文库构建原理介绍

吉因加医检中心 - 建库
组
二代测序实验流程

样本采集
DNA 提取 DNA 片段化 文库构建
与寄送

下机数据
上机测序 文库质控 杂交洗脱
处理及分析

文库构建：对样本 DNA 进行修饰，使之符合二代测序

仪
的检测要求。
 DNA 提取

cfDNA

全基因组 DNA
DNA 提取

cfDNA

全基因组 DNA
DNA 片段化

(1) 超声波主机； (2) 冷却循环器； (3) 电磁阀

DNA 片段化
文库构建流程
5’ 3’ 5’ 3’

3’ 5’ 3’ 5’

末端修复
5’ 3’

3’ 5’

加“ A”
5’ 3’
Pi A
A Pi
3’ 5’
文库构建流程
5’ 3’
Pi A
A Pi
3’ 5’

接头连接 T

34bp

5’ 3’
3’ 5’
文库构建流程

5’ 3’
3’ 5’

测序引物 测序引物
P5 index P7 index

5’ 3’
3’ 5’
NC-PCR

5’ 3’
3” 5”
文库构建产物

血浆

细胞
文库构建产物

接头污染

大片段拖尾
磁珠纯化

作用：去除反应液中的 dNTP 、引
物、盐类及其他污染物。

原理：硅基磁珠表面通常固定有
亲水性阴离子交换剂，可
以特异的吸附带负电的核
酸分子。

可吸附片段范围： 100bp-40kb
磁珠纯化

DNA 与磁珠结合 上架吸附 酒精清洗 回溶洗脱

注意事项： 1 、磁珠提前 30min 室温稳定

2 、酒精需要现用现配
3 、磁珠干燥时机的掌握
磁珠纯化

单管磁力架

板式磁力架