FREE-LIVING AEROBIC

NITROGEN-FIXING
BACTERIA
N FIXING BACTERIA :

Nitrogen : is one of the most abundant elements in nature.

Nitrogen fixation : a process that fix free nitrogen to be chemically
combined with other elements.
Bacteria capable to fix of nitrogen from the air, either through the
symbiosis (root-nodulating bacteria) and non-symbiosis (free-living
nitrogen-fixing bacteria)
GENERA RELATED :

• Azotobacter
• Azospirillium
• Azomonas
• Beijerinck
CHARACTERISTICS

• Inhabit soil
• Aerobic → fix N2 aerobically
• Cell → large, pleomorphic (shape and size)
• Motile with peritrichous flagella
• Variety in carbon and energy sources
• Strictly oxidative
• Fix N, but can grow on simple N ammonium, urea, nitrate
• Azotobacter can form cyst → like bacterial endospore → resting structure → resistant to
desiccation, mechanical disintegration, UV, ionizing radiation, but not heat resistant
MECHANISM

• Enzyme for catalize N fixation : nitrogenase

• Nitrogenase :
• Dinitrogenase (contain Fe and Mo)
• Dinitrogenase reductase (contain Fe)
• Mechanism : reduce N2 to produce NH3, to form organic material
• Obligate aerob, but nitrogenase is O2 sensitive
 ELECTRON FLOW IN NITROGEN FIXATION

• The sequence of electron transfer in nitrogenase is as follows:

• Electron donor → dinitrogenase reductase → dinitrogenase → N2, with NH3 being the
final product.
• The electrons for N2 reduction are transferred to dinitrogenase reductase from ferredoxin
or flavodoxin, both of which are low-potential iron–sulfur proteins → flavodoxin or
ferredoxin is reduced by the oxidation of pyruvate. In addition to electrons, ATP is
required for nitrogen fixation. In each cycle of electron transfer, dinitrogenase reductase is
reduced and binds two molecules of ATP.
• ATP binding alters the conformation of dinitrogenase reductase and lowers its reduction
potential, allowing it to interact with and reduce dinitrogenase.
• Upon electron transfer to dinitrogenase, the ATP is hydrolyzed and dinitrogenase
reductase dissociates from dinitrogenase and begins another cycle of reduction and ATP
binding. When fully reduced, dinitrogenase reduces N2 to NH3, with the actual reduction
occurring at the FeMo-co center
Berbagai bakteri chemoorganotrophic hidup bebas mendiami tanah
dan mampu mengfiksasi nitrogen (N2) aerobik bebas. Genus
Azotobacter adalah organisme yang pertama dan ditemukan oleh
ahli mikrobiologi Belanda Martinus Beijerinck, di awal abad kedua
puluh. Filogenetis, bakteri pengikat nitrogen yang hidup bebas
adalah Alpha-, Beta-, atau Gammaproteobacteria
GENUS AZOTOBACTER
• Selnya berbentuk oval dengan diameter 1,5-2,0 µm. Azotobacter bersifat pleomorfi,
yaitu selnya dapat berbentuk batang sampai kokus.
• Warna koloni putih coklat
• Tepi koloni rata
• Elevasi cembung
• Tidak membentuk endospora
• Gram negatif dan ada juga yang bersifat motil karena memiliki flagela peritrik atau nonmotil
• Medium nitrogen Jensen Agar
• Medium nitrogen Jensen Agar + pewarna Red Congo
GENUS AZOMONAS

• Gram negatif
• Bentuk sel batang – kokoid
• Warna koloni merah muda
• Tepi koloni rata
• Elevasi cembung
• memiliki sel yang berdiameter 2,0 μm.
• tidak memiliki endospora
 GENUS AZOSPIRILLUM
• koloni kecil dan banyak,
• mengkilap,
• biasanya mempunyai permukaan yang datar dengan sedikit cekung di
bagian tengah,
• seperti susu dan kelihatan bening. Warna koloni sangat tergantung pada
spesies
• bersifat mikroaerofilik yaitu menambat nitrogen pada kondisi tekanan
oksigen sangat rendah (0,007 atm atau 0,7 KPa)
GENUS BEIJERINCKIA

• Memiliki ciri sel tunggal, bentuk lurus atau melengkung, dan seperti buah
pear yang saling bergandengan antar ujung sel satu dengan lainnya.
• Sel-sel berukuran panjang dan bersifat membiaskan cahaya.
• Pada media cair tidak terbentuk pellicle, namun eksudat yang dikeluarkan
dapat merubah media menjadi kental dan terbentuk masa semi
transparan seperti lendir berwarna putih. Pellicle akan terbentuk bila
genus Beijerinckia ditumbuhkan pada media semi padat.
• Pellicle tersebut terbentuk pada permukaan media, berwarna putih
• Beijerinkia indica memiliki flagel peritrikha, lendir banyak dan pigmen
berwarna coklat karat yang muda dan tidak larut
 CARA MENDAPATKAN ISOLAT

 Platting
• Pengenceran inkubasi
Isolasi tanah bertingkat
 (sp) pada
media slektif