亚洲外科杂志（2018）41, 328e332

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原文

脱细胞气管异体移植在动物模型（兔）中
的应用
Reza Ershadi*, Mohamadbagher Rahim, Siavash Jahany,
Siamak Rakei

伊朗德黑兰医科大学瓦利亚斯尔医院胸腔外科部

2017年1月3日收到；2017年2月15日收到修订版；2017年2月20日接受
2017年3月27日可在线查阅

关键字 摘要 背景。在没有免疫抑制的情况下进行气管异体移植一直很困难。为了确定脱细胞气管是否

脱细胞异体移 可用于气管置换，我们在无免疫抑制剂移植的兔子模型中评估了脱细胞气管异体移植的生存能力

植。 。
家兔；气管 方法。从成年新西兰白兔身上采集一半异体组织（第1组，n Z 7），用去氧胆酸钠/DNase lava-
移植 tions的脱细胞方法，根据需要进行多次循环，另一半储存在磷酸盐缓冲盐水中，4o C作为对照（
第2组，n Z 7）。然后将生物工程和对照组植入14只年龄匹配的兔子体内。
结果。第1组（脱细胞），所有兔子都存活了，而第2组（对照组），所有兔子在手术后20天至45
天之间死于气道阻塞。组织学上，脱细胞异体移植显示了上皮和软骨的完全再生，但新鲜异体移
植显示了炎症变化，没有上皮，也没有软骨。
结论。植入脱细胞的气管异体后，上皮和软骨气管环发生了完全的再生，而没有免疫抑制。我们
表明，脱细胞的过程减少了对气管的异体反应。因此，我们认为脱细胞的气管异体移植是气管置
换的最佳选择。据我们所知，这是第一个观察这种移植气管的长期（1年）进展情况的研究。
ª 2017年亚洲外科协会和台湾机器人外科协会。出版服务
作 者 ： Elsevier B.V. 这 是 一 篇 根 据 CC BY-NC-ND 许 可 证 （ http://
creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/）公开获取的文章。

* 通讯作者。伊朗德黑兰Bagherkhan街Valiasr医院胸腔外科。
电子邮件地址：ershadyr@yahoo.com（R. Ershadi）。

http://dx.doi.org/10.1016/j.asjsur.2017.02.007
1015-9584/ª 2017 亚洲外科协会和台湾机器人外科协会。出版服务由Elsevier B.V.提供。这是一篇根据CC BY-NC-ND许可的开放性文章（
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/）。
脱细胞的气管异体移植
1. 简介
对于各种良性或恶性气管病变的患者来说，气管切除加原发
重建是唯一的治愈性治疗。1不幸的是，病变气管的可切除长
度在儿童中通常被限制在总长度的30%左右，在成人中被限
制在6厘米左右，这一切除率的进一步提高取决于安全气管替
代物的发展。2这在临床上还没有，因为到目前为止，几乎所
有提供自体或合成的安全和可重复的气管移植的尝试都是令
人失望的。 1 这使人们对长段气管置换的前景产生怀疑。 3 组
织生物工程已成为创造接近正常气管的最有希望的技术。1,4
而令人鼓舞的早期实验结果 5 和临床应用 6 已有报道。为了确
定脱细胞气管是否可以成为替代手术中真正的替代品，我们
评估了在没有免疫抑制的情况下，脱细胞气管异体移植的兔
子模型的生存能力和组织学变化。
2. 材料和方法
按照国家医学研究会制定的 "实验动物护理原则 "和国家研究
委员会实验动物资源研究所编写的 "实验动物护理和使用指
南 "采取了特殊的动物护理措施，并由国家研究院出版社出
版，1996年修订。
每个同种异体移植都是从体重为3170-4575克的成年雄性
新玉米地白兔身上获取的。在没有气管插管的情况下，将它
们置于仰卧位，并进行采血或移植手术。通过颈部中线切口
暴露颈部气管，然后从环状软骨到颈部收割。为了获得最大
的移植物存活率，移植物来自跳动的心脏供体，没有温热缺
血。
然后将收获的片段分为两组。一半（对照组）被放置在由
磷酸盐缓冲盐水（PBS）制成的储备溶液中，其中含有1%的
抗生素和抗霉菌溶液。另一半同样存放24小时，但随后提交
到 生物工程协议，如下所述。
图一 (A) 脱细胞的气管。(B) 移植脱细胞的气管异体。
329
2.1. 基质生物工程
剥去收获的气管上层组织，剥夺气管肌肉，并在含有1%抗生
素和抗霉菌溶液的PBS中冲洗四次（每次4小时）。此后，按
照以前的报告继续进行协议。7简而言之，对组织进行多次处
理循环，包括以下步骤：将组织在Aqua milliQ（Millipore）
中储存48小时
在4o C，然后在4%脱氧胆酸钠中培养4小时，并在1mol/L
NaCl中加入2000 kU的DNase-I（Sigma
化学公司），持续4小时。每个周期后，对细胞元素和主要组
织相容性复合体（MHC）细胞的存在进行了组织学验证。生
物工程过程持续了35天，相当于17个去根酶法（DEM）周期
，之后，生物工程气管基质显示出少数残留的软骨细胞核，
但完全去除MHC I类和II类抗原（图1A）。8相反，MHC I类和
II类的表达在对照组气管受体中是无处不在的。8
移植是与年龄匹配的受体兔一起进行的。在麻醉状态下，
受体被置于仰卧位，通过颈部中线切口切除一个六环气管段
。使用可吸收单丝（5-0 PDS，Ethicon，美国）以端对端连续
方式进行异体移植（对照，n Z 7；脱细胞，n Z 7）（图1B
），并按常规方式关闭伤口。术后，所有14只接受治疗的兔
子都被观察了3个小时，然后被送回各自的笼子。它们接受标
准的饲料和水。在术后第1天，给它们服用镇痛剂（丁丙诺啡
，0.05毫克/公斤），每天两次。术后5天内使用抗生物预防剂
（恩诺沙星，10毫克/公斤）。没有给予免疫抑制剂或类固醇
。在术后第5天和第15天用柔性支气管镜进行检查，此后每3
个月检查一次，当动物死亡或从第20天到第365天被牺牲时
，对每个气管移植进行大体和显微镜检查（用苏木精和伊红
染色进行病理检查）。
3. 结果
表1总结了14个移植对象的结果。在脱细胞组（第1组）中，
兔子在实验期间一直活着，随后被杀死进行组织学检查。然
而，在对照组（第2组），所有的7只兔子都死了
330 R.Ershadi et al.

表1 14只接受气管异体移植的兔子的研究结果
集团 兔子 死亡或牺牲 上皮细胞 软骨 淋巴细胞 单核
n 日 再生 渗入 细胞浸润
1-脱细胞 1 牺牲了200人 þ þ
异体移植 2 220 牺牲了 þ þ
3 280个牺牲者 þ þ
4 牺牲了320人 þ þ
5 340 牺牲了 þ þ
6 牺牲的365人 þ þ
7 牺牲的365人 þ þ
2-控制 1 20人死亡 þ þ
异体移植 2 25人死亡 þ þ
3 29人死亡 þ þ
4 34人死亡 þ þ
5 39人死亡 þ þ
6 41人死亡 þ þ
7 45人死亡 þ þ

在术后第20、25、29、34、39、41和45天出现气道梗阻。在
支气管镜下，上皮再生的迹象早期出现在移植物的后壁，然
后围绕整个圆周，第一组的气道是开放的，没有看到狭窄或
恶变（图2）。然而，在第2组中，气道几乎完全被纤维化和
肉芽组织所阻挡。
在组织学上，第二组观察到明显的淋巴细胞和单核细胞浸
润，严重的纤维化和软骨环的破坏（图3A）。在第1组，观
察到完整的上皮再生（分化良好的呼吸道上皮）和软骨气管
环的再生。第1组没有观察到淋巴细胞和单核细胞的浸润（图
3B）。
4. 讨论
与其他成功的器官置换相比， ，它是在无菌的间质环境中进
行的。
(例如，肝脏、肾脏和心脏），气道代表了哺乳动物和外部环
境之间的接口。毫不奇怪，它的粘膜拥有免疫活性的细胞，
在气道移植中起着关键作用。9,10这些细胞会导致急性异体移
植排斥反应，需要大剂量的免疫抑制。 11,12 更换气管有许多
尚未解决的手术问题。在实验和临床中，人们利用假体材料
、不同的自体组织和同种移植来完成这一任务，做出了各种
努力。 13,14 各种假体材料已被测试，但由于上皮化不充分、
细菌感染、过度肉芽化引起的阻塞和吻合口渗漏，临床上适
合的假体还没有开发出来。用各种自体组织进行重建，如心
包膜、骨膜、骨盆等。 15 骨膜。 16 食道。 17 和小肠。 18 所有这
些都是用支架加固的，已经被重新移植了。然而，他们的临
床应用必须谨慎进行。研究表明 19,20 抗原性研究表明，人类
气管上皮细胞会产生HLA-DR抗原，该抗原可激活T淋巴细胞
，并可能发挥重要作用。

图2 (A) 脱细胞气管异体移植组的支气管镜检查显示第5天移植管腔发白的一面。(B) 第15天早期出现的上皮再生。(C) 第365天的最终

支气管镜检查，上皮细胞完全再生。
脱细胞的气管异体移植
图3 对照组和脱细胞气管异体移植的组织学发现。(A) 对照组移
植的移植物有明显的细胞淤积（淋巴细胞和单核细胞），纤维化
和软骨环的破坏。(B)脱细胞气管异体移植中的呼吸道上皮再生
（方框箭头和插图）、软骨环和移植物血管再生（小箭头）。血
液-
毒蛋白酶染色x200。内页x400。
在移植物排斥中的作用。使用免疫抑制剂来控制免疫反应肯
定会减弱移植排斥，但也会增加气管置换后的气道感染。因
此，减少异体移植本身的抗原性是一种很好的控制方法。为
了这个目的，冷冻保存。21放射治疗。22和光动力疗法23已有
报道。
本研究结果表明，DEM过程是一种简单而有效的方法，可
以在保持与本地气管相似的结构完整性的同时，对缺乏任何
MHC抗原的气管基质进行生物工程改造，最重要的是，其长
度足以具有潜在的临床应用。
在我们的实验中，在植入脱细胞的气管异体后，观察到上
皮和软骨的完全再生。上皮层内或下没有淋巴细胞的浸润。
在支气管镜检查中，气管腔是开放的，在移植的气管中没有
观察到恶性变化。
331
段。我们的实验结果表明，脱细胞的气管异体移植具有良好
的长期组织存活能力，并降低了移植物的抗原性。它是气管
置换的一个很好的选择。本研究是首次观察这种移植气管的
长期（1年）预后。
总之，在植入脱细胞的气管异体后，上皮和软骨气管环完
全再生，没有免疫抑制。因此，脱细胞的过程减少了对气管
的异体反应。
利益冲突
作者没有利益冲突需要声明。
参考文献
1. Grille HC.气管置换：一个重要的回顾。Ann Thorax Surg. 2002;
73:1995e2004.
2. Gasser HA, Grille HC, Shadier MB, et al. 原发性气管和颈部腺
样囊 肿和 鳞状 细 胞 癌 切 除 后的 长期 生 存 。 Ann Thorax Surg.
2004; 78:1889e1896.
3. Birchall M, Macchiarini P. 气道移植：一场值得讨论的辩论？
Transplantation.2008;85:1075e1080.
4. Macchiarini P. 气管引导的生成：再次出现似曾相识的情况 ？J
Thorax Cardiovasc Surg. 2004; 128:14e16.
5. Walles T, Giere B, Hofmann M, 等. 组织工程功能和血管化气管
的实验性生成。J Thorax Cardiovasc Surg. 2004; 128:900-906.
6. Macchiarini P, Walles T, Biancosino C, Mertsching H. 首次人体
移 植 生 物 工 程 气 道 组 织 。 J Thorax Cardiovasc Surg. 2004;
128:638-641.
7. Conconi MT, De Coppi P, Di Liddo R, et al. 通过洗涤剂-酶法获
得的气管基质，在体外支持软骨细胞和气管上皮细胞的粘附。
Transpl Int. 2005; 18:727-734.
8. Jungebluth P, Asnaghi A, Bellini S, et al. 一种新型洗涤剂酶组
织工程气管基 质的结构和形态学评估。J Thorax Cardiovasc
Surg. 2009; 138:586e593.
9. Barker E, Murison P, Macchiarini P, et al. 与主要组织相容性复
合体匹配的猪模型中的喉部移植有关的早期免疫学变化。Clin
Exp Immunol.2006;146:503e508.
10. 东条 T, Niwaya K, Sawabata N, 等. 用低温保存的气管异体替代
气管：狗的实验。Ann Thorax Surg. 1998; 66:209e213.
11. Macchiarini P, Lenot B, de Montpre´ville VT, et al. 气管异体
移植的直接血管再造和静脉引流的异位猪模型。巴黎南方大学肺
移植小组。J Thorax Cardiovasc Surg. 1994; 108:1066e1075.
12. Macchiarini P, Mazmanian GM, de Montpre´ville VT, et al. 实
验性气管和气管食管异体移植。巴黎南方大学肺移植 组。J
Thorax Cardiovasc Surg. 1995; 110:1037e1046.
13. Alonso WA, Bridger GP, Bordley JE. 狗 的 气 管移植 。 喉镜 。
1972;82:204e209.
14. Grille HC. 气 管 置 换 [ 社 论 ] 。 Ann Thorax Surg. 1990;
49:864e865.
15. Idriss FS, DeLeon SY, Ilbawi MN, Gerson CR, Tucker GF,
Holinger L, et al. 气管成形术与心包膜修补术治疗婴儿和儿童的
广泛气管狭窄。J Thorax Cardiovasc Surg. 1984; 88:527e535.
332
16. Kimura K, Mukohara N, Tsugawa C, et al. Tracheoplasty for
congenital stenosis of the entire trachea.J Pediatr Surg.
1982; 17:869e871.
17. Kato R, Onuki AS, Watanabe M, et al. 食管插管重建气管：一
项实验研究。Ann Tho- rax Surg. 1990; 49:951e954.
18. Letang E, Sa´nchez-Lloret J, Gimferrer JM, Ram´rez J, Vicens A.
用自由血管化的小肠移植实验重建犬的气管。Ann Thorax Surg.
1990; 49: 955e958.
19. Bujia J, Wilmes E, Hammer C, Kastenbauer E. Tracheal trans-
plantation: 证 明人 类气管上的HLA II类亚区 基因 产品。 Acta
Otolaryngol (Stockh).1990; 110:149e154.
R.Ershadi et al.
20. Kalb TH, Chuang MT, Marom Z, Mayer L. 表达第二类MHC抗原
的气道 上皮细胞的附属细胞功能的证据。Am J Respir Cell Mol
Biol. 1991; 4:320e329.
21. Messineo A, Filler RM, Bahoric A, Smith CR.用低温保存的软骨
异体移植修复气管缺陷。J Pediatr Surg. 1992; 27:1131e1135.
22. 横尾H，Inui K，Wada H，等。高剂量照射预示着犬类气管异体
移 植 的 排 斥 。 J Thorax Car- diovasc Surg. 1994;
107:1391e1397.
23. LaMuraglia GM, Adili F, Schmitz-Rixen T, Michaud NA, Flotte
TJ. 光 动 力 疗 法 抑 制 实 验 性 同 种 异 体 移 植 反 应 。 循 环 》 。
1995;92:1919e1926.