２０１８ 年 ９月 基础医学与临床 Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２０１８

第 ３８ 卷 第９期 Ｂａｓｉｃ ＆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｖｏｌ.３８ Ｎｏ.９

文章编号: １ ０ ０ １ ￣ ６３ ２ ５ ( ２ ０ １ ８ ) ０ ９ ￣ １２ ２ ４ ￣ ０７ 研究论文

牛磺熊去氧胆酸减轻 ２ 型糖尿病小鼠肝细胞凋亡

张 换ꎬ 王志鹏ꎬ 窦 娜ꎬ 吴 静ꎬ 李 兰ꎬ 门秀丽 ∗
( 华北理工大学 基础医学院 唐山市慢性病临床基础研究重点实验室ꎬ 河北 唐山 ０６３２１０)

摘要:目的 观察牛磺熊去氧胆酸( ＴＵＤＣＡ) 对自发性 ２ 型糖尿病小鼠肝细胞凋亡的影响ꎬ并探讨其作用机制ꎮ 方

法 将 ｄｂ / ｄｂ 和 ｄｂ / ｍ ( ｌｅａｎ) 小鼠随机分为对照组和 ＴＵＤＣＡ 处理组ꎮ ＴＵＤＣＡ 处理组每天灌胃 给 予 ５００ ｍｇ / ｋｇ
ＴＵＤＣＡꎬ连续治疗 ２ 周ꎮ 检测空腹血糖和胰岛素水平ꎻ检测肝脏组织丙二醛( ＭＤＡ) 、活性氧( ＲＯＳ) 和超氧化物歧化
酶( ＳＯＤ) 水平ꎻ用油红 Ｏ 染色观察肝组织脂质沉积ꎻ用 ＴＵＮＥＬ 检测肝细胞凋亡ꎻ用 ｒｅａｌ￣ｔｉｍｅ ＰＣＲ 和免疫组化法检
测肝组织 Ｃ￣ＪＵＮ 和 ＸＢＰ￣ １ 的转录和表达水平ꎻ用光镜观察肝脏组织形态和超微结构改变ꎮ 结果 与 ｌｅａｎ 对照组相
比ꎬｄｂ / ｄｂ 对照组空腹血糖、转氨酶、ＭＤＡ 和 ＲＯＳ 活性升高ꎻ胰岛素和 ＳＯＤ 活性降低( Ｐ<０􀆰 ０５) ꎻＣ￣ＪＵＮ 和 ＸＢＰ￣ １ 表
达上调ꎻ肝细胞脂滴和凋亡细胞明显增多ꎮ 与 ｄｂ / ｄｂ 对照组相比ꎬｄｂ / ｄｂ ＴＵＤＣＡ 处理组空腹血糖、转氨酶、ＭＤＡ 和
ＲＯＳ 活性降低ꎻ胰岛素和 ＳＯＤ 活性升高( Ｐ<０􀆰 ０５) ꎻＣ￣ＪＵＮ 和 ＸＢＰ￣ １ 表达下调ꎻ肝细胞脂滴和凋亡细胞明显减少ꎮ
结论 ＴＵＤＣＡ 可通过抑制肝细胞凋亡减轻 ２ 型糖尿病小鼠肝损伤ꎬ其机制可能与抑制氧化应激反应、下调 Ｃ￣ＪＵＮ
与 ＸＢＰ￣ １ 基因表达有关ꎮ
关键词: 牛磺熊去氧胆酸ꎻ细胞凋亡ꎻ肝损伤ꎻ２ 型糖尿病ꎻｄｂ / ｄｂ 小鼠
中图分类号:Ｒ３６３􀆰 ２ 文献标志码:Ａ

Ｔａｕｒｏｕｒｓｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ ａｃｉｄ ( ＴＵＤＣＡ)

ａｌｌｅｖｉａｔｅｓ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆ ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ ｍｉｃｅ

ＺＨＡＮＧ Ｈｕａｎꎬ ＷＡＮＧ Ｚｈｉ￣ｐｅｎｇꎬ ＤＯＵ Ｎａꎬ ＷＵ Ｊｉｎｇꎬ ＬＩ Ｌａｎꎬ ＭＥＮ Ｘｉｕ￣ｌｉ ∗
( Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｂａｓｉｃ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｎ Ｃｈｒｏｎｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ｉｎ Ｔａｎｇｓｈａｎꎬ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓꎬ
Ｎｏｒｔｈ Ｃｈｉｎａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬ Ｔａｎｇｓｈａｎ ０６３２１０ꎬ Ｃｈｉｎａ)

Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔａｕｒｏｕｒｓｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ ａｃｉｄ ( ＴＵＤＣＡ) ｏｎ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆ
ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ ｄｂ / ｄｂ ｍｉｃｅ ａｎｄ ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｉｔｓ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ. Ｍｅｔｈｏｄｓ ｄｂ / ｄｂ ａｎｄ ｄｂ / ｍ ( ｌｅａｎ)
ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐｓ ａｎｄ ＴＵＤＣＡ￣ｔｒｅａｔｅｄ ｇｒｏｕｐｓ.ＴＵＤＣＡ ５００ ｍｇ / ｋｇ / ｄａｙ ｗａｓ ｇｉｖｅｎ ｂｙ
ｇａｖａｇｅ ｆｏｒ ２ ｗｅｅｋｓ ｉｎ ＴＵＤＣＡ￣ｔｒｅａｔｅｄ ｇｒｏｕｐｓ. Ｔｈｅ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｆａｓｔｉｎｇ ｐｌａｓｍａ ｇｌｕｃｏｓｅ ( ＦＰＧ) ａｎｄ ｆａｓｔｉｎｇ ｉｎｓｕｌｉｎｉｎ ｓｅｒ￣
ｕｍ ｏｆ ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ ( ＭＤＡ) ꎬ ｒｅａｃｔｉｖｅ ｏｘｙｇｅｎ ｓｐｅｃｉｅｓ ( ＲＯＳ) ａｎｄ ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｄｉｓｍｕｔａｓｅ ( ＳＯＤ) ｉｎ ｌｉｖｅｒ ｔｉｓｓｕｅ
ｗｅｒｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ. Ｌｉｐｉｄ ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ ｉｎ ｌｉｖｅｒ ｔｉｓｓｕｅ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ Ｏｉｌ ｒｅｄ Ｏ ｓｔａｉｎｉｎｇ. Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ｌｉｖｅｒ
ｔｉｓｓｕｅ ｗａｓ ｅｘａｍｉｎｅｄ ｂｙ ＴＵＮＥＬ ｍｅｔｈｏｄ. Ｔｈｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ Ｃ￣ＪＵＮ ａｎｄ ＸＢＰ￣１ ｉｎ ｌｉｖｅｒ ｔｉｓ￣
ｓｕｅ ｗｅｒｅ ｅｘａｍｉｎｅｄ ｂｙ ｒｅａｌ￣ｔｉｍｅ ＰＣＲ ａｎｄ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ ｍｅｔｈｏｄ. Ｔｈｅ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｃｈａｎｇｅｓ
ｏｆ ｌｉｖｅｒ ｔｉｓｓｕｅ ｗｅｒｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｂｙ ｌｉｇｈｔ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ ａｎｄ ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ ｅｌｅｃｔｒｏｎ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ. Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ

收稿日期:２０１８￣ ０８￣ ２４ 修回日期:２０１７￣ １１￣ １０

基金项目:国家自然科学基金(８１３７０９１８)
∗
通信作者( ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ) :ｘｉｕｌｉｍｅｎ＠ １２６.ｃｏｍ
 张换 牛磺熊去氧胆酸减轻 ２ 型糖尿病小鼠肝细胞凋亡 １２２５

ｌｅａｎ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐꎬ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＦＰＧꎬ ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅꎬ ＭＤＡ ａｎｄ ＲＯＳ ｉｎｃｒｅａｓｅｄꎻ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ｏｆ
Ｃ￣ＪＵＮ ａｎｄ ＸＢＰ￣ １ ｗａｓ ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄꎻ ｌｉｐｉｄ ｄｒｏｐｌｅｔｓ ａｎｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ
ｄｂ / ｄｂ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ( Ｐ < ０􀆰 ０５) . Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｄｂ / ｄｂ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐꎬ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ＦＰＧꎬ ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅꎬ ＭＤＡ
ａｎｄ ＲＯＳ ｗｅｒｅ ｄｅｃｒｅａｓｅｄꎻ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｃ￣ＪＵＮ ａｎｄ ＸＢＰ￣ １ ｗａｓ ｄｏｗｎ ｒｅｇｕｌａｔｅｄꎻ ｌｉｐｉｄ ｄｒｏｐｌｅｔｓ ａｎｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ
ｏｆ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｅｃｒｅａｓｅｄｉｎ ｄｂ / ｄｂ ＴＵＤＣＡ￣ｔｒｅａｔｅｄ ｇｒｏｕｐ( Ｐ < ０􀆰 ０５) . Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ ＴＵＤＣＡ ｃａｎ
ａｌｌｅｖｉａｔｅ ｈｅｐａｔｉｃ ｄａｍａｇｅ ｏｆ ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ ｄｂ / ｄｂ ｍｉｃｅ ｂｙ ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ. Ｉｔｓ
ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｍａｙ ｂｅ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｉｎｈｉｂｉｔ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ｒｅａｃｔｉｏｎꎬ ａｎｄ ｄｏｗｎ ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｃ￣ＪＵＮ ａｎｄ
ＸＢＰ￣ １ ｇｅｎｅ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: ｔａｕｒｏｕｒｓｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ ａｃｉｄꎻ ａｐｏｐｔｏｓｉｓꎻ ｈｅｐａｔｉｃ ｄａｍａｇｅꎻ ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓꎻ ｄｂ / ｄｂ ｍｉｃｅ

２ 型糖尿病( ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓꎬ Ｔ２ＤＭ) 是
一种严重威胁人类健康的代谢性疾病ꎮ 近年来发病
率 呈 明 显 上 升 趋 势ꎬ 而 各 种 慢 性 并 发 症 是 造 成
Ｔ２ＤＭ 患者死亡的主要原因ꎮ 以往的研究多集中在
糖尿病对心血管、视网膜、肾脏以及神经损伤的影
响ꎬ而对于糖尿病肝损伤的研究较少ꎮ 研究表明:高
糖、高脂可引起肝细胞损伤ꎬ并且这种肝损伤与氧化
应激反应和内质网应激反应增强有关ꎮ 细胞持续性
的内质网应激和氧化应激ꎬ通过激活 ＪＮＫ 路径及诱
导炎性反应ꎬ最后可导致细胞受损和凋亡
牛 磺 熊 去 氧 胆 酸 ( ｔａｕｒｏｕｒｓｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ ａｃｉｄꎬ
ＴＵＤＣＡ) 是一种结合型天然胆汁酸ꎬ广泛存在于人
和动物的胆汁中ꎬ作为参与蛋白质折叠的分子伴侣ꎬ
可减轻内质网应激反应 [２]
ꎮ 但其对 ２ 型糖尿病肝损
伤的影响及相关机制的研究尚未见报道ꎮ 本研究通
过自 发 ２ 型 糖 尿 病 小 鼠 模 型 ( ｄｂ / ｄｂ 小 鼠) ꎬ 观 察
ＴＵＤＣＡ 对 Ｔ２ＤＭ 小鼠肝细胞凋亡的影响ꎬ并探讨其
可能作用机制ꎮ
１ 材料与方法
１􀆰 １ 实验动物及试剂
ＳＰＦ 级 １３ 周龄雌性 ｄｂ / ｄｂ 小鼠和 ｄｂ / ｍ 小鼠各
１０ 只ꎬ即 ｄｂ / ｄｂ 糖尿病小鼠和表型正常的 Ｃ５７ＢＬ ｄｂ /
ｍ 小鼠( ｌｅｐｒ － / ｍ) ꎬ质量 １８ ~ ２４ ｇ( 北京美森生物医
药科技有限公司:ＳＣＸＫ 京 ２０１１ － ００１２) ꎮ Ｔｒｉｚｏｌ 试
剂( Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ 公 司) ꎻ 溴 酚 蓝 ( Ｓｏｌａｒｂｉｏ 公 司) ꎻ Ｔｒｉｓ￣
ＨＣｌ( Ｆｌｕｋａ 公司) ꎻ小鼠胰岛素酶联免疫检测试剂盒
( Ｌｉｎｃｏ 公司) ꎻ即用型免疫组织化学二步法试剂盒、
山羊超敏二步法试剂盒和 ＤＡＢ 显色试剂盒( 北京中
杉金桥生物技术有限公司) ꎻＣ￣ＪＵＮ 兔源多克隆抗体
和 ＸＢＰ￣ １ 羊源多克隆抗体 ( Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ 公司) ꎻ Ｒｅ￣
ｖｅｒｔＡｉｄ ＴＭ Ｆｉｒｓｔ Ｓｔｒａｎｄ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｋｉｔ ( Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ
公司 ) ꎻ Ｔｒａｎｓ２Ｋ Ｐｌｕｓ ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒ 和 ２ × Ｅａｓｙ Ｔａｑ
ＰＣＲ Ｓｕｐｅｒ Ｍｉｘ ( 北京全式金生物技术有限公司) ꎻ
ＳＯＤ、ＭＤＡ 和 ＲＯＳ 试剂盒( 南京建成生物技术有限
公司) ꎻＴＵＮＥＬ 细胞凋亡检测试剂盒( Ｒｏｃｈｅ 公司) ꎮ
１􀆰 ２ 方法
１􀆰 ２􀆰 １ 动物分组及给药方式:将每种小鼠随机分成
溶剂 对 照 组 和 ＴＵＤＣＡ 处 理 组 ( 每 天 给 予 ＴＵＤＣＡ
５００ ｍｇ / ｋｇꎬ早晚 ８ 点各 １ 次ꎬ连续灌胃 ２ 周) ꎬ溶剂
[１]
ꎮ 对照组采用同 样 方 法 给 予 相 同 体 积 的 ＰＢＳ 溶 液ꎮ
观察动物变化ꎮ
１􀆰 ２􀆰 ２ 样本采集和指标检测:小鼠饲养 ２ 周后ꎬ禁
食 ６ ｈꎬ腹主动脉取血ꎬ处死动物ꎬ留取血浆ꎬ按照试
剂盒说明书通过全自动生化分析仪检测定血糖和胰
岛素、ＡＬＴ、ＡＳＴꎻ通过 ＥＬＩＳＡ 检测 ＭＤＡ、ＲＯＳ 和 ＳＯＤ
水平ꎮ
１􀆰 ２􀆰 ３ 肝组织形态观察:每组取 ５ 只小鼠的部分肝
脏组织ꎬ于 １０％甲醛中的肝脏组织经常规石蜡包埋
和切片ꎬ进行苏木精￣伊红( ＨＥ) 染色ꎬ光镜显微镜下
观察肝组织形态的变化及其胶原产生ꎮ 同样每组取
５ 只小鼠的部分肝脏组织ꎬ经常规冰冻切片ꎬ进行油
红 Ｏ 染色ꎬ光学显微镜下观察病变的情况及其脂质
含量变化ꎮ
１􀆰 ２􀆰 ４ ＴＵＮＥＬ 检测:每组取 ５ 只小鼠的部分肝脏
组织标本用 ＯＣＴ 包埋剂包埋后ꎬ进行冰冻切片ꎬ制
成 ４ μｍ 切片ꎬ以备进行 ＴＵＮＥＬ 荧光染色ꎬ用 ＴｄＴ
介导的 ｄＵＴＰ 缺口末端标记技术行 ＴＵＮＥＬ 荧光染
色ꎬ激光共聚焦显微镜下观察肝组织细胞凋亡ꎮ 另
取部分肝脏组织于 １０％ 甲醛中的肝脏组织经常规
石蜡包埋和切片ꎬ按照免疫组化试剂盒说明操作检
测肝组织 Ｃ￣ＪＵＮ、ＸＢＰ￣ １ 和 ＳＯＤ 的表达ꎬ以酶作为
 １２２６ 基础医学与临床 Ｂａｓｉｃ ＆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２０１８􀆰 ３８(９)

标志物与外加底物作用后产生不溶性色素ꎬ沉积于 ＣＡＧＧＧＴＣＣＡＡＣＴＴ￣３′ꎻＧＡＰＤＨ:上游引物 ５′￣ＣＣＴＣＴ

抗原和抗体反应的部位ꎬ酶降解底物量与色泽浓度 ＧＧＡＡＡＧＣＴＧＴＧＧＣＧＴＧ￣３′ꎬ 下 游 引 物 ５′￣ＧＣＣＡＧＴＧ
成正比ꎬ可反映被测定抗原和抗体的量ꎬ用计算机辅 ＡＧＣＴＴＣＣＣＧＴＴＣＡＧ￣３′ꎮ 反 应 条 件: 预 变 性 ９５ ℃ 、
助图像分析系统分析ꎮ １ ｍｉｎꎬ变性 ９５ ℃ 、１５ ｓꎬ退火 ６０ ℃ 、３０ ｓꎬ延伸 ７２ ℃ 、
１􀆰 ２􀆰 ５ Ｒｅａｌ￣ｔｉｍｅ ＰＣＲ 方 法 检 测 肝 组 织 Ｃ￣ＪＵＮ 和 ３０ ｓꎬ循环 ４０ 次ꎬＣｔ 值法分析结果ꎮ
ＸＢＰ￣ １ 的表达:Ｒｅａｌ￣ｔｉｍｅ ＰＣＲ 方法检测肝组织 Ｃ￣ １􀆰 ３ 统计学分析
ＪＵＮ 和 ＸＢＰ￣ １ 的基因表达水平ꎬ按照试剂盒说明书 应用 ＳＰＳＳ１３􀆰 ０ 分析软件ꎬ所有计量资料以均数
提取小鼠肝组织 ＲＮＡꎬ并测浓度ꎬ 用 Ａ２６０ / Ａ２８０ 表示 ±标准差( ｘ±ｓ) 表示ꎬ各组间数据以单因素方差分析
ＲＮＡ 浓度待测样 品 ＲＮＡ 浓 度 ＝ ( ４ × Ａ２６０ ) ｇ / Ｌꎮ 取 ( ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｖａｒｉａｎｃｅꎬ ＡＮＯＶＡ) ｑ 检验统计处理ꎮ
ＲＮＡ 样品 ５ μＬꎬ按 ＲＮＡ 反转试剂盒说明书操作ꎬ反
２ 结果
应条件为 ６５ ℃ 温浴 ５ ｍｉｎꎬ冰浴 １ ｍｉｎ 退火后加入
反转液ꎬ混合后 ４２ ℃ 温浴 ６０ ｍｉｎꎬ再离心ꎬ７０ ℃ 温 ２􀆰 １ 糖代谢变化
浴５ ｍｉｎ终止ꎮ 再取 ４ μＬꎬ以 ２０ μＬ 体系制备 ＰＣＲ 与 ｌｅａｎ 对照组相比ꎬｄｂ / ｄｂ 对照组小鼠空腹血
体系ꎬＰＣＲ 引物序列分别为 Ｃ￣ＪＵＮ:上游引物 ５′￣ＴＣ 糖明显增加ꎻ而与 ｄｂ / ｄｂ 对照组相比ꎬｄｂ / ｄｂＴＵＤＣＡ
ＣＣＣＴＡＴＣＧＡＣＡＴＧＧＡＧＴＣ￣３′ꎬ 下 游 引 物 ５′￣ＴＴＴＴＧ 组小鼠空腹血糖降低( Ｐ < ０􀆰 ０５) ꎻ给药前后 ｌｅａｎ 小
ＣＧＣＴＴＴＣＡＡＧＧＴＴＴＴ￣３′ꎻ β￣ａｃｔｉｎ: 上 游 引 物 ５′￣ＧＣＴ 鼠血糖变化不明显( 表 １) ꎮ
ＣＴＴＴＴＣＣＡＧＣＣＴＴＣＣＴＴ￣３′ꎬ 下 游 引 物 ５′￣ＣＴＴＣＴＧＣ ２􀆰 ２ 胰岛素水平检测
ＡＴＣＣＴＧＴＣＡＧＣＡＡ￣３′ꎻＸＢＰ￣１:上游引物 ５′￣ＣＧＣＡＧＣ 与 ｌｅａｎ 对照组相比ꎬｄｂ / ｄｂ 对照组小鼠空腹血
ＡＣＴＣＡＧＡＣＴＡＴＧＴＧ￣３′ꎬ 下 游 引 物 ５′￣ＡＡＡＣＡＴＧＡ 糖升高ꎬ空腹胰岛素水平升高( Ｐ<０􀆰 ０５) ( 图 １) ꎮ

表１ 空腹血糖变化
Ｔａｂｌｅ １ Ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｆａｓｔｉｎｇ ｇｌｕｃｏｓｅ( ｘ±ｓꎬ ｎ ＝ ５)

ｇｒｏｕｐ ０ ｄａｙ ５ ｄａｙｓ １０ ｄａｙｓ １２ ｄａｙｓ

ｌｅａｎ ｃｏｎｔｒｏｌ ４􀆰 ９２±０􀆰 ３９ ２􀆰 ６３±０􀆰 ２１ ２􀆰 ４３±０􀆰 １９ ４􀆰 ８２±０􀆰 ３８

ｌｅａｎ ＴＵＤＣＡ ４􀆰 ９３±０􀆰 ３９ ５􀆰 １５±０􀆰 ４１ ５􀆰 ２２±０􀆰 ４２ ４􀆰 ８１±０􀆰 ３８

ｄｂ / ｄｂ ｃｏｎｔｒｏｌ １０􀆰 ５２±０􀆰 ８４ ∗ １５􀆰 ０８±１􀆰 ２０ ∗ １５􀆰 ２０±１􀆰 ２２ ∗ １５􀆰 ４３±１􀆰 ２３ ∗

ｄｂ / ｄｂ ＴＵＤＣＡ １０􀆰 ３０±０􀆰 ８２ ＃ ５􀆰 ３７±０􀆰 ４２ ＃ ５􀆰 ３７±０􀆰 ４２ ＃ ５􀆰 ５２±０􀆰 ４４ ＃

∗
Ｐ<０􀆰 ０５ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｌｅａｎ ｃｏｎｔｒｏｌꎻ ＃Ｐ<０􀆰 ０５ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｄｂ / ｄｂ ｃｏｎｔｒｏｌ.

２􀆰 ３ 肝组织中氧化应激相关因子的水平
与 ｌｅａｎ 对照组相比ꎬｄｂ / ｄｂ 对照组小鼠肝组织中
ＭＤＡ、ＲＯＳ 含量显著增加ꎬＳＯＤ 活性明显降低ꎻ与 ｄｂ /
ｄｂ 对照组相比ꎬｄｂ / ｄｂ ＴＵＤＣＡ 组小鼠肝组织 ＭＤＡ 和
ＲＯＳ 含量减少ꎬＳＯＤ 活性增加( Ｐ<０􀆰 ０５)ꎮ 给药前后
ｌｅａｎ 小鼠肝组织上述指标变化无显著性差异(表 ２)ꎮ
２􀆰 ４ 血浆 ＡＬＴ 和 ＡＳＴ 测定
与 ｌｅａｎ 对 照 组 相 比ꎬ ｄｂ / ｄｂ 对 照 组 小 鼠 血 浆
∗
Ｐ < ０􀆰 ０５ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｌｅａｎ ｃｏｎｔｒｏｌꎻ ＃ Ｐ < ０􀆰 ０５
ＡＬＴ 升高( Ｐ < ０􀆰 ０５) ꎬＡＳＴ 变化不明显ꎻ与 ｄｂ / ｄｂ 对
ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｄｂ / ｄｂ ｃｏｎｔｒｏｌ
图１ 胰岛素变化 照组相比ꎬｄｂ / ｄｂ ＴＵＤＣＡ 组小鼠血浆 ＡＬＴ、ＡＳＴ 明
Ｆｉｇ １ Ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｉｎｓｕｌｉｎ 显降低( Ｐ<０􀆰 ０５) ( 图 ２ꎬ３) ꎮ
 张换 牛磺熊去氧胆酸减轻 ２ 型糖尿病小鼠肝细胞凋亡 １２２７

表２ 肝组织 ＳＯＤ、ＭＤＡ、ＸＯＤ 和 ＲＯＳ 因子的表达 ｄｂ / ｄｂ 对照组小鼠相比ꎬｄｂ / ｄｂ ＴＵＤＣＡ 组小鼠肝组

Ｔａｂｌｅ ２ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＳＯＤꎬ ＭＤＡꎬ ＸＯＤ ａｎｄ 织细胞内红染脂滴数量减少( 图 ４Ｂ) ꎮ
ＲＯＳ ｉｎ ｈｅｐａｔｉｃ ｔｉｓｓｕｅ( ｘ±ｓꎬ ｎ ＝ ５)
ｇｒｏｕｐ ＳＯＤ ＭＤＡ ＲＯＳ
ｌｅａｎ ｃｏｎｔｒｏｌ ９３􀆰 ９９±６􀆰 ３５ ０􀆰 ４９±０􀆰 ０５ ５４􀆰 ３８±２􀆰 １２
ｌｅａｎ ＴＵＤＣＡ ９３􀆰 ５１±５􀆰 １７ ０􀆰 ４９±０􀆰 ０３ ５４􀆰 ３９±１􀆰 ０１
ｄｂ / ｄｂ ｃｏｎｔｒｏｌ ８１􀆰 ３２±２􀆰 ３０ ∗
０􀆰 ７９±０􀆰 １３ ∗
７３􀆰 ２１±４􀆰 ７３ ∗
ｄｂ / ｄｂ ＴＵＤＣＡ ８９􀆰 ２４±０􀆰 ８６ ＃
０􀆰 ６０±０􀆰 ０６ ＃
５３􀆰 ２０±２􀆰 ５１ ＃
∗
Ｐ<０􀆰 ０５ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｌｅａｎ ｃｏｎｔｒｏｌꎻ ＃Ｐ<０􀆰 ０５ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｄｂ / ｄｂ ｃｏｎｔｒｏｌ.

∗
Ｐ < ０􀆰 ０５ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｌｅａｎ ｃｏｎｔｒｏｌꎻ ＃ Ｐ < ０􀆰 ０５
ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｄｂ / ｄｂ ｃｏｎｔｒｏｌ
图２ 血浆谷丙转氨酶的变化
Ｆｉｇ ２ Ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ａｌａｎｉｎｅ ｔｒａｎｓａｍｉｎａｓｅ ｉｎ ｐｌａｓｍａ
Ａ􀆰 ＨＥ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｌｉｖｅｒ ｔｉｓｓｕｅ ｉｎ ｍｉｃｅ( × １００) ꎻ
Ｂ􀆰 ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ Ｏｉｌ ｒｅｄ Ｏ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｉｎ ｌｉｖｅ ｔｉｓｓｕｅｓ ｏｆ ｍｉｃｅ
图４ 小鼠肝组织形态学改变
Ｆｉｇ ４ Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｈｅｐａｔｉｃ ｔｉｓｓｕｅ ｏｆ
ｍｉｃｅ( ×１００)

２􀆰 ６ 光镜和激光共聚焦荧光显微镜下观察肝细胞
凋亡
ｄｂ / ｄｂ 对 照 组 可 见 大 量 凋 亡 细 胞ꎬ 而 ｄｂ / ｄｂ
ＴＵＤＣＡ 组则相对减轻ꎬ ｌｅａｎ 小鼠偶见凋亡细胞( 图
Ｐ<０􀆰 ０５ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｄｂ / ｄｂ ｃｏｎｔｒｏｌ
＃
５ꎬ６) ꎮ
图３ 血浆谷草转氨酶的变化
Ｆｉｇ ３ Ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ａｓｐａｒｔａｔｅ ｔｒａｎｓａｍｉｎａｓｅ ｉｎ ｐｌａｓｍａ

２􀆰 ５ 肝脏组织病理形态 ＨＥ 染色和油红 Ｏ 染色结果

ｄｂ / ｄｂ 对 照 组 肝 脏 ＨＥ 染 色 可 见 炎 性 细 胞 浸
润、水肿、胞质疏松淡染和气球样变ꎬ细胞排列紊乱
拥挤ꎬ肝窦受压变窄ꎬ细胞内可见胆汁淤积并可见融
合的脂滴ꎻｄｂ / ｄｂ ＴＵＤＣＡ 组与 ｄｂ / ｄｂ 对照组相比ꎬ
肝细胞水肿减轻、炎性细胞浸润减少、肝细胞再生减
少和偶见脂肪变性ꎬｌｅａｎ 小鼠肝细胞结构未见明显
变化( 图 ４Ａ) ꎻ与 ｌｅａｎ 对照组相比ꎬｄｂ / ｄｂ 对照组小 图５ 小鼠肝凋亡细胞染色结果

鼠肝组织细胞可见较多红色油红 Ｏ 着色脂滴ꎬ而与 Ｆｉｇ ５ Ｓｔａｉｎｉｎｇ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｈｅｐａｔｉｃ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ( ×２００)

 １２２８ 基础医学与临床 Ｂａｓｉｃ ＆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２０１８􀆰 ３８(９)

２􀆰 ８ 免疫组化检测肝组织 Ｃ￣ＪＵＮ、ＸＢＰ￣ １ 和 ＳＯＤ

蛋白的表达
ｄｂ / ｄｂ 对照组 Ｃ￣ＪＵＮ 蛋白信号定位 于 肝 细 胞
核ꎬ呈棕黄色ꎬ部分在胞质ꎻＸＢＰ￣ １ 蛋白阳性信号定
位于肝细胞胞质ꎬ呈棕黄色ꎮ Ｃ￣ＪＵＮ 和 ＸＢＰ￣ １ 蛋白
在 ｄｂ / ｄｂ 对照组肝细胞表达区可见弥漫性深棕色ꎬ
ｄｂ / ｄｂＴＵＤＣＡ 组相比 ｄｂ / ｄｂ 对照组表达区显色明显
减轻ꎬｌｅａｎ 小鼠在肝细胞表达区偶见浅棕色( 图 ７Ａꎬ
Ｂ) ꎬＳＯＤ 表达与其相反( 图 ７Ｃ) ꎮ
与 ｌｅａｎ 对照组比较ꎬｄｂ / ｄｂ 对照组小鼠肝组织
Ｃ￣ＪＵＮ 蛋白表达量明显上调ꎬ其吸光度( Ａ) 值分别
为 ０􀆰 ３０８ 和 ０􀆰 ３８０ꎻ 与 ｄｂ / ｄｂ 对 照 组 比 较ꎬ ｄｂ / ｄｂ
ＴＵＤＣＡ 组小鼠肝组织 Ｃ￣ＪＵＮ 蛋白表达量明显下调ꎬ
其 Ａ 值分别为 ０􀆰 ３８０ 和 ０􀆰 ３４２( Ｐ<０􀆰 ０５) ( 表 ４) ꎮ 与
ｌｅａｎ 对照组比较ꎬｄｂ / ｄｂ 对照组小鼠肝组织 ＸＢＰ￣ １
蛋白 表 达 量 明 显 上 调ꎬ 其 Ａ 值 分 别 为 ０􀆰 ２４６ 和
０􀆰 ３０１ꎻ与 ｄｂ / ｄｂ 对照组比较ꎬｄｂ / ｄｂ ＴＵＤＣＡ 组小鼠
肝组织 ＸＢＰ￣ １ 蛋白表达量明显下调ꎬ其 Ａ 值分别为
图６ 各组小鼠肝组织细胞凋亡荧光染色结果 ０􀆰 ３０１ 和 ０􀆰 ２７４( Ｐ<０􀆰 ０５) ( 表 ４) ꎮ 与 ｌｅａｎ 对照组比
Ｆｉｇ ６ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｃｅｌｌ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ 较ꎬｄｂ / ｄｂ 对照组小鼠肝组织 ＳＯＤ 蛋白表达量明显下
ｉｎ ｌｉｖｅｒ ｔｉｓｓｕｅｓ ｏｆ ｍｉｃｅ ｉｎ ｅａｃｈ ｇｒｏｕｐ( ×２００) 降ꎬ其 Ａ 值分别为 ０􀆰 ３１５ 和 ０􀆰 ２２８ꎻ与 ｄｂ / ｄｂ 对照组比
较ꎬｄｂ / ｄｂ ＴＵＤＣＡ 组小鼠肝组织 ＳＯＤ 蛋白表达量升
２􀆰 ７ Ｒｅａｌ￣ｔｉｍｅ ＰＣＲ 检测 Ｃ￣ＪＵＮ 和 ＸＢＰ￣１ 基因的 高ꎬ其 Ａ 值分别为 ０􀆰 ２２８ 和 ０􀆰 ２６５(Ｐ<０􀆰 ０５)(表 ４)ꎮ
表达
实时荧光定量 ＰＣＲ 测定 Ｃ￣ＪＵＮ 和 ＸＢＰ￣ １ 基因 表４ 肝组织 Ｃ￣ＪＵＮ、ＸＢＰ￣ １ 和 ＳＯＤ 的蛋白表达
表达水平ꎬ熔解曲线显示扩增发出荧光的片段为所 Ｔａｂｌｅ ４ Ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ Ｃ￣ＪＵＮꎬ ＸＢＰ￣ １
需产物ꎻ数据结果显示ꎬｄｂ / ｄｂ 对照组与 ｌｅａｎ 对照组 ａｎｄ ＳＯＤ ｉｎ ｈｅｐａｔｉｃ ｔｉｓｓｕｅ( ｘ±ｓꎬ ｎ ＝ ５)

相比ꎬ Ｃ￣ＪＵＮ 和 ＸＢＰ￣ １ 表 达 明 显 上 调 ( Ｐ < ０􀆰 ０５) ꎻ ｇｒｏｕｐ Ｃ￣ＪＵＮ ＸＢＰ￣ １ ＳＯＤ

ｄｂ / ｄｂＴＵＤＣＡ 组 Ｃ￣ＪＵＮ 和 ＸＢＰ￣ １ 基因较 ｄｂ / ｄｂ 对 ｌｅａｎ ｃｏｎｔｒｏｌ ０􀆰 ３０８±０􀆰 ０２１ ０􀆰 ２４６±０􀆰 ０２０ ０􀆰 ３１５±０􀆰 ０３８
ｌｅａｎ ＴＵＤＣＡ ０􀆰 ３１２±０􀆰 ０２１ ０􀆰 ２４５±０􀆰 ０１６ ０􀆰 ３１４±０􀆰 ０４０
照组表达下调( Ｐ<０􀆰 ０５) ( 表 ３) ꎮ
ｄｂ / ｄｂ ｃｏｎｔｒｏｌ ０􀆰 ３８０±０􀆰 ０３２ ∗
０􀆰 ３０１±０􀆰 ０１０ ∗
０􀆰 ２２８±０􀆰 ０１７ ∗
ｄｂ / ｄｂ ＴＵＤＣＡ ０􀆰 ３４２±０􀆰 ０３１ ＃ ０􀆰 ２７４±０􀆰 ０１４ ＃ ０􀆰 ２６５±０􀆰 ０１０ ＃
表３ 肝组织 ＸＢＰ￣ １ 和 Ｃ￣ＪＵＮ ｍＲＮＡ 的相对水平
∗
Ｐ < ０􀆰 ０５ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｌｅａｎ ｃｏｎｔｒｏｌꎻ ＃ Ｐ < ０􀆰 ０５ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｄｂ / ｄｂ
Ｔａｂｌｅ ３ ｍＲＮＡ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＸＢＰ￣ １ ａｎｄ Ｃ￣ＪＵＮ
ｃｏｎｔｒｏｌ.
ｉｎ ｈｅｐａｔｉｃ ｔｉｓｓｕｅ( ｘ±ｓꎬｎ ＝ ５)
ｇｒｏｕｐ ＸＢＰ￣ １ ２ Ｃ￣ＪＵＮ ２

ｌｅａｎ ｃｏｎｔｒｏｌ ０􀆰 １１±０􀆰 ０２ ５􀆰 ７×１０ －５ ±４􀆰 ５×１０ －７ ３ 讨论

ｌｅａｎ ＴＵＤＣＡ ０􀆰 １１±０􀆰 ０１ ８􀆰 ９×１０ －５ ±６􀆰 ８×１０ －７
临床发现糖尿病患者中肝脏病变可高达 ２１％ ~
ｄｂ / ｄｂ ｃｏｎｔｒｏｌ ０􀆰 ２３±０􀆰 ０３ ∗ ０􀆰 ２７±０􀆰 ０２ ∗
ｄｂ / ｄｂ ＴＵＤＣＡ ０􀆰 １４±０􀆰 ００ ＃ ８􀆰 １×１０ －４ ±６􀆰 ３×１０ －６ ＃
７８％ꎬ其中最主要的病变为脂肪肝ꎮ 肥胖 ２ 型糖尿
病的前期或早期就已出现脂肪肝 [３] ꎬ但其发生机制
∗
Ｐ<０􀆰 ０５ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｌｅａｎ ｃｏｎｔｒｏｌꎻ ＃ Ｐ < ０􀆰 ０５ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｄｂ / ｄｂ
ｃｏｎｔｒｏｌ. 并不十分清楚ꎮ ＴＵＤＣＡ 是一种结合型天然胆汁酸ꎬ
具有保护肝细胞和拮抗疏水性胆汁酸的细胞毒作
 张换 牛磺熊去氧胆酸减轻 ２ 型糖尿病小鼠肝细胞凋亡 １２２９

Ａ􀆰 ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｃ￣ＪＵＮ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ｌｉｖｅｒ ｔｉｓｓｕｅｓ ｏｆ ｍｉｃｅ ｉｎ ｅａｃｈ ｇｒｏｕｐꎻ Ｂ􀆰 ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＸＢＰ￣１ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ｌｉｖｅｒ ｔｉｓｓｕｅｓ ｏｆ ｍｉｃｅ
ｉｎ ｅａｃｈ ｇｒｏｕｐꎻ Ｃ􀆰 ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＳＯＤ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ｌｉｖｅｒ ｔｉｓｓｕｅｓ ｏｆ ｍｉｃｅ ｉｎ ｅａｃｈ ｇｒｏｕｐ
图７ 小鼠肝组织 Ｃ￣ＪＵＮ、ＸＢＰ￣ １、ＳＯＤ 蛋白的表达
Ｆｉｇ ７ Ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｃ￣ＪＵＮꎬ ＸＢＰ￣ １ ａｎｄ ＳＯＤ ｉｎ ｈｅｐａｔｉｃ ｔｉｓｓｕｅ ｏｆ ｍｉｃｅ( ×２００)

用 [４] ꎮ 作为内质网分子伴侣ꎬＴＵＤＣＡ 能够减轻内质 表达和氧化应激抑制与激活有关键作用ꎬ正常情况

网应激ꎬ改善胰岛素抵抗和减少肥胖引起的肝脂肪
蓄积 [５]
ꎮ ＴＵＤＣＡ 可通过抑制内质网应激反应改善
２ 型糖尿病小鼠的胰岛素抵抗水平
ＴＵＤＣＡ 处理之后肝细胞水肿减轻ꎬ 炎细胞浸润减
少ꎬＨＥ 和油红 Ｏ 镜下见炎性反应病变明显减轻ꎬ肝
细胞再生减少ꎬ偶见脂肪变性肝细胞脂滴ꎮ 可能与
ＴＵＤＣＡ 抑制氧化应激有关ꎮ
有研究表明 ＲＯＳ 是诱导内质网应激和引起肝
组织损伤的一个重要因素 [７]
ꎮ ＳＯＤ 是机体主要的
抗氧化物质ꎬＳＯＤ 可反映体内的氧化应激水平
ＭＤＡ 作为脂质过氧化物的最终产物ꎬ它能使生物膜
变性、 衰 老 或 死 亡 [９]
ꎮ 本 研 究 发 现 ｄｂ / ｄｂ 鼠 用
ＴＵＤＣＡ 处理后ꎬＲＯＳ 和 ＭＤＡ 降低ꎬ ＳＯＤ 活性和胰
岛素水平升高ꎬ说明 ＴＵＤＣＡ 可减轻 ２ 型糖尿病肝氧
化应激反应ꎮ 同时有研究报道 Ｃ￣ＪＵＮ 和 ＸＢＰ￣ １ 的
下活性很低ꎬ在炎性反应刺激下被激活ꎬ作为 ＪＮＫ
的下游 因 子ꎬ Ｃ￣ＪＵＮ 基 因 通 过 调 节 ＪＮＫ 基 因 的 表
[６]
ꎮ 本实验中 达ꎬ并对肝细胞氧化应激引起的损伤起关键的保护
作用 [１０] ꎮ 在应激条件下ꎬＸＢＰ￣ １ ｍＲＮＡ 由 ＡＴＦ６ 诱
导并经 ＩＲＥ￣ １ 剪接ꎬ表达高活性转录因子 ＸＢＰ￣ １ꎬ促
进内质网分子伴侣和 ＵＰＲ 效应基因的转录ꎬ从而激
活 ＵＰＲꎬ引起内质网应激效应ꎮ 研究[１１￣ １２] 发现ꎬ高糖
促进 ＸＢＰ￣ １ 的剪接ꎬ表达高活性转录因子 ＸＢＰ￣ １ꎬ增
加脂质的蓄积ꎬ引起肝损伤ꎬ导致细胞凋亡ꎮ 氧化应
[８]
ꎮ 激和脂质过氧化产生 ４￣羟基壬烯醛(４￣ｈｙｄｒｏｘｙｎｏｎｅ￣
ｎａｌꎬ４￣ＨＮＥ) ꎬ过度激活 ＪＮＫ / Ｃ￣ＪＵＮ 信号通路ꎬ导致
细胞凋亡ꎬ引起肝损伤 [１３] ꎮ 本实验Ｃ￣ＪＵＮ和 ＸＢＰ￣ １
基因表达下调ꎬ免疫组化示其相关蛋白表达降低ꎬ
ＳＯＤ 蛋白表达量升高ꎬ说明 ＴＵＤＣＡ 可通过减轻 ２
型糖尿病肝 氧 化 应 激 反 应 而 减 少 肝 细 胞 凋 亡ꎬ 同
１２３０ 基础医学与临床
时 ｄｂ / ｄｂＴＵＤＣＡ 组 空 腹 血 糖、 胰 岛 素 水 平 和 转 氨
酶得到明显 改 善ꎬ肝 脏 形 态 学 检 测 结 果 显 示 该 组
小鼠肝脏损伤明显减轻ꎬ均提示 ＴＵＤＣＡ 能有效减
轻肝细胞凋亡和损伤ꎬ从而减轻肝损伤ꎮ
参考文献:
[１] Ｌｅｅ ＳＹꎬ Ｌｅｅ Ｊꎬ Ｌｅｅ Ｈꎬｅｔ ａｌ. ＭｉｃｒｏＲＮＡ１３４ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｕｐ￣
ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＪＮＫ ａｎｄ ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＮＦｋＢ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇｓ
ａｒｅ ｃｒｉｔｉｃａｌｌｙ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｄｉｅｃｋｏｌ ｉｎｄｕｃｅｄ ａｎｔｉｈｅｐａｔｉｃ
ｆｉｂｒｏｓｉｓ[ Ｊ] . Ｊ Ａｇｒｉｃ Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍꎬ ２０１６ꎬ６４: ５５０８￣ ５５１４.
[２] Ｒａｎｉ Ｓꎬ Ｓｒｅｅｎｉｖａｓａｉａｈ ＰＫꎬ Ｋｉｍ ＪＯꎬ ｅｔ ａｌ. Ｔａｕｒｏｕｒｓｏｄｅ￣
ｏｘｙｃｈｏｌｉｃ ａｃｉｄ ( ＴＵＤＣＡ) ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｏｖｅｒｌｏａｄ￣ｉｎ￣
ｄｕｃｅｄ ｃａｒｄｉａｃ ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ ｂｙ ｒｅｄｕｃｉｎｇ ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃ ｒｅｔｉｃｕ￣
ｌｕｍ ｓｔｒｅｓｓ [ Ｊ] . ＰＬｏＳ Ｏｎｅꎬ ２０１７ꎬ １２ꎻ１￣ １６.ｄｏｉ:１０.１３７１ /
ｊｏｕｒｎａｌ.ｐｏｎｅ.０１７６０７１.
[３] Ｃａｒｐｅｎｔｉｅｒ ＡＣ. Ｔｈｅ ２０１２ ＣＤＡ￣ＣＩＨＲ ＩＮＭＤ ｙｏｕｎｇ ｉｎｖｅｓ￣
ｔｉｇａｔｏｒ ａｗａｒｄ ｌｅｃｔｕｒｅ: ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｄｉｐｏｓｅ ｔｉｓｓｕｅｓ ａｎｄ
ｔｈｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｅｃｔｏｐｉｃ ｆａｔ ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ ｉｎ ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ
[ Ｊ] . Ｃａｎ Ｊ Ｄｉａｂｅｔｅｓꎬ ２０１３ꎬ ３７: １０９￣ １１４.
[４] Ｚｈａｎｇ Ｗꎬ Ｃｈｅｎ Ｌꎬ Ｆｅｎｇ Ｈꎬ ｅｔ ａｌ.Ｒｉｆａｍｐｉｃｉｎ￣ｉｎｄｕｃｅｄ ｉｎ￣
ｊｕｒｙ ｉｎ ＨｅｐＧ２ ｃｅｌｌｓ ｉｓ ａｌｌｅｖｉａｔｅｄ ｂｙ ＴＵＤＣＡ ｖｉａ ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ
ｂｉｌｅ ａｃｉｄ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｅｎｈａｎｃｉｎｇ ｔｈｅ Ｎｒｆ２￣
ｍｅｄｉａｔｅｄ ａｄａｐｔｉｖｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ [ Ｊ ] . Ｆｒｅｅ Ｒａｄｉｃ Ｂｉｏｌ Ｍｅｄꎬ
２０１７ꎬ １１２:２４￣ ３５.
[５] Ｃｈｏ ＥＪꎬ Ｙｏｏｎ ＪＨꎬ Ｋｗａｋ ＭＳꎬ ｅｔ ａｌ. Ｔａｕｒｏｕｒｓｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ
ａｃｉｄ ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ ｉｎ ｍｉｃｅ ｆｅｄ ａ
ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ￣ｃｈｏｌｉｎｅ￣ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｄｉｅｔ [ Ｊ] . Ｄｉｇ Ｄｉｓ Ｓｃｉꎬ ２０１４ꎬ
５９:１４６１￣ １４７４.
[６] Ｏｚｃａｎ Ｕꎬ Ｙｉｌｍａｚ Ｅꎬ Ｏｚｃａｎ Ｌꎬ ｅｔ ａｌ. Ｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｈａｐｅｒ￣
ｏｎｅｓ ｒｅｄｕｃｅ ＥＲ ｓｔｒｅｓｓ ａｎｄ ｒｅｓｔｏｒｅ ｇｌｕｃｏｓｅ ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ ｉｎ ａ
ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ[ Ｊ] .Ｓｃｉｅｎｃｅꎬ ２００６ꎬ ３１３:
１１３７￣ １１４０.
Ｂａｓｉｃ ＆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２０１８􀆰 ３８(９)
综上所述ꎬＴＵＤＣＡ 减轻 ２ 型 糖 尿 病 并 发 的 肝
损凋亡ꎮ 能 改 善 ２ 型 糖 尿 病 的 胰 岛 素 抵 抗ꎬ 降 低
血糖ꎬ 从 而 减 轻 肝 脏 氧 化 应 激 反 应ꎬ 减 轻 细 胞
凋亡ꎮ
[７] Ｈｕａｎｇ ＣＨꎬ Ｃｈａｎ ＷＨ. Ｒｈｅｉｎ ｉｎｄｕｃｅｓ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ａｎｄ
ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ｍｏｕｓｅ ｂｌａｓｔｏｃｙｓｔｓ ａｎｄ ｈａｓ ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｃ ｅｆｆｅｃｔｓ
ｄｕｒｉｎｇ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ [ Ｊ] . Ｉｎｔ Ｊ Ｍｏｌ Ｓｃｉꎬ ２０１７ꎬ
１８:１￣ １７.
[８] Ｚｈａｏ Ｓꎬ Ｚｈｕ Ｌꎬ Ｄｕａｎ Ｈꎬ ｅｔ ａｌ. ＰＩ３Ｋ / Ａｋｔ ｐａｔｈｗａｙ ｍｅｄｉ￣
ａｔｅｓ ｈｉｇｈ ｇｌｕｃｏｓｅ￣ｉｎｄｕｃｅｄ ｌｉｐｉｄ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｒｅ￣
ｎａｌ ｐｒｏｘｉｍａｌ ｔｕｂｕｌａｒ ｃｅｌｌｓ ｖｉａ ｓｐｌｉｃｅｄ ＸＢＰ￣ １[ Ｊ] . Ｊ Ｃｅｌｌ
Ｂｉｏｃｈｅｍꎬ ２０１２ꎬ １１３:３２８８￣ ３２９８.
[９] Ｃａｏ Ｊꎬ Ｄａｉ ＤＬꎬ Ｙａｏ Ｌꎬ ｅｔ ａｌ. Ｓａｔｕｒａｔｅｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ
ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃ ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ ｓｔｒｅｓｓ ａｎｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ
ｈｕｍａｎ ｌｉｖｅｒ ｃｅｌｌｓ ｖｉａ ｔｈｅ ＰＥＲＫ / ＡＴＦ４ / ＣＨＯＰ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ
ｐａｔｈｗａｙ[ Ｊ] .Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｃｈｅｍꎬ ２０１２ꎬ ３６４:１１５￣ １２９.
[１０] Ａｍｉｒ Ｍꎬ Ｌｉｕ Ｋꎬ Ｚｈａｏ Ｅꎬｅｔ ａｌ. Ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ＪＮＫ
ａｎｄ Ｃ￣ＪＵＮ ｉｎ ｏｘｉｄａｎｔ￣ｉｎｄｕｃｅｄ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｄｅａｔｈ[ Ｊ] .Ｊ Ｃｅｌｌ
Ｂｉｏｃｈｅｍꎬ２０１２ꎬ １１３:３２５４￣ ３２６５.
[１１] Ｆｅｒｒｅｉｒａ ＭＣꎬ Ｚｕｃｋｉ Ｆꎬ Ｄｕａｒｔｅ ＪＬꎬ ｅｔ ａｌ. Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｉｒｏｎ
ｏｎ ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ ｒａｔ ｂｒａｉｎｓ ｅｘ￣
ｐｏｓｅｄ ｔｏ ｌｅａｄ[ Ｊ] . Ｅｎｖｉｒｏｎ Ｔｏｘｉｃｏｌꎬ ２０１７ꎬ３２:８１３￣ ８２２.
[１２] Ｌｉａｎｇ Ｙꎬ Ｃｈｅｎ Ｘꎬ Ｌｕ Ｘꎬ ｅｔ ａｌ.Ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｍｉｃｒｏ￣
ｃｙｓｔｉｎ ａｎｄ ｎｉｔｒｉｔｅ ｏｎ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈꎬ ｌｉｐｉｄ ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎꎬ ａｎｄ
ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｆｒｅｓｈｗａｔｅｒ ｒｏｔｉｆｅｒ Ｂｒａｃｈｉｏｎｕｓ￣
ｃａｌｙｃｉｆｌｏｒｕｓ[ Ｊ] . Ａｑｕａｔ Ｔｏｘｉｃｏｌꎬ ２０１７ꎬ １９２:７８￣ ８８.
[１３] Ｍｅｉｘｎｅｒ Ａꎬ Ｋａｒｒｅｔｈ Ｆꎬ Ｋｅｎｎｅｒ Ｌꎬ ｅｔ ａｌ.Ｊｕｎ ａｎｄ ＪｕｎＤ￣ｄｅ￣
ｐｅｎｄｅｎｔ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｉｎ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｔｒｅｓｓ ｒｅｓｐｏｎｓｅ
[ Ｊ] .Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ Ｄｉｆｆｅｒꎬ２０１０ꎬ １７:１４０９￣ １４１９.