Chloropicophyceae, novi razred

pikoplanktonskih prazinofita
Izradili: Lana Marković, 2 godina preddipl. studija biologije
Lovro Čeliković,2 preddipl. Studija biologije
Kolegij: Protista(40330)
 ŠTO SU PRASINOPHYTA?

01 parafiletska skupina

02 devet skupina zelenih

mikroalgi
03 jednostavna morfologija

klada VII –
04 loze A (A1- A7),B (B1-B3) i C

05 napreci u taksonomiji
METODE
- stanice u kulturi
- analiza pigmenata
- svjetlosna mikroskopija
- TEM
- SEM
- protočna citometrija – veličina
genoma
- PCR
- filogenetska analiza
 METODE

STANICE U KULTURI

● kultura uzgajana na 22 °C u L1 mediju morske vode pod

● prosječni intenzitet svjetlosti od 100 µmola fotona m−2 x s−1 I 12:12h LD (svijetlo:tamno) režim
 METODE
SVJETLOSNA MIKROSKOPIJA

● sakupljena su dva mililitra kultura u eksponencijalnoj ili ranoj stacionarnoj fazi.

● vršeno je centrifugiranje (2000 g, 5 minuta)

● Promatranje pod mikroskopom (Olympus BX 51 opremljenim diferencijalnim

interferencijskim kontrastom (DIC), faznim kontrastom i plavim fluorescentnim
filterima)
 METODE
SKENIRAJUĆA ELEKTRONSKA MIKROSKOPIJA

● stanice su fiksirane u 2% glutaraldehidu tijekom 1 sata

● 5-10 mL fiksnih staničnih suspenzija filtrirano je gravitacijom na Nuclepore filtere
● vršeno je centrifugiranje (2000 g, 5 minuta)
● filterati su isprani u mediju za rast (10 min), a zatim u 0,1 M kakodilatu
● stanice su naknadno fiksirane u 1% osmij tetroksidu
● provedena su tri slijedeća ispiranja u 0,1 M kakodilatu (svako po 5 minuta)
● stanice su dehidrirane u vodenoj otopini etanola (10min u 70%, 90%, 96% i tri izmjene u 100%, po
10min)
● držači filtera su preneseni na sušenje do kritične točke (Baltec CPD 030, Balzers, Lihtenštajn) i
osušeni filtri su montirani na stubovima od karbona
 REZULTATI

analiza morfologije i veličine genoma

01

analiza pigmenata
02

analiza rRNA i ITS2

03
 ANALIZA MORFOLOGIJE
● klade A i B:
male razlike u veličini
1 mitohondrij->između jezgre i kloroplasta
1 kloroplast oblika polumjeseca+zrno škroba
tilakoidi->pojedinačno ili gomilice po 3
vakuola->nasuprot kloroplastu
GK slabo vidljiv
slojevita stanična stijenka
genom-> 20-70Mbp

● klada C:
2 oblika-> kokoidni i tro-režanjski oblik
 ANALIZA PIGMENATA

● klade A i B

neoksantin, violaksantin, anteraksantin, zeaksantin, lutein i β,ε – karoten

astaksantin-> fotozaštita
loroksantin

● klada C:

monadoksantin, dijatoksantin, aloksantin

 ANALIZA rRNA i ITS2

● A1-A7,B3
kultivirali određene sojeve-> rod Chloropicon

● nuklearni 18S rRNA gen; plastidni 16S rRNA gen

● ITS2 -> topološki se ne podudara sa nuklearno-plastidnim sekvencama

-> sekundarna struktura i ˶ interclade distance˝
 LITERATURA
Chloropicophyceae, a new class of picophytoplanktonic prasinophytes Adriana Lopes dos
Santos, Thibaut Pollina, Priscillia Gourvil, Erwan Corre , Dominique Marie, José Luis Garrido,
Francisco Rodríguez, Mary-Hélène Noël, Daniel Vaulot & Wenche Eikrem
 TAKE HOME MESSAGE
Živi svijet, a posebice svijet algi je iznimno raznolik. Za posljedicu, mnoge vrste je teško
klasificirati ili svrstati pod određenu granu. Metode koje nam u tom pomažu te zbog kojih
se filogenetsko stablo svakodnevno mijenja variraju sve od stanica u kulturi do PCR-a.

METODE
stanice u kulturi
analiza pigmenata
svjetlosna mikroskopija
TEM
SEM
protočna citometrija – veličina genoma
PCR
filogenetska analiza