Анализ Стероиди

Анализ ‐
ЖЕНСКИ ПОЛОВИ ХОРМОНИ

МЪЖКИ ПОЛОВИ ХОРМОНИ

КОНТРАЦЕПТИВИ

АНАБОЛИ

ПРОТИВОВЪЗПАЛИТЕЛНИ

АНТИАЛЕРГИЧНИ

АНТИАСТМАТИЧНИ

ДИУРЕТИЦИ

ПЕРИФЕРНИ МИОРЕЛАКСАНТИ стеран

ПРЕКУРСОРИ НА VITAMIN D

ЖЛЪЧЕТВОРНИ (ХОЛЕРГИЧНИ)

АНТБАКТЕРИАЛНИ

СЪРДЕЧНИ СТЕРОИДИ
 циклопентанперхидрофенантрен
12
13
17
11 16
1 C D
9
10
2 14 15
8
A B
3 7
5
4 6
Строеж: четири кондензирани пръстена – A, B, C и D.
Хирални (асиметрични) С атоми.

Стероидите са мастноразтворими вещества с тетрациклична базова структура 
стеран (гонан, циклопентаноперхидрофенантрен), която се състои от четири 
съединени пръстена: три циклохексанови и един циклопентанов. 
д р р ц д ц
 Андростан
Основен въглеводород на андрогените

H3C

CH3 H

H H

H
Естран, основен въглеводород на 
естрогените
H3C

H H

H Пръстен А обикновено‐ бензоиден. 
 Прегнан
Основен въглеводород на прогестините и
кортикостероидите
CH3

CH3 H

H H

Н
 Прегнан
21
За означаване конфигурацията на  20
водородните атоми и заместителите на  18 CH3
стероидния скелет се използва алфа‐бета
конфигурация. Водородният атом или  12 17
11 13 16
метиловата група при С13 лежат над  19 CH3
9C
H 14 D 15
равнината на листа и всички заместители и 
водородни атоми, разположени на същата  1
2 10 8
страна на стероидния скелет, на която се 
намират водородният атом или метиловата  3
A
5 BH 7
H
4 6
група  при С13, имат бета‐конфигурация 
(плътна линия) а за всички останали алфa
(плътна линия), а за всички останали, алфa‐ H
конфигурация (прекъсната линия).
Циклоалкановите пръстени на 
стероидите са в конфигурация 
стол
А и В – цис (Н
А и В  цис (Н при С5 
при С5 – beta)
или транс (H
р ( при С5 –
р alfa))
В и С – транс
С и D – в повечето транс
 12 13 17
2 11 D
1
10 9
C
A B 8 14 15 16
3 4 6
5 H7 H
H
А и В trans
5 alfa - Androstane

12 13 17
11 D
1
10 9
C
B 8 14 15 16
А и В cis H2 5
H7 H
3 4

5 beta - Androstane
 Общи аналитични подходи за анализ на лекарства –
СТЕРОИДИ:

11. Тестове за идентичност:

а/ ИЧ-спектрофотометрия;
б/ УВ-спектрофотометрия;
в/ тънкослойна хроматография;
г/ качествени реакции.

2. Тестове:
а/ определяне на физико-химични константи-най-често специфично
оптично въртене
б/ определяне на рН;
в/ определяне
р д на органични
р примеси
р и сродни
р д вещества
щ чрез
р ТСХ
или НPLC .

3 Определяне
3. О ре е е наа количествено
о ес е о съдържание
с р а е –най-често
й УВ
УВ-
спектрофотометрично и течнохраматографски.
 Структури и някои представители
.
Естрогени и производни OH
CH3
Estradiol .

H
Estradiol е основен женски полов хормон, 
естествено продуциран в женския 
организъм Неговата функция е да подържа
организъм. Неговата функция е да подържа  A H H
репродуктивната система. При менопауза 
нивата на хормона се понижават, тъй като  HO
яйчниците спират овулацията Във времето
яйчниците спират овулацията. Във времето, 
по‐ниските му нива могат да доведат до 
остеопороза. естра‐1,3,5(10)‐триен‐3,17b‐диол
Стероидни лекарства с ароматен пръстен А
OH
CH3 H
Ph Eur E t di l B
Estradiol Benzoate
t
H
O
H H
O

17b‐Hydroxyestra‐1,3,5(10)‐trien‐3‐yl benzoate
Естрогени и производни
Заместителна терапия: при менопауза; за 
развитие на вторичните полови белези; 
регулиране на цикъла; спиране на лактация; 
карцином на простатната жлеза. 
 Ethinylestradiol
Ethinylestradiol е полусинтетично производно на Estradiol.
3-Acetate
3-Benzoate Ph Eur
OH CH
Етери за перорална употреба: CH3
3-methylether (Mestranol);
3-cyclopentylether(Quinestrol). H

H H
HO
19-nor-17a-pregna-1,3,5(10)-trien-20-yne-3,17-diol
( ) i di l
В комбинация с progestogen, като орален контрацептив.
 Производни на 4‐прегнена

Прогестогени  и производни– представители
Прогестините са синтетични структури на естествено срещащия се женски 
р р ду
репродуктивен хормон Progesterone.
р g
O CH3
CH3

CH3 H

H H
O
 Производни на 4‐прегнена

Производни на 19‐Nortestosterone
Norethisterone (Norethindrone)
( )
OH CH
CH3

H H
перорално
р р
H H
O Ph Eur

17-hydroxy-19-nor-17a-pregn-4-en-20-yn-3-one
( 7a et y 9 o testoste o e)
(17a-ethinyl-19-nortestosterone)
Mixture with ethinylestradiol
N thi t
Norethisterone A
Acetate
t t Ph Eur
E
 Norethisterone е прогестин или синтетичен прогестоген.
Той е агонист на прогестероновия рецептор и има слаба
андрогенна и естрогенна активност, най-вече
й при високи
дози.
Norethisterone Acetate CH

CH3 O CH3

H H O

H H
O

Ph Eur, 3‐Oxo‐19‐nor‐17a‐pregn‐4‐en‐20‐yn‐17‐yl acetate
h l

Комбинира се с Еthinylestradiol като орален контрацептив. Основният механизъм 
на това действие е потискане на овулацията чрез инхибиране на гонадотропините
на това действие е потискане на овулацията чрез инхибиране на гонадотропините 
(gonadotropins) хормони.
 OH
Testosterone
Мъжки полови хормони и производни CH3
Естерификацията забавя резорбцията при
интрамускулно приложение CH3 H
и така се удължава ефекта
на лекарството. H H
O Ph Eur

Testosterone Decanoate OCO(CH 2 ) 8 CH 3

Testosterone Propionate OCOCH2CH3
Testosterone Enantate OCO(CH2)5CH3
Testosterone Isocaproate OCOCH2CH2CH(CH3)2
Testosterone Cyclopentylpropionate O CO CH 2 CH 2
 Methyltestosterone
h l
OH
CH3 CH
Ph Eur 3

CH3 H
Androgen; anabolic steroid.
H H
O
17b-hydroxy-17a-methylandrost-4-en-3-one
17b hydroxy 17a methylandrost 4 en 3 one
Methyltestosterone e аналог на Testosterone и наличието на
метилова група в алфа
алфа-конфигурация
конфигурация при С17
блокира окислението на хидроксилната група при
С17 и не се стига д
до андростенедион.
др д
Това дава възможност за пероралин прием на лекарството.
 Ph Eur H d
Hydrocortisone
ti
11b,17,21-trihydroxypregn-4-ene-3,20-dione O
Hydrocortisone Hydrogen Succinate OH
Hydrocortisone
y Acetate CH3 OH
HO
Hydrocortisone Sodium Phosphate
CH3 H

H H
Glucocorticoid
O
противовъзпалителни, Глюкокортикоиди
антиалергични и слаби
б
минералкортикоидни свойства
 Производни на 1 4‐прегнадиена
Производни на 1,4‐прегнадиена
Синтетични O
OH
CH3 OH
Prednisone Ph Eur O

CH3 H
C21 ‐ Acetate
H H

Gl
Glucocorticoid
i id

17,21-dihydroxypregna-1,4-diene-3,11,20-trione
, y yp g , , ,
Подобно на Cortisone - антиалергично и имуносупресивно
лекарство при ревматоиден артрит и астма.
лекарство, астма
Терапевтично приложение намира и Prednisone‐C21‐Acetate.
 Prednisolone
Ph Eur
Prednisolone Sodium Phosphate O
Prednisolone Acetate OH
CH3 OH
P d i l
Prednisolone Pivalate
Pi l t HO

C21-Succinate sodium salt CH3 H

H H
O
11b,17,21-trihydroxypregna-1,4-diene-3,20-dione
Glucocorticoid, активен метаболит на Prednisone
астма, артрити, MS, имуносупресор.
Слаба минералкортикоидна активност, при болест на Адисон.
 Ph Eur Methylprednisolone
Methylprednisolone Acetate
M th l d i l
Methylprednisolone Hydrogen
H d Succinate
S i t O
OH
CH3 OH
C21-Succinate
C21 Succinate sodium salt HO
C21-Phosphate disodium salt CH3 H

H H
O
11b,17,21-trihydroxy-6a- CH3
methylpregna-1,4-diene-3,20-dione
Glucocorticoid

Medrol®, A-methaPred®, Depo-Medrol®, Medrol® DosePak™, Solu-Medrol®

 Betamethasone Ph Eur
Betamethasone Acetate O
Betamethasone Sodium Phosphate OH
CH3 OH
C21 Phosphate disodium salt
C21-Phosphate HO CH3
Betamethasone Valerate CH3 H
C17 Valerate
C17-Valerate
Betamethasone Dipropionate F H
C17,C21-Dipropionate
O
Betamethasone e с противовъзпалително,  Glucocorticoid
противоалергично и имуносупресивно 
дейсвтвие. 
д 9 fluoro 11b 17 21 trihydroxy 16b methylpregna
9-fluoro-11b,17,21-trihydroxy-16b-methylpregna-
1,4-diene-3,20-dione

Халогенирани 1,4‐прегнадиени
 Fluocinolone Acetonide (Synalar)
Fluocinolone Acetonide (Synalar)
Ph Eur
E CH3
O
HO
CH3 O CH3
Това е синтетичен кортикостероид за  HO O
локална употреба в дерматологията. 
CH3 H

F H
Glucocorticoid
O
F
6a,9-difluoro-11b,21-dihydroxy-16a,17-
(1- methylethylidenedioxy)pregna-1,4-diene-3,20-dione
Fluocinolone Acetonide Dihydrate
 Анализ на пръстен А
• Възможностите за анализ на стероиди по
р
пръстен А се основават на спектралните
р им
свойства в UV‐областта. Стероидите могат
да бъдат разделени на 3 групи в зависимост
от спектралните им отнасяния:
 Аналитични подходи при анализ на 
пръстен А.
I
IЕ
I Естрогени, като феноли. 
ф max 281 nm.
28
HO

II 3‐кетостероиди, алфа‐, бета‐ненаситени 
II кетони, които абсорбират в диапазона 239‐
244 nm и имат тясна лента с максимум при 
240 nm. Не се наблюдава абсорбция над 
O 275
275 nm.

III диенова структура и максимум при 238 nm.
II I

O
 Качествена реакция за доказване на фенолна ОН група

OH OH
CH3 - CH3
Estradiol benzoate 1. OH /H2O/t
+
2. H H
H

H H H H
C6H5COO HO
O
Алкална хидролиза на 
Estradiol benzoate до Еstradiol и
OH-
diazotised бензоена киселина. В алкална 
sulfanilic acid
C6H5COOH
OH
среда с диазотирана 
CH3 сулфанилова киселина се 
H
получава червено оцветяване.

H H
HO
N
N

SO3-
Качествени реакции за доказване на производни на 
4‐прегнена и 1,4‐прегнадиена

II

N CONHNH2 N CONHN
O H2O

II I
N CONHNH2 N CONHN
O H2O
Реакциите, които са възможни при типове II и III, 
, д д р
включват този, подход – реакция на Umberger, която 
ц g ,
може да бъде много полезна, ако директното 
измерване на UV при 240 nm не е възможно, напр. в 
замърсени или оцветени разтвори. За това, 
изследваното съединение реагира с хидразид на 
изоникотиновата киселина за да се получат оцветени
изоникотиновата киселина  за да се получат оцветени, 
съответни  хидразони, които имат максимуми при 380 
nm и 405 nm.
 Анализ на пръстен В
Анализ на пръстен В
Доказване на органично свързан флуор
Аналитичните възможности по отношение 
Аналитичните възможности по отношение
на пръстен В са ограничени до флуорните 
заместители, т.е. до частичните структури IV 
F и V Флуорът може да се отдели оксидативно
и V. Флуорът може да се отдели оксидативно 
с помощта на chromsulphuric acid, като така 
полученият флуор се определя по 
IV ox
ox. обичайните методи.
обичайните методи.
F-

Chromsulphuric acid:  калиев дихромат се 
F разтварят в топла дестилирана вода и след 
това бавно се добавя концентрирана сярна 
б б
киселина.
F

V
Аналитични подходи при анализ на пръстен С
Аналитични подходи при анализ на пръстен С
В пръстен С има или хидрокси‐, или 
карбонилна група при С11. Съединенията с 
хидрокси група дават относително 
Prednisolone характерен цвят с концентрирана сярна 
киселина. Карбонилните съединения не 
реагират. Механизмът обаче не е изяснен.
11 ОН‐‐група при С11
ОН група при С11‐‐характерно оцветяване след 
взаимодействие със сярна киселина

Prednison
Prednisone

11 Кето‐‐група при С11
Кето група при С11‐
ру р ‐не се наблюдава 
д
оцветяване след 
взаимодействие със сярна киселина
Анализ на пръстен D
Реактивоспособност и стабилност на стероиди
Реактивоспособност и стабилност на стероиди, 
съдържащи алфа‐кето група при С17.

OH OH
H2C 21 21
O H2 C O
20C 20 C
17 OH 17

D D

17‐Кетостероидите
17 Кетостероидите са чувствителни на окисление.
са чувствителни на окисление.
 C OOH
O2,OH- H
OH
В алкална среда и окисление.
H2C O
C
OH OHC O HOOC OH
O2,HOH C HC
17 OH OH
HOH
O
VII
Al2O3
OH- O С помощта на колонна хроматография с 
CH2OH
алуминиев оксид, стероидите с кетолна 
OH
HC OH OH функция в позиция C‐17 се променят до D‐
C хомокетони.
OH
17 Aнаеробна и аеробна промяна на 
страничната верига при C‐17. Кетолът VII 
р р р
14 претърпява повторно прегрупиране чрез 
енедиол 14 към алдол 15, който се 
разгражда кетон 16.
OHC OH O
HC
OH
17 + HOCH2CHO

15 16
 Възможности за анализ на пръстен D
Възможности за анализ на пръстен D
OH OH
H2C O H2C OH
Съединения с подобна частична  C HC
структура  могат да бъдат  H H
хидратирани с натриев борхидрид
б
NaBH4
до гликоли, които впоследствие
могат да бъдат разградени, 
за а се о а а е
за да се получат алдехиди (1)
(1).
(Norymberski reaction)
NaBiO3
CHO
H

1
Съединения от типа 1 могат да бъдат превърнати в 
хидроксаматен комплекс чрез бензенсулфохидроксамова 
киселина (2) и железни (III) йони. 
В
В алкален разтвор реагентът (2) се смесва отново с 
(2)
бенесулфинова киселина (3)и H‐N=O (Azanone) с 
последваща нуклеофилна атака върху карбонилната 
последваща  нуклеофилна атака върху карбонилната
група в (1). Образува се хидроксинитрозо съединение (4) 
и през хидроксиоксим (5) е в тавтомерна връзка с 
хидроксамовата киселина (6). След това, хидроксамовата 
киселина образува  комплекс с железни (III) йони. 
М
Максимумът на абсорбция на такива комплекси е при 520 
б б 520
nm.
 O O
OH-
S N OH S H + H N O
OH O
2 3

H O
C

+ H N O

O
OH HO C
H C NHO H
C N O
N O

5 6
4
 Хидроксамова проба
Хидроксамова проба

3+
R CO NH OH + Fe

_
R CO NH 3+
O Fe
3
iron(III) hydroxamate

3+
R CO NH OH + Fe
_
R CO NH 3+
O Fe
3
 OH
OH
HC OH
H2 C O
C C
H H

hv
VI
32 + Cl
- + -
N Cl
N
N N
N N
N N

C6 H5
C6 H5

- o TTC 33
TTC 33  фото‐TTC 37 
OH , 30 C

N
NH

N N

TF 35
C6 H5
O
- OH
HC O OOC
C
H H
-
OH

34 36
Алфа‐кетолите VI съществуват в равновесие със свързаните с тях ендиоли 32, 
които се окисляват от TTC 33 до 1,2‐кето‐алдехидното съединение 34, което 
може чрез вътремолекулната реакция на Cannizzaro частично да се получи
може чрез вътремолекулната реакция на Cannizzaro, частично да се получи 
хидрокси киселината 36. Съединение 33 по този начин претърпява редуктивно 
отваряне на хетероцикличния пръстен и се получава червене оцветен 
трифенилформазан TF 35 Тази реакция се използва за колориметричен анализ
трифенилформазан TF 35. Тази реакция се използва за колориметричен анализ 
на кетол‐стероиди. Абсорбцията на тествания разтвор, напр.  Betamethasone и
абсорбцията на референтния разтвор на Betamethasone се измерват при 485 
nm и съдържанието на Betamethasone се изчислява от абсорбцията на разтвора 
nm и съдържанието на Betamethasone се изчислява от абсорбцията на разтвора
и концентрацията на разтвора. Този метод е чувствителен на светлина, 
кислород. Напр., излагането на светлина може да предизвика фотордеструкция 
на TTC д
до TF 35 и ф
фото‐TTC 37 със затворен пръстен.Поради тази причина, тази 
р р р д р ,
реакция се провежда под инертен газ, като азот.
 Реакция с фенилхидразин за доказване на алфа‐кетоли
OH
Porter‐Silver reaction
H2C O Съединения със структура VII дават положителна Porter‐Silver 
C
OH reaction. Подходяща е за охарактеризиране на Betamethasone и
Dexamethasone Загряване на етанолов разтвор на Dexamethasone
Dexamethasone. Загряване на етанолов разтвор на Dexamethasone с 
с
фенилхидразин и сярна киселина ‐ жълт цвят с максимум при 410 
до 420 nm. В киселата среда, първо се извършва т.н. прегрупиране 
на Mattox, започвайки с протонирането на VII и елиминирането на 
р р р
VII вода до 39 и през междинните съединения 40 и 41 до 42. 
Алдехидът 42 кондензира с фенилхидразин 43 до фенилхидразон 
44 който се протонира в киселини до резонансно стабилизирания 
+ H+ H2O катион 45
катион 45.

H
OH O
H2C O OH OH OHC O
C HC OHC
C C C
H H
H
H H

40 41 42
39
 42
+ C6H5NHNH2 H2O

43
NNHC6H5

HC O
C
Алдехидът 42 кондензира с фенилхидразин
44 43 до фенилхидразон 44 който се протонира 
в киселинна до резонансно стабилизирания 
катион 45.
45
H+

NNHC6H5
O +
HC
C H

45
H
N N C6H5
+
HC OH
C
В киселата среда първо се извършва т.н. Претрупиране на 
Mattox, започвайки с протонирането на VII и елиминиране 
на вода до 39 и през междинните съединения 40 и 41, до 42. 
Алдехидът 42 кондензира с фенилхидразин 43 до 
фенилхидразон 44,
44 който се протонира в кисела среда до 
който се протонира в кисела среда до
резонансно стабилизиран катион 45.
Идентичност
IR спектри, цветни реакции или флуоресценсияTCХ. Така, 
страничните продукти и продуктите от деструкция се 
тестват едновременно. 
Пример: Ethinylestradiol ‐ ТСХ, подвижна фаза: етанол:
Пример: Ethinylestradiol ТСХ подвижна фаза: етанол:
толуен (1:9), TCХ плаката се изсушава при 110°С в 
продължение на 10 мин. и се напръсква с 35% разтвор на  
р д р р р
сярна киселина в етанол. Сушени при 110°С за 10 мин.  
Основното петно, получено с тестов разтвор, трябва да 
съответства на това на референтния разтвор по 
отношение на Rf стойност, цвят, флуоресценсия и размер. 
 Стероиди с етинилова група (тройна връзка) при  С17, могат 
да титруват ацидиметрично в присъствие на сребърни йони

HO CH HO C-Ag+
C C
H2O
7AgNO3 6AgNO3

H3O+ + NO3-

Използва се свойството на етиниловата група да образува слабо разтворими 
ацетилиди с метални соли. Това поведение се дължи на електроотрицателността на 
въглерода в тройната връзка ‐ поляризация на C‐H‐връзката. Ethinylestradiol и 
Mestranol се разтварят в тетрахидрофуран и след прибавяне на разтвор на сребърен 
нитрат се титрува с 0,1 N NaOH. Еквивалентният пункт се определя потенциометрично.
Използва се свойството на етиниловата група да образува 
слабо разтворими ацетилиди с метални соли. Това 
поведение се дължи на електроотрицателността на 
въглерода в тройната връзка ‐ поляризация на C‐H‐
връзката Ethinylestradiol и Mestranol
връзката. Ethinylestradiol и Mestranol се разтварят в 
се разтварят в
тетрахидрофуран и след прибавяне на разтвор на 
р р р ру ,
сребърен нитрат се титрува с 0,1 N NaOH. Еквивалентният 
пункт се определя потенциометрично.
Много стероиди показват характерен цвят или 
флуоресценция в присъствието на сярна киселина или р‐
толуенсулфонова киселина особено при нагряване Тези
толуенсулфонова киселина, особено при нагряване. Тези 
реакции се прилагат при ТСХ или идендификация в 
епруветка. Напр., Ethinylestradiol (фенолстероид) в концл 
сярна киселина дава червено‐оранжево оцветяване с 
зеленикава флуоресценция при UV 365 nm. При добавяне на 
вода, цветът се променя във виолетов. Тази реакция е 
Т
относително специфична за фенолстероиди и е известна, 
като Kober reaction.
като Kober reaction.
 + H CH
HO CH H O
C C

+H+

HO HO

Протониране  -H2O
Ethinylestradiol
y (фенолстероид) 
(ф р д)
CH
CH C
C +
+

HO
HO

-4 H

CH
C
+

HO - +C CH HO
2H
Протониране на алкохолната хидроксилна група и 
елиминиране на вода при С17. След това, 
прегрупировка на Wagner‐Meerwein. Метиловата група 
се премества от С13 на С17. Реакцrята продължава с 
дехидрогениране до фулвеново производно. 
до фулвеново производно
Идeнтифициране на Testosterone propionate
OCOCH2CH3

17
H
H+, t
H H
O +O
H

ТСХ – реакция със сярна 
ТСХ +
17
киселина – два флуоресциращи 
катйона.
катйона

+O
H
 Тънкослойна хроматография‐химично 
модифициране
OCOCH3 OH
OH

O O
OH OH
KHCO3,t/MeOH

H H

Cortisone acetat и Hydrocortisone acetat след алкална 

хидролиза на естерната компонента до Cortisone и
Hydrocortisone се хроматографират (ТСХ). 
се хроматографират (ТСХ)
 OH
ТСХ‐химично модифициране
O
OH
17

Hydrocortisone, Prednisone  и Prednisolone –
H Norymberski oxidation, получава се С17 
кетостероид, който се  хроматографира 
(ТСХ). 
NaBiO3 Sodium bismutat 
HOAc в ледена оцетна к‐на
O

17

H
 ТСХ химично модифициране
ТСХ‐химично модифициране

HO O
11 CrO3
H 11
AcOH H
H
F H
F

Triamcinolone acetonise и
Triamcinolone acetonise и Fluocinolone acetonide
Fluocinolone acetonide – ТСХ –
ТСХ –
хидрокси групата при С11 се окислява до кето група.
Анализ на Hydrocortisone Acetate съгласно Европейската 
фар а о е
фармакопея

Външен вид: бял или почти бял, кристален прах.
Външен вид: бял или почти бял, кристален прах.
Разтворимост: практически неразтворим във вода, слабо 
разтворим в безводен етанол и в метиленхлорид.
т.т .: около 220 ° С, с разлагане.
Идентичност:
инфрачервена спектрофотометрия;
инфрачервена спектрофотометрия;
ТСХ (подвижна фаза метанол:метилен хлорид (1:9 V/V) и 
детекия ultraviolet light 254 nm);
детекия ultraviolet light  254 nm); 
разтваряне в сярна киселина ‐ интензивен кафеникаво‐
червен цвят със зелена флуоресценция, която е особено 
интензивна, когато се гледа в UV светлина при 365 nm и 
след разреждане с вода ‐ цветът избледнява и 
флуоресценцията в ултравиолетова светлина не изчезва
флуоресценцията в ултравиолетова светлина не изчезва.
Тестове:
Специфично оптично въртене: + 158 до + 167 (изсушено 
вещество).
вещество)
Сродни вещества: Течна хроматография.
Загуба при сушене: максимум 0,5%, определена на 0,500 g 
чрез сушене във фурна при 105°C.
Количествен анализ:
Р
Разтварят се 0,100 g в етанол (96%) и се разреждат до 100,0 
0 100 (96%) 100 0
ml със същия разтворител. 2,0 ml от този разтвор се 
разрежда до 100,0 ml с етанол (96%). Измерва се абсорбция
разрежда до 100,0 ml с етанол (96%). Измерва се абсорбция  
при максимум на абсорбция при 241.5 nm. Изчислявя се 
количествено, като се взима специфичната абсорбция да е 
395.
Количествен анализ на Testosterone
Количествен анализ на Testosterone съгласно Европейската фармакопея
съгласно Европейската фармакопея
Разтварят се  50,0 mg в алкохол и се разрежда до 100,0 ml със същия 
разтворител. 2,0 ml от този разтвор ‐ до 100,0 ml с алкохол. Измерва се 
абсорбцията при максимума на абсорбция при 241 nm Изчисление –
абсорбцията при максимума на абсорбция при 241 nm. Изчисление 
специфичната абсорбцияда бъде 569.

ASSAY Dissolve 50.0 mg in alcohol R and dilute to 100.0 mL with the same 
ASSAY Dissolve 50 0 mg in alcohol R and dilute to 100 0 mL with the same
solvent. Dilute 2.0 mL to 100.0 mL with alcohol R. Measure the absorbance 
(2.2.25) at the absorption maximum at 241 nm. Calculate the content of 
C19H28O2 taking the specific absorbance to be 569
C19H28O2 taking the specific absorbance to be 569.
Анализ на Prednisolone съгласно Европейската 
фармакопея
И
Идентичност: IR, ТСХ, ,разтваряне в сярна киселина ‐
IR ТСХ
жълт цвят със синя флуоресценция в ултравиолетова 
светлина при 365 nm След прибавяне на вода цветът
светлина при 365 nm. След прибавяне на вода, цветът 
избледнява, но синята флуоресценцията в 
ултравиолетовата светлина не изчезва. 
Сродни вещества. Течна хроматография.
Количествен анализ: Разтварят се 0,100 g в етанол 
(96%) и се разрежда до 100 0 ml със същия
(96%) и се разрежда до 100,0 ml със същия 
разтворител. 2,0 ml от този разтвор до 100,0 ml с 
етанол (96%). Измерва се абсорбция при 
( ) р р ц р
абсорбционния максимум 238 nm. Изчисление ‐
като специфичната абсорбция да бъде 425.
Dissolve 0.100 g in ethanol (96 per cent) R and dilute to 100.0 mL with the same 
solvent. Dilute 2.0 mL of this solution to 100.0 mL with ethanol (96 per cent) R. 
Measure the absorbance (2 2 25) at the absorption maximum at 238 nm
Measure the absorbance (2.2.25) at the absorption maximum at 238 nm. 
Calculate the content of C21H26O5 taking the specific absorbance to be 425.
Prednisolone Tablets съгласно USP

Сродни вещества (Related substances) течна 
хроматография.
Количествен анализ: течна хроматография
Количествен анализ: течна хроматография.
 Кардиотоници:
пряк ефект, повишават силата на сърдечните 
р щ р
съкращения, положителен инотропен 
ефект, т.е. увеличават ударния и минутния 
обем на сърцето систолата се задълбочава
обем на сърцето, систолата се задълбочава, 
диастолата се удължава, като се 
нормализира сърдечния ритъм
нормализира сърдечния ритъм.
 Строеж
Гликон: захарна част, определя степента на 
разтворимост, проникваемост през клетъчните 
мембрани и осигурява белтъчното свързване 
на гликозидите в кръвта и тъканите.
р р
Агликон: незахарна част, определя 
избирателното действие върху сърцето.
Лактонов пръстен: необходим за
Лактонов пръстен: необходим за 
кардиотоничната активност, като осигурява 
сорбцията им върху миокардните влакна.
сорбцията им върху миокардните влакна.
Digitoxigenin Видове Digitalis
g
O O
23
21
22
12
18 CH3 20
17 Digoxigenin
19
CH3 HC
13
O O
1 D 16

2 14
10 OH
A HB OH
12 CH3
HO 3
4 H
CH3 H

H OH
HO
H
 O
O

Git i i
Gitoxigenin
CH3
OH
16
CH3 H

H OH
HO
H
Digitoxose 
Digitoxose

CH3
O OH
4 1
HO
OH
 Digitoxin Ph Eur

Гликозид (Digitoxigenin + 3 молекули b-D-Digitoxose

 Digoxin Ph Eur

Г
Гликозид (Digoxigenin
(Di i i + 3 молекули b-D-Digitoxose
b D Di it
Acetyldigoxin (Lanitilin)
Acetyldigoxin (Lanitilin)
Methyldigoxin (Lanitop)
Methyldigoxin (Lanitop)
 Свойства:
неразтворими във вода; неутрална реакция; 
лесно хидролизират в киселинна среда, а 
под действието на хидроксиди могат да 
изомеризират – отваря се лактоновия 
пръстен, после на ново се лактонизира –
изо‐ съединение, което несъдържа двойна 
връзка в пръстена и няма ефект; захарната 
част, хидролизно се отцепва под действието 
на ензими.
 Цветни реакции за идентифициране на 
сърдечнодействащи гликозиди

• Стероиден скелет
• Реакция на Либерман‐Бурхард – взаимодействие със
смес от оцетен анхидрид и сярна киселина в
съотношение 10:1 получава
10:1‐получава се синьо зелено
синьо‐зелено
оцветяване

• Стероидната структура може да се докаже и чрез

цветна реакция със сярна и фосфорна киселина
 Цветни реакции за идентифициране на СДГ
• Петчленен лактонен пръстен

• Реакция на Легал (червено) оцветяване с натриев

нитропрусид)
• Реакция на Раймонд (виолетово оцветяване с мета‐
динитробензол в алкална среда)
• Реакция на Кедде (виолетово оцветяване с 3,5‐
динитробензоена
• к‐на)
• Реакция на Балжет (оранжево оцветяване с
пикринова к‐на в алкална среда))
 Цветни реакции за идентифициране на 
сърдечнодействащи гликозиди

• Шестчленен лактонен пръстен

 Шестчленният лактонен пръстен се доказва с наситен 
р д
разтвор на антимонов трихлорид в хлороформ.
 И двата типа лактонни пръстени могат да бъдат 
И двата типа лактонни пръстени могат да бъдат
доказани и кол. определени с хидроксамовата проба
Цветни р
Ц реакции
ц за идентифициране
д ф ц р на СДГ
Д
• Дезоксизахари
Реакция на Келер‐Килиани –синьо оцветяване в 
ледена оцетна к‐на с железен трихлорид и конц. 
д ц р р д ц
сярна к‐на. 

Тънкослойнохроматографски 2‐
дезоксизахарите могат да се докажат чрез
проявяване с разтвор на р‐
диметиламинобензалдехид и фосфорна к‐на или
с алкохолен разтвор на ванилин във фосфорна
ф ф к‐
на, при което се оцветяват в синьо.
 Спектрални отнасяния
на сърдечнодействащите гликозиди в УВ‐областта

• Спектроскопски може да се установи вида

на лактонния пръстен, наличието на двойна
връзка в стероидния скелет и да се
определи броят и положението на
различните заместители в него.
Поглъщането при 215‐220 nm е характерно
за петчленния лактонен пръстен, при 300
nm‐за
nm за шестчленния, а при 303
303‐306
306 nm
nm‐за
за
наличие на карбонилна група при С10.
Количествено определяне на сърдечно‐действащи 
гликозиди

• Използват се химични и по‐рядко 
р д
биологични методи. 
• Химични 
Химични – широко се прилага течната 
широко се прилага течната
хроматография и по‐ограничено:
• ‐неводно титруване 
неводно титруване
‐спектрофотометрично определяне 
‐флуориметрично определяне 
Анализ на Digoxin съгласно Европейската фармакопея

Външен вид: бял или почти бял прах, или безцветен кристали.
Външен вид: бял или почти бял прах или безцветен кристали
Разтворимост: практически неразтворим във вода, разтворим в смес от равни 
обеми метанол и метиленхлорид, лесно разтворим в етанол (96%). 
Идентичност:
Инфрачервена абсорбционна спектрофотометрия. 
Тестове:
Външен вид на разтвора: безцветен .
Специфично оптично въртене: + 13,9 до + 15,9 (изсушено вещество).
Сродни вещества: Течна хроматография.
Загуба при сушене и сулфатна пепел.
Количествен анализ: течна хроматография.