PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,

Volume 9 Nomor 3 Agustus 2020

UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL ASCIDIAN

Herdmania Momus DENGAN METODE DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil)

ANTIOXIDANT ACTIVITY TEST OF ETHANOL EXTRACTS OF ASCIDIAN

Herdmania momus USING DPPH METHOD (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)

Frelinsia V.M Damanis1) , Defny S Wewengkang1) , Irma Antasionasti1)

1)
Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115
*damanisv@gmail.com

ABSTRACT
Ascidian Herdmania momus is one of the components of coral reef biota that has bioactive
potential. Bioactive compounds function as self-defense and also function for human life, one of
which can be used as a source of antioxidants. The purpose of this study is to determine the
antioxidant activity from the ethanol extracts of the Ascidian Herdmania momus. Ascidian
Herdmania momus was extracted using maceration method with ethanol as a solvent. As a
parameter, testing of antioxidant activity was carried out by the DPPH (1,1-diphenil-2-
picrylhydarzyl) method measured using UV-Vis spectrophotometry with variations in
concentrations of 25, 50, 75, 100, and 125 μg / mL. The results of the average % inhibition values
obtained were 59.13% (25 μg / mL), 60.93% (50 μg / mL), 61.73% (75 μg / mL), 63.86% (100 μg /
mL) and 66.16% (125 μg / mL). The highest antioxidant activity was found at a concentration of
125 μg / mL with an average % inhibition value of 66.16%. The conclusion is the ethanol extracts
of Ascidian Herdmania momus was shown to have antioxidant activity in each concentration of the
test.

Keywords: Ascidian Herdmania momus, Antioxidants, Extraction, DPPH

ABSTRAK
Ascidian Herdmania momus merupakan salah satu komponen biota penyusun terumbu karang yang
mempunyai potensi bioaktif. Senyawa bioaktifnya berfungsi sebagai pertahanan diri dan juga
berfungsi bagi kehidupan manusia, salah satunya dapat dijadikan sebagai sumber antioksidan.
Tujuan dari penelitian ini yaitu, untuk mengetahui aktivitas senyawa antioksidan dari ekstrak etanol
Ascidian Herdmania momus. Ascidian Herdmania momus diekstraksi menggunakan metode
maserasi dengan etanol sebagai pelarut. Sebagai parameter, pengujian aktivitas antioksidan
dilakukan dengan metode DPPH (1,1-diphenil-2-picrylhydarzyl) yang diukur menggunakan
Spektrofotometri UV-Vis dengan variasi konsentrasi 25, 50, 75, 100, dan 125 μg/mL. Hasil nilai %
inhibisi rata-rata yang didapat yaitu 59.13% (25 μg/mL), 60.93% (50 μg/mL), 61.73% (75 μg/mL),
63.86% (100 μg/mL) dan 66.16% (125 μg/mL). Aktivitas antioksidan tertinggi terdapat pada
konsentrasi 125 μg/mL dengan nilai % inhibisi rata-rata 66.16%. Kesimpulan yang didapat yaitu
ekstrak etanol Ascidian Herdmania momus terbukti memiliki aktivitas antioksidan disetiap
konsentrasi pengujian.

Kata Kunci : Ascidian Herdmania momus, Antioksidan, Ekstraksi, DPPH

464
 PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
PENDAHULUAN
Ascidian merupakan salah satu
komponen biota penyusun terumbu karang
yang mempunyai potensi bioaktif, sehingga
menjadikan ascidian target yang sangat menar
ik karena keanekaragamannya yang tinggi dan
unik diantara avertebrata laut karena menghas
ilkan sejumlah besar senyawa yang mengandu
ng nitrogen (Wang and Namikoshi, 2007).
Senyawa bioaktif ascidian berfungsi sebagai
pertahanan diri dan juga berfungsi bagi
kehidupan manusia, yaitu sebagai antikanker,
antiinflamasi, antimikroba dan antioksidan
(Khoeri, 2009).
Antioksidan atau senyawa penangkal
radikal bebas merupakan zat yang dapat
menetralkan radikal bebas, atau suatu bahan
yang berfungsi mencegah sistem biologi
tubuh dari efek yang merugikan yang timbul
dari proses ataupun reaksi yang menyebabkan
oksidasi yang berlebihan. Berbagai bukti
ilmiah menunjukkan bahwa senyawa antioksi
dan mengurangi resiko terhadap penyakit kro
nis seperti kanker dan penyakit jantung koron
er (Prakash, 2001). Radikal bebas merupakan
salah satu bentuk senyawa reaktif, yang
secara umum diketahui sebagai senyawa yang
memiliki elektron yang tidak berpasangan di
kulit terluarnya. Elektron yang tidak memiliki
pasangan cenderung akan menarik elektron
dari senyawa lain, sehingga elektron tersebut
akan dimiliki bersama oleh dua atom atau
senyawa dan terbentuk suatu senyawa radikal
bebas yang baru yang lebih reaktif (Uppu, et
al., 2010). Antioksidan bekerja dengan cara
mendonorkan satu elektronnya kepada
senyawa yang besifat oksidan sehingga
aktivitas senyawa oksidan tersebut bias
terhambat. Antioksidan menstabilkan radikal
bebas dengan melengkapi kekurangan
elektron yang dimiliki radikal bebas dan
menghambat terjadinya reaksi berantai dari
pembentukan radikal bebas (Winarsi, 2007).
Herdmania momus merupakan jenis
tunikata yang soliter, dan jarang keberadaann
ya, bentuk tubuhnya bulat berkisar antara 50-
100 mm. Jenis ini sangat rentan jika disentuh
dan biasanya berwarna 29 merah dengan
perpaduan putih (Hakim, 2014).
Volume 9 Nomor 3 Agustus 2020
Pada penelitian ini dilakukan uji aktivitas
antioksidan ekstrak etanol ascidian
Herdmania momus yang diambil dari Perairan
Pulau Bangka Likupang dengan metode
DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhidrazil).
METODOLOGI PENELITIAN
Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan
November 2019 - Juli 2020 di laboratorium
penelitian lanjutan Program studi Farmasi,
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan
Alam, Universitas Sam Ratulangi.
Bentuk Penelitian
Bentuk penelitian yaitu eksperimen
laboratorium dengan rancangan penelitian
dimana sampel ascidian Herdmania momus
disiapkan dan diekstraksi dengan metode
maserasi menggunakan pelarut etanol
kemudian dilakukan uji aktivitas antioksidan
terhadap DPPH (1,1-diphenil-2-picrylhydarz
yl).
Alat dan Bahan
Alat
Alat-alat yang digunakan pada
penelitian ini yaitu peralatan scuba diving,
kamera, gunting, pisau, wadah botol air
kemasan 600 mL, ziplok, sarung tangan,
telenan, kertas saring, aluminium foil, tissue,
kertas label, cawan petri, gelas ukur,
erlenmeyer, tabung reaksi, baker glass,
vortex, corong, pipet, mikro pipet, timbangan
digital, spatula, oven, spektrofotometer UV-
Vis.
Bahan
Bahan-bahan yang digunakan pada
penelitian ini yaitu Ascidian Herdmania
momus, etanol 96%, serbuk Vitamin C p.a
dan serbuk DPPH (1,1-diphenil-2-picrylhydra
zyl).
Prosedur Penelitian
Pengambilan dan Preparasi Sampel
Sampel ascidian Herdmania momus
diperoleh dari perairan Pulau Bangka
Likupang Kabupaten Minahasa Utara. Sampel
diambil dengan menggunakan alat bantu
465
 PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
(peralatan scuba diving, ziplok dan pisau),
kemudian dimasukkan dalam ziplok dan
diberikan label. Sampel yang telah didapat
langsung dibersihkan dari pengotor, lalu
dipotong kecil-kecil dan langsung
dimasukkan kedalam botol yang berisi pelarut
etanol 96%, dan dimasukkan kedalam cool
box
Ekstraksi dengan Metode Maserasi
Sampel direndam dengan mengguna
kan larutan etanol 96%. Metode ekstraksi
dilakukan dengan cara merendam sampel
dengan larutan penyari selama 3 kali 24 jam
pada temperatur kamar yang dilindungi dari
cahaya dan sesekali dikocok. Kemudian
diambil filtratnya dan residu dibuang dan
menghasilkan 3 filtrat yang kemudian
dicampur menjadi satu. Filtrat tersebut
dipekatkan dengan menggunakan oven pada
suhu 40oC sampai etanol menguap.
Pembuatan Larutan Stok
Sebanyak 100 mg ekstrak etanol
ascidian Herdmania momus dilarutkan
didalam etanol 96% ad. 100 mL (konsentrasi
1000 ppm). Dengan masing-masing konsent
rasi 125 µg/mL, 100 µg/mL, 75 µg/L, 50
µg/mL, dan 25 µg/mL dihitung dengan
menggunakan rumus pengenceran, yaitu :
M1×V1 = M2×V2
Pada kelima konsentrasi, masing-
masing hasil yang didapatkan dari hasil V1
dipipet dan ditambahkan etanol 96% hingga
mencapai tanda batas (10 mL), kemudian
dipindahkan ke dalam tabung reaksi dan
ditutup dengan menggunakan aluminium foil
untuk digunakan pada perlakuan selanjutnya.
Pembuatan dan Pengujian Larutan
Kontrol DPPH
Sebanyak 4 mg serbuk DPPH
ditimbang dan dilarutkan dalam etanol 96%
sebanyak 100 mL. Selanjutnya larutan stok
DPPH dilakukan pengujian kontrol, dengan
diukur serapannya menggunakan spektrofoto
Volume 9 Nomor 3 Agustus 2020
meter UV-Vis pada panjang gelombang
maksimum yaitu 517nm.
Pengujian Aktivitas Antioksidan Esktrak
dengan Metode DPPH
Sebanyak 2 mL ekstrak etanol
Ascidian Herdmania momus dengan
konsentrasi 125 µg/mL, 100 µg/mL, 75
µg/mL, 50 µg/mL dan 25 µg/mL
ditambahkan masing-masing 2 mL larutan
DPPH dalam etanol dan divorteks selama 5
detik. Berubahnya warna ungu menjadi warna
kuning menunjukkan efisiensi penangkal
radikal bebas. Diukur absorbansi pada
spektrofotometer UV-Vis dengan panjang
gelombang 517 nm, setelah diinkubasi selama
30 menit. Kemudian diamati perbandingannya
dengan vitamin C p.a sebagai standar.
Pembuatan dan Pengujian Larutan
Pembanding Vitamin C (p.a)
Larutan Vitamin C ditimbang
sebanyak 10 mg. Kemudian, vitamin C p.a
dilarutkan dalam etanol 96% sebanyak 10
mL, buat larutan stok dengan konsentrasi
yang sama sebelumnya yaitu konsentrasi 125
µg/mL, 100 µg/mL, 75 µg/mL, 50 µg/mL dan
25 µg/mL dengan ditambahkan masing-
masing larutan dengan etanol p.a mencapai
tanda batas (10 mL), dengan pengulangan
sebanyak 3 kali pada masing-masing
konsentrasi. Pada masing-masing konsentrasi
di pipet 2 mL dan ditambahkan larutan DPPH
2 mL, di vorteks selama 5 detik dan
diinkubasi selama 30 menit pada suhu 370C.
Sampel vitamin C p.a diuji pada
spektrofotometer UV-Vis dengan panjang
gelombang 517 nm. Setelah absorbansi
didapat, aktivitas penangkapan radikal bebas
(persen inhibisi) dihitung sebagai persentase
berkurangnya warna DPPH dengan
menggunakan rumus berikut:
% inhibisi = 1- x 100%
Analisis Data
Aktivitas antioksidan di ukur dengan
menggunakan spektrovotometer UV-Vis,
466
 PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
Volume 9 Nomor 3 Agustus 2020

kemudian data yang diperoleh disajikan
dalam bentuk tabel.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil
Penelitian dilakukan pada ekstrak
etanol Ascidian Herdmania momus untuk
mengetahui adanya aktivitas dari penangkal
radikal bebas yang di uji dengan
menggunakan Spektrofotometer UV-Vis.
Data absorbansi sampel ekstrak etanol
Ascidian Herdmania momus, Vitamin C (p.a)
sebagai pembanding dan kontrol DPPH
disajikan pada Tabel 1 dan Data % inhibisi
ekstrak etanol Ascidian Herdmania momus
dan Vitamin C (p.a) sebagai pembanding
disajikan pada Tabel 2 berikut ini :

Tabel 1. Data absorbansi sampel ekstrak etanol Ascidian Herdmania momus, Vitamin C (p.a) dan
Kontrol DPPH

ABSORBANSI
KONSENTRASI PENGULANGAN
Ekstrak dan Vitamin C
I II III
25 µg/mL Ekstrak 0.306 0.303 0.322
Vit. C 0.112 0.111 0.134
50 µg/mL Ekstrak 0.296 0.284 0.310
Vit. C 0.108 0.104 0.110
75 µg/mL Ekstrak 0.297 0.295 0.279
Vit. C 0.101 0.113 0.110
100 µg/mL Ekstrak 0.267 0.293 0.263
Vit. C 0.110 0.111 0.106
125 µg/mL Ekstrak 0.257 0.264 0.249
Vit. C 0.108 0.101 0.100
KONTROL DPPH 0.728

Tabel 2. Hasil pengujian perbandingan Ekstrak Etanol Ascidian Herdmania momus dan Vitamin C
(p.a).

KONSENTRASI PENGULANGAN
RATA -RATA
Ekstrak dan Vitamin C
I II III
Ekstrak 59.70% 60.10% 57.60% 59.13%
25 µg/mL
Vit. C 85.30% 85.40% 82.40% 84.36%
Ekstrak 61.0% 62.60% 59.20% 60.93%
50 µg/mL
Vit. C 85.80% 86.30% 85.50% 85.86%
Ekstrak 60.90% 61.10% 63.20% 61.73%
75 µg/mL
Vit. C 86.70% 85.10% 85.50% 85.76%
Ekstrak 64.80% 61.40% 65.40% 63.86%
100 µg/mL
Vit. C 85.50% 85.40% 86.10% 85.66%

467
 PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
Ekstrak 66.10%
125 µg/mL
Vit. C 85.80%
Pembahasan
Pada Pada penelitian ini, Ascidian
Herdmania momus digunakan sebagai
sampel. Dilakukan Preparasi sampel, sampel
dipotong kecil-kecil bertujuan untuk
memperbesar ukuran permukaan sampel
sehingga proses ekstraksi berjalan optimal
karena semakin luas permukaan sampel maka
interaksi antara pelarut dan sampel semakin
besar (Mardiyah et al., 2014).
Sampel kemudian di ekstraksi
menggunakan metode maserasi. Tujuan
pemilihan metode maserasi karena cara
pengerjaannya yang sederhana dan cepat
namun sudah dapat menarik senyawa kimia
dari sampel dengan maksimal. Keuntungan
utama dari metode ini ialah tidak dilakukan
pemanasan sehingga dapat mencegah
kemungkinan terjadinya penguraian zat aktif
yang terkandung di dalam sampel akibat
pengaruh suhu dan senyawa yang tidak tahan
pemanasan (Sa’adah et al., 2015). Agar
senyawa kimia di dalam sampel dapat
terekstrak secara menyeluruh maka dilakukan
remaserasi atau pengulangan dengan
penggantian pelarut sebanyak tiga kali.
Pemilihan pelarut pada umumnya dipengaruhi
oleh beberapa faktor antara lain selektivitas,
kelarutan, dan titik didih. Pada penelitian ini,
sampel Ascidan Herdmania momus
diekstraksi menggunakan metode maserasi
dan pelarut yang digunakan adalah etanol
96%, alasan pemilihan etanol 96% sebagai
pelarut dalam proses maserasi adalah karena
lebih selektif, tidak toksik, absorbsinya baik
dan dapat mencegah pertumbuhan bakteri dan
jamur (Suryanto, 2012).
Konsentrasi ekstrak etanol Ascidian
Herdmania momus yang digunakan adalah
125, 100, 75, 50, dan 25 µg/mL. Masing-
masing konsentrasi dicampurkan dengan
larutan DPPH. Campuran dihomogenkan dan
diinkubasi selama 30 menit pada tempat gelap
dengan suhu 370C. Setelah sampel diinkubasi,
kemudian masing-masing ekstrak dilakukan
pengukuran absorbansi dengan menggunakan
Volume 9 Nomor 3 Agustus 2020
65.20% 67.20% 66.16%
86.70% 86.90% 86.46%
spektrofotometer UV-Vis pada panjang
gelombang 517 nm. Pada tiap konsentrasi
dilakukan sebanyak 3 kali pengulangan.
Pengukuran aktivitas antioksidan sampel
dilakukan pada panjang gelombang 517 nm
karena DPPH memberikan serapan yang kuat
pada panjang gelombang tersebut.
Berdasarkan hasil yang diperoleh pada
pengujian DPPH persen inhibisi pada ekstrak
etanol Ascidian Herdmania momus dan
Vitamin C disajikan pada Tabel 2 mengalami
peningkatan dari konsentrasi terendah 25
μg/mL yakni 59.13% sampai pada konsentrasi
tertinggi 125 μg/mL dengan nilai rata-rata
66.16%. Peningkatan persen inhibisi ini pada
ekstrak menandakan bahwa semakin besar
konsentrasi ekstrak maka semakin besar
persen inhibisi. Hal ini didukung oleh
penelitian yang dilakukan oleh Hanani et al.,
(2005) yang menyatakan bahwa presentase
penghambatan (persen inhibisi) terhadap
aktivitas radikal bebas akan ikut meningkat
seiring dengan meningkatnya konsentrasi.
Hasil pengujian perbandingan aktivitas
antioksidan ekstrak etanol Ascidian
Herdmania momus dan Vitamin C menun
jukkan bahwa kemampuan penangkal radikal
bebas dari Vitamin C lebih kuat dibandingkan
dengan ekstrak etanol Ascidian Herdmania
momus.
Pembanding yang digunakan sebagai
kontrol positif adalah vitamin C, digunakan
sebagai pembanding karena berfungsi sebagai
antioksidan sekunder yaitu menangkap
radikal bebas, mencegah terjadinya reaksi
berantai, aktivitas antioksidannya sangat
tinggi, mudah diperoleh dan vitamin C lebih
polar dari vitamin yang lain. Vitamin C
mempunyai gugus hidroksi bebas yang
bertindak sebagai penangkap radikal bebas
(Isnindar, 2011). Hasil penelitian
menunjukkan bahwa dengan bertambahnya
konsentrasi ekstrak maka absorbansi sampel
akan menurun dan tingkat inhibisi akan naik.
Absorbansi sampel turun karena elektron pada
DPPH menjadi berpasangan dengan elektron
468
 PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
sampel yang mengakibatkan warna larutan
berubah dari ungu pekat menjadi kuning
bening. Kondisi ini sesuai dengan pernyataan
Green (2004) bahwa nilai tingkat inhibisi
meningkat seiring meningkatnya konsentrasi
sampel dikarenakan semakin banyak senyawa
antioksidan pada sampel yang dapat
menangkal radikal bebas.
KESIMPULAN
Berdasarkan dari hasil penelitian yang
telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa
ekstrak Ascidian Herdmania momus dari
perairan Pulau Bangka Likupang, memiliki
aktivitas antioksidan pada setiap konsentrasi
dan aktivitas antioksidan tertinggi terdapat
pada konsentrasi 125μg/mL dengan nilai
persen inhibisi rata-rata 66.16%.
SARAN
Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut
untuk mengetahui senyawa aktif yang
terkandung dalam ekstrak etanol Ascidian
Herdmania momus dan pengujian aktivitas
antioksidan dengan metode lain FC (Folin-
Ciocalteu), FRAP (Ferric Reducing
Antioxidant Power), RP (Reducing Power)
PV (Peroxide Value), TBA (2-thiobarbituric
acid) dan sebaiknya membandingkan hasilnya
dengan penelitian ini.
DAFTAR PUSTAKA
Green, R.J. 2004. Antioxidant activity of
peanut plant Tissues. North caroline
state university departemen of food
science, Raleigh.
Hakim, M.F.B.A. 2013. Distribusi dan
Keanekaragaman Tunikata (Ascidiace
a) Pada Kondisi Perairan yang Berb
eda di Pulau Badi, Bone Batang dan
Lae-Lae [Skripsi]. Universitas Hasanu
ddin, Makassar.
Hanani E, Mun’im B, Sekarini R. 2005.
Identifikasi Senyawa Antioksidan
dalam spons Callispongia sp. dari
Kepulauan Seribu. Jurnal Ilmu
Kefarmasian. 2 (3) : 127-133.
Volume 9 Nomor 3 Agustus 2020
Isnindar. 2011. Isolasi dan Identifikasi
Senyawa Antioksidan Daun Kesemek
(Diopyroskaki Thunb) dengan Metode
DPPH. Majalah Obat Tradisional. 16
(3) : 157-164.
Khoeri, M. M. 2009. Bioprospeksi Bakteri
Simbion pada Tunikata Didemnum
molle dari Perairan Pulau Sambangan
Karimunjawa Jepara. Universitas
Dipoengoro, Semarang.
Mardiyah, U., Fasya, G. A. Fauziyah, B., dan
Amalia, S. 2014. Ekstraksi Uji
Aktivitas Antioksidan dan Identifikasi
Golongan Senyawa Aktif Alga Merah
Eucheuma spinosum dari Perairan
Banyuwangi. Jurnal Achemy. 3 (1) :
42
Prakash, A., F. Rigelhof., and E. Miller. 2001.
Antioxidant Activity: Medallion
Laboratories. Analithycal Progress.
19(2) : 1-4.
Sa’adah, H., Nurhasnawati, H. 2015.
Perbandingan Pelarut Etanol Dan Air
Pada Pembuatan Ekstrak Umbi
Bawang Tiwai (Eleutherine
Americana Merr) Menggunakan
Metode Maserasi. Jurnal Ilmiah
Manuntung. 1(2) : 149-153.
Suryanto, E. 2012. Fitokimia Antioksidan.
Putra Media Nusantara, Surabaya.
Uppu, R. M., S.N. Murthy., W.A. Pryor., and
N.L. Parinandi. 2010. Free Radical
and Antioxidant Protocols. Humana
Press, New York.
Wang, W., and Namikoshi, M. 2007.
Bioactive Nitrogenous Metabolites
from Ascidians. Heterocycles. 74 : 53-
88.
Winarsih, H. 2007. Antioksidan Alami dan
Radikal Bebas. Kanisius, Jogjakarta.
469