I.

SC K LP MNG IU CH
Nguyn tc yu cu:
Sc k lp mng iu ch (Preparative thin layer chromatography PTL! l" m#t ph$%ng ph&p
'c k $(c ') *+ng , t&ch m#t l$(ng nh %n ch-t (./ ./// mg! t0 m#t h1n h(p %n gi2n
(ch3 g4m v"i c-u t)!5 Trong PTL6 m#t *ung *7ch m8u th) $(c ch-m tr9n m#t lp ch-t h-p ph+
(th$:ng l" 'ilica gel6 nh;m o<y*! c= # *"y t0 /6> ?6/ mm tr&ng tr9n nn ph@ng (kAnh6 kim
loBi6 ch-t *Co! =ng vai trD l" m#t pha tEnh5 F#t *ung m;i khai tri,n (pha #ng! *i chuy,n *Gc
theo H2n mng 'I l"m *i chuy,n c&c c-u t) cJa m8u th) theo m#t vKn tLc kh&c nhau tBo th"nh
m#t 'c k 4 g4m nhiu vt c= MN kh&c nhau5 Sau khi khai tri,n6 ta c= th, thu $(c nhOng c-u
t) Pc tr$ng HQng c&ch cBo vRng ch-t h-p ph+ chSa vt ra khi H2n v" ph2n h-p ph+ ch-t ra khi
gi& h-p ph+ HQng m#t *ung m;i thAch h(p5 T(p ch-t thu $(c t0 H2n mng c= th, $(c tinh
khit h=a tip t+c HQng 'c k lp mng (Thin layer chromatography TL! hay c&c ph$%ng
ph&p 'c k kh&c hoPc h(p ch-t n"y U Bt # tinh khit , tin h"nh 7nh tAnh6 <&c 7nh c-u trVc
HQng c&c ph$%ng ph&p phWn tAch c% H2n hay HQng phXp o Yuang phZ6 nghi9n cSu hoBt tAnh 'inh
hGc6 nghi9n cSu tZng h(p h=a hGc6 ') *+ng nh$ ch-t chu[n Li chiu5
1. u nhc im ca PTLC:
u im:
Ph$%ng ph&p tin h"nh cJa PTL nh\n chung t$%ng t] nh$ TL ch3 kh&c ^ vi_c ') *+ng nhOng
H2n mng *"y h%n 'o vi TL` PTL /6> ? mm6 c= th, *"y n ./ mm tRy y9u cau ') *+ngb
TL /6? /6?> mm5
So vi sc k ct:
chanh v" thuKn ti_n h%n 'o vi 'c k c#t cZ i,n5
de t\m $(c *ung m;i thAch h(p , t&ch c&c ch-t5
fRng chSa ch-t t+ th"nh lp mng *e ph&t hi_n6 *e c; lKp
T3 l_ giOa 'ilicagel v" ch-t t&ch cao n9n t&ch tLt h%n
MC6 %n gi2n h%n 'o vi TPL5 Thit H76 thao t&c %n gi2n *e nm Ht v" &p *+ng5
S) *+ng m#t l$(ng nh *ung m;i g c= th, tri,n khai nhiu lan , thu $(c kt Yu2 phWn t&ch
tLt h%n6 *e *"ng t&ch c&c vRng chSa ch-t h-p ph+ ra khi H2n mng6 c= th, tri,n khai 4ng th:i
c&c ch-t chu[n Li chiu trong cRng m#t iu ki_n <&c 7nh giVp tBo thuKn l(i cho vi_c <&c 7nh
h(p ch-t mong muLn5
Nhc im:
&c h(p ch-t kXm Hn ch-m tr9n H mPt H2n mng c= th, H7 phWn hJy khi tip <Vc vi kh;ng khA
v" &nh '&ng5
S] hi_n *i_n 4ng th:i cJa tBp ch-t khi ph2n h-p ph+ ch-t mong muLn ra khi gi& h-p ph+5
2. ng dng:
dRng , t&ch c&c ch-t vi h"m l$(ng nh (./ ./// mg! trong tr$:ng h(p kh;ng th, t&ch HQng
c&c ph$%ng ph&p kh&c5
= th, phWn lKp $(c c&c %n ch-t tinh khit vi khLi l$(ng J t0 c&c polymer tZng h(p6 c&c '2n
ph[m t] nhi9n t0 nu;i c-y m; hay t0 *$(c li_u6 c&c '2n ph[m chuy,n h=a t0 *7ch 'inh hGc6 phWn
Hi_t c-u h\nh ho& hGc cJa c&c '2n ph[m thi9n nhi9n hay tZng h(p5, kh2o '&t i,m ch2y6 phZ
hf6 iM6 kh2o '&t c-u trVc v" l"m ch-t chu[n5
3. Pha tnh:
Pha tEnh hay ') *+ng trong PTL l" c&c ch-t h-p ph+6 c&c ch-t h-p ph+ n"y phan ln c= tr#n
th9m ch-t kt *Anh nh$ aSjk > .> l6 tinh H#t ? > l6 *e<tran6 nh$ng cmng c= tr$:ng h(p
kh;ng *Rng ch-t kt *Anh5
Sc k iu ch - Nhm 2 TT DL chiu T3 Trang 1
3.1. Silica gel:
L" m#t ch-t phWn c]c6 hoBt #ng chJ yu theo c% ch h-p ph+6 trung tWm h-p ph+ l" c&c nh=m
jT 'ilanol g h-p ph+ c&c ch-t c= tAnh kim (alkaloi* Ha'e555! h%n l" c&c ch-t c= tAnh aci*
(polyphenol555!
FKt # nh=m 'ilanol c"ng cao (fd` hBt c"ng m7n!6 kh2 nnng h-p ph+ cJa 'ilica gel 'I c"ng ln5
oh2 nnng h-p ph+ cJa 'ilica gel ph+ thu#c v"o ph+ thu#c v"o t\nh trBng ngKm n$c cJa h_ thLng
g khi *Rng 'ilica gel l"m ch-t h-p ph+ th\ n9n '-y 'ilica gel ^ ./>/ trong ?h l" J6 0ng nung
Yu& k>//
3.2. Nhm oxyd:
= p *Bng` o<y* nh;m kim6 trung tAnh6 aci*5
L" m#t ch-t h-p ph+ phWn c]c mBnh6 c= tAnh trao Zi ion l$qng tAnh
Trung tWm h-p ph+ l" c&c nh=m jT6 khi c&c trung tWm hoBt #ng n"y H7 hVt [m6 o<y* nh;m 'I
gi2m hoBt tAnh5 FuLn hoBt h=a n=6 ng$:i ta '-y , loBi H l$(ng n$c h-p ph+ n"y i5 chi_t #
'-y c"ng cao6 l$(ng n$c h-p ph+ c"ng gi2m i6 o<y* nh;m c"ng hoBt #ng5
j<y* nh;m c= nhiu cq hBt6 hBt c"ng HX kh2 nnng h-p ph+ c"ng cao5
3.3. Cellulose:
ellulo'e chJ yu c= c% ch phWn HL6 th$:ng $(c *Rng , t&ch nhOng ch-t phWn c]c m" kh=
t&ch hoPc kh;ng th, t&ch $(c HQng c% ch h-p ph+5
L" ch-t cao phWn t) thi9n nhi9n $(c *Rng *$i *Bng H#t m7n v" th$:ng kh;ng can ch-t kt
*Anh5
3.4. Silica gel ghp:
L" 'ilica gel m" nhiu nh=m SirjT 'ilanol $(c Hin Zi th"nh nh=m SirM6 SirjrM hay SirjrSir
M
ohi M l" mBch hy*rocarHon kXm phWn c]c (?6 s6 t6 .t! ta c= 'ilica gel ghXp pha 2o6 Wy
l" c&c ch-t phWn HL kh;ng phWn c]c5
ohi M l" mBch phWn c]c ta c= 'ilica gel ghXp pha thuKn6 Wy l" c&c ch-t h-p ph+ yu nu 'o vi
c&c 'ilica gel kh;ng ghXp5
3.5. Cc pha th !hc:
Polyami*6 nh]a trao Zi ion loBi ionit v; c% hOu c%6 oie'elguhr5
4. Dung mi:
Chn dung mi:
= # tinh khit cao6 tr&nh chSa c&c vt kim loBi
dung m;i kh;ng Yu& *e Hay h%i
Thay i dung mi:
oh2 nnng t&ch ri9ng c&c h(p ch-t HQng PTL tRy thu#c t3 l_ phWn phLi cJa c&c h(p ch-t n"y
giOa ch-t h-p ph+ v" *ung m;i ly gi2i
Th$:ng ly gi2i vi h1n h(p *ung m;i nh$ng tr&nh ') *+ng h1n h(p *ung m;i c= nhiu h%n ?
c-u t) (v\ h1n h(p phSc tBp *e *8n n vi_c thay Zi pha khi thay Zi nhi_t #!
u, thay Zi kh2 nnng t&ch c= th, thay Zi *ung m;i hoPc th"nh phan *ung m;i
5. Chun b[ mu sc k:
Chun b l m!ng ch" h#a:
&c H2n mng ch h=a c= th, t] l"m trong phDng thA nghi_m (H2n mng t] tr&ng! hoPc ') *+ng
nhOng H2n mng tr&ng 'vn5
u# *"y cJa H2n mng PTL th$:ng ') *+ng l" /6> ?6/ mm6 kAch th$c H2n mng th$:ng l" >
w ?/6 ./ w ?/6 ?/ w ?/6 ?/ w k/ hay c= th, n ?/ w .// cm tRy y9u cau ') *+ng5
Sc k iu ch - Nhm 2 TT DL chiu T3 Trang 2
dRng c&c ch-t h-p ph+ tBo h1n *7ch Hn trong n$c (c= th, th9m m#t l$(ng nh ch-t tr% nh$
thBch cao , kt *Anh nu can! r4i tr&ng l9n t-m kAnh ph@ng th"nh c&c H2n c= # *"y /6> ?6/
mm (c= th, *"y n ./ mm! tRy y9u cau ') *+ng5
u, kh; H2n ^ nhi_t # phDng trong ? ng"y6 'au = '-y '% H# s// trong ?h r4i mi '-y hoBt h=a
^ .?// trong ?h5
Chun b m$u th% &dch ch'm(:
F8u th) (U $(c '% H# loBi tBp! $(c c; ^ &p 'u-t gi2m n kh;6 'au = hDa v"o trong m#t
l$(ng v0a J *ung m;i (ph2i hDa tan tLt m8u th) v" *e Hay h%i! r4i ch-m l9n H2n mng5
Ch'm m$u th%:
u&nh *-u $:ng <u-t ph&t c&ch mXp *$i . ? cm5
dRng Lng mao Yu2n hay micropipette ch-m *ung *7ch m8u th) l9n H2n mng th"nh Hnng li9n
t+c6 Hnng c= th, *"y t0 . ? mm6 c&ch mXp H2n .6> ? cm5
ohi ch-m kh;ng $(c l"m thJng lp mng6 vt ch-m ph2i gGn (n9n ch-m *$i m#t ngu4n
nhi_t!6 chSa l$(ng ch-t th) kho2ng . ./ xg5
)hai t*in +c ,-:
uPt H2n mng U ch-m v"o H\nh6 Ky np H\nh5 Sau khi *ung m;i chBy n c&ch au tr9n cJa
H2n kho2ng . ? cm th\ l-y ra6 &nh *-u mSc *ung m;i tr9n kAnh6 , kh;5
./u -:
-u t) nghi9n cSu ph2i *e ph&t hi_n (tLt nh-t l" ph&t hi_n $(c HQng yn hf!
chOng iu ki_n , phWn t&ch th"nh c;ng tr9n H2n mng ch h=a`
z2n mng ph2i 4ng nh-t5
L$(ng m8u ch-m tr9n H2n mng phR h(p5
z\nh tri,n khai 'c k $(c HUo hDa tLt` Yuan trGng nh-t v\ m#t h(p ch-t *i chuy,n tr9n H2n
mng vi '] thay Zi vKn tLc ph+ thu#c v"o t{ l_ Hay h%i cJa *ung m;i6 n= *i chuy,n nhanh h%n
tr9n H mPt cJa H2n mng v" chKm h%n ^ phan H2n mng gan vi gi& mang6 hi_n t$(ng n"y
$(c gi2m thi,u tLi a trong m#t H\nh 'c k U $(c HUo hDa ho"n to"n5
L$(ng ch-t h-p ph+ tr9n H2n mng thay Zi tRy theo t0ng tr$:ng h(p6 Li vi 'ilica gel can ?/
?> g| H2n mng kAch th$c ?/ w ?/ cm6 *"y .mm6 nhOng H2n mng *"y c= th, H7 nSt trong Yu&
tr\nh '-y *o = ph2i gi2m l$(ng n$c trong h1n *7ch hay h1n h(p H#t nhUo cJa ch-t h-p ph+6
tnng l$(ng ch-t kt *Anh (thBch cao aSjk!6 tnng th:i gian '-y hoPc c= th, '-y HQng tia h4ng
ngoBi5
ft ch-m ph2i th@ng6 h}p v" ph2i c&ch ? mXp hai H9n cJa H2n mng At nh-t . p cm , tr&nh
hi_u Sng vin th$:ng l"m *ung m;i chuy,n #ng nhanh h%n hoPc chKm h%n H\nh th$:ng ^ hai
mXp cJa H2n mng h%n l" ^ trung tWm cJa H2n mng5
F8u th) $(c hDa tan trong m#t *ung m;i kh;ng phWn c]c6 *e Hay h%i ^ m#t n4ng # m" t-t c2
c&c c-u t) cJa m8u th) $(c h-p ph+ kh;ng ch3 tr9n H mPt m" ph2i <uy9n 'uLt chiu *"y cJa
H2n mng5 = th, ch-m HQng tay HQng c&ch ') *+ng micropipette hay 'yringe v" th$c kC hoPc
c= th, ') *+ng nhOng *+ng c+ $(c th$%ng mBi h=a ph+c v+ cho vi_c ch-m m8u5
6. Cch pht hin trong sc k Ip mng iu ch:
".1. Soi #$:
u im:
chanh6 ti_n l(i
oh;ng H7 hao h+t m8u nh$ phun <7t H2n
Nh/0c im:
Ft nh\n th-y v7 trA Hi,u kin kh&c v7 trA th]c cJa vt g &nh *-u trKt vt v" kh;ng thu $(c
ch-t khi cBo r4i ly gi2i
Sc k iu ch - Nhm 2 TT DL chiu T3 Trang 3
Phun <7t H2n vi thuLc th) Pc tr$ng`
Ti"n h1nh:
dRng t-m king hoPc t-m nilon che . phan H2n
".2. %hu thu&c th' l( ph) !hg *+ che
d]a v"o nhOng vt hi_n tr9n H2n6 *Rng 'patule cBo phan 'ilicagel , thu h(p ch-t
u im:
zit chAnh <&c v7 trA vt
Nh/0c im:
ThuLc th) tBo phSc vi h(p ch-t kh;ng th, ') *+ng , cBo H2n6 c; lKp h(p ch-t
".3. S' d,g h-i iod:
Ti"n h1nh:
uPt H2n trong Hu4ng h%i io*
ohi th-y vt l-y H2n ra khi Hu4ng
u&nh *-u v7 trA vt
Ph%i H2n ngo"i YuBt gi= , Hay h%i io*
Bo H2n , thu ch-t
II. SC K CQT IU CH
Ph$%ng ph&p 'c k *]a v"o '] phWn HL kh&c nhau cJa c&c ch-t giOa hai pha #ng v" tEnh5 =
nhiu nguy9n nhWn $a n '] phWn HL kh&c nhau cJa c&c ch-t6 nh$ng chAnh '] lPp i lPp lBi
hi_n t$(ng h-p ph+ r ph2n h-p ph+ cJa c&c ch-t khi *Dng pha #ng chuy,n #ng Yua pha tEnh l"
nguy9n nhWn chJ yu cJa vi_c t&ch 'c k5
1. CC CCH TIN HNH PHN TCH SC K
Tu~ thu#c ch # $a m8u v"o h_ thLng 'c k cmng nh$ c&c thao t&c tin h"nh 'c k6 ng$:i ta
chia c&ch tin h"nh 'c k th"nh Ha loBi`
1.1. %h.-g php ti/ l.u
uWy l" ph$%ng ph&p 'c k %n gi2n nh-t5 ng$:i ta cho h1n h(p6 vA *+6 hai ch-t v" z li9n t+c
ch2y Yua c#t c= nBp 'vn c&c c&c ch-t h-p ph+5 cg$:i ta <&c 7nh n4ng # c&c c-u t) trong *ung
*7ch ch2y ra khi c#t v" <Wy *]ng 4 th7 theo h_ toB #` n4ng # c-u t)r th, tAch *ung *7ch ch2y
Yua c#t5 4 th7 n"y th$:ng gGi l" 'c k 4 hay $:ng cong tho&t (c= t&c gi2 gGi l" $:ng cong
<u-t!5 do c&c c-u t) H7 h-p ph+ l9n c#t6 n9n tr$c ht t0 c#t ch3 ch2y ra *ung m;i5 Sau = trong
*ung *7ch tho&t 'I c= c-u t) H7 h-p ph+ yn h%n tr9n c#t6 vA *+ c-u t) 6 'au = n phan *ung
*7ch chSa h1n h(p z6 $:ng cong tho&t theo ph$%ng ph&p tin l$u cho tr9n h\nh *$i5 Trong
ph$%ng ph&p tin l$u6 ta ch3 thu $(c *ung *7ch tho&t c= c-u t) tinh khit ^ lVc au6 'au = l"
h1n h(p z5 Ph$%ng ph&p tin l$u kh;ng cho phXp t&ch ho"n to"n c&c c-u t) ra khi nhau n9n
th]c t At $(c *Rng v"o m+c Ach phWn tAch c&c ch-t5
Sc k iu ch - Nhm 2 TT DL chiu T3 Trang 4
1.2. %h.-g php 0'a gi1i
Trong ph$%ng ph&p r)a gi2i6 au ti9n ng$:i ta cho fml *ung *7ch chSa h1n h(p c&c c-u t) (vA
*+6 h1n h(p hai c-u t) v" z6 trong = c= &i l]c vi c#t nh h%n z! chBy Yua c#t5 &c c-u t)
6 z chSa trong fml tr$c ht 'I H7 giO lBi ^ phan tr9n cJa c#t5 Sau = cho *ung *7ch r)a
(th$:ng l" *ung m;i ho" tan c&c c-u t)! ch2y Yua c#t5 LVc = c&c c-u t) H7 giO ^ phan tr9n cJa
c#t 'I H7 *ung m;i r)a v" $a *8n <uLng phAa *$i5 -u t) c= &i l]c vi c#t nh h%n z n9n
chuy,n #ng <uLng phAa *$i nhanh h%n z5 cu c#t J *"i v" ch # ch2y cJa *ung *7ch r)a
thAch h(p th\ 'au m#t th:i gian cho ch2y *ung *7ch r)a6 c&c c-u t) t&ch ra th"nh t0ng vRng5 &c
vRng n"y 'I tuan t] tho&t ra khi c#t6 m1i vRng lBi $(c c&ch nhau HQng m#t phan *ung m;i5
T\nh H9n *$i Hi,u *ien $:ng cong tho&t cJa Yu& tr\nh r)a gi2i5 Trong ph$%ng ph&p r)a gi2i6
ng$:i ta cmng hay *Rng nhOng *ung *7ch chSa m#t c-u t) c= &i l]c vi c#t nh$ng ph2i nh h%n
&i l]c cJa c&c c-u t) can t&ch vi c#t5
1.3. %h.-g php 0'a 23y
Trong ph$%ng ph&p r)a [y6 'au khi $a m8u v"o c#t6 ta cho ch2y Yua c#t m#t *ung *7ch r)a
chSa ch-t c= &i l]c vi pha tEnh ln h%n c&c c-u t) can t&ch5 &c c-u t) can t&ch 'I H7 chuy,n
*an <uLng phAa *$i khi ta tin h"nh Yu& tr\nh r)a c#t v" tuan t] tho&t ra khi c#t5 -u t) tho&t
ra khi c#t au ti9n l" c-u t) t$%ng t&c vi pha tEnh yu nh-t6 'au = *an *an n c&c c-u t) c= &i
l]c vi c#t mBnh *an5 oh&c vi ph$%ng ph&p r)a gi2i6 n4ng # c&c c-u t) kh;ng gi2m Yua Yu&
tr\nh 'c k5 F#t nh$(c i,m Yuan trGng cJa ph$%ng ph&p r)a [y l" r-t kh= phWn Hi_t c&c phan
ri9ng cJa c&c c-u t) trong *ung *7ch tho&t v\ ^ Wy giOa c&c phan *ung *7ch tho&t chSa c&c c-u
t) kh;ng t&ch nhau HQng c&c th, tAch *ung *7ch r)a5
2. Ct sc k
#t 'c k l"m HQng thXp kh;ng r3 6 thJy tinh Pc Hi_t hoPc ch-t *Co
2.1. C4t ph5 t6ch
d"i` ./rp/cm
u$:ng kAnh trong` kr./mm
q hBt pha tEnh` >r./xm
ck/5///rs/5/// Ea |met
#t nh (microcolumn!` pr5>cm6 .r?mm6 pr>xm6 c.//5/// Ea|mXt
2.2. Ch7t h8i c4t:
Silica ('ilic *io<y*! kt t+ th"nh 'ilicagel
Silicagel Hao lp mng hOu c% li9n kt ( h=a hGc hoPc vKt l! vi H mPt
ch;m o<y*6 polymer6 nh]a trao Zi ion
2.3. C4t ch9 h:a
d"i ?>r.//cm
u$:ng kAnh trong sr>/mm6 tr&nh $(c hi_u Sng th"nh cJa c#t5
TLc # *Dng ln h%n c#t phWn tAch
S) *+ng trong *$(c li_u , '% H# t&ch c&c nh=m h(p ch-t
3. Pha tnh
3.1. Silicagel;hay !ieselgel c<a acid silicic= pha thu>
r h-t h-p ph+ $(c ') *+ng r#ng rUi hi_n nay5 L" m#t ch-t phWn c]c6 th$:ng $(c *Rng l"m
pha tEnh , phWn t&ch c&c ch-t5 phR h(p vi hau ht c&c pha #ng5 n= c= th, chBy vi nhOng
l$(ng m8u r-t nh nh$ trong 'c k lp mng5
Sc k iu ch - Nhm 2 TT DL chiu T3 Trang 5
r cg"y nay6 Silicagel c= kAch th$c c&c l1 l" k/6s/ v" .//(Sirk/6 Sirs/6 Sir.//! $(c *Rng
tron 'c k iu ch 5 Sirs/ th$:ng $(c ') *+ng nh-t5 Trong m#t v"i tr$:ng h(p6 kAch th$c
hBt Yu& nh l"m gi2m hi_u Yu2 cJa '] chit t&ch5
r Silicagel c= *i_n tAch H mPt t0 /5kr/5sg|cmp6 v" nhiu nh-t l" ?5?g|cmp5
= nhiu kAch cq 'ilicagel kh&c nhau ph+ thu#c v"o nh" '2n <u-t5 uLi vi 'c k ch h=a ')
*+ng cho nhOng l$(ng m8u trong phDng thA nghi_m th$:ng ') *+ng loBi c= kAch th$c .>r
?>xm6?>rk/xmhay k/rspxm5
r TAnh h-p ph+ cJa 'ilicagel *o c&c nh=m jT tr9n H mPt Yuyt 7nh5 ch=m jT l" c&c trung
tWm h-p ph+
r u, Silicagel h-p ph+ $(c tLt th\ can hoBt h=a tr$c khi ') *+ng` St kim loBi $(c loBi H
HQng c&ch un ';i vi Tl Pc6 *Rng n$c r)a 'Bch ion clori* v" lng gan loBi c&c hBt nh l%
l)ng6 'au = '-y .?/o trong kt gi:5( Li vi c&c H2ng tr&ng 'vn th\ kh;ng can hoBt h=a! 5
oh;ng '-y Yu& lWu tr&nh l"m m-t nh=m 'ilanolgH-t hoBt5
r TRy ch-t can phWn tAch m" hoBt h=a 'ilicagel kh&c nhau5 fA *+ ` khi chBy t7nh *au th\ '-y
'ilicagel can lWu c"ng tLt5 cDn Li vi c&c ch-t phWn c]c mBnh th\ '-y hoBt h=a At i6 them m#t At
n$c , gi2m hoBt tnng MN5
r Tu~ theo vi_c chGn c&c *ung m;i thAch h(p c& th, *Rng 'ilicagel , t&ch c&c h(p ch-t
Ha'e(alkaloi*! hay c&c h(p ch-t $a *au5 PhWn t&ch c&c ch-t c= # phWn c]c gan vi n=5 Silicagel
l" '] l]a chGn tLt nh-t l"m pha tEnh khi phWn t&ch c& ch-t c= khLi l$(ng phWn t) nh(?///da!
r oh2 nnng t&ch cJa 'ilicagel tLt h%n khi t[m n= HQng *ung *7ch HBc nitrat./r.?l6 *ung *7ch
aci* Horic 6 ammoniac6 *ung *7ch _m pho'phate55
3.2. Nhm oxyd
r t $(c ') *+ng h%n 'ilicagel5 Th$:ng $(c *Rng trong 'c k h-p ph+
r L" ch-t h-p ph+ phWn c]c5
r Trong 'c k c= p *Bng nh;m o<y*` nh;m trung tAnh6 aci*6 Ha'e5TRy v"o ch-t can t&ch m" l]a
chGn loBi o<y* nh;m ') *+ng cho phR h(p(chit c&c aci* amin c= tAnh Ha'e can *Rng o<y*
nh;m Ha'e6 khi can t&ch c&c ch-t trung tAnh th\ *Rng o<y* nh;m trung H\nh!
r u, t&ch tLt h%n ng$:i ta <) l nh;m vi c&c *ung *7ch aci* hoPc Ha'e5
ToBt tAnh cJa nh;m o<y* tRy thu#c l$(ng n$c n= chSa6 hoBt tAnh 'I gi2m i khi l$(ng n$c gia
tnng5 Tr$c khi *Rng can hoBt h=a ^ .?/o trong . gi:5zKc hoBt tAnh cJa nh;m $(c chia l"m >
HKc`
zKc hoBt
tAnh
i ii iii if f
l n$c / p s ./ .>
r di_n tAch H mPt cJa o<y* nh;m kho2ng /5g|cmp n kho2ng k5/g|cmp5
r j<y* nh;m phWn t&ch tLt c&c ch-t phWn c]c yu n trung H\nh6 th$:ng *Rng , phWn t&ch c&c
h(p ch-t th%m( c= &i l]c mBnh vi jT phenol! v" c&c h(p ch-t 4ng phWn cJa n=5 j<y* nh;m
cDn $(c *Rng , t&ch c&c ch-t ` hy*rocacHon6 alkaloi*6 ch-t m"u th]c ph[m6 lipi*5
3.3. ?ieselguh0
r *Bng H#t 6 chSa kho2ng /r>l Sij? phan cDn lBi l" c&c o<y* kim loBi5
r L" m#t ch-t phWn c]c yu6 *Rng , t&ch c&c ch-t phWn c]c nh$ $:ng6 c&c triglyceric6 c&c aci*
HXo HKc cao6 cetoaci*6 lacton5 ch$ng th$:ng $(c *Rng chJ yu l"m gi& mang cho pha tEnh
trong 'c k phWn HL5
Sc k iu ch - Nhm 2 TT DL chiu T3 Trang 6
3.4. %olyamide
r t $(c *Rng l"m ch-t h-p ph+ 6 chJ yu $(c *Rng , t&ch c&c ch-t c= chSa nh=m chSc
phenol( Nlavon! 6 $:ng5
3.5. Silicagel pha 21o
r = nhiu loBi m8u k7 n$c nh$ c&c pepti*6 th\ 'c k pha 2o th$:ng l" ph$%ng ph&p $(c l]a
chGn ') *+ng c#t 'ilicagel r.t5
r Trong 'c k pha 2o th\ pha tEnh c= H2n ch-t kh&c vi pha #ng(pha tEnh kh;ng phWn c]c 6
phWn #ng phWn c]c!
r uWy l" 'ilicagel c= gn m#t chu1i carHon *"i th$:ng l" .t(cr.t! hay t(rt! `SirjrSir nLi
arHon5
r &c h(p ch-t $(c r)a gi2i ra khi theo thS t]` h(p ch-t chSa nh=m jjTg alcol|phenol
gaming eter|al*ehy*g cetonegh(p ch-t halogengalkan
r FPc *R 'c k pha 2o c= mc tin h%n 'c k pha thuKn nh$ng n= c= nhiu $u i,m h%n nh$`
oh;ng can ph2i hoBt h=a tr$c khi *Rng5
T_ $(c thit thit lKp cWn HQng nhanh ch=ng
dung *7ch thWn n$c c= th, i Yua
T&ch tLt Li vi c&c ch-t phWn c]c
r Th$:ng $(c &p *+ng trong TPL
3.". %ha th cho s@c !A 05y ph5 t'
r MWy phWn t) th$:ng *Rng c&c ch-t nh$ `*e<tran6 agaro'e hay polyacrylami*e( Sepha*e<6
Sepharo'e6 raktogel6 ziorgel!
r = c&c loBi gel nh$ gel cSng v" gel H&n cSng5 &c gel cSng $(c c-u tBo t0 c&c h(p ch-t vinyl
v" *ivinyl 'tyren polymer5 Dn c&c gel cVng th\ $(c c-u tBo H^i c&c hBt thJy tinh <Lp v"
'ilicagel <Lp5 TRy v"o tAnh ch-t cJa t0ng loBi gel ma chia ra hai loBi l" gel thWn n$c
(hy*rophilic gel! v" gel thWn *au (lipophilic gel!
2 C3c 4h5had56 thng d7ng:
Sepha*e< (?/5>/5>!
Sepha*e< LTr?/
3.B. Cellulose
r L" ch-t cao phWn t) thi9n nhi9n c= c;ng thSc sTj?(jT!pp6 *Bng H#t m7n 6 *Rng kh;ng
can ch-t kt *Anh5
r T&ch c&c h(p ch-t thWn n$c5
r Tnng hoBt tAnh cJa cellulo'e <) l vi h1n h(p methanol6 aci* Normic v" n$c hoPc HQng
i'opropanol6 aci* acetic v" n$c5
ch$(c i,m cJa cellulo'e kh;ng th, ph&t hi_n vt 'c k HQng c&c thuLc th) mBnh nh$ cajT6
T?Sjk5
4. K thut nhi ct sc k
4.1. C,g c,:
r #t 'c kA (giLng giLng nh$ c&i Huret6 g4m . Lng thJy tinh v" . c&i kh=a6 nh$ng kh;ng can
vBch chia #!
r h-t nh4i c#t (pha tEnh6 'tationary pha'e6 th$:ng *Rng 'ilicagel6 c= ? loBi l" 'ilicagel pha thuKn
v" 'ilicagel pha 2o6 'ilicagel pha thuKn th$:ng *Rng h%n6 g4m Si c= Anh c&c nh=m jT6
'ilicagel pha 2o g4m Si c= Anh c&c *Wy alkan M6 ngo"i ra cDn *Rng alumin! h-t nh4i c#t
Yuyt 7nh Yu& tr\nh 'c kA5
Sc k iu ch - Nhm 2 TT DL chiu T3 Trang 7
r cu *Rng pha thuKn6 'ilicagel c= gn nh=m jT th\ n= 'I giO chPt c&c ch-t phWn c]c6 c&c ch-t
kh;ng phWn c]c 'I li9n kt vi 'ilicagel yu h%n n9n 'I ra tr$c6 c&c ch-t phWn c]c h%n 'I ra 'au5
cgo"i ra tRy thu#c v"o l$(ng m8u c= m" 'I *Rng l$(ng 'ilicagel Hao nhi9u6 t0 = 'I chGn kAch
cq c#t 'c kA5 dRng l$(ng 'ilicagel g-p ?/6 p/ hay >/ lan l$(ng m8u5 hV l$(ng 'ilicagel ph2i
Z n kho2ng g-p ./ lan $:ng kAnh c#t th\ Yu& tr\nh t&ch 'I *ien ra tLt5 dung m;i` th;ng
th$:ng chGn *ung m;i ph+ thu#c v"o ch-t nh4i c#t5
r cu *Rng 'ilicagel pha th$:ng (phWn c]c! th\ chGn *ung m;i i t0 kh;ng phWn c]c n phWn
c]c (vA *+ t0 chloroNorm m methanol!6 th;ng th$:ng *Rng h1n h(p *ung m;i5 hV *ung
m;i chBy 'c kA c#t ph2i phWn c]c h%n m#t chVt 'o vi *ung m;i chBy H2n mng v\ hBt 'ilicagel
*Rng cho c#t 'c kA 'I to h%n hBt tr9n H2n mng n9n kh2 nnng t&ch 'I kXm h%n m#t chVt5
('c kA c#t l" ph$%ng ph&p , t&ch ch-t 'au khi U c= t-t c2 th;ng tin tr9n H2n mng6 TL6 thin
layer chromatography6 l" Hi_n ph&p au ti9n *Rng , *D t\m th;ng tin v h1n h(p cJa m\nh
cmng nh$ Hi_n ph&p t&ch ch-t can l-y!5
4.2. DhEc hiF
8/c 9: nh:i c;t<
Sau khi U chGn c#t6 l"m kh; v" cWn 'ilicagel can *Rng6 pha *ung m;i chBy h_ r4i th\ hDa tan
'ilicagel v"o *ung m;i = trong m#t erlen5 L-y m#t ming nh H;ng gDn nh4i *$i &y c#t ,
chPn 'ilicagel lBi6 nu c#t Yu& *"i th\ *Rng . *Wy kIm thGt H;ng gDn <uLng6 chV *Rng At H;ng
gDn5 fi nhOng c#t c= 'vn ming <Lp hay lGc thJy tinh , chPn 'ilicagel r4i th\ kh;ng can l"m
vi_c n"y6 tuy nhi9n ming <Lp c= nh$(c i,m l" 'au khi chBy c#t <ong ta ph2i r)a lBi nhiu lan
cho 'Bch6 r-t m-t th:i gian 'o vi vi_c nh4i H;ng gDn6 khi chBy c#t <ong ch3 can vSt H;ng gDn5
Sau khi nh4i chPt H;ng gDn th\ tin h"nh khu-y 'ilicagel trong *ung m;i (kh;ng phWn c]c! U
pha 'vn r4i r=t nh} nh"ng v"o c#t5 Trong lVc r=t th\ n9n m^ kh=a , 'ilicagel lng u6 nh , .
erlen H9n *$i , thu h4i *ung m;i6 tip t+c l"m nh$ vKy n khi cho ht l$(ng 'ilicagel v"o6
tin h"nh r=t th9m *ung m;i (t0 erlen H9n *$i! , Zn 7nh h_6 ch i ch lBi nhiu lan n khi
h_ Zn 7nh6 c#t kh;ng H7 nSt hay gUy th\ <em nh$ vi_c nh4i c#t U ho"n th"nh5 oh=a c#t lBi5
8/c =:
cBp m8u ch-t v"o5 = ? loBi nBp m8u l" nBp m8u kh; v" nBp m8u $t5 cBp m8u $t l" h1n h(p
ch-t phWn tAch cmng tan trong *ung m;i chBy c#t n9n ch3 can cho m8u v"o5 Dn nu m8u kh;ng
tan trong *ung m;i chBy c#t th\ ph2i hDa tan m8u v"o *ung m;i gi&n tip trong . erlen5 Sau =
*Rng l$(ng At 'ilicagel cho v"o erlen , h-p thu m8u6 'au = cho ht v"o H\nh c; Yuay , c;
Yuay uZi *ung m;i i thu $(c 'ilicagel kh; c= chSa m8u5 LVc n"y nBp ht 'ilicagel = v"o c#t
v" cho *ung m;i chBy c#t v"o` gGi l" nBp m8u kh;5 ohi c; Yuay th\ nh l=t ming H;ng gDn ^
mi_ng H\nh c; Yuay , tr&nh 'ilicagel Hay l9n5 ; Yuay l" ch$ng c-t trong &p 'u-t kXm (chWn
kh;ng!5
8/c >:
Sau khi ho"n t-t vi_c nBp m8u r4i th\ l=t . ming H;ng gDn ^ H9n tr9n m8u ch-t , Zn 7nh h_ r4i
tip t+c chWm *ung m;i v"o6 t0 t0 thay Zi # phWn c]c cJa h_6 chV kh;ng $(c thay Zi #t
ng#t cmng nh$ chuy,n t0 kh;ng phWn c]c 'ang phWn c]c r4i lBi Yuay lBi kh;ng phWn c]c6 l"m
nh$ vKy 'I gUy c#t v" ph2i nh4i lBi t0 au5
8/c ?:
F^ kh=a6 lVc n"y c#t Ht au t&ch ch-t6 hSng l$(ng *ung m;i ch2y ra c= kXm theo ch-t U t&ch
$(c HQng Lng nghi_m nh6 m1i lan hSng kho2ng .|pLng nghi_m5 Sau = em ch-m H2n c&c
Lng nghi_m6 nhOng Lng c= v_t t$%ng t] nhau 'I $(c gom lBi6 = l" . ch-t5 Tip t+c nh$ vKy th\
cuLi cRng ta 'I t&ch $(c c&c ch-t mong muLn5
@hi chA
r F1i lan t&ch can kho2ng >/r?//Lng nghi_m6 th:i gian t&ch t0 ? n ng"y5
dRng kh=a , iu ch3nh tLc # *Dng ch2y *ung m;i6 ra chKm hay nhanh6 vi_c n"y Yuyt 7nh
Sc k iu ch - Nhm 2 TT DL chiu T3 Trang
Yu& tr\nh t&ch c= tLt hay kh;ng5 cu thKn trGng Yu& cho chBy chKm th\ ph2i ch: lWu6 nu n;n
n=ng Yu& cho ch2y nhanh th\ 'ilicagel ch$a k7p t&ch U ph2i cho ra ch-t6 nh$ vKy cmng kh;ng
t&ch $(c5
= nhOng h_ ph2i t&ch r-t lWu6 cho *R U m^ kh=a ht cq v8n kh;ng ch2y <uLng nhanh th\ *Rng
m&y [y (m&y '+c o<i *Rng , nu;i c&!5 c= 'I '+c kh;ng khA v"o , tnng tLc Yu& tr\nh [y *ung
m;i <uLng (ch3 *Rng khi tLc # *Dng *$i kho2ng p giGt|phVt!5 hV ch-t kh;ng *e H7 o<i h=a
th\ mi *Rng ph$%ng ph&p n"y $(c5 cu kh;ng o<i kh;ng khA 'I o<i h=a ht ch-t phWn tAch5
r cu *Rng 'ilicagel pha 2o th\ c#t kh;ng can kh=a v\ pha 2o chBy r-t chKm6 nh$ng nh$(c
i,m l" ph2i ng4i canh n= li9n t+c5 hV khi U chBy pha 2o th\ kh;ng $(c *Rng m&y [y6 v\
H2n ch-t pha 2o l" chKm5 cu *Rng m&y [y th\ nh$ U n=i ^ tr9n6 'ilicagel kh;ng t&ch
$(c5ohi chBy c#t th\ iu tLi k7 l" kh=a c#t lBi Yu& lWu5 dE nhi9n chBy c#t ?rp ng"y th\ ph2i
kh=a c#t lBi ^ cuLi ng"y6 nh$ng h;m 'au ph2i l9n l"m ngay6 nu , Yu& lWu th\ ch-t H7 giO lBi
trong c#t lWu 'I kh= t&ch ra h%n5
5. Pha ng
Pha #ng l" m#t th;ng 'L *e iu ch3nh nh-t khi tLi $u h=a h_ thLng 'c k5 Trong kh2o '&t pha
#ng6 v-n Pt ra l" l"m 'ao , t\m *ung m;i hoPc h1n h(p *ung m;i phR h(p nh-t trong th:i
gian ngn nh-t c= th, v" ') *+ng At nh-t vKt li_u5
5.1. GEa chH dug mi:
dung m;i l]a chGn kh;ng $(c 2nh h$^ng ti kt Yu2 cJa ph$%ng ph&p ph&t hi_n5
Th$:ng *Rng h1n h(p *ung m;i n9n can ph2i chV n kh2 nnng tr#n th"nh h1n h(p cJa c&c
*ung m;i`
ui,m ';i cJa c&c *ung m;i cmng l" m#t yu tLt r-t Yuan trGng5 chi_t # ';i th-p 'I *e *"ng v"
tit ki_m cho vi_c thu h4i5 Tuy nhi9n *ung m;i ') *+ng kh;ng n9n c= i,m ';i Yu& th-p (T
'

k/
/
! nhQm tr&nh '] Hay h%i trong Yu& tr\nh phWn lKp5
dung m;i vi # nht th-p cmng $(c $u ti9n v\ giVp gi2m &p l]c ph2i Pt l9n c#t5
TAnh Hn vOng v" tAnh tr% ph2i $(c Yuan tWm , tr&nh h$ m8u5
u#c tAnh th-p6 kh2 nnng ch&y nZ v" gi& c2 cmng can Yuan tWm5
B; mCnh cDa dung mi
Sny*er *]a tr9n gi& tr7 th]c nghi_m $a ra H2ng gi& tr7 # mBnh cJa *ung m;i`
Sc k iu ch - Nhm 2 TT DL chiu T3 Trang !
B; hEn cFc cDa dung mi
u# phWn c]c cJa *ung m;i c= th, l]a chGn *]a tr9n tam gi&c chGn lGc $(c <Wy *]ng H^i
Sny*er`
Sc k iu ch - Nhm 2 TT DL chiu T3 Trang
1"
B; tinh ,hi"t cDa ha ;ng:
oh;ng c= hoBt ch-t n"o .//l tinh khit5 u# tinh khit c"ng cao6 gi& c"ng cao5 an phR h(p yu
tL chi phA vi # tinh khit nhQm $a c&c 2nh h$^ng cJa n= v gii hBn phR h(p5
5.2. Cug mi cho s@c !A pha thu>:
5.3. Cug mi cho s@c !A pha 21o:
5.4. Cug mi cho s@c !A gel:
(Theo c% ch rWy phWn t)6 trao Zi ion6 &i l]c!
cg$(c lBi vi c&c loBi 'c k kh&c6 'c k gel kh;ng cho phXp ng$:i *Rng t&c #ng l9n tAnh tan
*o '] thay Zi pha #ng5 Pha #ng ch3 $(c chGn theo p ti9u chA`
oh2 nnng hDa tan tLt m8u
u# nht th-p ( &p l]c t&c #ng l9 gel th-p!
oh;ng l"m ph& hJy pha tEnh5
T"i li_u cung c-p t0 nh" '2n <u-t gel can ph2i $(c nghi9n cSu kE l$qng nhQm tr&nh cho gel H7
ph& hJy *o t$%ng t&c vi *ung m;i kh;ng phR h(p5
Sc k iu ch - Nhm 2 TT DL chiu T3 Trang
11
6. Cch pht hin trong sc k ct iu ch:
Ph$%ng ph&t ghi nhKn 'c k HQng *etector hf th$:ng $(c ') *+ng nh-t5 Trong khi vi_c phun
thuLc th) giLng , ph&t hi_n l" kh;ng kh2 thi th\ ') *+ng m&y o hf lBi t r hi_u Yu26 '] chGn
lGc v" tAnh kh2 *+ng5
".1. #$ detecto0
p *+ng $(c cho c&c h(p ch-t c= nhWn th%m6 c= nLi ;i li9n h(p6 nh=m carHonyl6 c= chSa io*6
Hrom6 'ulNur6
ch\n chung hf *etector c= th, ') *+ng $(c cho 'c k gel m" kh;ng can r)a gi2i5
".2. IeJ0actiKe detecto0 ;IL=
z# phKn ph&t hi_n nh: ch3 'L khVc <B5 z# phKn ph&t hi_n n"y tuy c= # nhBy th-p h%n 'o vi H#
ph&t hi_n hf nh$ng n= c= Sng *+ng nh-t 7nh trong 'c k iu ch5 fi # nhBy th-p6 khi l]a
chGn *ung m;i 'I *]a v"o Mi , l]a chGn $(c loBi *ung m;i n"o chBy ra kt Yu2 c= n4ng #
cao nh-t5
7. [nh tnh mt ct sc k
f\ nhiu l *o6 can thit ph2i c= '] &nh gi& nhOng Pc thR nh-t 7nh cJa c#t t] l"m5
Th;ng tin n"o Yuan trGng nh-t cho vi_c &nh gi& m#t c#t 'c k ch h=a
Th;ng tin v hi_u l]c c#t6 th;ng tin n"y cho phXp $a ra kt luKn v kt Yu2 phWn lKp cJa 'c k5
B.1. S@c !A 28
cu au ra cJa c#t $(c ghi nhKn H^i m#t H# phKn ph&t hi_n thAch h(p trong Yu& tr\nh phWn lKp
'c k6 v" tAn hi_u t0 H# phKn ph&t hi_n $(c ghi nhKn *Bng n4ng # theo th:i gian6 'I ghi nhKn
$(c $:ng cong i,n h\nh5 u$:ng cong au'ian
To"n H# c&c ghi nhKn cJa c&c tAn hi_u $(c gGi l" 'c k 45 dO li_u 'au Wu c= th, thu tr]c tip
t0 m#t 'c k 4`
Sc k iu ch - Nhm 2 TT DL chiu T3 Trang
12
t
o
th:i gian cht cJa c#t6 th:i gian can thit cho *ung m;i ch2y Yua ht c#t vi tLc # *Dng <&c
7nh
t
M
Th:i gian l$u6 th:i gian t0 khi tri,n khai m8u n pic c]c Bi
u# r#ng c% H2n cJa pic
z
/6>
# r#ng pic tBi chiu cao5
SI kh;ng th]c '] h(p l nu &nh gi& m#t c#t *]a v"o th:i gian l$u hoPc # r#ng cJa pic5
chOng th;ng 'L n"y ph+ thu#c v"o Yu& nhiu yu tL nh$ tLc # *Dng6 th"nh phan *ung m;i6
chiu *"i c#t Tuy nhi9n6 vi_c &nh gi& c#t m#t c&ch thAch h(p Li vi 'c k iu ch l" *]a
v"o Si ('ymmetry in*e< r ch3 'L Li <Sng! v" 'L Ea l thuyt hay chiu cao Ea l thuyt5
Si m; t2 '% l$(c h\nh *&ng cJa pic v" *o = l" m#t th;ng 'L c= Ach cho vi_c &nh gi& Pc tAnh
ch2y cJa c#t5 Si $(c 7nh nghEa`
Si H|a
S] H-t Li <Sng tr^ n9n r r"ng6 tuy nhi9n6 m#t iu ki_n ti9n Yuyt cho loBi th) nghi_m n"y
ph2i ') *+ng Li vi ch-t c= kh2 nnng t&ch r)a tLt nh-t5
fA *+ cJa m#t pic tLt (tr&i! v" m#t pic <-u (ph2i!
Si $(c o kh;ng ph2i tBi $:ng nn m" ^ v7 trA >l hoPc ./l cJa chiu cao pic5 (trong vA *+
n"y l" >l!
B.2. S& 2a lA thuy9t
F#t th;ng 'L *Rng , 'o '&nh kh&c l" 'L Ea l thuyt c cJa c#t
;ng thSc tAnh c c= $(c *]a tr9n gi2 7nh rQng pic c= h\nh *Bng $:ng cong au''ian5 u,
%n gi2n tAnh to&n6 c&c pic $(c th0a nhKn c= h\nh *Bng au''ian5
SL c ln t$%ng Sng vi c#t tLt5
Sc k iu ch - Nhm 2 TT DL chiu T3 Trang
13
oho2ng c&ch l thuyt cho m#t Yu& tr\nh gi2i h-p ph+ r h-p ph+ l" m#t Ea l thuyt *o = n= l"
th;ng 'L Bi *i_n tLt nh-t cho c&c th;ng 'L kh&c (kAch th$c pha h-p ph+6 tLc # *Dng6 chiu *"i
c#t6!
B.3. Cc y9u t& 1h h.Mg 29 s& 2a lA thuy9t:
C3c y"u tG dH ha ;ng:
u# nht
T=a ch-t t] nhi9n
TLc # $a v"o c#t
TLc # khuch t&n v"o pha tEnh
C3c y"u tG hIa tan
T=a ch-t t] nhi9n
F8u nBp v"o c#t
dung m;i nBp m8u
c4ng # cJa m8u
TLc # khuch t&n ^ m1i pha
u tL *ung tAch k
J"u tG dH ha tKnh
u$:ng kAnh c#t
oAch th$c hBt
PhWn HL hBt
T\nh *Bng hBt
z mPt
oAch th$c v" h\nh *Bng l1
C3c y"u tG thu;c tLnh tH3n
T\nh *Bng pic
u# H-t Li <Sng cJa pic
Ph$%ng ph&p tAnh to&n
u# chAnh <&c v" # Vng cJa c&c ph$%ng ph&p o6 ghi
nhKn
C3c y"u tG thu;c MN m3y m#c thi"t b
TAnh 4ng nh-t cJa c-u trVc lp nh4i c#t
oho2ng trLng v" c&c k9nh giOa c&c lp nh4i c#t
Th, tAch cht Yu& mSc trong h_ thLng L
B.4. Chi/u cao t.-g Ng KOi m4t 2a lA thuy9t
u, c= th, 'o '&nh c&c c#t c= chiu *"i kh&c nhau6 can thit ph2i tAnh chiu cao cJa Ea l thuyt
T (TL|c vi L l" chiu *"i cJa c#t!
B.5. Chi/u cao 2a lA thuy9t 2P lQm gi1m
chQm 'o '&nh c&c c#t c= kAch cq kh&c nhau6 th;ng 'L thAch h(p nh-t l" chiu cao U l"m gi2m h
h T|* (* l" $:ng kAnh cJa c#t!
Trong m#t v"i tr$:ng h(p6 'L Ea l thuyt ph+ thu#c chPt chI v" hoBt ch-t ') *+ng , ki,m tra5
Th;ng tin chAnh <&c v ch-t th) v" iu ki_n th) can ph2i $(c cung c-p5
B.". R4 ph5 gi1i
u# phWn gi2i m; t2 mLi li9n h_ cJa ? pic6 Wy l" th;ng 'L =ng vai trD Yuan trGng trong vi_c
phWn lKp m#t h1n h(p c&c ch-t5
M ?(t
M?
t
M.
!|(
.

?
! .6.(t
M?
t
M.
!|(H
/6>(.!
H
/6>(?!
!
B.B. DhS t6ch ch9t
Th, tAch cht f
/
$(c 7nh nghEa l" kho2ng trLng trong c#t 'c k5
Sc k iu ch - Nhm 2 TT DL chiu T3 Trang
14
f
/
t
M
5
m
(
m
l" tLc # phWn phLi hay l$u l$(ng *Dng!
5 Telmchen v" z5lat U ngh7 m#t ph$%ng ph&p kh&c , tAnh f
/

#t $(c l"m ay vi m#t *ung m;i thS nh-t (t3 trGng *.!6 =ng kAn v" cWn (.!5 #t 'au khi
tri,n khai $(c ph+c h4i lBi HQng m#t *ung m;i thS hai (*?!6 cmng =ng kAn v" cWn (?!5 f
/
$(c tAnh theo c;ng thSc
f
/
(? .!|(*? *.!
zit $(c f
/
c= th, tAnh to&n $(c th:i gian cht t
o

t
o
f
/
|
m
8. Phn Ip kt qu sc k:
ohi yu tL phWn gi2i gi2m v" c&c pic tr^ n9n gan nhau h%n6 vi_c phWn lKp tr^ n9n kh= khnn
FPc *R kh;ng l t$^ng nh$ng ']
phWn lKp cJa c&c ch-t tinh khit v8n
c= th, th]c hi_n $(c vi # phWn
gi2i M /5s nh$ng vi_c n"y Di hi
m#t i,m ct trong c&c phWn oBn
thu $(c5 h3 c&c phWn oBn r\a tRy
theo m1i pic $(c thu thKp v" phan
cDn lBi nQm giOa chVng c= th, $(c
thu h4i v" t&i phWn lKp5
Tr$:ng h(p tin h"nh 'c k Yu& t2i
c= th, <2y ra hi_n t$(ng kXo u;i6
can c= '] iu ch3nh v7 trA thu thKp
, tr&nh l8n phan kXo u;i cJa pic
tr$c5
T.1. U9u t& ph5 gi1i alpha
(t
M?
t
/
! | (t
M.
t
/
!
(t
M?
t
M.
!
cu hai th:i gian l$u HQng nhau6
. khi = kh;ng th, phWn lKp $(c5
i& tr7 c"ng ln6 vi_c phWn lKp c"ng *e *"ng5
9. Sc k ct nhanh (FC - FIash
Chromatography)
@ii thiOu
f"o giai oBn au cJa k thuKt 'c k6 nhOng
c#t %n gi2n HQng thJy tinh $(c ') *+ng6
hoBt #ng nh: v"o &p l]c thJy tEnh cJa *ung
m;i5 Trong m#t -n ph[m nnm .t lark
5Still kh&m ph& ra kh2 nnng tnng tLc Yu&
tr\nh phWn lKp tr9n c#t thJy tinh6 t0 = gia tnng
hi_u l]c cJa ph$%ng ph&p 'c k5 ot Yu2 ht
'Sc thuyt ph+c v" tr^ n9n m#t ph$%ng ph&p
tinh ch kh;ng ng: trong h=a hGc ch h=a5
Sc k iu ch - Nhm 2 TT DL chiu T3 Trang
15
cg"y nay 'c k c#t nhanh c"ng $(c ph&t tri,n vi nhiu thit H7 h1 tr( v" '] ti_n *+ng5
Sc k c#t nhanh tr^ n9n phZ Hin v\ chVng %n gi2n *e ') *+ng6 ti_n l(i v" c= th, trang H7 ^
mGi phDng thA nghi_m5
V.1. Nguy( t@c:
S] phWn lKp 'c k *]a tr9n m#t trBng th&i cWn HQng giOa c&c th"nh phan can phWn lKp6 m#t t&c
nhWn h-p ph+ trong c#t (pha tEnh! v" m#t *ung m;i ch2y <uy9n Yua n= (pha #ng!5
ohi m#t th"nh phan phWn t&n v"o pha tEnh $(c 7nh nghEa l" '] h-p ph+6 '] t&ch ra H^i pha
#ng $(c 7nh nghEa l" '] ph2n h-p ph+5 oh2 nnng h-p ph+ cao giOa c&c th"nh phan v" pha
tEnh 4ng nghEa vi '] l$u giO cJa c&c ch-t n"y6 $(c <em nh$ chKm trong '] r)a gi2i c#t5 S]
phWn lKp cJa m#t h1n h(p ra c&c th"nh phan ri9ng Hi_t ch3 c= th, th]c hi_n khi m1i th"nh phan
n"y c= Pc tAnh h-p ph+ v" ph2n h-p ph+ kh&c nhau5
V.2. GEa chH pha th phW hXp
= th, tin h"nh 'c k tr9n c2 pha tEnh phWn c]c v" kh;ng phWn c]c6 # h-p ph+ tRy thu#c v"o
m1i nh" '2n <u-t5
Sc k chu[n y9u cau ') *+ng pha tEnh phWn c]c nh$ 'ilica gel v" *ung m;i kh;ng phWn c]c5
&c th"nh phan ri9ng lC H7 l$u giO l" *o t$%ng t&c giOa nh=m chSc phWn c]c cJa n= vi ch-t h-p
ph+5 &c ch-t phWn c]c yu $(c r)a gi2i ra tr$c6 tip 'au = l" c&c ch-t phWn c]c mBnh h%n5
Trong 'c k pha 2o6 pha tEnh l" ch-t kh;ng phWn c]c v" '] r)a gi2i $(c th]c hi_n H^i *ung
m;i phWn c]c5 chOng pha tEnh n"y $(c thit k HQng c&ch thay Zi 'ilica gel vi nh=m kh;ng
phWn c]c nh$ng r.t hoPc nhOng gLc t$%ng 4ng5 fKt li_u pha 2o mc h%n nhiu 'o vi pha
tEnh chu[n v" = l" l *o chAnh khin pha tEnh chu[n $(c ') *+ng chJ yu trong 'c k nhanh5
Sc k iu ch - Nhm 2 TT DL chiu T3 Trang
16
V.3. ?h1o st hF th&g s@c !A t0.Oc *Yg s@c !A lOp mZg:
ch$ U cKp6 a phan 'c k c#t nhanh ') *+ng pha tEnh l" 'ilica
gel H\nh th$:ng hoPc phWn c]c cao *o = vi_c tin h"nh kh2o '&t
tr$c HQng TL l" h(p l vi m#t '] au t$ nh nh-t v th:i gian v"
vKt li_u6 hSa h}n t\m ra iu ki_n 'c k c= kh2 nnng &p *+ng cho c#t
'c k nhanh5
&c 7nh pha tEnh
T\m pha #ng vi '] chGn lGc nh-t
&c 7nh # mBnh *ung m;i
F#t c&ch l t$^ng6 ch-t h-p ph+ tr9n ? loBi 'c k n9n giLng nhau ,
kh2 nnng &p *+ng t0 TL cho l" cao nh-t5
)hPH +3t ha tKnh
Th]c nghi_m vi TL c= th, giVp $a ra chGn l]a Vng n5 cu
TL vi 'ilica gel th$:ng $(c ') *+ng cho kt Yu2 tLt th\ cmng c=
th, ') *+ng cho 5 cu kt Yu2 kh;ng Bt6 khi = mi nghE n kh2
nnng ') *+ng pha 2o5
)hPH +3t dung mi
F#t khi U chGn $(c pha tEnh vi nhOng Pc tAnh thAch h(p6 *ung
m;i hoPc h1n h(p *ung m;i phWn lKp c&c ch-t th"nh phan 'I $(c
kh2o '&t5
F#t c&ch tZng Yu&t6 m1i *ung m;i u c= nhOng Pc tAnh ri9ng6 m#t
'L c= <u h$ng giLng nhau trong khi m#t 'L th\ kh&c nhau r-t nhiu5
L5M5Sny*er v" 55oirklan* U nghi9n cSu v" 'o '&nh c&c kt Yu2 Pc
tAnh cJa nhiu loBi *ung m;i v" c&c nh=m *ung m;i c= chung t&c
*+ng th"nh c&c nh=m chGn lGc5
ch=m chGn lGc cho
phXp c;ng vi_c t\m
kim $(c tKp trung6
'I c= At i,m 'o '&nh
khi m" *ung m;i
chung nh=m5 ;ng
vi_c 'I $(c tin h"nh
theo h$ng 'o '&nh
giOa c&c nh=m Pc
tAnh5
chOng *ung m;i Yuan
trGng cho 'c k $(c
tr\nh H"y theo H2ng
'au ch3 Hao g4m c&c
*ung m;i c= th, *Rng
trong phWn lKp ')
*+ng H# phKn ph&t
hi_n hf (kh;ng gWy
tAn hi_u!
Sc k iu ch - Nhm 2 TT DL chiu T3 Trang
17
d]a tr9n # phWn c]c cJa c&c th"nh phan can $(c phWn lKp6 trong tr$:ng h(p # *ung m;i c=
# mBnh Yu& ln khin kh;ng th, phWn t&ch $(c6 # mBnh cJa *ung m;i c= th, $(c gi2m
<uLng HQng c&ch hDa tan th9m he<ane (# mBnh /5.!6 ngay lKp tSc c= th, phWn lKp tLt5
i2m # mBnh cJa *ung m;i (tr&i` *ichloromethane6 ph2i` Te<ane`*ichloromethane p`.!
fi_c th9m he<ane giVp gi2m # mBnh cJa *ung m;i nh$ng kh;ng t&c #ng l9n tAnh chGn lGc
(kh2 nnng phWn gi2i!
TRy theo th"nh phan $(c l]a chGn , chGn *ung m;i c= '] chGn lGc thAch h(p5 z2n fi c= ']
phWn t&ch tLt nh$ng nu ch3 Yuan tWm ti vi_c phWn lKp th"nh phan au ti9n6 *ung m;i chBy ^
H2n f 'I $(c chGn5
L t$^ng c&c th"nh phan kh&c c"ng t&ch <a ch-t can t&ch c"ng tLt5
V.4. D[ DGC 29 \C
do hi_u nnng t&ch cJa TL cao h%n 'o vi n9n can ph2i c= '] iu ch3nh khi &p *+ng t0
TL n
Th, tAch c#t f .|M
N
M
N
nQm trong kho2ng t0 /5.> /5k 'I t$%ng Sng vi th, tAch c#t ?5> rs5s
Sc k iu ch - Nhm 2 TT DL chiu T3 Trang
1
V.5. N]p m^u l( c4t
fi_c nBp m8u Li vi 'c k c#t H\nh th$:ng l" m#t c;ng vi_c %n gi2n trong phWn tAch 'c k6
tuy nhi9n trong 'c k iu ch6 c#t th$:ng $(c tri,n khai Yu& t2i v" vi_c nBp m8u l" r-t Yuan
trGng5
LVc tr$c6 Yuy 7nh chung cho 'c k ch h=a l" c#t c= th, nKp m8u ^ n4ng # gan .l tRy theo
loBi 'ilica gel6 ng"y nay vi vi_c ') *+ng v" tLi $u h=a pha #ng (M
N
/5/k /5k6 f .!6
n4ng # m8u nBp c= th, tnng n ./l v" '] phWn lKp nhanh v" hi_u Yu2 h%n r-t nhiu5 ohi =
th, tAch m8u 'I nh v" $(c nBp th"nh Hnng c= # h}p tLi thi,u6 hi_u nnng t&ch 'I cao5
V.". I'a gi1i theo g0adiet
oh2o '&t pha #ng v" ghi nhKn '] phWn t&ch c&c pic theo m1i pha5

hia phWn oBn , thay Zi *ung m;i nhQm t&ch tLt h%n5
fA *+ c&c kt Yu2`
Sc k iu ch - Nhm 2 TT DL chiu T3 Trang
1!
10. SC K CQT KH
Sc k c#t kh; ( dd! l" m#t k thuKt 'c k hi_n Bi cho phXp chuy,n Zi nhanh ch=ng v" *e
*"ng c&c th;ng 'L hoBt #ng cJa cc k lp mng phWn tAch ( TL! 'ang 'c k c#t ch h=a
( !5 Sc k c#t kh; khc ph+c $(c nh$(c i,m cJa ? ph$%ng ph&p 'c k lp mng phWn
tAch v" 'c k c#t ch h=a5
Sc k lp mng l" m#t k thuKt Yuan trGng ') *+ng trong phDng thA nghi_m6v\ n= cho phXp <&c
7nh nhanh th"nh phan cJa c&c h(p ch-t phSc tBp5 TL c= th, phWn lKp c&c ch-t ^ m#t l$(ng r-t
nh5 Tuy nhi9n6 nhOng ch-t t0 v"i mg n v"i g cmng c= th, &p *+ng 'c k c#t6 v\ khi = *Rng
'c k lp mng tLn nhiu th:i gian v" gi& th"nh cao5 Trong m#t 'L tr$:ng h(p6 thKm chA nhOng
ph$%ng ph&p gGi l" lp *"y hay lp ch h=a cmng l" l]a chGn cuLi cRng v\ c&c yu tL th:i gian6
gi& th"nh6 v" thiu h+t '] chuy,n Zi c&c th;ng 'L cJa k thuKt phWn tAch5 z9n cBnh =6 ']
chuy,n Zi t0 'c k lp mng 'ang 'c k c#t th\ kh= khnn h%n v\ ch-t h-p ph+ cJa 'c k lp
mng kh;ng giLng 'c k c#t5
Trong 'c k lp mng lp 'ilic v" nh;m th\ kh; tr$c khi ') *+ng v" ch3 tip <Vc vi *ung m;i
'au khi $(c Pt v"o H\nh khai tri,n5 u= l" l *o tBi 'ao trong 'c k c#t kh; th\ m8u $(c nBp
v"o c#t kh; 5 Tr&i ng$(c vi 'c k c#t th;ng th$:ng6 'c k c#t kh; l" k thuKt kh;ng r)a gi2i
$(c5 f\ th ch3 m#t l$(ng gii hBn ch-t r)a gi2i $(c *Rng %n thuan , l-p nhOng kI cJa c&c
phWn t) h-p ph+5
Sc k iu ch - Nhm 2 TT DL chiu T3 Trang
2"
h-t h-p ph+ 'c k c#t kh; c= 'vn tr9n th7 tr$:ng $(c iu ch3nh phR h(p vi Pc tAnh l h=a
cJa 'c k lp mng6 trong 'uLt chu tr\nh '2n <u-t5 fi nhOng Pc tAnh l h=a t$%ng t]6 c&c gi&
tr7 MN cJa c&c ch-t phWn tAch HQng 'c k lp mng th\ hau nh$ Vng vi c&c gi& tr7 thu $(c t0
'c k c#t kh;5 fi_c ') *+ng nhOng ch-t h-p ph+ $(c iu ch3nh m#t c&ch Pc Hi_t n"y6 c= th,
') *+ng cRng m#t ch-t h-p th+6 cRng m#t *ung m;i cho vi_c tin h"nh tr9n c#t v" c= th, chuy,n
Zi nhOng kt Yu2 cJa 'c k lp mng 'ang 'c k c#t r)a gi2i m#t c&ch nhanh ch=ng6 tit ki_m
th:i gian v" tin HBc5 chOng ch-t li_u cho 'c k c#t h-p ph+ t$%ng Sng vi nhOng ch-t li_u cJa
lp mng th;ng *+ng nh-t6 nh$ ch\ dd6 nh;m dd5 chOng ch-t h-p th+ 'c k c#t kh; n"y
$(c ') *+ng r#ng rUi khi can ph2i tnng l9n m#t c&ch t$%ng <Sng vi 'c k lp mng6 , chu[n
H7 J 'L l$(ng c&c h(p ch-t cho c&c ph2n Sng h=a hGc v"| hoPc c&c Yuy tr\nh phWn tAch tip theo5
dd th]c t $(c ') *+ng cho c&c phWn lKp t0 'c k lp mng5
1_.1. `uy t0ah 2- gi1 h:a:
Chun b
S) *+ng cRng . h_ *ung m;i tr9n 'c k lp mng
t . Lng nylon theo chiu *"i y9u cau5 u, phWn lKp . g ch-t li_u6 can kho2ng p// g ch-t h-p
th+ trong m#t Lng .rmk/ mm( h\nh ?!
u=ng Lng HQng c&ch kXo m#t au v" giO chPt m#t au HQng c&i -n6 ghim hay inh k}p
hyn m#t t-m gi-y nh hay l=t H;ng thJy tinh ^ &y c#t6 *Rng m#t cWy kim Wm <uy9n Yua l1 ^
&y c#t5
uZ ay c#t n Ha phan t$ chiu *"i5
F8u $(c *Rng , phWn lKp n9n kt h(p vi m#t l$(ng ch-t h-p th+ t$%ng t] HQng At nh-t ./ lan
khLi l$(ng cJa n= trong m#t Lng ki,m tra h\nh n=n5
Th9m t0ng centimet ch-t h-p th+ v"o phAa tr9n m8u6 'au = cho m#t ming H;ng thJy tinh nh
#t chPt Lng HQng m#t k}p tr9n gi&5
F^ kh=a vDi cJa H\nh ]ng *ung m;i6 th9m *ung m;i cho n khi *ung m;i ch2y n &y c#t5
cg$ng lBi6 ch: kho2ng p/ phVt5( T\nh >!
T\m v7 trA cJa *2i phWn lKp HQng mt th$:ng6 tia hf hay tt Yuang5 Phun thuLc th) thAch h(p v"o
vRng tip <Vc v" 'o '&nh vi phan c#t kh;ng $(c <) l , &nh *-u *2i U $(c phWn lKp5
u&nh gi& v7 trA cJa *2i tr9n Lng nilon
L-y c#t ra khi gi&
t c#t th"nh nhOng phan theo y9u cau5 ( T\nh s!
M)a gi2i nhOng h(p ch-t tinh khit t0 nhOng phan U ct HQng c&c *ung m;i phWn c]c
1_.2. bNc CdNc SeC ?f CgD ?hi
Tinh du
FPc *R c= th, *Rng m&y 'c k khA mao *8n , phWn tAch6 c&c h(p ch-t phSc tBp nh$ tinh *au c=
th, $(c phWn tAch HQng ph$%ng ph&p kh&c5 z$c phWn tAch r-t can thit , t&ch c&c
hy*rocarHon t0 c&c terpenoi* H7 o<y h=a v" 'c k c#t c= th, th]c hi_n chSc nnng n"y5 FPt hBn
ch cJa ph$%ng ph&p n"y l" ti9u th+ nhiu *ung m;i6 l"m loUng c&c ch-t Pc Hi_t6 kh2 nnng t&i
ch kXm6 h\nh th"nh tBp ch-t v" tLn nhiu th:i gian5
Sc k c#t kh; l" ph$%ng ph&p nhanh $(c ') *+ng H^i ouHecka , phWn lKp tinh *au th"nh
c&c giai oBn thAch h(p cho phWn tAch 'c k khA5&c th"nh phan kh;ng phWn c]c 'I $(c phWn
lKp tr9n 'ilica gel oelm ( can ph2i t&i hoBt h=a vi l n$c , tr&nh '] t&i 'p <p lBi cJa c&c
hy*rocarHon terpen! HQng c&ch r)a gi2i au ti9n vi nrpentan( cho phWn oBn .!6 tip theo l"
Henen hay propyl chlori*e ( cho phWn oBn ?!5 Sau cRng Henen 'I $(c chBy Yua c#t6 c#t 'I
$(c ct th"nh p *Uy chSa nhOng th"nh phan phWn c]c h%n5 F1i *Uy 'I $(c chit <u-t vi
*iethyletherrmethanol t`?6 'au = 'I cho phWn oBn pr>5 T-t c2 c&c phWn oBn .r> 'I $(c ti9m
Sc k iu ch - Nhm 2 TT DL chiu T3 Trang
21
lan l$(t v"o c#t 'c k khA6 'c k 4 *e *"ng $(c nhKn *i_n5 T%n nOa6 th;ng tin v # phWn
c]c li9n Yuan cJa c&c giai oBn *o r)a gi2i tr9n 'ilicagel th\ r-t hOu Ach trong vi_c nhKn *Bng c&c
pic5
45+Quit5*5n5<
fi_c phWn lKp c&c 'e'Yuiterpene t0 *$(c li_u th\ th$:ng $(c th]c hi_n H^i c&c H$c 'c k c#t
cJa ph$%ng ph&p chit <u-t kh;ng phWn c]c ^ &p 'u-t th-p hay trung H\nh6 hay phWn lKp HQng
'c k lp mng ch h=a v" kt tinh lBi vi 'L l$(ng ln5Th$:ng ') *+ng c#t MPrt hay MPr.t
vi *ung m;i r)a gi2i l" h1n h(p methanolrn$c5 chOng giai oBn n"y chc chn *8n n ']
h-p thu kh;ng thuKn ngh7ch cJa c&c h(p ch-t mong muLn5
Rit5*5n5
cghi9n cSu hoBt tAnh kh&ng ung th$ cJa paclita<el t0 lo"i T# $unnan%n&i& cJa Trung uLc5 PhWn
tAch au ti9n vi 'c k c#t kh; ( 'ilicagel t/r?// me'hb T
?
l
?r
FejT k/`.! v" 'au = l" tr9n
c&c c#t m^ th;ng th$:ng cho ra ta<in z v" ?r*eacetylta<in z5
T1n h(p 'ilicagel ( spr?// g! v" gcj
p
( >`.! , phWn lKp laH*ane *iterpene methyl e'ter
Cucu*bitacin+
Sc k c#t kh; 'ilicagel $(c ') *+ng trong 'uLt Yu& tr\nh phWn lKp ch-t #c ..r
*eo<ycucurHitacin t0 D%&'(n)ainia &*in(&a6 tri,n khai vi ethyl acetater n$c `. v" he<aner
*ichloromethane `p5 iai oBn tinh ch cuLi cRng $(c th]c hi_n vi 'c k lp mng ch h=a
v" ly tWm5
.ignan+
2 lignan' v" neolignan' u thu $(c HQng c&ch kt h(p 'c k c#t kh; v" 'c k lp mng ch
h=a5
R5+id5
fA *+ nh$ aci* 'alvianolic z6 ') *+ng trong thuLc cZ truyn Trung uLc5 u$(c phWn lKp vi
'c k c#t kh; tr9n ?5p kg 'ilicagel ( Tl
p
rFejTrTjjT t>`.>`.!5 #t $(c ct th"nh .s
phan v" r)a gi2i HQng ethanol -m5 Phan .pr.k $(c tinh khit h=a HQng 'epha*e< LTr?/
( FejT! , thu $(c ?/5s g aci* 'alvianolic z5 ( i v" Li .tt!5
11. SC K LNG CHN KHNG
Sc k lng chWn kh;ng ( fL! c= ngu4n gLc t0 c5 f"o nnm .6 m#t m; t2 ngn v ph$%ng
ph&p phWn lKp cemHrenoi* terpene t0 'an h; mm cJa c U $(c <u-t H2n5
11.1. Nguy( t@c:
o thuKt n"y c= th, $(c <em nh$ 'c k lng ch h=a6 hoBt #ng nh$ m#t c#t6 *Rng chWn
kh;ng , tnng tLc # ch2y cJa ch-t r)a gi2i5 o thuKt n"y kh&c vi 'c k c#t nhanh l" c#t $(c
chBy kh; 'au khi thu m1i phWn oBn5 uiu n"y giLng 'c k lp mng ch h=a v\ c&c Ea $(c
l"m kh; 'au khi chBy v" 'au = $(c r)a gi2i lBi5
11.2. `uy t0ah:
F#t c#t nh hoPc m#t pheu lGc zuchner v0a vi thJy tinh ( ./r?/ m6 # <Lp d hay ?! $(c
gn kh; vi ch-t h-p th+ ( ./rk/ m cJa loBi 'c k lp mng6 vA *+ nh$ 'ilicagel Ferck s/ T
hay s/ !5
h-t h-p th+ $(c cho v"o HQng c&ch g nh} *$i trGng l]c5 Sau = $a chWn kh;ng v"o th;ng
Yua vDi p ngU6 ch-t h-p th+ $(c nXn <uLng th"nh m#t lp mng cSng HQng c&ch y m#t nVt
chPn cao 'u v" g nh}5
Tt chWn kh;ng6 r=t *ung m;i kXm phWn c]c nhanh l9n tr9n H mPt ch-t h-p ph+6 'au = m^ chWn
kh;ng5 ohi m" ch-t r)a gi2i i Yua6 c#t $(c hVt kh; v" 'vn '"ng , t2i5
F8u trong *ung m;i thAch h(p $(c cho tr]c tip phAa tr9n au c#t v" $(c kXo nh} nh"ng v"o
vKt hSng HQng chWn kh;ng5 F8u $(c t&i h-t thu tr9n 'ilicagel6 nh;m o<i*e5
Sc k iu ch - Nhm 2 TT DL chiu T3 Trang
22
#t $(c tri,n khai vi h1n h(p *ung m;i thAch h(p6 Ht au vi *ung m;i kXm phWn c]c6 tnng
*an # phWn c]c6 rVt cho c#t kh; giOa m1i phWn oBn thu $(c ( iu n"y tr&nh tBo rUnh!5
cg$(c vi ph$%ng ph&p ') *+ng &p 'u-t phAa tr9n au c#t6 '] l;i kXo tr9n c#t fL th\ *e *"ng
v\ phAa tr9n au c#t HQng vi &p 'u-t khA Yuy,n5
ch\n chung6 chiu cao c#t h-p th+ kh;ng n9n Yu& > cm5 fi lp nh ( .// mg!6 thAch h(p vi
c#t 5>r. cm i5*5 v" cao k cm6 Li vi /5>r.g6 thAch h(p kAch th$c ?5>k cm6 t0 .r./ g6 >> cm6
vi l$(ng ln h%n th\ $(c phWn lKp tLt nh-t vi pheu lGc thJy tinh nung vi chiu cao > cm5
T1n h(p , phWn lKp $(c th9m v"o c#t 'ilic ^ H-t cS v7 trA n"o c= th, vi m#t At *au ha ( nu
kh;ng th, l"m nh$ tr9n th\ th9m v"o m#t ch-t rn!5 Tnng l$(ng *ung m;i phWn c]c h%n cho m1i
phWn oBn *ung m;i li9n tip5 Tnng # phWn c]c m#t l$(ng nh (.l6?l6 pl!6 'au = l$(ng
tnng c= th, ti >l6 ./l6 ?/l5
11.3. Cc Ng d,g:
Sc k lng chWn kh;ng $(c *Rng , phWn lKp t0ng phan *7ch chit *$(c li_u tr$c khi *Rng
TPL v" c&c H$c phWn lKp phSc tBp kh&c5 Trong nhOng nnm tr$c fL $(c ') *+ng r#ng
rUi trong lEnh v]c '2n ph[m t] nhi9n v\ c% ch hoBt #ng %n gi2n5 chOng ch-t h1 tr( 'c k
kh&c $(c ') *+ng trong fL` 'ilicagel ( c2 loBi th$:ng v" loBi pha 2o!6 l
?
j
p
6 c6 *iol v"
polyami*e5 h-t r)a gi2i phZ Hin nh-t l" ether *au ha6 tnng th"nh phan ethyl acetate5
Sl,alHid
diterpene alkaloi*' $(c phWn lKp nhanh ch=ng v" *e *"ng HQng fL5
fi_c tinh khit h=a aconitine th$%ng mBi HQng fL th\ nhanh h%n6 rC h%n v" thuKn ti_n h%n
HQng 'c k lp mng ch h=a6 yu tL Yuan trGng nh-t6 r nh-t l" vi_c rOa gi2i m8u H^i fL m"
kh;ng can ph2i cBo Ea5
chOng phWn lKp v *iterpene alkaloi*' *Rng fL tr9n l
?
j
p
U $(c H&o c&o ( Pelletier an*
za*ai .tb o'hi et al5 ./` Liang et al5 ..!5 Trong nhOng vA *+ n"y th\ c= '] kt h(p
fL v" TL5
F#t alkaloi* guani*ine #c mi $(c phWn lKp t0 HGt Hi,n l+c 7a +nchin(% *au*%r)a& H^i m#t
Yuy tr\nh Hao g4m fL tr9n *iol6 vi *ichloromethanermethanol ( ./`/>`>! ( zouaicha et al5
.k!
Rit5*5n5
dau hBt cJa ,r()(n )ig-ium ch.a *h(r/(--.?6.pr*ie'ter $(c Hit nh$ l" ch-t *7 Sng v" gWy ung
th$5 chOng *ie'ter' n"y $(c tinh khit h=a tr9n 'ilicagel s/( .>rk/ m6 Ferck! vi m&y fL
$(c 'Oa Zi *Rng *Dng *ung m;i kh;ng Zi v" chWn kh;ng5
T+Hb5nUHVu*anHn5+
d7ch chit t0 re 0(-$g(num mu-)i'-(rum $(c ') *+ng trong thuLc cZ truyn Trung uLc tr7
H_nh tim mBch5 d7ch chit methanol cJa re $(c chia ra giOa n$c v" ethyl acetate5 Phan ethyl
acetate $(c 'c k H^i fL tr9n m#t gi& 'Wu ?5> cm theo loBi 'ilicagel s/T cJa 'c k lp
mng pha 2o6 Ferck ( 'L .s! ( trong m#t pheu zuchner $:ng kAnh .p5 cm6 thJy tinh <Lp
loBi p!5
T*it5*5n @lcH+id5+
jleanolic aci* 'aponin cJa cWy Dia-ium guin%%n&% $(c phWn lKp t0 Yu2 H^i Yuy tr\nh au ti9n l"
'c k c#t nhanh tr9n 'ilicagel v" 'au = l" fL tr9n lichoprep MPr.t vi methanol `k5
( j*ukova et al5 .s!
.imHnHid+
a*irone $(c phWn lKp t0 nhWn hBt ch$a chAn cJa Trichi-ia ha1an%n&i&# d7ch chit he<ane cJa
nhWn $(c chia ra giOa he<ane v" methanolrn$c .`.5 dung *7ch methanol n$c $(c chit vi
ethyl acetate v" fL cJa *7ch chit 'au tr9n 'ilicagel t&i hoBt h=a vi >l n$c ( r)a gi2i vi *au
harethyl acetate .`.! thu $(c tr]c tip limonoi*( rena' an* MogriYuerTahn ./!
Sc k iu ch - Nhm 2 TT DL chiu T3 Trang
23
WanthHn5+
> <anthone' $(c phWn lKp t0 2arcinia c(3a H^i Yuy tr\nh g4m c&c H$c phWn lKp chJ yu cJa
fL5 d7ch chit methanol cJa v $(c phWn lKp th"nh t phWn oBn H^i fL tr9n 'ilicagel
( t/g!6 r)a gi2i th$:ng <uy9n vi he<ane6 h1n h(p he<anerHenene v" *ichloromethane5 &c
<anthone' c= th, thu $(c HQng c&ch kt tinh tr]c tip t0 c&c phWn oBn hay t0 'c k lp mng
ly tWm li9n t+c5 oanol cho th-y hoBt tAnh kh&ng khu[n trung H\nh vi Staphylococcu' areu'
( ca Pattalung et al5 .k!
T*idHid+
fi_c &p *+ng fL , phWn lKp c&c iri*oi* kh&c nhau U $(c H&o c&o H^i Tan*ieva et al5( ..
a6H!5 fi m+c Ach n"y6 c2 nh;m trung tAnh s/ ( >rk/ m6 Ferck .//!6 Silicagel 'c k lp
mng s/T ( .> m6 Ferck ..s>!6 hoPc lori'il ( ./rsp m6 Ferck .?>. ! v" pheu lGc
zuchner vi $:ng kAnh kh&c nhau ( tRy theo kAch th$c m8u! U $(c ') *+ng5 F#t 'L Hin Zi
nh v ph$%ng ph&p cJa oll v" zo*en ( .ts! U $(c th]c hi_n6 un n=ng ch-t h-p th+ v"
') *+ng m#t lp nZi HQng nh]a H9n tr9n phan h1 tr(5
fA *+`
rF8u l" *7ch chit *ichloromethane t0 re kh; cJa ,%n)ra)hu& ru/%r5
rSo '&nh giOa fL v" 'c k lp mng ch h=a cho vi_c phWn lKp valepotriate' t0 4a-%riana
('icina-i& cho th-y nhOng thuKn l(i cJa fL` th:i gian phWn tAch ngn h%n s lan6 At h%n s lan
*ung m;i6 ch-t h-p th+ c= th, t&i ') *+ng sr lan6 h%n nOa fL thu $(c valepotriate At H7 Hin
ch-t h%n 'o vi 'c k c#t m^5
rSecoiri*oi* gluco'i*e' gentiopicro'i*e v" 'ertiamarin thu $(c ^ *Bng tinh khit t0 re t$%i
cJa entiana punctata 'au khi *Rng fL5
cgo"i ra vi_c phWn lKp iri*oi* glyco'i*e' HQng fL Hao g4m c&c H&o c&o H^i zoro' at al5
( ./6..!6 kunyili et al5 ( ..! v" u'tice et al5 ( .?!5 Trong m#t Sng *+ng $(c H&o c&o
H^i zoro' et al5( ./!6 minirfL tr9n pipet Pa'teur c= 'vn $(c *Rng , phWn lKp 'L l$(ng
nh nguy9n li_u
XlaMHnHid glycH+id5+
Trong vi_c phWn lKp m#t Nlavonol glyco'i*e mi ( kaempNerolrpr(?6pr*iaceto<yrkrprcoumaroyl!
rhamno'i*e! t0 l& cJa 5$rica ga-%6 H$c tinh khit h=a Han au l" fL tr9n polyami*erTL s
( Fachereyrcagel!6 r)a gi2i vi >/ ml6 $c 'L cJa methanolrn$c vi # phWn c]c tnng *an
( methanolrn$c .`.Fethanol .//l! ( arton et al5 ./!
Sc5tyl5nic SlcHhHl+
fL tr9n pha khung cyano ( k/ m! $(c ') *+ng , phWn lKp acetylenic alcohol' gWy #c t
H"o t0 HGt Hi,n ,ri/r(cha-ina 1a&cu-um ( Tallock et al5.>!5 hit <u-t HGt Hi,n th; $(c r)a
gi2i trong fL vi gra*ient cJa )rHutyl methyl etherrhe<ane'` TPL pha 2o th\ can thit cho
giai oBn phWn lKp cuLi cJa c&c alcohol' chu1i *"i5
YHlyac5tyl5n5+
F#t polyacetyllene #c t H"o6 (r!r.rhy*ro<yr6..6.p6.>rocta*ecatetraynoic aic* $(c phWn
lKp t0 5in6uar)ia guian%n&i&6 m#t cWy t0 cua*or5 f thWn cWy $(c chit <u-t vi c&c *ung
m;i c= # phWn c]c tnng *an v" *7ch chit chloroNorm $(c cho l" c= hoBt tAnh chLng lBi t H&o
ung th$ m&u lympho Prptt ^ chu#t5 d7ch chit n"y tr$c ti9n $(c 'c k vi 'c k c#t m^ v"
phWn oBn hoBt tAnh l" m8u cho fL tr9n m#tt c#t tk/ cm cJa 'ilicagel /r?p/ me'h5 Sau khi
r)a gi2i vi chloroNormr ethylacetater methanol ( .t`.`.! v" cuLi cRng kt tinh thu $(c
polyacetylene c= hoBt tAnh5
)aZalactHn5+
d7ch chit cJa l& ,r$*)(car$a kur7ii ( Lauraceae! vi ethanol thu $(c cPn6 cPn n"y #c vi t
H"o oz5 T1n h(p c= hoBt tAnh n"y6 m#t lacton loBi kaa mi6 kurilactone6 thu $(c HQng c&ch
Sc k iu ch - Nhm 2 TT DL chiu T3 Trang
24
kt h(p fL6 'c k lp mng ch h=a6 TPL pha 2o5 Silicagel s/T ( /r?p/ me'h! $(c ')
*+ng cho fL6 vi *ichloromethanermethanol ( .//`/6 `.6 `?6 .`.6 `.! nh$ l" ch-t r)a
gi2i5 ( u et al5 .p!
III. HPLC IU CH
1. Nguyn tc, yu cu:
S$ t&ch cac chWt Hnng ph$%ng phap 'nc ky *]a tr9n trBng th&i cWn HQng giOa c&c th"nh phan6 m#t
chWt hWp phu trong c#t (pha tinh! v" m#t *ung m;i ch2y Yua n= (pha ;ng!5ohi m#t thanh phWn
li9n k9t v%i pha tinh6 hi9n t$%ng nay $%c 7nh nghEa la '$ h-p ph+6 khi thanh phWn nay Hi tach
ra nh% pha ;ng6 hi9n t$%ng nay $(c 7nh nghEa l" phan hWp phu5 oh2 nnng h-p ph+ cao gi$a
cac thanh phWn nghi9n c$u v%i pha tinh nghEa l" '$ l$u giO c&c th"nh phan n"y tr9n c;t cao v"
*o o thanh phWn o 'e $%c r$a giai ra khoi c;t tr9 h%n thanh phWn khac5 fi_c t&ch ri9ng cac
chWt t$ m;t h1n h(p th"nh ch3 c= th, ti9n hanh m;i chWt co kha nnng hWp phu va phan hWp phu
khac nhau ;i v%i pha tinh va pha ;ng5
4[ \ m hi\nh +]^c ,y^ lH_ng ch^ hH^a
TPL i9u ch9 la m;t ph$%ng phap hi9u Yua va ang $%c '$ *ung rWt ph; Hi9n 9 tach cac
chWt cWn nghi9n c$u ra khoi . h;n h%p honc 9 tinh ch9 cac chWt5
C3c y"u tG +au Ey hPi /0c chA - `c biOt:
r Linh hoBt trong vi_c chGn c#t5 SL l$(ng ch-t va c&c y9u cau t&ch anh h$%ng kh&c nhau 9n cac
v-n cWn gi2i Yuyt5 u%n gi2n v" phu h%p vi kinh t cua m;t vWn 9 phWn tich c+ th, *o o co
th9 giai Yuy9t $%c5
r Ti9u 'uWt H%m cao h%n5 dung tich c;t l%n y9u cWu th9 tich *ong l%n h%n6 *o o t;c ; *ong
cung cWn phai l%n h%n5
r p 'uWt l%n h%n5 ohuynh h$%ng cua 'nc ky i9u ch9 ro rang la h$%ng v9 ch-t h-p ph+ *Bng hBt
m7n6 i9u nay *Wn 9n m;t khang l$c *ong ang chu y
Sc k iu ch - Nhm 2 TT DL chiu T3 Trang
25
zinh ch$a *ung m;i z%m *ung m;i
zinh ch$a mWu zm mWu
falve Hm
mu
;t sc ky ch hoa
detector
z; x ly
d li u
falve Hm
phn oan
zinh hng cac
phn oa n
2. u- nhc im, kh nng v mc ng dng:
oAch th$c ti,u phWn c"ng nh hi_u Yu2 Yu& tr\nh t&ch chit c"ng cao5 Tuy nhi9n kAch th$c ti,u
phWn c"ng nh th\ &p 'u-t ph2n h4i trong c#t nh4i c"ng cao6 iu = gii hBn kAch th$c th]c t
ti,u phWn6 tRy thu#c v"o kh2 nnng ch7u &p cJa thit H75 c=i chung6 a 'L thit H7 ch7u $(c &p
'u-t ph2n h4i gWy ra H^i ti,u phWn kAch th$c >xm ^ tLc # *Dng tLi $u5
i& th"nh cao5
Trong phWn t&ch iu ch6 pha tEnh th$:ng c= th, h4i ph+c v" t&i ') *+ng , tinh ch cRng hoBt
ch-t5 dung m;i chBy 'c kA mi l" phan tLn kXm v" kh2 nnng t&i ') *+ng *ung m;i U *Rng l"
Yuan trGng trong l]a chGn *ung m;i5 cu trong Yu& tr\nh chBy ta *Rng nhiu *ung m;i6 vA *+ .
*ung m;i , ti9m m8u v" . *ung m;i kh&c , r)a gi2i6 th\ n9n gom ri9ng c&c *ung m;i , ti_n
cho vi_c t&i ch5 . v"i h1n h(p *ung m;i he<anemethylrtertrHutyl ether6 he<aneether6 v" h1n
h(p p th"nh phan kh;ng th, ph+c h4i nh$ *ung m;i tinh khit5
Trong ky thuWt TPL i9u ch96 cWn '$ *ung c;t co kich th$%c l%n5 c9u Han kinh c;t tnng6 tr$
phi '$ *ung ky thuWt nh;i nc Hi9t6 '$ nh;i hat trong c;t 'e tr% n9n kh;ng hi9u Yua va '$ nh;i
hat t$ no cung kh;ng ;n inh5 cgoai ra6 9 *uy tri t;c ; t;i $u cho pha ;ng6 l$u l$%ng pha
;ng cWn phai tnng l9n va '$ ti9u thu pha ;ng 'e rWt t;n kem5 cg$%c lai6 n9u tnng chi9u *ai c;t6
thi khang l$c *ong chay 'e l%n h%n *Wn 9n ap 'uWt cao trong c;t5 c9u '$ *ung c;t co Han kinh
l%n6 'au o nh% '$c manh c% khi cua h9 th;ng c;t 'e han ch9 ap 'uWt t;i a trong c;t5 do o6 khi
keo *ai c;t 'nc ky thi Han kinh hat nh;i phai tnng l9n 9 cung cWp u tinh thWm5 Tnng $%ng
kinh hat 'e lam giam hi9u Yua cua c;t6 *o o 'e lam giam ; phWn giai cua cac chWt cWn nghi9n
c$u5 ThWt vWy6 vi9c tinh toan cho m;t ky thuWt 'nc ky i9u ch9 rWt ph$c tap6 phai ki9m 'oat nhi9u
y9u t; t$%ng tac6 va vi vWy6 cac th;ng '; t;i $u cWn cho vi9c phWn tach rWt kho <ac inh5 u9 hi9u
$%c cac y9u t; cWn thi9t cua 'nc ky i9u ch9 cWn phai <ac inh c;ng 'uWt tai cua c;t5
3. Pha tnh, cch chun b[ ct:
LA thuyt cJa van deemter cho rQng tAnh ch-t Yuan trGng nh-t cJa pha tEnh l" '] *e *"ng cJa ']
chuy,n khLi Yua c&c l1 cJa ti,u phWn5
&c ti,u phWn 'ilica th\ *e Bt # 4ng u v kAch th$c l1 v" # 4ng nh-t cJa c&c ti,u phWn
h%n c&c ti,u phWn polymer5 uiu n"y kh;ng c= nghEa l" polymeric' kXm h%n6 ng$(c lBi nhOng
pha tEnh n"y c= kAch cq ti,u phWn 4ng u h%n5 z^i v\ '] kh&c Hi_t giOa pha tEnh 'ilica v"
polymer At r r"ng khi 'o '&nh chVng ^ *Bng c#t nh4i 'vn ($(c nh4i ^ &p 'u-t cao h%n c#t d
*8n ti '] Hin *Bng cJa c&c ti,u phWn polymerr iu n"y l"m gi2m c&c khe hq tBo c&c ti,u
phWn nh h%n!
ihP 7nh nghEa pha thuKn nh$ l" . tin tr\nh r)a gi2i trong = pha tEnh th\ phWn c]c h%n pha
#ng5 trong th]c t6 pha tEnh th$:ng *Rng cho TPL iu ch *]a tr9n 'ilica v" tAnh phWn c]c
cJa 'ilyl ether ^ *$i v" 'ilanol cung c-p H mPt thWn n$c5 Li9n kt amino v" cyano vi 'ilica
cmng phZ Hin trong pha thuKn mPc *R li9n kt vi cyano c= v"i tAnh ch-t cJa pha 2o5 % ch
chim $u th l" li9n kt Ty*ro5 Tuy nhi9n nh=m 'ilanol c= tAnh aci* nh}6 v\ th H mPt 'ilica
cmng c= kh2 nnng trao Zi cation5
Pha thuKn th$:ng *Rng , tinh ch nhOng phWn t) hOu c% nh6 v\ th kE thuKt n"y th$:ng
*Rng trong *$(c ph[m v" n;ng *$(c5S] ph&t tri,n t0 'c kA c#t nhanh ti TPL iu ch *e
*"ng hi,u $(c Li vi nhOng nh" h=a hGc hOu c% truyn thLng v" n= *8n ti '] ch-p nhKn kE
thuKt n"y vi nhiu ng ti9n phong v" '] t&ch chit ch-t t0 th]c vKt5 . '] chuy,n tip 4ng th:i
t0 nhOng ti,u phWn v; 7nh h\nh irregular ti nhOng ti,u phWn pha tEnh c= *Bng h\nh cau chc
chn (iu ch HQng c&ch phun *ung *7ch 'ilicate trung tAnh th"nh nhOng giGt nh trong . lu4ng
khA n=ng6 hay phWn t&n *ung *7ch 'ilica th"nh *Bng nhm t$%ng trong . *ung m;i hOu c% thAch
h(p6 tBi = nhOng giGt gel h\nh cau h\nh th"nh5 Tuy nhi9n chi tit vi_c '2n <u-t $(c gi-u kAn
Lrp! cmng $(c thVc [y H^i nhu cau tnng *an5 ch$ U n=i tr$c6 ti,u phWn 'ilica v; 7nh
h\nh th$:ng *e H7 St gUy v" tBo th"nh H+i m7n5
Sc k iu ch - Nhm 2 TT DL chiu T3 Trang
26
Pha tEnh Hao phJ H^i c&c nh=m jT thit k cho 'c kA loBi cq nh$ orHa< ?>/ v" PLr
aYuagel cmng t$%ng t] pha thuKn6 thuKn l(i cJa chVng ^ ch1 tnng # Zn 7nh ^ pT cao5
l]a chGn pha tEnh trong Yua tr\nh nWng c-p Yui m; (t0 'c kA phWn tAch!
. ti9u chu[n Yuan trGng khi ph&t tri,n ph$%ng ph&p Han au l" pha tEnh 'c kA *Rng trong Yui
tr\nh nWng c-p ph2i c= H&n 'vn ^ c2 *Bng c#t phWn tAch (?>/mm < kmm! v" *Bng th; ^ l$(ng
ln5 c=i chung6 vKt li_u nh4i th$:ng *Rng cho c#t iu ch c= kAch cq t0 ./r?/ mcm5
3.1. No0maljphase silica gels:
oroma'il6 ./ xm *p ith s/ or .// pore *iameter
oroma'il6 .s xm *p ith .// pore *iameter
hiralcel S6 ?/ xm *p
hiralcel jd6 ?/ xm *p
3.2. IeKe0sedjphase silica gels:
oroma'il t
F .t
Typerprep t
FPc *R hau nh$ tkl pha tEnh *ung trong TPL iu ch l" 'ilica pha 2o5 Tuy vKy6 pha thuKn
c= nhOng l(i i,m ri9ng`
c= th, chuy,n Zi tr]c tip t0 TL pha thuKn hoPc TPL 'ang L ch h=a5
gi& th"nh cJa vKt li_u nh4i pha 2o cao v" v"i vKt li_u nh4i kh;ng c= *Bng th; (, nh4i thJ
c;ng!
l"m 'Bch 'ilica pha thuKn th\ *e h%n v\ pha thuKn Hn vOng h%n nhiu5
loBi H *ung m;i th$:ng *Rng trong 'c kA pha thuKn khi *7ch '2n ph[m cu4i *e *"ng h%n
loBi H n$c khi . phWn oBn cJa 'c kA pha 2o6 c= th, th]c hi_n ^ nhi_t # th-p v" cho ch-t
l$(ng '2n ph[m cao h%n v" At tLn nnng l$(ng h%n5
4. Cch nhi ct:
d (*ynamic a<ial compre''ion 'y'temr nXn theo tr+c th@ng! ph&t minh H^i ouillar*`
ra*ial compre''ion 'y'temr ph&t tri,n H^i ater'6 v" th$%ng mBi h=a H^i ziotage`
dRng cartri*ge HQng polymer *Co nh4i vi pha tEnh5 artri*ge $(c Pt trong . <yrlanh
(cyclin*er! v" $(c &p cho . &p 'u-t ngo"i5
annular e<pan'ion`
dRng . Yue c= au h\nh n9m nXn pha tEnh trong c#t (tBo ra c2 '] nXn tr+c v" nXn ki,u ta trDnr
ra*ial!
&ch nh4i c#t ph+ thu#c v"o thit k cJa c#t5 oi,u c#t ngn vi phan c#t m^ r#ng c= th, th&o r:i
v" J , chSa h1n h(p ch-t nh4i(h\nh k5p!b c#t *"i6 J ln , chSa h1n h(p chWt nh4i pha tEnh
(h\nh k5k!
Sc k iu ch - Nhm 2 TT DL chiu T3 Trang
27
4.1. C4t !iSu 4.3:
TAnh tZng th, tAch cJa c#t c#ng vi Lng chSa(re'ervoir! , <&c 7nh th, tAch h1n h(p nh4i 5
FKt # nh4i cJa pha tEnh polymer th$:ng l" /5pg|cmp6 cJa pha tEnh 'ilica th$:ng l" /5sg|cmp5
Th9m l$(ng thAch h(p pha tEnh v"o . H\nh ]ng v" pha loUng vi *ung m;i U chGn , $(c th,
tAch 5 ohu-y tr#n HQng tay hay m&y6 khi Bt $(c h1n h(p 4ng nh-t6 ng0ng khu-y v" , h1n
h(p Yua 9m , loBi khA trong pha tEnh5
Lp c#t6 phan Lng chSab gn H%m hVt chWn kh;ng v" 4 hSng *ung m;i v"o &y c#t5 oh;ng hVt
chWn kh;ng ^ giai oBn n"y5 PhWn t&n lBi h1n h(p6 'au = Z li9n t+c h1n h(p v"o c#t5 an Z
nhanh , tr&nh h1n h(p lng tr^ lBib '] ng0ng . v"i giWy cmng c= th, *8n n nSt c#t l"m gi2m
hi_u l]c t&ch5 TVt chWn kh;ng6 rVt *ung m;i cho ti khi cDn . lp *ung m;i kho2ng v"i mm tr9n
Sc k iu ch - Nhm 2 TT DL chiu T3 Trang
2
mPt c#t5 Th&o Lng hVt chWn kh;ng v" HAt &y c#t (en* Nitting! lBi5 Th&o Lng chSa v" gn np tr9n
(column top en*rNitting!5 n . $:ng *8n *ung m;i th2i v"o *$i c#t (&y c#t v8n $(c H7t
kAn!5 cXn c#t cho ti khi &p 'u-t nXn ti &p 'u-t cho H^i nh" '2n <u-t (s/r.// Har!5 #t lVc n"y
U 'vn '"ng cho nBp *ung m;i5
4.2. C4t !iSu hah 4.4:
hu[n H7 h1n h(p nh4i c#t nh$ tr9n5 z7t &y c#t v" nBp c#t nhu tr9n5 Sau = gn pi'ton l9n tr9n
c#t6 H\nh chSa *ung m;i6 nXn6 m^ &y c#t cho *ung m;i i ra5
4.3. Chu3 *+ m^uj R.a m^u l( c4t:
u$a m8u v"o ` H$c n"y kh& phSc tBp v\ &p 'u-t au v"o r-t cao5
Th:i gian l$u cJa m8u (retention time!` L" kho2ng th:i gian t0 lVc $a m8u v"o n khi 3nh
(peak! cJa hi,n th7 r nXt5 oho2ng th:i gian n"y H7 chi phLi H^i c&c yu tL `
p 'u-t au v"o
TAnh ch-t cJa pha tEnh (h(p ch-t6 kAch th$c hBt!
Th"nh phan *ung m;i
chi_t # c#t5
overloa* trong 'c kA` khi l$(ng m8u nBp Yu& ln v" iu = l"m gi2m hi_u nnng cJa c#t6 c= ?
loBi` nBp v$(t Yu& th, tAch (volume overloa*! v" nBp v$(t Yu& khLi| n4ng # (ma'' overloa*!b c=
th, *o mPc 7nh hoPc c= chJ trong 'c kA iu ch5
volume overloa* *8n ti m^ r#ng peak6 nh$ng '] m^ r#ng n"y Li <Sng v\ th h\nh *Bng peak
^ tr$c v" 'au kh;ng H7 mXo| Hin *Bng5 Trong 'c kA ch h=a th, tAch m8u c= th, tnng cho ti
khi ? peak cJa ? ch-t $(c r)a gi2i gan nhau nh-t chBm nhau6 v" th, tAch m8u lVc n"y l" tLi $u5
Trong 'c kA phWn tAch th\ kh;ng ch-p nhKn chuy_n n"y6 kh;ng *Rng H-t cS c&ch nBp m8u
overloa* n"o6 ngoBi tr0 trong nhOng tr$:ng h(p kh2 *E c= th, l"m tnng kh2 nnng phWn tAch ch-t
*Bng vt5
ma'' overloa* th\ chc chn l"m cho peak H7 Hin *Bngb mSc n4ng # ch-t can t&ch trong pha
tEnh 'I ^ trong vRng kh;ng tuyn tAnh cJa $:ng @ng nhi_t h-p ph+5 cu $:ng @ng nhi_t h-p
ph+ lm v phAa tr+c Hi,u th7 n4ng # trong pha #ng th\ ^ n4ng # cao cJa ch-t tan h_ 'L phWn
HL hi_u *+ng 'I th-p h%n5 f\ vKy phan c= n4ng # ch-t tan cao h%n 'I *i chuy,n trong c#t nhanh
h%n phan c= n4ng # th-p6 v" peak 'I H7 mXo vi phAa tr$c nhGn v" u;i H7 nghi9ng| tho2i5
Th:i gian l$u n=i chung 'I gi2m5 Tuy nhi9n nu $:ng @ng nhi_t lm v phAa tr+c Hi,u *ien
n4ng # trong pha tEnh th\ ^ n4ng # cao cJa ch-t tan6 h_ 'L phWn HL hi_u *+ng 'I ln h%n5 f" v\
th phan c= n4ng # cao h%n 'I *i chuy,n chKm h%n phan c= n4ng # th-p trong c#t6 peak 'I H7
mXo vi phAa tr$c nghi9ng v" u;i nhGnb trong tr$:ng h(p n"y th:i gian l$u n=i chung 'I gi2m
khi khLi m8u tnng5
4.4. $Oi pha 21o ;IeKe0se %hase h%GC kasics Jo0 GClmS=
F8u kh;ng n9n hDa tan trong . *ung m;i hOu c% nu kh;ng n= c= th, kh;ng gn l9n pha tEnh
$(c5 F8u cmng kh;ng n9n tan trong *ung *7ch chSa ch-t t[y6 m#t v"i ch-t t[y c= th, gn l9n
c#t pha 2o v" l"m thay Zi tAnh ch-t c#t kh;ng thuKn ngh7ch5 T%n nOa ch-t t[y $(c ion h=a $u
ti9n khi H7 t&c #ng cJa *Dng electron trong au *D khLi phZ6 l"m gi2m kh2 nnng ph&t hi_n hay
Sc ch '] ion h=a ch-t phWn tAch5
)im +H3t nhiOt ;:
oh;ng . nghi9n cSu n"o v 'c kA gGi l" ho"n ch3nh nu thiu phan nghi9n cSu v nhi_t #5
chi_t # <ung Yuanh 2nh h$^ng th:i gian l$u5 chi_t # chBy th$:ng l" k/5 u, Zn 7nh nhi_t
# cho c#t6 ta c= th, *Rng acket (&o giO nhi_t!6 Hu4ng Zn nhi_t655
= th, *Rng nhi_t # , t&c #ng ti Yu& tr\nh chit t&ch5 c=i chung nhi_t # cao h%n th\ tLt h%n6
peak 'I nhGn h%n v" r)a gi2i 'm h%n5 Tuy vKy nhi_t # cao l"m gi2m tuZi thG c#t v" nhiu c#t
kh;ng ch7u $(c nhi_t # Yu& s/5
Sc k iu ch - Nhm 2 TT DL chiu T3 Trang
2!
5. La chn dung mi- Thay i dung mi:
Pha thuKn th$:ng $(c chBy vi *ung m;i hOu c%6 th$:ng l" he<ane6 heptane6 cyclohe<ane hay
halocarHon nh$ dF6 loroNorm5 Pha #ng r)a gi2i th$:ng l" . *ung m;i thWn n$c6 nh$ n$c6
e'ter5 ci* hOu c% th$:ng th9m v"o , gi2m thi,u hi_u Sng trao Zi ion *o nhOng nh=m 'ilanol5
M)a gi2i @ng *Dng vi h1n h(p Hutanol6 aci* acetiic v" n$c l" giao thSc chu[n cho '] t&ch gi2i
c&c aci* amin v" . h1n h(p methanol6 cloroNorm6 n$c hOu *+ng cho h(p ch-t hOu c% n=i
chung5 Pepti*e *e *"ng $(c tinh ch HQng r)a gi2i ki,u gra*ient tr9n 'ilica pha thuKn6 tnng *an
t0 acetonitrile ti pha #ng c= n$c5 oE thuKt n"y Pc Hi_t hi_u Yu2 vi nhOng pepti*e r-t phWn
c]c kh= phWn lKp tr9n 'c kA pha 2o5
Pha 2o hoBt #ng trong m;i tr$:ng _m thWn n$c6 n%i h-p ph+ k7 n$c giOa ch-t phWn tAch v"
pha tEnh H7 <&o tr#n Hi '] tnng *an n4ng # . *ung m;i hOu c% c= th, ha l8n5 ng *+ng phZ
Hin cJa TPL pha 2o l" trong tinh ch pepti*e' v" protein6 trong = ch-t phWn tAch th$:ng
$(c gi2 h-p H^i '] r)a gi2i gra*ient5 u_m chBy thWn n$c phZ Hin nh-t th$:ng l" n$c chSa
h"m l$(ng th-p cJa a<it triNluoroacetic (th$:ng l" /6.l v | v! v" c&c pha #ng r)a gi2i th$:ng l"
acetonitriler ch-t iu ch3nh # phWn c]cr chSa a<At triNluoroacetic5
&c triNluoroacetic a<it ph+c v+ hai m+c Ach` tr$c ht6 n= tBo m#t cPp ion mBnh vi ch-t phWn
tAch6 nh$ vKy chLng lBi vi_c trao Zi cation vi H-t k~ nh=m 'ilanol t] *o n"o tr9n gi& mang
'ilicab v" thS nh\6 vi vai trD c&c cPp ion6 n= l"m gi2m '] thay ;i c-u trVc protein v" pepti*e v"
*o = c2i thi_n h\nh *Bng peak5 L(i i,m cJa a<it triNluoroacetic ^ ch1 n= kh;ng h-p thu hfr kE
thuKt chAnh trong ph&t hi_n pepti*e v" nhiu phWn t) kh&c5 &c _m aci* kh&c nh$ pho'phate6
acetate an* hy*rochlori*e cmng th$:ng $(c *Rng5 thanol6 methanol6 tetrahy*roNuran6 pror
pionitrile v" propanr?rol cmng th$:ng $(c *Rng vi vai trD ch-t iu ch3nh # phWn c]c6 nh$ng
chVng kh;ng tLt HQng acetonitrile5
Silica pha 2o kh;ng Zn 7nh trong m;i tr$:ng kim *o '] m-t c&c gLc ankyl v" '] hDa tan cJa
'ilica khi hoBt #ng lWu ^ pT cao5 fi pha tEnh polymer l1 ln Zn 7nh ^ pT cao (macroporou'
polymeric 'tationary pha'e'! c= th, m^ r#ng kho2ng pT hoBt #ng cJa pha 2o trong kho2ng .r
.k5 Pha 2o polymer th$:ng *Rng nh-t l" loBi polymer trRng h(p t0 'tyrene v" *ivinyl Henene5
TAnh k7 n$c cJa pha tEnh n"y l" *o mBch polymer *"i v" vDng Henene6 v\ th Yu& tr\nh r)a gi2i
*] o&n 'I kh&c vi pha tEnh 'ilica .t ch@ng hBn5 Th]c t6 tr9n *O li_u r)a gi2i nhiu ch-t6
tr\nh t] r)a gi2i v" th:i gian r)a gi2i Yuan '&t $(c tr9n pha tEnh polymer ch-t l$(ng cao th$:ng
t$%ng t] kt Yu2 thu $(c t0 pha tEnh 'ilica ch-t l$(ng cao5
6. Phong phap phat hin va thu nhn kt qua sc ky:
a;t +G b; hbn h3t hiOn:
-LC Detectors Based on e!ractive "nde#
$eas%rement
The MeNractive in*e< detector
The ngle oN deviation Fetho*
The re'nel Fetho*
The hri'tian'en NNect detector
The interNerometer detector
The Thermal Len' detector
The dielectric on'tant detector
-&he '( Detectors
Sc k iu ch - Nhm 2 TT DL chiu T3 Trang
3"
The hf H'orption detector'
The i<e* avelength hf detector
The Fultiavelength hf detector
The Fultiavelength di'per'ive hf detector
The dio*e rray detector
The luore'cence detector
The Single avelength <citation luore'cence detector
The Fulti avelength luore'cence detector
-&rans)ort Detectors
The Foving ire detector
The hain detector
The Fo*iNie* Foving ire detector
The di'c detector
rThe vaporative Light Scattering detector
-Li*%id Li+ht Scatterin+ Detectors
The Lo ngle La'er Light Scattering detector
The Fultiple ngle La'er Light Scattering (FLLS! detector
rThe lectrical on*uctivity detector
-&he ,-ectrochemica- Detector
lectro*e onNiguration'
lectro*e on'truction
za'ic lectrochemical detector lectronic'
The Fultilectro*e rray detector
7. Ca c ng dung cu th :
Tinh ch9 ta<ol Hnng 'nc ky long i9u ch9 '$ *ung trong c;ng nghi9p` m;t ph$%ng phap a $%c
nghi9n c$u phat tri9n 9 tinh ch9 ta<ol t$ *ich chi9t cloroNorm th; cua cWy Ta<u' yunnanen'i' '$
*ung 'nc ky long i9u ch9 c;ng nghi9p (iPL! *$a tr9n pha tinh polymer (d>s re'in!5 S$ *ung
h9 th;ng thi9t Hi %n ('ingler'y'tem apparatu'!6 khoang > kg *ich chi9t th; co th9 $%c tai Yua
c;t Wu ti9n6 va cu;i cung6 Yua p lWn chay 'nc ky6 khoang >/g ta<ol (l tinh khi9t! co th9 thu
$%c 'au .>>h6 ko t;n HWt ky *ung m;i h$u c% nao5 S$ thu h;i ta<ol at tr9n t/l5 ch$a d>s
a cho thWy tinh chon loc va kha nnng tach ta<ol cao h%n 'o v%i 'ilicagel va material'5 f%i h9
th;ng nay6 vi9c ap *ung chi9t ta<ol trong c;ng nghi9p co th9 th$c hi9n $%c5 (ournal oN
hromatography 6 t.p (.t! ?/.?/k PuriNication oN ta<ol Hy in*u'trial preparative liYui*
chromatography6 ueNeng ang6 oailu Liu6 Fan ie6 zeiing Me'earch in'titute oN hemical
ngineering an* Fetallurgy6 P5j5 zo< ?pk6 zeiing ./..k6 hina6 .t!
ng *+ng 'c k lng iu ch <&c 7nh
polyphenol t0 l& chy <anh thS ph[m5 TS5 PhRng
Lan T$%ng
IV. SC K PHN B NGQC
DNG
1. Nguyn tc ca phong php:[7]
L" . ph$%ng ph&p ') *+ng ch-t lng ho"n to"n6
kh;ng c= '] tham gia cJa gi& mang pha'e rn *]a
Sc k iu ch - Nhm 2 TT DL chiu T3 Trang
31
v"o '] phWn HL cJa m8u giOa ? ch-t lng kh;ng h1n hDa , c= th, tin h"nh t&ch5 T_ 'L phWn HL
giVp <&c 7nh t3 l_ cJa m8u giOa ? pha'e5
#t g4m m#t Lng h\nh <on Lc HQng TeNlon $(c #n v"o pha tEnh lng6 Pha #ng 'I $(c
cho ch2y Yua t0 t0 Yua6 v" thay th *an pha tEnh5 u, tr&nh hi_n t$(ng pha #ng ch2y Yua v" ch3
%n thuan [y to"n H# pha tEnh ra ngo"i6 ng$:i ta th9m t&c #ng trGng tr$:ng HQng c&ch *Rng
l]c ly tWm6 l]c n"y c= th, thay Zi $(c H^i chuy,n #ng Yuay trDn cJa hai tr+c5s
2. u nhc im ca phong php:[9]
u im:
So vi ph$%ng ph&p phWn tAch rn lng truyn thLng th\ c= nhiu $u i,m nZi tr#i`
c= '] h-p ph+ 2o ng$(c
h4i ph+c ho"n to"n $(c m8u H%m
At kXo v_t nh-t trong 'c k 4
At rJi ro nh-t v kh2 nnng m8u H7 ph& hJy
tit ki_m *ung m;i v" r-t kinh t ( kh;ng can c#t t tin6 *ung m;i th;ng th$:ng!
Trong TPL pha tEnh chim ?l th, tAch6 trong khi = trong con 'L n"y l" t/l
= th, n#i chuy,n Zi giOa pha'e #ng v" pha'e tEnh
. '] thay th tuy_t v:i cho nhOng Yuy tr\nh gPp ph2i '] h-p ph+ pha'e rn
Nh/0c im:
SL Ea l thuyt At h%n TPL5
Th:i gian 'c k kXo *"i v" ph2i giO nhi_t # cL 7nh trong 'uLt Yu& tr\nh5
3. Pha tnh:
ellulo'e` t&ch nhOng ch-t phWn c]c m" kh;ng t&ch $(c HQng c% ch h-p ph+5 -u tBo l" m#t
poly'accchari* ^ *Bng polymer (
s
T
./
j
>
!
n
5
uLi vi 'c k c#t6 *Rng *Bng cellulo'e vi tinh th, $(c l"m [m vi m#t l$(ng pha tEnh v0a J6
ho" v"o pha #ng tBo th"nh h1n *7ch5
Polyami*` l" ch-t phWn HL h%n l" ch-t h-p ph+6 c% ch phWn HL l" nh c&c <oang r1ng cJa
polyami*5 Polyami* th;ng *+ng l" loBi polyami* s (polycaprolactam! v" polyami* ..
(polyun*ecanami*!5
Silica gel ghXp` l" 'ilica gel (SirjT! ghXp vi mBch hy*rocarHon kXm phWn c]c (Silica gel pha
2o!6 hoPc ghXp vi mBch phWn c]c (Silica gel pha thuKn!
4. Dung mi:
do '] 'c k tu~ thu#c v"o kh2 nnng ho" tan cJa ch-t phWn tAch trong pha #ng v" pha tEnh n9n
*ung m;i l" yu tL Yuan trGng Yuyt 7nh , cho m#t H2ng 'c k tLt5
F8u phWn tAch th$:ng l" c&c ch-t phWn c]c n9n *Rng m;i cmng mang tAnh phWn c]c5 fi_c chGn
*ung m;i n9n tham kh2o c&c t"i li_u nghi9n cSu tr$c =5 z2ng c&c h_ *ung m;i t$%ng Sng vi
t0ng loBi h(p ch-t t] nhi9n c= th, tham kh2o tBi t"i li_u t
T_ *ung m;i ? pha tLt can 2m H2o y9u cau`
u2m H"o pha tEnh c= &i l]c thAch h(p nh-t6 th:i gian Zn 7nh cJa h_ *ung m;i n9n *$i p/'5
T_ 'L phWn HL cJa ch-t phWn tAch n9n trong kho2ng /6>o?6/6 v" h_ 'L phWn HL giOa ? th"nh
phan n9n ln h%n .6>5
u, tnng kh2 nnng t&ch6 ta c= th, thay Zi pT5
Sc k iu ch - Nhm 2 TT DL chiu T3 Trang
32
5. Cch pht hin:
mng nh$ k thuKt 'c k c#t th;ng th$:ng6 ta 'I thu nhOng phWn oBn ch-t ch2y ra6 nhOng ch-t
c= # tan c"ng nhiu trong pha #ng th\ 'I ra tr$c5 T0 nhOng phWn oBn thu $(c6 ta tin h"nh
nhOng ph$%ng ph&p chuy9n Hi_t , 7nh tAnh cmng nh$ 7nh l$(ng ch-t phWn tAch5
Sc k iu ch - Nhm 2 TT DL chiu T3 Trang
33
V. MPLC IU CH
1. Tng quan:
FPL l" Huc chu[n H7 cho TPL5 FPL vi &p 'u-t v" t3 'u-t *Dng ch2y cao h%n6 cho phXp
') *+ng c#t .t vi kAch thuc hBt gi2m , cho kt Yu2 gan vi h_ thLng chu[n H7 TPL5
2. So snh u nhc im gia MPLC v HPLC
2.1. ChuyS 2ni dug mi:
TPL` ch3 *Rng u(c c-u h\nh , chBy 'c k pha 2o v" pha thu:ng
FPL` c= tAnh linh hoBt v" *e chuy,n Zi h_ thLng *ung m;i giOa pha 2o v" pha th$:ng
2.2. C4t ]p m^u 0@
FPL` cho phXp ') *+ng nhiu k{ thuKt nBp m8u5 ThuKn l(i chAnh cJa FPL v c% ch ti9m
m8u l" '] ph+c h4i m8u cao5 T(p ch-t u(c *e *"ng chuy,n l9n c#t trong 'uLt th:i gian nBp
m8u5
= nhiu thuKn l(i v ti9m m8u lng5 c= giVp ') *+ng tLt nh-t kh2 nnng t] #ng cJa h_ thLng5
cg$:i ') *+ng ch3 can -n nVt Start v" i l"m vi_c kh&c5
T_ thLng cWn HQng c#t6 nBp c#t6 t&i cWn HQng c#t m" kh;ng can can thi_p kh&c5
cgo"i ra FPL cho phXp h(p ch[t tan gii hBn trong trong pha #ng6 c= th, nBp *e *"ng m"
kh;ng can ti9m m#t lu(ng *ung m;i mBnh6 c= th, gWy gi2m hi_u 'u-t c#t5
T_ thLng TPL y9u cau h(p ch-t tan ho"n to"n6 *o = can m#t lu(ng *ung m;i mBnh gWy gi2m
kh2 nnng gn Han au v"o c#t
= nhiu chGn l]a ch-t h-p ph+`h(p ch-t nBp l9n c#t .t c= th, h-p ph+ l9n elite655 cgo"i ra
cDn c= th, nBp th@ng l9n c#t l"m 'vn5 fKt li_u u(c ho" tan trong *ung m;i mBnh v" khA 'I u(c
thZi Yua c#t , l"m uZi *ung m;i HQng h_ thLng chWn kh;ng5
cBp m8u lng` m8u u(c ti9m th@ng l9n c#t hoPc Yua val HQng m#t Lng ti9m5
T(p ch-t u(c t&ch tinh khit cao
LGc *ung m;i kh;ng can lGc hay kh) khA *ung m;i6 giVp tit ki_m th:i gian cho vi_c tinh khit5
uPc Hi_t H=ng khA kh;ng l"m m-t nguy9n tL cJa h_ thLng5
3. ng dng
Tinh khit h(p ch-t chSa >r>rHenylrcrrcrimr*irtrzocr
LrTi'. (h(p ch-t !6 ') *+ng c#t .t6 h_ *ung m;i >r>l c`T?j6 ^ H$c '=ng ?.knm
Sc k iu ch - Nhm 2 TT DL chiu T3 Trang
34
VI. TI LIEU THAM KHO:
.5 La/(ra)(r$ ,hr(ma)(gra*h$ 2ui8%6 ngelo Talamona6 z-chi LaHortechnik 5
?5 Li6ui8 ,hr(ma)(gra*h$ ,(-umn Th%(r$6 Maymon* P5 5 Scott6 ohn iley Son'5
p5 0r%*ara)i1% ,hr(ma)(gra*h$6 zook .? hromr* zook Serie'6 Maymon* P5 5 Scott
k5 9nc$c-(*%8ia (' chr(ma)(gra*h$ Thir8 98i)i(n6 ack ae'5
>5 0r%*ara)i1% chr(ma)(gra*h$ )%chni6u%& S%c(n8 %8i)i(n :+**-ica)i(n& in na)ura-
*r(8uc) i&(-a)i(n;6 o5To'tettmann6 5 Far'ton6 F5To'tettmann6 Springer5
s5 <(urna- (' ,hr(ma)(gra*h$ -i/rar$ 1(-um% 3 Li6ui8 c(-umn chr(ma)(gra*h$ a &ur1%$
(' m(8%rn )h%chni6u%& an8 a**-ica)i(n&= 5deyl6 o5Facek an* 5anak6 p5.sp
5 5%)h(8& in ,h%mica- 9c(-(g$ 1(-um% 16 ocelyn 5Fillar oenneth 5Tayne'6 p5t/
t5 5 Far'ton6 o5 To'tettmann6 <(urna- (' ,hr(ma)(gra*h$ +6 ...? (?//s! .t..k6
>%1i%3 D%1%-(*m%n)& in )h% a**-ica)i(n (' c(un)%r-curr%n) chr(ma)(gra*h$ )( *-an)
ana-$&i&
5 5P5 oucault6 L5 hevolot6 <(urna- (' ,hr(ma)(gra*h$ 6 t/t (.t! p??6 >%1i%3
,(un)%r-curr%n) chr(ma)(gra*h$? in&)rum%n)a)i(n= &(-1%n) &%-%c)i(n an8 &(m% r%c%n)
a**-ica)i(n& )( na)ura- *r(8uc) *uri'ica)i(n
./5 + 0rac)ica- @an8/((k (' 0r%*ara)i1% @0L,6 donal* 5 elling'5
..5 Th% >(-% (' )h% ,(-umn in 0r%*ara)i1% @0L,6 Monal* 5 Faor'6 gilent Technologie'6
ilmington6 delaare6 hS5
Sc k iu ch - Nhm 2 TT DL chiu T3 Trang
35
VII.MUC LUC
i5 S o LP Fc uih T5555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555.
.5 u nh$(c i,m cJa PTL`55555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555.
?5 ng *+ng`55555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555.
p5 Pha tEnh`5555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555.
k5 dung m;i`55555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555?
>5 hu[n H7 m8u 'c k`55555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555?
s5 &ch ph&t hi_n trong 'c k lp mng iu ch`55555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555p
ii5 S o T uih T555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555k
.5 T Tic TcT PTc TT S o5555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555k
?5 #t 'c k 5555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555>
p5 Pha tEnh555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555>
k5 o thuKt nh4i c#t 'c kA55555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555
>5 Pha #ng5555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555
s5 &ch ph&t hi_n trong 'c k c#t iu ch`55555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555.?
5 u7nh tAnh m#t c#t 'c k5555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555.?
t5 PhWn lKp kt Yu2 'c k`55555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555.>
5 Sc k c#t nhanh ( la'h hromatography!555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555.>
./5 S o T oT555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555?/
..5 S o Lc Tc oTc5555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555??
iii5 TPL uih T5555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555?>
.5 cguy9n tc6 y9u cau`5555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555?>
?5 ur nh$(c i,m6 kh2 nnng v" mSc # Sng *+ng`55555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555?s
p5 Pha tEnh6 c&ch chu[n H7 c#t` 55555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555?s
k5 &ch nh4i c#t`55555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555?
>5 L]a chGn *ung m;ir Thay Zi *ung m;i`55555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555p/
s5 Ph$%ng phap phat hi9n va thu nhWn k9t Yua 'nc ky`5555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555p/
5 ac $ng *ung cu th9`5555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555p.
if5 S o PTc z c dc555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555p.
.5 cguy9n tc cJa ph$%ng ph&p`555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555p.
?5 u nh$(c i,m cJa ph$%ng ph&p`55555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555p?
p5 Pha tEnh`55555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555p?
k5 dung m;i`555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555p?
>5 &ch ph&t hi_n`5555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555pp
f5 FPL uih T555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555pk
.5 TZng Yuan`5555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555pk
?5 So '&nh $u nh$(c i,m giOa FPL v" TPL55555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555pk
p5 ng *+ng5555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555pk
fi5 Ti Lih TTF oTj`55555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555p>
fii5 F L55555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555ps
.?5555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555
Sc k iu ch - Nhm 2 TT DL chiu T3 Trang
36