中国药事 2015 年 5 月 第 29 卷 第 5 期 507

·技术研究·

穿山龙 TLC 鉴别方法的改进研究

王春艳 1，李士栋 2*，张路 2，李民 2，张淹 1（1. 国家胶类中药工程技术研究中心，聊城
252201；2. 山东东阿阿胶股份有限公司，聊城 252201）

摘要 目的：改进《中国药典》2010 年版中穿山龙及其制剂骨龙胶囊中薯蓣皂苷元鉴别方法，为中国药
典标准修订提高提供参考。方法：原薄层色谱法（TLC）鉴别方法采用三氯甲烷 - 甲醇（20 ∶ 0.2）为展
开剂，以 10% 磷钼酸乙醇溶液为显色剂；改进后的方法以石油醚（60~90 ℃）- 乙酸乙酯（4 ∶ 1）为展
开剂，以 10% 硫酸乙醇溶液为显色剂。结果：原方法展开后斑点拖尾，磷钼酸显色后各成分斑点颜色差
异小，斑点不够清晰。方法改进后，薯蓣皂苷元分离良好，重现性好，斑点清晰，其他成分无干扰；在
骨龙胶囊穿山龙的鉴别应用中，效果良好。结论：该方法专属性强、重现性好，可以满足穿山龙和骨龙
胶囊中薯蓣皂苷元的鉴别。

关键词： 穿山龙；骨龙胶囊；薯蓣皂苷元；TLC 法鉴别；中药质量标准；标准提高

中图分类号：R95 文献标识码：A 文章编号：1002-7777(2015)05-0507-04

doi：10. 16153/j. 1002-7777. 2015. 05. 012

Study on the Improvement of TLC Identification of Dioscoreae nipponicae

Wang Chunyan1, Li Shidong2*, Zhang Lu2, Li Ming2, Zhang Yan1 (1. National Engineering Technology Research
Center for Glue of Traditional Medicine, Liaocheng 252201, China; 2. Shandong Dong-E E-Jiao Co., Ltd.,
Liaocheng 252201, China)

Abstract Objective: To improve the identification method of diosgenin in Dioscoreae nipponicae and its
preparations in Chinese Pharmacopoeia (version 2010), and to provide references for revision and perfection of
the standards of Chinese Pharmacopoeia. Methods: The original TLC identification method used chloroform-
methanol (20 ∶ 0.2) as the developing agent, and 10% phosphomolybdic acid with ethanol solution as the
chromogenic agent. The improved method used petroleum ether (60-90 ℃ )-ethyl acetate (4 ∶ 1) as the
developing agent, and 10% sulfuric acid with ethanol solution as the chromogenic agent. Results: Using the
original method, spots were unfolded trailed, the color difference of component spots was small and the spots
were not clear enough after phosphomolybdic acid coloring. After improvement, diosgenin had good separation
and repeatability, and clear spots without interference by other ingredients. Good results were achieved when
this identification method was applied to Gulong capsules. Conclusion: This method has good specificity and
repeatability and can be used for identification of diosgenin in Dioscoreae nipponicae and Gulong capsules.
Keywords: Dioscoreae nipponicae; Gulong capsules; diosgenin; TLC identification; quality standard of
traditional Chinese medicine; standard improvement

基金项目：山东省科技发展计划（经典中药大品中阿胶技术升级）（编号 2013G003190）
作者简介：王春艳，本科；研究方向：中药质量标准研究；E-mail：wangcy@dongeejiao.com
通信作者： 李士栋，专科；研究方向：中药质量标准研究；E-mail：lisd@dongeejiao.com
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穿 山 龙 为 穿 龙 薯 蓣（Dioscorea nipponica 法 [7] 制备供试品溶液。

Makino）的干燥根茎。别名穿山龙、地龙骨、野 2.2 对照品溶液的制备
山药、山常山、土黄连等。性平，味苦，具有活血 照《中国药典》2010 年版一部穿山龙鉴别方法
舒筋、消食利水、祛痰截疟之效。民间多用其浸酒 制备薯蓣皂苷元对照品溶液。
或煎服，治疗筋骨麻木和腰酸腰痛。现代药理研究 2.3 展开系统及显色剂改进前后对比试验
表明穿地龙有调节免疫、改善心血管功能、镇咳、 2.3.1 药典方法
平喘、祛痰等多种药理作用，临床用于治疗类风湿 照 TLC（《 中 国 药 典》2010 年 版 一 部 附 录
性关节炎、冠心病、心绞痛、慢性布鲁菌病、支气 Ⅵ B）试验，吸取上述供试品溶液、对照品溶液各
[1-4]
管哮喘等 。骨龙胶囊是我公司的独家品种，由 3 μL，分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以三氯甲
狗腿骨、穿山龙组成，具有散寒镇痛、活血祛风、 烷 - 甲醇（20 ∶ 0.2）为展开剂，展开，取出，晾
强筋壮骨的功效。近年来，临床上已广泛应用于治 干，喷以 10% 磷钼酸乙醇溶液，在 110 ℃加热 10
疗风湿性关节炎及类风湿性关节炎风寒痹阻，肝肾 min。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置
[5-6]
不足 。穿山龙有效成分是甾体皂苷，包括薯蓣 上，显相同颜色的斑点，但斑点不清晰、分离度差
皂苷、纤细皂苷和水溶性皂苷，总皂苷水解产生薯 （见图 1）。
[1-2]
蓣皂苷元 ，目前穿山龙及其制剂的薄层色谱法
（TLC）鉴别多采用薯蓣皂苷元作对照 [7-9]。本课
题组按 2010 年版《中国药典》穿山龙项下 TLC 鉴
别方法，进行穿山龙 TLC 鉴别研究，发现斑点展
开后拖尾，显色斑点模糊，信息量较差。因此，对
穿山龙中薯蓣皂苷元的 TLC 鉴别方法进行了再研
究，并通过一系列试验建立了更好的 TLC 鉴别方
法，改进后的方法 TLC 色谱斑点清晰、分离度好，
重现性也较好，可用于考察药材的真伪优劣。改进
后的方法应用于骨龙胶囊中穿山龙的 TLC 鉴别，
斑点分离度良好，显色清晰，阴性对照表明其他成
分无干扰。 1 2 3 4

1 试剂与试药 1. 薯蓣皂苷元对照品；2、3、4. 穿山龙药材。

穿 山 龙 对 照 药 材（ 批 号：121378-200401）、 图 1 穿山龙 TLC 色谱图（日光下）
薯蓣皂苷元（批号：111539-200001，供含量测定
用），均购自中国食品药品检定研究院；硅胶 G 2.3.2 改进后的方法
（青岛化工所），试剂均为分析纯，水为纯化水。 照 TLC（《中国药典》2010 年版一部附录 VI
穿山龙从济南市各药店采购，经公司质检中心鉴定 B）试验，吸取上述供试品溶液各 3 μL，分别点
为穿龙薯蓣 Dioscorea nipponica Makino 的干燥根茎。 于同一硅胶 G 薄层板上，以石油醚（60~90 ℃）-
骨龙胶囊（山东东阿阿胶股份有限公司，批号： 醋 酸 乙 酯（4 ∶ 1） 为 展 开 剂， 展 开， 取 出， 晾
131004、131201、140101，规格：每粒装 0.5 g）。 干， 喷 以 10% 硫 酸 乙 醇 溶 液， 在 110 ℃ 加 热 5
2 穿山龙 TLC 鉴别方法研究 min， 分 别 置 日 光 下 和 紫 外 光 灯（365 nm） 下 检
2.1 供试品溶液的制备 视。供试品色谱，在与对照品色谱相应的位置上，
照《中国药典》2010 年版一部穿山龙鉴别方 显相同颜色的斑点（见图 2、图 3）。

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3.3 TLC 鉴别
照 TLC（《中国药典》2010 年版一部附录 VI
B）试验，吸取上述供试品溶液 3 μL、对照品溶
液 3 μL，分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以石油
醚（60~90 ℃）- 醋酸乙酯（4 ∶ 1）为展开剂，展开，
取出，晾干，喷以 10% 硫酸乙醇溶液，在 110 ℃
加热 5 min，分别置日光下和紫外光灯（365 nm）
下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位
置上，显相同颜色的斑点，阴性对照图谱表明其他
成分无干扰（见图 4、图 5）。

1 2 3 4
1. 薯蓣皂苷元对照品；2、3、4 . 穿山龙药材。

图 2 穿山龙 TLC 色谱图（日光下）

1 2 3 4 5
1. 薯蓣皂苷元对照品；2、3、4 . 骨龙胶囊样品；5. 去穿山
龙阴性对照。

图 4 骨龙胶囊穿山龙 TLC 色谱图（日光下）

1 2 3 4
1. 薯蓣皂苷元对照品；2、3、4. 穿山龙药材。

图 3 穿山龙 TLC 色谱图（365 nm）

3 改进后的方法在骨龙胶囊中穿山龙 TLC
鉴别中的应用
3.1 供试品溶液的制备
取骨龙胶囊（批号：131004、131201、140101）
内容物各 2 g，分别加 3 mol·L-1 盐酸溶液 30 mL，
1 2 3 4 5
待其溶解后置水浴中加热水解 30 min，放冷，再加
1. 薯蓣皂苷元对照品；2，3，4. 为批号：131004、131201
三氯甲烷 30 mL，加热回流 15 min，分取三氯甲烷
和 140101 的骨龙胶囊样品；5. 去穿山龙阴性对照。
蒸干，残渣加三氯甲烷 - 甲醇（1 ∶ 1）的混合溶
液 1 mL 使溶解，作为供试品溶液。 图 5 骨龙胶囊穿山龙 TLC 色谱图（365 nm）
3.2 对照品溶液的制备
另取薯蓣皂苷元对照品加甲醇制成质量浓度为 4 讨论
-1
1.0 mg·mL 的溶液，作为对照品溶液。 按《 中 国 药 典 》2010 版 穿 山 龙 TLC 鉴 别

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方 法 试 验， 斑 点 拖 尾， 且 欠 清 晰。 曾 试 用 展
开 系 统 三 氯 甲 烷 - 丙 酮（97 ∶ 3）
[12-13]
甲 烷 - 甲 醇（12 ∶ 1） 、三氯甲烷-甲醇
[14]
（20 ∶ 0.2） 、 氯 仿 - 乙 酸 乙 酯 - 甲 醇 - 水
[8,15]
（2.5 ∶ 4 ∶ 3 ∶ 0.3） 、甲苯 - 乙酸乙酯 - 甲
[16]
酸 - 水（13 ∶ 7 ∶ 2 ∶ 0.2）
离度。又根据薯蓣皂苷元性质，试用环己烷 - 醋酸
乙酯（4 ∶ 1）、环己烷 - 醋酸乙酯（2 ∶ 1）、环
己烷 - 醋酸乙酯（10 ∶ 1）、石油醚（60~90 ℃）
- 醋酸乙酯（4 ∶ 1）等展开系统，进行研究，结果
表明，以石油醚（60~90 ℃）- 醋酸乙酯（4 ∶ 1）
为展开剂，重复性好，斑点分离良好，不拖尾。
《 中 国 药 典》2010 版 穿 山 龙 TLC 鉴 别 显 色 剂 为
10％磷钼酸乙醇溶液，显色后只可在日光下观察，
斑点不够清晰；改用 10％硫酸乙醇溶液为显色剂，
显色效果更好，日光下观察薯蓣皂苷元鉴别斑点显
色清晰，置紫外 365 nm 下观察也可见清晰薯蓣皂
苷元鉴别斑点，且紫外光下鉴别斑点明显增多。
改进的方法应用于骨龙胶囊中穿山龙 TLC 鉴
别，在日光下直接观察或紫外光灯（365 nm）下两
种方式观察，结果均良好，鉴别意义更大。
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（收稿日期 2014 年 11 月 25 日 编辑 钟建国）
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