北京汇智泰康医药技术有限公司

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微量波动 Ames 试验（Mini-Ames）试剂盒使用说明书

(Cat.No. 0211021)

产品内容（16*96 孔版）
数
包装盒 产品组成 规格 使用说明 保存条件
量
生长培养液 100 mL 4 使用前混匀
S9 反应液 6 mL 1 使用前混匀
使用前加 250 μL 无菌水
甲基磺酸甲酯 3 μL 1
混匀，浓度 12 μL/mL
A盒 敌克松 100 μL 1 450 μg/mL，使用前混匀 室温
2-氨基芴 100 μL 1 200 μg/mL，使用前混匀
环磷酰胺 100 μL 1 30 mg/mL，使用前混匀
96 孔板 / 17 /
生长指示剂 40 mL 1 使用前混匀

组氨酸 100 μL 1
使用前混匀，每 100 mL
生长培养液加组氨酸溶液
生物素 320 μL 1
20 μL；生物素溶液 80 μL；
氨苄青霉素 50 μL。 -70℃下， 可保
氨苄青霉素 200 μL 1
存 1 个月。
B盒
请勿反复冻融。
TA98 菌株 1.0 mL 1 使用前混匀。

TA100 菌株 1.0 mL 1 使用前混匀。

S9 复合物溶液 1.2 mL 1 使用前混匀

试验原理

鼠伤寒沙门氏组氨酸营养缺陷型菌株不能合成组氨酸，故在缺乏组氨酸的培养液

中，仅少数自发回复突变的细菌生长；假如有致突变物存在，则营养缺陷型的细菌回复

突变成野生型，因而能正常生长。微量波动 Ames 试验培养基采用液体培养基，在 96

孔板中培养，通过细菌代谢产物导致培养液酸碱性发生变化，以观察酸碱指示剂颜色变

化判断受试物是否为致突变物。

某些致突变物需要代谢活化后才能引起回复突变，故需加入经诱导剂诱导的大鼠肝

制备的 S9 混合液。

地址：北京市北京经济技术开发区科创 14 街 99 号汇龙森科技园 18 号楼 B 座 1832 室

电话：010-59755330 邮箱：info@iphasepharma.com
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产品说明

本试剂盒提供进行微量波动 Ames 试验所需的所有试剂及沙门氏菌株 TA98、

TA100，

其中所用菌株均经过严格的鉴定。菌株以甘油菌的形式提供，无需活化培养，融化后可

直接使用。
注：本试剂盒不适用于具有杀菌和/或抑菌作用的受试物。不适用于抑制/阻碍哺乳动
物细胞复制系统的受试物。

S9 混合液(2%)及 S9 反应液的配制
S9 混合液 4 mL

S9 反应液 2.88 mL 现用现配。使用时保存于冰

浴中，实验结束后，剩余溶
S9 复合物溶液 1.12 mL 液应丢弃，不可重复使用

S9 反应液 4 mL
S9 反应液 2.88 mL 现用现配。使用时保存于冰浴
中，实验结束后，剩余溶液应
无菌蒸馏水 1.12 mL 丢弃，不可重复使用

试验方法

1） 操作步骤
a) 菌液稀释：
TA98 甘油菌：加生长培养液 50 倍稀释，混匀制成 TA98 菌液生长混和物。

TA100 甘油菌：加生长培养液 10 倍预稀释混匀，取预稀释液加生长培养液 50 倍稀

释制成 TA100 菌液生长混和物。

b) 溶剂

应根据受试物特点选用溶剂，如水、二甲基亚砜(每孔不超过 5 μL)、或其他溶剂

(毒性剂量以下)。所选用溶剂应无诱变性。如需特殊处理，可参考国标方法要求。

c) 对照组

试验应同时设有阳性物对照组、溶剂对照组和未处理对照，并进行添加 S9（活化）

和不加 S9（非活化）两种情况的测试。

各菌株阳性对照使用情况表

S9 TA98 TA100

- 敌克松 甲基磺酸甲酯

+ 2-氨基芴 环磷酰胺
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试验需同时设定阳性对照、溶剂对照和未处理对照：阳性对照为标准诱变剂（2-氨

基芴、甲基磺酸甲酯等）；溶剂对照指使用用于溶解受试物或标准诱变剂的试剂，如水

或二甲基亚砜 (光谱纯或分析纯)等作为对照；未处理对照指仅向生长液中加入菌株生长

混合物，不加入受试物或标准诱变剂。其余试剂加入同上；

d）反应体系配制（10mL/组）
菌液生
生长培 S9 混合 S9 反
处理 长混合 受试物 溶剂 无菌水 阳性底物
组别 养液 物 应液
方式 物 （mL） （mL） （mL） （mL）
（mL） （mL） （mL）
（mL）
阳性对
7.7 2 0.2 / / / / 0.1
照组
未处理
7.7 2 0.2 / / / 0.1 /
活化 对照组
+S9 受试物
7.7 2 0.2 / 0.1 / / /
组
溶剂对
7.7 2 0.2 / / 0.1 / /
照组
阳性对
7.7 2 / 0.2 / / / 0.1
照组
未处理
非活 7.7 2 / 0.2 / / 0.1 /
对照组
化
受试物
-S9 7.7 2 / 0.2 0.1 / / /
组
溶剂对
7.7 2 / 0.2 / 0.1 / /
照组
注：如受试物样品溶剂为水，则可省略未处理对照组处理。

e) 将上述组别按需求加入试剂并混匀加入 96 孔板中，每孔 190μL 添加量，每个组

别共 48 孔， 37℃培养箱静置培养 24 小时后，每孔加入生长指示剂 20μL，继续培养 48

小时后观察结果。

2)结果判定

培养后生长液呈黄色为菌株突变孔，紫色为非突变孔。

① 将未处理对照组的回复突变孔数的 x 值设为基线值，所有受试物组的回复突变

孔数小于基线值 2 倍，判为阴性。

② 测试组的回复突变孔数大于或等于基线值 2 倍，并有剂量反应关系或者至少某

一测试点有可重复的、并有统计学意义的阳性，可判断阳性。

注：明显的阳性结果不需要验证；可疑的结果要改用其他的方法进行验证；阴性结果需

验证（即重复一次），应改变试验的条件，如剂量的间距（改为 5 倍间距）等。

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附：本试剂盒自发回复突变孔数和使用标准诱变剂测试的回复突变孔数，试验结果均符合要
求。
TA98 TA100

自发回复突变孔数 3-15

标准诱变剂 ≥自发回复突变孔数 2 倍

③ 结果判定指示条

阳性 阴性

注意事项

1.试验开始前请自行准备无菌水、移液器、灭菌枪头、10ml、15ml、50mL 离心管、涡

旋振荡器、恒温培养箱等，所有耗材需做无菌处理。

2.试验过程避免交叉污染！

3.本试剂盒只适用于化合物遗传毒性早期筛选，标准遗传毒性 Ames 试验可参考本公司

“0211014”系列产品。

4.仅供科研使用。

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