Identificación molecular de

especies de Mucor y Lichtheimia

en cultivos puros de zigomicetos

Ardeshir Ziaee, Mohammadali Zia, Mansour Bayat y Jamal Hashemi

Jundishapur journal of microbiology

1. Introducción

2. Objetivo

Los Mucorales son hongos saprófitos ubicuos, considerados El objetivo de este estudio fue identificar las especies de Mucor
como patógenos animales y humanos muy importantes, ya que, y Lichtheimia (antes Absidia ) entre otros géneros de Mucorales
son responsables de la mucormicosis. Esta es una enfermedad aisladas en medios de cultivo mediante el método PCR-RFLP.
fúngica invasiva muy agresiva y puede ser causada por
cualquiera de las seis familias de Mucorales. Por lo tanto es
necesario el desarrollo y validación de un nuevo sistema de
detección, involucrando el método de PCR para el diagnóstico
rápido y preciso de la mucormicosis.

3. Materiales y
métodos
1. Aislamiento de hongos
500 muestras de diferentes distritos de la
ciudad, parques, hospitales, etc.
Agar Sabouraud dextrosa y agar patata
dextrosa --> cloranfenicol.
Se seleccionaron dos cebadores de sentido
específicos de género y un cebador antisentido 4. Enzimas de restricción
del gen ARNr 18S.
2. Extracción de ADN de cultivos de hongos
puros
El ADN genómico se extrajo y se purificó de cada
colonia usando fenol-cloroformo
Las hifas de cultivos frescos de 48 horas en SDA 5. RFLP
o PDA se suspendieron en un tampón de lisis.
Se retiró el etanol del tubo y sesuspendió en 50
µl de agua destilada manteniendo a -20ºC como
ADN purificado hasta su uso.
3. PCR
Los cebadores se dirigieron a una secuencia de 830
pb en el gen ribosómico fúngico 18S.
Se aplicó un cebador antisentido degenerado para
los Mucorales.
La amplificación se realizó en un termociclador 2700
PCR de 120 Mucorales se digirieron con enzimas de
restricción seleccionadas, incluidas AfIII , XmnI y AcII
especificadas para Mucor sp .: Mucor circinelloides , M .
racemosus , M. ramosissimus , M. plumbeus , L.
corymbifera y L. blakesleeana .
Dieciocho fragmentos amplificados de los 120
Mucorales fueron digeridos por separado por las tres
enzimas mencionadas anteriormente.
6. Electroforesis
Se utilizó gel de agarosa en un tampón TBE, ácido
bórico 90 mm y EDTA 2 mm a 100 V durante 45 - 120
minutos en un gel al 1%, 1,5% y 2% para la
electroforesis del ADN extraído.
7. Rasgos característicos de las especies de Mucor y
Leichtheimia
La discriminación de estas especies se realizó en
función de las características macroscópicas y
microscópicas, así como la capacidad de crecimiento
en diferentes temperaturas

4. Resultados 5. Conclusión
Finalmente, Mucor sp. y Lichtheimia sp
El ADN genómico perteneciente a los Mucorales se amplificó representaron aproximadamente el 39,17%
En relación a lo antes expuesto se puede
exitosamente con los cebadores seleccionados y se amplificó un de todas las colonias puras. decir que, los hallazgos revelaron que los
producto de aproximadamente 830 pares de bases para todos L. blakesleeana métodos moleculares se pueden utilizar
los Mucorales . 0,83 % para la detección rápida y diferenciación
de especies que son responsables de la
infección y, por lo tanto, pueden ayudar en
la realización de investigaciones
L. corymbifera M. circinelloides epidemiológicas.
9,17 % 9,17 %

M. ramosissimus M. racemosus
3,33 % 5,83 %
M. plumbeus

10,83 % 6. Referencia bibliográfica

Ziaee, A., Zia, M., Bayat, M. y Hashemi, J.

Mucor
(2016). Identificación molecular de especies
Lichtheimia
de Mucor y Lichtheimia en cultivos puros de
Figura 1: Aspecto macroscópico y microscópico de Mucorales Figura 2: Representación de Mucor sp. zigomicetos. Revista de microbiología de
identificados (29, 17 %) y Lichtheimia (10%) Jundishapur , 9 (4), e35237.
https://doi.org/10.5812/jjm.35237