2.5.1.

L – Lysin- Ph¬ng ph¸p HPLC

- Thuèc thö:
- Níc cÊt hai lÇn
- Dung dÞch acid acetic 2%
- Dung dÞch acid hydrocloric 0,1N (TT)
- Triethylamin
- Tetrahydrofuran
- Natri acetat trihydrat
- Acetonitril (dïng cho HPLC)
- Methanol (dïng cho HPLC)
- §iÒu kiÖn s¾c ký:
- Cét Alltima C18, 5m (250mm x 4,6mm)
- Bíc sãng ph¸t hiÖn : 340 nm
- NhiÖt ®é cét: 400C
- Tèc ®é dßng: 0,5ml/phót
- Tiªm mÉu: 20l
- Tû lÖ dung m«i: .
0 phót: 99% pha ®éng A – 1% pha ®éng B
17 phót: 40% pha ®éng A – 60% pha ®éng B
18 phót: 0% pha ®éng A – 100% pha ®éng B
23 phót: 0% pha ®éng A – 100% pha ®éng B
25 phót : 99% pha ®éng A – 1% pha ®éng B
- Pha ®éng :
+ Pha ®éng A: Hoµ tan 1,36g Natri acetat trihydrat trong 500ml níc,
thªm 90l triethylamin, l¾c ®Òu. §iÒu chØnh dung dÞch tíi pH = 7,2  0,05 b»ng
dung dÞch acid acetic 2%, thªm 1,5 ml tetrahydrofuran, l¾c ®Òu, läc qua mµng läc
milipore 0,45m.
+ Pha ®éng B: Hoµ tan 1,36g Natri acetat trihydrat trong 100ml níc,
®iÒu chØnh tíi pH = 7,2 ± 0,05 víi dung dÞch acid acetic 2%. Läc qua mµng läc
milipore 0,45m. Thªm 200ml acetonitril vµ 200ml methanol (lo¹i dïng cho s¾c ký
láng). Trén ®Òu.
L¾c siªu ©m 30 phót tríc khi sö dông 2 pha ®éng trªn.
+- Thuèc thö OPA: C©n 50mg phthalaldehyd hoµ trong 1,25 ml
Methanol khan. Sau ®ã thªm 50 l acid 3- mecaptopropionic vµ 11,2ml ®Öm borat
pH 10,4.
 + §Öm borat pH 10,4: C©n 0,6189g acid boric vµ 0,7456g kali clorid,
hoµ tan trong 50ml níc cÊt, thªm 36,85ml dung dÞch natri hydroxyd 0,2M. §iÒu
chØnh vÒ pH 10,4 b»ng dung dÞch natri hydroxyd 1M, sau ®ã thªm níc võa ®ñ
200ml, l¾c ®Òu.
- TiÕn hµnh:

-5-
+ Dung dÞch chuÈn: C©n chÝnh x¸c kho¶ng 50mg L- Lysin vµo b×nh ®Þnh
møc 100ml. Thªm 70 ml dung dÞch acid hydrocloric 0,1N l¾c cho tan hoµn
toµn. Thªm acid hydrocloric 0,1N ®Õn v¹ch. L¾c ®Òu. Läc qua mµng läc
milipore 0,45mm. Hót 1,0ml dung dÞch nµy,
thªm 5ml dung dÞch thuèc thö OPAvµ 1,0 ml ®Öm borat pH= 10,4, l¾c ®Òu.
§ãng nót vµ ®Ó æn nhiÖt ë 60oC trong 10 phót.