Festési eljárások

Egyszerű festések, Gram-féle

festésSaválló festés (Ziehl-Neelsen
festés), Schaffer-Foulton festés
(spórafestés), Neisser-festés (Babes-
Ernst szemcsék)

2023.02.01.
Festett készítmények
Előnyök: Hátrányok:
◦ A baktériumok jól láthatóak, elütnek a ◦ A baktériumok elölt formában vannak jelen,
háttértől emiatt alakjuk, méretük változik
◦ A járulékos alkotók egyes festésekkel ◦ Mozgásuk így nem vizsgálható
láthatóvá tehetők
◦ Különböző csoportosítások alapjául
szolgálhatnak (pl. Gram pozitív/negatív)

2023.02.01.
Csoportosításuk:
Egyszerű festési eljárások: egy féle festéket használunk
Összetett festési eljárások: több féle festéket használunk, további két alcsoportra bonthatók:
◦ Elektív festések: Különböző baktérium genusok elkülönítésére szolgál, a különböző festési tulajdonságok
alapján
◦ Differenciáló festések: Baktériumok sejtalkotóinak megfestésére szolgál

2023.02.01.
Kenetkészítés

Minden festési eljárás kenetkészítéssel kezdődik!

1. Zsírtalanított tárgylemez
2. Sejtkultúra tárgylemezre oltása
Folyékony táptalajból: 1 kacs sejtkultúra
Szilárd táptalajból: 1 kacs fiz. só + 1 kacs sejtkultúra
3. Szárítás levegőn
4. Fixálás Bunsen-égő lángján (háromszor áthúzva)

A fixált kenetet is, főként a Mycobacteriumból készült

keneteket, fertőzőnek kell tekinteni!

2023.02.01.
Egyszerű festések:

1. Löffler-féle lúgos metilénkék festés:

- kenetkészítés, kenet festőállványra helyezése
- festés Löffler-féle lúgos metilénkék oldattal 3-5 percig
- szárítás
- vizsgálat mikroszkóp alatt

2. Festés vizes fukszinnal:

- kenetkészítés, kenet festőállványra helyezése
- festés vizes fukszinnal 30 mp-ig
- szárítás
- vizsgálat mikroszkóp alatt

2023.02.01.
Lúgos metilénkék Vizes fukszin

2023.02.01.
Összetett festések
◦ 1. Gram-féle festés
ELEKTÍV
◦ 2. Saválló festés (Ziehl-Neelsen festés)

◦ 3. Schaffer-Foulton festés (spórafestés)

DIFFERENCIÁLÓ
◦ 4. Neisser-festés (Babes-Ernst szemcsék)

2023.02.01.
Összetett festések:
1. Gram-féle festés:
- kenetkészítés
- festés Gram A-B oldattal 1 percig
( kristályibolya + ammónium-oxalát)
- öblítés csapvízzel
- Lugol oldat 1 percig
- differenciálás alkohollal
- utófestés vizes fukszinnal

◦ Ez a festési eljárás a baktériumok sejtfalának

különbözőségére alapoz. Csoportosításuknak
alapjául szolgál.

2023.02.01.
Gram-féle festés

2023.02.01.
Gram-negatív: vörös Gram-pozitív: kék

2023.02.01.
Saválló festés (Ziehl-Neelsen festés)

◦ Saválló festődés kimutatására szolgál, a festéket sósavas alkohollal sem lehet eltávolítani a baktériumokból. A festéket nehezen is
veszik fel, emiatt melegítést kell alkalmazni.
◦ Ez nem csak festődési tulajdonság, hanem biológiai is. Legfőbb savállók a Mycobacteriumok
◦ LÉPÉSEI:
- kenetkészítés, festőállványra helyezés
- karbol-fuxin oldat, 6-8 percig, Bunsen-égő lángján 3-szor gőzölésig melegítve
- differenciálás sósavas alkohollal
- öblítés csapvízzel
- utófestés lúgos-metilénkékkel
- öblítés csapvízzel
- szárítás az állványon, felitatás nélkül
- vizsgálat mikroszkóp alatt
saválló baktériumok piros színűre, a nem savállóak kék
színűre festődnek
2023.02.01.
Mycobacterium tuberculosis saválló festés

2023.02.01.
Schaffer-Foulton festés (spórafestés)
◦ Endospórák kimutatására szolgál, a spórák nehezen veszik fel a festéket, emiatt melegítést kell alkalmazni.
◦ LÉPÉSEI:
- kenetkészítés, festőállványra helyezés

- karabolos malachitzöld oldat, 6-8 percig, Bunsen-égő lángján 3-szor gőzölésig melegítve
- differenciálás vízzel
- utófestés safraninnal
- csapvizes öblítés
- szárítás itatóspapír között
- vizsgálat mikroszkóp alatt

2023.02.01.
Clostridium tetani (dobverő alak) Bacillus cereus

A spórák zöldre, a vegetatív alakok pirosra festődnek

2023.02.01.
Neisser-festés (Babes-Ernst szemcsék)
◦ Polifoszfát szemcsék, más néven Babaes-Ernst szemcsék, vagy Volutin rögök kimutatására szolgáló eljárás.
◦ Ez a tulajdonság bizonyos Corynebacteriumokra jellemző, ez a festés megkönnyíti az azonosításukat
◦ LÉPÉSEI:
- kenetkészítés, festőállványra helyezés
- Neisser A és B oldat ( metilénkék, ecetsav, kristályibolya) 5 percig
- csapvizes öblítés
- utófestés chrisoidinnel 20 mp-ig
- szárítás itatóspapír között, öblítés nélkül
- vizsgálat mikroszkóp alatt

2023.02.01.
 Corynebacterium diphteria

A polifoszfát rögök kékek/lilák, a baktériumok zöldek

2023.02.01.
 Fertőtlenítő
szerek

Fertőtlenítés / Sterilezés?

2023.02.01.
Főbb típusok
◦ Antiszeptikumok: olyan szerek, amelyek gátolják vagy elpusztítják a patogéneket az élő szövetek
felületén, ideértve a bőrt, a szájüreget vagy a sebeket.

◦ Dezinficiensek: a fertőtlenítőszerek célja a mikroorganizmusok elpusztítása, élettelen tárgyak felszínén.

Toxikus, izgató, maró hatású szerek, melyek nem használhatók bőrön és nyálkahártyán.

2023.02.01.
Fenol koefficiens
◦ A fertőtlenítőszerek hatékonyságát gyakran úgy jellemezték, hogy hatékonyságukat összehasonlították a
fenollal, az első kémiai dezinficienssel.
◦ A különféle vegyszerek és a fenol hatékonyságának összehasonlítására (Rideal-Walker teszt),
Staphylococcus aureus és Salmonella enterica serovar Typhi mintákat használtak.
◦ Az 1,0 fenol-együttható azt jelenti, hogy az anyag hatékonysága megegyezik a fenoléval. Például a
formalin fenol-együtthatója 0,3 (S. aureus) és 0,7 (Salmonella enterica serovar. Typhi), míg a klóraminok
fenol-együtthatója 133, illetve 100. Noha a fenol-együttható sokáig volt a hatékonyság mérőszáma, ma
már ritkán használják. Ennek az önkényesen megválasztott kísérleti rendszer az oka.

2023.02.01.
Kémiai csoportosítás
◦ Etanol/ i-propanol o Oxidálószerek
o Ózon
◦ Aldehidek (Formaldehid) o H2O2
◦ Fenol (Phenolum acidum carbolicum) o Kálium-permanganát

◦ Savak/Lúgok o Fémsók
◦ Bórsav o Higany sók
◦ Ecetsav o Ezüst sók
◦ Peroxiecetsav
o Detergensek
◦ Szalicilsav
o Anionos szappanok
◦ Halogének o Kationos szappanok
◦ Jód o Kvaterner ammónium vegyületek
◦ Klór

2023.02.01.
 Antiszeptikumok és dezinficiensek antimikrobiális hatása

◦ (Murray PR, Rosenthal KS, Pfaller MA. Medical Microbiology. 8th edition, ELSEVIER, 2016; Chapter 3, p. 13.)