BI 3 : QUY TRNH TRCH NHANH ADN CA TM

I. Vt liu, dng c, ha cht

1. Vt liu : M tm.
2. Dng c, thit b :
- Tube
- a thy tinh
- My li tm
- T
- Micropipet
3. Ha cht :
- Lysis buffer
- Ethanol 95%, 70%
- Nc ct 2 ln v trng.
II. Tin hnh th nghim
1. Ly khong 50 -100mg phn biu b da u hoc c tm cho vo tube.
2. Dng a thy tinh nghin v tht tm vi 1ml Lysis buffer trong 10 pht
ph v mng t bo gii phng DNA.
3. Ly tm 13.000 vng/pht trong 5 pht loi b protein v cc thnh phn
hu c. Dung dch trong tube phn thnh 3 lp : lp th nht l phn dch trong c
cha DNA, lp th hai l mt lp mng protein, lp th ba c cha clorofom v
mt s thnh phn hu c khc.
4. Dng pipet 1000 nh nhng cn thn ly nhiu nht c th phn dch trong c
cha DNA, ch nh tay khng ht protein v tp cht hu c bn di cho
vo tube mi.
5. Thm vo 1 ml Ethanol 95%, o u tube 5 - 6 ln, Ethanol 95% ta DNA,
bo v DNA khng b phn hy bi cc enzyme v gip ra sch DNA.
6. Ly tm 13.000 vng/pht trong 5 pht.
7. b phn trong, gi li phn ta.
8. Ra phn ta vi 500 Ethanol 70% loi b mui ra khi DNA.
9. Ly tm 13.000 vng/pht trong 5 pht.
10. b phn trong loi b ht tp cht, gi li phn ta c DNA, b phn
trong n git cui cng dng khn giy chm trn ming tube cho kh.
11. Sy kh DNA trong 10 pht.
12. Ha tan DNA vi 50 nc ct 2 ln v trng
13. Kim tra cht lng sn phm ly trch bng cch in di trn gel agarose v o
quang ph hp th bc sng 260nm v 280nm. Xc nh c hm lng DNA
c trong mu nhng khng bit chnh xc hm lng DNA l bao nhiu v mu
cn ln tp cht hay khng.