2.

Mikrobiológia gyakorlat

• Gyakorlati jegyzet: 50-77.old

• ( javasolt irodalom )
 Mikrobiológia laborgyakorlat II.

Fénymikroszkóp:
mechanikai szerkezet: talp, állvány, tárgyasztal, csavarok,
tubus, tubus alsó végén revolver, tubust mozgató
csavar(mikro és makrométer)
optikai berendezés: fényforrás, tükör, kondenzor,
diafragma, objektív (tárgylencse):10,20,40 és 100 nagyítás,
okulár (szemlencse):10x,16x nagyítás
 Mikroszkópos vizsgálat

Natív tárgy fedőlemez(lapos-csepp)készítés.

Anyagok: tárgylemez, fedőlemez.
Eljárás:
1, tárgylemezt Bunsen-égő lángjában áthúzzuk, leégetett felével fordítva
vizsgálóra asztalra helyezzük.
2. Vizsgálati anyagból egy cseppnyit tárgylemez közepére helyezzünk
3. Fiziológiás konyhasóoldatban szuszpenziót készítünk
4. Fedőlemezzel lefedjük.
Értékelés: baktériumokat kis és nagy nagyítás mellett látunk.
Hátrány: könnyen kiszárad.
 Natív készítmények
• A mikroorganizmus élő állapotban van jelen
• Vizsgálható: méret, alak +
• mozgás, metabolizmus, szaporodás
• Laposcsepp: tárgylemezre 1 csepp minta
(szuszpenzió), fedőlemez
• Függőcsepp: tárgylemez vájulatába belógó csepp
• Vitális festések: metilénkék, fukszin (hígítva!)
• Sötétlátóteres mikroszkóp
• Fáziskontraszt-mikroszkóp
• Fluoreszecens mikroszkóp
• Elektronmikroszkóp (felbontás: 0,1 nm)
 Vitális (natív) festés

Anyagok: metilén-kék (kristályibolya, fukszin stb.)

festékoldat, izotóniás konyhasó oldat
Eljárás:
1, tenyészetet fiziológiás sóoldatba szuszpendáljuk
2, a szuszpenzióból kis cseppet a tárgylemezre helyezünk
3, vizes festékoldattal (pl.:0,01%-os metilénkék)
összekeverjük és fedőlemezzel lefedjük
4, 10-15 perc múlva fénymikroszkóppal vizsgáljuk
Értékelés: metilén-kékkel festett baktériumok
világoskék színűek, kristályibolyával festettek sötétkék
színűek.
Kenet készítés menete
 Kenetkészítés

Eljárás:
1, Az előzetesen zsírtalanított tárgylemezt tovább zsírtalanítjuk úgy,
hogy mindig azonos oldalán háromszor a Bunsen-láng fölött áthúzzuk.
2, Megvárjuk míg a tárgylemez kihűl.
3. Folyékony vizsgálati anyagból egy cseppnyit helyezünk tárgylemez
közepére steril kaccsal. Ha az anyag nem folyadék egy cseppnyi
fiziológiás sóoldatban kell szuszpendálni .
4. Az anyagot vékony rétegben elkenjük kb. 15X15 mm-es területen.
5. Levegőn megszárítjuk
6. Kenetet fixáljuk.
Lapos csepp készítés
 A festés menete

A tárgylemezt festőállványra helyezzük

A kenetet fixáljuk.
Lehűlés után megfelelő festékoldattal vagy egyéb oldatokkal
leöntjük.
Festékoldatot az előírt ideig rajta hagyjuk.
Vízzel leöntjük
Sima szűrőpapírral leitatjuk
Levegőn megszárítjuk
Immerziós technikával nézzük.
 Egyszerű festési eljárások
Egyetlen festékkel végezzük a festést.

Leggyakoribb festések.
-alkoholos vizes metilénkék
-alkoholos vizes kristályibolya
-alkoholos vizes fukszin
-Löffler-féle metilénkék.
 Metilénkék festés
Anyagok: metilén-kék festékoldat
Eljárás: 1, kenetet szárítjuk és fixáljuk
2, metilénkék festékoldattal 3-5 percig
festjük
3, csapvízzel leöblítjük és szárítjuk
4, immerziós eljárással vizsgáljuk
Értékelés: baktériumsejtek kék színűre festődnek.
 Összetett festési eljárások
Gram-festés
Ziehl-Neelsen festés
Neisser festés
Spórafestési eljárások
Csillófestési eljárások
Tokfestés
Giemsa festés
 Gram-színezés
• Hans Christian Joachim Gram (dán kutató)
• Elv: Gram+ sejtekből nem mosható ki,
• Gram- sejtekből igen + kontraszt színezés
• Eredmény
Gram-festés menete Bacillus cereus Gram (+)
Escherichia coli Gram (–)
1. Kenet készítés
2. Szárítás
3. Rögzítés
4. Festés kristályibolyával 2 percig
/leönteni!/
5. Lugol 2 perc
6. Mosás etanollal
7. Mosás csapvízzel
8. Festés szafraninnal 2-3 perc
9. Mosás csapvízzel
10. Mikroszkópizálás (40x)
11. Szárítás
12. Olajimmerzió
Gram- és Gram+ sejtfal felépítése
Élesztőgombák

Saccharomyces cerevisiae
(sütő- vagy pékélesztő)

Sejtjei oválisak, 5–10 m átmérőjűek,

sarjadzással, más néven bimbózással
szaporodik.
 Penészgombák
Mucor sp. (fejespenész)

Mucor racemosus spóratartó fejek

(sporangia) spórákkal
Mucor mucedo tenyészet
 Penészgombák
Penicillium sp.
Penicillium expansum
 ecsetszerű konídiumtartók és
lesodródott konídiumok

konídiumtartó térhatású
felvételen


Penicillium sp. tenyészet Petri-csészében

 Baktériumok
Lactobacillus plantarum

Mikroszkópos felvétel
Scanning elektronmikroszkópos felvétel
festett preparátumról
 Baktériumok
Lactococcus (Streptoccocus) lactis

Scanning elektronmikroszkópos felvétel Mikroszkópos felvétel

Gram színezett tenyészetről
(Gram+ baktérium)
Baktériumok
Escherichia coli

Gram festés szerint negatív

 Baktériumok
Pseudomonas fluorescens
Nagyon változatos metabolizmussal rendelkező, talajban, természetes vizekben gyakran
előforduló, ún. ubikviter baktérium. Obligát aerob, pálcika alakú, többszörös
flagellummal rendelkezik.
Tenyészete UV fényben zöldeskék színben fluoreszkál. Gram szerint (az E. coli -hoz
hasonlóan) negatív festődésű.
 Baktériumok
Bacillus subtilis

Szénabacilus néven is ismert, a talajban, növényeken általánosan fellelhető Gram+,

baktérium. Pálcika formájú, aerob, endospórás. Sok ostora van, ezért gyors
mozgásra képes.

Bacillus endospórák spóraszínezéssel

Scanning elektronmikroszkópos felvétel

 Tok kimutatása
• Tok: nyálkaburok, körülveszi a sejtet
• Anyaga: homogén vagy heterogén,
– poliszacharid, polipeptid, aminocukor, fehérje-
lipopoliszacharid
• Egyszerű vagy bordás
• Szerepe:
– patogének virulenciája, véd a fagocitózis ellen
– véd a kiszáradástól
– tartalék tápanyag
– lokalizáció
– tápanyag-adszorpció

• Kimutatás:
– negatív festés
 Baktériumok
Streptomyces sp.
(fonalas baktériumok)

Streptomyces coelicolor
tenyészete Petri-csészében 

Streptomyces rimosus
 Endospóra képzés
• Bacillus, Clostridium,
• A szülősejt kitartó állapota, nincs anyagcseréje
• A túlélést teszi lehetővé
• Rendkívül ellenálló
• Elhelyezkedés: terminális, centrális, szubterminális,
• Alak: szubtilisz (1,2), klosztrídium (3,4,5,6)
 Spóraszínezés

Malachitzölddel
1. Szuszpenzió készítése
2. Szárítás
3. Rögzítés /láng felett áthúzni 2-
3 szor/
4. 10 percig szárítópadkán
malachitzölddel melegítjük /ne
száradjon be/
5. Mosás 1/2 percig vízzel
6. Szafraninos festés 3 perc
7. Mosás csapvízzel
8. Mikroszkópizálás (40x) Spóra: zöld
Vegetatív sejt: piros
QR