辽宁中医杂志 ２０２１ 年第 ４８ 卷第 ９ 期 · ２０３·

ＤＯＩ∶１０． １３１９２ ／ ｊ． ｉｓｓｎ． １０００⁃１７１９． ２０２１． ０９． ０５７

桃红四物汤配方颗粒对糖皮质激素性
骨质疏松小鼠模型的干预作用研究
祝佳音，宿家铭，李焱鑫，林茜，张晓伟，孙澳川，侯春英
（ 北京中医药大学，北京 １０００２９）

摘要：目的 观察桃红四物汤对糖皮质激素性骨质疏松小鼠模型的治疗作用。 方法 将 ８ 周龄的 ４０ 只 Ｃ５７ＢＬ ／ ６ 雄性

小鼠称重，随机分为空白对照组（ ｃｏｎ） 、模型对照组（ ｍｏｄ） 、中药高剂量组（ Ｈ） 、中药中剂量组（ Ｍ） 、中药低剂量组（ Ｌ） ，共
５ 组，每组 ８ 只。 分别给予相应的药物灌胃及臀肌注射，连续给药 ６ 周，处死，行股骨取材并制成股骨病理切片。 常规 ＨＥ
染色，用显微镜在 ４０ 倍镜下观察骨组织形态和结构、计算切片内骨小梁面积比值并拍照记录切片，使用 ＩｍａｇｅＪ 图像处理
软件和 ＳＰＳＳ １９. ０ 统计学软件分析数据。 结果 与空白对照组相比，模型对照组小鼠股骨小梁排列稀疏、变细、数目减
少、间距加宽，股骨小梁面积比例降低，提示造模成功；与模型对照组相比，中药组小鼠股骨小梁较饱满，排列较有序，数
目及粗细适中，股骨小梁面积比例高于模型对照组，提示中药桃红四物汤对糖皮质激素性骨质疏松具有明显的治疗作
用。 结论 中药桃红四物汤对糖皮质激素性骨质疏松小鼠模型具有明显的治疗作用。
关键词：骨质疏松；小鼠；糖皮质激素；桃红四物汤；股骨病理切片
中图分类号：Ｒ２８５ 文献标志码：Ａ 文章编号：１０００⁃１７１９（２０２１）０９⁃０２０３⁃０４

Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｔａｏｈｏｎｇ Ｓｉｗｕ Ｄｅｃｏｃｔｉｏｎ（ 桃红四物汤） ｏｎ Ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ － Ｉｎｄｕｃｅｄ Ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ Ｍｉｃｅ

ＺＨＵ Ｊｉａｙｉｎ，ＳＵ Ｊｉａｍｉｎｇ，ＬＩ Ｙａｎｘｉｎ，ＬＩＮ Ｘｉ，ＺＨＡＮＧ Ｘｉａｏｗｅｉ，ＳＵＮ Ａｏｃｈｕａｎ，ＨＯＵ Ｃｈｕｎｙｉｎｇ

（ Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００２９，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅ ｔｈｅ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｔａｏｈｏｎｇ Ｓｉｗｕ Ｄｅｃｏｃｔｉｏｎ（ 桃红四物汤） ｏｎ ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ － ｉｎｄｕｃｅｄ
ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ ｍｉｃｅ． Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｆｏｒｔｙ Ｃ５７ＢＬ ／ ６ ｍａｌｅ ｍｉｃｅ，７ ｗｅｅｋｓ ｏｌｄ，ｗｅｒｅ ｗｅｉｇｈｅｄ ａｎｄ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｂｌａｎｋ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ
（ ｃｏｎ） ，ｍｏｄｅｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（ ｍｏｄ） ，Ｃｈｉｎｅｓｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｈｉｇｈ ｄｏｓｅ ｇｒｏｕｐ（ Ｈ） ，ｍｉｄｄｌｅ ｄｏｓｅ ｇｒｏｕｐ（ Ｍ） ａｎｄ ｌｏｗ ｄｏｓｅ ｇｒｏｕｐ（ Ｌ） ，８
ｍｉｃｅ ｐｅｒ ｇｒｏｕｐ，５ ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ ｔｏｔａｌ． Ｔｈｅ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｉｎｔｒａｍｕｓｃｕｌａｒｌｙ ｉｎｊｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ ｔｗｉｃｅ ａ ｗｅｅｋ ｔｏ ｒｅｐｌｉｃａｔｅ ｔｈｅ ｏｓｔｅｏ⁃
ｐｏｒｏｓｉｓ ｍｏｄｅｌ ａｎｄ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｄｏｓｅｓ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｂｙ ｉｎｔｒａｇａｓｔｒｉｃ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｆｏｒ ６ ｗｅｅｋｓ． Ｔｈｅｎ ｔｈｅ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ
ｓａｃｒｉｆｉｃｅｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｆｅｍｕｒｓ ｗｅｒｅ ｒｅｍｏｖｅｄ ｆｏｒ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｅｃｔｉｏｎｉｎｇ． Ｂｙ ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ ＨＥ ｓｔａｉｎｉｎｇ，ｂｏｎｅ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ
ｗｅｒｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｕｎｄｅｒ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ ａｔ ４０ ｔｉｍｅｓ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ． Ｔｈｅ ｒａｔｉｏ ｏｆ ｔｒａｂｅｃｕｌａｒ ａｒｅａ ｉｎ ｔｈｅ ｓｌｉｃｅ ｗａｓ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ，ｐｈｏｔｏｇｒａｐｈｅｄ ａｎｄ
ｓｌｉｃｅｄ． ＩｍａｇｅＪ ｉｍａｇｅ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ｓｏｆｔｗａｒｅ ａｎｄ ＳＰＳＳ１９. ０ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ｓｏｆｔｗａｒｅ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ａｎａｌｙｚｅ ｔｈｅ ｄａｔａ． Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ
ｔｈａｔ ｏｆ ｔｈｅ ｂｌａｎｋ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ ｆｅｍｏｒａｌ ｔｒａｂｅｃｕｌａｅ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｄｅｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｓｐａｒｓｅ，ｔｈｉｎｎｅｒ，ｓｍａｌｌｅｒ ａｎｄ ｗｉｄｅｒ，ａｎｄ ｔｈｅ
ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ ｏｆ ｆｅｍｏｒａｌ ｔｒａｂｅｃｕｌａｒ ａｒｅａ ｗａｓ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ， ｓｕｇｇｅｓｔｉｎｇ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌ ｍｏｄｅｌｉｎｇ． Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈａｔ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｄｅｌ ｃｏｎｔｒｏｌ
ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ ｆｅｍｏｒａｌ ｔｒａｂｅｃｕｌａｅ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｇｒｏｕｐｓ ｗｅｒｅ ｍｏｒｅ ｆｕｌｌ，ａｒｒａｎｇｅｄ ｍｏｒｅ ｏｒｄｅｒｌｙ，ａｎｄ ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ａｎｄ ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ
ｗｅｒｅ ｍｏｄｅｒａｔｅ． Ｉｎ ａｄｄｉｔｉｏｎ，ｔｈｅ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ ｏｆ ｆｅｍｕｒ ｔｒａｂｅｃｕｌａｒ ａｒｅａ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｄｅｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，ｓｕｇｇｅｓｔｉｎｇ ｔｈａｔ
Ｔａｏｈｏｎｇ Ｓｉｗｕ Ｄｅｃｏｃｔｉｏｎ ｈａｄ ｏｂｖｉｏｕｓ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ － ｉｎｄｕｃｅｄ ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔａｏｈｏｎｇ Ｓｉｗｕ Ｄｅｃｏｃ⁃
ｔｉｏｎ ｈａｓ ｏｂｖｉｏｕｓ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ － ｉｎｄｕｃｅｄ ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ ｍｉｃｅ ｍｏｄｅｌ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ；ｍｉｃｅ；ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄｓ；Ｔａｏｈｏｎｇ Ｓｉｗｕ Ｄｅｃｏｃｔｉｏｎ（ 桃红四物汤） ；ｆｅｍｏｒａｌ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｅｃｔｉｏｎ

糖皮质激素（ ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ，ＧＣ） 由于其强大的免 ｉｎｄｕｃｅｄ ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ，ＧＩＯＰ） 属于继发性骨质疏松，是一

疫抑制、抗炎等作用在临床中应用广泛。 但与此同时， 种因内源或外源糖皮质激素所致的、以骨强度下降、骨
其带来的较大不良反应也不容忽视。 临床研究表明， 折风险性增加为特点的代谢性骨病。 目前，临床医生
患者持续使用糖皮质激素 ６ 个月以上，有 ５０％ 的概率 对 ＧＩＯＰ 对机体危害的认识相当有限，对 ＧＩＯＰ 的防范
患骨质疏松 ［１］
。 糖皮质激素性骨质疏松（ ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ 和管理尚不够规范。 ＧＩＯＰ 患者如果不能得到有效干
预治疗，将会给患者带来严重的健康危险 ［２］ 。
基金项目：国家自然科学基金（８１９０３９３５）
骨质疏松症与古籍中记载的 “ 骨痹” “ 骨虚” “ 骨
作者简介：祝佳音（１９９１ － ） ，女，山东济宁人，硕士研究生，研究方向：中
医外科学（ 皮肤病方向） 。 痿” 等相似 ［３］ ，对于其治疗，古代医家多重视肝肾之虚，
通讯作者：侯春英（１９８８ － ） ，女，山东潍坊人，讲师，博士研究生，研究方 治疗从肝肾脾之脏立法为主 ［４］ ，遣方用药多重于补，尤
向：中药药理。 重视补肾益精，但骨痹之病多病程长、起病隐匿，病久
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则多瘀 ［５］ ，病多虚实混杂之证，因此治疗除补益精血 ２０ ｇ体质量小鼠注射 ０. ２ ｍＬ 稀释液。

外，还应注重行瘀活络。 （２） 桃红四物汤的配制：中药给药采用灌胃给药
桃红四物汤又叫加味四物汤，是在四物汤的基础 法。 参考徐叔云教授主编的《 药理实验动物学法》 中
上加桃仁、红花，是活血祛瘀法的代表方剂，具有消炎、 附表 １１ － ８，人与小鼠间按体表面积折算的等效剂量
镇痛、扩张血管、改善微循环及增加机体非特异性免疫 比值为 ３８７. ９∶ １。 方药组成按照《 医宗金鉴》 中关于桃
功能的作用 ［６］ 。 近年来桃红四物汤在骨科方面的研究 红四物汤的配比：熟地黄２０ ｇ，当归 ２０ ｇ，赤芍 ２０ ｇ，川
己经取得一定成就，如桃红四物汤能够改善血流变特 芎 １０ ｇ，桃仁 ２０ ｇ，红花 １０ ｇ。 所用颗粒剂生药当量为
性 ［７］
、促进骨折区血管新生、增加生长因子 ＶＥＧＦ 的水 熟地 １∶ ５、当归 １∶ ５、川芎 １∶ ５、赤芍 １∶ １０、桃仁 １∶ ２０、
平 ［８］ 、促进成骨细胞与破骨细胞的修复功能 ［９］ 、增加促 红花 １∶ １０（ 均为颗粒∶ 饮片） 。 ①中剂量组：称取熟地
血管新生因子内皮型一氧化氮合酶（ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｎｉｔｒｉｃ ３. ４４ ｇ，当归 ３. ４４ ｇ， 川 芎 １. ７２ ｇ， 赤 芍 １. ７２ ｇ， 桃 仁
ｏｘｉｄｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ，ｅＮＯＳ） 和 ＮＯ ［１０］ 等，为桃红四物汤对骨 ０. ８６ ｇ，红花 ０. ８６ ｇ 中药免煎颗粒剂各（ 计算方法：人
质疏松的治疗提供了理论依据。 用量 ÷ ３８７. ９ ÷ ０. ３ ｍＬ × １００ ｍＬ × 生 药 当 量） ， 加 入
小鼠由于基因组与人类接近、近交系发达、易于获 １００ ｍＬ 煮沸放冷的蒸馏水，配制成 １００ ｍＬ 溶液（ 忽略
取及基因技术相对成熟等特点，是激素诱导骨质疏松 体积变化） ；②高剂量组：称取等量颗粒剂，加入 ５０ ｍＬ
模型的重要动物来源，故选用小鼠作为实验对象 ［１１］ 。 煮沸放冷的蒸馏水；③低剂量组：称取等量颗粒剂，加
综上，本实验选用桃红四物汤对糖皮质激素性骨 入 ２００ ｍＬ 煮沸放冷的蒸馏水。 药物一次性配制完成，
质疏松小鼠模型进行干预，观察小鼠股骨病理切片并 放入 ４ ℃ 冰箱保存。
分析小鼠血清碱性磷酸酶水平，通过 ＩｍａｇｅＪ 图像处理 １. ２. ３ 给药 ｃｏｎ 组： 给 予 生 理 盐 水 臀 肌 注 射，
软件和 ＳＰＳＳ １９. ０ 统计学软件对实验数据进行分析， ０. ３ ｍＬ蒸馏水灌胃，给药 ６ 周；ｍｏｄ 组：给予地塞米松
用给药前后数据的差异证明桃红四物汤对于糖皮质激 磷酸钠溶液臀肌注射，０. ３ ｍＬ 蒸馏水灌胃，给药 ６ 周；
素性骨质疏松症具有治疗作用，从而指导临床用药，为 Ｈ 组：给予地塞米松磷酸钠溶液臀肌注射，０. ３ ｍＬ 桃
临床治疗提供新的配方思路。 红四物汤高剂量灌胃，给药 ６ 周；Ｍ 组：给予地塞米松
１ 材料和方法 磷酸钠溶液臀肌 注 射，０. ３ ｍＬ 桃 红 四 物 汤 中 剂 量 灌
１. １ 材料 胃，给药 ６ 周；Ｌ 组：给予地塞米松磷酸钠溶液臀肌注
１. １. １ 实验动物 ８ 周龄的 Ｃ５７ＢＬ ／ ６Ｎ 雄性小鼠，４０ 射，０. ３ ｍＬ 桃红四物汤低剂量灌胃，给药 ６ 周。
只，体质量（２０ ± ５） ｇ，购于北京维通利华实验动物技 注射每周 ２ 次（ 周二、周五） ，灌胃每天 １ 次。 实
术有限公司［ 许可证号：ＳＣＸＫ （ 京） ２０１６ － ０００６；合格 验 ６ 周后，脱颈处死全部小鼠。
证号 １１００１１１９１１０２７５７８］ ，饲养温度为（２２ ± ３） ℃ ，湿 １. ２. ４ 取材 每组采用随机数法选取 ５ 只小鼠（ 低剂
度 ５０％ ～ ７５％ ，自然光源，标准营养颗粒饲料喂养，自 量组 ３ 只） ，首先摘除眼球采血并分离血清，取上清于
由饮水，适应性饲养 １ 周后用于评价桃红四物汤对糖 干净的离心管中，保存于 － ２０ ℃ 。 其次行股骨取材与
皮质激素性骨质疏松小鼠模型的治疗作用实验。 切片制作，右侧股骨常规备皮并固定于手术台，常规消
１. １. ２ 试剂与器材 实验试剂：桃红四物汤中药免煎 毒铺巾，采用侧卧位将小鼠固定于操作台上，于大腿外
颗粒 剂 （ 北 京 德 寿 堂 医 药 有 限 公 司 ） ： 桃 仁 （ 批 号： 侧作一长约 １. ５ ｃｍ 皮肤切口，沿股骨外侧白线钝性分
１９０４５８２１） 、 红 花 （ 批 号： １９０３８６６１ ） 、 熟 地 黄 （ 批 号： 离周围肌肉及软组织，取出股骨。 将小鼠股骨用福尔
１９０２７０７１ ） 、 当 归 （ 批 号： １９０４６２７１ ） 、 川 芎 （ 批 号： 马林液固定 ２ ｄ，１４％ ＥＤＴＡ 液脱钙 １４ ｄ，按常规脱水、
１９０４５２５１） 、赤芍 （ 批号：１９０４１８１１ ） ； 地塞米 松 磷 酸 钠 透明、包埋、石蜡切片（ 厚 ３ ～ ４ μｍ） 、捞片、烤片处理。
注射液［ 山西省芮城科龙兽药有限公司，批准文号：兽 １. ２. ５ 检测指标 取小鼠血清进行碱性磷酸酶浓度
药字 （ ２０１３ ） ０４０１９１１４７， 生 产 批 号：２０１８０５０４ ］ ；０. ９％ 的检测，具体检测步骤按试剂盒说明书进行。 将小鼠
生理盐水；蒸馏水；实验器材：电子天平；分析天平；显 股骨切片行常规 ＨＥ 染色，用显微镜在 ４０ 倍镜下观察
微镜；记号笔； 封口膜；５０ ｍＬ 离心管；５０ ｍＬ、５００ ｍＬ 骨组织形态和结构并拍照记录切片。
烧杯；具塞三角瓶；１ ｍＬ 注射器；５０ ｍＬ、１０ ｍＬ 量筒； １. ３ 统计学处理
玻璃棒；药匙；称量纸；水浴锅；灌胃针。 第一步，使用 ＩｍａｇｅＪ 图像处理软件对小鼠股骨病
１. ２ 方法 理切片图片进行半定量分析，输出并记录结果，结果中
１. ２. １ 分组 将 ８ 周龄的 ４０ 只 Ｃ５７ＢＬ ／ ６Ｎ 雄性小鼠 的 Ａｒｅａ 为选择范围的面积，即股 骨 小 梁 在 图 中 的 面
称重，随机分为 １０ 笼，每笼 ４ 只，标号。 标注对照组 积；ＩｎｔＤｅｎ 就是所选范围的 ＩＯＤ（ 光密度的总和） 。 用
（ ｃｏｎ） 、模型组（ ｍｏｄ） 、中药高剂量组（ Ｈ） 、中药中剂量 ＩｎｔＤｅｎ 的数值除以 Ａｒｅａ 的数值得出来的就是这张图
组（ Ｍ） 、中药低剂量组（ Ｌ） ，共 ５ 组，每组 ８ 只。 片中细胞的平均光密度，即股骨小梁面积比值，以图 １
１. ２. ２ 溶液配制（ 以小鼠体质量 ２０ ｇ 为例） （１） 地 的数据为例，即：５９２７２３ ／ １８８０６４２ × １００％ ＝ ３１. ５１７０５６４％ ，
塞米松磷酸钠注射液的配制：将现有地塞米松磷酸钠 同法测量多张图的股骨小梁面积比值后就可以进行半
注射液稀释 ５０ 倍，即１ ｍＬ地塞米松磷酸钠加入 ４９ ｍＬ 定量比较。 第二步，采用 ＳＰＳＳ １９. ０ 统计学软件进行
生理盐 水， 配 制 成５０ ｍＬ 地 塞 米 松 磷 酸 钠 溶 液， 放 入 分析小鼠股骨小梁面积比值及血清碱性磷酸酶浓度。
４ ℃ 冰 箱 保 存。 注 射 时， 按 照 １ ｍｇ ／ ｋｇ 标 准 给 药， 即 首先进行方差齐性检验，方差齐用单因素方差（ Ｏｎｅ －
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Ｗａｙ ＡＮＯＶＡ） 进行分析，Ｐ ＜ ０. ０５ 为差异有统计学意 中药低剂量组的小鼠股骨小梁面积比值相对于模型组

义，从而进行多重比较。 综合以上指标，对桃红四物汤 有显著性差异（ Ｐ ＝ ０. ００ ＜ ０. ０５，差异有统计学意义） ，
是否对糖皮质激素性骨质疏松小鼠模型具有治疗作用 提示中药桃红四物汤对糖皮质激素性骨质疏松具有明
进行探讨。 显的治疗效果；中药高剂量组、中药中剂量组和中药低
２ 结果 剂量组 ３ 组两两比较提示桃红四物汤对糖皮质激素性
２. １ 各组小鼠骨质的变化 骨质 疏 松 的 治 疗 作 用 未 见 明 显 差 异 （ Ｐ ＝ ０. ９９１、
本实验共有 ５ 个组，为对照组、模型组、中药高剂 ０. ０８８、０. ０８７，均 ＞ ０. ０５，差异无统计学意义） ，提示治
量组、中药中剂量组和中药低剂量组，通过对各组小鼠 疗作用与给药剂量之间没有明显显著的剂量相关性。
股骨病理切片的观测与分析，结果见插页Ⅵ图 １。 每 表２ 各组小鼠股骨小梁面积比值（ ｘ ± ｓ） 单位：％

组随机抽选出一张小鼠股骨切片 ＨＥ 染色在显微镜下 组别 ｎ 股骨小梁面积比值 标准差

放大 ４０ 倍显示：空白组小鼠骨小梁饱满，排列有序，数 对照组 ５ ３１. ３ ± ２. ０ ０. １９
目及粗细适中，骨质疏松程度最低；而模型组小鼠股骨
模型组 ５ １７. ９ ± ５. ０ ＃
０. ３４
小梁排列稀疏、变细、数目减少、间距加宽，骨质疏松最
中药高剂量组 ５ ２９. ９ ± ２. ９ ∗
０. ２４
严重；中药高剂量组、中药中剂量组和中药低剂量组其
中药中剂量组 ５ ２９. ２ ± ２. ５ ∗
０. １３
骨小梁排列顺序稍紊乱，骨小梁稍变细，数目稍减少，
骨质疏松程度居中。 中药低剂量组 ３ ２６. ０ ± ４. ３ ∗
０． ４２

２. ２ 各组小鼠血清碱性磷酸酶浓度变化 注：＃与对照组比较，Ｐ ＜ ０. ０５；∗与模型组比较，Ｐ ＜ ０. ０５。

血清中的碱性磷酸酶是成骨细胞的一种外酶，它 ３ 讨论
的表达活性是成骨细胞分化的一个明显特征，可以间 糖皮质激素因其强大免疫抑制、抗炎等药理作用
接反映成骨细胞的活性，从而推测小鼠骨质的改变。 在临床治疗中具有十分重要的地位，在其广泛应用中
数据见表 １，并运用 ＳＰＳＳ １９. ０ 统计学软件对数据进行 糖皮质激素发挥主要的药理作用同时，其他的药理作
方差分析。 首先进行方差齐性检验，结果中“ 显著性” 用将成为不良反应，如骨质疏松和骨坏死、诱发和加重
Ｐ ＝ ０. ２０４ ＞ ０. ０５，满足方差齐性，故采用单因素方差 感染、代谢和内分泌紊乱、肌病、生长迟缓等，激素的不
（ Ｏｎｅ － Ｗａｙ ＡＮＯＶＡ） 进一步分析，Ｐ ＜ ０. ０５ 为差异有 良反应与激素使用的剂量、总量和疗程成正比。 本实
统计学 意 义。 从 结 果 来 看， Ｐ ＝ ０. ５３ ＞ ０. ０５， 说 明 在 验积极寻找糖皮质激素诱导的骨质疏松症发生的机制
０. ０５ 的显著性水平下，不同组别小鼠血清 ＡＬＰ 浓度变 并提供相关中西医提前干预措施，在临床上具有重要
化差异无统计学意义。 可能原因是统计学中 ｎ 的数量 的意义。
不足或是测量过程中人为原因导致的血清处理不当。 西医学认为糖皮质激素抑制成骨细胞，减少骨生
表１ 各组小鼠血清碱性磷酸酶浓度（ ｘ ± ｓ） 单位：ｍｍｏｌ ／ Ｌ
成，并减少胃肠道钙的吸收，促进尿钙排泄而增加甲状
组别 ｎ ＡＬＰ 浓度 标准差 旁腺素分泌，从而增加破骨细胞活性，增加骨吸收。 因
对照组 ５ １０６. ０２ ± ２. ６７ ５. ８９ 此，长疗程激素治疗后约 ３０％ 或更多的患者存在骨密
模型组 ５ １０８. ５１ ± ３. ０２ ４. ６５ 度降低、骨质疏松，尤其是绝经后的妇女。 糖皮质激素
性骨质疏松症在前期症状不明显，不易被发现，但后期
中药高剂量组 ５ ９４. １３ ± ３. ０４ １５. ６４
就可能会造成股骨头坏死、骨折等后果，严重影响病人
中药中剂量组 ５ １０４. ３９ ± ２. ９５ ４. ３５
的生活质量。 目前西医主要通过在服用激素治疗过程
中药低剂量组 ３ １０７. ５２ ± ３. １２ ６. ３９
中并用维生素 Ｄ 和补充钙剂有一定的预防作用，而间
２. ３ 桃红四物汤对地塞米松诱导的骨质疏松的作用 歇性服用羟丁膦酸盐（ ｅｔｉｄｒｏｎａｔｅ，４００ ｍｇ ／ ｄ 口服 １４ ｄ
采用 ＩｍａｇｅＪ 图像处理软件对各组中每只小鼠股 为 １ 个疗程，每 ３ 个月 １ 次） 或第三代双膦酸盐制剂阿
骨切片进行处理并计算出各组小鼠股骨病理切片的骨 仑膦酸钠（ ａｌｅｎｄｒｏｎａｔｅ，５ ｍｇ ／ ｄ 口服） ，并补充钙剂效果
小梁面积比值，数据见表 ２，并运用 ＳＰＳＳ １９. ０ 统计学 更佳 ［１２ － １３］ 。 大剂量的糖皮质激素可引起骨坏死，常见
软件对数据进行方差分析。 首先进行方差齐性检验， 部位是股骨头。 其原因可能与骨内血管脂肪栓子或骨
结果中“ 显著性” Ｐ ＝ ０. ２８９ ＞ ０. ０５，满足方差齐性，故 质疏松引起骨质塌陷，导致血管缺血有关，具体机制尚
采用单 因 素 方 差 （ Ｏｎｅ － Ｗａｙ ＡＮＯＶＡ） 进 一 步 分 析， 不清楚。 目前缺乏有效内科治疗手段，必要时需行手
Ｐ ＜ ０. ０５ 为差异有统计学意义，从结果来看 “ 单因素 术治疗。
ＡＮＯＶＡ” 分析结果，显著性 Ｐ 为 ０. ０００ ＜ ０. ０５，说明在 中医认为，根据骨质疏松临床表现及发病机制，当
０. ０５ 的显著性水平下，不同组别小鼠股骨小梁面积比 属“ 骨痿” “ 骨痹” 范畴。 从辨证角度分析骨质疏松，认
值有显著性差异。 为本病的病因、病机涉及多个脏腑，归纳为肾虚、脾虚
进而通过多重比较得出结论：模型组的小鼠股骨 与血瘀，所以临床上对骨质疏松症的治疗应以温补肾
小梁面积比值相对于对照组有显著性差异（Ｐ ＝ ０. ００ ＜ 阳、强筋壮骨、填精生髓为主，兼以活血祛瘀、益气养
０. ０５，差异有统计学意义） ，提示糖皮质激素性骨质疏 血、祛风散寒除湿、通络止痛等法 ［１４］ 。 故在本病中药
松小鼠模型构建成功；中药高剂量组、中药中剂量组和 制剂的临床应用中，补益类方剂占多，而忽视了活血祛
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瘀方剂的重要作用。 而本病患者多由于长期使用糖皮
质激素，久病多瘀多虚，身体机能衰退，体虚气弱，易受
外邪侵入，导致气机运行不畅，气虚而无力推动血行，
经络不通，气血不畅，故可导致血瘀。 另外肾气不足，
血液无力推动，亦可使血瘀证加重；肾阳不足，则温煦
之力减退，血液因寒而凝滞 ［１５］
。 因此，血瘀是此病重
要的致病因素之一。 桃红四物汤作为活血化瘀类的经
典中药复方，以祛瘀为核心，辅以养血、行气。 方中以
强劲的破血之品桃仁、红花为君药，活血化瘀；熟地、当
归为臣药，滋阴补肝、养血调经；芍药为佐药，养血和
营、增补血之力；川芎为使药，活血行气、调畅气血，助
活血之功。 现代研究显示，桃仁及其提取物具有增加
局部血 流 量、 降 低 血 液 黏 度、 改 善 血 液 流 变 学 等 作
用 ［１６］ ；在一定浓度范围内，红花中含有的西红花苷浓
度越高，抑制破骨细胞形成的效果越明显 ［１７］ ；有“ 补血
圣药” 之 称 的 当 归 是 中 医 治 疗 骨 质 疏 松 症 的 常 用 药
物 ［１８］ ，研究表明，当归具有类雌激素作用，调节体内激
素水平来防治骨质疏松症，可增加骨量、骨密度，增加
骨强度 ［１９］
。 配伍方面，方中熟地、白芍是血中之血药，
当归、川芎是血中之气药，阴阳动静相配，加以桃仁、红
花活血化瘀。 全方配伍得当，使瘀血祛、新血生、气机
畅，化瘀 生 新 是 该 方 显 著 特 点。 《 黄 帝 内 经 · 素 问》
言：“ 脉者，血之府也” ，凡血液流通之处，皆可称为血
府，因此桃红四物汤被广泛用于骨科各疾病的治疗，如
骨折、腰腿痛等 ［２０］ 。
由于桃红四物汤在骨伤科方面多用做壮骨强肾药
的辅助用药，单独探讨其对骨质疏松症作用的研究较
为少见，本研究探讨在糖皮质激素诱导的小鼠骨质疏
松模型中，桃红四物汤对其的治疗作用，结果发现：经
过桃红四物汤治疗后，小鼠股骨小梁数目、排列、粗细
及股骨小梁面积占比均有明显改善，即小鼠骨质疏松
程度有所改善，证明中药桃红四物汤对糖皮质激素性
骨质疏松具有明显的治疗作用，但研究中尚未能证实
不同有效剂量的桃红四物汤对糖皮质激素性骨质疏松
治疗作用的差异及对血清中碱性磷酸酶的影响。
实验中，由于低剂量组换气系统堵塞导致 ４ 只小
鼠窒息死亡，还有 １ 只小鼠因灌胃操作失误发生消化
道出血及肠梗阻死亡，因此只有 ３ 只小鼠的数据。 低
剂量组样本量无法满足统计学要求，会影响反映不同
中药浓度对骨质疏松的治疗效果比较，但不影响反映
中药对骨质疏松的治疗效果。
本实验不设置阳性对照组的原因主要是在临床上
没有比较合适的阳性药物。 在临床上，治疗糖皮质激
素引起的骨质疏松的首选药物为钙剂和维生素 Ｄ ［２１］ ，
其也是原发性骨质疏松的一般用药，与中药药剂的作
用机制并不相似，比较两者药效和毒性的意义不大，因
此不设置阳性对照组。
本实验探究活血祛瘀方药桃红四物汤在治疗糖皮
质激素性骨质疏松中的作用，为治疗该病提供了新思
路，完善糖皮质激素性骨质疏松相关治疗理论。 我们
推测，临床上通过配合糖皮质激素应用桃红四物汤有
辽宁中医杂志 ２０２１ 年第 ４８ 卷第 ９ 期
可能在保证糖皮质激素良好治疗效果的同时，在一定
程度上降低治疗的不良反应。
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·Ⅵ· 辽宁中医杂志 ２０２１ 年第 ４８ 卷第 ９ 期

图３ Ｂ、Ｃ 对综合评分影响的等高线图和响应面图

骆驼蓬草调控 ＥＲＫ 信号通路减轻类风湿性关节炎的炎症反应

田新玮（ 正文见 １９９ ～ ２０２ 页）

图１ ＨＥ 染色结果（４０ × ，１００ × ，２００ × ，４００ × ）

桃红四物汤配方颗粒对糖皮质激素性骨质疏松小鼠模型的干预作用研究
祝佳音（ 正文见 ２０３ ～ ２０６ 页）

注：对照组（ ｃｏｎ） 、模型组（ ｍｏｄ） 、中药高剂量组（ Ｈ） 、中药中剂量组（ Ｍ） 、中药低剂量组（ Ｌ）

图１ 各组小鼠股骨病理切片（ ＨＥ 染色 ４０ × ）