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GC-MS 法测定苯磺酸氨氯地平原料药中水合肼的含量
黄伟民1 　 黄伟静2 　 陈伟翰2 　 (1. 广州市海珠区食品药品检验所　 广州 510290;2. 广州大光制药有限公司)

摘　 要　 目的: 建立 苯 磺 酸 氨 氯 地 平 原 料 药 中 基 因 毒 性 杂 质 水 合 肼 含 量 的 GC-MS 方 法。 方 法: 采 用 DB-35MS ( 30 m ×

0. 25 mm,0. 25 μm) 分析柱,程序升温:65 ℃ 保持 3 min,以 25 ℃ ·min -1 升温至 250 ℃ ,保持 3 min,进样口温度为 250 ℃ ;载气
( 氦气) 流速为 1. 3 ml·min -1 ,以 25 ∶ 1 的分流比进样,进样体积为 1 μl。 水合肼在丙酮-冰醋酸条件下进行衍生化反应,在
SIM 的扫描模式下对水合肼衍生物进行分析,其定量离子为 m / z 112。 结果: 所测的水合肼衍生物在 0. 03 ~ 1. 50 μg·ml -1 浓
度范围内线性良好( r = 0. 997 2) ,检测限为 0. 006 7 μg·ml -1 ,定量限为 0. 02 μg·ml -1 ,分析方法的专属性、重复性、中间精密
度、准确度、溶液稳定性、耐用性等验证参数均在指导原则的规定范围内。 结论: 该 GC-MS 定量方法准确度高、重复性好、耐
用性强,可用于苯磺酸氨氯地平原料药中水合肼的杂质检测。
关键词　 苯磺酸氨氯地平;水合肼;衍生化;基因毒性杂质;气相色谱联合质谱
中图分类号:R927. 1　 文献标识码:A　 　 文章编号:1008-049X(2021)01-0202-04

Determination of Hydrazine Hydrate in Amlodipine Besylate Raw Material by GC-MS

Huang Weimin1 , Huang Weijing2 , Chen Weihan2 ( 1. Food and Drug Inspection Institute of Guangzhou Zhuhai District, Guangzhou
510290, China; 2. Guangzhou Daguang Pharmaceutical Co. Ltd. )
ABSTRACT　 Objective: To develop a GC-MS method for determining the content of hydrazine hydrate in amlodipine besylate.
Methods: A DB-35MS (30 m×0. 250 mm,0. 25 μ m) column was used, the column temperature was kept at 65 ℃ for 3 min, and
then raised at 25 ℃ ·min -1 until the temperature reached 250℃ , and then kept for another 3 min, and the temperature of injection in-
let was set at 250℃ . The flow rate of carrier gas ( helium) was 1. 3 ml·min -1 , the sample was injected at a split ratio of 25 ∶ 1, and
the injection volume was 1 μl. Hydrazine hydrate was derivatized under the condition of acetone and glacial acetic acid. The quantita-
tive ion m / z 112 was scanned in the scanning mode of SIM. Results: The derivative product of hydrazine hydrate showed good linearity
within the concentration range of 0. 03-1. 50 μg·ml -1( r = 0. 997 2) . The limit of detection and quantification was 0. 006 7 μg·ml -1
and 0. 02 μg·ml -1 ,respectively. All the validation parameters of the method including specificity, repeatability, intermediate preci-
sion, accuracy, solution stability and durability met the required acceptance of relevant method validation guidance. Conclusion: The
GC-MS method has the advantages of high accuracy, good repeatability and strong durability. It can be used for the determination of
hydrazine hydrate in amlodipine besylate.
KEY WORDS　 Amlodipine besylate; Hydrazine hydrate; Derivatization; Genotoxic impurity; GC-MS

　 　 苯磺酸氨氯地平是二氢吡啶类钙拮抗药 [1] ,作 特异性特质,建立了气质联用 ( GC-MS) 方法,通过

为外周血管动脉扩张药物,直接作用于血管平滑肌, 丙酮与冰醋酸的衍生化处理后,对苯磺酸氨氯地平
降低外周血管阻力,从而降低血压,是治疗高血压的 原料药中的水合肼进行分析。
首选药物之一 [2] 。 水合肼具有强碱性与还原性,常 1　 仪器与试药
用于药物合成。 在苯磺酸氨氯地平的合成过程中, 1. 1　 仪器
水合肼是氨氯地平的制备原料之一 [3,4] ,因此,苯磺 7820A-5977E 气相色谱-质谱联用仪( 美国 Agi-
酸氨氯地平的原料药中可能含有水合肼残留。 水合 lent 公司) ; BS224 型电子 分 析 天 平 ( 德 国 Sartorius
肼是一种高毒物质,国际化学安全项目及综合风险 公司) ;PS-40A 型超声波清洗机 ( 浙江石浦海天电
信息系统将肼定义为 B2 分级,即可能引起人类致 子仪器厂) ;16700 型涡旋混合器( 美国 Scientific in-
癌的物 质 [5] 。 水 合 肼 或 其 蒸 气 可 经 呼 吸 道、 消 化 dustries 公司) 。
道、皮肤吸收进入体内,对神经系统、肝、肾等均能产 1. 2　 试药
生严重的不良影响 [6] 。 因此,肼类物质在药物中的 水合肼 ( 阿 法 埃 莎 化 学 试 剂 有 限 公 司, 批 号:
残留受到严格控制。 5003K29U,含量 99. 5%) ;丙酮( 天津市科密欧化学
目前,水合肼的分析 检 测 方 法 有 HPLC 法 [5] 、 试剂有限公司,批号:20171101,含量 99. 9%) ;冰醋
GC 法 [7] 、分光光度法 [8,9] 等,并且色谱法中通常采 酸( 天 津 市 科 密 欧 化 学 试 剂 有 限 公 司, 批 号:
用衍生化方式进行样本处理 [10,11] 。 本方法综合之 20160109,含 量 99. 5%) ; 苯 磺 酸 氨 氯 地 平 原 料 药
前的色谱方法优势及质谱高灵敏度、高选择性及高 ( 批号:18090101、18090102、18090103) 和中间体氨
通信作者:黄伟民　 Tel:(020)34038672　 E-mail:45366563@ qq. com

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中国药师　 　 2021 年第 24 卷第 1 期　 　 China Pharmacist 2021, Vol. 24　 No. 1

氯地平 ( 批号:Z090101、Z090102、Z090103) 由国内

某制药股份有限公司提供。
2　 方法与结果
2. 1　 溶液配制
2. 1. 1　 空白溶液　 精密量取 400 ml 丙酮和 100 ml
冰醋酸置溶剂瓶中,振摇使其混合均匀,即得空白
溶液。
2. 1. 2　 对照品溶液　 精密称取 20. 00 mg 水合肼置
于 20 ml 量瓶中,加入适量空白溶液至溶解,再定容
至刻度,超声(240 W,40 kHz)10 min,既得水合肼衍
生物的母液;精密移取 1 ml 水合肼衍生物母液置
100 ml 量瓶中,加入空白溶液定容至刻度,振摇,配
制成浓度为 10. 00 μg·ml -1 的储备液;再精密移取
10. 00 μg·ml -1 的储备液 2 ml 置于 20 ml 量瓶中,
加入空白溶液定容至刻度,振摇,即配制成浓度为
1. 00 μg·ml -1 的对照品溶液。
2. 1. 3　 供试品溶液　 精密称取 400. 00 mg 苯磺酸
氨氯地平原料药样品置 10 ml 量瓶中,加入空白溶
液定容至刻度,超声 ( 240 W,40 kHz) 10 min 后用
0. 22 μm 孔径的滤膜过滤,即得供试品溶液。
2. 1. 4　 含对照品的供试品溶液　 精密量取 10. 00
μg·ml -1 的储备液 1 ml 置于 10 ml 量瓶中,加入上
述供试品溶液定容至刻度,振摇,即配制成浓度为含
1. 00 μg·ml -1 对照品的供试品溶液。
2. 2　 分析条件
2. 2. 1 　 色 谱 条 件 　 采 用 DB-35MS 柱 ( 30 m ×
0. 25 mm,0. 25 μm) ;升温程序:65 ℃ 保持 3 min,以
25 ℃ ·min -1 升温至 250 ℃ ,保持 3 min;进样口温
度:250 ℃ ;流速:1. 3 ml·min -1 ( 氦气) ;分流比:25
∶ 1;进样体积:1 μl。
2. 2. 2　 质谱条件　 离子源温度:230 ℃ ;四级杆温
度:150 ℃ ; 扫 描 模 式: SIM; 定 量 检 测 离 子 质 荷 比
( m / z) 为 112。 A. 水合肼定量质谱图　 B. 空白溶液　 C. 供试品溶液
2. 3　 方法学考察 D. 含 1. 00 μg·ml -1 对照品的供试品溶液
2. 3. 1　 系统适用性及专属性考察　 按“2. 2” 项下 图 1　 水合肼专属性考察色谱图
条件进行分析,其中对照品溶液平行配制 6 份,进样 间,此时得到水合肼的检测限为 0. 006 7 μg·ml -1 。
测定,进行系统适用性考察;分别对空白溶液、供试 水合肼衍生物对照品溶液用空白溶液逐级稀释至信
品溶液、含 1. 00 μg·ml -1
对照品的供试品溶液进 噪比( S / N) 至 8 ~ 10 之间,此时得到水合肼的定量
样进行专属性考察。 结果显示,对照品溶液峰面积 限为 0. 02 μg·ml -1 。
的 RSD 为 3. 1%( n = 6) ,保留时间的 RSD 为 0. 1% 2. 3. 3　 线性考察　 精密移取适量水合肼衍生物储
( n = 6) ; 空白溶液对水合 肼 衍 生 物 出 峰 位 置 无 干 备液,用空白溶液分别将储备液稀释至 1. 50,1. 25,
扰,供试品( 苯磺酸氨氯地平原料药) 溶液中未出现 1. 00,0. 50,0. 10,0. 03 μg · ml -1 , 制得系列线性标
水合肼衍生物的干扰峰,见图 1。 准溶液,按“2. 2” 项下条件进行分析。 以水合肼衍
2. 3. 2　 检测限和定量限　 水合肼衍生物对照品溶 生物溶液浓度( X,μg·ml -1 ) 与对应的峰面积( Y) 绘
液用空白溶液逐级稀释至信噪比( S / N) 至 2 ~ 4 之 制标准曲线,其拟合方程为:Y = 25 667X + 411. 93( r

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= 0. 997 2) ,结果表明,水合肼在 0. 03 ~ 1. 50 μg· 氯地平,按照供试溶液配制方法进行配制,按已建立

ml -1
浓度范围内线性关系良好。 的 GC-MS 方法进行原料药中水合肼的含量检测。
2. 3. 4　 重复性与中间精密度　 精密移取水合肼衍 苯磺酸氨氯地平原料药均未检测到水合肼衍生物,
生物储备液 1 ml,置于 10 ml 量瓶中,用供试品溶液 而在苯磺酸氨氯地平中间体中检出略高于定量限的
将储备液稀释定容,得到浓度为含 1 μg·ml -1
水合 水合肼衍生物,结果见表 2。
肼衍生物的供试品溶液,平行制备 6 份,按“2. 2” 项 表 2　 苯磺酸氨氯地平原料药及中间体中
下条件进行分析。 结果得到水合肼衍生物的平均回 的水合肼含量( μg·ml -1 ,n = 2)
收率为 102. 15%,RSD 为 3. 0%( n = 6) 。 苯磺酸氨氯地平批号 含量 氨氯地平批号 含量

由另一实验员在同一台气质联用仪上再次进行 18090101 0. 019 Z090101 未检出

0. 022 未检出
重复性考察,结果得到水合肼衍生物的平均回收率 18090102 0. 024 Z090102 未检出
为 98. 5%,RSD 为 3. 4%( n = 6) ;重复性与中间精密 0. 028 未检出
度回收率的 RSD 为 3. 6%( n = 12) 。 18100103 0. 019 Z090103 未检出
0. 027
2. 3. 5　 回收率　 精密移取适量水合肼衍生物储备
未检出

液,加 入 供 试 品 溶 液 将 其 稀 释 为 0. 50, 1. 00, 1. 50 3　 讨论

μg·ml -1 含水合肼衍生物的供试品溶液,每组平行 3. 1　 检测方法的确定
配制 3 份样品。 结果得到水合肼衍生物的平均回收 在水合肼检测方法的摸索过程中,曾尝试采用
率为 96. 2%,RSD 为 4. 2%( n = 9) 。 碘滴定法及分光光度法进行测定,但方法的灵敏度
2. 3. 6　 溶液稳定性　 将水合肼衍生物对照品溶液 均较低,难以用于药物中的水合肼含量测定。 质谱
和含 1. 00 μg·ml -1
水合肼衍生物的供试品溶液在 专属性强、灵敏度高,已成为制药业不可或缺的分析
室温下分别放置 0,2,4,8,16,24 h 后进样分析。 结 检测工具。 水合肼的分子量较小,因此考虑采用气
果得到两溶液稳定性的 RSD 分别为 3. 6% 和 2. 8% 质联用方法。
( n = 6) 。 3. 2　 色谱条件与前处理方法的建立
2. 3. 7　 耐用性　 对不同气体流速(1. 1 ml·min 、 -1
由于水合肼的沸点为 120. 1℃ ,最初将进样口
1. 5 ml·min -1 ) 、柱温起始温度(60 ℃ 、70 ℃ ) 、色谱 温度设置为 150 ℃ ,升温程序为柱温箱温度 90 ℃ ,
柱( HP-35 ms、ZB-35) 进行耐用性考察,每个条件下 保持 3 min, 以 20 ℃ · min -1 升 温 至 150 ℃ , 保 持
各平行配制 2 份含 1. 00 μg·ml -1 水合肼衍生物的 3 min,并采用不分流的形式进样,分别使用 DB-1、
供试品溶液进行测定,RSD 为 4. 8% ( n = 12) ,具体 DB35、FFAP 等不同极性的色谱柱进样考察,水合肼
结果见表 1。 均无响应。
表 1　 测定苯磺酸氨氯地平中水合肼含量的 水合肼在高温下易分解成 N2、NH3、H2,而气质
GC-MS 方法的耐用性结果 离子源温度基本在 200 ℃ 以上,水合肼很容易被分
测定条件 样品名称 回收率( %)
解,因此考虑采用衍生化方法进行检测。 水合肼在
气体流速( ml·min -1 )
　 　 　 1. 1 sample 1-1 105. 3 丙酮-冰醋酸作用下可产生二丙酮腙,分别考察在不
sample 1-2 95. 2 同体积比的丙酮-冰醋酸混合溶液(2 ∶ 1,4 ∶ 1,10 ∶
　 　 　 1. 5 sample 2-1 102. 4
1,20 ∶ 1) 情况下,在不同超声时长( 3,5,10 min) 情
sample 2-2 106. 2
柱温起始温度( ℃ ) 况下,水合肼的衍生化效果。 综合考虑,确定了在
　 　 　 60 sample 3-1 108. 2 DB35 色谱柱条件下,丙酮-冰醋酸比例为 4 ∶ 1,超
sample 3-2 97. 5
声时长为 10 min 时的衍生化效果最佳。 经软件匹
　 　 　 70 sample 4-1 106. 4
sample 4-2 103. 8 配,水合肼在丙酮-冰醋酸的衍生化作用下的衍生物
色谱柱 为二丙酮腙。
　 　 　 HP-35ms sample 5-1 99. 6
3. 3　 小结
sample 5-2 98. 2
　 　 　 ZB-35 sample 6-1 95. 5 本次研究通过水合肼在丙酮-冰醋酸的衍生化
sample 6-2 94. 7 作用下,成功建立了可检测苯磺酸氨氯地平原料药
2. 4　 样品检测 中水合肼含量的 GC-MS 检测方法,该方法专属性
分别称取 3 个不同批次的苯磺酸色氨氯地平原 强、准确度高、专属性好、耐用性强,可为其他药物中
料药及 3 个不同批次的苯磺酸氨氯地平中间体-氨 水合肼的含量测定提供参考。

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( 上接第 183 页)
显延长;与 SL 纳米脂质体相比,TMC60 包覆后,可
进一步增加主药在兔眼房水及角膜的生物利用度。
在房水及角膜中,两种 SL 纳米脂质体的 T max
一致,说明 SL 释放的限速步骤为纳米脂质体,而不
是 TMC60 包衣层。 同时,两种 SL 纳米脂质体在角
膜中的 T max 为 20 min,明显短于在房水中的 T max(45
min) ,说明角膜对 SL 有一定的储库作用,使 SL 延
A 缓进入房水,起到长效作用,同时也说明 SL 从载体
中释放后主要以角膜途径吸收而发挥治疗作用。

参 考 文 献

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中国药师,2009,12(4) :453-454
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图 3　 单次给药后 SL 在房水、角膜中的药-时曲线( n = 4) 其体外释药考察[ J] . 中国医院药学杂志,2012,32(7) :513-516

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眼部给药系统以发挥局部治疗作用为主,但由 5　 宋玲,何文. N-三甲基壳聚糖包覆乳酸司帕沙星纳米脂质体体外

于泪液的稀释作用,普通滴眼液有约 70% 会随泪液 角膜渗透性及抗菌性[ J] . 中国药师,2016,19(5) :863-866

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从眼部溢出,降低主药的利用率。 而纳米粒、脂质体
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纳米脂质体及 TMC60 包覆 SL 纳米脂质体可显著增
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加 SL 在房水、角膜中的生物利用度,而滞留时间明 (2020-06-02 收稿　 2020-08-13 修回)

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