第9期 燕禹辛，等： 盐酸环喷托酯有关物质测定方法研究 · 87·

盐酸环喷托酯有关物质测定方法研究
燕禹辛，邢科，刘学艳
（ 山东绅联药业有限公司，山东 济南 250000）

摘要： 建立高效液相色谱法测定盐酸环喷托酯的有关物质。色谱柱为 YMC Triart C 8（ 4．6×250 mm， 5 μm） ； 流动相 A 为 0．2 mol / L 磷酸氢
二铵 +0．1 mol / L 庚烷磺酸钠（ 磷酸调 pH 值 = 3．0） ，流动相 B 为乙腈，梯度洗脱； 流速 1．0 mL / min； 检测波长为 220 nm； 进样体积为 20 μL；
柱温为 30 ℃ 。在选定的条件下，盐酸环喷托酯与已知杂质 A、B、C、E、H 分离度良好； 杂质 A、B、C、E、盐酸环喷托酯分别在 0．2171 ～
2．1714，
0．2046 ～ 2．0465，0．2151 ～ 2．1514， 0．2068 ～ 2．0683 μg / mL 浓度范围内线性关系良好； 杂质 A、B、C、E、盐酸环喷托酯
0．2022 ～ 2．0223，
定量限分别为 0．0832， 0．1121，0．0593， 0．0446，0．1017 μg / mL； 重复性和回收率结果良好。该法专属、准确、易于操作，适用于盐酸环喷托
酯有关物质的测定。
关键词： 盐酸环喷托酯； 高效液相色谱法； 有关物质； 杂质
中图分类号： O657．7 文献标识码： A 文章编号： 1008－021X（ 2021） 09－0087－03
DOI:10.19319/j.cnki.issn.1008-021x.2021.09.036
Determination of Related Substances in Cyclopentolate Hydrochloride
Yan Yuxin，Xing Ke，Liu Xueyan
（ Shandon Sheelian Pharmaceutical Co．，Ltd．，Jinan 250000，China）

Abstract： The purpose of this study was to establish an HPLC method for the determination of the related substances in
Cyclopentolate Hydrochloride． The chromatographic column was YMC Triart C8（ 4．6×250 mm，5 μm） ． Mobile phase A was 0．2
mol / L ammonium phosphate with 0． 1 mol / L sodium heptanesulfonate （ adjusted pH = 3． 0 with phosphoric acid） ，and mobile
phase B was acetonitrile with gradient elution． The flow rate was 1．0 mL / min； the detection wavelength was 220 nm； the injection
volume was 20 μL； the column temperature was 30 ℃ ． Based on selected condition，the resolutions between Cyclopentolate
Hydrochloride peak and kown impurities A，B，C，E，H peaks were fine． Linear range of impurities A，B，C，E and
Cyclopentolate Hydrochloride were 0．2171 ～ 2．1714， 0．2046 ～ 2．0465，0．2151 ～ 2．1514，0．2022 ～ 2．0223，0．2068 ～ 2．0683 μg / mL，
respectively． LOQ of impurities A，B，C，E and Cyclopentolate Hydrochloride were 0．0832，0．1121，0．0593，0．0446，0．1017
μg / mL，respectively． Repeatability and recovery of this method were good． This method is specific，accurate and convenient，
which applies to analyse the related substances in Cyclopentolate Hydrochloride．
Key words： Cyclopentolate Hydrochloride； HPLC； related substance； impurty

盐酸环喷托酯为眼科局部用药，临床应用于散瞳验光、眼
底检查，可拮抗虹膜括约肌和睫状体肌对胆碱能药物的兴奋作
用，睫状肌麻痹效果优于托吡卡胺，起效快，作用强，麻痹效果
［1－6］
持续时间长，散瞳持续时间短，调节作用恢复快
由 Treves、Testa 合 成，作 为 副 交 感 神 经 阻 断 剂。1952 年，
Ehrenberg 等人研究了其药理作用，其具有与阿托品平同等的调
节麻痹效果，且持续时间短于阿托品，毒性较低、起效快。盐酸
环喷托酯滴眼液在美国、日本、欧洲均有上市，得到了普遍的应
用。在我国，主要有爱尔康公司的赛飞杰滴眼液（ 进口） 上市。
《中国药典》2020 年版未收录盐酸环喷托酯质量标准，日本
药典 JP17 中有关物质方法为 TLC 法，检测灵敏度低、干扰大，
准确性不如 HPLC 法，欧洲药典 EP9．0 及美国药典 USP40 中收
录了盐酸环喷托酯的质量标准，有关物质测定方法为 HPLC 法，
经测试，在 EP 和 USP 的色谱条件下，主峰拖尾严重，峰形不好，
杂质 B 和杂质 C 分离度较差，且基线不平，很可能导致一些小
杂质不能准确定量。本文在 EP 条件的基础上，对方法进行了
系统的摸索与优化，建立高效液相色谱法测定盐酸环喷托酯中
的有关物质，在此色谱条件下，盐酸环喷托酯中已知杂质、未知
杂质与主峰可有效分离，对方法进行了系统的验证，此方法简
便、准确、易操作，专属性良好，适用于盐酸环喷托酯有关物质
的检测。
1 仪器与试药
Waters e2695 型高效液相色谱仪，2489UV 紫外检测器。赛
多利斯 Qiutix－125D－ICN 型电子天平、德国赛多利斯 FE－28 型
酸度计。磷酸氢二铵、庚烷磺酸钠、磷酸、乙腈均为色谱纯； 水
为纯化水。盐酸环喷托酯对照品（ USP，批号： R45B0） ，杂质 A
（ LGC，批号： 142391） ，杂质 B 对照品（ BP，批号： 3357） ，杂质 C
。1951 年， 对照 品 （ LGC，批 号： 30734 ） ，杂 质 E 对 照 品 （ 自 制，批 号：
190530） ，杂质 H 对照品（ 自制，批号： 190428） 。盐酸环喷托酯
原料为自制，原料批号为 A191022、A191118、A200104。原研制
剂采用赛飞杰滴眼液，规格（ 10 mg： 1 mL） ，批号： 17I27LF。
2 方法与结果
2．1 色谱条件选择
本文测试了 EP 和 USP 色谱条件，在氧化破坏条件下，产生
降解产物 H，与环喷托酯峰相邻，无法达到基线分离，且主峰拖
尾严重，杂质 B、C 分离度较差； 参照 EP 色谱条件，以磷酸氢二
铵为缓冲盐，向缓冲盐中加入了离子对试剂庚烷磺酸钠，磷酸
调节 pH 值为 3．0，有效的改善了主峰的拖尾问题。检测波长、
流速参照 EP / USP 标准为 220 nm，1 mL / min。EP 和 USP 中色
谱柱均为 C6 色谱柱，经过多次条件测试，更换更为普遍的 C8
色谱柱，对杂质检测无明显影响。增加了可能的降解杂质 E 和
杂质 H，增加了盐酸环喷托酯和杂质 H 的混合溶液作为系统适
用性溶液，在已知杂质计算中增加了杂质 E。
2．2 色谱条件
色谱柱： YMC Triart C8（ 4．6×250 mm，
5 μm） ； 流动相 A： （ 0．2
mol / L 磷酸 氢 二 铵 + 0． 1 mol / L 庚 烷 磺 酸 钠，磷 酸 调 pH 值 =
3．0） ，流 动 相 B： 乙 腈； 柱 温： 30 ℃ ，检 测 波 长： 220 nm，流 速：

收稿日期： 2021－02－03
作者简介： 燕禹辛（ 1989—） ，内蒙古赤峰人，初级工程师，主要从事药物分析工作。
 山 东 化 工
· 88· SHANDONG CHEMICAL INDUSTRY 2021 年第 50 卷

1．0 mL / min，进样体积： 20 μL。溶剂： 50%乙腈水。 取盐酸环喷托酯约 10 mg，精密称定， 6 份，分别置 10 mL 量

梯度程序见表 1。 瓶， 加溶剂 2 mL 使溶解。未破坏（ 用溶剂稀释至刻度） ； 酸破坏
表 1 梯度程序 试验（ 加 1 mol / L 盐酸溶液 1 mL，水浴加热 5 h，取出，放冷，用 1
时间 / min A /% B /% mol / L 氢氧化钠溶液中和至中性，用溶剂稀释至刻度） ； 碱破坏
试验（ 加 1 mol / L 氢氧化钠溶液 1 mL，水浴加热 5 h，取出，放
0 70 30
冷， 用 1 mol / L 盐酸溶液中和至中性，用溶剂稀释至刻度） ； 高温
49 50 50 破坏试验（ 水浴加热 48 h，取出，放冷，用溶剂稀释至刻度） ； 氧
50 70 30 化破坏试验（ 加 3%双氧水溶液 1 mL，水浴加热 1 h，取出，放冷，
65 70 30 用溶剂稀释至刻度） ； 光照破坏试验（ 置光照箱内 5000lx 照度下
放置 10 d，取出，用溶剂稀释至刻度） 。
2．3 溶液的制备 2．5 定量限与检测限试验
杂质 A 母液： 取杂质 A 约 10 mg，精密称定，置 10 mL 量瓶
定量限、检测限溶液： 经杂质 A、B、C、E、盐酸环喷托酯母液
中，加溶剂适量溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
逐步稀释而得，精密量取上述溶液 20 μL，进样，记录色谱图。
杂质 B 母液： 取杂质 B 约 10 mg，精密称定，置 10 mL 量瓶 杂质 A、B、C、E、盐酸环喷托酯定量限分别为 0． 0832，0． 1121，
中，加溶剂适量溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。 0．0446，0． 1017 μg / mL，检 测 限 分 别 为 0． 0277，0． 0374，
0．0593，
杂质 C 母液： 取杂质 C 约 10 mg，精密称定，置 10 mL 量瓶 0．0198，
0．0149，0．0339 μg / mL。
中，加溶剂适量溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
2．6 线性试验
杂质 E 母液溶液： 取杂质 E 约 10 mg，精密称定，置 10 mL
精密量取杂质 A、B、C、E、盐酸环喷托酯母液溶液各 1 mL，
量瓶中，加溶剂适量溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
置同一 100 mL 量瓶，加溶剂稀释至刻度，摇匀，精密量取 0．5， 1，
杂质 H 母液： 取杂质 H 约 10 mg，精密称定，置 10 mL 量瓶
2．5，
4，5 mL，分别置于 25 mL 量瓶，加溶剂稀释至刻度，摇匀，分
中，加溶剂适量溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
别作为线性溶液①、②、③、④、⑤。精密量取上述溶液 20 μL，
盐酸环喷托酯对照品母液： 取盐酸环喷托酯对照品约 10
进样，记录色谱图。线性试验结果见表 2。
mg，精密称定，置 10 mL 量瓶中，加溶剂适量溶解并稀释至刻
表 2 线性试验结果
度，摇匀，即得。
对照品溶液： 精密量取杂质 A、B、C、E、盐酸环喷托酯母液 名称 线性方程 R

溶液各 1 mL，置同一 100 mL 量瓶，加溶剂稀释至刻度，摇匀，精 杂质 A Y = 20．36X+0．051 0．9992

密量取 5 mL，置 50 mL 量瓶加溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
杂质 B Y = 14．05X+0．151 0．9991
系统适用性溶液： 称取盐酸环喷托酯对照品约 10 mg，精密
称定，置 10 mL 量瓶，加入杂质 H 母液 0．1 mL，加溶剂适量溶解 杂质 C Y = 9．112X+0．125 0．9995
并稀释至刻度，摇匀，即得。色谱图见图 1。 杂质 E Y = 38．67X+0．089 0．9992

盐酸环喷托酯 Y = 14．97X+0．124 0．9998

2．7 重复性试验
照 2．3 配制方法，重复配制 6 份原料供试品溶液，取 20 μL
注入液相色谱仪。试验结果见表 3。
表 3 重复性试验结果
序号 未知 / % 杂 C /% 总杂 / %

1 0．07 0．08 0．15

2 0．07 0．08 0．15

图 1 系统适用性溶液色谱图
供试品溶液： 取盐酸环喷托酯约 10 mg，精密称定，置 10 mL 3 0．07 0．08 0．15
量瓶，加溶剂适量溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。 4 0．07 0．08 0．15
2．4 专属性试验
5 0．07 0．08 0．15
强制降解试验对比图见图 2。
6 0．07 0．08 0．15

RSD / % 0 0 0

2．8 回收率试验
精密量取杂质 A、B、C、E 母液溶液各 1 mL，置同一 100 mL
量瓶，加溶剂稀释至刻度，摇匀，作为回收率母液溶液。分别精
密量取 4， 6 mL，分别置于 50 mL 量瓶，分别加入盐酸环喷托
5，
酯各 50 mg，加溶剂稀释至刻度，摇匀，分别作为 80%，100%，
120%回收率 溶 液。杂 质 A、B、C、E 回 收 率 分 别 为 101． 5%，
98．1%，97． 3%，96． 5%，RSD 分 别 为 1． 81%，1． 39%，1．
65%， 1．11%。
2．9 溶液稳定性试验
取供试品溶液，室温放置 0，4，8，12，24 h 后，进样检测，结
图2 强制降解试验对比图 果见表 4。
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表4 溶液稳定性试验结果 解试验中，氧化破坏后主要降解出已知杂质 H，为 1．84%； 酸破

时间 / h 未知 / % 杂 C /% 总杂 / % 坏主要降解出 2．51% 的杂质 A、0．52% 的杂质 B、0．74% 的杂质
C、 3．48%的杂质 E； 碱破坏主要降解出 5．41%的杂质 B、 6．32%的
0 0．07 0．07 0．14
杂质 A； 光破坏无明显降解杂质； 高温破坏主要降解出 1．59%的
2 0．06 0．08 0．14 杂质 A、 0．56%的杂质 B、 0．93%的杂质 C、 0．46%的杂质 E。定量
限和检测限证明本方法检测灵敏度良好，可准确检出目标物。
4 0．07 0．08 0．15
杂质 A、B、C、E、盐酸环喷托酯分别在 0．2171 ～ 2．1714，0．2046 ～
8 0．06 0．07 0．13 2．0465，0．2151 ～ 2．1514，0．2022 ～ 2．0223，0．2068 ～ 2． 0683 μg / mL
12 0．07 0．08 0．15 浓度范围内，相关系数 R 均大于 0．999，线性关系良好。重复测
定样品 6 次，未知单杂、杂质 C、总杂偏差分别为 0．01%，0．01%，
24 0．07 0．07 0．14 0．02%，方法重复性良好。杂质 A、B、C、E 回收率均在 90% ～
偏差 / % 0．01 0．01 0．02 108%范围内，且 RSD 小于 2．0%，方法回收率良好。供试品溶
液在室温（ 25 ℃ ） 下， 24 h 内稳定。
结果显示，主峰峰面积 RSD 为 0．52%，单杂、总杂偏差均小
于 0．1%，溶液在室温 24 h 内稳定。
2．11 有关物质的测定
采用上述方法测定了三批盐酸环喷托酯和一批上市制剂
2．10 方法学总结
（ 赛飞杰，滴眼液） 的有关物质，结果见表 5 和图 3。
系统适用性结果显示，主峰在 15．049 min 出峰、杂质 H 在
15．799 min 出峰，杂质 H 与主峰分离度为 2．40，分离度良好。降
表 5 三批原料及上市制剂有关物质测定结果
样品 批号 A /% B /% C /% 单杂 / % 总杂 / %

原料 A191022 0．01 0 0．07 0．07 0．15

原料 A191118 0 0 0．09 0．03 0．12

原料 A200104 0 0 0．08 0．07 0．15

赛飞杰 17I27LF 1．36 0．12 0．09 0．03 1．60

测。通过降解试验结果分析，杂质 A、B、C、E、H 均会有不同程

度的降解，上市制剂中杂质 A 含量较高，可能为降解产生。
实验过程和结果表明，本法可有效检测盐酸环喷托酯有关
物质，有较强的专属性，对多个已知杂质进行了严格控制，更加
严格的控制了盐酸环喷托酯原料的质量，本品合成工艺较为成
熟，
且其他未知杂质含量较少。通过以上的方法学验证试验，证
明该方法适应性强，简单、准确可靠，为盐酸环喷托酯原料的质
量控制提供了可靠的依据。
参考文献
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降解杂质 E、H，并以杂质 H 与盐酸环喷托酯对照品的混合溶液 ［6］HUNG K C，HUANG H M，LIN P W． Changes of intraocular
作为系统适用性溶液，有效的控制了色谱条件的可控性； 以杂质 pressure and refractive status in children following cycloplegic
杂质 A、B、C、E 和盐酸环喷托酯对照品组成的对照溶液，对有关 refraction with 1% and 1% tropicamide［J］． TaiWan Journal
物质进行外标法计算，更加准确的定量； 在磷酸盐缓冲液中，加 Ophthalmology， 2015， 5： 124－127．
入了适量的离子对试剂庚烷磺酸钠，优化了洗脱程序，使得主峰
不再拖尾，主峰理论板数提高。笔者在本实验中考察了 C6 柱和 （ 本文文献格式： 燕禹辛，邢科，刘学艳．盐酸环喷托酯有关物质
C8 柱对盐酸环喷托酯杂质检测的影响，盐酸环喷托酯检测不受
测定方法研究［J］．山东化工， 50（ 9） ： 87－89．）
2021，
C6 和 C8 柱影响，因 C8 柱更为常用且耐用，选择 C8 柱进行检
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