P l a n t P h y s i o l .

( 1 9 8 1 ) 6 8 , 1 1 7 0 - 1 1 7 4
0 0 3 2 - 0 8 8 9 / 8 1 / 6 8 / 1 1 7 0 / 0 5 / $ 0 0 . 5 0 / 0
E f f e c t o f L i g h t Q u a l i t y o n S t o m a t a l O p e n i n g i n L e a v e s o f
X a n t h i u m s t r u m a r i u m L . '
R e c e i v e d f o r p u b l i c a t i o n F e b r u a r y 4 , 1 9 8 1 a n d i n r e v i s e d f o r m J u n e 9 , 1 9 8 1
THO MAS D . S HAR K E Y ' AND K L AUS R AS C HK E 3
MS U- D O E P l a n t R e s e a r c h L a b o r a t o r y , Mi c h i g a n S t a t e Un i v e r s i t y , E a s t L a n s i n g , Mi c h i g a n 4 8 8 2 4
ABS TR AC T
F l u x r e s p o n s e c u r v e s w e r e d e t e r m i n e d a t 1 6 w a v e l e n g t h s o f l i g h t f o r t h e
c o n d u c t a n c e f o r w a t e r v a p o r o f t h e l o w e r e p i d e r m i s o f d e t a c h e d l e a v e s o f
X a n t h i w m s t n a r i u m L . An a c t i o n s p e c t r u m o f s t o m a t a l o p e n i n g r e s u l t e d
i n w h i c h b l u e l i g h t ( w a v e l e n g t h s b e t w e e n 4 3 0 a n d 4 6 0 n a n o m e t e r s ) w a s
n e a r l y t e n t i m e s m o r e e f f e c t i v e t h a n r e d l i g h t ( w a v e l e n g t h s b e t w e e n 6 3 0
a n d 6 8 0 n a n o m e t e r s ) i n p r o d u c i n g a c o n d u c t a n c e o f 1 5 c e n t i m o l e s p e r
s q u a r e m e t e r p e r s e c o n d . S t o m a t a r e s p o n d e d o n l y s l i g h t l y t o g r e e n l i g h t .
An a c t i o n s p e c t r u m o f s t o m a t a l r e s p o n s e s t o r e d l i g h t c o r r e s p o n d e d t o t h a t
o f C O 2 a s s i m i l a t i o n ; t h e i n h i b i t o r s o f p h o t o s y n t h e t i c e l e c t r o n t r a n s p o r t ,
c y a n a z i n e ( 2 c h l o r o - 4 1 1 - c y a n o - l - m e t h y l e t h y l a m i n o l - 6 e t h y l a m i n o - s - t r i a -
z i n e ) a n d 3 - ( 3 , 4 - d i c h l o r o p h e n y l ) - 1 , 1 - d i m e t h y l u r e a , e l i m i n a t e d t h e r e s p o n s e
t o r e d l i g h t . Th i s i n d i c a t e s t h a t l i g h t a b s o r p t i o n b y c h l o r o p h y l i i s t h e c a u s e
o f s t o m a t a l s e n s i t i v i t y t o r e d l i g h t . D e t e r m i n a t i o n o f f l u x r e s p o n s e c u r v e s
o n l e a v e s i n t h e n o r m a l p o s i t i o n ( u p p e r e p i d e r m i s f a c i n g t h e l i g h t ) o r i n t h e
i n v e r t e d p o s i t i o n ( l o w e r e p i d e r m i s f a c i n g t h e l i g h t ) l e d t o t h e c o n c l u s i o n
t h a t t h e p h o t o r e c e p t o r s f o r b l u e a s w e l l a s f o r r e d l i g h t a r e l o c a t e d o n o r
n e a r t h e s u r f a c e s o f t h e l e a v e s ; p r e s u m a b l y t h e y a r e i n t h e g u a r d c e l l s
t h e m s e l v e s .
Un t i l r e c e n t l y , l i g h t w a s t h o u g h t t o a f f e c t s t o m a t a l o p e n i n g
i n d i r e c t l y t h r o u g h t h e l i g h t d e p e n d e n c e o f C O 2 a s s i m i l a t i o n ( 9 ,
1 1 ) . Ho w e v e r , n e w a n a l y s e s o f s t o m a t a l r e s p o n s e s t o C O 2 a n d
l i g h t l e d t o t h e c o n c l u s i o n t h a t , i n m o s t c a s e s , s t o m a t a r e s p o n d e d
t o c h a n g e s i n t h e i n t e r c e l l u l a r C O 2 c o n c e n t r a t i o n o n l y t o a s m a l l
e x t e n t ; m o s t o f t h e r e s p o n s e t o l i g h t w a s " d i r e c t " , i . e . n o t m e d i a t e d
b y C O 2 ( 1 3 , 1 4 ) . C o m p a r i s o n o f s t o m a t a l b e h a v i o r i n l e a v e s o f
n o r m a l o r i e n t a t i o n ( u p p e r e p i d e r m i s f a c i n g t h e s o u r c e o f l i g h t )
w i t h t h a t i n l e a v e s i n t h e i n v e r t e d p o s i t i o n ( l o w e r e p i d e r m i s f a c i n g
t h e l i g h t ) l e d u s t o c o n c l u d e t h a t t h e p h o t o r e c e p t o r s f o r t h e d i r e c t
r e s p o n s e t o l i g h t a r e l o c a t e d i n e a c h e p i d e r m i s , p r e s u m a b l y w i t h i n
t h e g u a r d c e l l s ( 1 3 ) . Wo n g e t a l . ( 1 5 ) b e l i e v e t h a t a n a d d i t i o n a l
r e s p o n s e t o " a n o t h e r m e t a b o l i t e o f p h o t o s y n t h e s i s " i n t h e m e s o -
p h y l l , a m e t a b o l i t e o t h e r t h a n C 0 2 , i s i n v o l v e d i n l i n k i n g s t o m a t a l
c o n d u c t a n c e t o t h e p h o t o s y n t h e t i c a c t i v i t y o f t h e m e s o p h y l l .
We u s e d m o n o c h r o m a t i c l i g h t t o o b t a i n f u r t h e r i n f o r m a t i o n o n
t h e l o c a t i o n o f t h e p h o t o r e c e p t o r s i n v o l v e d . Ac t i o n s p e c t r a o f
s e v e r a l s t o m a t a l a c t i v i t i e s h a v e a l r e a d y b e e n o b t a i n e d w i t h i s o -
l a t e d e p i d e r m a l s t r i p s ( 3 , 5 ) . Al l o f t h e m s h o w a c o n s i d e r a b l y
s t r o n g e r s t i m u l a t i o n o f s t o m a t a l o p e n i n g a n d r e l a t e d p r o c e s s e s b y
'
Th i s r e s e a r c h w a s s u p p o r t e d b y t h e Un i t e d S t a t e s D e p a r t m e n t o f
E n e r g y u n d e r C o n t r a c t E Y - 7 6 - C - 0 2 - 1 3 3 8 .
2
P r e s e n t a d d r e s s : R e s e a r c h S c h o o l o f Bi o l o g i c a l S c i e n c e s , Au s t r a l i a n
Na t i o n a l Un i v e r s i t y , P . O . Bo x 4 7 5 , C a n b e r r a C i t y , AC T 2 6 0 1 , Au s t r a l i a .
3 P r e s e n t a d d r e s s : P f l a n z e n p h y s i o l o g i s c h e s I n s t i t u t d e r Un i v e r s i t a t G o t -
t i n g e n , Un t e r e K a r s p u l e 2 , 3 4 0 0 G o t t i n g e n , F e d e r a l R e p u b l i c o f G e r m a n y .
b l u e l i g h t t h a n b y r e d l i g h t ; g r e e n l i g h t w a s v i r t u a l l y i n e f f e c t i v e .
I f , i n w h o l e l e a v e s , p h o t o s y n t h e t i c a c t i v i t y i n t h e m e s o p h y l l i s
i m p o r t a n t i n d e t e r m i n i n g s t o m a t a l o p e n i n g , w e s h o u l d e x p e c t a
c o m b i n a t i o n o f t h e a c t i o n s p e c t r a f o r s t o m a t a l o p e n i n g i n i s o l a t e d
e p i d e r m i s a n d f o r p h o t o s y n t h e s i s t o a p p e a r w h e n w e d e t e r m i n e
t h e s p e c t r a l d e p e n d e n c e o f s t o m a t a l o p e n i n g o n l i g h t i n w h o l e
l e a v e s . No i n f o r m a t i o n i s a v a i l a b l e o n t h e s p e c t r a l s e n s i t i v i t y o f
s t o m a t a i n l e a v e s e x p o s e d t o q u a n t u m f l u x e s n o r m a l l y o c c u r r i n g
i n t h e f i e l d ( f u l l s u n l i g h t c o r r e s p o n d s t o a p p r o x i m a t e l y 2 0 0 0 , E
m - 2
s - 1 ) .
We t h e r e f o r e e x t e n d e d t h e
r a n g e
o f
l i g h t
t r e a t m e n t s t o
q u a n t u m f l u x e s t h a t a p p r o a c h e d t h e h i g h e s t v a l u e s o f o u r e a r l i e r
e x p e r i m e n t s w i t h w h i t e l i g h t ( 1 3 ) a n d t h e r e b y c a u s e d s a t u r a t i o n
o f t h e s t o m a t a l r e s p o n s e s .
We c o n t i n u e d t o u s e p l a n t s o f X a n t h i u m s t r u m a r i u m f o r o u r
e x p e r i m e n t s b e c a u s e w e w e r e a b l e t o o b t a i n l e a v e s w i t h l o w
s t o m a t a l s e n s i t i v i t y t o C 0 2 ; i n t e r f e r e n c e b y C 0 2 - m e d i a t e d r e -
s p o n s e s w a s t h e r e b y m i n i m i z e d ( 8 ) . We c o m b i n e d e x p o s u r e t o
m o n o c h r o m a t i c l i g h t w i t h o u r e a r l i e r a p p r o a c h e s o f u s i n g l e a f
i n v e r s i o n a n d i n h i b i t o r s o f p h o t o s y n t h e t i c e l e c t r o n t r a n s p o r t f o r
t h e a t t e m p t e d l o c a l i z a t i o n o f t h e p h o t o r e c e p t o r s i n v o l v e d i n t h e
a d j u s t m e n t o f s t o m a t a l a p e r t u r e t o l i g h t ( 1 3 ) .
MATE R I AL S AND ME THO D S
P l a n t s . P l a n t s o f X s t r u m a r i u m L . ( C h i c a g o s t r a i n ) w e r e g r o w n
i n a g r o w t h c h a m b e r w i t h a d a y l e n g t h o f 2 0 h ; 2 4 C / 2 0 C d a y /
n i g h t ; 7 5 % R H. L i g h t w a s p r o v i d e d b y G e n e r a l E l e c t r i c l a m p s H
4 0 0 D X 3 3 - 1 ( m e r c u r y v a p o r ) a n d L U 4 0 0 ( h i g h - t e m p e r a t u r e
s o d i u m v a p o r ) ( G e n e r a l E l e c t r i c C o . , C l e v e l a n d , O H) . D u r i n g
e a c h d a y t h e i r r a d i a n c e w a s i n c r e a s e d i n t h r e e s t e p s t o 2 3 0 w m
( a s m e a s u r e d w i t h a n E p p l e y p y r a n o m e t e r ( E p p l e y L a b o r a t o r y
I n c . , Ne w p o r t , R I ) b e h i n d a C o m i n g No . 4 6 0 0 I R a b s o r b i n g f i l t e r
( C o m i n g G l a s s Wo r k s , C o m i n g , NY ) ) a n d t h e n d e c r e a s e d . A 2 0 -
x 2 . 5 - c m w i c k w a s p l a c e d i n e a c h p o t c o n t a i n i n g a g r a v e l - s o i l
m i x t u r e , s u c h t h a t a b o u t 1 5 c m w a s i n c o n t a c t w i t h t h e s o i l a n d 5
c m d i p p e d i n t o a g r a v e l b e d c o n t a i n i n g d i s t i l l e d H2 0 .
G a s An a l y s i s . Ai r w a s p a s s e d t h r o u g h s o d a l i m e t o r e m o v e a l l
C O 2 a n d t h e n h u m i d i f i e d i n a g a s w a s h i n g b o t t l e . Th e C O 2
c o n c e n t r a t i o n o f t h e a i r w a s a d j u s t e d b y i n j e c t i n g 1 o r 5 % C O 2 ( i n
a i r ) i n t o t h e a i r s t r e a m t h r o u g h c a p i l l a r i e s o f v a r y i n g r e s i s t a n c e .
P a s s a g e o f t h e a i r t h r o u g h a g l a s s c o n d e n s e r s e t t h e d e w p o i n t .
Th e t e m p e r a t u r e o f t h e c o n d e n s e r w a s m a i n t a i n e d a t 1 8 C b y a
c o n s t a n t t e m p e r a t u r e w a t e r b a t h a n d w a s m e a s u r e d w i t h a t h e r -
m o c o u p l e . Th e a i r s t r e a m w a s s p l i t a n d t h e a i r s t r e a m p a s s i n g o v e r
t h e l e a f w a s a d j u s t e d t o 5 0 l i t e r s h - 1 o v e r e a c h s u r f a c e . Th e l e a v e s
w e r e m o u n t e d b e t w e e n t w o w a t e r j a c k e t e d a l u m i n u m c h a m b e r s
w h o s e t e m p e r a t u r e w a s k e p t a t 2 3 C b y a c o n s t a n t t e m p e r a t u r e
c i r c u l a t o r . Th e p e t i o l e o f t h e l e a f d i p p e d i n t o a b e a k e r c o n t a i n i n g
e i t h e r w a t e r o r a s o l u t i o n t o b e f e d t o t h e l e a f . I n e a c h c h a m b e r ,
a l e a f a r e a o f 2 . 4 4 c m 2 w a s e x p o s e d t o t h e a i r s t r e a m . A s m a l l
c o p p e r - c o n s t a n t a n t h e r m o c o u p l e w a s p r e s s e d a g a i n s t t h e n o n i l -
l u m i n a t e d s u r f a c e o f t h e l e a f . Th o s e p a r t s o f t h e l e a f n o t c o v e r e d
b y t h e c h a m b e r s w e r e t r i m m e d o f f ( 8 ) . Th e m o l a r f l u x e s o f C O 2
1 1 7 0
L I G HT Q UAL I TY AND S TO MATAL O P E NI NG
a n d H2 0 f o r b o t h u p p e r a n d l o w e r l e a f s u r f a c e s w e r e m e a s u r e d
w i t h f o u r d i f f e r e n t i a l g a s a n a l y z e r s ( UR AS 2 , Ha r t m a n n u n d
Br a u n , F r a n k f u r t , We s t G e r m a n y ) .
As s i m i l a t i o n a n d e v a p o r a t i o n r a t e s , c o n d u c t a n c e ( s t o m a t a a n d
b o u n d a r y l a y e r t o g e t h e r ) , a n d i n t e r c e l l u l a r C O 2 c o n c e n t r a t i o n
w e r e c a l c u l a t e d b y c o m p u t e r . Th e i n t e r c e l l u l a r C O 2 c o n c e n t r a t i o n
( c i ) w a s o b t a i n e d u s i n g t h e f o l l o w i n g e q u a t i o n :
c i = c a -
1 . 6 A/ g
w h e r e
c .
i s t h e C O 2 c o n c e n t r a t i o n i n t h e a i r p a s s i n g o v e r t h e l e a f ,
A i s t h e a s s i m i l a t i o n r a t e , a n d g i s t h e c o n d u c t a n c e f o r w a t e r v a p o r
o f t h e s t o m a t a a n d t h e b o u n d a r y l a y e r . Th e f a c t o r 1 . 6 i s t h e r a t i o
o f t h e d i f f u s i v i t i e s o f w a t e r v a p o r a n d C O 2 i n a i r . Th e u n i t s u s e d
f o r t h e g a s e x c h a n g e p a r a m e t e r s a r e t h o s e o f F a r q u h a r e t a l . ( 2 ) .
L i g h t . Mo n o c h r o m a t i c l i g h t w a s p r o d u c e d b y f i l t e r i n g w h i t e
l i g h t ( f r o m a i r - c o o l e d x e n o n a r c l a m p s ) t h r o u g h b a n d p a s s f i l t e r s
( AX a b o u t 1 5 0 n m ) a n d w a t e r - c o o l e d i n t e r f e r e n c e f i l t e r s . Th e
i n t e r f e r e n c e f i l t e r s h a d a h a l f - b a n d w i d t h o f 2 0 n m , e x c e p t f o r t h e
e x p e r i m e n t r e p o r t e d i n F i g u r e 3 f o r w h i c h f i l t e r s w i t h a h a l f - b a n d
w i d t h o f 1 2 n m w e r e u s e d . Th e f i l t e r s w e r e t a n d e m f i l t e r s m a d e
b y S c h o t t , Ma i n z , We s t G e r m a n y , t y p e D AL ( 2 0 n m h a l f - b a n d
w i d t h ) o r D I L ( 1 2 n m h a l f - b a n d w i d t h ) . Th e i r r a d i a n c e w a s
r e d u c e d w i t h n e u t r a l d e n s i t y P l e x i g l a s f i l t e r s ( n o . 8 0 0 a n d 8 3 8 ,
R o h m u n d Ha a s , D a r m s t a d t , We s t G e r m a n y ) . Tw o 2 . 5 k w l a m p s
w e r e s e t u p t o s h i n e i n t o o n e b o x f r o m w h i c h a l l o t h e r l i g h t w a s
e x c l u d e d . ( An e a r l i e r v e r s i o n o f t h e m o n o c h r o m a t o r e q u i p m e n t i s
d e s c r i b e d i n r e f e r e n c e 7 ) .
I n t h e i r r a d i a t i o n c o m p a r t m e n t , t h e l e a f c h a m b e r w a s m o u n t e d
o n a n o p t i c a l b e n c h a n d c o u l d b e p o s i t i o n e d u n d e r e i t h e r l a m p .
Wi t h t h i s s e t u p , t h e w a v e l e n g t h o f t h e l i g h t s h i n i n g o n t h e l e a f
c o u l d b e c h a n g e d i n l e s s t h a n t h r e e s b y s l i d i n g t h e c h a m b e r f r o m
o n e l a m p t o t h e o t h e r . A 6 . 5 k w l a m p w a s a v a i l a b l e w h e n h i g h
q u a n t u m f l u x e s w e r e n e e d e d .
Th e l e a f c h a m b e r w a s f i t t e d w i t h a b e a m s p l i t t e r ( a m i c r o s c o p e
s l i d e f i x e d a t a 4 5 0 a n g l e t o t h e l i g h t b e a m ) w h i c h r e f l e c t e d a b o u t
1 0 % o o f t h e l i g h t t o t w o s i l i c o n c e l l s . Th e s e s i l i c o n c e l l s w e r e
c a l i b r a t e d b y t h e f o l l o w i n g m e t h o d : An i n t e r m e d i a t e p a i r o f
s i l i c o n c e l l s w a s c a l i b r a t e d a g a i n s t a n E p p l e y t h e r m o p i l e ( m o d e l
D - 3 ) , t h e n p u t i n t o t h e l e a f c h a m b e r . Th e s i l i c o n c e l l s o f t h e b e a m
s p l i t t e r w e r e t h e n c a l i b r a t e d a g a i n s t t h e i n t e r m e d i a t e p a i r o f s i l i c o n
c e l l s s o t h a t t h e s i g n a l f r o m t h e b e a m s p l i t t e r s i l i c o n c e l l s c o u l d b e
c o n v e r t e d d i r e c t l y i n t o q u a n t u m f l u x i n s i d e t h e l e a f c h a m b e r . Th i s
c a l i b r a t i o n w a s d o n e f o r e a c h w a v e l e n g t h o f l i g h t u s e d .
R E S UL TS
Ac t i o n S p e c t r a . I n t h e e x p e r i m e n t s w e r e p o r t e d b e f o r e ( 1 3 ) ,
s t o m a t a o n t h e a b a x i a l ( l o w e r ) s u r f a c e o f l e a v e s o f X . s t r u m a r i u m
p r o v e d t o b e m u c h m o r e s e n s i t i v e t o l i g h t t h a n s t o m a t a o n t h e
a d a x i a l s u r f a c e . We t h e r e f o r e p e r f o r m e d a l l m e a s u r e m e n t s n e c -
e s s a r y f o r t h e a s s e m b l y o f a n a c t i o n s p e c t r u m o f s t o m a t a l o p e n i n g
o n i n v e r t e d l e a v e s w i t h l i g h t i m p i n g i n g u p o n t h e i r l o w e r s u r f a c e s .
Th e c o n d u c t a n c e v a l u e s w e r e p o r t a r e f o r t h e d i r e c t l y i l l u m i n a t e d
a b a x i a l s u r f a c e s o n l y , w h e r e a s a s s i m i l a t i o n r a t e s a r e t h e s u m s o f
t h e r a t e s o f C O 2 e x c h a n g e o f b o t h s i d e s o f t h e l e a v e s .
An a c t i o n s p e c t r u m f o r s t o m a t a l o p e n i n g w a s c o n s t r u c t e d u s i n g
t h e s t e a d y - s t a t e m e t h o d , i . e . a l e a f w a s e x p o s e d t o a q u a n t u m f l u x
a t a p a r t i c u l a r w a v e l e n g t h u n t i l t h e c o n d u c t a n c e n o l o n g e r
c h a n g e d . I n g e n e r a l , s t o m a t a a d j u s t e d t o a n e w q u a n t u m f l u x
w i t h i n 3 0 m i n . Th r e e s e c t i o n s c o u l d b e d i s t i n g u i s h e d i n t h e
q u a n t u m f l u x - r e s p o n s e c u r v e s ( F i g s . 5 , 6 ) . At l o w l e v e l s o f q u a n -
t u m f l u x s t o m a t a w e r e h a r d l y o p e n , i f a t a l l . At i n t e r m e d i a t e l e v e l s
s t o m a t a l c o n d u c t a n c e i n c r e a s e d n e a r l y l i n e a r l y w i t h t h e l o g a r i t h m
o f q u a n t u m f l u x . At v e r y
h i g h
l e v e l s , s a t u r a t i o n w i t h r e s p e c t t o
l i g h t o c c u r r e d . I n r e d l i g h t , s t o m a t a l r e s p o n s e s t o i n c r e a s i n g
q u a n t u m f l u x e s s a t u r a t e d a t l o w e r c o n d u c t a n c e s t h a n i n b l u el i g h t
( F i g s . 5 , 6 ) . A l i n e a r r e g r e s s i o n w a sp e r f o r m e d f o r e a c h w a v e l e n g t h
f o r t h e
p o i n t s
t h a t f e l l i n t h e l i n e a r
r e s p o n s e r a n g e ( e x c e p t
a t 7 1 1
n m , f o r w h i c h o n l y t w o p o i n t s c o u l d b e u s e d ) . L i n e s w e r e o b t a i n e d
f o r s t o m a t a l r e s p o n s e s t o l i g h t o f 1 6 w a v e l e n g t h s . Th e l e n g t h o f
e a c h l i n e i n F i g u r e 1 i n d i c a t e s t h e r a n g e o v e r w h i c h t h e s t o m a t a l
r e s p o n s e w a s l i n e a r w i t h l o g a r i t h m i c c h a n g e s i n q u a n t u m f l u x .
Th e s l o p e s o f t h e l i n e s i n b l u e l i g h t w e r e g r e a t e r t h a n t h e s l o p e s
i n r e d l i g h t . Th e a v e r a g e s l o J ) e o f a l l l i n e s b e t w e e n 4 0 0 a n d 5 0 0
n m w a s 1 9 . 4 3 . 7 c m o l m s - 1 p e r d e c a d e c h a n g e i n q u a n t u m
f l u x , w h e r e a s t h e a v e r a g e s l o p e o f a l l l i n e s b e t w e e n 6 0 0 a n d 7 0 0
n m w a s 1 2 . 8 0 . 8 c m o l m - 2 S - 1 p e r d e c a d e . Us i n g d a t a f r o m
F i g u r e 1 , a n a c t i o n s p e c t r u m w a s a s s e m b l e d b y p l o t t i n g t h e i n v e r s e
o f t h e q u a n t u m
f l u x r e q u i r e d t o p r o d u c e a c o n d u c t a n c e o f 1 5 c m o l
m - 2 s - , v e r s u s w a v e l e n g t h ( F i g . 2 ) . Th i s m e t h o d d e e m p h a s i z e s t h e
p e a k o f a c t i v i t y i n r e d l i g h t s i n c e t h e s l o p e s o f t h e f l u x - r e s p o n s e
c u r v e s a r e s m a l l e r i n r e d l i g h t t h a n i n t h e b l u e . An o t h e r a c t i o n
s p e c t r u m w a s c o n s t r u c t e d ( n o t s h o w n ) b y e x t r a p o l a t i n g t h e r e g r e s -
s i o n l i n e s o f F i g u r e 1 t o t h e c o n d u c t a n c e v a l u e o b t a i n e d i n t h e
d a r k f o r e a c h i n d i v i d u a l l e a f ( n o t e n t e r e d i n F i g . 1 ) a n d p l o t t i n g
t h e i n v e r s e o f t h e q u a n t u m f l u x t h u s o b t a i n e d v e r s u s w a v e l e n g t h .
I n t h a t c a s e t h e r e d p e a k w a s 2 0 % o o f t h e b l u e p e a k r a t h e r t h a n
c l o s e t o l 1 0 % o a s i n F i g u r e 2 .
Be c a u s e t h e a c t i o n s p e c t r u m o b t a i n e d r e s e m b l e d c l o s e l y t h e
s p e c t r a f o r s t o m a t a l o p e n i n g a n d s s R b a c c u m u l a t i o n , a n d i n
Q u a n t u m f l u x
( P E
m 2 5 - l )
F I G . 1 . S t o m a t a l r e s p o n s e i n l e a v e s o f X . s t r u m a r i u m t o q u a n t u m f l u x e s
o f l i g h t o f 1 6 w a v e l e n g t h s ( n u m b e r s i n d i c a t e w a v e l e n g t h i n n m ) . F r o m
m e a s u r e m e n t s o f t h e c o n d u c t a n c e f o r w a t e r v a p o r o f t h e a b a x i a l ( l o w e r )
s u r f a c e w h i c h w a s d i r e c t l y i l l u m i n a t e d . Th e l i n e s a r e l i n e a r r e g r e s s i o n s o f
t h e t h r e e o r f o u r p o i n t s t h a t f e l l o n t h e l i n e a r r e s p o n s e p o r t i o n o f t h e c u r v e .
Th e e x t e n t o f e a c h l i n e i n d i c a t e s t h e r a n g e o v e r w h i c h t h e s t o m a t a
r e s p o n d e d l i n e a r l y t o c h a n g e s i n t h e l o g a r i t h m o f t h e q u a n t u m f l u x . E a c h
l i n e w a s d e r i v e d f r o m d a t a o b t a i n e d f r o m o n e l e a f . S t o m a t a d i d n o t
r e s p o n d t o q u a n t u m f l u x e s u p t o 1 0 0 0
, E
m - 2 s - ' a t 7 4 9 a n d 7 3 1 n m , a n d
u p t o 1 0 0, u E m - 2 s - ' ( l i m i t o f t h e l i g h t s o u r c e ) a t 3 8 6 a n d 3 7 2 n m . Al l
m e a s u r e m e n t s w e r e c o n d u c t e d a t a C O 2 c o n c e n t r a t i o n o f 3 2 0
I L I
- ' i n t h e
a t m o s p h e r e .
7
w
, , 0 . 0 4
N
; k Q I X
E
C X
0
o 3
)r ) r r
V
4 0 0 5 0 0 6 0 0
Wa v e l e n g t h ( n m )
7 0 0
F I G . 2 . Ac t i o n s p e c t r u m o f s t o m a t a l o p e n i n g i n t h e l o w e r e p i d e r m i s o f
l e a v e s o f X . s t r u m a r i u m . Th e m e a s u r e o f a c t i o n i s t h e i n v e r s e o f t h e
q u a n t u m f l u x r e q u i r e d t o p r o d u c e a c o n d u c t a n c e o f 1 5 c m o l m - 2 s - ' .
1
2 t
I ~
L - - 1
P l a n t
P h y s i o l .
Vo l .
6 8 ,
1 9 8 1
1 1 7 1
S HAR K E Y AND R AS C HK E
E 1 2
Z
E
v 8
0
c 4
0
6 7 0 6 8 0 6 9 0 7 0 0 7 1 0
Wa v e l e n g t h ( n m )
F I G . 3 . C o n d u c t a n c e f o r w a t e r v a p o r a n d a s s i m i l a t i o n r a t e i n l e a v e s o f
X . s t r u m a r i u m e x p o s e d t o a q u a n t u m f l u x o f 3 0 0 , t E m - 2 s - ' a t v a r i o u s
w a v e l e n g t h s o f r e d l i g h t a n d a n i n t e r c e l l u l a r C O 2 c o n c e n t r a t i o n c l o s e t o
2 5 0 1 i V' . Av e r a g e d v a l u e s a r e f r o m f o u r l e a v e s . C o n d u c t a n c e d a t a a r e
f o r t h e d i r e c t l y i l l u m i n a t e d a b a x i a l s u r f a c e o n l y , w h e r e a s t h e a s s i m i l a t i o n
d a t a a r e f o r b o t h l e a f s u r f a c e s . As s i m i l a t i o n ( U) i s p l o t t e d a g a i n s t t h e r i g h t
s c a l e a n d c o n d u c t a n c e ( 0 ) i s p l o t t e d a g a i n s t t h e l e f t s c a l e . Th e a v e r a g e
s t o m a t a l c o n d u c t a n c e i n d a r k n e s s w a s 4 . 6 c m o l m - 2 s - ' . Th e i n t e r f e r e n c e
f i l t e r s u s e d h a d a h a l f - b a n d w i d t h o f 1 2 n m a n d a o n e - t e n t h b a n d w i d t h
o f 2 0 n m .
p a r t i c u l a r t h e a c t i o n s p e c t r u m o f m a l a t e a c c u m u l a t i o n i n i s o l a t e d
e p i d e r m i s o f Vi c i a f a b a ( 3 , 5 ) , w e m a d e n o a t t e m p t t o v e r i f y , b y
r e p e t i t i o n o f o u r e x p e r i m e n t s , d e t a i l s o f t h e s p e c t r u m w e h a d
o b t a i n e d .
Ma n y i n v e s t i g a t o r s a s s u m e t h a t C h l i s i n v o l v e d i n s t o m a t a l
r e s p o n s e s t o l i g h t . Wh i l e C h l c a n n o t b e t h e o n l y p i g m e n t i n v o l v e d ,
i t c o u l d b e t h e p i g m e n t r e s p o n s i b l e f o r t h e a c t i v i t y o f r e d l i g h t i n
c a u s i n g s t o m a t a l o p e n i n g . We t e s t e d t h i s p o s s i b i l i t y b y m e a s u r i n g
t h e s t e a d y s t a t e c o n d u c t a n c e o f l e a v e s i n a q u a n t u m f l u x o f 3 0 0
, i E m - 2 s - ' a t e a c h o f 5
w a v e l e n g t h s
a t t h e
l o n g w a v e l e n g t h
e n d o f
t h e C h l a b s o r p t i o n s p e c t r u m w h e r e i n t e r f e r e n c e b y a c c e s s o r y
p i g m e n t s s h o u l d b e m i n i m a l . ( Na r r o w b a n d w i d t h f i l t e r s w e r e
u s e d f o r t h i s p u r p o s e . ) F o r t w o l e a v e s t h e w a v e l e n g t h o f t h e
i l l u m i n a t i n g l i g h t w a s i n c r e a s e d d u r i n g t h e e x p e r i m e n t f r o m t h e
s h o r t e s t t o t h e l o n g e s t , a n d f o r t w o a d d i t i o n a l l e a v e s t h e w a v e -
l e n g t h w a s d e c r e a s e d , f r o m t h e l o n g e s t t o t h e s h o r t e s t . Th e i n t e r -
c e l l u l a r C O 2 c o n c e n t r a t i o n w a s k e p t a t 2 5 3 8 , u l I 1 b y a d j u s t -
m e n t o f t h e a m b i e n t C O 2 c o n c e n t r a t i o n f o r a l l w a v e l e n g t h s e x c e p t
7 1 1 n m . At 7 1 1 n m , t h e i n t e r c e l l u l a r C O 2 c o n c e n t r a t i o n w a s 2 8 2
, u l
1 - 1 . F o r e a c h l e a f t h e s h a p e o f t h e c u r v e r e l a t i n g c o n d u c t a n c e
t o w a v e l e n g t h w a s t h e s a m e , a l t h o u g h t h e a b s o l u t e c o n d u c t a n c e
v a l u e s v a r i e d f r o m l e a f t o l e a f a t e a c h w a v e l e n g t h . ( I n e a c h o f t h e
f o u r l e a v e s t h e c o n d u c t a n c e a t 6 9 0 n m o s c i l l a t e d w i t h a p e r i o d o f
a b o u t 2 5 m i n a n d d e c r e a s i n g a m p l i t u d e ) . Th e a v e r a g e d r e s u l t s
f r o m f o u r l e a v e s a r e s h o w n i n F i g u r e 3 . Th e p a t t e r n o f s t o m a t a l
r e s p o n s e s t o c h a n g e s i n t h e w a v e l e n g t h o f r e d l i g h t w a s v i r t u a l l y
i d e n t i c a l w i t h t h a t o f t h e s i m u l t a n e o u s r e s p o n s e s o f n e t a s s i m i l a -
t i o n .
I n h i b i t i o n o f P h o t o s y n t h e s i s . I n w h o l e l e a v e s s t o m a t a l r e s p o n s e s
t o r e d l i g h t d i s a p p e a r e d a f t e r a p p l i c a t i o n o f t h e i n h i b i t o r s o f
p h o t o s y n t h e t i c e l e c t r o n t r a n s p o r t , D C MU, a n d c y a n a z i n e 4 . F i g u r e
4 s h o w s t h e r e s u l t o f o n e o f t h r e e s i m i l a r e x p e r i m e n t s . I n b l u e
l i g h t ( X
= 4 5 5 n m ) b o t h c o n d u c t a n c e a n d a s s i m i l a t i o n i n c r e a s e d
r a p i d l y u n t i l s u f f i c i e n t i n h i b i t o r h a d a c c u m u l a t e d i n t h e l e a f t o
r e d u c e t h e r a t e o f p h o t o s y n t h e s i s . C o n d u c t a n c e f e l l s l i g h t l y . Th i s
m a y h a v e b e e n a C O 2 e f f e c t i n a s m u c h a s t h e i n t e r c e l l u l a r C O 2
c o n c e n t r a t i o n r o s e b y 3 0 , u l F 1 a s C O 2 a s s i m i l a t i o n d e c l i n e d . I n
r e d l i g h t ( A
= 6 8 1 n m ) a s s i m i l a t i o n r a t e a n d c o n d u c t a n c e b o t h f e l l
a s t h e i n h i b i t o r o f p h o t o s y n t h e s i s b e g a n t o a c t . Ta b l e I c o n t a i n s
4 C y a n a z i n e , 2 - c h l o r o - 4 - ( - c y a n o - I - m e t h y l e t h y l a m i n o ) - 6 - e t h y l a m i n o - s -
t r i a z i n e , i s t h e a c t i v e i n g r e d i e n t o f t h e h e r b i c i d e Bl a d e x b y S h e l l C h e m i c a l
C o m p a n y .
Ti m e o f d a y
F I G . 4 . Ti m e c o u r s e s o f c o n d u c t a n c e f o r w a t e r v a p o r a n d a s s i m i l a t i o n
o f X s t r u m a r i u m l e a v e s s u p p l i e d w i t h 5 x 1 0 - 5 M c y a n a z i n e a n d p l a c e d i n
r e d o r b l u e l i g h t ( a b a x i a l s u r f a c e i l l u m i n a t e d ) . As s i m i l a t i o n r a t e s ( 0 , E ,
r i g h t s c a l e ) a n d c o n d u c t a n c e ( U,, l e f t s c a l e ) r o s e i n i t i a l l y i n r e s p o n s e t o
l i g h t ( 6 5 0 , u E m - 2s - 2 a t b o t h w a v e l e n g t h s ) . Th e C O 2 c o n c e n t r a t i o n i n t h e
a i r w a s 3 2 0 u l 1 - ' . Th e c o n d u c t a n c e v a l u e s a r e t h o s e o f t h e d i r e c t l y
i l l u m i n a t e d a b a x i a l s u r f a c e o n l y ; t h e a s s i m i l a t i o n r a t e s a r e t h e s u m s o f
C O 2 e x c h a n g e s t h r o u g h b o t h s u r f a c e s .
Ta b l e I . E f f e c t o f D C MU o n C 0 2 As s i m i l a t i o n a n d C o n d u c t a n c e f o r
Wa t e r Va p o r i n Bl u e a n d R e d L i g h t
Th e d o s e w a s c a l c u l a t e d b y i n t e g r a t i n g t h e s t r i p c h a r t r e c o r d o f w a t e r
l o s s f o r t h e 6 h d u r a t i o n o f t h e e x p e r i m e n t a n d m u l t i p l y i n g t h e r e s u l t b y
t h e c o n c e n t r a t i o n o f D C MU i n t h e i r r i g a t i o n w a t e r ( 5 0 p M) . Th e d o s e w a s
t a k e n u p b y a l e a f t r i m m e d t o a n a r e a o f a b o u t 2 0 c m 2 , o f w h i c h 2 . 4 c m 2
w e r e e x p o s e d t o t h e l i g h t .
Q u a n t u m C o n d u c t - As s i m i l a -
L i g h t , A F l u x a n c e t i o n R a t e D o s e
n m
p E
m - 2 s - ' c m o l m 2 s - ' m o l 2 ' n m o l
Bl u e 4 5 5 6 5 0 3 3 . 2 0 . 2 1 3 6 . 5
Bl u e 4 5 5 6 5 3 3 . 6 0 . 3 3 3 6 . 3
R e d 6 8 4 6 5 0 7 . 8 1 . 9 9 2 3 . 0
Bl u e a 4 5 5 6 5 0 1 6 . 8 1 . 9 7
a S a m e l e a f a s u s e d f o r 6 8 4 n m . Th i s l i n e s h o w s t h a t w h e n s t o m a t a i n
r e d l i g h t a r e c l o s e d b y D C MU, t h e y c a n s t i l l r e s p o n d t o b l u e l i g h t .
d a t a f r o m a s i m i l a r e x p e r i m e n t , t h i s t i m e w i t h D C MU a s i n h i b i t o r .
Be c a u s e a l m o s t 1 0 t i m e s m o r e q u a n t a o f r e d l i g h t t h a n o f b l u e
w e r e r e q u i r e d t o p r o d u c e a c o n d u c t a n c e o f 1 5 c m o l m - 2 s - ' ( F i g .
2 ) , t h e e x p e r i m e n t i n c l u d e d o n e t r e a t m e n t i n w h i c h t h e q u a n t u m
f l u x o f b l u e l i g h t w a s o n e - t e n t h t h a t o f t h e r e d l i g h t . Af t e r 6 h o f
i r r a d i a t i o n , t h e t w o l e a v e s i n b l u e l i g h t ( f i r s t t w o l i n e s ) h a d l a r g e
c o n d u c t a n c e s , w h i l e t h e l e a f i n r e d l i g h t h a d a t t a i n e d o n l y a l o w
c o n d u c t a n c e v a l u e . Be c a u s e s t o m a t a b e c a m e n a r r o w i n r e d l i g h t
b u t r e m a i n e d o p e n i n b l u e l i g h t , t h e a m o u n t o f D C MU t a k e n u p
d u r i n g t h e c o u r s e o f t h e e x p e r i m e n t ( a s j u d g e d b y t h e w a t e r l o s t
b y t h e l e a v e s ) w a s 5 0 % o h i g h e r i n t h e b l u e l i g h t t r e a t m e n t s t h a n i n
t h e r e d l i g h t t r e a t m e n t . Af t e r s t o m a t a h a d c l o s e d i n r e d l i g h t , i n
r e s p o n s e t o D C MU, t h e y s t i l l w e r e a b l e t o r e s p o n d t o b l u e l i g h t
t h o u g h n o t a s s t r o n g l y a s d u r i n g t h e f i r s t o p e n i n g m o v e m e n t
( f o u r t h l i n e i n Ta b l e I ) .
L e a f I n v e r s i o n . S t o m a t a o p e n i n r e d l i g h t ( F i g s . 1 , 2 ) ; t h e a c t i o n
s p e c t r u m i n t h e r e d r e g i o n o f t h e s p e c t r u m c o i n c i d e d w i t h t h a t o f
t h e a s s i m i l a t i o n o f C O 2 ( F i g . 3 ) . I n r e d l i g h t s t o m a t a w e r e s e n s i t i v e
t o i n h i b i t o r s o f p h o t o s y n t h e t i c e l e c t r o n f l o w ( F i g . 4 , Ta b l e I ) .
Th e s e o b s e r v a t i o n s a r e c o n s i s t e n t w i t h t h e s u g g e s t i o n t h a t p h o t o -
s y n t h e s i s i n t h e m e s o p h y l l c o n t r o l s s t o m a t a l c o n d u c t a n c e ( 1 5 ) .
F o r a t e s t o f t h i s h y p o t h e s i s , w e d e t e r m i n e d c o n d u c t a n c e s i n
n o r m a l l y o r i e n t e d a n d i n i n v e r t e d l e a v e s t h a t w e r e e x p o s e d t o
b l u e o r t o r e d l i g h t ( F i g . 5 ) . Wh e n i l l u m i n a t e d d i r e c t l y s t o m a t a
b e g a n t o o p e n a t m u c h l o w e r q u a n t u m f l u x e s t h a n w h e n t h e y
C o n d u c t a n c e
As s i m i l a t i o n
E
6 . .
0
E
: t l
4
0 . _
c x a
. E
2 W^
- U,
E
0
I -
E
E
0
t n
r )
u _ A _ . - - - u
1 1 7 2
P l a n t
P h y s i o l .
Vo l .
6 8 , 1 9 8 1
L I G HT Q UAL I TY AND S TO MATAL O P E NI NG
3 4 0
c E
E 0
0
C
O u a n t u m f l u x
( p E
m r 2 s ' )
F I G . 5 . S t o m a t a l r e s p o n s e s t o m o n o c h r o m a t i c b l u e o r r e d l i g h t i n t h e
n o r m a l o r i n v e r t e d o r i e n t a t i o n o f l e a v e s o f X . s t r u m a r i u m . Th e l e a f b l a d e s
w e r e p o s i t i o n e d s o t h a t l i g h t w a s s h i n i n g o n t h e a d a x i a l ( u p p e r ) s u r f a c e
( a b a x i a l s u r f a c e s h a d e d b y t h e m e s o p h y l l ) o r o n t h e a b a x i a l ( l o w e r ) s u r f a c e
( a d a x i a l s u r f a c e s h a d e d ) . Th e f i l t e r s h a d h a l f - b a n d w i d t h s o f 2 0 n m . Th e
a v e r a g e t r a n s m i t t a n c e o f t h e l e a v e s w a s 1 . 7 % i n b l u e l i g h t a n d 3 . 9 % o i n r e d
l i g h t . ( S e p a r a t e l e a v e s w e r e u s e d f o r e a c h c o l o r a n d l e a f p o s i t i o n . Th e f l u x -
r e s p o n s e c u r v e f o r a n e p i d e r m i s i n t h e s h a d e d p o s i t i o n d o e s t h e r e f o r e n o t
a p p e a r a s a n e x a c t d i s p l a c e m e n t o f t h e c u r v e f o r t h e i l l u m i n a t e d p o s i t i o n . )
w e r e s h a d e d b y t h e m e s o p h y l l . Th i s w a s o b s e r v e d i n b l u e l i g h t a s
w e l l a s i n r e d l i g h t . At a n y o n e p a r t i c u l a r q u a n t u m f l u x , s t o m a t a
d i r e c t l y e x p o s e d t o t h e i m p i n g i n g l i g h t a l s o w e r e o p e n w i d e r t h a n
t h o s e o f t h e s h a d e d s u r f a c e o f t h e l e a v e s .
E f f e c t o f C O 2 . S o m e i n v e s t i g a t o r s , n o t a b l y Br o g a r d h ( 1 ) , b e l i e v e
t h a t s t o m a t a l r e s p o n s e s t o r e d l i g h t a r e m e d i a t e d b y c h a n g e s i n
t h e c o n c e n t r a t i o n o f C 0 2 , w h e r e a s r e s p o n s e s t o b l u e l i g h t a r e
c a u s e d b y l i g h t a b s o r p t i o n i n t h e g u a r d c e l l s . To t e s t t h e m o d i f i -
c a t i o n o f s t o m a t a l r e s p o n s e s t o r e d o r b l u e l i g h t b y C 0 2 , f l u x
r e s p o n s e c u r v e s w e r e d e t e r m i n e d a t a h i g h a n d a t a l o w l e v e l o f
C O 2 i n t h e a i r . Th e r e s u l t s s h o w n i n F i g u r e 6 i n d i c a t e t h a t C O 2
a f f e c t e d s t o m a t a l r e s p o n s e s t o r e d a n d t o b l u e l i g h t i n a s i m i l a r
m a n n e r . I n l i g h t o f b o t h q u a l i t i e s , c o n d u c t a n c e s w e r e l o w e r i f t h e
C O 2 c o n c e n t r a t i o n i n t h e a i r w a s a b o v e t h e n o r m a l C O 2 c o n c e n -
t r a t i o n i n t h e a t m o s p h e r e t h a n w h e n t h e C O 2 c o n c e n t r a t i o n w a s
a p p r o a c h i n g 1 0 0 , u l
I - ' . I n r e d l i g h t a s w e l l a s i n b l u e l i g h t , a h i g h
l e v e l o f C O 2 l o w e r e d t h e m a x i m u m c o n d u c t a n c e r e a c h e d b y t h e
s t o m a t a . I t a l s o a p p e a r s t h a t s t o m a t a o f X s t r u m a r i u m w e r e a b l e
t o r e s p o n d t o r e d l i g h t w i t h o u t m e d i a t i o n b y t h e i n t e r c e l l u l a r
c o n c e n t r a t i o n o f C O 2 .
D I S C US S I O N
Th e a c t i o n s p e c t r u m o f s t o m a t a l o p e n i n g i n l e a v e s o f X s t r u -
m a r i u m ( F i g . 2 ) r e s e m b l e s t h e s p e c t r a o b t a i n e d b y Hs i a o e t a l . ( 3 ) ,
a n d b y O g a w a e t a l . ( 5 ) , f o r s t o m a t a l o p e n i n g i n l e a f d i s c s a n d
e p i d e r m a l s t r i p s o f V. f a b a , a n d o f t h e a c c u m u l a t i o n o f s e R b a n d
m a l a t e i n e p i d e r m a l s a m p l e s o f t h e s a m e s p e c i e s . Bl u e l i g h t
s t i m u l a t e s s t o m a t a l o p e n i n g 1 0 t o 2 0 t i m e s m o r e t h a n r e d l i g h t
( d e p e n d i n g o n t h e m e a s u r e u s e d ) . E v e n a t s a t u r a t i n g f l u x e s w i t h
r e d q u a n t a , s t o m a t a l c o n d u c t a n c e s r e m a i n o n e - t h i r d b e l o w t h o s e
a t t a i n a b l e i n b l u e l i g h t ( F i g s . 5 , 6 ) . G r e e n l i g h t i s m u c h l e s s
1 0 1 0 0
Q u a n t u m f l u x
( p E
m 2 s - ' )
F I G . 6 . E f f e c t o f C O 2 o n s t o m a t a l r e s p o n s e s t o r e d o r b l u e l i g h t i n
l e a v e s o f X . s t r u m a r i u m . Th e c o n d u c t a n c e s g i v e n a r e t h o s e o f t h e d i r e c t l y
i l l u m i n a t e d a b a x i a l s u r f a c e . ( 0 , E ) : l o w a m b i e n t C O 2 c o n c e n t r a t i o n ( 1 1 0
y t L 1 f o r b l u e , 1 3 0
Al
1 ` f o r r e d ) . ( O , ) : h i g h a m b i e n t C O 2 c o n c e n t r a t i o n
( 5 1 0
p l
F - 1 f o r b l u e , 5 8 0 , u l 1 ' - f o r r e d ) .
e f f e c t i v e i n c a u s i n g s t o m a t a t o o p e n t h a n l i g h t o f o t h e r w a v e -
l e n g t h s . Th e g r e a t e r s l o p e s o f t h e f l u x - r e s p o n s e c u r v e s i n b l u e
l i g h t t h a n i n r e d l i g h t a r e e v i d e n c e f o r t h e i n v o l v e m e n t o f t w o
p i g m e n t s i n t h e s t o m a t a l r e s p o n s e t o l i g h t .
O g a w a e t a l . , o n t h e s t r e n g t h o f t h e i r e x p e r i m e n t s i n v o l v i n g
s i m u l t a n e o u s i r r a d i a t i o n w i t h l i g h t o f t w o w a v e l e n g t h s , s u g g e s t e d
t h a t t w o p i g m e n t s p a r t i c i p a t e i n t h e s t i m u l a t i o n o f m a l a t e f o r m a -
t i o n i n e p i d e r m a l t i s s u e . I n a l l l i k e l i h o o d , o n e o f t h e r e c e p t o r
m o l e c u l e s i s C h l ; t h e o t h e r i s p o s s i b l y a f l a v i n ( 5 ) . P a r t i c i p a t i o n o f
t w o l i g h t r e s p o n s e s i n t h e s t i m u l a t i o n o f s t o m a t a l o p e n i n g w a s
a l s o s u g g e s t e d b y Br o g a r d h ( 1 ) ; h e o b s e r v e d l a r g e o v e r s h o o t s i n
t h e t r a n s p i r a t i o n r a t e s o f o a t s e e d l i n g s w h e n b l u e l i g h t w a s g i v e n ,
b u t o n l y g r a d u a l i n c r e a s e s w h e n t h e p l a n t s w e r e i l l u m i n a t e d w i t h
r e d l i g h t .
O u r e v i d e n c e s u p p o r t s t h e s u g g e s t i o n t h a t s t o m a t a l o p e n i n g i n
r e d l i g h t i n v o l v e s t h e p h o t o s y n t h e t i c a p p a r a t u s . F i r s t , i n w h o l e
l e a v e s o f X s t r u m a r i u m , t h e r e d r e g i o n o f t h e a c t i o n s p e c t r u m o f
s t o m a t a l o p e n i n g w a s i d e n t i c a l w i t h t h a t o f t h e a s s i m i l a t i o n o f
C O 2 . S e c o n d l y , i n l e a v e s e x p o s e d t o r e d l i g h t , s t o m a t a c l o s e d w h e n
i n h i b i t o r s o f p h o t o s y n t h e t i c e l e c t r o n t r a n s p o r t l i k e c y a n a z i n e o r
D C MU w e r e a p p l i e d ; b u t c o n d u c t a n c e r e m a i n e d h i g h w h e n t h e
e x p e r i m e n t w a s p e r f o r m e d i n b l u e l i g h t ( F i g . 4 , Ta b l e I ) . Be c a u s e
t h e p h o t o s y n t h e t i c a p p a r a t u s i s n o t t h e o n l y s y s t e m t h a t c o n f e r s
l i g h t s e n s i t i v i t y t o t h e s t o m a t a , w e h a v e t o e x p e c t v a r i a b i l i t y
a m o n g t h e e f f e c t s i n h i b i t o r s o f p h o t o s y n t h e s i s h a v e o n s t o m a t a l
b e h a v i o r ( s e e 9 f o r a r e v i e w ) . F o r i n s t a n c e , i t i s e a s y t o s e e w h y
D C MU c a u s e s s t o m a t a l c l o s u r e w h e n t h e e x p e r i m e n t a l m a t e r i a l
i s e x p o s e d t o a n i n c a n d e s c e n t l a m p w h i c h e m i t s p r e d o m i n a n t l y
r e d l i g h t ( 4 ) .
Wh e r e a r e t h e p h o t o r e c e p t o r s l o c a t e d ? Th e c l o s e r e s e m b l a n c e
o f t h e r e d r e g i o n s o f t h e a c t i o n s p e c t r a o f c o n d u c t a n c e a n d
a s s i m i l a t i o n ( F i g . 3 ) , a s w e l l a s t h e o b s e r v e d e f f e c t s o f i n h i b i t o r s
o f p h o t o s y n t h e s i s , a r e c o n s i s t e n t w i t h t h e s u g g e s t i o n o f Wo n g e t
a l . ( 1 5 ) t h a t s t o m a t a r e s p o n d t o a m e t a b o l i t e o f p h o t o s y n t h e s i s i n
t h e m e s o p h y l l . I n w h o l e l e a v e s t h e r e s p o n s e o f g u a r d c e l l s t o r e d
l i g h t c o u l d i n d e e d h a v e b e e n m e d i a t e d b y l i g h t a b s o r p t i o n i n t h e
p h o t o s y n t h e t i c t i s s u e . Bu t a f t e r r e f e r r i n g t o F i g u r e 5 a n d c o m p a r -
i n g s t o m a t a l b e h a v i o r i n l e a v e s i n t h e n o r m a l p o s i t i o n ( l i g h t
i m p i n g i n g u p o n t h e u p p e r e p i d e r m i s ) , w i t h t h a t i n i n v e r t e d l e a v e s
( l i g h t i m p i n g i n g u p o n t h e l o w e r e p i d e r m i s ) , w e c o m e t o a d i f f e r e n t
c o n c l u s i o n . Th e c o n d u c t a n c e o f a n e p i d e r m i s w a s c o n s i d e r a b l y
h i g h e r w h e n i t f a c e d t h e l i g h t t h a n w h e n i t w a s t u r n e d a w a y . Th i s
d i f f e r e n c e i n o p e n i n g o c c u r r e d i n t h e a d a x i a l e p i d e r m i s a s w e l l a s
i n t h e a b a x i a l e p i d e r m i s , a n d i n b l u e l i g h t a s w e l l a s i n r e d l i g h t .
Th e r e f o r e , t h e r e c e p t o r s f o r b l u e l i g h t a n d f o r r e d l i g h t a p p e a r t o
b e l o c a t e d i n e a c h e p i d e r m i s . I f r a d i a t i o n a b s o r b e d i n t h e m e s o -
L
I
P l a n t
P h y s i o l .
Vo l .
6 8 ,
1 9 8 1
1 1 7 3
1 1 7 4 S HAR K E Y A
p h y l l d o e s c o n t r i b u t e t o s t o m a t a l o p e n i n g t h e n t h e l a y e r o f a b -
s o r p t i o n m u s t b e v e r y c l o s e t o t h e e p i d e r m i s . We h a v e n o e v i d e n c e
f o r s u c h a s i t u a t i o n . R a t h e r , w e k n o w t h a t t h e a c t i o n s p e c t r a f o r
s t o m a t a l o p e n i n g i n l e a f d i s c s a n d i n w h o l e l e a v e s ( r e f e r e n c e 3
a n d t h i s s t u d y ) a g r e e w i t h t h e a c t i o n s p e c t r a o f v a r i o u s s t o m a t a l
p r o c e s s e s t h a t w e r e o b t a i n e d o n i s o l a t e d e p i d e r m a l s a m p l e s ( 3 , 5 ) .
We s e e n o r e a s o n t o p o s t u l a t e a c o n t r i b u t i o n f r o m t h e p h o t o s y n -
t h e t i c a c t i v i t y o f t h e m e s o p h y l l t o s t o m a t a l o p e n i n g i n t h e l i g h t
o t h e r t h a n t h a t t h r o u g h t h e d e p l e t i o n o f C O 2 o f t h e i n t e r c e l l u l a r
s p a c e s ( 1 3 ) .
I n i s o l a t e d e p i d e r m i s t h e p h o t o r e c e p t o r s f o r b l u e a n d r e d l i g h t
m u s t b e s i t u a t e d i n t h e g u a r d c e l l s t h e m s e l v e s . Hs i a o e t a L ( 3 )
d e s t r o y e d t h e o r d i n a r y e p i d e r m a l c e l l s b y r o l l i n g a n d O g a w a e t a l .
( 5 ) b y s o n i c a t i o n . Th e a c t i o n s p e c t r a f o r t h e a c c u m u l a t i o n o f s s R b
( 3 ) a s w e l l a s t h o s e f o r t h e a c c u m u l a t i o n o f m a l a t e ( 5 ) p r o v e t h a t
t h e m e t a b o l i s m o f g u a r d c e l l s c a n b e s t i m u l a t e d b y b l u e a n d b y
r e d l i g h t ; Ze i g e r a n d He p l e r ( 1 6 ) s h o w e d t h a t e v e n i s o l a t e d g u a r d
c e l l p r o t o p l a s t s b e g i n t o s w e l l w h e n t h e y a r e e x p o s e d t o l i g h t . We
k n o w t h a t p h o t o s y n t h e t i c r e d u c t i o n o f C O 2 d o e s n o t o c c u r i n
g u a r d c e l l s ( 6 , 1 0 , 1 2 ) . I f e x p e r i m e n t a l e v i d e n c e p o i n t s t o a
p a r t i c i p a t i o n o f p h o t o s y n t h e t i c e l e c t r o n t r a n s p o r t i n t h e g u a r d
c e l l s ' r e s p o n s e s t o l i g h t , t h e n t h i s p a r t i c i p a t i o n c o u l d o c c u r t h r o u g h
t h e p r o v i s i o n o f NAD P H f o r t h e r e d u c t i o n o f o x a l o a c e t a t e t o
m a l a t e . We a l s o h a v e t o c o n s i d e r t h e p o s s i b i l i t y t h a t i n g u a r d c e l l s
t h e p h o t o s y n t h e t i c p r o d u c t i o n o f r e d u c i n g e q u i v a l e n t s i s u n i m -
p o r t a n t f o r t h e c e l l s ' s u p p l y o f e n e r g y , b u t i n c o m b i n a t i o n w i t h a
r e s p o n s e o f t h e b l u e - l i g h t a b s o r b i n g p h o t o r e c e p t o r , i s i m p o r t a n t
f o r d e t e r m i n i n g q u a n t i t y a n d s p e c t r a l c o m p o s i t i o n o f t h e l i g h t
a v a i l a b l e t o t h e l e a f . ( A o n e - p i g m e n t p h o t o r e c e p t o r s y s t e m i s
c o l o r - b l i n d . )
Wo n g e t a l . ( 1 5 ) b r o u g h t o u t t h e s t r i k i n g a b i l i t y o f p l a n t s t o
a d j u s t t h e i r s t o m a t a l c o n d u c t a n c e i n p r o p o r t i o n t o t h e n e e d s o f
t h e i r p h o t o s y n t h e t i c a p p a r a t u s f o r C O 2 . Th e r e s u l t o f t h i s a d j u s t -
m e n t i s a n e a r l y c o n s t a n t i n t e r c e l l u l a r C O 2 c o n c e n t r a t i o n . We
Ta b l e I I . C o n d u c t a n c e s f o r Wa t e r Va p o r o f L e a v e s o f X a n t h i u m
s t r u m a r i u m E x p o s e d t o Wh i t e o r Mo n o c h r o m a t i c L i g h t o f E q u a l Q u a n t u m
F l u x e s
C o n d u c t a n c e s a r e t h e s u m s o f t h e c o n d u c t a n c e s o f t h e u p p e r a n d l o w e r
e p i d e r m i s . Wh i t e l i g h t : l i g h t o f a x e n o n a r c l a m p f i l t e r e d t h r o u g h a
C o r n i n g G l a s s No . 4 6 0 0 . C o n v e r s i o n f a c t o r i s 4 . 5 , i E s - ' w - ' ( 1 3 ) .
Am - C o n d u c t a n c e a t a
L i g h t P h o t o - b i e n t Q u a n t u m F l u x o f
Tr a -
s y n t h e -
C O 2
Tr e a t -
s i s I n - C o n - 1 8 0 4 5 0 7 0 0 S o u r c e
m e n t
h i b i t e d c e n t r a - ( j s E m 2 s - 1 )
t i o n c m o l m - 2 s - l
Ml l ' -
Wh i t e a n o 3 2 0 3 5 3 9 4 7 R e f 1 3 , F i g . 7
Wh i t e y e s 2 5 0 2 7 5 0 6 0 R e f 1 3 , F i g . 5
Bl u e , A =
4 3 6 n m n o 3 2 0 3 5 5 4 6 0 Th i s p a p e r , F i g . 5
R e d , A =
6 8 1 n m n o 3 2 0 5 1 3 1 9 Th i s p a p e r , F i g . 5
a
D a t a f o r l e a f t e m p e r a t u r e 2 2 C ; v a p o r p r e s s u r e d e f i c i t 8 m l 1 - 1 .
NI D R AS C HK E P l a n t P h y s i o l . Vo l . 6 8 , 1 9 8 1
w e r e s u r p r i s e d t o l e a r n t h a t f e e d b a c k ( p a r t i c u l a r l y o f C 0 2 ) c o n -
t r i b u t e s o n l y p a r t i a l l y t o t h e a p p a r e n t h o m e o s t a s i s o f t h e i n t e r c e l -
l u l a r l e v e l o f C O 2 ( 1 3 , 1 4 ) . Mu c h o f t h e e x c e l l e n t c o r r e l a t i o n
b e t w e e n c o n d u c t a n c e a n d p h o t o s y n t h e s i s i s t o b e a s c r i b e d t o t h e
e v o l u t i o n o f a c o n c e r t e d d i r e c t r e s p o n s e o f g u a r d c e l l s t o l i g h t ( 1 3 ,
1 4 ) , w h i c h i n t u r n c a n b e m o d i f i e d b y t h e l e v e l o f C O 2 i n t h e a i r
( F i g . 6 ) . L i g h t q u a l i t y e n t e r s a s a f u r t h e r m o d i f y i n g f a c t o r . Wh e n
l e a v e s o f X . s t r u m a r i u m p o s s e s s i n g s t o m a t a o f l o w s e n s i t i v i t y t o
C O 2 w e r e e x p o s e d t o e q u a l q u a n t u m f l u x e s o f w h i t e , b l u e , a n d
r e d l i g h t ( Ta b l e I I ) , w h i t e l i g h t o f a s p e c t r a l c o m p o s i t i o n r e s e m -
b l i n g t h a t o f s u n l i g h t c a u s e d c o n d u c t a n c e s s i m i l a r t o t h o s e t h a t
o c c u r i n b l u e l i g h t . C o n d u c t a n c e s a t t a i n e d i n t h e p r e s e n c e o f a n
i n h i b i t o r o f p h o t o s y n t h e s i s w e r e o f a m a g n i t u d e e q u a l t o t h o s e
r e a c h e d w h e n p h o t o s y n t h e s i s p r o c e e d e d u n i n h i b i t e d ; t h e r e i s n o
i n d i c a t i o n o f a d e p e n d e n c e o f c o n d u c t a n c e o n p h o t o s y n t h e s i s i n
t h e m e s o p h y l l . R e d l i g h t , w h e n g i v e n a l o n e , i s i n s u f f i c i e n t t o
p r o d u c e m a x i m a l s t o m a t a l c o n d u c t a n c e . We c o n f i r m t h e f i n d i n g
p r e s e n t e d i n Ta b l e I V o f o u r p r e v i o u s p u b l i c a t i o n ( 1 3 ) w h e r e w e
s h o w e d t h a t , a t a q u a n t u m f l u x o f 7 4 0 , u E m - 2 s - ' , c o n d u c t a n c e
w a s g r e a t e r i n b l u e l i g h t t h a n i n r e d l i g h t e v e n t h o u g h i n t e r c e l l u l a r
C O 2 c o n c e n t r a t i o n w a s h i g h e r a n d a s s i m i l a t i o n w a s l o w e r .
No t e a d d e d i n p r o o f : W. H. O u t l a w , J r . , B. C . Ma y n e , V. E .
Ze n g e r , a n d J . Ma n c h e s t e r ( P l a n t P h y s i o l . 6 7 : 1 2 - 1 6 ) a s w e l l a s E .
Ze i g e r , P . Ar m o n d , a n d A. Me l i s ( P l a n t P h y s i o l . 6 7 : 1 7 - 2 0 )
p u b l i s h e d e v i d e n c e f o r t h e p r e s e n c e o f a c o m p l e t e p h o t o s y n t h e t i c
e l e c t r o n t r a n s p o r t c h a i n i n g u a r d - c e l l c h l o r o p l a s t s .
L I TE R ATUR E C I TE D
1 . BR O G AR D H T 1 9 7 5 R e g u l a t i o n o f t r a n s p i r a t i o n i n Av e n a R e s p o n s e s t o r e d a n d
b l u e l i g h t s t e p s . P h y s i o l P l a n t 3 5 : 3 0 3 - 3 0 9
2 . F AR Q UHAR G D , D R D UBBE , K R As c HK E 1 9 7 8 G a i n o f t h e f e e d b a c k l o o p
i n v o l v i n g c a r b o n d i o x i d e a n d s t o m a t a . Th e o r y a n d m e a s u r e m e n t . P l a n t P h y s i o l
6 2 : 4 0 6 4 1 2
3 . HS I AO TC , WG AL L AWAY , L T E VANS 1 9 7 3 Ac t i o n s p e c t r a f o r g u a r d c e l l R b +
u p t a k e a n d s t o m a t a l o p e n i n g i n Vi c i a f a b a P l a n t P h y s i o l 5 1 : 8 2 - 8 8
4 . K UI P E R P J C 1 9 6 4 D e p e n d e n c e u p o n w a v e l e n g t h o f s t o m a t a l m o v e m e n t i n
e p i d e r m a l t i s s u e o f S e n e c i o o d o r i s . P l a n t P h y s i o l 3 9 : 9 5 2 - 9 5 5
5 . O G AWA T, H I S HI K AWA, K S HI MAD A, K S HI BATA 1 9 7 8 S y n e r g i s t i c a c t i o n o f r e d
a n d b l u e l i g h t a n d a c t i o n s p e c t r a f o r m a l a t e f o r m a t i o n i n g u a r d c e l l s o f Vi c i a
f a b a L . P l a n t a 1 4 2 : 6 1 - 6 5
6 . O UTL AW WH, J MANC HE S TE R , C A D I C AME L L I , D D R AND AL L , B R AP P , G M
VE I TH 1 9 7 9 P h o t o s y n t h e t i c c a r b o n r e d u c t i o n p a t h w a y i s a b s e n t i n c h l o r o p l a s t s
o f Vi c i a f a b a g u a r d c e l l s . P r o c Na t l Ac a d S c i US A 7 6 : 6 3 7 1 - 6 3 7 5
7 . R As c HK s E K 1 9 6 7 E i n e An l a g e z u r m o n o c h r o m a t i s c h e n Be s t r a h l u n g b i o l o g i s c h e r
O b j e k t e , a u s g e r u s t e t m i t I n t e r f e r e n z f i l t e r n u n d e i n e r e l e k t r o n i s c h g e r e g e l t e n
2 , 5 k W- X e n o n l a m p e . P l a n t a 7 5 : 5 5 - 7 2
8 . R As c HY E K 1 9 7 4 Ab s c i s i c a c i d s e n s i t i z e s s t o m a t a t o C O ) i n l e a v e s o f X a n t h i u m
s t r u m a r i u m L . P r o c 8 t h I n t e r n a t i o n a l C o n f e r e n c e o n P l a n t G r o w t h S u b s t a n c e s ,
To k y o 1 9 7 3 . Hi r o k a w a P u b l i s h i n g C o , To k y o , p p 1 1 5 1 - 1 1 5 8
9 . R As c HK E K 1 9 7 5 S t o m a t a l a c t i o n . An n u R e v P l a n t P h y s i o l 2 6 : 3 0 9 - 3 4 0
1 0 . R AS C HK E K , P D I TTR I C H 1 9 7 7 [ ' 4 C ] C a r b o n - d i o x i d e f i x a t i o n b y i s o l a t e d l e a f
e p i d e r m e s w i t h s t o m a t a c l o s e d o r o p e n . P l a n t a 1 3 4 : 6 9 - 7 5
1 1 . S C AR TH G W 1 9 3 2 Me c h a n i s m o f t h e a c t i o n o f l i g h t a n d o t h e r f a c t o r s o n s t o m a t a l
m o v e m e n t . P l a n t P h y s i o l 7 : 4 8 1 - 5 0 4
1 2 . S C HNABL H 1 9 8 0 C O 2 a n d m a l a t e m e t a b o l i s m i n s t a r c h - c o n t a i n i n g a n d s t a r c h -
l a c k i n g g u a r d c e l l p r o t o p l a s t s . P l a n t a 1 4 9 : 5 2 - 5 8
1 3 . S HAR K E Y TD , K R As c HK E 1 9 8 1 S e p a r a t i o n a n d m e a s u r e m e n t o f d i r e c t a n d
i n d i r e c t e f f e c t s o f l i g h t o n s t o m a t a . P l a n t P h y s i o l 6 8 : 3 3 - 4 0
1 4 . WO NG S C , I R C O WAN, G D F AR Q UHAR 1 9 7 8 L e a f c o n d u c t a n c e i n r e l a t i o n t o
a s s i m i l a t i o n i n E u c a l y p t u s p a u c f l o r a S i e b . e x S p r e n g . I n f l u e n c e s o f i r r a d i a n c e
a n d p a r t i a l p r e s s u r e o f c a r b o n d i o x i d e . P l a n t P h y s i o l 6 2 : 6 7 0 - 6 7 4
1 5 . WO NG S C , I R C O WAN, G D F AR Q UHAR 1 9 7 9 S t o m a t a l c o n d u c t a n c e c o r r e l a t e s
w i t h p h o t o s y n t h e t i c c a p a c i t y . Na t u r e 2 8 2 : 4 2 4 4 2 6
1 6 . ZE I G E R E , P K HE P L E R 1 9 7 7 L i g h t a n d s t o m a t a l f u n c t i o n : b l u e l i g h t s t i m u l a t e s
s w e l l i n g o f g u a r d c e l l p r o t o p l a s t s . S c i e n c e 1 9 6 : 8 8 7 - 8 8 9