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버전 5.0 HB1010

핸드북

DNA 정제 핸드북
추가 질문이 있으시면 언제든지 문의해 주십시오.
귀하의 의견과 조언에 감사드립니다.

연락처 정보

하이브리드-QTM, 특급TM, ExfectionTM, 익스핀TM, 엑스진TM, 제넥스TM, DirExTM, 하이브리드-RTM, 리보엑스TM, 리보스핀TM,

리보클리어TM, 올스핀TM, 리보세이버TM, 이지클리어TM, EzSepTM, 이지퓨어TM, 이지패스TM, 엠프원TM, 앰프마스터TM,

RealAmpTM, 하이퍼스크립트TM, 프로틴엑스TM, 파제스타TM, STEADiTM, 젠티TMGeneAll의 상표입니다.®

생명공학(주)

2 018 GeneAll Biotechnology, 판권 소유.

이 프로토콜 핸드북은 다음에 포함되어 있습니다.

진올®특급TM플라스미드 SV 미니(101-150, 101-102) GeneAll®특급TM

플라스미드 SV 미디(101-226, 101-250, 101-201)

FAQ, Q&A 및 자세한 정보는 www.geneall.com 또는 www.geneall.co.kr을 참조하십시오.

 색인
키트 내용물 04
품질 관리 05
보관 조건
화학적 위험
제품 사양 06

소개 07
방법론
진올®특급TM플라스미드 키트 절차 일반 고려 08
사항 09
출발 물질
알칼리 용해 12
EzClear로 용해물 여과TM필터 컬럼 세척 13

용출 14
Midi 키트 프로토콜의 원심 분리기 15

..에 대한 프로토콜

특급TM플라스미드 SV 미니 16
ExprepTM플라스미드 SV 미디 21

문제 해결 가이드 27
간단한 프로토콜 30
주문 정보 31
 전부내용물

특급TM플라스미드 SV 미니
고양이. 아니요. 101-150 101-102
크기 미니 미니
준비 번호 50 200
진올®SV 컬럼 유형 Q(포집 튜브 포함) 버퍼 S1 50 200
20ml 60ml
버퍼 S2 20ml 60ml
버퍼 S3 25ml 90ml
버퍼 AW(농축액) * 버퍼 19ml 69ml
PW(농축액) *† 12ml 50ml
버퍼 EB ** 15ml 30ml
RNase A(20mg/ml) 100ul 300ul
프로토콜 핸드북 1 1

특급TM플라스미드 SV 미디
고양이. 아니요. 101-226 101-250 101-201
크기 미디 미디 미디
준비 번호 26
진올®SV 컬럼 유형 Q(적색 링)(포집 튜브
26
포함)
이지클리어TM필터 컬럼(파란색 링)
26
(수집 튜브 포함)
수집관 26 101-226 101-226
버퍼 S1 80ml ×2 ×4
버퍼 S2 80ml
버퍼 S3 110ml
버퍼 AW(농축액) * 버퍼 94ml x 2
PW(농축액) *† 50ml x 2
버퍼 EB ** 120ml
RNase A(20mg/ml) 400ul
프로토콜 핸드북 1
* 처음 사용하기 전에 병에 표시된 대로 AW 및 PW 버퍼에 무수 에탄올(ACS 등급 이상)을 첨가하십시오.

†방부제로 아지드화나트륨을 함유
* * 10mM TrisCl, pH 8.5

4 진올®특급TM프로토콜 핸드북
품질 관리

GeneAll의 모든 구성 요소®특급TMPlasmid SV kit는 엄격하게 깨끗한 상태로 제조되며

주기적으로 청결도를 모니터링합니다.
품질관리로서 제한효소분석, 유전자 클로닝, PCR 증폭분석, 자동염기서열분석 등을 로
트별로 철저히 진행하여 적격자에 한해 승인합니다.

보관 조건

진올®특급TMPlasmid SV 키트는 실온에서 배송됩니다. 모든 구성 요소는 제품 라벨에 인

쇄된 만료 날짜까지 실온에서 안정적입니다. RNase A를 첨가한 후 버퍼 S1은 4˚C에서
보관할 때 1년 동안 안정적입니다.

차가운 주변 조건에서 버퍼 S2 및 S3는 염 침전을 나타낼 수 있으며 이로 인해 DNA 복구

수율이 감소합니다. 그렇다면 병이 완전히 녹을 때까지 37˚C 수조에서 가끔 저어주면서
가열합니다.

화학적 위험

GeneAll에 포함된 버퍼®특급TMPlasmid SV kit에는 피부에 직접 노출되거나 흡입 또는

삼켰을 때 유해한 자극제가 포함되어 있습니다. 취급 시 주의를 기울여야 합니다. 항상
장갑과 보안경을 착용하고 표준 안전 예방 조치를 따르십시오.

버퍼 S3 및 AW에는 카오트로픽 염이 포함되어 있습니다. 표백제와 결합하면 반응성이

높은 화합물을 형성할 수 있습니다. 시료 전처리 폐기물에 표백제나 산성 용액을 직접 첨
가하지 마십시오.

진올®특급TM프로토콜 핸드북 5
 제품 명세서

특급TM 피라즈미드 SV
미니 미디*
체재 스핀/진공 스핀/진공
권장 시료량 최대 시료량 5ml 50ml
10ml 100ml
용해물의 제거 원심분리기 이지클리어TM

준비 시간 <23분 <50분
최대 적재량 800ul 15ml
바인딩 용량 30ug 300ug
회수율 85~95% 85~95%
최소 용출량 40ul 400ul

* 진올®특급TMPlasmid SV Midi 키트 절차에는 스윙 아웃 버킷과 4,000~5,000 x g의 성능을 가진 원심분

리기가 필요합니다.

6 진올®특급TM프로토콜 핸드북
 진올®EXPREPTM
플라스미드 정제 키트

소개
진올®특급TMPlasmid SV 키트는 세균 세포에서 중소 규모의 플라스미드 DNA를 쉽
고 빠르게 준비할 수 있는 방법을 제공합니다. 이 키트는 모든 플라스미드를 분리하고
정제하는 데 사용할 수 있지만 플라스미드 크기가 20kb 미만일 때 가장 효율적으로
작동합니다.
순수한 플라스미드 DNA를 준비하기 위한 모든 과정은 약 25분 정도 소요되며 여러
시료의 동시 처리가 용이합니다. GeneAll을 사용하여 최대 30ug의 순수 플라스미드
를 정제할 수 있습니다.®특급TM플라스미드 SV 미니 키트와 이 순수 플라스미드 DNA
는 추가 조작 없이 PCR, 클로닝, 형광 시퀀싱, 표지된 혼성화 프로브의 합성, 세포 형
질감염, 전기천공 및 효소 제한 분석에 사용할 수 있습니다.

방법론
진올®특급TMPlasmid SV kit는 수정된 알칼리 용해 방법에 기반한 유리 극세사 멤브
레인을 사용합니다. 알칼리 용해는 박테리아 세포에서 플라스미드 DNA를 방출하고
RNA를 분해하며, RNase는 용해물에서 살아남은 RNA를 제거합니다. 세포 파편 및
염 침전물은 미니 키트용 원심분리 및 EzClear로 제거됩니다.TMMidi 키트용 필터 컬
럼.
높은 염이 존재하는 경우 제거된 용해물의 플라스미드 DNA는 GeneAll의 유리 극세
사 막에 선택적으로 결합합니다.®특급TM플라스미드 SV 컬럼. 결합된 플라스미드 DNA
는 다른 세균 성분의 오염을 제거하기 위해 일련의 세척 단계에서 정제됩니다. 마지막
으로 저염 완충액 또는 탈이온수에 의한 용출은 유리 극세사 막에서 플라스미드 DNA
를 방출합니다. 이 간단한 방법은 유기 용매 추출 및 알코올 침전이 필요하지 않습니
다.

진올®특급TM프로토콜 핸드북 7
진올®특급TM 플라스미드 SV 키트 절차

플라스미드 SV 미니 플라스미드 SV 미디

8 진올®특급TM프로토콜 핸드북
진올®특급TM
플라스미드 정제 키트

일반 고려 사항

출발 물질
플라스미드 DNA의 수율과 품질은 플라스미드 카피 수, 박테리아 균주, 항생제, 접종 및
배양 배지 유형과 같은 여러 요인에 따라 달라집니다. 가능한 한 플라스미드는 한천 플레
이트에서 뽑은 단일 형질전환 콜로니로 접종된 세균 배양에서 정제되어야 합니다.

일반적으로 콜로니는 후기 대수기까지 성장하는 작은 스타터 배양으로 옮겨집니다. 이

배양물의 분취량은 분석을 위한 소량의 플라스미드 DNA를 준비하고/하거나 대규모 배
양을 위한 접종물로 사용할 수 있습니다. 대규모 배양의 성장 조건은 주로 플라스미드의
복제 수와 엄격하게 또는 완화된 방식으로 복제되는지 여부에 따라 달라집니다. 항상 형
질전환된 박테리아는 선택적 조건, 즉 적절한 항생제가 있는 상태에서 성장해야 합니다.

플라스미드의 복제 수는 정상적인 성장 조건에서 박테리아 세포당 플라스미드의 평균

수로 정의됩니다. 플라스미드는 복제 기점(레플리콘)과 플라스미드 DNA의 크기에 따라
세포당 고유한 복제 수를 가집니다. 플라스미드 레플리콘은 자율적으로 복제할 수 있는
플라스미드 DNA의 가장 작은 조각으로 정의할 수 있으며 완화된 제어 또는 엄격한 제어
하에 있는지 여부를 결정하여 정상적인 복제 수를 유지할 수 있습니다.

30개 이상의 서로 다른 레플리콘이 플라스미드에서 확인되었습니다. 그러나 분자 복제

에 일상적으로 사용되는 거의 모든 플라스미드는 pMB1에서 파생된 레플리콘을 가지고
있습니다. pUC 플라스미드는 변형된 pMB1 레플리콘을 포함하고 제어가 완화되며 매우
높은 복제 수로 복제합니다. 그렇지 않으면 pSC101은 엄격한 제어를 가지며 낮은 복제
수를 유지합니다. 일반적으로 높은 카피 수의 플라스미드는 더 높은 수율을 가져옵니다.

매우 큰 플라스미드는 종종 세포당 매우 낮은 복제 수로 유지됩니다.

진올®특급TM프로토콜 핸드북 9
 진올®특급TM플라스미드 SV 키트 절차는 고카피수 플라스미드에 최적화되어 있으므로 카
피수가 적은 플라스미드를 사용하는 경우 더 큰 시작 샘플이 필요할 수 있습니다.

1 번 테이블.다양한 플라스미드 벡터에 의해 운반되는 레플리콘

플라스미드 크기(bp) 번호 복사 레플리콘

pUC 시리즈 2,686 500~700 pMB1
p블루스크립트 시리즈 ~3,000 300~500 ColE1

pGEM 시리즈 ~3,000 300~400 pMB1

pMK16 및 유도체 ~4,500 > 15 ColE1

pBR322 및 유도체 4,362 15~20 pMB1

pACYC 및 유도체 ~4,000 18~22 p15A
pSC101 및 유도체 9,263 ~5 pSC101

pRK353 및 유도체 ~11,100 ~15 R6K

최대대장균균주를 사용하여 플라스미드 DNA를 전파하고 분리할 수 있습니다. DH5α

및 XL1-Blue와 같은 숙주 균주는 매우 고품질의 DNA를 생성합니다. 그러나 일부 균주,
특히 HB101에서 파생된 균주(예: TG1 및 JM 시리즈)는 용해될 때 비교적 많은 양의 탄
수화물을 방출합니다. 탄수화물은 완전히 제거되지 않으면 많은 제한 효소와 중합 효소
의 활성을 억제할 수 있습니다.

많은끝A+균주는 엔도뉴클레아제 I을 생성하며 이는끝A이중 가닥 DNA를 절단합니다

(13페이지 참조). 플라스미드 준비 중에 endonuclease I이 완전히 제거되지 않으면 용
출액의 플라스미드 DNA는 Mg 존재 하에서 후속 배양 중에 분해됩니다.2+(예: 제한 효소
와 함께 배양하는 동안). 이 문제는 다음을 사용하여 피할 수 있습니다.끝A-균주 (로 표시
endA1) DH5α 및 XL1-Blue와 같은. 버퍼 AW로 추가 세척하면 DNA 분해를 방지하는
데 도움이 됩니다.

10진올®특급TM프로토콜 핸드북
 진올®특급TM시리즈는 균의 번식을 위해 가장 널리 사용되는 배지인 Luria-Bertani(LB)
broth에 최적화되어 있습니다.대장균. Terrific Broth(TB) 또는 2xYT와 같은 다른 풍
부한 국물을 사용하면 세포 밀도가 매우 높아집니다. 이러한 배지를 사용하는 경우
GeneAll에 과부하가 걸리지 않도록 시작 샘플 볼륨을 줄여야 합니다.®
특급TM플라스미드 SV 컬럼 및 버퍼 시스템. 그렇지 않으면 효율적인 용해를 위해 버퍼
S1, S2 및 S3의 부피를 늘려야 합니다. TB 또는 2xYT에서 하룻밤 배양하면 LB broth에
서 배양할 때보다 세포수가 2~5배 증가할 수 있습니다. TB 또는 2xYT는 낮은 copy 수의
플라스미드의 경우 더 많은 수율의 플라스미드 DNA를 얻기 위해 사용될 수 있습니다.

진올®특급TM프로토콜 핸드북11
 알칼리 용해
수확된 세균 배양은 RNase의 존재 하에 버퍼 S1에 의해 재현탁됩니다.
A. 박테리아 현탁액을 높은 pH(버퍼 S2, SDS/NaOH)에서 강한 음이온성 세제에 노출
시키면 세포벽이 열리고 염색체 DNA와 단백질이 변성되며 플라스미드 DNA가 상층액
으로 방출됩니다. 염기성 용액인 버퍼 S2는 염기쌍 형성을 완전히 방해하지만 닫힌 원형
플라스미드 DNA 가닥은 위상학적으로 얽혀 있기 때문에 서로 분리할 수 없습니다.

높은 pH(OH)에 노출되는 강도와 지속시간만큼-)가 너무 크지 않으면 플라스미드 DNA

의 두 가닥은 pH가 중성으로 돌아올 때 다시 한 번 등록됩니다. 그러나 변성 조건에 장기
간 노출되면 닫힌 원형 DNA가 비가역적으로 변성 상태가 됩니다. 제한 효소로 절단할 수
없는 붕괴된 코일은 천연 초나선형 폐쇄 원형 DNA의 약 두 배의 속도로 아가로즈 겔을
통해 이동하며 인터칼레이팅 염료로 잘 염색되지 않습니다.

세포 용해 동안 박테리아 단백질, 부서진 세포벽 및 변성 염색체 DNA는 도데실 황산염

으로 코팅된 큰 복합체에 얽히게 됩니다. 이러한 복합체는 나트륨 이온을 칼륨 이온으로
대체하고 용해물을 고염 결합 조건으로 조정하는 버퍼 S3를 추가하여 용액에서 효율적
으로 침전됩니다.

용해물을 세게 다루면 변성된 염색체 DNA가 전단되어 게놈 DNA가 오염될 수 있습니

다. 좋은 결과를 얻으려면 용액을 부드럽지만 완전히 혼합하여 완전한 침전을 보장하는
것이 중요합니다.

12진올®특급TM프로토콜 핸드북
EzClear로 용해물 여과TM필터 열
버퍼 S3와 혼합한 후 세포 파편과 침전물을 완전히 제거하여 GeneAll이 막히지 않도록
해야 합니다.®특급TM후속 결합에서 플라스미드 SV 컬럼. 새로운 특허 EzClearTM필터 컬
럼은 전통적인 방법에서 널리 사용되는 지루한 원심분리 대신 여과를 통해 용해물의 제
거를 용이하게 합니다.

이지클리어TM필터 컬럼은 GeneAll에 포함되어 있습니다.®특급TM플라스미드 SV 미디 키트.

세탁
작업할 때끝A+저장 또는 효소 반응 중에 플라스미드 DNA가 분해되지 않도록 보장하기
위해 버퍼 AW를 사용한 선택적 세척 단계를 통해 엔도뉴클레아제를 효율적으로 제거할
수 있습니다.
Buffer AW는 잔류 단백질을 제거하여 플라스미드 DNA의 품질을 향상시키기 때문에
일반적으로 더 큰 배양 부피에서 사용되는 저카피 플라스미드로 작업할 때도 필요합니
다. Buffer PW는 컬럼 멤브레인에 비특이적으로 결합된 염 및 기타 세포 성분을 제거합
니다.

표 2.다양한 유전자형대장균균주

EndA+균주
BL21(DE3), CJ236, HB101, JM83, JM101,
JM110, LE392, MC1061, NM 시리즈, P2392
PR 시리즈, RR1, TB1, TG1, BMH71-18,
ES1301, 야생형 등
EndA-균주
DH1, DH20, DH21, DH5α, JM103,
JM105, JM106, JM107, JM108,
JM109, MM294, SK1590, SRB, XL1-블
루, XLO 등

진올®특급TM프로토콜 핸드북13
 용출
정제된 DNA는 다운스트림 응용 분야의 필요에 따라 저염 완충액 또는 탈이온수에서 용출될
수 있습니다. 버퍼 EB에는 10mM TrisCl, pH 8.5가 포함되어 있습니다. 용리액으로 물을 사
용하는 경우 pH 값이 7.0과 8.5 사이인지 확인하십시오.
물에 있는 플라스미드는 가수분해되기 쉽고 완충제가 부족하므로 -20˚C 이하에서 보관
하는 것이 좋습니다. Elution volume은 필요에 따라 조절할 수 있으나 SV column
membrane을 완전히 담가두기 위해서는 최소한의 요구량 이상이어야 합니다. DNA 농
도를 높이려면 용출 버퍼의 양을 줄입니다. 수율을 높이려면 용출 버퍼의 양을 늘리고 용
출 단계를 다시 한 번 반복하십시오. 용출 부피로서의 농도 및 수율은 아래와 같습니다.

플라스미드 SV 미니 플라스미드 SV 미디

30 500 300 300

DNA 농도 (ug/ml)

DNA 농도 (ug/ml)
총 DNA 수율(ug)

총 DNA 수율(ug)

15 250 150 150

0 0 0 0
20 30 50 80 100 120 200 500 800 1000 1500 2000년

Elution Vol. (울) Elution Vol. (울)

중 20 30 50 80 100 120 200

그림 2. 용출량에 따른 플라스미드 DNA의 전체 수율 및
농도. pUC18 플라스미드 DNA는 GeneAll을 사용하여
밤새 배양된 DH5α 3ml(미니) 및 40ml(미디)로부터 정
제되었습니다.®특급TM플라스미드 SV 프로토콜. 플라스
미드 DNA는 표시된 부피의 완충액 EB로 용출되었고,
mini용 1% 아가로스 겔에서 분해되었습니다. (왼쪽,
Midi의 데이터는 표시되지 않음)

14진올®특급TM프로토콜 핸드북
Midi 키트 프로토콜의 원심 분리기
GeneAl l®특급TMPlasmid SV Midi 절차에는 스윙 버킷 로터와 4,000~5,000 x g의 능
력을 갖춘 기존의 원심분리기가 필요합니다.
고정각 로터를 사용하면 SV 컬럼 멤브레인이 샘플 혼합물 및 완충액과 일관되지 않게
접촉하여 만족스럽지 못한 결과를 초래할 수 있습니다.
g-force가 낮으면 에탄올이 불완전하게 제거될 뿐만 아니라 SV 컬럼의 멤브레인에서 DNA
가 용출되지 않을 수도 있습니다. 사용 가능한 원심 분리기 및 로터는 아래에 나열되어 있지만
이에 상응하는 모든 것을 사용할 수 있습니다.

회사 원심분리기 축차
Beckman Coulter Inc. 알레그라 X-15R Sx4750
(미국 캘리포니아) 알레그라 25R Sx4750A
TS-5.1-500

에펜도르프 AG 5804/5804R A-4-44

(독일 함부르크) 5810/5810R

(주)아이엘라 5800 RS-410

(도쿄, 일본) 5900 RS-410M

한일사이언스 유니온 5KR R-WS1000-6B

인더스트리얼 유니온 55R W-WS750-6B
(대한민국 인천) MF-550 HSR-4S
HA1000-6 WHSR-4S
HA1000-3

헤티히 AG 로티나 35 1717년

(Kirchlengern, 로탄타 460 1724년
독일) 로티사 50S 5624

진올®특급TM프로토콜 핸드북15
 진올®특급TM플라스미드 SV 미니
실험 전*처음 사용하기 전에 무수 에탄올(ACS 등급 이상)을 첨가하십시오.
병에 표시된 대로 버퍼 AW 및 PW에 넣습니다.
* 다른 적응증이 없는 한, 모든 원심분리 단계는 상온의 마이크로 원심분
리기에서 최대 속도(>10,000 xg 또는 10,000~14,000 rpm)로 수행해
야 합니다.
* 처음 사용하기 전에 모든 RNase A를 버퍼 S1에 추가하십시오.

* RNase A를 첨가한 후 버퍼 S1을 4˚C에서 보관하십시오.

* 새 1.5ml 또는 2ml 마이크로 원심 분리기 튜브를 준비합니다.
* 버퍼 S2 및 S3는 차가운 주변 조건에서 침전될 수 있습니다.
침전물이 나타나면 완전히 녹을 때까지 37˚C 수조에서 녹입니다.

투명 용해물의 준비

1.원심분리기에서 10,000 xg에서 5분 동안 원심분리하여 세균 배양을 펠렛합니다. 상

층액은 최대한 버린다.
적절한 양의 세균 배양을 사용하십시오. 높은 카피 수 플라스미드의 경우 최대 5ml,
낮은 카피 수 플라스미드의 경우 최대 10ml. 박테리아 배양은 선택적 항생제가 포
함된 LB 배지에서 16~21시간 동안 성장시켜야 합니다. TB 또는 2xYT와 같은 다른
풍부한 배지 및/또는 더 높은 배양 부피를 사용하면 용해 효율이 감소하거나 SV 컬
럼의 과부하가 발생하여 만족스럽지 못한 수율을 초래할 수 있습니다.

대안적으로, 박테리아 세포는 최고 속도로 1분 동안 원심분리에 의해 1.5ml 또는 2ml

미니

마이크로원심분리기 튜브에서 반복적으로 펠릿화될 수 있습니다.

2.250 ul의 버퍼 S1에 완전히 펠릿화된 세균 세포를 재현탁합니다. 현탁액을 새로운

1.5ml 미세원심분리기 튜브로 옮깁니다.
세포 펠렛을 완전히 재현탁하는 것이 필수적입니다.
이전 단계에서 세포가 1.5ml 마이크로 원심분리기 튜브에서 펠릿화된 경우 현탁액
을 옮길 필요가 없습니다.
* 처음 사용하기 전에 RNase A를 버퍼 S1에 추가하십시오.

16진올®특급TM프로토콜 핸드북
삼.버퍼 S2 250ul를 추가하고 튜브를 4번 뒤집어 혼합합니다(와동하지 마십시
오).
세포 현탁액이 투명하고 점성이 될 때까지 배양하되 5분 이상 배양하지 마십시오.
탁한 덩어리 없이 lysate가 투명해지면 즉시 다음 단계로 진행하는 것이 중요합니
다.
사용 전 버퍼 S2에 침전된 물질이 형성되면 37˚C에서 가열하여 용해합니다. 침전된
버퍼 S2는 DNA 복구 수율을 크게 감소시킬 수 있습니다.

4.Buffer S3 350 ul를 넣고 튜브를 4~6회 뒤집어 즉시 섞는다(DO NOT VORTEX).

더 나은 침전을 위해 버퍼 S3를 추가한 직후 용해물을 부드럽지만 완전하게 혼합합

니다.

5.최고 속도로 10분 동안 원심 분리합니다.

미니

진올®특급TM프로토콜 핸드북17
 플라스미드 DNA의 분리 및 정제
이 키트를 사용할 때 두 가지 방법 중 하나를 선택하여 plasmid DNA를 정제할 수 있습
니다. 플라스미드 DNA는 SV 컬럼을 통해 제거된 용해물을 끌어당기기 위해 원심분리를
사용하여 정제할 수 있습니다. 또는 진공을 사용하여 SV 컬럼을 통해 제거된 용해물을
강제로 통과시킬 수 있습니다(20페이지).

ㅏ 원심분리 프로토콜

1.가만히 따르거나 파이펫팅하여 상층액을 SV 컬럼으로 조심스럽게 옮깁니다. 최고 속

도로 30초 동안 원심 분리합니다. SV 컬럼을 제거하고 통과물을 버리고 SV 컬럼을
수집 튜브에 다시 삽입합니다.

흰색 침전물이 SV 컬럼으로 공동 전달되는 것을 피하십시오.

2.(선택 과목:)500 ul의 AW 버퍼를 적용하고 최대 속도로 30초 동안 원심분리합니다.

SV 컬럼을 제거하고 통과물을 버리고 SV 컬럼을 수집 튜브에 다시 삽입합니다.

이 단계는 뉴클레아제 활동의 흔적을 제거하는 데 필요합니다.끝A+

부담. 야생형과 일부대장균균주는 유전자에 암호화된 엔도뉴클레아제 I을 생성합니
다.끝A이중 가닥 DNA를 분해합니다.
그만큼대장균유전자형끝A1은 야생형의 돌연변이를 나타냅니다.끝A비활성 형태의
뉴클레아제를 생산하는 유전자.대장균이 돌연변이를 가진 균주는끝A-.

의 부재끝A유전자형 목록의 1은 활성 엔도뉴클레아제 I을 발현하는 야생형 유전자

의 존재를 나타냅니다. 야생형은 다음과 같이 표시됩니다.끝A+. 여러 유전자형대장
미니

균균주는 13페이지의 표 2에 나와 있습니다. low-copy 플라스미드를 사용하는 경

우에도 이 단계를 수행하는 것이 좋습니다.끝A-균주.

삼.700 ul의 Buffer PW를 적용하고 최대 속도로 30초 동안 원심분리합니다. SV 컬럼

을 제거하고 통과물을 버리고 SV 컬럼을 수집 튜브에 다시 삽입합니다.

18진올®특급TM프로토콜 핸드북
4.잔류 세척 버퍼를 제거하기 위해 추가로 1분 동안 원심분리기를 사용합니다. SV 컬럼
을 새 1.5ml 마이크로 원심분리기 튜브(제공되지 않음)로 옮깁니다.

이 단계는 SV 컬럼 멤브레인에서 잔류 에탄올을 제거합니다. 용출액의 잔류 에탄올

은 후속 효소 반응을 억제할 수 있습니다. 버퍼 PW의 carryover가 발생하면 다음
단계로 진행하기 전에 다시 1분 동안 원심분리합니다.

5.버퍼 EB 또는 탈이온 증류수 50ul를 추가하고 1분 동안 방치한 다음 1분 동안 원심분

리합니다.
최적의 DNA 용출을 위해 버퍼 EB 또는 증류수가 스핀 컬럼 멤브레인 중앙에 직접
분배되었는지 확인하십시오.
용리액 부피는 최대 200 ul까지 조절할 수 있으며 이는 플라스미드의 총 수율을 증
가시키지만 용출액의 농도를 감소시킵니다. 더 높은 농도의 용출액을 위해 용리액
부피를 최소 40ul로 줄일 수 있습니다. 용출액의 부피는 용리액의 부피보다 적을 수
있으며 수율에 영향을 미치지 않습니다.

장기간 보관을 위해서는 buffer EB(10mM TrisCl, pH 8.5)에 용출하여 -20˚C 이

하에서 보관하는 것을 권장합니다. elution을 위해 물을 사용할 때 물의 pH가
7.0~8.5 범위 내에 있는지 확인하십시오.
일부 더 큰 플라스미드(>10kb)는 일반적으로 예열된(70˚C) 버퍼 EB 또는 ddH가
아니면 최적으로 용출되지 않을 수 있습니다.2O는 용출에 적용됩니다. 예열된 용출
버퍼를 추가한 후 2분 동안 배양합니다.

미니

진올®특급TM프로토콜 핸드북19
 비 진공 프로토콜
압력 범위
15~18수은
진공 압력은 이 목록의 범위에 있어야 합니다. 낮은 진공
285~345mmHg
은 DNA 수율과 순도를 감소시킬 수 있으며 너무 높은 진
380~460밀리바
공 압력은 컬럼 멤브레인을 파열시킬 수 있습니다.
5.5~6.5psi

1.단단히 진공 매니폴드의 포트에 SV 열을 연결합니다. 루어 커넥터가 있는 대부

분의 상업용 진공 매니폴드를 사용할 수 있습니다.

2.피펫팅 또는 디캔팅을 통해 제거된 용해물을 SV 컬럼으로 옮깁니다.

흰색 침전물이 상층액과 함께 옮기지 않도록 주의해야 합니다.

삼.진공 소스를 켜서 SV 열을 통해 용액을 그립니다. 모든 액체가 SV 컬럼을 통과하면

진공을 해제합니다.

4.(선택 과목:)버퍼 AW 500ul를 적용합니다. 진공 소스를 켜서 SV 열을 통해 용액을

끌어오고 진공 소스를 끕니다.

18페이지의 '원심 분리 프로토콜'의 2단계 주석을 참조하십시오.

5.800ul의 버퍼 PW를 적용하고 진공 소스를 켭니다. 모든 액체가 SV 컬럼을 통과하면

미니

진공을 해제합니다.

6.SV 컬럼을 수집 튜브(제공됨)로 옮깁니다.

7.'원심 분리 프로토콜'(19페이지)의 4단계로 이동합니다.

20진올®특급TM프로토콜 핸드북
진올®특급TM플라스미드 SV 미디
실험 전*처음 사용하기 전에 무수 에탄올(ACS 등급 이상)을 첨가하십시오.
병에 표시된 대로 버퍼 AW 및 PW에 넣습니다.
* 별도의 지시가 없는 한, 모든 원심분리 단계는 스윙 버켓 로터가 있는
4,000~5,000 xg 용량의 원심분리기에서 실온에서 수행해야 합니다(15
페이지 참조).

* 처음 사용하기 전에 모든 RNase A를 버퍼 S1에 추가하십시오.

* RNase A를 첨가한 후 버퍼 S1을 4˚C에서 보관하십시오.

* 버퍼 S2 및 S3는 차가운 주변 조건에서 침전될 수 있습니다.

침전물이 나타나면 완전히 녹을 때까지 37˚C에서 녹입니다.

투명 용해물의 준비

1.탁상 원심분리기에서 10,000 xg에서 5분 동안 원심분리하여 세균 배양액 50ml를

펠렛합니다. 상층액은 최대한 버린다.

적절한 양의 세균 배양을 사용하십시오. 50ml 미만의 작은 샘플 또는 OD가 있는

50ml 샘플의 경우600<2, 버퍼 S1, S2 및 S3의 부피를 각각 2, 2 및 2.8ml로 줄입니
다.
박테리아 배양은 선택적 항생제가 포함된 LB-broth에서 16~21시간 동안 성장시켜야
합니다. TB 또는 2xYT와 같은 다른 풍부한 배지 및/또는 100ml 이상의 더 높은 배양 부
피가 사용되는 경우 박테리아 세포의 너무 높은 세포 밀도가 용해 감소를 유발할 수 있으
므로 버퍼 S1, S2 및 S3의 부피를 비례적으로 증가시킵니다. 효율성이 떨어지고 결과적
으로 만족스럽지 못한 수율이 발생합니다.

2.2.5 ml의 버퍼 S1에 완전히 펠릿화된 박테리아 세포를 재현탁합니다. 세포 펠렛을

완전히 재현탁하는 것이 필수적입니다.
미디

* 버퍼 S1을 처음 사용하기 전에 RNase A를 추가하십시오.

진올®특급TM프로토콜 핸드북21
 삼.2.5ml의 버퍼 S2를 추가하고 튜브를 4번 뒤집어 혼합합니다(와동하지 마십시오).

세포 현탁액이 투명하고 점성이 될 때까지 배양하되 5분 이상 배양하지 마십시오.

탁한 덩어리 없이 lysate가 투명해지면 즉시 다음 단계로 진행하는 것이 중요합니
다.
침전된 물질이 버퍼 S2에 형성되면 37˚C에서 가열하여 용해합니다. 침전된 버퍼
S2는 DNA 복구 수율을 크게 감소시킬 수 있습니다.

4.S3 완충액 3.5ml를 넣고 튜브를 4~6회 뒤집어 완전히 천천히 섞는다(VORTEX하지

말 것).
결합 조건의 더 나은 침전 및 조정을 위해 버퍼 S3를 추가한 직후 용액을 부드럽게
그러나 완전하게 혼합합니다.
얼음 위에서 배양하면 변성된 세포 성분을 보다 효율적으로 침전시키는 데 도움이
될 수 있습니다. 염색체 DNA의 오염 가능성을 줄일 수 있습니다.

5.(선택 과목:)4,500 xg(5,000 rpm)에서 20분 동안 원심분리합니다. 또는 고정 앵글

로터 원심분리기에서 10,000 xg(9,000rpm)로 10분 동안 원심분리합니다.

세균 세포의 세포 밀도가 너무 높으면 EzClear가 막힐 수 있기 때문에TM다음 단계에

서 필터를 사용하는 경우, 이 단계는 크거나 밀도가 높은 샘플에 필요할 수 있습니
다.
미디

22진올®특급TM프로토콜 핸드북
 플라스미드 DNA의 분리 및 정제
이 키트를 사용할 때 두 가지 방법 중 하나를 선택하여 plasmid DNA를 정제할 수 있습
니다. 플라스미드 DNA는 SV 컬럼을 통해 제거된 용해물을 끌어당기기 위해 원심분리를
사용하여 정제할 수 있습니다. 또는 진공을 사용하여 SV 컬럼을 통해 제거된 용해물을
강제로 통과시킬 수 있습니다(26페이지).

ㅏ ㅏ씨씨이자형이자형NN티티아르 자형아르 자형만약에나유자형아르 자형영형영형티티영형영형씨씨영형영형엘엘

부ggㅏㅏ티티이오이오NN피피아르

1.모든 lysate 또는 cleared lysate를 EzClear에 붓습니다.TM50ml 원추형 수집 튜

브(제공됨)에 있는 필터 장치(파란색 링).
2분 동안 배양하고 1,000 xg(2,200 rpm)에서 3분 동안 원심분리합니다. 세포 파
편은 배양 중에 위로 올라오며, 이는 EzClear를 통해 lysate를 제거하는 데 도움이
됩니다.TM필터 유닛. 배양을 수행하지 않으면 용해물의 여과가 불완전해질 수 있습
니다. 소량의 액체가 잔류 불용성 물질에 갇힌 상태로 남을 수 있지만 이로 인해 수
율이 눈에 띄게 감소하지는 않습니다.

22페이지의 5단계에서 선택적 원심분리를 수행하는 경우 상등액만 EzClear에 옮

깁니다.TM필터 장치(일부 이물질이 함께 옮길 수 있음).

2.통과 분획을 SV Midi 컬럼(빨간색 링)으로 조심스럽게 따르십시오. 1,000

xg(2,200 rpm)에서 3분 동안 원심분리합니다. SV 컬럼을 제거하고 통과물을 버
리고 SV 컬럼을 수집 튜브에 다시 삽입합니다.

삼.버퍼 AW 9ml를 적용하고 1,000 xg(2,200rpm)에서 3분 동안 원심분리합니다.

SV 컬럼을 제거하고 통과물을 버리고 SV 컬럼을 수집 튜브에 다시 삽입합니다.

이 단계는 SV 컬럼 막에 비특이적으로 결합된 단백질, 탄수화물 및 기타 세포 성분

의 흔적을 제거합니다.

4.1,000 xg(2,200 rpm)에서 3분 동안 버퍼 PW 및 원심분리기 12ml를 적용합니다.

미디

SV 컬럼을 제거하고 통과물을 버리고 SV 컬럼을 수집 튜브에 다시 삽입합니다.

진올®특급TM프로토콜 핸드북23
 5.4,500 xg(5,000 rpm)에서 15분 동안 3 ml의 버퍼 PW 및 원심분리기를 적용합니
다. SV 컬럼을 새 50ml 코니컬 튜브(제공되지 않음)로 옮깁니다.

수집 튜브에서 SV Midi 컬럼을 제거할 때 SV 컬럼이 통과 분획과 접촉하지 않도록

주의해야 합니다. 이렇게 하면 버퍼 PW에서 에탄올이 이월될 수 있습니다.

용출액의 잔류 에탄올은 후속 반응을 방해할 수 있습니다. 에탄올의 이월이 발생하

면 SV 컬럼을 RT에서 15분 동안 배양하여 잔류 에탄올을 증발시킵니다.

6.버퍼 EB 또는 탈이온 증류수 0.6ml를 SV 컬럼 멤브레인 중앙에 직접 추가합니다. 실

온에서 5분 동안 배양하고 4,500 xg(5,000 rpm)에서 5분 동안 원심분리기를 배
양합니다.
최적의 DNA 용출을 위해 버퍼 EB 또는 증류수가 SV 컬럼 멤브레인 중앙에 직접 분
배되었는지 확인하십시오.
DNA 농도를 높이려면 용리액의 부피를 400ul로 줄일 수 있지만 전체 DNA 수율이
약간 감소합니다. 반대로 용출 부피가 클수록 용출액의 농도는 감소하지만 약간 더
많은 DNA가 생성됩니다.

장기간 보관을 위해서는 buffer EB(10mM TrisCl, pH 8.5)에 용출하여 -20˚C 이

하에서 보관하는 것을 권장합니다. Elution을 위해 물을 사용할 때 물의 pH가
7.0~8.5 이내인지 확인하십시오.
일부 더 큰 플라스미드(>10kb)는 일반적으로 예열된(70˚C) 버퍼 EB 또는 ddH가
아니면 최적으로 용출되지 않을 수 있습니다.2O는 용출에 적용됩니다. 예열된 용출
버퍼를 추가한 후 2분 동안 배양합니다.

7.(선택 과목:)
A. 보다 높은 용출액 농도를 위해; 6단계의 용출액을 SV 컬럼 멤브레인에 다시 로드
하고 캡을 닫고 실온에서 5분 동안 배양하고 4,500 xg(5,000 rpm)에서 5분 동안
원심분리합니다.

B. 더 많은 전체 수율을 위해; 0.6~1 ml의 fresh buffer EB를 SV column에 넣고 마

개를 닫은 후 상온에서 5분간 배양하고 4,500 xg (5,000 rpm)에서 5분간 원심분
미디

리한다.

1차 용출액과 2차 용출액은 필요에 따라 혼합하거나 별도로 수집할 수 있습니다.

24진올®특급TM프로토콜 핸드북
 V
비비 음
ㅏV씨ㅏ유씨유유중
홍보피영형아르 자형티영형영형티씨영형영형씨엘올

압력 범위
23~26 HG
진공 압력은 이 목록의 범위에 있어야 합니다. 낮은 진공
580~660mmHg
압력은 DNA 수율과 순도를 감소시킬 수 있으며 너무 높
77~880밀리바
은 진공 압력은 컬럼 멤브레인을 파열시킬 수 있습니다.
11~12.5psi

1.EzClear를 중첩하여 컬럼 스택 조립TM미디 필터 장치(파란색 링)를 SV Midi 컬럼(빨

간색 링) 상단에 삽입합니다. 조립된 컬럼 스택을 진공 매니폴드의 포트에 단단히
연결합니다.
루어 커넥터가 있는 대부분의 상업용 진공 매니폴드를 사용할 수 있습니다.

2.모든 용해물을 EzClear로 따르십시오.TM미디 필터 장치 및 세포 파편과 침전물이 위

로 올라갈 수 있도록 1~3분 동안 배양합니다.

삼.최대 진공을 적용하여 컬럼 스택을 통해 용액을 끌어옵니다. 바닥에 있는 SV Midi

컬럼을 통해 모든 액체를 끌어당기면 천천히 진공을 해제합니다.

용해물은 EzClear를 통과합니다.TM필터 유닛과 플라스미드 DNA는 Midi SV 컬럼

의 멤브레인에 결합됩니다.
용해물의 일부가 EzClear를 통과하지 못하는 경우TM필터 장치, 필터 장치를 제거하
고 새 50 ml conical tube에 넣고 1,750 xg(3,000 rpm)에서 3분 동안 원심분리
합니다. 그런 다음 Midi SV 컬럼에 패스스루를 적용합니다. 진공이 너무 빨리 해제
되면 멤브레인이 SV 컬럼에서 분리될 수 있습니다. 멤브레인이 분리되면 멸균된 것
으로 부드럽게 두드려줍니다.

4.상단 EzClear 폐기TM필터 장치(파란색 링)를 제거하고 버퍼 AW 9ml를 SV Midi 컬

럼(빨간색 링)에 적용합니다. 진공 소스를 켜서 SV Midi 컬럼을 통해 용액을 끌어
오고 천천히 진공을 해제합니다.
미디

이 단계는 SV 컬럼 막에 비특이적으로 결합된 단백질, 탄수화물 및 기타 세포 성분

의 흔적을 제거합니다.

진올®특급TM프로토콜 핸드북25
 5.버퍼 PW 14ml를 적용하고 진공 소스를 켭니다. 모든 액체가 SV Midi 컬럼을 통과
하면 천천히 진공을 해제합니다.

6.SV Midi 컬럼을 수집 튜브(제공됨)로 옮깁니다.

7.'원심 분리 프로토콜'(24페이지)의 5단계로 이동합니다.

미디

26진올®특급TM프로토콜 핸드북
문제 해결 가이드
사리 가능한 원인들 제안
낮음 또는 아니오 샘플에 너무 많은 세 배양액은 항생제가 포함된 적절한 배지에서
수율 포 16~21시간 동안 배양해야 합니다. 샘플의 양
플라스미드 DNA 을 줄입니다. Terrific Broth(TB) 또는 2xYT
와 같은 진한 국물을 사용하는 경우 이러한 배
지는 세포 밀도가 매우 높기 때문에(LB의 2~5
배) 시작 샘플 부피를 줄여야 합니다.

적은 카피 수 낮은 카피 수의 플라스미드는 5ml의 하룻밤

사용된 플라스미드 배양에서 0.5ug의 DNA를 얻을 수 있습니다.
가능하면 배양량을 늘리거나 복제 수가 많은
플라스미드 또는 농축액을 사용하십시오.

불량한 재서스펜션 박테리아 세포 펠릿은 완충액 S1에 완전히 재

박테리아 알갱이 현탁되어야 합니다.
버퍼 S1

버퍼 S2 침전 37˚C(또는 그 이상)에서 가온하여 버퍼 S2를 재용

해합니다.
언급

불충분한 소화 과도한 RNA는 플라스미드 DNA와 GeneAll의

RNase A로 결합을 방해할 수 있습니다.®플라스미드 SV 컬
럼 막.
RNase A를 추가한 후 버퍼 S1을 4˚C로 보관
하십시오.
RNase A가 포함된 버퍼 S1이 1년 이상 된 경
우 RNase A의 활성이 약간 감소할 수 있습니
다.

부적절한 용출 DNA는 저염 상태에서만 용출됩니다. Buffer

완충기 EB(10mM TrisCl, pH 8.5)가 최적의 elution
효율을 가지지만 사용자의 필요에 따라 다른
elution buffer를 사용할 수 있습니다. 용출
효율은 pH에 따라 달라지며 최대 효율은
7.0~8.5 사이에서 달성됩니다. 용출을 위해 물
을 사용하는 경우 pH 값을 확인하십시오.

진올®특급TM프로토콜 핸드북27
문제 해결 가이드
사리 가능한 원인들 제안
부적절한 원심분리기 스윙 버켓 로터(4,000~5,000 xg 가능)를 사용
(미디) 해야 합니다. 고정각 로터를 사용하면 용해물
과 컬럼 멤브레인 사이의 적절한 접촉이 실패
하여 DNA 수율이 낮고 일관되지 않을 수 있습
니다.

낮은 순도 오염 클리어된 lysate를 GeneAll로 옮기는 경우®특

때 침전 급TM플라스미드 SV 컬럼은 침전물이 이동에
포함되지 않도록 합니다.
제본

부적절한 원심분리기 고정각 로터 대신 스윙버킷 로터

(미디) (4,000~5,000 xg 가능)를 사용해야 합니다.

염색체 잘못된 취급 완충액 S3를 첨가한 후 격렬한 와동은 염색체

DNA 오염- 추가 후 용해 DNA의 전단에 이어 염색체 DNA 오염을 일으
킬 수 있습니다. 버퍼 S3를 추가한 후 용해물을
국가 버퍼 S3의
부드럽게 처리합니다.

lysate로 벽을 덮는 단순한 반전 및 회전 튜브
는 혼합에 충분합니다.

번짐 너무 긴 용해 시간 버퍼 S2에서 너무 긴 용해는 염색체 DNA 오

플라스미드 DNA 염을 일으킬 수 있습니다. 용해물에 덩어리가
더 이상 보이지 않으면 즉시 다음 단계로 진행
합니다.
어떤 경우에도 Lysis 시간은 5분을 넘지 않아야 합니
다.

활발한 섞임 버퍼 S2를 추가한 후 격렬한 취급은 플라스미

버퍼 S2 드 DNA의 돌이킬 수 없는 변성을 초래할 수 있
습니다. 점성이 있는 용해물로 벽을 덮기 위한
부드러운 반전 및 회전 튜브는 혼합에 충분합
니다.

여과된 용해물 과도한 염침- 시작 샘플의 바이오매스는 작습니다. 알칼리성

by 이지클리어TM분 용해물에서 반복 용해 동안 버퍼의 부피를 줄입니다. 그렇지 않
명하지 않다 (미디) 으면 시작 샘플의 양을 늘리십시오.

28진올®특급TM프로토콜 핸드북
문제 해결 가이드
사리 가능한 원인들 제안
RNA 오염- RNase A 생략 또는 이 RNase A는 처음 사용하기 전에 버퍼 S1에 추
국가 전 가해야 합니다. RNase A가 포함된 버퍼 S1이
1년 이상 된 경우 RNase A의 활성이 감소할
수 있습니다. 추가 RNase A를 추가합니다(작
업 농도=100 ug/ml). RNase A가 포함된 버
퍼 S1은 4˚C에서 보관해야 합니다.

샘플에 너무 많은 세 샘플 볼륨을 줄입니다. 너무 많은 세포가

포 RNase A 소화에 적절하게 적용되지 않을 수
있습니다.

고염 부적절한 세척 단계 프로토콜에서 세척 단계를 확인하십시오. 또는

집중 세척 단계에서 버퍼 PW를 적용한 후 실온에서
용출액에서
5분 동안 배양하십시오.

플라스미드 DNA 뉴클레아제 오염- 을 위한끝A+HB101 및 JM 시리즈(13페이지)

하락 옵션 와 같은 균주는 AW 완충액으로 세척해야 합니
다.

DNA가 떠다닌다 에탄올은 아니다 세척 단계가 제대로 수행되었는지 확인하십시

우물에서 완전히 제거 오. 진올®특급TMPlasmid SV column
로드하는 동안 세척 단계 중 membrane은 추가 원심분리 또는 공기건조
를 통해 완전히 건조되어야 좋은 결과를 얻을
아가로스 젤
수 있습니다.

효소 고염 세척 단계가 프로토콜에 따라 수행되었는지 확

반응이 아니다 에 집중 인하십시오. 세척 단계를 반복하면 용출액에서
높은 염분을 제거하는 데 도움이 될 수 있습니
수행 용출하다
다.
퓨리와 잘-
DNA 낮은 순도의 DNA 29페이지의 "낮은 순도"를 참조하십시오.

잔류 에탄올 세척 단계가 제대로 수행되었는지 확인하십시

용출하다 오. 진올®특급TMPlasmid SV 컬럼 멤브레인은
추가 원심분리 또는 공기 건조를 통해 완전히
건조되어야 합니다.

진올®특급TM프로토콜 핸드북29
간략한 프로토콜

진올®특급TM플라스미드 SV 미니
1.원심 분리에 의한 펠렛 세포
2.다음에 다시 일시 중단250ul버퍼의S1

삼.추가하다250ul버퍼의S2반전하여 혼합
4.추가하다350ul버퍼의S3반전하여 혼합
5.원심 분리기10 분
6.제거된 용해물을 SV 컬럼으로 옮기고 원심분리기에30초
7.(선택 과목:)추가하다500ul버퍼의AW및 원심분리기30초
8.추가하다700ul버퍼의PW및 원심분리기30초
9.추가 원심분리기1 분
10.적용하다50ul버퍼의EB및 원심분리기1 분

진올®특급TM플라스미드 SV 미디
1.원심 분리에 의한 펠렛 세포
2.다음에 다시 일시 중단2.5ml버퍼의S1

삼.추가하다2.5ml버퍼의S2반전하여 혼합
4.추가하다3.5ml버퍼의S3반전하여 혼합
5.(선택 과목:)4,500 xg(5,000 rpm)에서 20분 동안 원심분리기
6.용해물(4단계) 또는 제거된 용해물(5단계)을 EzClear로 옮깁니다.TM필터 컬럼(파란색
링),2분및 원심분리기3분~에1,000xg(2,200rpm)
7.pass-through를 SV Midi 컬럼(빨간색 링)으로 옮기고 원심분리기에3분~에
1,000xg(2,200rpm)
8.추가하다9ml버퍼의AW및 원심분리기3분~에1,000xg
9.추가하다12ml버퍼의PW및 원심분리기3분~에1,000xg
10.추가하다3ml버퍼의PW및 원심분리기15 분~에4,500xg
11.적용하다600ul버퍼의EB, 서 보자5 분및 원심분리기5 분~에4,500xg

30진올®특급TM프로토콜 핸드북
주문 정보

제품 규모 크기 고양이. 아니요. 유형 제품 규모 크기 고양이. 아니요. 유형

하이브리드-QTM플라스미드 DNA의 빠른 준비를 위해 엑스진TM총 DNA 분리용

플라스미드 Rapidprep 50 100-150 100 105-101 스핀 /
미니 회전 미니
200 100-102 250 105-152 진공
26 105-226 스핀 /
블러드 SV 미디
특급TM 플라스미드 DNA의 준비를 위해 100 105-201 진공
50 101-150 스핀 / 10 105-310 스핀 /
미니 맥시
200 101-102 진공 26 105-326 진공
26 101-226 100 106-101 스핀 /
플라스미드 SV 스핀 / 미니
미디 50 101-250 250 106-152 진공
진공 셀에스브이
100 101-201 10 106-310 스핀 /
맥시
26 106-326 진공
ExfectionTM
transfection 등급의 플라스미드 DNA 준비용 100 108-101 스핀 /
미니
50 111-150 스핀 / 250 108-152 진공
미니
200 111-102 진공 26 108-226 스핀 /
플라스미드 르
클리닉 SV 미디
(낮은 엔도톡신) 26 111-226 스핀 / 100 108-201 진공
미디
100 111-201 진공 10 108-310 스핀 /
맥시
20 121-220 26 108-326 진공
플라스미드 EF
미디 회전
(엔도톡신 프리) 100 121-201 게놈 DNA 마이크로 50 118-050 회전
100 117-101 스핀 /
미니
엑스핀TM단편 DNA 정제용 250 117-152 진공

50 102-150 스핀 / 26 117-226 스핀 /
미니 미디
진공
플랜트에스브이
젤에스브이
200 102-102 진공 100 117-201

50 103-150 스핀 / 10 117-310 스핀 /
PCR SV 미니 맥시
200 103-102 진공 26 117-326 진공

50 토양 DNA 미니 미니 50 114-150 회전
113-150 스핀 /
클린업 SV 미니 스툴 DNA 미니 미니 50 115-150 회전
200 113-102 진공
바이러스 DNA/RNA 미니 50 128-150 회전
50 112-150 스핀 /
콤보 GP 미니 50 138-150
200 112-102 진공 FFPE 조직 DNA 미니 회전
250 138-152

엑스진TM총 DNA 분리용

100 104-101 스핀 /
제넥스TM 스핀 컬럼 없이 전체 DNA 분리
미니
250 104-152 진공 100 220-101
섹스 해결책
26 104-226 스핀 / 제넥스TM피 500 220-105
조직 SV 미디
100 104-201 진공 Lx 100 220-301 해결책
10 104-310 스핀 / 100 221-101
맥시 섹스 해결책
26 104-326 진공 제넥스TM셀 500 221-105
100 109-101 스핀 / Lx 100 221-301 해결책
미니
250 109-152 진공 100 222-101
섹스 해결책
26 109-226 스핀 / 제넥스TM조직 500 222-105
조직을 더한!SV 미디
100 109-201 진공 Lx 100 222-301 해결책
10 109-310 스핀 /
맥시
26 109-326 진공

진올®특급TM프로토콜 핸드북31
 제품 규모 크기 고양이. 아니요. 유형 제품 규모 크기 고양이. 아니요. 유형

제넥스TM총 DNA 분리용 엠프원TMPCR 증폭용

섹스 100 227-101 250유 501-025
제넥스TM식물 MX 100 227-201 해결책 Taq DNA 중합효소 500유 501-050 (2.5U/㎕)
Lx 100 227-301 1,000유 501-100
섹스 100 228-101 250유 502-025
제넥스TM식물을 더한! MX 50 228-250 해결책
- Taq DNA 중합효소 500유 502-050 (2.5U/㎕)
Lx 20 228-320
1,000유 502-100
DirExTM시리즈 250유 504-025
추출 없이 PCR 템플릿 준비
- Pfu DNA 중합효소 500유 504-050 (2.5U/㎕)
DirExTM 100 250-101 해결책
1,000유 504-100
DirExTM빠른-조직 96티 260-011 해결책
250유 505-025
DirExTM빠른-배양세포 96티 260-021 해결책 Fast-Pfu DNA
500유 505-050 (2.5U/㎕)
DirExTM빠른-전혈 96티 260-031 해결책 중합효소
1,000유 505-100
DirExTM빠른-혈흔 96티 260-041 해결책
250유 531-025
DirExTM빠른-머리카락 96티 260-051 해결책 핫스타트 Taq DNA
500유 531-050 (2.5U/㎕)
DirExTM빠른- 협측 면봉 96티 260-061 해결책 중합효소
1,000유 531-100
DirExTM빠른-담배 96티 260-071 해결책
20㎕ 521-200
동결 건조
50㎕ 521-500
RNA 시리즈total RNA 준비용 Taq 프리믹스 96관
20㎕ 526-200
100 301-001 해결책
RiboExTM 미니 해결책 50㎕ 526-500
200 301-002
20㎕ 522-200
하이브리드-RTM 미니 100 305-101 회전 동결 건조
50㎕ 522-500
하이브리드-RTM블러드 RNA 미니 50 315-150 회전 - Taq 프리믹스 96관
20㎕ 527-200
하이브리드-RTMmiRNA 미니 50 325-150 회전 해결책
50㎕ 527-500
100 302-001
RiboExTM엘에스 미니 해결책 20㎕ 525-200
200 302-002 해결책
HS-Taq 프리믹스 96 튜브 50㎕ 525-500
리보클리어TM 미니 50 303-150 회전
20㎕ 520-200 동결 건조
리보클리어TM을 더한! 미니 50 313-150 회전
- Pfu 프리믹스 96 튜브 50㎕ 523-500 해결책
리보스핀TM 미니 50 304-150 회전
Taq 프리믹스(염료 없음) 96관 20㎕ 524-200 동결 건조
50 314-150
리보스핀TMII 미니 회전 dNTP 믹스 500㎕ 509-020 각 2.5mM
300 314-103
dNTP 세트 1ml x
미니 50 509-040 100mM
리보스핀TMvRD 302-150 회전 (dATP, dCTP, dGTP 및 dTTP 세트) 4개의 관

리보스핀TMvRD을 더한!미니 50 312-150 회전

리보스핀TMvRD II 미니 50 322-150 회전
리보스핀TM식물 미니 50 307-150 회전
리보스핀TM
미니 50 317-150 회전
씨앗 / 과일

올스핀TM 미니 50 306-150 회전
리보세이버TM 미니 100 351-001 해결책

32진올®특급TM프로토콜 핸드북
 제품 규모 크기 고양이. 아니요. 유형 제품 크기 고양이. 아니요.

앰프마스터TMPCR 증폭용 단백질 시리즈

0.5ml x 2 튜브 541-010 해결책 프로틴엑스TM
Taq 마스터 믹스 100ml 701-001 해결책
0.5ml x 10 튜브 541-050 해결책 동물세포/조직

0.5ml x 2 튜브 542-010 해결책 파게스타TM

- Taq 마스터 믹스 감소
0.5ml x 10 튜브 542-050 해결책 1ml × 10 튜브 751-001 해결책
5X SDS 페이지
0.5ml x 2 튜브 545-010 해결책 샘플 버퍼
HS-Taq 마스터 믹스
0.5ml x 10 튜브 545-050 해결책
0.5ml x 2 튜브 543-010 해결책 자동 핵산 정제용
- PFU 마스터 믹스
0.5ml x 10 튜브 543-050 해결책 12 악기 GST012 체계

24 악기 GST024 체계
하이퍼스크립트TM역전사용
게놈 DNA 세포/조직 96 401-104 전부
역전사 효소 10,000유 601-100 해결책
RT 마스터 믹스 0.5ml × 2 튜브 601-710 해결책 게놈 DNA 혈액 96 402-105 전부

RT 마스터 믹스 박테리아 DNA 96 403-106 전부

0.5ml × 2 튜브 601-730 해결책
올리고 (dT)20
총 RNA 96 404-304 전부
랜덤 헥사머와 RT
0.5ml × 2 튜브 601-740 해결책 바이러스 DNA/RNA 96 405-322 전부
마스터 믹스

RT 프리믹스 96관, 20㎕ 601-602 해결책 CFC 종자 DNA / RNA 96 406-C02 전부

RT 프리믹스 게놈 DNA 식물 96 407-107 전부

96관, 20㎕ 601-632 해결책
올리고 (dT)20
토양 DNA 96 407-108 전부
RT 프리믹스
96관, 20㎕ 601-642 해결책
무작위 육합체

원스텝 RT-PCR
0.5ml × 2 튜브 602-110 해결책
마스터 믹스

원스텝 RT-PCR
96 튜브, 20㎕ 602-102 해결책
프리믹스
첫 번째 가닥
50 반응 605-005 해결책
합성 키트

ZymAllTM
10,000유 605-010 해결책
RNase 억제제

ZymAllTM
4,000유 605-004 해결책
RNase 억제제

RealAmpTMqPCR 증폭용
SYBR qPCR 마스터 200 rxn 20㎕ 801-020
해결책
혼합(2X, 낮은 ROX) 500 rxn 20㎕ 801-050

SYBR qPCR 마스터 200 rxn 20㎕ 801-021

해결책
혼합(2X, 높은 ROX) 500 rxn 20㎕ 801-051

진올®특급TM프로토콜 핸드북33
 메모 .

34진올®특급TM프로토콜 핸드북
메모 .

진올®특급TM프로토콜 핸드북35
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