山东医药 2022 年第 62 卷第 18 期

腹腔注射多氯联苯 118 的雄性大鼠甲状腺功能

变化观察及其机制探讨
朱晓霞，许文立，段宇
南京医科大学第一附属医院内分泌科，南京 210029

摘要：目的 观察多氯联苯 118（polychlorinated biphenyl 118，PCB118）腹腔注射的雄性大鼠甲状腺功能变化及

组织衰老程度，并探讨其可能作用机制。方法 24 只雄性 Wistar 大鼠随机分为 A、B、C 及对照组 4 组，每组 6 只。A、
B 及 C 组大鼠分别用 10、100、1 000 μg/（kg·d）的 PCB118 腹腔注射，对照组用等容积玉米油腹腔注射，各组均注射
1 天/次，一周 5 次，共注射 13 周。造模结束时处死各组大鼠，心脏取血，ELISA 法检测大鼠血清游离甲状腺素
（FT4）、游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）及促甲状腺激素（TSH）。取甲状腺组织，采用衰老相关 β-半乳糖苷酶（SA-β-
gal）染色评估甲状腺组织衰老情况；实时荧光定量 PCR 法检测各组大鼠甲状腺组织衰老基因（p16、p21、p53）、衰老
相关分泌表型（SASP）中的部分因子［白细胞介素-1α（IL-1α）、肿瘤坏死因子 α（TNFα）、白细胞介素-6（IL-6）、基质金
属肽酶 13（MMP13）］mRNA 以及线粒体动力学相关蛋白［线粒体自噬调节因子 PTEN 诱导激酶 1（PINK1）、线粒体动
力相关蛋白 1（DNM1L）、线粒体融合蛋白 1（MFN1）、线粒体融合蛋白 2（MFN2）］mRNA。结果 A、B 及 C 组大鼠血
清 FT3 和 FT4 水平呈 PCB118 剂量依赖性降低，TSH 水平呈剂量依赖性升高；与对照组比较，B、C 组大鼠血清 FT3 和
FT4 水平显著下降，TSH 水平显著升高（P 均<0. 05）。与对照组比较，A、B、C 组大鼠甲状腺组织 SA-β-gal 染色阳性率
高（P 均<0. 05）；与 A、B 组比较，C 组大鼠甲状腺组织 SA-β-gal 染色阳性率进一步增高（P 均<0. 05）。与对照组比较，
B、C 组大鼠甲状腺组织 p16、p21 基因相对表达量升高（P 均<0. 05）。与对照组比较，A、B、C 组大鼠甲状腺组织 IL-
6 mRNA 及 MMP13 mRNA 相对表达量升高，B 组大鼠甲状腺组织 TNFα mRNA 相对表达量升高（P 均<0. 05）；与 B 组
比 较 ，C 组 大 鼠 甲 状 腺 组 织 TNFα mRNA 相 对 表 达 量 下 降（P<0. 05）。 与 对 照 组 比 较 ，A 组 甲 状 腺 组 织
DNM1L mRNA、MFN1 mRNA 相 对 表 达 量 升 高（P 均 <0. 05），B 组 甲 状 腺 组 织 PINK1 mRNA、DNM1L mRNA、
MFN1 mRNA 相对表达量升高（P 均 <0. 05），C 组甲状腺组织 DNM1L mRNA 及 MFN2 mRNA 相对表达量降低（P 均 <
0. 05）。结论 PCB118 腹腔注射的大鼠甲状腺功能减退、甲状腺组织衰老程度高，甲状腺组织衰老基因 p16、p21 表
达升高，衰老相关分泌表型标志物 IL-6 mRNA、TNFα mRNA 及 MMP13 mRNA 表达升高，线粒体线粒体动力学相关
蛋白 PINK1 mRNA、DNM1L mRNA、MFN1 mRNA 表达升高。PCB118 可能通过诱导大鼠甲状腺组织线粒体动力学紊
乱、上调衰老基因表达、促进衰老衰老相关分泌表型标志物表达，促进甲状腺组织衰老，导致大鼠甲状腺功能减退，
诱导大鼠甲状腺衰老。
关键词：多氯联苯 118；多氯联苯；甲状腺；甲状腺功能异常；衰老；线粒体
doi：10. 3969/j. issn. 1002-266X. 2022. 18. 011
中图分类号：R58 文献标志码：A 文章编号：1002-266X（2022）18-0049-06 开放科学（资源服务）
标识码（OSID）

通信作者：段宇（E-mail：duanyujsph@163. com）

［13］ WANG J， JU B， PAN C， et al. Application of bone mar⁃
rowderived mesenchymal stem cells in the treatment of intrauter⁃
ine adhesions in rats［J］. Cell Physiol Biochem，2016，39（4）：
1553-1560.
［14］ SZÓSTEK⁃MIODUCHOWSKA AZ，LUKASIK K，SKARZYNSKI
DJ， et al. Effect of transforming growth factor ⁃ β1 on α ⁃
smooth muscle actin and collagen expression in equine endometri⁃
al fibroblasts［J］. Theriogenology，2019，124：9⁃17.
［15］ WEISS G，GOLDSMITH L T，TAYLOR R N，et al. Inflamma⁃
tion in reproductive disorders［J］. Reprod Sci，2009，16（2）：
216-229.
［16］ GNAINSKY Y，GRANOT I，ALDO P B，et al. Local injury of
the endometrium induces an inflammatory response that promotes
successful implantation［J］. Fertil Steril，2010，94（6）：2030-
2036.
［17］ 徐慧颖，李娜，张云山 . 胚胎植入—子宫内膜容受性是关键
［J］. 生殖医学杂志，2014，23（3）：198-202.
［18］ ROSSIGNOLI F，CASELLI A，GRISENDI G，et al. Isolation，
characterization，and transduction of endometrial decidual tis⁃
sue multipotent mesenchymal stromal/stem cells from menstrual
blood［J］. Biomed Res Int，2013，2013：901821.
（收稿日期：2022-01-24）

49
 山东医药 2022 年第 62 卷第 18 期

Effect of intraperitoneal injection of PCB118 on thyroid function in male rats and its mechanism
ZHU Xiaoxia，XU Wenli，DUAN Yu
Department of Endocrinology，The First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University，Nanjing 210029，China
Abstract：Objective To observe the secretory function and aging degree in thyroid tissues of rats injected with
polychlorinated biphenyl 118（PCB118）intraperitoneally，and to explore the underlying mechanism. Methods Twenty-
four male Wistar rats were randomly divided into four groups：groups A，B，C，and control group. Rats of groups A，B，C
were intraperitoneally injected with 10，100，and 1 000 μg/（kg·d）PCB118，respectively；rats in the control group were
intraperitoneally injected with corn oil，five days a week，for 13 weeks. At the end of modeling，the rats were euthanized
and sacrificed，the blood was collected from the heart. Rats’serum levels of free thyroxine（FT4），free triiodothyronine
（FT3）and thyroid-stimulating hormone（TSH）were measured by enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）. Thyroid
tissues of rats were taken out and their senescence was assessed by aging-related β-galactosidase（SA-β-gal）staining. The
qRT-PCR was used to detect mRNA expression levels of senescence genes（p16，p21，p53），senescence-associated secre⁃
tory phenotype（SASP）factors［interleukin-1α（IL-1α），tumor necrosis factor-α（TNF-α），interleukin-6（IL-6），and ma⁃
trix metallopeptidase 13（MMP13）］，and mitochondria dynamics regulators［PTEN induced putative kinase 1（PINK1），
dynamin1-like（DNML1），mitofusin1（MFN1），and mitofusin2（MFN2）］. Results FT3 and FT4 serum concentrations
of rats decreased in the groups A，B and C in a PCB118 dose-dependent manner，while TSH increased in a PCB118 dose-
dependent manner. Compared with the control group，FT3 and FT4 significantly decreased，and TSH significantly in⁃
creased in groups B and C（all P<0. 05）. SA-β-Gal staining positive rate of rats’thyroid tissues was significantly higher in
the groups A，B and C than in the control group（all P<0. 05）；compared with groups A and B，SA-β-Gal staining positive
rate increased meaningfully in the group C（P<0. 05）. Compared with the control group，the mRNA expression levels of
p16 and p21 in the rats’thyroid tissues significantly increased in groups B and C（all P<0. 05）. Compared with the control
group，the relative expression levels of IL-6 mRNA and MMP13 mRNA in the thyroid tissues of rats increased in the groups
A，B，and C，and the relative expression of TNFα mRNA in the thyroid tissues of rats increased in the group B（all P<
0. 05）. Compared with group B，the relative expression of TNFα mRNA in the thyroid tissues of rats decreased in the
group C（P<0. 05）. Compared with the control group，the relative expression levels of DNM1L mRNA and MFN1 mRNA
in the thyroid tissues increased in the group A （all P<0. 05），and the relative expression levels of PINK1 mRNA，
DNM1L mRNA，and MFN1 mRNA of thyroid tissues increased in the group B（all P<0. 05），and the relative expression
levels of DNM1L mRNA and MFN2 mRNA in the thyroid tissues decreased in the group C（all P<0. 05）. Conclusions
Rats with intraperitoneal injection of PCB118 showed impaired thyroid function，higher degree of thyroid tissue aging and
increased mRNA expression levels of senescence genes p16，p21，SASP factors IL-6，TNFα，MMP13，and mitochondria
dynamics regulators PINK1，DNM1L，MFN1. PCB118 exposure could accelerate senescence and damage function in thy⁃
roid tissues of rats via disturbing mitochondrial dynamics，up-regulating senescence gene expression，and promoting SASP.
Key words：polychlorinated biphenyl 118； polychlorinated biphenyls； thyroid； thyroid dysfunction； senes⁃
cence；mitochondria

多氯联苯（polychlorinated biphenyls，PCBs）是一 分泌功能下降及甲状腺组织纤维化［4-5］。甲状腺功

种人工合成的持久性有机环境污染物，曾作为冷却
剂、热载体和绝缘油等广泛用于工业生产中。PCBs
的化学稳定性高、难以分解，目前普遍存在于水、土
壤和空气中［1］。PCBs 的高亲脂性导致其在生物体
内积聚，并沿着食物链进一步富集，对动物和人类造
成一系列不良影响，如致癌、认知和行为异常、致畸
［2-3］
和内分泌代谢紊乱等
亲和，可直接沉积在甲状腺组织中。长期暴露于富
含 PCBs 环境中的人群、海洋生物或野生哺乳类动
物甲状腺组织中均可检测出 PCBs，并出现甲状腺
50
能异常已成为糖尿病、肥胖、脂质异常等多种衰老
相 关 性 疾 病 的 独 立 危 险 因 素［6-8］。 我 们 前 期 研
究［9-10］发现，持续低剂量 PCB118 暴露可导致大鼠甲
状腺功能异常，甲状腺组织间质纤维化、炎症浸润，
但其发生机制尚未明确。2021 年 6 月起，我们观察
了 PCB118 腹 腔 注 射 后 Wistar 大 鼠 甲 状 腺 功 能 变
。PCBs 对甲状腺组织高度 化，评估了甲状腺组织的衰老程度，检测了衰老基
因、SASP、线粒体动力学因子的表达，为进一步揭
示 PCB118 引发甲状腺功能异常的作用机制提供一
定的依据。
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1 材料与方法
1. 1 动物、试剂及仪器 24 只 8 周龄 SPF 级雄性
Wistar 大鼠，体质量（225 ± 20）g，购于 Vital River 公
司（中国北京），饲养于南京医科大学动物实验中
心 ，饲 养 条 件 为 相 对 湿 度 50%～60%，环 境 温 度
20 ℃～25 ℃，明暗周期 12 h，自由摄食及饮水。纯
度 100% 的 PCB118（No. 31508-00-6）购 自 美 国 Ac⁃
cuStandard 公司，溶解于玉米油（C8267，美国 Sigma
公司）中，避光常温保存。ELISA 试剂盒购自中国麦
莎公司，细胞衰老相关 β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）染
色试剂盒购自中国碧云天，总 RNA 提取试剂盒购自
美国 Invitrogen 公司 ，逆转录试剂盒 PrimeScript RT
Master Mix Kit 购自美国 TaKaRa 公司，、SYBR-Green
PCR 试剂盒购自中国诺维赞公司，StepOnePlus 实时
定量 PCR 仪购自美国 AppliedBiosystems 公司，qRT-
PCR 引物由上海英俊公司合成。
1. 2 大鼠分组及 PCB118 腹腔注射方法 24 只大
鼠适应性饲养 1 周后随机分为 A、B、C 及对照组 4
组 ，每 组 6 只 。 A、B 及 C 组 大 鼠 分 别 用 10、100 和
1 000 μg/（kg·d）的 PCB118 腹腔注射，1 天/次，一周
5 次，共注射 13 周。对照组用等容积玉米油腹腔注
射，1 天/次，一周 5 次，共注射 13 周。造模期间大鼠
无行为异常，各组大鼠体质量变化无统计学差异。
1. 3 各组大鼠甲状腺功能指标观察 造模结束时
处死各组大鼠，心脏取血并分离血清，-80 ℃保存
备用，采用 ELISA 试剂盒测定各组大鼠血清游离甲
状腺素（FT4）、游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）及促甲
状腺激素（TSH），所有操作均严格按照使用说明书
进行。留空白孔调零，使用酶标仪测量标准品及样
品的光密度 OD 值。根据标准品浓度及吸光度值建
立标准曲线后计算样品的浓度。试验重复 3 次，取
平均值。
1. 4 各组大鼠甲状腺组织衰老情况观察 采用
SA-β-gal 染色评估甲状腺组织衰老情况。处死各组
大鼠后取新鲜甲状腺组织，冰冻切片，使用细胞衰老
β-半乳糖苷酶染色试剂盒对组织的冰冻切片进行
SA-β-gal 染色，所有操作均严格按照使用说明书进
行。显微镜下观察各组大鼠甲状腺组织 SA-β-gal 表
达情况。SA-β-gal 染色以 X-Gal 为底物，在衰老特异
性的 SA-β-gal 催化下会生成深蓝色产物，光学显微
镜下可观察到表达 SA-β-gal 的组织变为蓝色。对各
组大鼠甲状腺组织 SA-β-gal 染色情况进行计量分
析，测算各组 SA-β-gal 染色阳性率。实验重复 3 次，
取平均值。
1. 5 各组大鼠甲状腺组织衰老基因、衰老相关分泌
表型中的部分因子及线粒体动力学相关蛋白的基因
表达检测 采用实时荧光定量 PCR（qRT-PCR）法检
测各组大鼠甲状腺组织衰老基因（p16、p21、p53）、衰
老相关分泌表型标志物［白细胞介素-1α（IL-1α）、肿
瘤坏死因子 α（TNFα）、白细胞介素-6（IL-6）、基质金
属肽酶 13（MMP13）］mRNA、线粒体动力学相关蛋白
［线粒体自噬调节因子 PTEN 诱导激酶 1（PINK1）、线
粒体动力相关蛋白 1（DNM1L）、线粒体融合蛋白 1
（MFN1）、线粒体融合蛋白 2（MFN2）mRNA。取各组
甲状腺组织，根据说明书用总 RNA 提取试剂盒提取
大鼠甲状腺组织的总 RNA，用逆转录试剂盒逆转录
后获得 cDNA。使用 SYBR-Green PCR 试剂盒在 Ste⁃
pOnePlus 系统上进行 qRT-PCR。以 β-actin 作内参，
β -actin 上 游 引 物 5'-GACAACTTTGGCATCGTGGA-
3'，下 游 引 物 5'-ATGCAGGGATGATGTTCTGG-3；
p21 上 游 引 物 5'- ATGTCCGATCCTGGTGATGTCC⁃
GA-3'，下 游 引 物 5'- TCAGGGCTTTCTCTTG⁃
CAGAAGAC-3；p16 上 游 引 物 5'- TACCCCGATA⁃
CAGGTGATGA-3'，下游引物 5'-TACCGCAAATACC⁃
GCACGA-3；p53 上 游 引 物 5'-GTCGGCTCCGAC⁃
TATACCACTATC-3'，下 游 引 物 5'-CTCTCTTTG⁃
CACTCCCTGGGG-3；IL-6 上 游 引 物 5'-GTCAACTC⁃
CATCTGCCCTTC-3'，下 游 引 物 5'-TGTGGGTGG⁃
TATCCTCTGTG-3；TNF- α 上 游 引 物 5'-CATCC⁃
GTTCTCTACCCAGCC-3'，下 游 引 物 5'-AATTCT⁃
GAGCCCGGAGTTGG-3；IL-1α 上 游 引 物 5'-AAGA⁃
CAAGCCTGTGTTGCTGAAGG-3'，下 游 引 物 5'-
TCCCAGAAGAAAATGAGGTCGGTC-3；MMP13 上游
引 物 5'-TGATGGGCCTTCTGGTCTTCT-3'，下 游 引
物 5'-AGGTCTCGGGATGGATGCT-3；PINK1 上 游 引
物 5'-AATGCCGCTGTGTATGAAGC-3'，下 游 引 物
5'-CTCCCCATCTGCTCCCTTT-3；DNM1L 上 游 引 物
5'-TCCCTAAACTCCATGATGCCATA-3'，下 游 引 物
5'-CCACAGGCATCAGCAAAGTC-3；MFN1 上 游 引
物 5'-CCTTGTACATCGATTCCTGGGTTC-3'，下游引
物 5'-CCTGGGCTGCATTATCTGGTG-3；MFN2 上 游
引物 5'-TCAAGCGCCAGTTTGTGGAG-3'，下游引物
5'-CACAGATGAGCAAATGTCCCAGA-3。 以 2- ΔΔ CT
代表目的基因的相对表达量。实验重复 3 次，取平
均值。
1. 6 统计学方法 使用 GraphPad Prism 8 统 计 软
51
 山东医药 2022 年第 62 卷第 18 期

件 进 行 数 据 处 理 。 应 用 Shapiro-Wilk 法 检 验 计 量 2. 5 各 组 大 鼠 甲 状 腺 组 织 PINK1 mRNA、

-
资料的正态分布，符合正态分布的计量资料以 x ± s DNM1L mRNA、MFN1 mRNA 及 MFN2 mRNA 相对表
表 示 ，多 组 比 较 采 用 单 因 素 方 差 分 析 ，进 一 步 组 达量比较 各 组 大 鼠 甲 状 腺 组 织 PINK1 mRNA、
间 比 较 采 用 Tukey 法 。 P < 0. 05 为 差 异 有 统 计 学 DNM1L mRNA、MFN1 mRNA 及 MFN2 mRNA 相对表
意义。 达量比较见表 4。
2 结果 表4 各组大鼠甲状腺组织 PINK1 mRNA、DNM1L mRNA、
-
MFN1 mRNA及MFN2 mRNA相对表达量比较（x ± s）
2. 1 各组大鼠血清 FT4、FT3 及 TSH 水平比较 各
组别 PINK1 mRNA DNM1LmRNA MFN1 mRNA MFN2 mRNA
组大血清 FT4、FT3 及 TSH 水平比较见表 1。
- A组 2. 50 ± 0. 52 1. 89 ± 0. 24* 1. 96 ± 0. 29* 1. 54 ± 0. 27
表1 各组大鼠血清 FT4、FT3 及 TSH 水平比较（x ± s）
B组 2. 81 ± 1. 24* 1. 43 ± 0. 11* 1. 93 ± 0. 39* 1. 26 ± 0. 33
组别 FT3（pmol/L） FT4（pmol/L） TSH（mIU/L） C组 1. 67 ± 0. 56 0. 52 ± 0. 11 *#&
0. 63 ± 0. 13 #&
0. 40 ± 0. 22*#&
A组 18. 46 ± 0. 63 141. 96 ± 2. 13 0. 70 ± 0. 11 对照组 1. 05 ± 0. 25 1. 01 ± 0. 16 1. 02 ± 0. 24 1. 01 ± 0. 17
B组 17. 71 ± 0. 51* 131. 12 ± 3. 86*# 0. 79 ± 0. 10*
注：与对照组比较，*P<0. 05；与 A 组比较，#P < 0. 05；与 B 组比
C组 16. 67 ± 0. 47*#& 118. 80 ± 9. 51*#& 0. 84 ± 0. 07* 较，&P<0. 05。
对照组 18. 79 ± 0. 61 146. 55 ± 3. 06 0. 62 ± 0. 04
3 讨论
注：与对照组比较，*P<0. 05；与 A 组比较，#P < 0. 05；与 B 组比
PCBs 是一种在环境中广泛存在的环境内分泌
较，&P<0. 05。
干扰物，它可以通过食物持久蓄积于生物体内，已被
2. 2 各组大鼠甲状腺组织 SA-β-gal 染色阳性率比
证明可造成动物和人体神经、免疫、生殖、内分泌系
较 A、B、C 及对照组大鼠甲状腺组织 SA-β-gal 染色
统等多组织、多系统损伤［11］。PCBs 可影响人体淋巴
阳 性 率 分 别 为 15. 46%±4. 81%、15. 84%±9. 15%、
细胞的端粒酶活性，加速端粒缩短。端粒是染色体
31. 04%±7. 61%、4. 14%±2. 91%。 与 对 照 组 比 较 ，
末端高度重复的核苷酸序列，可保护染色体免受侵
A、B、C 组大鼠甲状腺组织 SA-β-gal 染色阳性率升高
蚀 ，对保持基因组稳定性至关重要［12］。随机体老
（P 均<0. 05）；与 A、B 组比较，C 组大鼠甲状腺组织
化，端粒酶活性会降低、端粒缩短。由此推测 PCBs
SA-β-gal 染色阳性率高（P <0. 05）。
可能会加速机体衰老，但目前关于 PCBs 是否促进
2. 3 各组大鼠甲状腺组织 p16、p21 及 p53 基因相对
甲状腺衰老的研究尚缺乏。PCB118 在我国长三角
表达量比较 各组大鼠甲状腺组织 p16、p21 及 p53
地区广泛存在，常作为评估环境中多氯联苯总量的
基因相对表达量比较见表 2。 指标［13］，因此本研究选用 PCB118 作为 PCBs 同系物
表2 各组大鼠甲状腺 p16、p21 及 p53 基因相对表达量
- 的代表，研究 PCBs 能否引起大鼠甲状腺衰老及其
比较（x ± s）
潜在机制。
组别 p16 p21 p53
衰老是一个普遍的、内在的和复杂的过程，其特
A组 1. 65 ± 0. 31 1. 75 ± 0. 34 1. 33 ± 0. 41
B组 2. 28 ± 0. 60* 2. 02 ± 0. 66* 1. 29 ± 0. 32 征 是 组 织 和 器 官 功 能 逐 渐 丧 失［14］。 流 行 病 学 调
C组 2. 34 ± 0. 57* 2. 24 ± 0. 32* 1. 32 ± 0. 46 查［7］显示在老年人群中的随着年龄增大其甲状腺
对照组 1. 04 ± 0. 32 1. 00 ± 0. 06 1. 01 ± 0. 12 分 泌 功 能 降 低 ，表 现 为 血 清 中 FT4 及 FT3 水 平 降
注：与对照组比较，P<0. 05。 低 、TSH 升 高 。 本 研 究 中 我 们 检 测 了 对 照 组 及
*

2. 4 各组大鼠甲状腺组织 IL-6、TNFα、
MMP13 及 IL- PCB118 暴露组的大鼠血清甲状腺功能，结果显示
1α的基因相对表达量比较 各组大鼠甲状腺组织IL-6、 暴露组大鼠出现明显的甲状腺功能异常。血清
TNFα、
MMP13 及 IL-1α 基因相对表达量比较见表 3。 FT3、FT4 水平随着 PCB118 剂量的增加而下降，TSH
表3 各组大鼠甲状腺组织 IL-6、TNFα、MMP13 及 IL-1α 水平则随着 PCB118 剂量的增加而上升，这与老化
-
基因相对表达量比较（x ± s）
进程中甲状腺功能的变化相一致，提示 PCB118 暴
组别 IL-6 mRNA TNFα mRNA MMP13 mRNA IL-1α mRNA
露导致了大鼠甲状腺功能降低，这可能是甲状腺早
A组 3. 62 ± 0. 67* 2. 40 ± 0. 31 3. 22 ± 0. 66* 1. 19 ± 0. 46
衰引起的。
B组 3. 76 ± 1. 07* 3. 06 ± 1. 27* 3. 39 ± 0. 75* 1. 57 ± 1. 56
C组 4. 06 ± 0. 94* 0. 74 ± 0. 17& 4. 44 ± 1. 04* 1. 16 ± 0. 87
细胞衰老是脊椎动物和人类衰老的标志，衰老
对照组 1. 01 ± 0. 17 1. 01 ± 0. 19 1. 04 ± 0. 32 1. 01 ± 0. 20 细胞的存在及累积可造成组织器官损伤，导致患心
注：与对照组比较，P<0. 05；与 B 组比较，P<0. 05。
* &
血管疾病、糖尿病和神经退行性疾病等疾病的风险
52
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增加［15］。衰老反应引起细胞表型的显著变化，包括 种促炎细胞因子、生长因子和细胞外基质降解蛋
细胞分裂潜能的不可逆性尚失、细胞凋亡抗性的发 白，其特征是持续的促炎性表型，称为衰老相关分
［16］
生以及基因表达模式的改变 ，这些变化可以被一 泌表型，进入“完全衰老”的第二步［19］。尽管它们的
些标记物识别。SA-β-gal 是用于具体识别衰老细胞 生长停滞，衰老细胞仍具有代谢活性并且可以影响
的第一个标记。SA-β-gal 一直是用于在体外或体内 它们的微环境，衰老相关分泌表型能在邻近的年轻
识别衰老细胞的最广泛使用的可靠生物标志物，它 细胞中诱导衰老，促进炎症和功能障碍向邻近细胞
的活性通常通过用显色底物 X-gal 进行原位染色来 的传播［15］。衰老相关分泌表型已被证实与老龄化
确定［17］。本研究中 SA-β-gal 染色显示，对照组可看 和年龄相关疾病密切相关。低水平慢性炎症（也称
到稀疏散在的被染成蓝色的甲状腺细胞、且染色很 为“无菌炎症”
）是许多年龄相关疾病的病理学基
浅，而在 PCB118 暴露组大鼠甲状腺组织 SA-β-gal 活 础。消除衰老细胞可以降低老年小鼠脂肪、肾脏和
性增强、催化生成的深蓝色产物明显增多，在光学 骨 骼 肌 中 的 促 炎 细 胞 因 子 水 平 ，如 IL-6、IL-1α 和
显微镜下表现为蓝染强度增强、面积增大，并且随 TNF-α［15］。其中 IL-6 被认为是衰老相关分泌表型
着 PCB118 浓度的增加这种变化越来越明显，C 组 的核心之一，它在多种类型的衰老组织或细胞中表
可观察到蓝色最深、且蓝染面积最大。同时我们 达上升，包括衰老的垂体组织及甲状腺细胞等［20］。
对 其 进 行 了 计 量 分 析 也 发 现 PCB118 处 理 组 的 MMP13 则是一种重要的细胞外基质降解蛋白。我
SA- β -gal 染 色 阳 性 占 比 明 显 高 于 对 照 组 ，C 组 中 们检测了 IL-6、TNFα、MMP13、IL-1α 的基因表达水
SA-β-gal 染 色 阳 性 率 显 著 高 于 A、B 组 及 对 照 组 ， 平 ，qRT-PCR 结 果 显 示 IL-6 在 PCB118 暴 露 组
提示 PC118 暴露可致大鼠甲状腺组织内衰老细胞 中 mRNA 相对表达量均显著上升，MMP13、TNFα 在
累 积 ，且 衰 老 细 胞 随 着 PC118 暴 露 浓 度 的 增 高 而 B 组也显著上升，而 IL-1α 在各组之间无显著差异。
进一步增多。 这些结果表明暴露组甲状腺处于衰老相关变化的
衰老细胞决定性特征之一是稳定的细胞周期 风险中。
停滞，它的基因表达谱也发生极端变化，尤其是与 线粒体是机体重要的细胞器，在调节能量和新
细胞周期抑制剂或激活剂相关的基因，如 p21、p16 陈代谢稳态中起着关键作用。长期以来线粒体代谢
的 过 度 表 达 。 p21 和 p16 是 p53 和 RB 控 制 的 肿 瘤 紊乱和 ROS 产生在衰老中的作用已经得到广泛证
抑 制 通 路 的 组 成 部 分 ，其 中 p21 基 因 被 认 为 是 唯 实。近年有研究结果揭示了线粒体膜动力学受损和
一已知的具有促衰老功能的介质，p21 结合并调节 线粒体质量控制机制在衰老中的作用［21］。线粒体膜
细胞周期蛋白依赖性激酶 2（CDK2），导致细胞的 动力学通过不断交替进行的融合—裂变来调节线粒
G1 周期停滞和衰老。p21 的作用主要在于衰老的 体数量、形态和分布，以确保线粒体网络适应细胞生
启 动 ，而 p16 则 可 保 持 持 久 的 生 长 停 止 。 在 本 研 物能量需求。线粒体融合可使细胞器拉长，扩大线
究 中 ，p21、p16 相 对 表 达 量 随 PCB118 暴 露 浓 度 增 粒体网络及其互连性，重新分配能量，改善钙稳态和
加均显著上升。p21、p16、p53 通常以协同或相互 ATP 合成；裂变则将功能受损的组件分离出来以待
关联的方式起作用以阻断细胞周期并实施衰老程 线粒体自噬将其进一步去除。线粒体自噬是一种通
序，但在不同细胞类型或物种中它们发挥的作用 过自噬机制选择性清除受损或功能失调的线粒体的
不同。高表达的 p21 或 p16 可诱导人成纤维细胞 过程，其功能是维持线粒体质量控制和体内平衡。
周期停滞，p53 在小鼠胚胎成纤维细胞的衰老中发 线粒体自噬对细胞活动非常重要，因为它可以清除
挥重要作用 ［18］
。 本 研 究 结 果 显 示 ，在 PCB118 诱 严重受损的线粒体，减少有害物质的产生，抵消线粒
导大鼠甲状腺组织衰老的过程中 p16、p21 发挥重 体损伤的遗传积累。许多研究表明，线粒体融合、裂
要的作用。 变和线粒体自噬可能参与细胞衰老，而在多种年龄
以往研究认为，细胞衰老是一种静态的细胞命 相关性疾病中也观察到了线粒体动力学稳态的
运。最新研究发现，衰老是一个动态的多步骤过 失衡［22］。
程。尽管最初的衰老诱导信号足以启动细胞周期 线粒体裂变和融合分别由 DNM1L 和 MFN1/2
退出，但这仅仅是衰老过程的早期步骤。衰老细胞 介 导 ，PINK1 则 是 线 粒 体 自 噬 的 主 要 调 节 因 子 。
逐渐重塑染色质，形成独特的分泌蛋白谱，包括多 在 本 研 究 中 ，PINK1、DNM1L、MFN1/2 的 表 达 在
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 山东医药 2022 年第 62 卷第 18 期

PCB118 暴 露 后 都 发 生 了 显 著 改 变 。 DNM1L、 ing hormone levels are associated with metabolic syndrome in a
Chinese community-based population of euthyroid people aged 40
MFN1 在 A、B 组中表达升高，在 C 组表达显著降低，
years and older［J］. J Biomed Res，2016，30（6）：476-482.
证实低、中浓度的 PCB118 即可扰乱线粒体动力学
［9］ XU B，YANG H，SUN M，et al. 2，3'，4，4'，5-pentachlorobiphe⁃
的稳态，而更高浓度的 PCB118 可使线粒体损伤进 nyl induces inflammatory responses in the thyroid through jnk and
一 步 加 重 。 PINK1 靶 向 线 粒 体 ，稳 定 状 态 期 间 aryl hydrocarbon receptor-mediated pathway［J］. Toxicol Sci，
PINK1 可以通过线粒体蛋白穿梭机制转运到线粒体 2016，149（2）：300-311.

基质中被蛋白酶降解，但在线粒体损伤的情况下、线 ［10］ 李文，汤金梅，解雨春，等 . 多氯联苯 118 对大鼠胰岛素敏感性

影响的研究［J］. 中华糖尿病杂志，2013，5（10）：4.
粒体膜电位降低，PINK1 无法转移到线粒体中被降
［11］ KLOCKE C，LEIN P J. Evidence implicating non-dioxin-like
解［23］。本研究中，PINK1 在 PCB118 暴露组表达上
congeners as the key mediators of polychlorinated biphenyl（pcb）
调，反映 PCB118 暴露后甲状腺组织中受损线粒体 developmental neurotoxicity［J］. Int J Mol Sci，2020，21（3）：
积累，这可能与 PCB118 加速了甲状腺衰老相关。 1013.

综上所述，PCB118 腹腔注射的大鼠甲状腺功 ［12］ ZIEGLER S，SCHETTGEN T，BEIER F，et al. Accelerated telo⁃
mere shortening in peripheral blood lymphocytes after occupation⁃
能 减 退 、甲 状 腺 组 织 衰 老 程 度 高 ，衰 老 基 因 p16、
al polychlorinated biphenyls exposure［J］. Arch Toxicol，2017，91
p21 表 达 升 高 ，衰 老 相 关 分 泌 表 型 标 志 物 IL-6
（1）：289-300.
mRNA、TNFα mRNA 及 MMP13 mRNA 表达升高，线 ［13］ RUDGE C V C，SANDANGER T，RÖLLIN H B，et al. Levels of
粒 体 线 粒 体 动 力 学 相 关 蛋 白 PINK1 mRNA、 selected persistent organic pollutants in blood from delivering
DNM1L mRNA、MFN1 mRNA 表达升高。PCB118 可 women in seven selected areas of São Paulo State，Brazil［J］. En⁃

能通过诱导大鼠甲状腺组织线粒体动力学紊乱、上 viron Int，2012，40：162-169.

调衰老基因表达、促进衰老衰老相关分泌表型标志
物表达，促进甲状腺组织衰老，导致大鼠甲状腺功
能减退。
参考文献：
［1］ MARKOWITZ G. From industrial toxins to worldwide pollutants：
a brief history of polychlorinated biphenyls［J］. Public Health
Rep，2018，133（6）：721-725.
［2］ BERG MVAN DEN，KYPKE K，KOTZ A，et al. WHO/UNEP
global surveys of PCDDs， PCDFs， PCBs and DDTs in hu⁃
man milk and benefit-risk evaluation of breastfeeding［J］. Arch
Toxicol，2017，91（1）：83-96.
［3］ SIMHADRI J J，LOFFREDO C A，TRNOVEC T，et al. Biomark⁃
ers of metabolic disorders and neurobehavioral diseases in a PCB-
exposed population：What we learned and the implications for fu⁃
ture research［J］. Environ Res，2020，191：110211.
［4］ DUFOUR P，PIRARD C，SEGHAYE M C，et al. Association be⁃
tween organohalogenated pollutants in cord blood and thyroid
function in newborns and mothers from Belgian population［J］.
Environ Pollut，2018，238：389-396.
［5］ ALSEN M，SINCLAIR C，COOKE P，et al. Endocrine disrupt⁃
ing chemicals and thyroid cancer：an overview［J］. Toxics，2021，
9（1）：14.
［6］ GUO H，SUN M，HE W，et al. The prevalence of thyroid nod⁃
ules and its relationship with metabolic parameters in a Chinese
community-based population aged over 40 years［J］. Endocrine，
2014，45（2）：230-235.
［7］ WEISSEL M. Disturbances of thyroid function in the elderly［J］.
Wien Klin Wochenschr，2006，118（1-2）：16-20.
［8］ XU B，YANG H，WANG Z，et al. Elevated thyroid stimulat⁃
［14］ MOHAMAD KAMAL N S，SAFUAN S，SHAMSUDDIN S，et al.
Aging of the cells：Insight into cellular senescence and detection
Methods［J］. Eur J Cell Biol，2020，99（6）：151108.
［15］ HERRANZ N，GIL J. Mechanisms and functions of cellular se⁃
nescence［J］. J Clin Invest，2018，128（4）：1238-1246.
［16］ DI MICCO R，KRIZHANOVSKY V，BAKER D，et al. Cellular
senescence in ageing：from mechanisms to therapeutic opportuni⁃
ties［J］. Nat Rev Mol Cell Biol，2021，22（2）：75-95.
［17］ LI X，QIU W，LI J，et al. First-generation species-selective
chemical probes for fluorescence imaging of human senescence-
associated β -galactosidase［J］. Chem Sci，2020，11（28）：7292-
7301.
［18］ ROGER L，TOMAS F，GIRE V. Mechanisms and regulation of
cellular senescence［J］. Int J Mol Sci，2021，22（23）：13173.
［19］ MISAWA T，TANAKA Y，OKADA R，et al. Biology of extracel⁃
lular vesicles secreted from senescent cells as senescence-associ⁃
ated secretory phenotype factors［J］. Geriatr Gerontol Int，2020，
20（6）：539-546.
［20］ SAPOCHNIK M，FUERTES M，ARZT E. Programmed cell se⁃
nescence：role of IL-6 in the pituitary［J］. J Mol Endocrinol，
2017，58（4）：R241-R253.
［21］ WU N N，ZHANG Y，REN J. Mitophagy，dynamicsMitochondri⁃
al， and homeostasis in cardiovascular aging［J］. Oxid Med
Cell Longev，2019，2019：9825061.
［22］ SEBASTIÁN D，PALACÍN M，ZORZANO A. Mitochondrial dy⁃
namics：coupling mitochondrial fitness with healthy aging［J］.
Trends Mol Med，2017，23（3）：201-215.
［23］ WANG N，ZHU P，HUANG R，et al. PINK1：The guard of mito⁃
chondria［J］. Life Sci，2020，259：118247.
（收稿日期：2022-01-10）

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