Sprawozdanie

Wykonała: Natalia Kwidzińska

Numer indeksu: 185138
Kierunek: Biotechnologia
Semestr: V
Grupa : III

Oznaczanie masy cząsteczkowej i stopnia oligomeryzacji β-galaktozydazy Kluyveromyces lactis

metodą filtracji żelowej.
1. Wstęp teoretyczny

β-galaktozydaza uzyskiwana z szczepu drożdży Kluyveromyces lactis (rys.1) jest białkiem o

wybitnym znaczeniu biotechnologicznym w przemyśle spożywczym m.in w celu wykorzystania cukru
z serwatki mlecznej [1]. W celu wyznaczenia masy i stopnia oligomeryzacji β-galaktozydazy
stosujemy technikę chromatografii cieczowej niskociśnieniowej (FPLC) wykorzystująca metodę
filtracji żelowej (ang. Gel Filtration, GF) lub inaczej chromatografiii wykluczenia (ang. Size
Exclusion Chromatography, SEC) (rys.2) - to jedna z metod rozdziału białek w kolumnach
wypełnionych porowatym polimerem [2].

Rysunek1 Rysunek 2

https://redro.pl/obraz-laktazy-kluyveromyces-lactis-beta-galaktozydazy-enzymu-,69878041 https://chem.pg.edu.pl/documents/175628/48452604/17-18%20W7.pdf

2. Cel ćwiczenia

Celem ćwiczenia jest oznaczanie masy cząsteczkowej β-galaktozydazy Kluyveromyces lactis metodą
filtracji żelowej.
3. Krzywa wzorcowa

Wyznaczamy krzywą wzorcową dzięki której na podstawie równania linii trendu krzywej będziemy
w stanie obliczyć masę cząsteczkową oligomeru. Metodą rozdzielenia chromatograficznego białek o
równej MW na kolumnie Superdex 200 10/300 GL wyznaczyliśmy ich Ve. Przekształcone dane
podstawiamy do wykresu i kreślimy linię trendu.

Białko log Mw Ve/Vo

Anhydraza
4,462398 1,961905
węglanowa
BSA 4,819544 1,659524
Dehydrogenaza
5,176091 1,494048
alkoholowa
β- Amylaza 5,30103 1,371429
Apoferytyna 5,646404 1,221429
Tyroglobulina 5,825426 1,083333
Dekstran 6,30103 1

4. Obliczanie masy cząsteczkowej oligomeru β-galaktozydazy K. lactis.

VK.lactis= 11,27 [ml]

VK.lactis/Vo= 11,27ml/8,40ml= 1,342 → x

𝑦 = −1,5983𝑥 + 7,5471 → y ≈ 5,402

𝑴𝑾 = 10𝑦 ≈ 𝟐𝟓𝟐𝟑𝟒𝟖 [𝑫𝒂]
5. Obliczanie masy cząsteczkowej monomeru β-galaktozydazy K. lactis.

https://web.expasy.org/protparam/

6. Wyznaczenie stopienia oligomeryzacji β-galaktozydazy K. lactis

Obliczana poprzez dzielenie średniej masy cząsteczkowej oligomeru przez masę cząsteczkową
jednego meru [3].

𝑀𝑊𝑜𝑙𝑖 252348
𝒏= = ≈𝟐
𝑀𝑊𝑚𝑒𝑟 117619

7. Bibliografia i źródła

[1] Á. P. Rodríguez, R.F. Leiro, M C. Trillo, M E. Cerdán, M I. González Siso & M. Becerra, (2006)
„Secretion and properties of a hybrid Kluyveromyces lactis-Aspergillus niger β-galactosidase”
[2] M. Rosiński, D. Piasecka-Kwiatkowska, J. R. Warchalewski. Przegląd metod separacji i
oczyszczania białek przydatnych w badaniach i analizie żywności. „Żywność. Nauka. Technologia.
Jakość”.
[3] Malcolm P. Stevens, "Wprowadzenie do chemii polimerów", tł. Mirosław Włodarczyk at al,
PWN 1983