Co-cultivation of Isochrysis galbana

and Marinobacter sp. can enhance algal

growth and docosahexaenoic acid
production Ying-Ying Wang
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-sp-can-enhance-algal-growth-and-docosahexaenoic-acid-production-ying-ying-wang/
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Co-cultivation of Isochrysis galbana and Marinobacter sp. can enhance algal

growth and docosahexaenoic acid production
Ying-Ying Wang a, Si-Min Xu a, Jia-Yi Cao a, *, Min-Nan Wu a, Jing-Hao Lin a, Cheng-Xu Zhou a,
Lin Zhang a, Hai-Bo Zhou b, Yan-Rong Li d, Ji-Lin Xu a, *, Xiao-Jun Yan c
a
Key Laboratory of Applied Marine Biotechnology, Ningbo University, Ministry of Education of China, Ningbo, Zhejiang 315211, China
b
Fujian Dalai Seed Science and Technology Co. LTD, Ningde, Fujian 352101, China
c
Collaborative Innovation Center for Zhejiang Marine High-Efficiency and Healthy Aquaculture, Ningbo University, Ningbo, Zhejiang 315211, China
d
Ningbo Institute of Oceanography, Ningbo, Zhejiang 315832, China

A R T I C L E I N F O A B S T R A C T

Keywords: Isochrysis galbana, an important diet microalgal species, is widely used in aquaculture and rich in docosahexa­
Isochrysis galbana enoic acid (DHA). Currently, no efficient strategies are available to steadily enhance the production of its biomass
Marinobacter sp. and DHA. It has been reported that algae-associated bacteria can affect the yield of algae and the production of
Growth-promoting bacteria
high-value compounds. Here, we identified a growth-promoting bacterial strain Marinobacter sp., which could
DHA
enhance the growth, the content of chlorophyll a, the maximal photochemical efficiency of PS II (Fv/Fm), and
soluble protein content of I. galbana when they were co-cultured, while superoxide dismutase (SOD) activity was
decreased. Besides, Marinobacter sp. promoted the production of DHA and up-regulated the expressions of genes
involved in DHA synthesis pathway of I. galbana. Our study clearly suggested that co-cultivation of I. galbana and
Marinobacter sp. could effectively enhance the quality and quantity of microalgae, showing promising applica­
tions in improving productivity and sustainability of aquaculture algal rearing systems.

1. Introduction cultivation of high-quality microalgae and improving their high-value

Microalgae have potential applications as food, medicine, health
products, biomass energy, industrial materials, bait in aquaculture and
so on (Harun et al., 2010; Hemaiswarya et al., 2011; Matos et al., 2017).
Microalgae are rich in nutrients, including proteins, amino acids, pig­
ments, carbohydrates, lipids, vitamins, and some minerals (Buono et al.,
2014; Matos et al., 2017; Pradhan et al., 2021). Among them, docosa­
hexaenoic acid (DHA) and eicosapentaenoic acid (EPA) are the most
valuable functional components in microalgal lipids, which have been
widely believed to benefit human health (Romieu et al., 2005). Besides,
these microalgal nutrients have also been widely used in aquaculture.
Microalgae as bait or bait supplements can alleviate the barriers to fish
meal farming and have been proved to be a successful replacement for
fish meal (Dineshbabu et al., 2019). Some microalgae, such as Tha­
lassiosira pseudonana, are widely cultivated to feed the Pacific oyster
Crassostrea gigas and rock scallops (Yaakob et al., 2014). Therefore, the
substances are very important for aquaculture.
As one of the most important bait microalgae, I. galbana belongs to
the class of Prymnesiophyceae (Matos et al., 2019). Extensive research
has shown that I. galbana is widely used to feed bivalve larvae, such as
mussels, scallops, clams, and bivalve larvae (Dineshbabu et al., 2019;
Tremblay et al., 2007), because it is small in size, easy to be digested,
and rich in essential nutritional constituents, such as DHA and EPA. As a
potential algal strain with abundant DHA and EPA, it has been observed
that I. galbana is not only a good bait for aquaculture seedling but also an
important raw material for the development of bioactive substances (Liu
et al., 2013). Meanwhile, it is considered to have the potential to achieve
industrialization. Therefore, a great deal of attention has been paid to
the study of I. galbana recently.
To improve the wide application of I. galbana, it is of great signifi­
cance to enhance its biomass yield. Studies have found that the growth
of I. galbana is affected by many abiotic factors, such as light,

Abbreviations: DHA, docosahexaenoic acid; SOD, superoxide dismutase; EPA, eicosapentaenoic acid; BCA, bicinchoninic acid; FAMEs, Fatty acid methyl esters;
RT-qPCR, Real-time quantitative PCR; rbcL, ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase; d4FAD, delta-4 desaturase gene; ASE2, delta-9 elongase gene; SFAs,
saturated fatty acids; MUFAs, monounsaturated fatty acids; ROS, reactive oxygen species; VF, vibrioferrin.
* Corresponding authors.
E-mail addresses: caojiayi@nbu.edu.cn (J.-Y. Cao), xujilin@nbu.edu.cn (J.-L. Xu).

https://doi.org/10.1016/j.aquaculture.2022.738248
Received 14 December 2021; Received in revised form 21 March 2022; Accepted 8 April 2022
Available online 11 April 2022
0044-8486/© 2022 Elsevier B.V. All rights reserved.
Y.-Y. Wang et al.
temperature, salinity, CO2, and nutrients (Alkhamis and Qin, 2013; Cao
et al., 2020; Picardo et al., 2013; Sayegh and Montagnes, 2011; Zhang
et al., 2014). However, even if the main abiotic factors of the growth
environment of I. galbana are controlled under optimal conditions, there
are still many problems under large-scale outdoor conditions, reminding
us that the growth is also impaired by other factors in addition to the
above-mentioned abiotic factors. Algae will release a large number of
carbohydrates, amino acids, enzymes, lipids, and other metabolites into
the environment during the growth process to form a unique “phyco­
sphere”, which will attract a lot of bacteria-dominated microorganisms
(Bell and Mitchell, 1972). In this environment, the extracellular prod­
ucts of algae will stimulate bacterial growth and vice versa. Therefore,
the interactions between these two groups and the influence of their
interaction on each other are areas of recent research interest. Besides
the influence on growth, it has been reported that bacteria also affect the
production of high-value compounds of microalgae. For example,
Pseudomonas composti promoted the increase in biomass yield and lipid
of Characium sp. 46–4 by releasing some unidentified extracellular
compounds (Berthold et al., 2019). In addition, Liu et al. (2020) have
found that co-culture with probiotic algae-associated bacteria signifi­
cantly enhances the EPA production of Nannochloropsis oceanica. In the
case of I. galbana, Sandhya and Vijayan (2019) have shown that some
I. galbana-associated bacteria play a role in promoting algal growth.
Moreover, the interaction between them is regulated by various growth-
stimulating compounds, such as antioxidants, siderophores, and indole-
3-acetic acid, which can have a significant positive impact on algal
growth. However, the relationship between this microalgae and bacteria
remains largely unexplored. Therefore, it is urgently necessary to
explore the growth-promoting bacteria and their effects on the physi­
ology and metabolism of I. galbana, as well as the interaction mechanism
between them.
In the present study, we preliminarily applied different initial algae/
bacteria ratios to explore the effects of I. galbana-associated bacteria
Marinobacter sp. on the growth of I. galbana. We further evaluated the
physiological and biochemical effects of Marinobacter sp. on I. galbana.
Collectively, our current findings not only improved the understanding
of bacteria-microalgae interactions but also provided an alternative
strategy to improve algal production and culture stability.
2. Materials and methods
2.1. Culture of microalgae and bacteria
I. galbana 3011 was obtained from the Marine Biotechnology Labo­
ratory of Ningbo University, China. As a culture medium, the seawater
was filtered through 0.22-μm cellulose acetate membranes and then
sterilized by autoclaving. NMB3 medium used in this study was
composed of KNO3 (100 mg/L), KH2PO4 (10 mg/L), MnSO4⋅H2O (2.5
mg/L), FeSO4⋅7H2O (2.5 mg/L), EDTA-Na2 (10 mg/L), vitamin B1 (6 μg/
L), and vitamin B12 (0.05 μg/L) (Yang et al., 2016). A photoperiod of 12/
12-h day/night was applied with a light intensity of 100 μmol photon
m− 2 s− 1 using a cool light fluorescent lamp. The temperature was
controlled at 25 ◦ C throughout the experiment. Marinobacter sp. used in
this study was isolated from I. galbana culture and preserved in the
Marine Biotechnology Laboratory of Ningbo University. Marinobacter sp.
was freshly cultured on a 2216E marine medium at 28 ◦ C before
experiments.
2.2. Co-culture experiments
Before co-culture experiments, Marinobacter sp. was plated freshly on
a 2216E agar medium, and single colonies were grown in the 2216E
liquid medium overnight (25 ◦ C, 180 rpm). The freshly prepared bac­
terial culture broth was centrifuged at 5000 ×g for 5 min, washed twice,
and finally resuspended in sterile NMB3 medium. The axenic I. galbana
was obtained and maintained as previously described (Cao et al., 2019).
2
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When axenic I. galbana was cultured to an exponential phase (initial cell
density of about 1 × 106 cells/mL), the bacterial suspension was added
into the algal culture to achieve an algae/bacteria ratio of 1:1, 1:50, or
1:100 (cell counts: cell counts). Axenic I. galbana cultured alone was
denoted as the control group.
2.3. Physiological and biochemical determinations of microalgae
To study the physiological and biochemical effects of Marinobacter
sp. on I. galbana, the algae/bacteria ratio in the co-culture was 1:100.
The content of chlorophyll a, the maximal photochemical efficiency of
PS II (Fv/F), soluble protein content, and superoxide dismutase (SOD)
activity of I. galbana in the co-culture and mono-culture systems were
measured every 2 days. The content of chlorophyll a was measured as
previously described (Bruckner et al., 2008). The absorbance was
determined at wavelengths of 630, 664, and 750 nm. The content of
chlorophyll a was then calculated using the following equation:
Chl a (μg/mL) = 11.47 × (OD664 − OD750 ) − 0.4 × (OD630 − OD750 )
Fv/Fm was measured by AquaPen, which is a lightweight, hand-held
fluorometer intended for quick and reliable measurements of photo­
synthetic activity in algae. The measurement was performed with a
dark-adapted sample. Soluble protein was extracted and analyzed using
the bicinchoninic acid (BCA) protein assay with bovine serum albumin
as the standard according to the manufacturer’s instructions. The con­
centration of soluble protein was calculated based on the standard curve
drawn. The SOD activity was determined by the xanthine oxidase
method at a wavelength of 550 nm according to the manufacturer’s
instructions.
2.4. Fatty acid analysis
For fatty acid analysis, the samples from mono-culture of I. galbana,
mono-culture of Marinobacter sp., and their co-cultures were collected
on the 14th day post-co-culturing by centrifuging at 10,000 rpm for 10
min. The obtained I. galbana and Marinobancter sp. pellets were pre-
frozen in liquid nitrogen and dried by the vacuum freeze-drying sys­
tem for further analysis.
Fatty acid methyl esters (FAMEs) were purified following the
methods with modifications as previously described (Okuyama et al.,
1992). Briefly, samples (20 mg) of lyophilized cells were accurately
weighed and transferred to culture tubes. Next, 1 mL n-hexane, 15 μL
internal standard nonadecanoic acid (1 mg/mL), and 1.5 mL freshly
made pyromrcyl chloride (prepared by slowly adding 10 mL of acetyl
chloride to 100 mL of anhydrous methanol) were added to each sample
in a culture tube and vortexed for 1 min at a slow speed. The tightly
capped tubes were heated at 70 ◦ C in a water bath for 2 h. After samples
were cooled to room temperature, 2.5 mL of 6% K2CO3 was added,
followed by the addition of 1 mL n-hexane. The tubes were vortexed 30s
and the upper phase was collected in 2-mL sample bottle, then cen­
trifugated at 3000 rpm for 10 min. The supernatant was filtered by an
organic phase filter membrane, and the filtrate was collected into a 2-mL
screw-capped sample bottle. The purified fatty acids were subjected to
methylations.
The methyl esters were analyzed using an Agilent 7890B–7000C gas
chromatography system equipped with an EI detector. A 100-m-long
capillary column CD-2560 (Germany, CNW) was used. The column
had an inside diameter of 0.25 mm and a film thickness of 0.2 μm. The
temperature program was set as follows. The initial oven temperature
was maintained at 140 ◦ C for 5 min, then the temperature was increased
to 240 ◦ C at an increment of 4 ◦ C/min; and finally, the oven was
maintained isothermally for 30 min. The injector temperature was set at
250 ◦ C. Helium was used as the carrier gas at a constant flow rate of 2.25
mL/min. In each analysis, 1 μL of methyl ester solution was injected into
the chromatograph. Fatty acids were identified by comparison of
Y.-Y. Wang et al.
retention times to those of known standards and expressed as % of
FAMEs identified. The concentration of each fatty acid was calculated
using Qualitative Analysis, B.07.00 software.
2.5. Total RNA extraction
Microalgae were harvested through centrifugation at 10,000 rpm
and 4 ◦ C for 10 min. Algal cells were ground into powder in liquid ni­
trogen. Total RNA was isolated from each sample using an E. Z. N. A.®
Plant RNA Kit (OMEGA Bio-Tek) according to the manufacturer’s in­
structions. The concentration and quality of the purified RNA were
determined using a Thermo Scientific NanoDrop One spectrophotometer
(Thermo Fisher Scientific, USA).
2.6. Real-time quantitative PCR (RT-qPCR)
Briefly, purified RNA was reversely transcribed into cDNA using
PrimeScript™ RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time)
(TaKaRa, Japan). Gene expression was analyzed through RT-qPCR using
a LongGene Q2000A qPCR system (Hangzhou) and TB Greer® Premix
Ex Taq™ II (Tli RNaseH Plus) (TaKaRa, Japan). The large subunit gene
of ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase (rbcL) was used as
the reference gene (Han et al., 2019). Primers for delta-4 desaturase
gene (d4FAD), d5FAD, d6FAD, and d8FAD were synthesized as previ­
ously reported (Huerlimann et al., 2014). The primers for the delta-9
elongase gene (ASE2) were designed using Primer 5. All the PCR
primers were listed in Table S1. The relative expressions of target genes
were calculated using the 2^-ΔΔCt method as previously described (Cao
et al., 2016).
3. Results
3.1. The effects of Marinobacter sp. on the growth of I. galbana
The axenic strain of I. galbana was cultured in the presence of Mar­
inobacter sp. to investigate the effect of Marinobacter sp. on microalgal
growth. Fig. 1 shows the effects of Marinobacter sp. with different algae/
bacteria ratios (1:1, 1:50, and 1:100) on the content of chlorophyll a of
I. galbana over a period of 14 days. When we explored the effects of
Marinobacter sp. on the growth of I. galbana, we found that Marinobacter
sp. exerted a growth-promoting effect on I. galbana depending on the
population density of the bacteria. Besides, the growth-promoting ef­
fects were enhanced with the increase of the treatment duration of
bacteria. The presence of bacteria under ratios of 1:50 and 1:100
significantly increased the cell growth of I. galbana compared with the
control group. We further detected the cell growth of these two strains
during the co-cultivation. The cell growth of I. galbana was enhanced by
Marinobacter sp., while the growth of Marinobacter sp. was decreased
when compared with pure culture of bacteria from day 4 (Fig. S1).
Moreover, no significant effect on the morphology of Marinobacter sp.
was found in co-cultivation. For I. galbana, at a later stage of the growth,
a large number of deformed algal cells were observed in the mono-
culture, while no deformation of algal cells was observed in the co-
cultures (Fig. S2).
3.2. The physiological and biochemical effects of Marinobacter sp. on
I. galbana
To study the physiological and biochemical effects of Marinobacter
sp. on I. galbana, the content of chlorophyll a, Fv/F, soluble protein
content, and SOD activity of I. galbana in the co-culture and mono-
culture systems were compared (Fig. 2). During 14 days of moni­
toring, the content of algal chlorophyll a in co-cultures was significantly
higher compared with the I. galbana mono-culture (Fig. 2A). The chlo­
rophyll fluorescence parameter, Fv/Fm, was used to monitor the effect of
Marinobacter sp. on the photosynthetic property of I. galbana. Fig. 2B
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Fig. 1. Co-culture results of Isochrysis galbana and Marinobacter sp. with three
different initial algae/bacteria ratios (1:1, 1:50, 1:100) expressed as chlorophyll
a content over the period of 14 days. Significance of the differences between
mean values was determined with Student’s t-test. All the experiments were
carried out in triplicate with standard error as error bar, while asterisks (*)
indicate significant difference at p value <0.05.
shows that Fv/Fm was higher in the co-culture system during the whole
culture process compared with the mono-culture. The results revealed
that the photosynthetic property of I. galbana was improved in the
presence of Marinobacter sp. The total concentration of soluble protein in
the microalgal cells was increased steadily over time (Fig. 2C), showing
that the presence of Marinobacter sp. significantly increased the syn­
thesis of soluble protein in I. galbana. The SOD activity in I. galbana was
decreased in the co-culture system compared with the mono-culture
(Fig. 2D). The presence of Marinobacter sp. inhibited the SOD activity
in microalgae during the entire study period. On the 8th day of the
experiment, the highest SOD activity was observed in the co-culture,
while it was still lower compared with the mono-culture at the corre­
sponding time point. The peak value in the mono-culture on the last day
was 1.27-fold higher compared with the co-culture group.
3.3. The effects of Marinobacter sp. on the fatty acid composition of
I. galbana
The difference in fatty acid composition of I. galbana in the co-culture
and mono-culture systems was analyzed (Table 1-3, Table S2). The most
abundant saturated fatty acids (SFAs) in both axenic and co-cultured
I. galbana were myristic acid (C14:0) and palmitic acid (C16:0). The
specific SFAs obtained from the mono-culture of Marinobacter sp. con­
sisted of dodecanoic acid (C12:0) and tridecanoic acid (C13:0). Addi­
tionally, the main SFAs in Marinobacter sp. were C12:0 (22.81 ± 0.66%)
and C16:0 (29.91 ± 1.03%). Moreover, we found that the contents of
pentadecanoic acid (C15:0), stearic acid (C18:0), and behenic acid
(C22:0) were significantly decreased in I. galbana when co-cultured with
Marinobacter sp. The levels of total monounsaturated fatty acids
(MUFAs) in axenic (27.75 ± 0.62%) and co-cultured (28.46 ± 0.28%)
I. galbana were similar. The most abundant MUFA in both axenic and co-
cultured I. galbana was elaidic acid (C18:1n-9 t). The specific MUFA
obtained from mono-cultured Marinobacter sp. was myristoleic acid
(C14:1n-5). Besides, the content of heptadecenoic acid (C17:1n-7) was
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Fig. 2. Chlorophyll a content (A), Fv/Fm (B), protein content (C) and superoxide dismutase (SOD) activity (D) for Isochrysis galbana co-culture and mono-culture
during 14 d exposure time. Significance of the differences between mean values was determined with Student’s t-test. All the experiments were carried out in
triplicate with standard error as error bar, while asterisks (*) indicate significant difference at p value <0.05.

Table 1 Table 2
Saturated fatty acid composition (as a percentage of total fatty acids) of Iso­ Monounsaturated fatty acid composition (as a percentage of total fatty acids) of
chrysis galbana co-cultured with Marinobacter sp. for 14 days. Isochrysis galbana co-cultured with Marinobacter sp. for 14 days.
Saturated fatty Axenic I. galbana Axenic I. galbana Marinobacter sp. Monounsaturated Axenic I. galbana Axenic I. galbana Marinobacter sp.
acids (SFA’s) + Marinobacter sp. fatty acids (MUFA’s) + Marinobacter sp.

C12:0 ND ND 22.81 ± 0.66 C14:1n-5 ND ND 0.49 ± 0.02

C13:0 ND ND 1.10 ± 0.08 C16:1n-7 4.22 ± 0.16 5.15 ± 0.06* 7.47 ± 1.50
C14:0 8.9 ± 0.13 10.68 ± 0.07* 1.36 ± 0.16 C17:1n-7 1.13 ± 0.06 0.75 ± 0.01* 1.01 ± 0.18
C15:0 1.29 ± 0.09 0.87 ± 0.00* 0.32 ± 0.02 C18:1n-9 t 19.02 ± 0.22 18.68 ± 0.16 14.80 ± 0.22
C16:0 15.09 ± 0.37 14.55 ± 0.05 29.91 ± 1.03 C18:1n-9c 2.29 ± 0.09 2.62 ± 0.03* 3.55 ± 0.75
C18:0 2.24 ± 0.26 1.14 ± 0.20* 4.36 ± 0.30 C22:1n-9 1.09 ± 0.09 1.26 ± 0.02 ND
C20:0 0.73 ± 0.37 0.24 ± 0.00 ND ΣMUFA 27.75 ± 0.62 28.46 ± 0.28 27.32 ± 2.67
C22:0 2.16 ± 0.10 1.20 ± 0.02* ND
ΣSFA 30.41 ± 1.32 28.68 ± 0.34 59.86 ± 2.25 Asterisks (*) indicate significant difference at p value <0.05. ND = not detected.

Asterisks (*) indicate significant difference at p value <0.05. ND = not detected.

significantly decreased in co-cultured I. galbana. The levels of total
polyunsaturated fatty acids (PUFAs) were not significantly changed in
axenic I. galbana (40.38 ± 1.78%) compared with the co-cultures (42.05

4
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Table 3 Therefore, it is necessary to find strategies to improve its production. In

Polyunsaturated fatty acid composition (as a percentage of total fatty acids) of our study, we identified a growth-promoting bacterial strain Mar­
Isochrysis galbana co-cultured with Marinobacter sp. for 14 days. inobacter sp. and DHA production of I. galbana can be enhanced by this
Polyunsaturated fatty Axenic Axenic I. galbana+ Marinobacter bacterium. As we known, this was the first study to find a bacterium that
acids (PUFA’s) I. galbana Marinobacter sp. sp. can both enhance the algal biomass and DHA production in I. galbana.
C16:2n-6 0.89 ± 0.08 1.13 ± 0.03* ND Our results lay a foundation for studying the interaction between algae
C18:2n-6 5.21 ± 0.54 3.47 ± 0.01 ND and bacteria and help improve the yield and quality of bait-microalgae
C18:3n-3 6.90 ± 0.10 6.07 ± 0.06* ND in aquaculture.
C18:4n-3 10.99 ± 13.91 ± 0.05* ND
When we explored the effects of Marinobacter sp. on the growth of
0.41
C20:2n-6 0.74 ± 0.07 0.39 ± 0.07* ND I. galbana, we found that the growth-promoting role of Marinobacter sp.
C20:3n-3 0.38 ± 0.04 0.21 ± 0.02* ND to I. galbana depends on the population density of the bacterium. With
C20:4n-6 0.33 ± 0.06 0.17 ± 0.00 ND the increase of bacterial density, the growth-promoting effects became
C20:4n-3 0.41 ± 0.08 0.15 ± 0.00* ND more obvious (Fig. 1). It is crucial to note that in cultures with a high
C20:5n-3 1.13 ± 0.12 1.16 ± 0.02 ND
C22:5n-6 2.22 ± 0.14 1.96 ± 0.03 ND
density of bacterial cells, the availability of light and nutrients to
C22:6n-3 11.18 ± 13.43 ± 0.10* ND microalgae cells is lower, and the growth rates and yields of valuable
0.14 compounds, such as carotenoids and fatty acids, decrease (Fuentes et al.,
ΣPUFA 40.38 ± 42.05 ± 0.39 ND 2016). Possibly Marinobacter sp. cell density in our study was not suf­
1.78
ficiently high to affect the availability of light and nutrients. Our results
Asterisks (*) indicate significant difference at p value <0.05. ND = not detected. also suggested that an appropriate algae/bacteria ratio was a crucial
factor to achieve high I. galbana growth in the co-cultivation system.
Similarly, the growth-promoting effect of Alteromonas macleodii on
± 0.39%). Our study clearly suggested that PUFAs were absent in I. galbana also depends on the population density of the bacteria (Cao
Marinobacter sp. The contents of hexadecadienoic acid (C16:2n-6), et al., 2021).
stearidonic acid (C18:4n-3), and DHA (C22:6n-3) in the co-cultured Our results also indicated in the presence of Marinobacter sp., the
I. galbana were significantly increased compared with the axenic content of chlorophyll a was always significantly higher than that of
I. galbana. However, the contents of α-linolenic acid (C18:3n-3), eico­ axenic algal culture (Fig. 2). This finding was consistent with a previous
sadienoic acid (C20:2n-6), eicosatrienoic acid (C20:3n-3) and eicosate­ study that Marinobacter sp. has positive effects on the growth of seven
traenoic acid (C20:4n-3) were significantly decreased compared with microalgal species (Ling et al., 2020). Besides, the co-cultivation of
the axenic I. galbana. Rhizobium sp. and Ankistrodesmus sp. results in an increment of up to
30% in chlorophyll (Do Nascimento et al., 2013). Likewise, a similar
3.4. The effects of Marinobacter sp. on the expressions of genes involved study has shown that the co-immobilization of Chlorella vulgaris and
in DHA synthesis pathway Azospirillum brasilense leads to increments of up to 35% in chlorophyll a
(Gonzalez and Bashan, 2000). The increase in the content of chlorophyll
ASE2, d4FAD, d5FAD, d6FAD, and d8FAD are key genes involved in a was indeed a manifestation of the algal growth promoted by Mar­
the addition of double bonds and carbon atoms to the growing fatty inobacter sp.
chain in the DHA synthesis pathway (Fig. S3). Based on RT-qPCR Stresses usually lead to the accumulation of reactive oxygen species
analysis, the expressions of these five genes were all up-regulated in (ROS). ROS are extremely harmful when their production exceeds the
co-cultures compared with the mono-cultures on all three time points (2 buffering capacity of the antioxidant system (Wang et al., 2019). It is
d, 4 d and 14 d after co-cultivation) (Fig. 3). Among them, the expression well known that SOD plays a key role in the removal of ROS. We found
of d8FAD was mostly enhanced (fold change = 12.99) on 14 d. that the SOD activity of I. galbana was always lower compared with the
control group during the co-culture period (Fig. 2). Similarly, co-culture
4. Discussion with A. macleodii severely inhibits the SOD activity of I. galbana
compared with the control group during the entire study period, which
I. galbana, as a high-quality bait microalgae species, has been widely may be related to the ability of A. macleodii to produce extracellular
used in aquaculture (Tremblay et al., 2007). However, mass cultivation antioxidants (Cao et al., 2021). Whether Marinobacter sp. can produce
of I. galbana is often impaired by different environmental factors. antioxidants is worthy of further study.
When we explored the effects of Marinobacter sp. on the fatty acid
composition of I. galbana, it is interesting to find that the production of
DHA was significantly improved by Marinobacter sp. DHA is one kind of
important nutrient for aquatic animals. It was reported that higher
protein synthesis in microalgae results in elevated expressions of omega-
3/6 fatty acid biosynthetic genes, namely desaturase and elongase,
which subsequently synthesize long-chain PUFAs, such as EPA and DHA
(Jeyakumar et al., 2020). As higher protein synthesis was found in co-
culture, we conjectured that the high protein content might be one
reason for the increased content of DHA. Similarly, the proportion of
unsaturated fatty acids of C. vulgaris-Mesorhizobium sangaii co-culture
was significantly increased compared with the pure algae culture (Wei
et al., 2019). They explained that this enhancement in co-cultures might
be due to the metabolic regulation and nutrient exchange between
microalgae and bacteria.
To further explore the reason for the enhancement of DHA produc­
Fig. 3. Real-time quantitative PCR (RT-qPCR) analysis of the expression of
genes involved in DHA synthesis pathway (ASE2, d4FAD, d5FAD, d6FAD and tion, the effects of Marinobacter sp. on the expressions of genes involved
d8FAD) in co-culture and mono-culture on three time points (2 d, 4 d and 14 d). in DHA synthesis pathway were studied. Our study showed that the
RT-qPCR data represent the mean ± standard error of three independent ex­ expression of ASE2, d4FAD, d5FAD, d6FAD, and d8FAD in the DHA
periments, while asterisks (*) indicate significant difference at p value <0.05. synthesis pathway significantly up-regulated in co-cultures. Therefore,

5
Y.-Y. Wang et al.
the increased content of DHA in co-cultures might be attributed to that
Marinobacter sp. stimulated the expressions of genes involved in the
DHA synthesis pathway. Phosphorus, as a major growth-limiting
nutrient for microalgal growth, is necessary for synthesizing vital bio­
molecules, such as DNA, RNA, and phospholipids (including DHA) (Liu
et al., 2017). Besides, it is interesting to find that Marinobacter sp. has the
ability to decompose and mineralize organic phosphorus. Therefore, we
proposed another hypothesis that Marinobacter sp. decomposed and
mineralized organic phosphorus by the alkaline phosphatase enzyme to
inorganic phosphorus that could be taken up by I. galbana. The increased
phosphorus intake might be the reason for the increased DHA synthesis.
However, additional studies are required to validate this hypothesis.
Marinobacter sp. exists in a wide range of environments, playing an
important in the biochemical cycles of the earth, and it can use a variety
of carbon sources to interact with metals (Singer et al., 2011). It has been
reported that Marinobacter sp. can promote the growth of dinoflagellates
and coccolithophores (Amin et al., 2009b). This Marinobacter strain is
capable of producing vibrioferrin (VF), an unusual lower-affinity dici­
trate siderophore. With the help of VF, the bacteria promote algal
assimilation of iron by facilitating photochemical redox cycling of iron
(Amin et al., 2009a). However, it has been reported that the VF-
producing strains are a small number of strains in the genus Mar­
inobacter, and most strains do not produce VF (Amin et al., 2007; Vraspir
and Butler, 2009). It was worth mentioning that we attempted to
determine the ability to produce VF of this bacterial strain. However, we
did not detect the production of VF in Marinobacter sp. (data not shown).
We also attempted to amplify the VF biosynthetic genes, while we didn’t
obtain the expected PCR product. Therefore, the mechanism for Mar­
inobacter sp. to promote the growth of I. galbana was not dependent on
the VF produced by Marinobacter sp. as reported in dinoflagellates and
coccolithophores. It is well studied that bacteria can secrete hormones,
e.g. indole-3-acetic acid (IAA), that stimulate the growth and meta­
bolism of microalgae (Amin et al., 2015; De Bashan et al., 2008). Our
study showed the potential of Marinobacter sp. to release IAA which
might have a significant positive impact on algal growth (Fig. S4).
Whether Marinobacter sp. enhances the growth of I. galbana by providing
it with IAA merits further study. Taken together, we are sure that the
metabolic regulation and nutrient exchange happened between Mar­
inobacter sp. and I. galbana. What kind of metabolic regulation and what
substances are exchanged merits further investigations.
Collectively, co-cultures of I. galbana and Marinobacter sp. altered the
metabolism and fatty acid contents of microalgal cells and increased the
levels of DHA. Therefore, such an approach could be applied in high-
value compound production and mariculture of microalgae.
5. Conclusion
In our present study, we selected a bacterial strain with a strong
ability to promote microalgal growth and DHA production in I. galbana.
Co-cultures of I. galbana and Marinobacter sp. altered the growth, the
content of chlorophyll a, Fv/Fm, soluble protein content, and SOD ac­
tivity of I. galbana. Besides, the presence of Marinobacter sp. promoted
the production of DHA and up-regulated the expressions of genes
involved in DHA synthesis pathway. Taken together, our current find­
ings provided valuable insights into the interaction between algae and
bacteria and helped improve the yield and quality of microalgae.
CRediT authorship contribution statement
Ying-Ying Wang: Investigation, Data curation, Formal analysis,
Writing – original draft, Writing – review & editing. Si-Min Xu: Data
curation, Writing – review & editing, Validation, Visualization. Jia-Yi
Cao: Funding acquisition, Conceptualization, Supervision, Writing –
original draft, Writing – review & editing. Min-Nan Wu: Data curation,
Writing – review & editing. Jing-Hao Lin: Validation, Visualization.
Cheng-Xu Zhou: Funding acquisition, Conceptualization. Lin Zhang:
6
Aquaculture 556 (2022) 738248
Funding acquisition, Writing – review & editing. Hai-Bo Zhou: Writing
– review & editing. Yan-Rong Li: Writing – review & editing. Ji-Lin Xu:
Funding acquisition, Conceptualization, Supervision. Xiao-Jun Yan:
Conceptualization.
Declaration of Competing Interest
The authors declare that the research was conducted in the absence
of any commercial or financial relationships that could be construed as a
potential conflict of interest.
Acknowledgements
This research was supported by the National Key Research and
Development Program of China (2018YFD0900702; 2018YFA0903003;
2018YFD0901504; 2019YFD0900400), Ningbo Science and Technology
Research Projects, China (2019B10006; 2019C10023), Zhejiang Major
Science Project, China (2019C02057), China Agriculture Research Sys­
tem of MOF and MARA, the National Natural Science Foundation of
China (31801724), Natural Science Foundation of Ningbo, China
(2019A610416), the Zhejiang Provincial Natural Science Foundation of
China (LY22C190001) and the Natural Science Foundation of Ningbo
Government (2021 J114).
Appendix A. Supplementary data
Supplementary data to this article can be found online at https://doi.
org/10.1016/j.aquaculture.2022.738248.
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Bestandes. Nach den bisherigen Beobachtungen war es
wahrscheinlich, daß der Feind vor uns seine Stellung räumte. Ich
beschloß am 9. 5. 1916, falls sich diese Beobachtung bestätigen
sollte, die niedrigen, jetzt vom Feinde besetzten Höhen sogleich
selbst zu besetzen. Für einen Angriff waren die Verhältnisse nicht
günstig, da unser Vorgehen bemerkt werden mußte und ein
überraschender Sturm ausgeschlossen war. Ohne Überraschung
aber bot ein Versuch, die besetzte Stellung zu stürmen, keine
Aussicht auf Erfolg; der Feind hatte sich genügend auf den kleinen
Höhen verschanzt, und diese beherrschten völlig das für den
Nahkampf in Betracht kommende Gelände, das bei dem niedrigen
Dornbusch und den zahlreichen Felsstücken nur langsam zu
durchschreiten war.
Ich befand mich bei den Kompagnien, welche den vorn
befindlichen Sicherungspatrouillen folgten; diese meldeten kurz vor
Einbruch der Dunkelheit, daß die Höhen vom Feinde geräumt seien.
Unsere Kompagnien blieben daher in Marsch; die Führer gaben
Befehl, die Bagage heranzuziehen, um sich für die Nacht
einzurichten. Ich selbst begab mich zum Lager des Kommandos,
das auf den etwas rückwärts gelegenen großen Höhen geblieben
war. Meine große Erschöpfung suchte ich durch eine Tasse Kaffee
mit etwas Rum zu bekämpfen, schlief aber mit dem Bewußtsein, daß
nichts weiter zu veranlassen wäre, bald fest ein. Neben meinem
Lagerplatz stand das 8,8 cm-Geschütz. Gegen 11 Uhr abends
weckten mich Bemerkungen, die Oberleutnant z. S. Wunderlich, der
Führer des Geschützes, machte; er konnte sich mehrfaches
Aufleuchten, das er in der Richtung auf den Feind zu sah, nicht
erklären. Auch ich war mir im ersten Augenblick nicht ganz
schlüssig. Bald aber war kein Zweifel, daß dieses Aufleuchten, das
sich immer mehr verstärkte, Gewehr- und Maschinengewehrschüsse
bedeutete. Als sich der Wind drehte, war auch der Gefechtslärm
deutlich hörbar. Gegen alle Erwartung war also vor uns ein ernster
Kampf im Gange, aber bei der großen Entfernung und dem Marsch
durch unübersichtlichen Busch und Felsengelände hielt ich es für
ausgeschlossen, die zurückgehaltenen Reserven mit irgendwelcher
Aussicht auf Erfolg einsetzen zu können. Selbst die allergröbste
Orientierung über die Gefechtslage erforderte Stunden, und der
Mond würde kaum noch eine Stunde scheinen. Wohl oder übel
mußte ich daher das Gefecht vorn sich selbst überlassen.
Dort hatten unsere Kompagnien die von der Patrouille
abgesuchte Höhe allerdings frei vom Feinde gefunden, aber
unmittelbar dahinter lag der Feind auf einer zweiten Welle des
Geländes in verschanzter Stellung. Hiergegen liefen unsere
Kompagnien nun an, und bei der Unübersichtlichkeit des Geländes
und der Dunkelheit gingen Überblick und Zusammenhang verloren.
Unsere Askari nisteten sich dem Feinde gegenüber ein, und
Hauptmann Lincke, der, nachdem Oberstleutnant v. Bock schwer
verwundet und Hauptmann v. Kornatzki gefallen war, den Befehl
übernommen hatte, sagte sich, daß er hier zwar liegenbleiben
könne, aber nach Tagesanbruch wegen des beherrschenden
feindlichen Feuers jede Bewegungsmöglichkeit aufgeben müsse. Da
somit ein Erfolg nicht erreichbar schien, brach er vorsichtigerweise
noch in der Nacht das Gefecht ab und kehrte auf die
Ausgangsstellung zurück. Der Feind, der in der Hauptsache aus
dem 11. südafrikanischen Infanterieregiment bestand, hatte sich gut
geschlagen und unsere Kompagnien wiederholt unter wirksames
Maschinengewehrfeuer genommen. Unsere Verluste von etwa 50
Toten und Verwundeten müssen in Anbetracht der geringen
Gewehrzahl, die am eigentlichen Gefecht teilgenommen hat — etwa
400 —, als schwer bezeichnet werden.
In den folgenden Tagen besetzten wir nun auch die weiter östlich
gelegenen großen Höhen und drängten die im Vorgelände
befindlichen Reiterabteilungen mit recht empfindlichen Verlusten für
sie ab. Es kam mehrfach vor, daß von feindlichen, etwa 20 Mann
starken Abteilungen keiner oder nur wenige Leute entkamen, und
auch sonst hatten wir eine ganze Reihe günstiger Zusammenstöße.
Mehrfach beobachteten wir von unseren, weite Übersicht
gewährenden Höhen aus mit guten Gläsern, wie feindliche Truppen
und Wagenkolonnen von Norden her auf Kondoa zu fuhren, dann
nach Osten abbogen und in den Bergen verschwanden. Auch
unsere Patrouillen, die wir weit fort in den Rücken des Feindes
schickten, bestätigten den Marsch größerer Transporte, die sich von
Aruscha her in Richtung auf Kondoa-Irangi bewegten.
 Die Engländer hatten sogleich die Zivilverwaltung in Kondoa in
die Hand genommen und in geschickter Weise die Jumben
(Häuptlinge) nach diesem Ort entboten und ihnen
Verhaltungsmaßregeln gegeben. Hierzu gehörte auch die Pflicht,
deutsche Truppenbewegungen zu melden. So war es für unsere
Patrouillen häufig zweckmäßig, sich im Bereich des Feindes als
Engländer auszugeben. Die Unterschiede der Uniformen waren ja
nicht groß und durch das lange Kriegsleben noch mehr verwischt
worden; vielfach wurden Uniformröcke überhaupt nicht, sondern nur
blusenartige Hemden getragen, und das kleine Tuchabzeichen, das
die Engländer am Tropenhut trugen, war wenig auffallend. Der
Unterschied in der Bewaffnung war oft verschwunden, da auch ein
Teil der Deutschen englische Gewehre trug.
Im allgemeinen hatte man nicht den Eindruck, daß in Kondoa
schon ein sehr starker Feind war; aber unser Angriff mußte, selbst
wenn er Erfolg haben würde, über freies Gelände gegen
Befestigungen führen, die wir mit unseren wenigen Geschützen nicht
genügend zudecken konnten. Die mit Sicherheit zu erwartenden
erheblichen und unersetzbaren Verluste veranlaßten mich, von
einem allgemeinen Angriff abzusehen und den Feind durch kleine
Unternehmungen, die sich bisher so vorteilhaft erwiesen hatten, zu
schädigen. Unsere Artillerie — es waren auch die beiden
Gebirgsgeschütze und 2 Feldhaubitzen, die mit dem zweiten
Hilfsschiff angekommen waren, eingetroffen — beschoß günstige
feindliche Ziele, die sich boten. Auch die Gebäude von Kondoa-
Irangi, wo General van Deventer eingetroffen war, wurden
gelegentlich durch unser 10,5 cm-Geschütz unter Feuer genommen.
Westlich unserer Hauptkräfte, an der Straße Saranda-Kondoa-Irangi,
hatte unsere junge 2. Schützenkompagnie in mehreren günstigen
Zusammenstößen Teile des 4. südafrikanischen Berittenenregiments
allmählich in die Nähe von Kondoa-Irangi zurückgedrängt.
Der Feind verstärkte sich nun immer mehr. Anfang Juni beschoß
er uns auch auf große Entfernung, etwa 12 km, mit schwereren
Geschützen von 10 cm und 12,5 cm Kaliber. Seine Beobachtung
und Feuerleitung verdiente alle Anerkennung; jedenfalls schlugen
am 13. 6. 1916 seine Granaten bald sehr genau in unserem
Kommandolager ein. Ich unterbrach meine Arbeit, die ich im Schutze
eines Grasdaches vorgenommen hatte, und begab mich etwas
seitwärts hinter eine Felsplatte. Unmittelbar nachdem dort auch der
Ordonnanzoffizier, Oberleutnant Boell, eingetroffen war, platzte ein
Geschoß dicht über uns, verwundete Oberleutnant Boell schwer am
Oberschenkel und mich und einige andere Europäer leicht.
Materiellen Schaden hat uns das feindliche Artilleriefeuer im übrigen
fast gar nicht zugefügt, aber es war doch lästig, wenn seine
schweren Geschosse immer von Zeit zu Zeit in unser Lager
einschlugen.
Von den erheblichen Arbeiten, wie sie gute Unterstände
erfordern, sahen wir ab, da wir die Kräfte unserer Leute für den
Patrouillen- und Sicherheitsdienst, sowie für die Beschaffung der
Verpflegung voll beanspruchen mußten. Das ganze Land war, soweit
das Auge reichte, mit Eingeborenenkulturen bedeckt; in der
Hauptsache — und dies kam für die Verpflegung der Truppe
vorzugsweise in Betracht — war Mtama, eine Hirsenart, angebaut
worden, deren Reife jetzt gerade begann. Die Eingeborenen waren
zum großen Teil fortgelaufen, der Nachschub von Dodoma hatte
unserem Vormarsch nicht folgen können; unsere Verpflegung
basierte daher fast ausschließlich auf den Beständen, die die
Erntekommandos der Kompagnien selbst einbrachten. Die Garben
trockneten auf Steinen schnell in der heißen Sonne. In allen
Kompagnien herrschte reger Mahlbetrieb, sei es, daß die
ausgedroschenen Körner mit Steinen zerrieben oder in „Kinos“, das
sind harte Holzgefäße, mit Stangen zu Mehl zerstampft wurden. Für
die Europäer gab es damals noch Weizenmehl, das auf den
Etappenwegen vorgebracht wurde. Unser aus einer Mischung von
Weizenmehl und Eingeborenenmehl hergestelltes Brot vor Kondoa
war von einer ganz ausgezeichneten Beschaffenheit. Außer Mtama
und anderen Körnerfrüchten gab es Zuckerrohr, Muhogo (eine
Pflanze mit wohlschmeckender, eßbarer Wurzel), Süßkartoffeln,
dann verschiedene Arten Erbsen und andere Eingeborenenfrüchte
sowie genügend Vieh. Die Truppe konnte in dem überaus
wohlhabenden Gebiet von Kondoa reichlich und vielseitig verpflegt
werden.
 Die beobachtete Ausdehnung des Feindes von Kondoa nach
Osten hin lenkte auch unsere Aufmerksamkeit auf dieses uns bis
dahin wenig bekannte Gebiet. Hauptmann Schulz wurde mit
mehreren Kompagnien dorthin entsandt und fand ein
außerordentlich schwieriges Berggelände mit starker Bewachsung
vor; dazwischen waren Ansiedlungen von großer Fruchtbarkeit. Hier
kam es zu einer ganzen Reihe für den Feind recht verlustreicher
Gefechte, an denen für uns eine oder auch mehrere Kompagnien
beteiligt waren. Eine stärkere feindliche Abteilung suchte sich
zwischen den Kompagnien der Abteilung Schulz und uns
hineinzuschieben und hatte wahrscheinlich die Absicht, die Abteilung
Schulz abzuschneiden. Dieser Versuch des Feindes mißglückte aber
gänzlich. Unsere Truppen drängten von beiden Seiten gegen diesen
feindlichen Keil und warfen ihn zurück. Recht gewandt benahm sich
hierbei der alte Effendi (schwarzer Offizier) Juma Mursal; er legte
sich an einer Wasserstelle auf die Lauer und beschoß die Engländer,
die hierher zum Tränken kamen, mit gutem Erfolg; nach seiner
Beobachtung sind dabei 6 gefallen. In der Gefechtsperiode von
Kondoa-Irangi sind dem Gegner allmählich recht erhebliche
Gefechtsverluste beigebracht worden. Rechnet man hierzu noch die
Verluste an Krankheiten bei seinen jungen weißen Truppen, die nicht
an die Tropen gewöhnt und so außerordentlich unvorsichtig in ihren
Schutzmaßregeln gegen Tropenkrankheiten waren, so dürfte der
Gesamtausfall des Feindes in der Zeit von Kondoa-Irangi kaum
unter 1000 Mann an Weißen betragen haben.
 Fünfter Abschnitt
Zwischen Nordbahn und Zentralbahn

E nde Juni 1916 gewannen die Vorgänge auf den anderen

Kriegsschauplätzen entscheidenden Einfluß auf unsere
Maßnahmen vor Kondoa. Aus der Gegend des Kiwusees und vom
Russissi rückten die Belgier, westlich des Viktoriasees und seit Mitte
Juli auch von Muanza her drangen englische Streitkräfte
konzentrisch auf Tabora vor. General Wahle, der von Tabora aus den
gemeinsamen Befehl über unsere im Nordwesten stehenden
Truppen führte, zog seine Abteilungen von den Grenzen her
allmählich auf Tabora zu zusammen.
Von Südwesten her, aus dem Raum zwischen Tanganjika und
Nyassa, drangen gleichfalls feindliche Abteilungen vor. Vor ihnen
wich unsere in der Gegend von Bismarckburg fechtende Kompagnie
langsam nach Nordosten in Richtung auf Tabora aus. Aus dem
Bezirk Langenburg gingen unsere beiden dort sichernden
Kompagnien allmählich in Richtung aus Iringa zurück. Diesen folgte
General Northey, dessen Division mit allen Mitteln moderner
Kriegführung ausgerüstet war. Von diesen Vorgängen hatte das
Kommando bei der Schwierigkeit der Verbindung nur
unvollkommene Nachrichten.
An der Nordbahn hatten die Patrouillen des Majors Kraut, die von
dessen fester Stellung bei Lembeni ausgingen, gelegentlich
erfreuliche Erfolge gehabt. Mehrere Flugzeuge wurden zum Landen
gebracht oder verunglückten; die Insassen wurden gefangen, die
Apparate vernichtet. Als die schweren Regen aufgehört hatten, trat
von Kahe her der Feind seinen Vormarsch längs der Nordbahn
sowie östlich derselben durch die Pareberge hindurch und westlich
längs des Pangani an. Hunderte von Automobilen und große
Reitermengen wurden beobachtet. Um bei der großen Überzahl des
Feindes nicht abgeschnitten zu werden, zog Major Kraut sein Gros
unter Belassung schwacher Abteilungen am Feinde mit der Bahn bis
Buiko zurück. In dieser Gegend sowie bei Mombo kam es dann zu
einigen Gefechten, bei denen manchmal unsere Kompagnien durch
den Feind, der den Bahnkörper hinter ihnen absperren wollte,
hindurchfuhren und ihn von den Waggons aus beschossen. Der
Feind konnte zwar infolge seiner numerischen Überlegenheit mit
leichter Mühe stets mit frischen Truppen umfassende Bewegungen
ausführen, aber das schwierige Gelände beeinträchtigte die
Wirksamkeit solcher Umgehungen im hohen Maße. Es schien daher,
daß der Feind häufig diesen Gedanken fallen ließ und dafür eine Art
Ermüdungstaktik betrieb. Er griff heute mit einem Teil seiner Truppen
an, ließ diese dann ruhen und setzte morgen andere, übermorgen
wieder andere ein. Trotz allem augenscheinlichen Drängen und
seinen günstigen Nachschubverhältnissen war sein Vormarsch
ziemlich langsam. Niemals sind die Truppen des Majors Kraut in
eine wirklich schwierige Lage gekommen, im Gegenteil; den
unsrigen glückten häufig Feuerüberfälle und Teilerfolge, die
gelegentlich, wie bei einem durch Hauptmann Freiherrn von
Bodecker geführten Nachhutgefecht in der Gegend von Handeni,
dem Feinde recht erhebliche Verluste beibrachten.
Bei diesem von allen Seiten erkennbaren konzentrischen
Vordringen des Feindes mußte man sich die Frage vorlegen, was
nun mit dem vor Kondoa stehenden Hauptteil der Truppe geschehen
sollte. Für einen Angriff war die Gelegenheit allzu ungünstig. Es
fragte sich also, wohin im großen und ganzen unser Abmarsch zu
gehen habe. Ich faßte die Gegend von Mahenge ins Auge. Sie
entzog uns der Umklammerung durch den Feind und war reich und
für den Kleinkrieg geeignet. Von dort aus bot sich auch die
Möglichkeit, weiter nach Süden auszuweichen und den Krieg noch
lange Zeit fortzusetzen.
Ein anderer wichtiger Gesichtspunkt war die Sicherung unserer
an der Zentralbahn, besonders in der Gegend von Morogoro
lagernden Kriegsbestände. Diese waren bei dem schnellen
Vordringen des Generals Smuts, dem gegenüber Major Kraut bis
über die Gegend von Handeni hinaus nach Süden vorgedrungen
war, stark gefährdet. Wenn auch anzunehmen war, daß die stetig
wachsende Länge seiner rückwärtigen Verbindungen den General
Smuts hemmen würde, so schien er mir doch der gefährlichste und
wichtigste Gegner zu sein. Ich beschloß daher, dem Kondoafeinde
gegenüber nur ein Detachement unter Hauptmann Klinghardt bei
Burungi stehenzulassen, mit den Hauptkräften aber wieder nach
Dodoma zu marschieren, von dort mit der Bahn nach Morogoro zu
fahren und an Major Kraut heranzurücken. Es hat sich später
herausgestellt, daß die Engländer über diese Bewegung bis ins
kleinste unterrichtet waren und z. B. über einen Eisenbahnunfall
genau Bescheid wußten, der einer Kompagnie während dieses
Transportes zustieß. Bei den Europäern in Morogoro verschwand
beim Eintreffen unserer Kompagnien und angesichts der glänzenden
Haltung der Askari auch der letzte Rest einer niedergedrückten
Stimmung; jeder Mann und jede Frau hatten begriffen, daß unsere
Lage zwar schwierig war, daß es aber keine andere Möglichkeit gab,
als weiterzufechten, und daß unsere Truppe nach ihrer ganzen
Beschaffenheit auch imstande war, noch lange mit Erfolg
standzuhalten. Anfang Juli traf ich bei Major Kraut ein, der in
befestigter Stellung am Kangaberge stand, nordöstlich Tuliani. Ich
hatte geglaubt, daß die Askari durch das Zurückgehen
niedergedrückt wären, traf sie aber in einer vortrefflichen,
selbstbewußten Stimmung an. Vor ihrer Stellung hatten sie 50 bis
100 Meter Schußfeld geschaffen und waren fest davon überzeugt,
daß ein feindlicher Angriff abgeschlagen werden würde.
Die Zeit bis zum Eintreffen der übrigen Abteilungen bei Tuliani
benutzte ich zu Erkundungen und gewann so bald ein Bild über die
Pässe, die das schwierige, westlich unserer Etappenstraße
gelegene Felsen- und Waldgelände durchschnitten.
Ein Versuch, mit einer stärkeren Abteilung unter Umgehung des
feindlichen Lagers dieses von rückwärts her anzugreifen, führte des
außerordentlich dichten Busches wegen zu keinem Erfolg. Wohl
aber erlitt der Feind Einbuße durch zahlreiche, kleine
Patrouillenunternehmungen, die seine Transporte und seine hinter
der Front verkehrenden Autos beschossen. Auch das Auto eines
Stabes wurde bei dieser Gelegenheit wirksam unter Feuer
genommen. Der Feind war ebenfalls mit Patrouillen tätig, und
mehrere seiner Fernpatrouillen waren in unseren Rücken gelangt.
Eine derselben, von Leutnant Wienholt geführt, verriet sich dadurch,
daß sie eine unserer Trägerkolonnen überfiel und deren Lasten
verbrannte. Hierunter befanden sich eine Anzahl mit dem Hilfsschiff
angekommener und sehnlichst erwarteter Beinkleider. Wienholt
erregte daher bei jedermann peinliches Interesse, wurde in seinem
Lager im dichten Busch ausgemacht und überfallen. Er selbst
entkam und wollte im Vertrauen darauf, daß im afrikanischen Busch
nicht leicht jemand zu finden ist, allein durch unsere Linie hindurch
zu den Engländern zurückwandern. Unseren bewährten Leuten, die
früher den erfolgreichen Pferdefang am Longido gemacht hatten,
van Rooyen, Nieuwenhuizen und Truppel, gelang es, seinen
Wechsel aufzuspüren und ihn zu fangen. Bei der Rückkehr von
einem Erkundungsgange traf ich Wienholt in unserem Lager in
Tuliani bei fröhlichem Schmause mit denen, die ihn ergriffen hatten.
Wir alle mußten die vortrefflichen Leistungen seiner Patrouille, deren
Weg in der bei ihm erbeuteten Karte genau verzeichnet war, ehrlich
anerkennen. Wienholt ist dann in das Innere in ein Gefangenenlager
gebracht worden und nach Monaten aus diesem beim Baden
entwichen. 1917 hat er in der Gegend von Kilwa und Liwale und
später 1918 in Portugiesisch-Ostafrika wieder ausgezeichnete
Patrouillendienste gegen uns geleistet. Seine Schilderung eines
Überfalles durch einen Leoparden, der den Begleiter Wienholts im
Lager mit großer Kühnheit schlug, hat mich lebhaft interessiert. Ich
nehme an, daß er die anschauliche Schilderung, deren Original ihm
leider später bei einem Patrouillenzusammenstoß abhanden
gekommen und in unsere Hände gefallen ist, inzwischen seinen
Bekannten und Freunden zugänglich gemacht hat.
Es vergingen jetzt Wochen, in denen uns die Engländer
hauptsächlich mit Fliegerbomben belästigten. Augenscheinlich
hatten sie die Stelle des Kommandolagers in Tuliani genau erfahren.
Ich entsinne mich eines Tages, wo 4 Flugzeuge, denen wir nichts
anhaben konnten, stundenlang über unserem Lager kreisten und
Bomben abwarfen. Aber wir hatten gelernt, uns unsichtbar zu
machen; nur der Europäer, der in der Telephonhütte beschäftigt war,
wurde so schwer verletzt, daß er eine Hand verlor. Eine daneben
gelegene Hütte mit wertvollen Akten wurde durch eine Brandbombe
unter Feuer gesetzt.
 Meine Automobile waren damals noch im Gange, und ich konnte
häufig von Tuliani aus die auf der guten Etappenstraße
vorgeschobene Abteilung Kraut schnell erreichen. Dort hatte
Korvettenkapitän Schoenfeld vortreffliche Anordnungen für die
Feuerleitung des 10,5 cm- und des 8,8 cm-Marinegeschützes
getroffen. Von seinem auf den Höhen des Kangaberges gelegenen
Artilleriebeobachtungsposten hatte man guten Einblick in die
englischen Lager. Schwächere deutsche Abteilungen waren von
Usambara her nicht dem Major Kraut auf Tuliani gefolgt, sondern
längs der Usambarabahn in Richtung auf Tanga ausgewichen. Sie
hatten dort sowie in der Gegend von Korogwe kleinere
Zusammenstöße mit dem Feinde und wichen östlich der Abteilung
Kraut allmählich nach Süden aus. Ihnen folgten stärkere Abteilungen
des Feindes. Mit der Zeit wuchs für die Truppe bei Tuliani die
Gefahr, östlich umgangen zu werden und die Verbindung mit der für
die Ausrüstung mit Munition und Material sowie für die Verpflegung
so wichtigen Gegend von Morogoro zu verlieren. Gleichzeitig rückte
von Kondoa aus General van Deventer, dessen Truppen auf eine
Division verstärkt worden waren, in südlicher Richtung vor. Vor ihm
wich Hauptmann Klinghardt zunächst nach Süden und dann in
Richtung auf Mpapua aus.
Die Unübersichtlichkeit und Unwegsamkeit des Geländes
veranlaßte hierbei den Hauptmann Klinghardt, seine an sich schon
geringen Truppen (5 Kompagnien) noch mehr zu teilen, um wichtige
Pässe zu beobachten und zu sperren. Der Feind folgte mit einer
großen Zahl von Automobilen, und es glückte gelegentlich, eins
derselben durch eingebaute Minen zu beschädigen. Bei der
notgedrungenen Zersplitterung der Kräfte des Hauptmanns
Klinghardt und der Schwierigkeit der Verbindung unter ihnen konnte
oft ein Teil nicht wissen, was bei den Nachbarabteilungen vorging.
Eine starke deutsche Reiterpatrouille suchte von Osten kommend
Anschluß an eine Abteilung die sie bei Meiameia an der Straße
Dodoma-Kondoa-Irangi vermutete. Sie ritt ahnungslos in ein
feindliches Lager hinein und wurde fast vollzählig
gefangengenommen. Die Rückwärtsbewegung unserer
Kondoatruppen, die nicht lediglich fortzukommen, sondern dem
Feinde Schaden zuzufügen suchten, war ein recht schwieriges
Manöver; der Moment, wann man zurückgehen, wann wieder halten
und wann zu einer raschen Gegenoffensive schnell wieder vorgehen
muß, um dann wieder schnell und rechtzeitig abzubauen, ist schwer
zu erfassen. Zuverlässige Meldungen fehlten; bei dem Rückmarsch
mehrerer Kolonnen durch unbekanntes Gelände wuchsen die
Schwierigkeiten bei dem Mangel an Verbindungsmitteln ins
Unendliche. Der Einfluß des Führers wurde oft ausgelöscht und dem
Zufall gar zu vieles überlassen. Am 31. 7. 16 erreichte der Feind die
Zentralbahn bei Dodoma. Hauptmann Klinghardt wich nach Osten
längs der Bahn aus.
Bei den Gefechten, die sich westlich Mpapua abspielten, wurden
einige günstige Situationen nicht erkannt, und Nachbarabteilungen,
auf deren Unterstützung gerechnet wurde, trafen nicht rechtzeitig
ein. Das gibt in der Truppe leicht ein Gefühl der Unsicherheit und
wirkt lähmend auf das Vertrauen und die Unternehmungslust. Der
Fall wurde hier noch dadurch erschwert, daß der Führer, Hauptmann
Klinghardt, an Typhus erkrankte und gerade im kritischen Augenblick
ausfiel. Als sein Nachfolger wurde von Tuliani her Hauptmann Otto
entsandt; diesem glückte es, die auseinander geratenen Teile wieder
zu sammeln und einheitlich zu verwenden.
Auch die 2. Schützenkompagnie, die auf der Straße Kondoa-
Saranda nach diesem letzteren Ort zu hatte entweichen müssen und
mit der die Verbindung völlig verlorengegangen war, zog sich südlich
der Bahn in großem Bogen wieder an die Abteilung Otto heran. Die
Gefechte der Abteilung Otto boten bei der Überzahl des Feindes
vielfach das Bild eines Frontalangriffes und gleichzeitiger
Umgehungen unserer beiden Flügel. Es glückte dem Feinde nicht
immer, diese Bewegungen in richtigen Einklang zu bringen. So geriet
bei Mpapua sein Frontalangriff zu dicht an unsere Front heran und
erlitt erhebliche Verluste; auch die Umfassungen, selbst wenn sie bis
in den Rücken unserer Stellungen führten, hatten keine
entscheidende Wirkung. In dem unübersichtlichen Gelände war es
immer möglich, sich der Gefahr zu entziehen oder, falls die
Gelegenheit dazu günstig war, die umgehenden Truppen einzeln zu
fassen. Auf alle Fälle erforderte die Umfassungstaktik des Feindes in
dem außerordentlich dichten Busch und zwischen den vielen Felsen
große Anstrengungen und brauchte die Kräfte seiner Truppen auf.
Hauptmann Otto wich jeden Tag immer nur wenige Kilometer nach
Osten zurück, und die Bahn gestattete ihm hierbei, nach Wunsch die
Stellung seines schweren Geschützes zu ändern. Als sich die
Abteilung Otto Kilossa näherte, war es notwendig, eine
Verschiebung auch unserer bei Tuliani stehenden Hauptkräfte
vorzunehmen. Das Kommando und ein Teil der Truppen rückten
nach Morogoro; Major Kraut mit mehreren Kompagnien und einem
10,5 cm-Geschütz rückte nach Kilossa. Bei Tuliani übernahm
Hauptmann Schulz den Befehl.
Ich rechnete jetzt damit, daß von Norden vordrückende Kolonnen
bald die Gegend westlich von Bagamojo erreichen und auch bei
diesem Ort selbst Truppenlandungen stattfinden würden. Zur
persönlichen Orientierung fuhr ich nach Station Ruwu und von dort
mit dem Fahrrad den sandigen und gewellten Weg entlang auf
Bagamojo zu. Einen Tagemarsch südlich Bagamojo traf ich auf das
Lager von zwei Europäern. Es war der Bezirksleiter Michels, der
seinen gefährdeten Amtssitz von Bagamojo weiter in das Innere
verlegen wollte. Die Bevölkerung war zutraulich und lebte wie im
Frieden. Der Weltkrieg war an ihr bisher spurlos vorübergegangen.
Da die Zeit drängte, mußte ich umkehren, und der schnelle
Maskatesel des Herrn Michels brachte mich in wenigen Stunden
wieder nach Ruwu. Am nächsten Tage erkundete ich von Kidugallo
aus mit dem Fahrrad die dort und weiter nördlich angelegten
Verpflegungsmagazine und fuhr dann wieder nach Morogoro.
Andere Erkundungen, ebenfalls meist zu Rad, führten mich zu den
nach Westen in Richtung auf Kilossa vorgelagerten Bergen, sowie
die Straßen entlang, die westlich und östlich um die Uluguruberge
herumführen. Die Pässe, die von Morogoro aus den Nordabhang
des Riesenmassivs der Uluguruberge hinauf und weiter in südlicher
Richtung auf Kissaki führen, mußten zu Fuß erkundet werden. Bei
dem Druck des Generals van Deventer gegen Kilossa und bei der
Gefahr, daß auch Hauptmann Schulz bei Tuliani umgangen wurde,
durfte der Moment, Hauptmann Schulz auf Morogo heranzuziehen,
nicht verpaßt werden. Um uns trotzdem die Möglichkeit zu
Gegenschlägen zu wahren, mußten wir die Gegend von Tuliani
solange wie möglich halten.
 Die von Tuliani aus einen kleinen Tagemarsch unmittelbar nach
Norden zu vorgeschobene Abteilung des Hauptmanns
Stemmermann wurde bei Matomondo von starken europäischen und
indischen Truppen angegriffen. Der Feind war recht geschickt. Ein
an einem Felsenhange stehendes Maschinengewehr der 6.
Kompagnie wurde von einzelnen Indern, die sich unbemerkt von
vorn herangeschlichen hatten, ergriffen und schnell den steilen Hang
heruntergeworfen, so daß es nicht wiedergefunden werden konnte.
Der Feind, der in unsere Reihen eingedrungen war, wurde durch
einen Gegenstoß der 21. Kompagnie mit schweren Verlusten
zurückgeworfen. Im Nahkampf schoß der englische Major Buller, der
Sohn des bekannten Generals aus dem Burenkriege, dem
Kompagnieführer Oberleutnant von Ruckteschell durch den Hut,
wurde dann aber selbst durch diesen schwer verwundet. Major
Buller wurde dann in das deutsche Lazarett nach Daressalam
geschafft und von der Gattin seines Gegners, die dort als Schwester
tätig war, gesund gepflegt. Während des Gefechts von Matomondo
hatten englische Reiter weiter westlich ausgeholt; sie erschienen
überraschend in einem Gebirgspasse, der von Westen nach Tuliani
führte. In dem dichten Busch hatte die unter dem General Brits aus
Südafrika gekommene 2. Reiterbrigade anscheinend schwere
Verluste.
 Signalschüler

Hauptmann Schulz wich nun mit Genehmigung des Kommandos

nach Derkawa aus, das an dem Wege Tuliani-Morogoro am
Wamiflusse in dichter Buschsteppe liegt. Er stand hier in befestigter
Stellung am Südufer und wurde am 13. August durch den von
Tuliani her nachdrängenden Feind, der mindestens eine Infanterie-
und die berittene Brigade Brits stark war, sowie gleichzeitig von
Osten her durch eine Brigade, die den Wami aufwärts an dessen
rechtem Ufer entlang marschiert war, angegriffen. Während des
Gefechts bestand von Morogoro aus mit Hauptmann Schulz
dauernde telephonische Verbindung; die Verluste des Feindes
wurden auf mehrere hundert Mann geschätzt und später auch von
den Engländern bestätigt. Die feindlichen Angriffe wurden
abgeschlagen, aber in dem dichten Busch war die Lage so
unübersichtlich, daß ein durchschlagender Erfolg nicht erreichbar
schien. Hauptmann Schulz trug Bedenken, seine letzte, noch
geschlossene Kompagnie einzusetzen. Seine Absicht, nach Schluß
des Gefechts nach Morogoro abzumarschieren, billigte ich, da mir
die Gesamtlage die Zusammenziehung meiner Kräfte
wünschenswert machte. Nach dem Eintreffen des Majors Kraut bei
Kilossa zog ich auch den Hauptmann Otto mit einem Teil seiner
Kompagnien nach Morogoro heran. Major Kraut hatte sich hinter
Abteilung Otto durch Kilossa hindurchgezogen und nahm nach
Gefechten bei diesem Ort dicht südlich desselben an der Straße
nach Mahenge Aufstellung. Auch nachdem feindliche Truppen in
Kilossa eingerückt waren, hatte noch wenige Stunden telephonische
Verbindung mit der Abteilung Kraut durch den Feind hindurch
bestanden.
Von da ab war die unmittelbare Verbindung mit Major Kraut
unterbrochen. Helioverbindung funktionierte nicht, und die
Drahtlinien, welche von Kisaki und später vom Rufiji aus nach
Mahenge und von dort zu den Truppen des Majors Kraut führten,
waren noch nicht fertig, beziehungsweise noch gar nicht begonnen.
Mit General Wahle bei Tabora fehlte ebenfalls seit der zweiten Hälfte
des Juli, also mehr als einem Monat, jede Verbindung. Bagamojo
war in die Hände des Feindes gefallen; mit dem Fall von Daressalam
und der Unterbrechung der Verbindung dorthin war täglich zu
rechnen.
 Sechster Abschnitt
Dauernde Kämpfe in der Nähe des Rufiji

G egen die von Neulangenburg her vorrückenden Truppen des

Generals Northey war Ende Juni von Dodoma aus Hauptmann
Braunschweig entsandt worden. Dieser hatte den beiden aus der
Gegend Neulangenburg ausgewichenen deutschen
Askarikompagnien Verstärkungen von Kondoa und von Daressalam
her zugeführt und seine eigenen Truppen, im ganzen fünf
Kompagnien und eine Feldhaubitze, bei Malangali gesammelt. Dort
hatte seine Truppe gegen den überlegenen Feind tapfer gefochten,
hatte aber doch in Richtung Mahenge ausweichen müssen.
Es fragte sich, wie jetzt, wo sich die konzentrisch vorrückenden
feindlichen Kolonnen einander in der Richtung auf Morogoro
näherten, unsere Operationen weiterzuführen seien. Der Feind
rechnete damit, daß wir uns am Nordhange der Uluguruberge auf
Morogoro zum letzten entscheidenden Kampf stellen würden. Diese
Auffassung ist mir nicht recht verständlich gewesen. Bei unserer
erheblichen Unterlegenheit war es doch Wahnsinn, hier die
Vereinigung der feindlichen Kolonnen, deren jede einzelne uns
bereits numerisch überlegen war, abzuwarten und uns dann mit dem
Rücken gegen das steile Felsengebirge zu schlagen, dessen Pässe
leicht zu sperren waren und das uns jede Bewegungsfreiheit in
unserem Rücken nahm. Ich hielt es für praktischer, die Operationen
so zu führen, daß wir es nur mit einem Teile des Feindes zu tun
hatten. Bei der bekannten Vorliebe des Feindes und besonders des
Generals Brits für weit ausholende Umgehungsbewegungen
rechnete ich damit, daß von Dakawa, wo starke feindliche Lager
festgestellt waren, oder von Kilossa her sich eine Kolonne in
Bewegung setzen würde, um westlich der Uluguruberge in unseren
Rücken zu gelangen. Diese Möglichkeit lag so auf der Hand, daß ich
täglich nach den westlich Morogoro gelegenen Bergen
hinausradelte, um dort die Meldungen unserer Patrouillen rechtzeitig
entgegenzunehmen und durch eigene Beobachtung der Rauch- und
Staubwolken zu ergänzen. Diese ließen bald keinen Zweifel, daß
eine starke Kolonne aus der Gegend von Dakawa sich gegen die
Bahn zwischen Morogoro und Kilossa in Bewegung setzte.
Patrouillen stellten feindliche Truppen fest, die die Bahn
überschritten und weiter nach Süden marschierten.
Bergbeobachtungsposten meldeten, daß die Staubwolken die
Richtung auf Mlali nahmen.
Da es meine Absicht war, diese Bewegung des Feindes weit
auslaufen zu lassen und den vereinzelten Teil dann mit allen meinen
Kräften anzugreifen, wartete ich ab, bis ich diese Kolonne dicht bei
Mlali vermutete. Hauptmann Otto, der bei Morogoro lagerte, erhielt
am Abend des 23. August den Befehl, mit drei Kompagnien in der
Nacht nach Mlali abzurücken. Er traf dort am 24. frühmorgens ein,
als englische Reiter soeben das Magazin Mlali in Besitz genommen
hatten. Als ich im Auto bei Abteilung Otto eintraf, war das Gefecht im
vollen Gange. Das Gelände war aber infolge der vielen steilen
Höhen, die die Bewegung erschwerten, für kurze entscheidende
Angriffsbewegungen nicht günstig. Die anderen Truppen aus
Morogoro, mit Ausnahme der Abteilung des Hauptmanns
Stemmermann, wurden telephonisch herangezogen. Ich selbst fuhr
noch einmal nach Morogoro zu mündlichen Besprechungen hinein.
Der Abteilung Stemmermann, der mit Rücksicht auf die
Wegeverhältnisse auch das 10,5 cm-Königsberggeschütz und die
Haubitzbatterie zugeteilt waren, erhielt den Auftrag, längs des
Osthanges der Uluguruberge auszuweichen und dort den Feind
hinzuhalten. Die Pässe der Uluguruberge selbst wurden durch
schwache Patrouillen gesperrt. Als ich am Nachmittag wieder in der
Gegend von Mlali anlangte, hatte das Gefecht zu keiner
Entscheidung geführt. Die feindlichen Truppen waren an mehreren
Stellen zurückgeworfen worden, und eigene glaubten, nennenswerte
Verluste beim Feinde beobachtet zu haben. Beim Einbruch der
Dunkelheit waren wir aber so in die Berge hineingeraten, und jede
Bewegung gestaltete sich so schwierig und zeitraubend, daß wir
halten blieben. Die Nacht war recht kalt, als wir ohne unsere Lasten
auf den Höhen lagen. Glücklicherweise aber war die reiche Gegend
bisher durch den Krieg kaum in Anspruch genommen worden, und
ein am Spieß geröstetes Huhn stillte bald den knurrenden Magen.
 Am nächsten Morgen zeigten uns zahlreiche Explosionen in den
deutschen vom Feinde überraschten Magazinen, daß der Gegner
abgezogen war und unsere dort gestapelten 10,5 cm-Granaten
zerstört hatte. Dieser Abzug wurde in südwestlicher Richtung
gehend vermutet, was sich später auch als richtig herausgestellt hat.
Es war wahrscheinlich, daß der Feind eine Umgehungsbewegung
machte, um vor uns Kissaki zu erreichen. Bei der reichen
Verwaltungsstelle dieses Ortes waren 600000 Kilogramm
Verpflegung und das von Morogoro abtransportierte Truppenmaterial
gesammelt worden. Wilde Gerüchte eilten der Wirklichkeit voraus
und berichteten, daß bereits starke Kräfte südlich von uns auf den
nach Kissaki führenden Wegen angelangt seien. Wenn nun auch die
Fahrstraße bei Mlali aufgehört hatte und die weiteren Wege nach
Kissaki nur Pfade mit vielen Schluchten und Hindernissen waren, so
war doch mit der Möglichkeit eines schnellen Marsches des Feindes
nach Kissaki sehr ernsthaft zu rechnen, und wir durften keine Zeit
verlieren. Am Abend fanden wir in der Mission Mgeta bei dem
dortigen Pater eine überaus gastliche Aufnahme. Die Gebäude
liegen reizend in dem tiefen Einschnitt des Mgetaflusses, der hier
ziemlich reißend zu Tal fließt. Die vielen Lichter am Bergabhange
erweckten den Eindruck, als ob man sich in Deutschland einem
kleinen Badeorte nähere. Auch einige Europäerinnen aus Morogoro
weilten hier und nahmen den letzten Abschied von der Truppe. Mit
Ausnahme weniger Krankenschwestern mußten alle Frauen
zurückbleiben.
Der Abtransport unserer Lasten arbeitete leidlich. Es kam der
Truppe zustatten, daß etwa tausend schwarze Arbeiter, die noch bis
vor wenigen Tagen in den Forstkulturen bei Morogoro gearbeitet
hatten, ihr auf Drängen des umsichtigen Hauptmanns Feilke zur
Verfügung gestellt wurden. Die Trägerfrage fing aber an, schwierig
zu werden. Die Leute sahen, daß wir die Gegend räumten; eine
Anzahl der Eingeborenen, die ihr Erscheinen zugesagt hatten,
blieben zur Verzweiflung der verständigen Jumben, die uns gern
helfen wollten, aus. Da in der Gegend von Mgeta nur schwache
Abteilungen des Feindes erschienen, wurde es wahrscheinlich, daß
seine Hauptkräfte eine Umgehungsbewegung ausführten. Unter
Belassung einer Nachhut, die uns nur allmählich folgte, wurde daher
unser Gros in den nächsten Tagen näher an Kissaki herangezogen.
Eines Nachts erschien ein Askari in strammer Haltung an meinem
Lager; es war der in Morogoro krank zurückgelassene Effendi Juma
Mursal der 4. Feldkompagnie. Er war aus dem Lazarett
fortgegangen und uns über die Berge gefolgt. Er berichtete, daß der
Feind so stark, wie früher bei Kahe, von Morogoro westlich um die
Uluguruberge herum marschiert sei und daß einer Anzahl deutscher
Askari die Gefechte der letzten Zeit zuviel geworden wäre. Sie
hätten sich von der Truppe entfernt und raubten in den Pflanzungen
südwestlich Morogoro.
Von Kissaki aus wurde eine Fernsprechleitung zu uns gelegt;
durch sie hielt uns Hauptmann Tafel dauernd unterrichtet, daß bei
Kissaki vom Feinde nichts zu merken sei. Aber westlich von uns
wurde der Vormarsch feindlicher Kräfte nach Süden durch unsere
Patrouillen festgestellt. Ich rückte deshalb nach Kissaki und mußte
einen Teil unseres Kriegsmaterials, das in kleinen Depots an
unserem Wege gelagert war, vernichten. Leider fand hierbei
wiederum, wie schon vorher in Morogoro bei gleicher Gelegenheit,
ein tüchtiger Feuerwerker durch Unglücksfall den Tod. In Kissaki
dauerte es mehrere Tage, ehe wir ernsthaft mit dem Feinde in
Berührung kamen. Die Boma (Feste) selbst zu besetzen, war nicht
ratsam; sie bestand aus einem von massiver hoher Mauer
umgebenen Gebäudekomplex und lag inmitten eines völlig
freigeschlagenen Geländes. Der Feind konnte sie daher nur durch
einen verlustreichen Angriff nehmen, aber er brauchte gar nicht zu
stürmen; durch Artillerie und Fliegerbomben hätte er den Aufenthalt
in dem engen Raum der Boma unleidlich gemacht, und der
Verteidiger wäre in die Notwendigkeit geraten, seinerseits aus der
Boma heraus über das freigeschlagene Schußfeld zu gehen und das
Feuer auszuhalten, das der Feind dann in aller Ruhe auf ihn abgab.
Unsere für den Kampf geschaffenen Geländeverstärkungen lagen
deshalb weit außerhalb der Boma, gegen Fliegerbeobachtung
gedeckt und so angelegt, daß sie ungesehen besetzt und wieder
geräumt werden konnten.
Über die reichen Bestände an Material und Verpflegung in
Kissaki gewann ich erst beim persönlichen Eintreffen ein klares Bild.
Ich erfuhr, daß entgegen meiner Annahme weiter südlich bei
Behobeho und am Rufiji bei Kungulio so gut wie nichts lagerte. Bei
Kissaki lagerten große Bestände, aber trotz der dichten
Eingeborenenbesiedlung war ein Abtransport nicht möglich. Die
zahlreich vorhandenen Leute, denen der Krieg und die vielen Askari
etwas ganz Neues waren, verloren den Kopf und liefen in den
Busch. Die Zivilverwaltung, die das volle Vertrauen der Leute genoß,
erwies sich den so überwältigend auf die Eingeborenen
einstürmenden Einflüssen gegenüber als machtlos. Selbst
Geschenke von den sonst so hochgeschätzten Kleidungsstücken
vermochten die Leute nicht zu halten. Es schien, als ob sich alle
bösen Geister verschworen hätten, um uns die Transportmöglichkeit
zu nehmen. Unsere Kolonne von mehreren hundert Trageseln war
von Morogoro über die Berge getrieben worden. Sie langte verspätet
und gänzlich erschöpft in Kissaki an. Die wenigen Ochsenwagen, die
wir hatten und die der Beschaffenheit der Straße wegen östlich um
die Uluguruberge herum fahren mußten, wollten und wollten nicht
ankommen. Der Leiter des Etappenwesens sah auch keinen
Ausweg zum Weitertransport unserer für den Krieg notwendigen
Bestände. Und doch war es klar, daß wir vor der feindlichen
Übermacht weiter nach Süden an den Rufiji ausweichen mußten.
Ein Lichtblick war es, daß unsere großen Viehbestände, die
östlich Mpapua geweidet hatten, von dort rechtzeitig weggeführt
wurden. Mehrere tausend Stück, meist schönes Rindvieh, gelangten
nach Kissaki und wären eine höchst willkommene bewegliche
Verpflegungsreserve gewesen. Leider aber wurde die Freude
hierüber durch die an manchen Stellen häufig vorkommende
Tsetsefliege beeinträchtigt; erkrankten die Tiere durch deren Stich,
so kamen sie sehr herunter und gingen meist nach wenigen Wochen
ein. Die Masse des Viehs wurde deshalb in die gesunden Gegenden
am Rufiji weitergetrieben. Im übrigen wurde mit allen
Truppenträgern, dann mit allen erreichbaren Leuten aus der
Landschaft und den paar Fahrzeugen ganz energisch aus Behobeho
und weiter aus Kungulio abtransportiert. Hierfür mußte Zeit
gewonnen werden, und Hauptmann Stemmermann, der auf der
Oststraße um die Uluguruberge herum marschierte, durfte nur ganz