See discussions, stats, and author profiles for this publication at: https://www.researchgate.

net/publication/235981709

Isolasi dan uji aktivitas antibakteri jamur endofit dari daun dan rimpang
Zingiber ottensii Val.

Article · July 2009

CITATIONS READS

9 38,099

3 authors, including:

Ernawati Sinaga
universitas nasional
26 PUBLICATIONS   113 CITATIONS   

SEE PROFILE

Some of the authors of this publication are also working on these related projects:

Increasing drug delivery using synthetic peptides View project

Efek Hepatoprotektif Ekstrak Rimpang Bangle H antu ( Z ingiber ottensii ) pada Tikus Terinduksi Parasetamol View project

All content following this page was uploaded by Ernawati Sinaga on 21 May 2014.

The user has requested enhancement of the downloaded file.

 Isolasi dan uji aktivitas antibakteri jamur endofit dari daun dan rimpang Zingiber ottensii
(Noverita, Dinah Fitria, Ernawati Sinaga)

ISOLASI DAN UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI

JAMUR ENDOFIT DARI DAUN DAN RIMPANG
Zingiber ottensii Val.
Noverita, Dinah Fitria, Ernawati Sinaga
Fakultas Biologi Universitas Nasional

Korespondensi: Prof. Dr. Ernawati Sinaga, MS, Apt.

Fakultas Biologi Universitas Nasional, Jalan Sawo Manila, Pejaten,
Pasar Minggu, Jakarta Selatan
ersinaga2003@yahoo.com.sg

ABSTRACT
Endophytic fungi is cluster of fungi lives in the plant tissues for a few time or entire of its life.
This kind of fungi usually produces secondary metabolites which have significant bioactivity,
such as anti cancer, anti virus, or antibacterial agents. Endophytic fungi can be isolated from
many kinds of plants, especially medicinal plant such as Zingiber ottensii Val. (Ghost Bangle),
which is abundant in Indonesia. The objective of this research is to isolate endophytic fungi
from leaves and rhizomes of Zingiber ottensii Val. and investigate its antibacterial activity
towards Escherichia coli and Staphylococcus aureus. From the experiments we could obtain
10 endophytic fungi isolates from leaves and rhizomes of Zingiber ottensii Val., and
experiments showed that all of the endophitic fungi have significant antibacterial activity
towards Escherichia coli and Staphylococcus aureus.
Keywords: antibacterial, endophytic, fungi, Zingiber ottensii

ABSTRAK
Jamur endofit merupakan sekelompok jamur yang sebagian atau seluruh hidupnya berada
dalam jaringan tumbuhan hidup dan biasanya tidak merugikan pada inangnya. Jamur-jamur
endofit umumnya memproduksi metabolit sekunder yang memiliki aktivitas biologis yang
bermanfaat seperti misalnya senyawa-senyawa anti kanker, anti virus, atau antibakteri.
Jamur endofit dapat ditemukan pada berbagai jenis tumbuhan, terutama pada tumbuhan
obat, seperti misalnya Zingiber ottensii Val. (Bangle hantu), salah satu tumbuhan obat yang
banyak terdapat di Indonesia. Penelitian ini bertujuan untuk memperoleh isolat jamur endofit
dari daun dan rimpang Zingiber ottensii Val., serta menguji aktivitas antibakteri dari isolat
jamur yang diperoleh terhadap pertumbuhan bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus
aureus. Dari penelitian yang dilakukan diperoleh 10 isolat jamur endofit dari daun dan
rimpang Zingiber ottensi Val. Kesepuluh isolat jamur endofit tersebut memiliki kemampuan
menghambat pertumbuhan kedua jenis bakteri uji, dengan kekuatan yang berbeda-beda.
Kata kunci : anti-bakteri, jamur, endofit, bangle hantu, Zingiber ottensii Val.

biji, daun, bunga, ranting, batang dan

PENDAHULUAN
akar. Berbagai senyawa fungsional
Jamur endofit merupakan dapat dihasilkan oleh jamur endofit.
mikroorganisme yang terdapat di dalam Senyawa yang dihasilkan jamur endofit
suatu sistem jaringan tumbuhan seperti tersebut dapat berupa senyawa anti
171
Jurnal Farmasi Indonesia Vol. 4 No. 4 Juli 2009: 171 -176
kanker, antivirus, antibakteri, antifungi,
hormon pertumbuhan tanaman,
insektisida dan lain-lain (1).
Penelitian terhadap aktivitas suatu
senyawa baik sebagai antibakteri
maupun antijamur merupakan suatu
langkah awal untuk mengetahui
kegunaan senyawa tersebut. Adanya
senyawa aktif antibakteri dan antifungi
dibidang kesehatan merupakan
informasi penting untuk
penanggulangan suatu penyakit yang
disebabkan oleh bakteri atau jamur (2).
Selain itu, pencarian jamur endofit yang
banyak terdapat pada tumbuhan
dilakukan untuk menambah atau
memperkaya koleksi mikroba.
Selanjutnya mikroba tersebut perlu
diidentifikasi untuk mengetahui sifat
pertumbuhan dan jenisnya, sehingga
lebih lanjut dapat dimanfaatkan di
bidang kesehatan. Mengingat
kebutuhan bahan baku obat yang
semakin meningkat baik jumlah
maupun macamnya maka potensi
sumber daya alam Indonesia
khususnya jamur endofit perlu digali
dan dikembangkan.
Berbagai jenis tanaman terutama
tanaman obat, dapat digunakan
sebagai sumber isolat jamur endofit.
Tumbuhan yang banyak digunakan
oleh masyarakat sebagai bahan baku
obat-obatan tradisional antara lain dari
suku Zingiberaceae. Salah satu jenis
yang banyak digunakan adalah Bangle
hantu (Zingiber ottensii Val.).
Tumbuhan tersebut memiliki
kandungan senyawa utama yang
dikenal dengan minyak atsiri dan
memiliki aktivitas sebagai antimikroba
yang berspektrum luas. Tanaman
tersebut biasanya digunakan sebagai
analgetik, obat demam (antipiretik),
obat batuk, antikonvulsan (obat kejang)
terutama anak-anak, dan obat untuk
ibu setelah melahirkan (3).
Bakteri uji yang digunakan dalam
penelitian ini merupakan flora normal
dalam tubuh manusia, tetapi pada
keadaan tertentu dapat berpotensi
172
membahayakan dan menjadi patogen.
Bakteri ujinya adalah Escherichia coli
dan Staphylococcus aureus yang
menyebabkan penyakit yang berkaitan
dengan eksotoksin dan produksi enzim
yang dihasilkan (4). Bakteri Escherichia
coli merupakan bakteri Gram negatif
berbentuk batang yang tidak
membentuk spora dan merupakan flora
normal di usus dan sebagai penyebab
penyakit diare, sedangkan
Staphylococcus aureus merupakan
bakteri Gram positif (5).
Berdasarkan latar belakang dan
permasalahan di atas, maka penelitian
ini dilakukan dengan tujuan :
1. Memperoleh isolat jamur endofit
dari tanaman Zingiber ottensii Val.
2. Menguji aktivitas antibakteri dari
isolat jamur endofit hasil isolasi
terhadap pertumbuhan bakteri
Escherichia coli dan
Staphylococcus aureus.
METODE PENELITIAN
Tempat dan Waktu Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan di
Laboratorium Mikrobiologi dan
Genetika Fakultas Biologi Universitas
Nasional, Jl. Harsono RM, Ragunan,
Jakarta Selatan, pada bulan Mei hingga
Juli 2008.
Alat
Alat yang digunakan dalam
penelitian ini antara lain: oven (WTB
Binder), autoklaf (Delixi), laminar air
flow, rotary shaker (Model VRN-210),
refrigerator, inkubator (Memmert),
sentrifus (Hittech), tabung sentrifuse,
timbangan digital, kompor listrik, pH
universal, gelas piala, labu Erlenmeyer
(Pyrex), cawan Petri (Pyrex), tabung
reaksi, rak tabung, pembakar Bunsen,
gelas ukur, kain saring, kertas saring,
plastik pembungkus, aluminium foil,
swab, pipet volumetrik, pinset, spatula,
gunting, pisau, koran, plastik, core
borer (pembolong gabus), vortex mixer,
 Isolasi dan uji aktivitas antibakteri jamur endofit dari daun dan rimpang Zingiber ottensii
kapas, kertas label, bulb, spidol, scalpel,
ose, dan penggaris.
Isolasi Jamur Endofit: Isolasi jamur
endofit dilakukan dengan metode
tanam langsung, yaitu setelah
perendaman terakhir menggunakan
etanol 70% selama 1 menit.
Selanjutnya, potongan sampel
dikeringkan di atas kertas saring steril
selama beberapa menit. Masing–
masing potongan sampel kemudian
diletakkan di atas media MEA (Malt
Extract Agar) yang telah ditambahkan
serbuk tanaman inang dengan posisi
permukaan belahan menempel pada
agar médium. Sampel diletakkan di
atas médium dengan diberi tekanan,
dan bagian potongan berada di atas
medium. Inokulasi sampel dilakukan di
atas cawan petri dan dilakukan duplo,
tiap cawan berisi 4 potongan sampel.
Selama pekerjaan dilakukan di dalam
laminar air flow, dan kemudian inkubasi
selama 2-14 hari hari pada suhu 27-
29oC (suhu ruang). Isolat endofit yang
menunjukkan sifat morfologi jamur
dipindahkan ke media MEA .
Pemurnian Jamur Endofit: Jamur
endofit yang telah tumbuh pada media
isolasi MEA, kemudian secara bertahap
dimurnikan satu persatu. Masing-
masing isolat murni jamur endofit yang
diperoleh, kemudian dipindahkan ke
dalam media dalam MEA cawan Petri.
Pemurnian ini bertujuan untuk
memisahkan koloni endofit dengan
morfologi berbeda untuk dijadikan isolat
tersendiri. Pengamatan morfologi
dilakukan kembali setelah inkubasi
selama 5-7 hari, dan apabila masih
ditemukan pertumbuhan koloni yang
berbeda secara makroskopik maka
harus dipisahkan kembali sampai
diperoleh isolat murni. Jamur endofit
diinkubasi pada suhu kamar selama 3-
5 hari sesuai dengan pertumbuhannya.
Setiap isolat murni dibuat duplo pada
agar miring. Masing-masing sebagai
kultur stok dan kultur untuk penelitian.
(Noverita, Dinah Fitria, Ernawati Sinaga)
Fermentasi Jamur Endofit: Fermentasi
jamur endofit dilakukan dengan
fermentasi cair menggunakan media
PDY (Potato Dextrose Yeast) (6).
Koloni murni jamur endofit pada cawan
petri MEA yang telah diinkubasi selama
5-7 hari, kemudian dengan
menggunakan core borer diambil 3
potongan biakan jamur berukuran ± 1
x 1 cm. Potongan jamur tersebut
kemudian diinokulasikan ke dalam
media fermentasi cair PDY sebanyak
20 mL dalam labu Erlenmeyer ukuran
100 mL. Selanjutnya dilakukan
fermentasi goyang menggunakan
rotary shaker 130 rpm (kocokan/menit)
pada suhu kamar selama 14 hari. Dari
masing-masing kultur yang telah
difermentasi dimasukkan ke dalam
tabung sentrifus ukuran 15 mL yang
sebelumnya telah disterilisasi terlebih
dahulu, kemudian di sentrifugasi
dengan kecepatan 3000 rpm selama 20
menit. Supernatan diambil dan
kemudian disaring menggunakan
kertas saring. Supernatan ini kemudian
digunakan untuk uji aktivitas antibakteri
sebagai larutan uji berupa supernatan
suspensi koloni endofit.
Persiapan Bakteri Uji: Sebanyak satu
ose koloni bakteri uji diinokulasikan
dalam larutan NaCl fisiologis 0,9%
sebanyak 5 mL. Kekeruhannya
diseragamkan dengan menggunakan
standar McFarland 0,5 (kepadatan
bakteri 1,5 x 108) pada latar belakang
hitam dan cahaya terang. Standar
kekeruhan McFarland dibuat dengan
cara 0,5 mL larutan BaCl2 1% ditambah
dengan 9,5 mL H2SO4 1%
Teknik inokulasi bakteri yang
dilakukan dalam penelitian ini adalah
menggunakan swab steril. Swab steril
dicelupkan ke dalam campuran bakteri
uji dengan NaCl fisiologis 0,9%,
kemudian ditiriskan dengan cara ujung
swab ditekan dan diputar pada dinding
dalam tabung untuk membuang
kelebihan cairan. Selanjutnya swab
tersebut dioleskan ke permukaan agar
173
Jurnal Farmasi Indonesia Vol. 4 No. 4 Juli 2009: 171 -176
sebanyak dua kali yaitu secara
horizontal dan vertikal agar
pertumbuhan bakteri merata.
Pengujian aktivitas antibakteri:
Pengujian aktivitas antibakteri
dilakukan dengan metode Kirby-Bauer
yang dikenal dengan sebutan metode
cakram kertas (7). Tiap-tiap cakram
kertas kosong sebelumnya dipanaskan
dalam oven pada suhu 70oC selama 15
menit, kemudian kertas cakram
dicelupkan ke dalam larutan uji.
Cakram yang telah berisi supernatan,
kemudian didiamkan selama 15 menit
sebelum diletakkan pada media uji.
Kemudian secara aseptik, setelah
kertas cakram menyerap supernatan
tersebut, masing-masing diletakkan
pada permukaan medium yang telah
berisi mikroba uji. Jumlah cakram
kertas yang diletakkan tersebut kira-
kira dalam satu cawan Petri berisi 6-7
buah, dan masing-masing jarak antara
cakram diatur supaya tidak terlalu
dekat.
Sebagai kontrol positif digunakan
cakram Ampisilin 10 µg dan untuk
kontrol negatif digunakan cakram
kosong steril. Pengujian dilakukan
dengan tiga ulangan. Setelah inkubasi
pada suhu 370C selama 18-24 jam,
dilakukan pengukuran diameter zona
hambat, yaitu zona bening yang
terbentuk di sekitar cakram, dengan
menggunakan penggaris milimeter.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Isolat Jamur Endofit dari Zingiber
ottensii (Bangle hantu)
Jumlah total isolat jamur endofit
yang diperoleh dari daun dan rimpang
tanaman Zingiber ottensii (bangle
hantu) adalah 10 isolat dengan rincian
8 isolat dari daun dan 2 isolat dari
rimpang . Dilihat dari angka tersebut,
ternyata jumlah isolat yang diperoleh
dari bagian daun lebih banyak
dibandingkan dari rimpang. Hal ini
diduga karena sumber nutrisi yang
174
terdapat di bagian daun lebih
mendukung keberadaan jamur endofit.
Jamur endofit yang dihasilkan dari
ttumbuhan inang dapat menghasilkan
jenis isolat yang berbeda-beda dan
jumlah bervariasi. Sesuai dengan
pernyataan Wahyudi (8), isolasi jamur
endofit dari bagian tanaman yang
berbeda dari satu tumbuhan inang,
ternyata mengandung jenis isolat yang
berbeda pula. Hal ini merupakan
mekanisme adaptasi dari endofit
terhadap mikroekologi dan kondisi
fisiologis yang spesifik dari masing-
masing tumbuhan inang. Bahkan dari
satu jaringan hidup suatu tumbuhan
dapat diisolasi lebih dari 1 jenis jamur
endofit. Selanjutnya menurut Petrini
dkk. (9), bahwa kehadiran jenis endofit
dihubungkan dengan kondisi
mikrohabitat tanaman inang dan
kecocokan genotip antara tanaman
inang dan endofit, sehingga akan
berpengaruh terhadap perbedaan
dalam komposisi koloni endofit dan
tingkat infeksi tanaman inang yang di
tempati oleh jamur endofit pada lokasi
yang sama.
Perolehan isolat jamur endofit hasil
isolasi selanjutnya dilakukan
pengamatan secara makroskopis dan
mikroskopis. Masing-masing isolat
memiliki cirri khas morfologi yang
berbeda (Gambar 1).
Gambar 1. Koloni beberapa isolat
endofit dari Zingiber ottensii
 Isolasi dan uji aktivitas antibakteri jamur endofit dari daun dan rimpang Zingiber ottensii
(Noverita, Dinah Fitria, Ernawati Sinaga)

Aktivitas antibakteri isolat jamur terhadap pertumbuhan S. aureus

endofit adalah isolat D1, D2 dan D3 dengan
Hasil pengujian daya antibakteri 10 zona hambat masing-masing sebesar
isolat jamur endofit yang diisolasi dari 19 mm.
tanaman Zingiber ottensii terhadap
pertumbuhan koloni bakteri Escherichia
coli dan Staphylococcus aureus
ditampilkan pada tabel 1 berikut ini.

Tabel 1. Diameter zona hambat isolat

jamur endofit terhadap bakteri
uji
No Kode Zona hambat rata-
Isolat rata (mm)
E.a coli S. aureus
1 D1 17 19
2 D2 17 19
3 D3 18 19
4 D4 19 18
5 D5 17 17 Gambar 2. Zona hambat rata-rata
6 D6 15 16 (mm) isolat jamur endofit
7 D7 17 18 terhadap kedua bakteri uji
8 D8 18 18 Ket: biru = E. coli dan merah = S. aureus
9 R1 18 15
10 R2 16 17 Bila dibandingkan kemampuan
11 Ampisilin 16 12 menghambat pertumbuhan kedua
12 Kontrol 6 6 bakteri uji antara isolat jamur endofit
hasil isolasi dengan kontrol positif, yaitu
Rata-rata zona hambat yang cakram antibiotik ampisilin 10 ug,
dihasilkan masing-masing isolat endofit terlihat bahwa hampir semua isolat
hasil isolasi dari tanaman Zingiber endofit hasil isolasi ini lebih efektif
ottensii (bangle hantu) terhadap kedua dalam menghambat kedua jenis bakteri
bakteri uji (tabel 1) memperlihatkan uji dibandingkan dengan cakram
hasil yang berbeda-beda. Kisaran antibiotik ampisilin 10 ug yang
zona hambat yang dihasilkan digunakan. Hal ini terbukti dari
kesepuluh isolat endofit tersebut adalah besarnya zona hambat yang dihasil
15 mm sampai dengan 19 mm. Untuk oleh isolat-isolat jamur endofit ini yang
lebih jelasnya dapat dilihat pada melebihi kemampuan cakram ampisilin
diagram batang gambar 2. 10 ug dalam menghambat
Berdasarkan gambar 2 terlihat pertumbuhan kedua bakteri uji.
bahwa ke sepuluh isolat jamur endofit Melihat kemampuan kesepuluh
hasil isolasi dari tanaman Zingiber isolat endofit ini yang mampu
ottensii (bangle hantu) memiliki daya menghambat kedua jenis bakteri uji
hambat berbeda-beda terhadap kedua yang mewakili bakteri Gram positif
bakteri uji, tetapi hampir seluruhnya (S.aureus) dan bakteri Gram negatif
lebih kuat dibandingkan dengan kontrol (E.coli), maka dapat disimpulkan
positif. Isolat yang memiliki rata-rata bahwa isolat-isolat jamur endofit hasil
zona hambat tertinggi terhadap isolasi ini memiliki daya antibakteri
pertumbuhan E. coli adalah isolat D4 yang signifikan dan tampaknya bersifat
sebesar 19 mm, sedangkan yang broad spectrum. Data ini dapat
memiliki daya hambat tertinggi
175
 Jurnal Farmasi Indonesia Vol. 4 No. 4 Juli 2009: 171 -176
dijadikan sebagai acuan dalam
mendapatkan senyawa antibiotik baru.
KESIMPULAN DAN SARAN
Berdasarkan hasil penelitian yang
dilakukan dapat diambil kesimpulan
sebagai berikut :
1. Dari daun dan rimpang Zingiber
ottensii (bangle hantu) dapat
diperoleh 10 isolat jamur endofit.
2. Kesepuluh isolat jamur endofit
tersebut memiliki sifat antibakteri
yang cukup kuat terhadap
Escherichia coli dan Staphylococcus
aureus.
3. Daya antibakteri isolat jamur endofit
yang dihasilkan berbeda-beda. Yang
paling tinggi daya antibakterinya
terhadap E. coli adalah isolat D4
yang diperoleh dari daun, dan yang
paling tinggi daya antibakterinya
terhadap S. aureus adalah isolat D1,
D2, dan D3.
Dari hasil penelitian perlu diajukan
beberapa saran sebagai berikut:
1. Diperlukan penelitian lebih lanjut
untuk identifikasi jenis dan senyawa
kimia antimikroba yang terdapat di
dalam isolat jamur endofit hasil
isolasi dari tanaman Zingiber ottensii
(bangle hantu), terutama untuk
isolat yang mempunyai aktivitas
antibakteri terbaik.
2. Perlu dilakukan uji antibakteri
lanjutan menggunakan jenis-jenis
bakteri patogen lainnya, agar dapat
176
View publication stats
diperoleh data antibakteri yang
memadai dari hasil fermentasi jamur
endofit yang diperoleh, untuk
nantinya dapat dikembangkan
sebagai bahan obat antibakteri .
DAFTAR PUSTAKA
1. Strobel GA. Natural products from
endophytic microorganism. Journal of
Natural Products 2004 ; 67:257-268.
2. Ganjar I, Syamsurizal W, Wutari A.
Mikologi Dasar dan Terapan. Yayasan
Obor Indonesia, Jakarta, 2006.
3. Sinaga E, Rahayu SE, Wahyuningsih E
dan Matondang I. Katalog tumbuhan
obat di Indonesia: Zingiberaceae.
Universitas Nasional Press, 2000.
4. Volk WA dan Wheeler MF. Mikrobiologi
Dasar. Jilid 1, edisi 5. Erlangga. Jakarta,
1993.
5. Budiyanto AK. Mikrobiologi Terapan.
Universitas Muhammadiyah Malang,
2002.
6. Kumala S, Mangunwardoyo W, dan
Budiarti P. Fermentasi diam dan goyang
isolat kapang endofit dari Brucea
javanica L. Merr. dan uji aktivitas
antimikroba. Jurnal Ilmu Kefarmasian
Indonesia 2005;.3(2): 60-63.
7. Lay BW. Analisis mikroba di
laboratorium. Grasindo Persada,
Jakarta, 1994.
8. Wahyudi P. Mikroba endofitik: simbion
dalam jaringan tanaman. Lingkungan
Manajemen Ilmiah 2001; 3(2): 45-50.
9. Petrini O, Sieber TN, Toti L, dan Viret
O. Ecology metabolite production and
substrate utilization in endophytic
fungi. Natural Toxins 1992. 1:185-196.