P l a n t P h y s i o l .

( 1 9 7 6 ) 5 7 , 486 -489
E f f e c t o f P o wde ry M i l de w I n f e c t i o n o n P h o t o s y n t h e s i s b y L e a v e s
a n d C h l o ro p l a s t s o f S u g a r B e e t s 1
R e c e i v e d f o r p u b l i c a t i o n O c t o b e r 2 1 , 1 9 7 5 a n d i n re v i s e d f o rm De c e m b e r 1 5 , 1 9 7 5
ANDR E W C . M AG Y AR O S Y , P E T E R S C H U R M ANN, 2 AND B O B B . B U C H ANAN
De p a rt m e n t o f C e l l P h y s i o l o g y , U n i v e rs i t y o f C a l i f o rn i a , B e rk e l e y , C a l i f o rn i a 9 47 2 0
AB S T R AC T
C h l o ro p l a s t s i s o l a t e d f ro m p o wde ry m i l de w-i n f e c t e d ( E , y s i p h e p o l y -
g o n i DC ) s u g a r b e e t l e a v e s ( B e t a v u l g a ri s L ) s h o we d a re du c t i o n i n t h e
ra t e o f e l e c t ro n t ra n s p o rt a n d i n t h e a c c o m p a n y i n g AT P f o rm a t i o n i n
n o n c y c l i c p h o t o p h o s p h o ry l a t i o n ( wa t e r a s e l e c t ro n do n o r, NADP a s
e l e c t ro n a c c e p t o r) a n d l i t t l e o r n o c h a n g e i n t h e ra t e o f AT P f o rm a t i o n i n
c y di c p h o t o p h o s p h o ry l a t i o n c a t a l y z e d b y p h e n a z i n e m e t h o s u l f a t e . T h e
i n h i b i t i o n o f n o n c y c l i c p h o t o p h o s p h o ry l a t i o n a p p e a re d t o l e a d i n t h e
p a re n t l e a v e s t o a de c re a s e d ra t e o f p h o t o s y n t h e t i c C O 2 a s s i m i l a t i o n a n d
a s h i f t i n p ro du c t s re s u l t i n g i n a re l a t i v e i n c re a s e o f a m i n o a c i ds . T h e s e
c h a n g e s we re a c c o m p a n i e d b y a l t e ra t i o n s i n c h l o ro p l a s t u l t ra s t ru c t u re
a n d b y a re du c t i o n i n t h e a c t i v i t y o f e n z y m e s n e c e s s a y f o r t h e f o rm a t i o n
o f o rg a n i c a dds ( p h o s p h o e n o l p y ru v a t e c a rb o x y l a s e a n d m a l a t e de h y dro -
g e n a s e ) . T h e s e re s u l t s a re s i m i l a r t o t h e f i n di n g s o f M o n t a l b i n i a n d
B u c h a n a n ( 1 9 7 4 P h y s i o l . P l a n t P a t h o l . 4: 1 9 1 -1 9 6 ) wi t h c h i o ro p l a s t s
f ro m ru s t -i n f e c t e d V i c i a f a b a l e a v e s .
Al t h o u g h t h e e f f e c t s o f c e rt a i n e t i o l o g i c a l a g e n t s o n t h e p h y s i -
o l o g i c a l p ro c e s s e s o f h o s t p l a n t s h a v e b e e n s t u di e d e x t e n s i v e l y ,
i n v e s t i g a t i o n s wi t h o b l i g a t e p a ra s i t e s , a n i m p o rt a n t g ro u p o f
p l a n t p a t h o g e n s , a re s c a n t y a n d i n p a rt c o n t ra di c t o ry . Wh i l e i t i s
g e n e ra l l y a g re e d t h a t o b l i g a t e p a ra s i t e i n f e c t i o n s c o n s i s t e n t l y
i n c re a s e t h e ra t e o f re s p i ra t i o n ( 2 3 , 2 7 ) , c o n f l i c t i n g re p o rt s
i n di c a t e t h a t s u c h i n f e c t i o n s c a n e i t h e r de c re a s e ( 1 , 2 , 9 , 1 5 -1 7 ,
2 1 , 2 2 ) o r i n c re a s e ( 1 , 9 , 2 6 ) t h e ra t e o f p h o t o s y n t h e s i s . L i t t l e i s
k n o wn a b o u t t h e e f f e c t o f o b l i g a t e p a ra s i t e s o n p h o t o s y n t h e s i s a t
t h e c h e m i c a l l e v e l .
I t h a s re c e n t l y b e e n o b s e rv e d t h a t i n f e c t i o n b y ru s t f u n g i
i n h i b i t s p h o t o c h e m i c a l re a c t i o n s o f c h l o ro p l a s t s ( 1 4) , p e rh a p s b y
e f f e c t i n g t h e p ro du c t i o n o f a s u b s t a n c e , f u n c t i o n a l l y s i m i l a r t o
DC M U , wh i c h p re f e re n t i a l l y i n h i b i t s e l e c t ro n t ra n s p o rt a n d
AT P f o rm a t i o n b y n o n c y c l i c p h o t o p h o s p h o ry l a t i o n b u t do e s n o t
a p p re c i a b l y a f f e c t AT P f o rm a t i o n b y c y c l i c p h o t o p h o s p h o ry l a -
t i o n . T h e s e f i n di n g s ra i s e t h e q u e s t i o n wh e t h e r t h e re i s a s i m i l a r
i n h i b i t i o n o f n o n c y c l i c p h o t o p h o s p h o ry l a t i o n b y a n o t h e r g ro u p
o f p a ra s i t e s , t h e p o wde ry m i l de w f u n g i , wh i c h c o u l d a c c o u n t f o r
t h e re du c e d c a p a c i t y o f di s e a s e d p l a n t s t o p ro du c e s u c ro s e ( 2 4) .
An a n s we r t o t h i s q u e s t i o n s e e m e d p a rt i c u l a rl y t i m e l y i n v i e w
o f t h e u n u s u a l l y h i g h i n c i de n c e o f p o wde ry m i l de w o n s u g a r
b e e t s du ri n g 1 9 7 4 a n d 1 9 7 5 t h ro u g h o u t t h e U n i t e d S t a t e s ,
p a rt i c u l a rl y i n C a l i f o rn i a ( 8, 1 8) . We , t h e re f o re , e x a m i n e d t h e
' T h i s i n v e s t i g a t i o n wa s s u p p o rt e d i n p a rt b y H a t c h a n d C a l i f o rn i a
S t a t e wi de C ri t i c a l Ap p l i e d R e s e a rc h F u n ds .
2 0n l e a v e f ro m t h e L a b o ra t o i re de P h y s i o l o g i e v e g e t a l e e t B i o c h i m i e ,
U n i v e rs i t e de Ne u c h a t e l , S wi t z e rl a n d.
e f f e c t o f p o wde ry m i l de w i n f e c t i o n o n c e rt a i n a s p e c t s o f p h o t o -
s y n t h e s i s b y s u g a r b e e t s , a n d we n o w re p o rt e v i de n c e t h a t t h e
i n f e c t i o n p re f e re n t i a l l y i n h i b i t s e l e c t ro n t ra n s p o rt i n n o n c y c l i c
p h o t o p h o s p h o ry l a t i o n i n c h l o ro p l a s t s a n d i n s o do i n g c a u s e s a
de c re a s e i n t h e ra t e o f p h o t o s y n t h e t i c C O 2 a s s i m i l a t i o n a n d a
s h i f t i n p ro du c t s . Ac c o m p a n y i n g t h e s e c h a n g e s a re a l t e ra t i o n s i n
c h l o ro p l a s t u l t ra s t ru c t u re a n d a re du c e d a c t i v i t y o f c e rt a i n e n -
z y m e s . P re l i m i n a ry a c c o u n t s o f t h i s i n v e s t i g a t i o n h a v e b e e n
p u b l i s h e d ( 1 1 , 1 2 ) .
M AT E R I AL S AND M E T H O DS
G ro wt h C o n di t i o n s a n d I n o c u l a t i o n o f P l a n t s wi t h P a t h o g e n .
P l a n t s ( B e t a v u l g a ri s L . U . S . H 1 O ) we re g ro wn i n s o i l u n de r
n o rm a l g re e n h o u s e c o n di t i o n s . T h e c o n i di a l s t a g e o f E ry s i p h e
p o l y g o n i DC wa s c o l l e c t e d a t t h e we s t s i de o f t h e S a n J o a q u i n
V a l l e y , C a l i f o rn i a , a n d m a i n t a i n e d o n s u g a r b e e t s . L e a v e s o f 3 0-
da y -o l d s u g a r b e e t p l a n t s we re du s t e d wi t h c o n i di a o f t h e p a t h o -
g e n , k e p t i n a s e a l e d m e t a l re f u s e c a n f o r 2 da y s , a n d t h e n p l a c e d
u n de r n o rm a l g re e n h o u s e c o n di t i o n s . L e a v e s s h o wi n g a h e a v y
u n i f o rm i n f e c t i o n , i n di c a t e d b y p ro f u s e p o wde ry c o n i di a o f t h e
f u n g u s , we re h a rv e s t e d a b o u t 3 0 da y s a f t e r i n o c u l a t i o n a n d u s e d
i n a l l e x p e ri m e n t s u n l e s s o t h e rwi s e s t a t e d. L e a v e s o f y o u n g e r
i n f e c t e d p l a n t s s h o we d o n l y p a t c h y g ro wt h o f t h e f u n g u s a n d
t h e re f o re we re n o t s a t i s f a c t o ry f o r t h i s i n v e s t i g a t i o n , wh i c h re -
q u i re d u n i f o rm l y i n f e c t e d m a t e ri a l f o r c e l l -f re e p re p a ra t i o n s .
U n i n o c u l a t e d 6 0-da y -o l d p l a n t s we re u s e d f o r c o n t ro l m e a s u re -
m e n t s .
C O 2 F i x a t i o n b y L e a f Di s c s . P h o t o s y n t h e t i c ' 4C O 2 a s s i m i l a t i o n
wa s c a rri e d o u t i n Wa rb u rg v e s s e l s c o n t a i n i n g du p l i c a t e l e a f
di s c s . T h e re a c t i o n wa s s t o p p e d b y p l a c i n g t h e l e a f di s c s f o r 2
m i n i n s e p a ra t e s c i n t i l l a t i o n v i a l s c o n t a i n i n g b o i l i n g m e t h a n o l .
O n e di s c wa s c o u n t e d t o de t e rm i n e t h e ra t e o f p h o t o s y n t h e s i s
( 1 0) , a n d t h e s e c o n d wa s u s e d f o r p ro du c t a n a l y s i s ( 1 9 , 2 0) . As
i n di c a t e d, a ddi t i o n a l p o i n t s we re t a k e n f o r ra t e de t e rm i n a t i o n s .
C y di c a n d No n c y c l i c P h o t o p h o s p h o ry l a t i o n b y I s o l a t e d C h l o -
ro p l a s t s . F i v e t o 6 g o f h e a l t h y o r i n f e c t e d l e a v e s we re de v e i n e d,
wa s h e d, a n d b l e n de d f o r a f e w s e c o n ds i n a m i c ro m o n e l c u p o f a
Wa ri n g B l e n do r c o n t a i n i n g 3 2 m l o f t h e f o l l o wi n g p re p a ra t i v e
s o l u t i o n : 0. 5 M Na C l , 0. 04 M T ri c i n e b u f f e r ( p H 8. 2 ) , a n d 0. 01 M
Na -a s c o rb a t e . T h e re s u l t i n g s l u rry wa s f i l t e re d t h ro u g h f o u r
l a y e rs o f f i l t e ri n g s i l k a n d c e n t ri f u g e d f o r 1 m i n a t 3 , 7 00g . T h e
c h l o ro p l a s t p e l l e t wa s re s u s p e n de d i n a s m a l l a m o u n t o f p re p a ra -
t i v e s o l u t i o n , a n d t h e C h l c o n t e n t wa s de t e rm i n e d a c c o rdi n g t o
Arn o n ( 3 ) .
C y c l i c a n d n o n c y c l i c p h o t o p h o s p h o ry l a t i o n we re c a rri e d o u t
u n de r a n i t ro g e n a t m o s p h e re i n Wa rb u rg v e s s e l s a s p re v i o u s l y
de s c ri b e d ( 1 0) . F o r c y c l i c p h o t o p h o s p h o ry l a t i o n , t h e re a c t i o n
m i x t u re ( i n a Wa rb u rg v e s s e l ) c o n t a i n e d ( M ) : T ri c i n e b u f f e r ( p H
8. 2 ) , 0. 1 ; M g C l 2 , 0. 005 ; ADP , 0. 005 ; 3 2 P i , 0. 005 ; P M S , 5 x
1 0-5 ; a n d c h l o ro p l a s t s e q u i v a l e n t t o 0. 05 m g o f C h l . F i n a l v o l -
u m e wa s 1 m l ; l i g h t i n t e n s i t y , 2 0, 000 l u x ; g a s p h a s e , n i t ro g e n ;
486
P O WDE R Y M I L DE W AND P H O T O S Y NT H E S I S
t e m p e ra t u re , 2 0 C ; re a c t i o n t i m e , 5 m i n . No n c y c l i c p h o t o p h o s -
p h o ry l a t i o n wa s a l s o m e a s u re d i n s p e c t ro p h o t o m e t ri c c u v e t t e s ,
a n d t h e c o n c o m i t a n t c h a n g e s i n a b s o rb a n c e a t 3 40 n m we re
re c o rde d wi t h a m o di f i e d B e c k m a n DU m o n o c h ro m a t o r
e q u i p p e d wi t h a G i l f o rd 2 00 a b s o rb a n c e i n di c a t o r ( 1 3 ) .
AT 3 2 P f o rm a t i o n i n c y c l i c a n d n o n c y c l i c p h o t o p h o s p h o ry l a t i o n
wa s de t e rm i n e d a s p re v i o u s l y de s c ri b e d ( 1 0) . R a di o a c t i v i t y wa s
m e a s u re d wi t h a G e i g e r-M u l l e r c o u n t e r.
E n z y m e As s a y s . F o r a s s a y o f p h o s p h o e n o l p y ru v a t e c a rb o x y l -
a s e a n d m a l a t e de h y dro g e n a s e , 2 g o f l e a v e s we re g ro u n d a t 5 C
wi t h s a n d i n a m o rt a r c o n t a i n i n g 7 m l o f a b u f f e r s o l u t i o n o f 40
m M T ri c i n e ( p H 8. 2 ) a n d 5 m m Na -a s c o rb a t e . T h e s l u rry wa s
c e n t ri f u g e d a t 48, 000g f o r 1 5 m i n . P ro t e i n c o n c e n t ra t i o n o f t h e
s u p e rn a t a n t f ra c t i o n wa s m e a s u re d b y a m o di f i e d p h e n o l m e t h o d
( 1 0) a n d t h e n a dj u s t e d t o 4 m g / m l . F o r a s s a y o f m a l a t e de h y dro -
g e n a s e , t h e o x i da t i o n o f NADH i n t h e p re s e n c e o f o x a l o a c e t a t e
wa s m e a s u re d i n a C a ry M o de l 1 4 s p e c t ro p h o t o m e t e r. P E P 3
c a rb o x y l a s e wa s a s s a y e d s p e c t ro p h o t o m e t ri c a l l y b y m e a s u ri n g
t h e o x a l o a c e t a t e f o rm e d f ro m P E P a n d C O 2 i n t h e p re s e n c e o f
m a l a t e de h y dro g e n a s e a n d NADH ( 1 0) .
U l t ra s t ra c t u ra l C h a n g e s . L e a f t i s s u e s f o r e l e c t ro n m i c ro s c o p i c
e x a m i n a t i o n we re f i x e d i n 2 % g l u t a ra l de h y de , de h y dra t e d, a n d
s t a i n e d wi t h u ra n y l a c e t a t e ( 6 ) . L e a f s e c t i o n s we re e x a m i n e d i n a
S i e m e n s E l m i s k o p 1 01 e l e c t ro n m i c ro s c o p e .
R E S U L T S AND DI S C U S S I O N
E f f e c t o f P o wde ry M i l de w I n f e c t i o n o n C y di c a n d No n c y di c
P h o t o p h o s p h o ry l a t i o n . I n v i e w o f t h e e a rl i e r e v i de n c e t h a t o b l i -
g a t e p a ra s i t e s c a u s e a de c re a s e i n t h e ra t e o f e l e c t ro n t ra n s p o rt i n
n o n c y c l i c p h o t o p h o s p h o ry l a t i o n a n d h a v e l i t t l e e f f e c t o n c y c l i c
p h o t o p h o s p h o ry l a t i o n ( 1 4) , we e x a m i n e d a c t i v i t i e s o f t h e s e t wo
p ro c e s s e s i n s i x p re p a ra t i o n s o f c h l o ro p l a s t s i s o l a t e d f ro m
h e a l t h y a n d p o wde ry m i l de w-i n f e c t e d l e a v e s . T h e re s u l t s i n di -
c a t e t h a t AT P f o rm a t i o n b y P M S c a t a l y z e d c y c l i c p h o t o p h o s -
p h o ry l a t i o n wa s l i t t l e a f f e c t e d b y i n f e c t i o n ( 2 04 v e rs u s 1 9 8
, u m o l e s o f AT P f o rm e d/ m g o f C h l -h r f o r h e a l t h y a n d i n f e c t e d
c h l o ro p l a s t s , re s p e c t i v e l y ) , wh e re a s AT P f o rm a t i o n b y n o n c y c l i c
p h o t o p h o s p h o ry l a t i o n wi t h NADP a s a c c e p t o r wa s re du c e d ( T a -
b l e I ) . I n g e n e ra l , t h e re wa s a 2 0 t o 3 0% re du c t i o n o f AT P
f o rm a t i o n i n n o n c y c l i c p h o t o p h o s p h o ry l a t i o n i n c h l o ro p l a s t s
f ro m i n f e c t e d l e a v e s , a s c o m p a re d t o t h e i r h e a l t h y c o u n t e rp a rt s .
S u c h a re du c t i o n i n n o n c y c l i c p h o t o p h o s p h o ry l a t i o n c o u l d re s u l t
e i t h e r f ro m a s p e c i f i c u n c o u p l i n g o r f ro m a n i n h i b i t i o n o f e l e c -
t ro n t ra n s p o rt f ro m wa t e r t o NADP . O n t h e b a s i s o f t h e s t o i c h i -
o m e t ry o b s e rv e d ( ra t i o o f AT P f o rm e d p e r t wo e l e c t ro n s t ra n s -
f e rre d f ro m wa t e r t o NADP ) , t h e re wa s , a s s h o wn i n T a b l e I , n o
a p p re c i a b l e di f f e re n c e i n c o u p l i n g b e t we e n c h l o ro p l a s t s f ro m
h e a l t h y a n d i n f e c t e d l e a v e s . I t a p p e a rs l i k e l y t h a t p o wde ry m i l -
de w i n f e c t i o n re du c e d AT P f o rm a t i o n s e l e c t i v e l y b y i n h i b i t i n g
n o n c y c l i c e l e c t ro n f l o w ra t h e r t h a n b y s p e c i f i c a l l y u n c o u p l i n g
p h o t o p h o s p h o ry l a t i o n . S i m i l a r re s u l t s we re o b t a i n e d b y M o n t a l -
b i n i a n d B u c h a n a n ( 1 4) wi t h c h l o ro p l a s t s f ro m ru s t -i n f e c t e d
V i c i a f a b a l e a v e s .
C O 2 F i x a t i o n o f H e a l t h y a n d P o wde ry M i l de w-i n f e c t e d L e a f
Di s c s . I n v i e w o f t h e re du c e d c a p a c i t y o f c h l o ro p l a s t s f ro m
p o wde ry m i l de w-i n f e c t e d l e a v e s t o c a t a l y z e n o n c y c l i c p h o t o -
p h o s p h o ry l a t i o n , t h e q u e s t i o n a ri s e s wh e t h e r i n f e c t i o n a f f e c t s
p h o t o s y n t h e t i c " 4C O 2 a s s i m i l a t i o n -a p ro c e s s de p e n de n t o n t h e
p ro du c t s o f n o n c y c l i c p h o t o p h o s p h o ry l a t i o n , n a m e l y re du c e d
f e rre do x i n ( o r NADP H ) a n d AT P . As s h o wn i n F i g u re 1 , p o w-
de ry m i l de w m a rk e dl y de c re a s e d t h e ra t e o f " 4C O 2 a s s i m i l a t i o n
b y l e a f di s c s . B a s e d o n C h l c o n t e n t , t h e ra t e s o f f i x a t i o n b y
' Ab b re v i a t i o n s : P E P :
p h o s p h o e n o l p y ru v a t e ;
P M S :
p h e n a z i n e
m e t h o -
s u l f a t e ; 3 -P G A:
3 -p h o s p h o g l y c e ra t e .
T a b l e I . E f f e c t o f P o wde ry M i l de w I n f e c t i o n o n No n c y c l i c
P h o t o p h o s p h o ry l a t i o n b y I s o l a t e d S u g a r B e e t C h l o ro p l a s t s
T h e re a c t i o n m i x t u re ( i n a c u v e t t e o f 2 -m m l i g h t p a t h ) c o n t a i n e d ( M ) :
T ri c i n e b u f f e r ( p H 8. 2 ) , 0. 1 ; M g C l 2 , 0. 005 ; ADP , 0. 005 ; P i , 0. 005 ;
NADP , 0. 005 ; s p i n a c h f e rre do x i n , 1 x 1 O -5 ; a n d c h l o ro p l a s t s e q u i v a l e n t
t o 0. 05 m g o f C h l . F i n a l v o l u m e , 1 m l ; l i g h t i n t e n s i t y ( re d l i g h t , A > 6 00
n m ) , 2 . 4 x 1 04 e rg s / c m 2 * s e c ; g a s p h a s e , n i t ro g e n ; t e m p e ra t u re , 2 0 C .
S o u rc e o f C h l o ro p l a s t s AT P F o rm e d NADP H , F o rm e d R a t i o P . 2 e -
( wm o l e s l m g C h i l h r)
H e a l t h y l e a v e s 1 09 1 2 1 0. 9 0
I n f e c t e d l e a v e s 80 6 4 1 . 2 5
q b
t 3
! z t
m i n u t e s
F I G . 1 . E f f e c t o f p o wde ry m i l de w i n f e c t i o n o n t h e ra t e o f p h o t o s y n -
t h e t i c 1 4C O 2 a s s i m i l a t i o n b y l e a f di s c s . Du p l i c a t e di s c s we re f l o a t e d
s t o m a t a s i de u p i n a Wa rb u rg v e s s e l c o n t a i n i n g 1 . 5 m l o f H 2 0. T h e s i de -
a rm c o n t a i n e d 0. 1 m l o f Na H C O 3 s o l u t i o n ( 1 0 , u m o l e s ; 5 x 1 06 c p m /
M m o l e ) . Af t e r 5 -m i n
p re i l l u m i n a t i o n , g a s e o u s C O 2
wa s l i b e ra t e d
b y
i n j e c t i n g 0. 2 m l o f 9 N H 2 S O 4 i n t o t h e s i de -a rm . L i g h t i n t e n s i t y , 2 0, 000
l u x ; t e m p e ra t u re , 2 0 C .
u n i n f e c t e d l e a f di s c s we re a s h i g h a s 1 5 3 L m o l e s o f C O 2 f i x e d/
m g C h l -h r, wh e re a s t h o s e o f i n f e c t e d l e a f di s c s we re c o n s i s t e n t l y
a b o u t h a l f o f t h a t v a l u e . I t i s n o t e wo rt h y t h a t re p e a t e d a n a l y s e s
o f h e a l t h y a n d i n f e c t e d l e a f di s c s re v e a l e d t h e a b s e n c e , o n a n
a re a b a s i s , o f a s i g n i f i c a n t di f f e re n c e i n C h l c o n t e n t .
P ro du c t s o f C O 2 As s i m i l a t i o n . An i n di c a t i o n t h a t t h e re du c -
t i o n i n t h e ra t e o f " 4C O 2 a s s i m i l a t i o n i n du c e d b y t h e p a t h o g e n
wa s du e t o a re du c e d c a p a c i t y f o r n o n c y c l i c p h o t o p h o s p h o ry l a -
t i o n c a m e f ro m p ro du c t a n a l y s e s t h a t re v e a l e d a s t ri k i n g di f f e r-
e n c e b e t we e n h e a l t h y a n d i n f e c t e d l e a v e s . C o m p a re d wi t h t h e i r
h e a l t h y c o u n t e rp a rt s , a f t e r 5 -m i n p h o t o s y n t h e s i s , i n f e c t e d l e a v e s
s h o we d i n c re a s e d a m o u n t s o f " 4C O 2 f i x e d i n t o a m i n o a c i ds a n d
de c re a s e d a m o u n t s o f " 4C O 2 f i x e d i n t o 3 -P G A, s u c ro s e , a n d
o t h e r s u g a rs ( T a b l e I I ) . T h e re we re re s p e c t i v e i n c re a s e s o f 6 -f o l d
a n d 3 -f o l d i n t h e l a b e l i n g o f a l a n i n e a n d g l u t a m a t e + a s p a rt a t e ,
c o m p a re d t o de c re a s e s o f 5 0% a n d 2 5 % i n 3 -P G A a n d s u c ro s e .
A s i m i l a r s h i f t t o a m i n o a c i ds wa s re p o rt e d f o r s q u a s h l e a v e s
i n f e c t e d wi t h s q u a s h m o s a i c v i ru s ( 1 0) a n d i n C h i n e s e c a b b a g e
l e a v e s i n f e c t e d wi t h t u rn i p y e l l o w m o s a i c v i ru s ( 4) . I n t h e c a s e o f
s q u a s h , a c h a n g e i n p h o t o p h o s p h o ry l a t i o n di d n o t a p p e a r t o b e
i n v o l v e d.
T h e re wa s a s l i g h t re du c t i o n i n o rg a n i c a c i ds f o rm e d b y di s -
e a s e d l e a v e s ( T a b l e I I ) . S u c h a re du c t i o n m a y b e du e t o
t h e re du c e d a c t i v i t y o f P E P c a rb o x y l a s e a n d m a l a t e de h y dro g e n -
P l a n t
P h y s i o l .
V o l .
5 7 ,
1 9 7 6 487
M AG Y AR O S Y , S C H U R M ANN, AND B U C H ANAN
a s e t h a t wa s o b s e rv e d i n t h i s i n v e s t i g a t i o n i n c e l l -f re e e x t ra c t s
f ro m p o wde ry m i l de w-i n f e c t e d l e a v e s . M a l a t e de h y dro g e n a s e
a n d P E P c a rb o x y l a s e a c t i v i t i e s i n l e a f e x t ra c t s we re 3 7 % a n d
5 0%, re s p e c t i v e l y , o f t h e a c t i v i t i e s i n e x t ra c t s f ro m h e a l t h y
l e a v e s . T h e re du c t i o n o f e n z y m e a c t i v i t y i n e x t ra c t s f ro m p o w-
de ry m i l de w-i n f e c t e d l e a v e s i s t o b e c o m p a re d wi t h a p re v i o u s
re p o rt o f a n i n c re a s e i n a c t i v i t y o f P E P c a rb o x y l a s e i n e x t ra c t s
f ro m ru s t -i n f e c t e d l e a v e s ( 2 5 ) .
C h a n g e s i n U l t ra s t ru c t u re o f C h l o ro p l a s t s f ro m P o wde ry M i l -
de w-i n f e c t e d S u g a r B e e t L e a v e s . B e c a u s e c h a n g e i n c h l o ro p l a s t
u l t ra s t ru c t u re c o u l d a c c o m p a n y a c h a n g e i n c h l o ro p l a s t a c t i v i t y
i n di s e a s e d l e a v e s , we e x a m i n e d b y e l e c t ro n m i c ro s c o p y t h e
c h l o ro p l a s t s o f p o wde ry m i l de w-i n f e c t e d s u g a r b e e t l e a v e s . T h i s
e x a m i n a t i o n re v e a l e d t h a t , a l t h o u g h t h e i n n e r a n d o u t e r c h l o ro -
p l a s t m e m b ra n e s a p p e a re d t o b e u n a f f e c t e d, i n f e c t i o n b y t h e
p a ra s i t e c a u s e d a m a rk e d c h a n g e i n t h e m o rp h o l o g i c a l o rg a n i z a -
T a b l e I I . E f f e c t o f P o wde ry M i l de w I n f e c t i o n o n P h o t o s y n t h e t i c
P ro du c t s F o rm e d b y S u g a r B e e t L e a f Di s c s
P ro du c t s we re a n a l y z e d a f t e r 5 -m i n p h o t o s y n t h e s i s u n de r c o n di t i o n s
i n F i g . 1 b y t h e t h i n l a y e r e l e c t ro p h o re s i s -c h ro m a t o g ra p h y t e c h n i q u e
u s e d e a rl i e r f o r a l g a l c e l l s a n d s p i n a c h c h l o ro p l a s t s ( 1 9 , 2 0) . T o t a l c p m
f o r t h e h e a l t h y a n d i n f e c t e d s a m p l e s we re 2 5 8, 5 00 a n d 2 6 7 , 1 00, re s p e c -
t i v e l y . C o u n t s we re de t e rm i n e d i n a s c i n t i l l a t i o n c o u n t e r.
1 4
o f T o t a l
C O ,
F i x e d
P ro du c t H e a l t h y l e a v e s I n f e c t e d l e a v e s
1 . 3 -P h o s p h o g l y c e ri c a c i d 1 8 9
2 . S u g a r m o n o - a n d di -p h o s p h a t e s 2 2 2 3
3 . P h o s p h o e n o l p y ru v a t e , p y ru v a t e 2 1
4. O rg a n i c a c i ds * 7 5
S . Al a n i n e 4 2 5
6 . As p a rt a t e , g l u t a m a t e 2 S
7 . S u c ro s e 2 9 2 2
8. O t h e r n e u t ra l c o m p o u n ds 1 6 1 0
*
I n c l u de s m a l a t e , g l y c e ra t e , a n d t h re e u n i de n t i f i e d o rg a n i c a c i ds .
H e a l t h y
F I G . 2 . E l e c t ro n m i c ro g ra p h s o f h e a l t h y
f e c t e d s u g a r b e e t l e a v e s .
I n f e c t e d
a n d p o wde ry m i l de w-i n -
t i o n o f t h e s t ro m a a n d g ra n a re g i o n s o f c h l o ro p l a s t s ( F i g . 2 ) . T h e
s t a c k i n g o f t h y l a k o i ds wa s di s t u rb e d, s t a rc h g ra n u l e s di d n o t
a p p e a r t o b e f o rm e d i n t h e s t ro m a , a n d l a rg e o s m i o p h i l i c g l o b -
u l e s ( " l i p i d m a t e ri a l " ) we re a b u n da n t . I t i s n o t p o s s i b l e a t
p re s e n t t o re l a t e t h e s e s t ru c t u ra l a b e rra t i o n s t o t h e o b s e rv e d
i n h i b i t i o n o f n o n c y c l i c p h o t o p h o s p h o ry l a t i o n o r t o o t h e r b i o -
c h e m i c a l c h a n g e s i n du c e d b y i n f e c t i o n . I t m a y b e n o t e d t h a t a
s i m i l a r di s t u rb a n c e i n t h y l a k o i d s t a c k i n g wa s o b s e rv e d wi t h ru s t -
i n f e c t e d l e a v e s ( 5 , 7 ) .
C O NC L U S I O NS
T h e p re s e n t re s u l t s p ro v i de e v i de n c e t h a t p o wde ry m i l de w ( o n
s u g a r b e e t s ) re s e m b l e s ru s t ( o n V i c i a f a b a ) i n e f f e c t i n g a p re f e r-
e n t i a l i n h i b i t i o n o f n o n c y c l i c p h o t o p h o s p h o ry l a t i o n b y c h l o ro -
p l a s t s o f h o s t l e a v e s . T h e i n h i b i t i o n i n b o t h c a s e s s t e m s f ro m a
di m i n u t i o n i n e l e c t ro n f l o w f ro m wa t e r t o NADP a n d, i n t h e c a s e
o f p o wde ry m i l de w, l e a ds t o a n i n h i b i t i o n o f p h o t o s y n t h e t i c C O 2
a s s i m i l a t i o n a n d a s h i f t i n p ro du c t s t h a t c a n a c c o u n t f o r t h e
re p o rt e d re du c e d c a p a b i l i t y o f i n f e c t e d p l a n t s t o f o rm s u c ro s e .
T h e s e c h a n g e s a re a c c o m p a n i e d b y a b e rra t i o n s i n c h l o ro p l a s t
u l t ra s t ru c t u re a n d b y a de c re a s e i n t h e a c t i v i t y o f e n z y m e s
l e a di n g t o t h e p ro du c t i o n o f o rg a n i c a c i ds . I t i s p o s s i b l e t h a t t h e
i n h i b i t o ry e f f e c t o n n o n c y c l i c p h o t o p h o s p h o ry l a t i o n b y p o wde ry
m i l de w-i n f e c t e d c h l o ro p l a s t s , a s wa s e a rl i e r p ro p o s e d f o r ru s t
i n f e c t i o n , i s t h e re s u l t o f t h e p ro du c t i o n o f a s u b s t a n c e t h a t i s
f u n c t i o n a l l y s i m i l a r t o t h e h e rb i c i de DC M U .
Ac k n o wl e dg m e n t s -T h e a u t h o rs g ra t e f u l l y a c k n o wl e dg e t h e a s s i s t a n c e o f V . B re a z e a l e i n t h e
p re p a ra t i o n o f t h i n s e c t i o n s f o r e l e c t ro n m i c ro s c o p y a n d t h e v a l u a b l e a dv i c e o f K . E s a u o f t h e
U n i v e rs i t y o f C a l i f o rn i a , S a n t a B a rb a ra , c o n c e rn i n g t h e p re p a ra t i o n o f e l e c t ro n m i c ro g ra p h s . T h e
a dv i c e a n d g u i da n c e o f J . E . Du f f u s o f t h e U n i t e d S t a t e s Ag ri c u l t u ra l R e s e a rc h S t a t i o n , S a l i n a s ,
C a l i f . , t h ro u g h o u t t h i s i n v e s t i g a t i o n i s g re a t l y a p p re c i a t e d.
L I T E R AT U R E C I T E D
1 . AL L E N, P . J . 1 9 42 . C h a n g e s i n t h e m e t a b o l i s m o f wh e a t l e a v e s i n du c e d b y i n f e c t i o n wi t h
p o wde ry m i l de w. Am . J . B o t . 2 9 : 42 5 -43 5 .
2 . AL L E N, P . J . 1 9 5 4. P h y s i o l o g i c a l a s p e c t s o f f u n g u s di s e a s e s o f p l a n t s . An n u . R e v . P l a n t
P h y s i o l . 5 : 2 2 5 -2 48.
3 . AR NO N, D. I . 1 9 49 . C o p p e r e n z y m e s i n i s o l a t e d c h l o ro p l a s t s . P o l y p h e n o l o x i da s e i n B e t a
v u l g a ri s . P l a n t P h y s i o l . 2 4: 1 -1 5 .
4. B E DB R O O K , J . R . AND R . E . F . M At T H E WS . 1 9 7 2 . C h a n g e s i n t h e p ro p o rt i o n s o f e a rl y p ro du c t s
o f p h o t o s y n t h e t i c c a rb o n a s s i m i l a t i o n i n du c e d b y T Y M V i n f e c t i o n . V i ro l o g y 48: 2 5 5 -2 5 8.
5 . C O F F E Y , M . D. , B . A. P AL E V I T Z , AND P . J . AL L E N. 1 9 7 2 . U l t ra s t ru c t u ra l c h a n g e s i n ru s t -
i n f e c t e d t i s s u e s o f f l a x a n d s u n f l o we r. C a n . J . B o t . 5 0: 1 485 -1 49 2 .
6 . E s Au , K . 1 9 7 2 . C y t o l o g y o f s i e v e e l e m e n t s i n m i n o r v e i n s o f s u g a r b e e t l e a v e s . Ne w P h y t o l .
7 1 : 1 6 1 -1 6 8.
7 . H E AT H , M . C . 1 9 7 4. C h l o ro p l a s t u l t ra s t ru c t u re a n d e t h y l e n e p ro du c t i o n o f s e n e s c i n g a n d
ru s t -i n f e c t e d c o wp e a l e a v e s . C a n . J . B o t . 5 2 : 2 5 9 1 -2 5 9 7 .
8. K O NT AX I S , D. G . , H . M E I S T E R , AND R . K . S H AR M A. 1 9 7 4. P o wde ry m i l de w e p i p h y t o t i c o n
s u g a r b e e t s . P l a n t Di s . R e p . 5 8: 9 04-9 05 .
9 . L I V I NE , A. 1 9 6 4. P h o t o s y n t h e s i s i n h e a l t h y a n d ru s t a f f e c t e d p l a n t s . P l a n t P h y s i o l . 3 9 : 6 1 4-
6 2 1 .
1 0. M AG Y AR O S Y , A. C . , B . B . B U C H ANAN, AND P . S C H O R M ANN. 1 9 7 3 . E f f e c t o f a s y s t e m i c v i ru s
i n f e c t i o n o n c h l o ro p l a s t f u n c t i o n a n d s t ru c t u re . V i ro l o g y 5 5 : 42 6 -43 8.
1 1 . M AG Y AR O S Y , A. C . , P . S C H U R M ANN, P . M O NT AL B I NI , AND B . B . B U C H ANAN. 1 9 7 5 . E f f e c t o f
i n f e c t i o n b y o b l i g a t e p a ra s i t e s o n p h o t o s y n t h e s i s . S y m p o s i u m o n C u rre n t T o p i c s i n P l a n t
P a t h o l o g y ( a b s t r. ) , B u da p e s t . p . 2 5 .
1 2 . M AG Y AR O S Y , A. C . , P . S C H O R M ANN, B . B . B U C H ANAN, AND J . E . DU F F U S . 1 9 7 5 . E f f e c t o f
p o wde ry m i l de w i n f e c t i o n o n p h o t o s y n t h e s i s b y s u g a r b e e t s . Am . P h y t o p a t h o l . S o c . , V o l . 2
( a b s t r. ) . I n p re s s .
1 3 . M C S WAI N, B . D. AND D. 1 . AR NO N. 1 9 6 8. E n h a n c e m e n t e f f e c t s a n d t h e i de n t i t y o f t h e t wo
p h o t o c h e m i c a l re a c t i o n s o f p h o t o s y n t h e s i s . P ro c . Na t . Ac a d. S c i . U . S . A. 6 1 : 9 89 -9 9 6 .
1 4. M O NT AL B I NI , P . AND B . B . B U C H ANAN. 1 9 7 4. E f f e c t o f a ru s t i n f e c t i o n o n p h o t o p h o s p h o ry l a -
t i o n b y i s o l a t e d c h l o ro p l a s t s . P h y s i o l . P l a n t P a t h o l . 4: 1 9 1 -1 9 6 .
1 5 . M O NT E M AR T I NI , L . 1 9 04. No t e di f i s i o p a t h o l o g i a v e g e t a l e . Ah i I n s t i t u t o B o t a n i c o U n i v e rs i t a
di P a v i a , S e ri e s I . 9 : 3 9 -9 7 .
1 6 . R AG G I , V . 1 9 6 6 . F o t o s i m t e s i e re s p i ra z i o n e i n f o g l i e di f a v a i n di v e rs a p o s i z i o n e ri s p e t t o
a l l e
i n f e t t e ( R u g g i n e ) . An n . F a c . Ag ra r. , P e ru g i a 2 1 : 3 -1 1 .
1 7 . R AG G I , V . 1 9 6 6 . I n f l u e n z a de l l a l u c e s u l l e a l t e ra z i o n i p ro do t t e da U rm o y c e s p h a s e o l i ( P e rs ) .
Wi n t . S u f a g i o l o p ri n c i p a l m e n t e a c a ri c o de g l i a m m i n o a c i di . R i v . P a t o l . V e g . , S e ri e s I V . 2 :
2 6 3 -3 02 .
1 8. R U P P E L , E . G . , F . J . H I L L S , AND D. L . M U M F O R D. 1 9 7 5 . E p i de m i o l o g i c a l
o b s e rv a t i o n s o n t h e
s u g a rb e e t p o wde ry m i l de w e p i p h y t o t i c i n we s t e rn U S A i n 1 9 7 4. P l a n t Di s . R e p .
5 9 : 2 83 -
2 86 .
1 9 . S C H U R M ANN, P . 1 9 6 9 . S e p a ra t i o n o f p h o s p h a t e e s t e rs a n d a l g a l e x t ra c t s b y t h i n -l a y e r
488 P l a n t
P h y s i o l .
V o l .
5 7 ,
1 9 7 6
i F
. : - . , . ,
A%1 9 -" '
. . .
l r: . -- A
, l .
. , -:
-. , . -Wr-
P O WDE R Y M I L DE W AND P H O T O S Y NT H E S I S
e l e c t ro p h o re s i s a n d c h ro m a t o g ra p h y . J . C h ro m a t o g . 3 9 : 5 07 -5 09 .
2 0. S C H U R M ANN, P . , B . B . B U C H ANAN, AND D. 1 . AR NO N. 1 9 7 2 . R o l e o f c y c l i c p h o t o p h o s p h o ry l a -
t i o n i n p h o t o s y n t h e t i c c a rb o n di o x i de a s s i m i l a t i o n b y i s o l a t e d c h l o ro p l a s t s . B i o c h i m .
B i o p h y s . Ac t a 2 6 7 : 1 1 1 -1 2 4.
2 1 . S c o rr, K . J . AND R . M . S M I L U E . 1 9 6 3 . P o s s i b l e re l a t i o n s h i p b e t we e n p h o t o s y n t h e s i s a n d t h e
ri s e i n re s p i ra t i o n i n di s e a s e d l e a v e s . Na t u re 1 9 7 : 1 3 1 9 -1 3 2 0.
2 2 . S E M P I O , C . 1 9 46 . M e t a b o l i s m e du " c o m p l e x e " f ro m e n t -E ry s i p h e g ra m i n L s . M o n i t e u r I n t e r-
n a t i o n a l de l a P ro t e c t i o n P l a n t e s de l ' I n s t i t u t i n t e rn a t i o n a l d' Ag ri c u l t u re , R o m e 2 0( 7 -8) :
5 3 -6 9 .
489
2 3 . S E M P I O , C . 1 9 5 9 . T h e h o s t i s s t a rv e d. I n : J . G . H o rs f a l l a n d A. E . Di m o n d, e ds . , P l a n t
P a t h o l o g y , An Adv a n c e d T re a t i s e , V o l . 1 , Ac a de m i c P re s s , Ne w Y o rk . p . 5 9 9 .
2 4. S K O Y E N, 1 . O . , R . T . L E WE L L E N, AND J . S . M c F AR L ANE . 1 9 7 5 . E f f e c t o f p o wde ry m i l de w o n
s u g a rb e e t p ro du c t i o n i n t h e S a l i n a s V a l l e y o f C a l i f o rn i a . P l a n t Di s . R e p . 5 9 : 5 06 -5 1 0.
2 5 . WAY G O O D, E . R . , L . Y . P AO , AND H . R . G O DAV AR I . 1 9 7 4. S t i m u l a t i o n o f
p h o s p h e n o l p y ru v a t e
c a rb o x y l a s e a c t i v i t y i n ru s t -i n f e c t e d wh e a t l e a v e s . E x p e ri e n t i a 1 5 : 9 86 -9 88.
2 6 . Y AR WO O D, C . E . 1 9 5 9 . E f f e c t o f ru s t i n f e c t i o n o n p h o t o s y n t h e s i s o f b e a n s . P ro c . 4t h I n t .
C o n g r. C ro p P ro t e c t i o n , H a m b u rg . p p . 85 -87 .
2 7 . Y AR WO O D, C . E . 1 9 6 7 . R e s p o n s e t o p a ra s i t e s . An n u . R e v . P l a n t P h y s i o l . 1 8: 41 9 -43 8.
P l a n t P h y s i o l . V o l . 5 7 , 1 9 7 6