Professional Documents
Culture Documents
TIBBI MİKROBİYOLOJİ
ANABİLİM DALI
1
İçindekiler……………………………………………………………Sayfa no:
1-Bölüm hakkında
2-Laboratuar planı…………………………………………………….
3-Numune kabul………………………………………………………
4-Ekim
5-Kültür Değerlendirme
BAKTERİYOLOJİ
b) Uygulanan işlemler
-Boya yapma
-3 şeker(TSI besiyerine alma)
-Seriye alma
-R+
-PYR
-Cihaza alma
-KOH
-Oksidaz
-Aglunitasyonlar( Salmonella,Shigella)
2
a) 3 şeker okuma
b) Seri okuma
c) R+ okuma
d) Ab okuma
e) Wright,Gruber Widal okuma
7-Sonuç bildirme
MANTAR
TBC
PARAZİTOLOJİ
ELISA
9-PARAZİTOLOJİ
3
1.BÖLÜM HAKKINDA
Tanıtım ve Tarihçe
Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı1966 yılında Dr. Mete BABACAN tarafından
faaliyete geçirilmiştir.Daha sonra AnabilimDalı kadrosuna Prof.Dr. Meliha
ERTUĞRUL, Prof. Dr. Ruknettin ÖĞÜTMEN, Prof. Dr. Erdal TUNCEL ve Prof.Dr.
Selahattin LELOĞLU katılmıştır. Anabilim Dalı Başkanlığını 2003 yıından beri
Prof.Dr. Ahmet AYYILDIZ yürütmektedir.2015 Aralıkta Selahattin Çelebi başkan
olmuştur.
Öğretim üyeleri :
Prof.Dr.Selahattin ÇELEBİ
Prof.Dr.Ülkü ALTOPARLAK
Prof.Dr.Hakan USLU
Prof.Dr.Osman AKTAŞ
Prof.Dr.Halil YAZGI
Doç.Dr.Hamidullah UYANIK
Araştırma görevlileri :
Veysel COŞKUN
Hayrunnisa
Çiğdem Eda BALKAN
Kübra ALAY KARA
Sabiha ŞENSÖZ
Esra
AYŞE Erdem YAYLA
İclal
Yavuz ALPER
4
2.LABORATUAR PLANI
5
3.NUMUNE KABUL
Bir örneğin laboratuara ulaşıp ulaşmadığını numune kabul defterinden kontrol edip
öğreniriz.Barkodun tarihinden ve hasta adından kontrol edip gelip gelmediğini
öğrenebiliriz.Çünkü gelen her şey o deftere kaydediliyor.Geldiyse o defterde kaydı
vardır,gelmediyse ya klinikteki görevli gönderdiğini zannediyordur veya pnomotik
sistemde bir arıza sonucu gelmemiştir.
Klinikte hemşire veya doktor tarafından enjektörle alınan kanlar, kan kültür
cihazımızın özel şişelerine onlar tarafından ekilir.Bu şişeleri onların personelleri
6
zaman zaman gelip bizden alırlar.Yine pnomotik sistemden gelen kanlar ayrı bir
kaba konulur,numune kabul odasından barkod çıkarılır,boş kağıda yapıştırılır ve bir
numara atanır.Kan kültürlerinin numune kabul defteri kan kültür cihazlarının
yanındadırKan kültür cihazı pozitif verince cihazdan alınır,ekim odasına verilir.
7
ÇALIŞILAN TESTLER
8
9
10
11
12
13
4.EKİM
14
MK(Mumlu Kavanoz) = Desikatör
Bazı örnekler MK ya koyulur. Pnomokok,Neisseria,H.Influenza gibi Co2’li ortamı severler.
15
(MK)=YAYMA EKİM
BOS: KANL AGARI+EMB+2 ÇİKOLATAMSI (1MK)=ORTA KISMA EKİM
MENİ: KANLI AGAR+EMB+2 ÇİKOLATAMSI (1MK)=ÇİZGİ EKİM
MANTAR: SABOROUT DEKSTROZ AGAR+2TÜP BESİYERİ
(1ODA+1ETÜV)
ANAEROB: ETLİ BUYYONA EKİM
GAİTA: MACCONKEY + SELENİT F EKİM(ERTESİ GÜN
PASAJLANACAK) =ÇİZGİ EKİM
16
5.RUTİN İŞLEYİŞ
1. Sabah ilk olarak elbiseler giyilir.
2. Önceki günden ekilip ekim odasındaki etüv-2 ye kaldırılmış olan ve önceki günden okunmuş
bekletilmesine karar verilmiş olan “ Tarih” adını verdiğimiz Etüv-3 teki örnekler taşıma
arabasına yerleştirilir.
3. Ekim odasındaki etüv-1 deki örneklerden üst raftakiler hızlıca incelenip üreme olanlar taşıma
arabasına yerleştirilir.,üreme olmayanlar ve alt raftakiler yanındaki etüv-2 ye aktarılır.Üst
raftakiler 18:00-22:00 arası ekilen örnekler ertesi güne kadar yeterli inkubasyon süresi geçtiği
için hastaya erken sonuç vermek adına hızlıca inceleniyor ve üreme olanlar değerlendirmeye
alınıyor.22:00 ve sonrası ekilenler ise yeterli süre geçmediği için direkt aktarılıyor.
17
4. Kültürleri içeren taşıma arabası rutin bakteriyoloji laboratuarına getirilir ve ortadaki masanın
yanına koyulur ve asistanlar tarafından kültür okuma yapılır.Bu esnada bir asistan önceki
günden işleme alınmış olan 3 şeker,R+, Enterokok antibiyogram sonuçlarını okumaya
başlar,yeni kültürlerin okunmasına dahil olmaz.Başka bir asistan Vitek-2 cihazına alınmış
olan sonuçları kontrol eder ve sonucunu yazıp “Sonuç girilecek bilgisayarın” yanına
bırakır.Başka bir asistan ise okunan sonuçları girer.
5. Okunan kültürler duruma göre TSİ(3 Şeker) besiyerine,Boyama,R+,cihaz vb. işlemler için
sınıflandırılır.Okuma bitince “Tarih”ler ekim odasının karşısındaki etüve,taşıma arabasıyla
götürülür.Tarihler buradaki etüve kaldırılır.İçlerinde MK(Mumulu kavanoza koyulmuş
kültür) varsa onlar ayrılır ve ekim odasındaki Mumlu Kavanoza(desikatör) koyulur.
6. Her asistan bir işlemi haftaiçinde dönüşümlü olarak yapar.
7. Öğleden sonra ise TSİ besiyerlerinin yanında Indol’den eküvyonla müllere sürüp gr- ab
dizilir.(Aşağıda detayı var)
18
6.KÜLTÜR DEĞERLENDİRME
BAKTERİYOLOJİ
1.
a)Gelen kültürlere yaklaşımlar
İdrar
Besiyerindeki koloniler sayılır eğer en az 100 tane koloni varsa anlamlıdır.100 ve
üzeri için tahmini koloni sayısı belirtilir.
100 koloni= 10 bin koloni
Besiyerinin yarısından az 20 bin,30.40 bin durumuna göre.
Yarısı kadar 50 bin
Yarısından fazla 60,70,80,90 bin koloni.
Yüzeyinin tamamen kaplamış veya koloniler bir bölgeyi silme kaplamışsa 100 bin koloni
denilir.
1.DURUM
Kanlı +
Emb-
19
Boya
Gr+ kok
Katalaz
+ ise - ise
R + işlemine PYR yapılır
+ ise
Enterokok diz
+ - ise
s.aureus KNS Yazılır kağıdına
Koagulaz neg Müllere sürülüp enterokok
Staph. Absi dizilir
20
2.DURUM
Kanlı+
Emb+
21
Gram – bakteridir, koloni sayısı verip 3ŞR( üç şeker) işlemine alınır.
22
3.DURUM
Kanlı-
Emb+
Gr- bakteridir,bizim kanlı besiyerinde sorun var veya kanlıya sürülmemiş.Çünkü embde
üreyen kanlıda kesin üremeliydi.
4.DURUM
Kanlı-
Emb-
Koloni sayısı 100 tanenin altında yani 10 bin koloni kadar bile üreme yoksa üreme
olmadığına kanaat getirip boş küme işareti yazılır kağıdına.
23
24
Kanlıdaki üremeler yetersiz 100 koloniyi bulmuyor,proteuslar aşırı hareketli olduğunda o siyah halka bir
koloni sayılır.
25
5.DURUM
Kanlı da iki farklı koloni
Emb var veya yok
İdrarda iki farklı koloni üremesi durumunda her koloni ayrı ayrı değerlendirilir,eğer
ikisinin sayısı da 10 bin koloniyi buluyorsa “Kontaminasyon” diyip çıkarıyoruz.Eğer
sadece biri 10 bin diğeri daha azsa fazla olanı işleme alıyoruz.
6.DURUM
Sadece kanlıda veya her ikisinde Candida kolonileri
Candikdalar EMB de genelde cüce(silik) koloni yaparlar.Ayrıca tipik bir kokuları
olur.Aşağıdaki plakta tipik candida koloni morfolojisi ve mikroskopta boyandıktan
sonraki görüntüsü :
26
27
28
29
Notlar :
30
KAN
Ekimden hatırlanacağı üzere kan örnekleri Kanlı+EMB,Çikolata ve Çikolata MK ya
ekiliyordu.
1.DURUM
Kanlı+
Emb-
Çikolata+
Çikolata MK+
31
2.DURUM
Kanlı+
Emb+
Çikolata+
Çikolata MK+
32
3.DURUM
Kanlı-
Emb-
Çikolata-
Çikolata MK+
33
4.DURUM
Kanlı+ ikiden fazla koloni
Emb-
Çikolata+
Çikolata MK+
Kanda üreyen tüm bakteriler işleme alındığından.Eğer saf alınabiliyorsa ayrı ayrı alınıp
boyanır ve ilgili işlem uygulanır.Saf alınamazsa pasaj yapılıp ertesi gün devam edilir.
34
5.DURUM
MÜLLERDE DİRENÇLİ DURUM,cihaza alınır.
Notlar :
Boyada kum tanesi gibi Gr- koklar Brucella olabilir, bu yüzden bize bulaşmaması
için çok dikkatli davranılır.
35
PROTEUS ÜREMESİ
ÖRNEK : Hastanın BOS örneğinde aşağıdaki gibi üreme oldu. EMB de 2 tane gr- koloni
ve kanlıda bunlara ek olarak gr+ bakteri şüphesi var. EMB den 3 ŞR işlemine alınır.Kanlı
gr+ şüphesi olanlar boyanır ve yine işleme alınır,eğer koloni azsa ve boyanırsa
kalmayacak korkusu varsa pasaja alınır.
36
37
BALGAM
1.Durum
Kanlı karışık
EMB karışık veya yok
2.Durum
Kanlı karışık
EMB saf
3.Durum
Küf üremesi.Küf boyası yapılır.Yapılışı: Bir bant kesilir koloninin üzerine
dokundurulur,bastırılmaz.Lam üzerine kristal viyole veya metilen mavisi damlatılır,bant
lamın üzerine yapıştırılır.Mikroksop altında 10 luk veya 40 lık büyütmede incelenir.
38
39
40
ASPİRAT
İdrardaki gibi yeterli koloni sayısı olmalıdır.100 makro koloni yani 10 bin koloni.Eğer
varsa boyanır ve işleme devam edilir.
BOĞAZ
Şu an boğaz kültürlerinde rutinimiz AGBHS(s.pyogenes) araştırmak
olduğundan sadece bu bakteri araştırılır. Işığa doğru tutup hemoliz bakılır eğer hemoliz
varsa PYR yapılır.Burada aranılan hemoliz küçük kolonilerin yaptığı geniş
hemolizlerdir.Aşağıdaki resimlere bakınız.
Beklenen hemoliz :
41
42
43
44
45
Aşağıdaki resimlerde ise :
Koloniler büyük,hemolizler kolonilere nispeten küçük,”Normal Boğaz Florası”
PYR + ise görülen hemolizin çokluğuna göre “az/orta/çok AGBHS”olarak
bildirilir. PYR – ise NBF(Normal Boğaz Florası) yazıp çıkarılır.
46
KULAK
Eğer üremesi safsa ileri işleme alınır.Karışıksa karışık boyanıp görülenler
bildirilir.Genelde KNS,difteroid çıkıyor.Mantar üremesi olursa,boyanıp bildirilir.
BURUN
Şu an burun kültürlerinde rutinimiz S.aerus taşıyıcılığı araştırmak.Klinikten
bu bilinerek yollanıyor. Koloniye önce katalaz yapılır,pozitifse koagulaza alınır ve
koagulaz tüpüne “F4” şeklinde numara verilir.Aynı anda Müllere sürülüp
“FOX(sefoksitin)” diski koyulur.Ertesi gün değerlendirilir.Eğer koagulazı
pıhtılaştırmamışsa KNS yazılıp çıkarılır.Pıhtılaştırmışsa SA olduğu kesinleşir.Sonra
Müllerdeki FOX çapına göre eğer
>21 mm ise MSSA
<21 mm ise MRSA diye kağıdına yazılır.
VRE TARAMA
Klinikten bazen tarama için çok miktarda örnek gönderilir veya bazen tek
gönderilir.VRE taramalar teknisyen tarafından safra eskülin VEYA enterokok agara
ekilir. Ertesi gün değerlendirilir.Eğer besiyerinde siyahlaşma olduysa Müllere sürüp
Vankomisin diski koyuyoruz,ertesi gün Vankomisin dirençliyse e-test yapıyoruz.(Müllere
sürüp e-test stripi koyuyoruz ertesi gün 4 ve üzerinden itibaren duyarlılık varsa vre üredi
diyoruz,yine de emin olmak için PYR yapıp enterokok olduğuna karar veriyoruz, 4 ve
altından itibaren açtıysa VRE üreme olmadı diyoruz) .Hoca eğer taramalar sürekli çok
geliyorsa vanko dirençlileri e-test yapmadan VRE üredi diye bildirilebilir,yaralarda ise e-
test kesin yapıyoruz.Vankomisin duyarlıysa “VRE üreme olmadı” diyoruz.
47
48
49
Eskülin agarda siyah kolonileri müllere sürüp vanko direnci araştırıyoruz.
50
Not: Staphlarda artık Vankomisin direnci için disk difüzyon yöntemi geçerli bir yöntem
değil,e-testteki MIC değerine bakılmalı.Ama enterokoklarda hala geçerli bir yöntem.Biz
yine de bakıyoruz staphda : )
E-test değerleri
Staph S I R
≤2 4-8 ≥16
Enterokok
≤4 8-16 ≥32
GAİTA
Gelen gaitalar teknisyen tarafından Macconcey besiyerine hemen
ekiliyordu ve ayrıca Selenit F besiyerine alıp 8 saat bekletip yine Macconcey besiyerine
ekiliyordu.Biz okurken ilk mc concey besiyerinde pembe koloniler görürsek(laktoz+)
normal barsak florası lehine değerlendiriyoruz ve kağıdına “MCEC Selenit F ? ”yazılır.
(Macconceyde E.Coli üredi acaba selenit f pasajı da mı öyle?). Sonra kağıdını pasaj
kağıtlarının toplandığı kaba bırakıyoruz.Ertesi gün selenit f psajından yapılan ekime
bakıyoruz.O da pembe kolonilerse “NBF”(Normal Barsak Florası) diyip çıkarıyoruz.
51
Diğer durumlar:
52
Seriye alınması gereken siyah koloniler
53
VAGEN CER.
Balgam gibi değerlendirilir.Üreme olduysa karışık boyanıp görülenler
bildirilir.
54
ANAEROB KÜLTÜR
Teknisyen tarafından etli buyyon besiyerine ekilen anaerob örnekler resimdeki etüvdeki
kırmızı “ANAEROB” sepetine koyulur(ekim odasının karşısındaki).Bu etüve aynı zamanda sabah
okunan ancak ertesi güne bırakılması gereken asistanlar arasında “Tarih” diye adlandırılan kültürler de
koyulur.”.Değerlendirilirken,bulanıklaşması ve kapağı açılınca pis bir koku gelmesi,fıs diye bir gaz
sıkışıklığı sesi gelmesi beklenir.Bu durumlar yoksa üreme olmadı diyip çıkarılır.Renk bulanıklığı ve
koku varsa varsa özeyle alınıp iki tane kanlıya ekim yapılır.Kanlıların birinde
55
ÖNEMLİ NOT : Tüm kültürler için üreme olmayanları
bekletme süresi aşağıdaki gibidir:
İdrar – 1 Gün
Yara,Balgam,Kulak,Boğaz-2 Gün
Kan,BOS,Vagen-3 Gün
56
b-Uygulanan İşlemler
1-Boya yapma
Uygulamalı gösterileceğinden özetle ;Lamın iki yüzü ateşe tutulur.Sarı kalemle
bölmelendirilir.1damla SFte koloni çözündürülür.Kurutulup Gram boyanır,mikroskopta incelenir.
3-Seriye alma
3 ŞR işlemine ek olarak
Sağdan sola
Citrat
Mannit
Üreaz
MIO
4-R+
Spora koagulaz dolu tüpler yerleştirilir.Sırasıyla numara verilir ve örneğin lab numarası da yazılır
1/765 gibi. Sonra iğne özeyle koloniden alıp tüpte çözündürülür.Koagulaza işlemi bittikten sonra veya
beraberinde müllerle aynı şekilde numaralandırılır ve eküvyonla tüm yüzeye yayılır.Ardından GR+ ab
dizilir.Ertesi gün okunmak üzere etüve kaldırılır.
57
5-PYR
PYR kağıdı kaç tane yapılacaksa ona göre bölünür, koloni yeterli miktarda alınıp sürülür,üzerine
beyaz şişeden 1 damla damlatılır,4-5 dakika sonra mor şişeden damlatılır.Eflatun-mor renk oluşması
PYR+ demektir.
58
6-Cihaza alma
59
7-KOH
Lamın üzerine bir damla KOH damlatılır,sonra koloniden alınıp lamın diğer ucuna
koyulur.Özeyle KOH’tan alıp koloni üzerine sürülür ve “sünüp sünmediği” araştırılır.Sünerse
KOH+ yani gram neg. bakteridir.
60
8-Oksidaz
Bir cam tüpe bir miktar oksidaz şişesinden alınır.Üzeri musluktan suyla tamamlanır.Boş betri
kapağına peçete koyulur ve üzerine cam tüpteki sulandırılmış oksidaz dökülür.Sonra eküvyonla
koloniden alıp peçeteye sürülür,eğer mor renk oluşursa oksidaz +
9-Aglunitasyonlar( Salmonella,Shigella)
Bir lam ikiye bölünür,sarı kurşun kalemle iki tane yuvarlak çizilir içlerine 1 er damla sf
damlatılır.Biri kontrol içindir.Koloniden alınıp ikisinde de çözündürülür.Sonra birine Salmonella veya
shigella polivalan serum damlatılıp aglunitasyona bakılır.Pozitif olursa tiplendirme için diğer serumlarla
aglünitasyon yapılabilir.
61
6-İŞLEM SONUCU OKUMA
a-3ŞR okuma
3ŞR olarak kısalttığımız aslında TSI(Triple Sugor Iron) besiyeridir.Gr- bakterilerin
tanımlanması sık kullanılan bir besiyeridir.
CAZ-CZC veya CTX-CTC çap farkları 5mm’den fazla olursa ESBL+ ibaresi
bakteri adının yazına yazılır.
ETP-60
IMP-29
TPZ-53
CN-2
AK-1
CIP-48
SAM-54
SXT-26
FOX-14
62
1.Durum
Glukoz +
Laktoz+
İndol+
63
64
2.Durum
G+
L+
I-
Miyo yoksa resimdeki gibi koloniler varsa Klebsiella,başka koloni varsa Enterobacter yazılır)
65
66
3.Durum
G+
L-
I+
Kolonisi E.coliye benziyorsa E.coli( Çünkü e.colinin bazı suşları bazen laktozu geç fermente
edebiliyor,biraz daha beklense laktoz pozitif olacaktı)
67
NON FERMENTERLER
1.DURUM
Citrobacter Freundii
Proteus mirabilis
Salmonella( Örnek idrarsa Salmonella demiyoruz)
68
2.DURUM
G-
L-
İ-
Oksidaz yapılır
69
Kok,kokbasil = Acinetobacter Basil= Eğer IMP dirençli,SXT duyarlıysa
Stenotrophomonas maltophilia diyip
Müllere sürüyoruz ve
47(Levofloksasin),26(SXT) koyup ertesi gün
Duyarlılık bildiriyoruz.
70
71
3.DURUM
G+
L-
İ-
H2S İnce bir üreme(Şart değil,aşağıda salmonella paratyphi b üremesi olan hasta
örneği var h2s tamamen kaplamış)
72
Salmonella Paratyphi B çıkan hastamız(Vitek-2) ile doğrulandı)
73
74
75
76
77
78
4.DURUM
G+
L+
H2S+
İ-
Citrobacter freundii
79
80
81
82
Notlar :
83
b-SERİ Okuma
Bu testlere göre deskin üzerindeki tablodan bakteri tipi belirlenir.
84
85
- +
MIO- Mor renk Başka renk Renk değişmezse
86
Çıkan sonuçlara göre tanı koyulan tablolar
87
88
89
c-R+ okuma
İlk bakacağımız şey koagulazı pıhtılaştırmış mı ,sonraki aşamaları şemadan
takip ediniz.
KOGULAZ
+ -
S.A(s.aureus) KNS(Koagulaz neg. Staph)
FOX duyarlılığı
FOX duyarlılığı
<25mm >25mm
MSKNS MRKNS
<21mm >21mm
MSSA MRSA
(Metisilin (Metisilin
Sensitive SA) Resistant SA)
Notlar :
Eritromisin ve klindamisin diskleri yakın dizilip “İndüklenebilir klindamisin
direnci “araştırılır. Eğer Eritromisinle klindamisin diski arasında düz bir hat
oluşursa ikisine de dirençli bildirilir.
Gr+ örnek Vankomisin veya Linezolid dirençli çıkarsa cihaza alınır.(Gr-
olabileceğinden KOH yapılıp Gr+ ise cihaza alınır)
90
d-Enterokok okuma
Çaplara bakılıp yazılır.
Notlar :
91
e-Wright,Gruber Widal okuma
WRİGHT okuma
92
93
Tüplerin dibinde çökelti araştırılır.Tüpleri kaldırıp alttan bakarız.Çökeltinin oluştuğu bulanıklığın
berraklaştığı son tüp bize değeri verir.Yukarıdaki şekilde örneğin “1/80”
94
95
96
İlk tüp 1/20 sonraki tüpler iki kat artarak devam eder.20-40-80-160-320-640-1280-2560
97
7-SONUÇ BİLDİRME
-İdrar kültürleri negatif ise kağıdında boş küme işareti vardır hazır metinlerden “üreme olmadı”
işaretlenir.
-Üreme olmayan veya tipik b hemoliz kolonileri olmayan kültürler “NBF” olarak kağıtta yazar,sisteme
hazır metinlerden “Normal Boğaz Florası” olarak girilir.
Notlar :
Ab bildirirken “Klinik ibaresiyle görülen ” yani yatan hastaların sonuçları yazdırılır.Çünkü
hastane enfeksiyon komitesindeki Intaniye bölümünün hemşireleri her sabah gelip bu sonuçları
alırlar.
Enterokok bildirirken “Gentamisin,Streptomisin yüksek düzey çalışıldı” hazır metinlerden seçilir.
İdrar ve aspiratta koloni sayısı bildirilir.
ESBL+ suş ise hazır metinlerden “ Üretilen suş….” seçilir.
98
8-Vitek 2 cihazı ile ilgili bilgiler
İlk koyduğumuz bölmede vakumlama yapılıp tüplerdeki sıvılar kartlara çekiliyor.Vakum
işlemi bittikten sonra transport bölmesine aktarıyoruz. Biz elimizdeki tüplerin ve kartların bulunduğu
sporu oraya yerleştirince aslında farkında olmadan transport mekanizmasının üzerine koymuş
oluyoruz.Daha sonra cihaz “kesme işlemi” yapmak için sporumuzu hareket ettiriyor,spor hareket ederken
sabit metal bir tel kartların tüplere uzanan plastik borularını kesiyor.Bu işlem bitince kartları “Karosel”e
yüklüyor cihaz.Bizim cihazda 4 tane 15 kart alabilen karosel var,yani 60 tane anda kart
yüklenebiliyor.Kartlar karosele yüklendikten sonra cihaz karoseli çevire çevire bütün testeri yapıyor ve
sonuç veriyor.
Kullanıcı : Admin
Şifre: bmx_admin
login watson9
99
9-MANTAR
100
101
102
103
104
105
106
107
108
10-PARAZİTOLOJİ
Tenia yumurtası
109
110
111
112
113
114
115
116
117
ÖNEMLİ NOTLAR :
118
119
120