol 2 mg/mL en tampó fosfat oxigenat (el
catecol és un difenol)
50 μL d’extracte de patata en tampó fosfat oxigenat (conté una
concentració de PPO de 5 μg/mL)

Ràpidament, es mesura l’absorbància a 526 nm i s’anota el valor que

presenta l’espectrofotòmetre cada 10 segons i fins a 1 minut de temps.

a) Com prepararies el blanc d’aquesta reacció? (0,5 punts)

b) Descriu de manera ben detallada com es determina la velocitat (en

ua/segon) i la corresponent activitat específica de l’enzim (1 punt)

Descarregat per Mei Rosell (larameirosell@gmail.com)

 lOMoARcPSD|7689077

c) Si l’objectiu fos comprovar si aquest enzim segueix una cinètica de

tipus Michaelis-Menten, com dissenyaries l’experiment? Fes un
esquema el més detallat possible (1,5 punts)

Descarregat per Mei Rosell (larameirosell@gmail.com)