HİSTOLOJİDE KULLANILAN

RUTİN BOYAMA
TEKNİKLERİ

Doç.Dr.Şerife TÜTÜNCÜ
Boyalar amaca göre yapılır.

En basit boyamada hücrenin iki temel bölümü ayrı

renklerde boyanır.
* Çekirdek Haematoksilen,
* Sitoplazma Eosin ile boyanır.

Boyama işlemi sonunda kesitler su içindedir. Kesitlerin

ve boyanın dayanıklı olabilmesi için kapatıcı bir medyum
ile kapatılması gerekir.

Bu amaçla öncelikle kesitlerdeki suyun giderilmesi

gerekir. Suyun giderilmesi amacı ile kullanılan dereceli
alkollerden ve xylollerden geçirilir.
Xylol hem kapatıcı medyum ile uyuşur, hem de dokuları
parlatarak saydamlaştırır.

Kapatıcı medyumdan kesit üzerine bir damla

damlatılarak, lamel ile arada hava kabarcığı
kalmayacak şekilde kapatılır.

Düz bir zeminde kurumaya bırakılır.

Preperatlar mikroskop altında incelenmeye hazırdır.

 BOYA SOLUSYONLARININ
HAZIRLANIŞI

İodin Alkol Solusyonu:

İodine (İyot)……………………2 gr.
%70 alkol……………………..100 ml.

Sodyum Tiyosülfate Solusyonu:

Sodyum Tiyosülfat……………...2 gr.
Distile su…………………………..100 ml.
 Weigert Hematoxylin Solusyonu:

Solusyon A ; Hematoxylin ( Crist)…………….1 gr.

% 95 alkol………………………….100 ml.
Solusyon B ; Distile su……………………………….99 ml.
Demir-3-Klorür………………………1 gr.
(sıvı ile 4 ml.)
HCL (Hidroklorik asit)………….1 ml.
A ve B solusyonları eşit miktarda hazırlanıp
karıştırılır.
Metil Alkol ( Metil Karbonat)
Solusyonu
Distile su……………………...125 ml.
Metil alkol (Metanol)…125 ml.
Az miktarda Sodyum Karbonat
ilave edilir, karıştırılır,
karbonat eritilir.
Asit Fuksin Orange G
Solusyonu
Asitfuksin………………………0,7 gr.
Orange G……………………….0,3 gr.
Distile su................200 ml.
Tymol……………………0,13 gr.
Asetik asit……………2 ml.
Anilin-Blue Solusyonu Asetik Asit Solusyonu

Anilin-Blue………..2 gr Asetik Asit…………..2 ml.

Distile su.………..100 ml
Distile su……...100 ml
Asetik asit……….2 ml.
Phosphotungstic Asit Solusyonu

Phosphotungstic Asit………….3 gr
Distile su…………………...........100 ml.
 Triple Boyama Tekniği
Xylol I………………………………………………..5 dk.
Xylol II………………………………………………5 dk.
Absolu alkol I.……………………………….…3 dk.
Absolu alkol II…………………………………3 dk.
% 96 Alkol………………………………………....3 dk.
%80 Alkol……………………………………………3 dk.
%70 Alkol……………………………………………3 dk.
İodin Alkol solusyonu……………………… 3 dk.
Sodyum Tiyosülfat sol. ………………....30 sn.
Distile suda çalkalama……………………2 şale
Akarsuda yıkama……………………………....5 dk.
Weigert Hematoxylin…………………………8 dk. (boyanın
tazelik derecesine göre)
Akarsuda çalkalama…………………………..5 dk.
Metil alkolde çalkalama……………….1 dk. (yarıyarıya
metil alkol ve su karışımına biraz sodyum karbonat ilave
edilerek hazırlanır veya asit alkol)
Akarsuda yıkama………………………………….5 dk.
Distile suda çalkalama………………………5 dk.
Asit Fuksin………………………………………….1 dk. (5-
10 sn)
Distile suda çalkalama……………………(2 kez)
Phosfotungstic asitle dekolere………15 dk. (bağ doku
beyazlaşıncaya kadar)
Distile suda çalkalama ………………………7 dk.
Distile suda çalkalama ……………………………...7 dk.
Anilin-Blue (Light Gren) de boyama…....1 dk.
Distile suda çalkalama…………………..10-15 sn.
%2 Asetik asitte……………………………....1-5 dk.
Distile suda çalkalama…………………..10-15 sn.
%96 alkolde çalkalama…………………..….2 şale
%100 alkolde çalkalama……………….…...3 şale
Xylolde çalkalama…………………………….…2 şale
Entellan ve lamelle kapatma
 PAS Boyama
Organizmada değişik
karbonhidrat gruplarını
boyama amacı ile kullanılır.
Dokularda PAS
reaksiyonunu tespit etmek
amacı ile alkol içeren
tespitlerin kullanılması
gerekir.
PAS reaksiyonu, periyodik
asidin glikol kalıntıları
üzerinde Schiff reaktifi ile
reaksiyon veren aldehid
gruplarının oluşması
esasına dayanır.
Reaksiyon sonucu mor ya
da lila rengi kompleks
bileşik oluşur.
 PAS BOYASI
Schiff Reaktifinin Hazırlanması
100 cc saf su kaynatılıp hemen
ateşten alınır.
1 gr bazik fuksin içinde eritilir.
Solusyon 60ºCe soğutulur.
Süzülür, 2 gr Na, sülfit ya da
Potasyum meta disülfit(K2S2O5)
ile 20 cc 1NHCL eklenir.
Oda ısısında ya da buzdolabında
18-24 saat bekler.
300 mg aktif kömür konur, 1
dakika kuvvetlice çalkalanır.
2-3 kez süzülür.
0-5ºC de saklanır. Solusyon açık
sarı parlak renkte olmalıdır.
Pembeye dönüşünce atılır.
1N HCL
HCL (%37’lik Konsantre)83.3cc
Safsu…………………………16.7cc
Asit üzerine su konmaz!!!!!!!!!
Yıkama Solusyonu
a) %10’luk K2S2O5 ( 10 cc saf su +
1 gr K2S2O5 )
b) %10N HCL (10 cc) ( 1 cc 1N + 10
cc distile su = %10 N )
Yıkama solusyonu hazırlanırken a
ve b ürünlerinden 10’ar cm3 alınır
üzerine 180 cm3 musluk suyu
eklenir. 3 boya kabına paylaştırılır.
Yıkama solusyonu karışımı her
boyada daima taze olarak
hazırlanmalıdır.
Periodik Asit Solusyonu
Periodik asit (1 gr) + Saf su (100 cc)
 Boyama Prosedürü
Kesitlerin parafini giderilir, suya indirilir.
P.A……………………………………………………30 dakika
Akarsuda………………………10 dakika çalkalanır
Saf su……………………………… 3 kez çalkalanır
Schiff solusyonu (karanlıkta)………30 dakika
Yıkama solusyonu………………3 kere 5 dakika
Akarsu ……………………………………………5 dakika
Harris hematoksilen………………………7 dakika (hazır
boyada süre azalır)
Akarsuda mavileştirme…………………10 dakika
Alkol ve Xylol’lerden geçirilir ve Kapatılır.
Haematoksilen Eosin Boyama Tekniği (Harris)
Hematoxylen alkolde eritilir, ısıtılarak suda eritilen
alumla sıvı haldeki hematoxylen birleştirilir.

Kaynama noktasına kadar bir miktar ısıtılır (1 dk. kadar)

ocaktan indirilir. Civa oksit yavaş yavaş ilave edilir.

Solusyon koyu pembe bir renk alır. Soğuduktan sonra

her 100 ml solusyon için 24 ml. Glacial asetik asit
ilave edilir ( çekirdeğin güzel boyanması için) her
kullanımdan önce solusyon süzülür.
HARRİS HEMATOXYLEN ASİT ALKOL
SOLUSYONUNUN
HAZIRLANMASI HCl .....................1 ml.
% 70 Alkol....100 ml.
Hematoxylen (Crist.)............1 gr.
Absolu alkol.........................10 ml.
Amonyum veya Potasyum AMONYAKLI SU
aluminyum sülfat................20 gr.
Distile su...........................200 ml.
Civa oksit............................0.5 gr. Amonyak....1 ml.
Distile su...............100 ml.
% 1 lik STOK ALKOL-EOZİN SOLUSYONU
HAZIRLANMASI

Eozin......................... 1 gr.
Distile su................20 ml. (Eozin suda eritilir)
% 96 Alkol.............80 ml.

BOYA SOLUSYONU (200 ml)

Eozin (Stoktan)......50 ml
% 80 Alkol...........150 ml
Glasial asetik asit....5 ml
HARRİS HEMATOXYLEN-EOZİN BOYAMA

XYLOL III % 80 ALK. % 70 ALK. AKARSU HARRİS ABS. ALK. XYLOL III
15Dakika 3 Dakika 3 Dakika 3 Dakika HEMATOXY. 3 Dakika 5 Dakika
10 Dakika

XYLOL II % 96 ALK. AKARSU ASİT-ALKOL DİSTİLE SU % 96 ALK. XYLOL II

15Dakika 3 Dakika 3-4 kez Daldır 3-4 Kez Daldır 3 Dakika 3 Dakika 5 Dakika

XYLOL I ABS. ALK. EOZİN AMONYAKLI % 70 ALK. % 80 ALK. XYLOL I

15Dakika 3 Dakika 3 Dak. SU 3 Dakika 3 Dakika 5 Dakika
(Doku mavi-
leşinceye
kadar)