Ιω

άν
νη
ς
ΑΡΧΕΣΛΕΙΤΟΥΡΓΙΑΣ
Σ
Πα
πα
δά
ΑΙΜΑΤΟΛΟΓΙΚΩΝΑΝΑΛΥΤΩΝΙ
κη
ς
dr
.i
oa
nn
ΙΩΑΝΝΗΣΣΠΑΠΑΔΑΚΗΣ
is
pa
pa
ΕΠΙΜΕΛΗΤΗΣΒΙΑΤΡΙΚΗΣΒΙΟΠΑΘΟΛΟΓΙΑΣΕΡΓΑΣΤΗΡΙΑΚΗΣΙΑΤΡΙΚΗΣ

da
ΑΙΜΑΤΟΛΟΓΙΚΟΕΡΓΑΣΤΗΡΙΟ

ki
s@
ΓΕΝΙΚΟΝΟΣΟΚΟΜΕΙΟΧΑΝΙΩΝΑΓΙΟΣΓΕΩΡΓΙΟΣ

gm
27ΟΚΤΩΒΡΙΟΥ2023

ai
l.
co
m
 Σύγχρονοι Αυτοματοποιημένοι Αιματολογικοί Αναλυτές

Ιω
(Modern Automated Hematology Analyzers – MAHA)

άν
νη
ς
Σ
Πα
πα
Εξελιγμένα Διαγνωστικά Όργανα

δά
κη
• Αναλυτικά (εξελιγμένη μεθοδολογία)

ς
• Τεχνικά (αυτοματοποίηση, υψηλή τεχνολογία)

dr
Διαγνωστικά Αιματολογικά Εργαστήρια

.i
oa
• Ολοκληρωμένη, γρήγορη, ακριβής και

nn
αποδοτική επισκόπηση και ανάλυση δειγμάτων

is
αίματος (κυτταρικών συστατικών) τόσο ποιοτικά

pa
όσο και ποσοτικά

pa
Εφαρμογές/Λειτουργικός ρόλος

da
ki
• Διάγνωση

s@
• Παρακολούθηση Υγείας Ασθενών

gm
• Έρευνα

ai
l.
co
m
Chhabra G. Automated hematology analyzers: Recent trends and applications. J Lab Physicians. 2018 Jan-Mar;10(1):15-16. doi: 10.4103/JLP.JLP_124_17. PMID: 29403197; PMCID: PMC5784285.
 Λειτουργικός Ρόλος των MAHA στο Διαγνωστικό Αιματολογικό Εργαστήριο

Ιω
άν
νη
ς
Γενική Εξέταση Αίματος (Complete Blood Count – CBC)

Σ
Πα
Διαφορικός Λευκοκυτταρικός Τύπος (Differential Count)

πα
δά
Άωρα Κύτταρα Κοκκιώδους Σειράς (IG- Immature Granulocytes)

κη
ς
Επίπεδα Αιμοσφαιρίνης και Αιματοκρίτη (Hemoglobin and
Hematocrit Levels)

dr
.i
Ερυθροκυτταρικοί Δείκτες (Red Cell Indices)

oa
nn
Ανάλυση Αιμοπεταλίων (Platelet Analysis)

is
pa
Αριθμός Εμπύρηνων Ερυθροκυττάρων (NRBC Count)

pa
da
Αριθμός Δικτυοερυθροκυττάρων (Reticulocyte Count)

ki
s@
Κυτταροχημικές Χρώσεις και Ανοσολογικοί δείκτες (Cytochemical

gm
Stains and Immunologic Markers)

ai
l.
Ανάλυση Σωματικών Υγρών (Body Fluids Analysis)

co
m
Ψηφιακή Απεικόνιση (Digital Imaging)
Vis JY, Huisman A. Verification and quality control of routine hematology analyzers. Int J Lab Hematol. 2016 May;38 Suppl 1:100-9. doi: 10.1111/ijlh.12503. Epub 2016 May 9. PMID: 27161194.
Thachil J, Bates I. Approach to the Diagnosis and Classification of Blood Cell Disorders. Dacie and Lewis Practical Haematology. 2017:497–510. doi: 10.1016/B978-0-7020-6696-2.00023-0. Epub 2016 Oct 21.
PMCID: PMC7150139.
 Λειτουργικός Ρόλος των MAHA στο Διαγνωστικό Αιματολογικό Εργαστήριο
Γενική Εξέταση Αίματος

Ιω
(Complete Blood Count – CBC)

άν
νη
ς
Σ
Απλούστερη (??) - Συχνότερα εκτελούμενη εξέταση παγκοσμίως

Πα
Πληροφορίες για ομοιόσταση ασθενούς

πα
δά
Screening Test για υποκείμενες παθολογικές διεργασίες

κη
•Λοιμώξεις

ς
•Αιματολογικές και λοιπές κακοήθειες,

dr
•Αναιμίες

.i
•Ηπατοπάθειες/κίρρωση

oa
•Καρδιαγγειακές νόσοι

nn
•Αρτηριοσκλήρυνση

is
•Σακχαρώδης διαβήτης τύπου 2
•Μεταβολικό σύνδρομο

pa
pa
Αφετηρία για το διαφοροδιαγνωστικό πλάνο που θα ακολουθήσει ο θεράπων ιατρός

da
Αξιολόγηση πρόγνωσης

ki
s@
Παρακολούθηση (monitoring) δραστηριότητας νόσου ασθενών

gm
•χρονίως πάσχοντες

ai
•υπό φαρμακευτική αγωγή

l.
•υπό μετάγγιση

co
•μετά από χειρουργείο κτλ

m
Vis JY, Huisman A. Verification and quality control of routine hematology analyzers. Int J Lab Hematol. 2016 May;38 Suppl 1:100-9. doi: 10.1111/ijlh.12503. Epub 2016 May 9. PMID: 27161194.
Thachil J, Bates I. Approach to the Diagnosis and Classification of Blood Cell Disorders. Dacie and Lewis Practical Haematology. 2017:497–510. doi: 10.1016/B978-0-7020-6696-2.00023-0. Epub 2016 Oct 21.
PMCID: PMC7150139.
 Λειτουργικός Ρόλος των MAHA στο Διαγνωστικό Αιματολογικό Εργαστήριο
Διαφορικός Λευκοκυτταρικός Τύπος

Ιω
(Differential Count)

άν
νη
ς
Σ
Διαφοροποίηση Υποπληθυσμών

Πα
WBC (five-part differential count)

πα
δά
κη
• Ουδετερόφιλα

ς
• Λεμφοκύτταρα

dr
• Μονοκύτταρα

.i
oa
• Ηωσινόφιλα

nn
• Βασεόφιλα

is
pa
pa
Διαγνωστική Αξία

da
ki
• Λοιμώξεις

s@
gm
• Αλλεργίες

ai
• Αυτοάνοσα Νοσήματα

l.
• Κακοήθειες

co
m
Tefferi A, Hanson CA, Inwards DJ. How to interpret and pursue an abnormal complete blood cell count in adults. Mayo Clin Proc. 2005 Jul;80(7):923-36.
doi: 10.4065/80.7.923. PMID: 16007898; PMCID: PMC7127472.
 Λειτουργικός Ρόλος των MAHA στο Διαγνωστικό Αιματολογικό Εργαστήριο
Άωρα Κύτταρα Κοκκιώδους Σειράς

Ιω
(Immature Granulocytes - IG)

άν
νη
ς
Σ
Μέτρηση συνολικού αριθμού IG

Πα
πα
• Μεταμυελοκύτταρα

δά
κη
• Μυελοκύτταρα

ς
• Προμυελοκύτταρα

dr
.i
Διαγνωστική Αξία

oa
nn
• Έγκαιρη Ανίχνευση Λοιμώξεων

is
• Εκτίμηση Φλεγμονωδών Καταστάσεων

pa
pa
• Αξιολόγηση Διαταραχών Μυελού των

da
Οστών

ki
• Αξιολόγηση Χημειοθεραπείας και

s@
Ακτινοθεραπείας

gm
ai
• Προγνωστικός Δείκτης

l.
• Ανταπόκριση στη θεραπεία

co
m
Georgakopoulou VE, Makrodimitri S, Triantafyllou M, Samara S, Voutsinas PM, Anastasopoulou A, Papageorgiou CV, Spandidos DA, Gkoufa A, Papalexis P, Xenou E, Chelidonis G, Sklapani P, Trakas N,
Sipsas NV. Immature granulocytes: Innovative biomarker for SARS-CoV-2 infection. Mol Med Rep. 2022 Jul;26(1):217. doi: 10.3892/mmr.2022.12733. Epub 2022 May 13.
Λειτουργικός Ρόλος των MAHA στο Διαγνωστικό Αιματολογικό Εργαστήριο
Επίπεδα Αιμοσφαιρίνης και Αιματοκρίτη

Ιω
(Hemoglobin and Hematocrit Levels)

άν
νη
ς
Σ
Αιμοσφαιρίνη

Πα
πα
• Πρωτεΐνη των ερυθροκυττάρων

δά
• Κρίσιμος ρόλος στη μεταφορά

κη
ς
οξυγόνου από τους πνεύμονες στους

dr
ιστούς και διοξειδίου του άνθρακα από

.i
τους ιστούς πίσω στους πνεύμονες

oa
nn
Αιματοκρίτης

is
pa
• Λόγος όγκου ερυθρών αιμοσφαιρίων

pa
προς τον συνολικό όγκο αίματος

da
ki
Διαγνωστική Αξία

s@
gm
• Αναιμία

ai
• Πολυκυτταραιμία

l.
• Κατάσταση ενυδάτωσης

co
m
https://healthjade.net/hematocrit/
 Λειτουργικός Ρόλος των MAHA στο Διαγνωστικό Αιματολογικό Εργαστήριο
Ερυθροκυτταρικοί Δείκτες (Red Cell Indices)

Ιω
άν
νη
Ερυθροκυτταρικοί δείκτες

ς
• MCV

Σ
• Μέγεθος

Πα
• Μικροκυττάρωση

πα
• Ορθοκυττάρωση

δά
• Μακροκυττάρωση

κη
• MCH

ς
• Ποσότητα αιμοσφαιρίνης ανά ερυθροκύτταρο

dr
• Υποχρωμία

.i
• Ορθοχρωμία

oa
• MCHC

nn
is
• Ποσότητα αιμοσφαιρίνης ανά μονάδα όγκου

pa
• Συσχετισμός περιεκτικότητας σε αιμοσφαιρίνη με
τον όγκο του κυττάρου

pa
• RDW

da
• Συντελεστής μεταβολής κατανομής όγκου των

ki
ερυθρών αιμοσφαιρίων (μέγεθος -

s@
ανισοκυττάρωση)

gm
ai
Διαγνωστική Αξία

l.
• Έλλειψη σιδήρου

co
• Έλλειψη βιταμίνης Β12 ή φυλλικού οξέος

m
https://labpedia.net/red-blood-cell-rbc-part-4-blood-indices/
Sarma PR. Red Cell Indices. In: Walker HK, Hall WD, Hurst JW, editors. Clinical Methods: The History, Physical, and Laboratory Examinations. 3rd edition. Boston: Butterworths; 1990. Chapter 152. Available from:
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK260/
 Λειτουργικός Ρόλος των MAHA στο Διαγνωστικό Αιματολογικό Εργαστήριο
Αριθμός Εμπύρηνων Ερυθροκυττάρων

Ιω
(Nucleated Red Blood cell –NRBC Count)

άν
νη
ς
Σ
Εμπύρηνα Ερυθροκύτταρα (NRBC)

Πα
πα
• Ανώριμα RBC

δά
• Εξακολουθούν να περιέχουν πυρήνα

κη
ς
Διαφοροποίηση NRBC από ώριμα RBC

dr
• Μέγεθος

.i
oa
• Σχήμα

nn
• Παρουσία πυρήνα

is
pa
Διαγνωστική αξία

pa
• Διαταραχές μυελού των οστών

da
ki
• Αναιμία

s@
• Λοιμώξεις

gm
• Καταστάσεις στρες

ai
l.
• Υποξία

co
• Φλεγμονή

m
Pikora, K.; Krętowska-Grunwald, A.; Krawczuk-Rybak, M.; Sawicka-Żukowska, M. Diagnostic Value and Prognostic Significance of Nucleated Red Blood Cells (NRBCs) in Selected Medical Conditions. Cells 2023, 12,
1817. https://doi.org/10.3390/cells12141817
 Λειτουργικός Ρόλος των MAHA στο Διαγνωστικό Αιματολογικό Εργαστήριο
Μέτρηση Δικτυοερυθροκυττάρων (ΔΕΚ - Reticulocyte Count)και

Ιω
Σχετικών Δεικτών

άν
νη
ς
Νεαρά RBC

Σ
Πα
•Απώλεια πυρήνα
•Δίκτυο RNA

πα
•Ρυθμός παραγωγής RBC στο μυελό των οστών

δά
Παράμετροι ΔΕΚ

κη
ς
•Αριθμός ΔΕΚ (Reticulocyte Count -Ret#)

dr
•Ποσοστό ΔΕΚ (Reticulocyte Percentage -Ret%): Ποσοστό ΔΕΚ σε σχέση με συνολικό αριθμό
RBC

.i
•Μέσος όγκος ΔΕΚ (Mean Reticulocyte Volume - MRV): μέσο μέγεθος ΔΕΚ

oa
•Περιεκτικότητα αιμοσφαιρίνης στα ΔΕΚ (Reticulocyte Hemoglobin Content -CHr ή RET-He):

nn
ποσότητα αιμοσφαιρίνης εντός των ΔΕΚ

is
•Εύρος κατανομής ΔΕΚ (Reticulocyte Distribution Width RDW-RET): διακύμανση μεγέθους ΔΕΚ

pa
•Χρόνος ωρίμανσης ΔΕΚ (Reticulocyte Maturation Time - RMT ή Ret-T): εκτίμηση χρόνου που
χρειάζεται για να ωριμάσουν τα ΔΕΚ σε πλήρως λειτουργικά RBC

pa
•Κλάσμα Άωρων ΔΕΚ (IRF Ιmmature Reticulocyte Fraction): υποπληθυσμός ΔΕΚ νεότερων και

da
λιγότερο ώριμων από τα τυπικά ΔΕΚ

ki
Διαγνωστική Αξία

s@
•Αξιολόγηση και monitoring καταστάσεων που επηρεάζουν την παραγωγή RBC στο μυελό των

gm
οστών

ai
•Σιδηροπενική αναιμία

l.
•Διαταραχές Β12/φυλλικού

co
•Αιμολυτικές διαταραχές

m
•Διαταραχές μυελού των οστών

Rai D, Wilson AM ανεπάρκεια βιταμίνης Β12 ή φυλλικού οξέος, Moosavi L. Histology, Reticulocytes. [Updated 2023 May 19]. In: StatPearls [Internet]. Treasure Island (FL): StatPearls Publishing; 2023 Jan-.
Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK542172/
 Λειτουργικός Ρόλος των MAHA στο Διαγνωστικό Αιματολογικό Εργαστήριο

Ιω
Ανάλυση Αιμοπεταλίων (PLT analysis)

άν
νη
ς
Σ
Αιμοπετάλια (Platelet Count -PLT)

Πα
•Απύρηνα κύτταρα

πα
•Κρίσιμος ρόλος στον μηχανισμό πήξης του αίματος και στο μηχανισμό

δά
αιμόστασης

κη
Δείκτες Αιμοπεταλίων

ς
•Μέσος όγκος αιμοπεταλίων (Mean Platelet Volume - MPV): μέτρο μέσου

dr
μεγέθους PLTs

.i
•Εύρος κατανομής αιμοπεταλίων (Platelet Distribution Width -PDW):

oa
διακύμανση μεγέθους PLTs

nn
•Αιμοπεταλιοκρίτης (Plateletcrit - PCT): όγκος που καταλαμβάνουν τα
PLTs σε ένα δεδομένο δείγμα αίματος

is
•Αναλογία PLTs-μεγάλων κυττάρων (Platelet-Large Cell Ratio P-LCR):

pa
μέτρο των μεγάλων αιμοπεταλίων στο αίμα

pa
•Δείκτης αναλογίας PLTs-μεγάλων κυττάρων (Platelet-Large Cell Ratio

da
Index -PLCI): P-LCR/MPV

ki
Διαγνωστική Αξία

s@
•Αιμορραγικές διαταραχές

gm
•Διαταραχές πήξης

ai
•Λοιμώξεις

l.
•Κακοήθειες
•Διαταραχές μυελού οστών

co
•Αποτελεσματικότητα χημειοθεραπειών

m
Detopoulou P, Panoutsopoulos GI, Mantoglou M, Michailidis P, Pantazi I, Papadopoulos S, Rojas Gil AP. Relation of Mean Platelet Volume (MPV) with Cancer: A Systematic Review with a Focus on Disease
Outcome on Twelve Types of Cancer. Curr Oncol. 2023 Mar 14;30(3):3391-3420. doi: 10.3390/curroncol30030258. PMID: 36975471; PMCID: PMC10047416.
 Λειτουργικός Ρόλος των MAHA στο Διαγνωστικό Αιματολογικό Εργαστήριο
Κυτταροχημικές Χρώσεις και Ανοσολογικοί Δείκτες

Ιω
(Cytochemical Stains and Immunologic Markers)

άν
νη
ς
Αναγνώριση κυτταρικών χαρακτηριστικών

Σ
για πιο εξειδικευμένες διαγνώσεις

Πα
πα
αιματολογικών διαταραχών

δά
• Κυτταροχημικές χρώσεις

κη
ς
• Διαφοροποίηση κυτταρικού τύπου

dr
• Ανίχνευση μη φυσιολογικών κυτταρικών

.i
εγκλείστων

oa
• Αξιολόγηση περιεκτικότητας σε

nn
αιμοσφαιρίνη

is
• Ανοσολογικοί δείκτες

pa
• Ταυτοποίηση δεικτών κυτταρικής

pa
επιφάνειας

da
ki
• Διάγνωση λευχαιμιών και λεμφωμάτων

s@
• Παρακολούθηση ελάχιστης

gm
υπολειμματικής νόσου

ai
• Χαρακτηρισμός διαταραχών

l.
αιμοπεταλίων

co
m
Raskin, R.E., Santangelo, K. and Polak, K. (2022). Cytochemical Staining and Immunocytochemistry. In Schalm's Veterinary Hematology (eds M.B. Brooks, K.E. Harr, D.M. Seelig, K.J. Wardrop and D.J. Weiss).
https://doi.org/10.1002/9781119500537.ch61
 Λειτουργικός Ρόλος των MAHA στο Διαγνωστικό Αιματολογικό Εργαστήριο

Ιω
Ανάλυση Σωματικών Υγρών (Body Fluids Analysis)

άν
νη
ς
Σ
Πα
Ανάλυση •Εγκεφαλονωτιαίο Υγρό (ΕΝΥ)

πα
•Αρθρικό Υγρό
Σωματικών •Υπεζωκοτικό Υγρό

δά
Υγρών •Περιτοναϊκό Υγρό

κη
ς
dr
.i
Η ανάλυση

oa
nn
σωματικών •Κυτταρική Μέτρηση

is
υγρών •Διαφορικός Λευκοκυτταρικός Τύπος

pa
περιλαμβάνει

pa
da
ki
•Λοιμώξεις ΚΝΣ (π.χ. μηνιγγίτιδα)

s@
•Διαταραχές των αρθρώσεων (π.χ.

gm
Διαγνωστική αρθρίτιδα)

ai
Αξία •Υπεζωκοτική συλλογή (συσσώρευση
υγρού στο στήθος)

l.
•Ασκίτης (συσσώρευση κοιλιακού υγρού)

co
m
Takemura H, Ai T, Kimura K, Nagasaka K, Takahashi T, Tsuchiya K, Yang H, Konishi A, Uchihashi K, Horii T, Tabe Y, Ohsaka A. Evaluation of cell count and classification capabilities in body fluids using a fully
automated Sysmex XN equipped with high-sensitive Analy
sis (hsA) mode and DI-60 hematology analyzer system. PLoS One. 2018 Apr 26;13(4):e0195923. doi: 10.1371/journal.pone.0195923. PMID: 29698492; PMCID: PMC5919509.
 Λειτουργικός Ρόλος των MAHA στο Διαγνωστικό Αιματολογικό Εργαστήριο

Ιω
Ψηφιακή Απεικόνιση (Digital Imaging)

άν
νη
ς
Απεικόνιση Υψηλής

Σ
Πα
Ανάλυσης

πα
δά
• Μεγάλης ακρίβειας και υψηλής

κη
απεικονιστικής ποιότητας

ς
μορφολογική ανάλυση

dr
.i
• Αξιόπιστες εκτιμήσεις βοηθητικές

oa
στη διαφοροδιάγνωση

nn
αιματολογικών διαταραχών

is
pa
• Χαρακτηριστικά πυρήνα

pa
(πυρήνια, πυκνότητα

da
χρωματίνης, λοβώσεις)

ki
s@
• Χαρακτηριστικά

gm
κυτταροπλάσματος (κοκκίωση,

ai
κενοτόπια)

l.
co
m
Gedefaw, L.; Liu, C.-F.; Ip, R.K.L.; Tse, H.-F.; Yeung, M.H.Y.; Yip, S.P.; Huang, C.-L. Artificial Intelligence-Assisted Diagnostic Cytology and Genomic Testing for Hematologic Disorders. Cells 2023, 12, 1755.
https://doi.org/10.3390/cells12131755
 m
co
l.
ai
gm
s@
ki
da
pa
pa
is
nn
oa
.i
dr
ς
κη
δά
πα
Πα
Σ
ς
νη
άν
Ιω
 Ιω
άν
νη
ς
Σ
Πα
πα
δά
κη
ς
dr
.i
Οι Σύγχρονοι Αυτοματοποιημένοι

oa
nn
Αιματολογικοί Αναλυτές έχουν εξελιχθεί

is
pa
σημαντικά με την πάροδο των ετών και

pa
da
προσφέρουν πλέον πολλά προηγμένα

ki
s@
χαρακτηριστικά

gm
ai
l.
co
m
 Η εξέλιξη των Αιματολογικών Αναλυτών

Ιω
Πριν την Δεκαετία του 1950

άν
νη
ς
Σ
Πα
Τεχνικές

πα
δά
Xειροκίνητης

κη
Mέτρησης

ς
dr
.i
• Μικροσκόπιο

oa
(microscope)

nn
• Αιμοκυτταρόμετρο

is
pa
(hemocytometer)

pa
da
ki
s@
gm
ai
l.
co
m
 Η εξέλιξη των Αιματολογικών Αναλυτών
Δεκαετία του 1940

Ιω
Αρχή Coulter (Coulter Principle)

άν
νη
ς
Σ
Πα
πα
δά
Wallace H. Coulter

κη
Αμερικανός ηλεκτρολόγος μηχανικός και εφευρέτης

ς
dr
.i
Όταν τα σωματίδια που αιωρούνται σε ένα διάλυμα

oa
ηλεκτρολύτη περνούν μέσα από μια μικρού μεγέθους οπή σε

nn
μια ηλεκτρικά αγώγιμη μεμβράνη, μετατοπίζουν έναν
ισοδύναμο όγκο του αγώγιμου υγρού

is
pa
Καθώς τα σωματίδια περνούν μέσα από την οπή, διακόπτουν

pa
τη ροή του ηλεκτρικού ρεύματος

da
Η αλλαγή στην ηλεκτρική σύνθετη αντίσταση (electrical

ki
impedance), που προκαλείται από αυτές τις διακοπές στην

s@
τρέχουσα ροή, είναι ευθέως ανάλογη με το μέγεθος και τον

gm
αριθμό των σωματιδίων που διέρχονται από την οπή

ai
l.
co
m
https://www.technologynetworks.com/diagnostics/articles/optimizing-optical-technology-for-automated-hematology-analyzers-322252https://www.escavo.com/docs/TheCoulterPrinciple.pdf
Brittin GM, Brecher G, Johnson CA. Evaluation of the Coulter Counter Model S. Am J Clin Pathol. 1969 Dec;52(6):679-89. doi: 10.1093/ajcp/52.6.679. PMID: 5353836.
Barnard DF, Carter AB, Crosland-Taylor PJ, et al An evaluation of the Coulter model S.Journal of Clinical Pathology 1969;s2-3:26-33.
Robinson, J.P. (2013), Wallace H. Coulter: Decades of invention and discovery. Cytometry, 83A: 424-438. https://doi.org/10.1002/cyto.a.22296
 Η εξέλιξη των Αιματολογικών Αναλυτών
Δεκαετία του 1950

Ιω
Πρώιμοι Αιματολογικοί Αναλυτές

άν
νη
ς
Σ
Πα
πα
1953

δά
κη
• Ο Coulter λαμβάνει δίπλωμα ευρεσιτεχνίας για το

ς
Μετρητή Coulter (Coulter Counter), ένα όργανο που θα

dr
μπορούσε να αυτοματοποιήσει την καταμέτρηση και το

.i
μέγεθος των κυττάρων

oa
nn
1956 - Μετρητής Coulter

is
pa
(Coulter Counter Model A)

pa
da
• Επανάσταση στην ανάλυση και διάγνωση των κυττάρων

ki
του αίματος

s@
• Πρώτος αυτοματοποιημένος αιματολογικός αναλυτής

gm
• Τεχνολογία βασισμένη στην σύνθετη αντίσταση

ai
• Αυτοματοποίηση της καταμέτρησης και της κατανομής

l.
των κυττάρων του αίματος με βάση το μέγεθος

co
m
https://americanhistory.si.edu/collections/search/object/nmah_120067
https://www.escavo.com/docs/TheCoulterPrinciple.pdf
Brittin GM, Brecher G, Johnson CA. Evaluation of the Coulter Counter Model S. Am J Clin Pathol. 1969 Dec;52(6):679-89. doi: 10.1093/ajcp/52.6.679. PMID: 5353836.
Barnard DF, Carter AB, Crosland-Taylor PJ, et al An evaluation of the Coulter model S.Journal of Clinical Pathology 1969;s2-3:26-33.
Robinson, J.P. (2013), Wallace H. Coulter: Decades of invention and discovery. Cytometry, 83A: 424-438. https://doi.org/10.1002/cyto.a.22296
 Η εξέλιξη των Αιματολογικών Αναλυτών
Δεκαετία 1960

Ιω
1968 - Coulter Model S

άν
νη
ς
Σ
Το Coulter Model S εισήχθη μετά την

Πα
επιτυχία του Model A

πα
δά
Συνεχιζόμενη ανάπτυξη των μετρητών

κη
Coulter για την καταμέτρηση και τον

ς
προδιορισμού του μεγέθους σωματιδίων

dr
.i
oa
nn
Πλεονεκτήματα Model S

is
σε σχέση με το Model A

pa
pa
da
ki
• Αναβαθμισμένος σχεδιασμός και ακρίβεια

s@
• Ευελιξία

gm
• Μέτρηση σωματιδίων ευρύτερου φάσματος όσον

ai
αφορά το μέγεθος
• Βελτιωμένο ηλεκτρονικό υπόβαθρο

l.
• Περιθώρια για περαιτέρω βελτιώσεις

co
m
Robinson, J.P. (2013), Wallace H. Coulter: Decades of invention and discovery. Cytometry, 83A: 424-438.
https://doi.org/10.1002/cyto.a.22296
 Η εξέλιξη των Αιματολογικών Αναλυτών
Δεκαετία 1960

Ιω
Απαρχή Ανάπτυξης Ανάλυσης Εικόνας (Image Analysis)

άν
νη
ς
Σ
Πα
Τα μικροσκόπια ανάλυσης εικόνας

πα
επιτρέπουν τη λήψη, επεξεργασία και

δά
ανάλυση εικόνων

κη
ς
Η ανάλυση εικόνας (Ιmage Αnalysis -ΙΑ)

dr
κατέστη δυνατή με την απαρχή της

.i
ανάπτυξης της ψηφιακής τεχνολογίας

oa
nn
• QTM A - Ποσοτικό Ψηφιακό Μικροσκόπιο

is
• 1962 - ο πρώτος ψηφιακός αναλυτής

pa
μικροσκοπικών εικόνων (Metals Research -

pa
Cambridge )

da
• Χρήση ψηφιακής κάμερας ως συσκευή εισόδου

ki
• Απαρχή αυτοματοποίησης στην ανάλυση

s@
εικόνας (μεσοδιάστημα 20 msec ανά εικόνα)

gm
• QTM B

ai
• 1963- πρώτο εμπορικά επιτυχημένο

l.
αυτοματοποιημένο όργανο ανάλυσης εικόνας
για επιστημονικούς σκοπούς (βιομηχανία

co
χάλυβα)

m
https://www.leica-microsystems.com/science-lab/microscopy-basics/50-years-of-image-analysis/
 Η εξέλιξη των Αιματολογικών Αναλυτών
Δεκαετία 1970

Ιω
Κυτταρομετρία Ροής

άν
νη
ς
Σ
Πα
πα
δά
κη
ς
dr
.i
Εισαγωγή της κυτταρομετρίας ροής με οπτική μέθοδο

oa
nn
(flow cytometry-optical method)

is
pa
pa
• Διαφοροποίηση διαφορετικών τύπων κυττάρων αίματος

da
• Ανάλυση μορφολογίας κυττάρων

ki
s@
• Ταξινόμηση λευκών αιμοσφαιρίων με μεγαλύτερη ακρίβεια

gm
ai
• Μετάβαση από το 3-part στο 5-part differential (διάκριση 5

l.
υποπληθυσμών λευκοκυττάρων)

co
m
Picot J, Guerin CL, Le Van Kim C, Boulanger CM. Flow cytometry: retrospective, fundamentals and recent instrumentation. Cytotechnology. 2012
Mar;64(2):109-30. doi: 10.1007/s10616-011-9415-0. Epub 2012 Jan 21. PMID: 22271369; PMCID: PMC3279584.
 Η εξέλιξη των Αιματολογικών Αναλυτών
Δεκαετία 1970

Ιω
1974 – Hemalog D

άν
νη
ς
Σ
Πα
πα
δά
κη
ς
dr
.i
oa
nn
is
pa
pa
da
ki
s@
gm
ai
l.
co
m
Picot J, Guerin CL, Le Van Kim C, Boulanger CM. Flow cytometry: retrospective, fundamentals and recent instrumentation. Cytotechnology. 2012
Mar;64(2):109-30. doi: 10.1007/s10616-011-9415-0. Epub 2012 Jan 21. PMID: 22271369; PMCID: PMC3279584.
 Η εξέλιξη των Αιματολογικών Αναλυτών

Ιω
Δεκαετία 1980

άν
1981 – Geometric Data Hematrak 590

νη
ς
Πρώτο Ψηφιακό Μικροσκόπιο με εμπορική επιτυχία

Σ
Πα
πα
δά
κη
ς
dr
.i
oa
nn
is
pa
pa
da
ki
s@
gm
ai
l.
co
m
Kratz, A, Lee, S-H, Zini, G, Riedl, JA, Hur, M, Machin, S; on behalf of the International Council for Standardization in Haematology. Digital morphology analyzers in hematology:
ICSH review and recommendations. Int J Lab Hematol. 2019; 41: 437–447. https://doi.org/10.1111/ijlh.13042
Lee JH, Lu WC, Chan JH. [Hematrak automated differential system model 590--an evaluation]. Zhonghua Yi Xue Za Zhi (Taipei). 1987 Jan;39(1):46-51. Chinese. PMID: 3455310.
Pierre RV, Payne BA, Lee WK, Hyma BA, Melchert LM, Scheidt RM. Comparison of four leukocyte differential methods with the National Committee for Clinical Laboratory
Standards (NCCLS) reference method. Am J Clin Pathol. 1987 Feb;87(2):201-9. doi: 10.1093/ajcp/87.2.201. PMID: 3812351.
 Η εξέλιξη των Αιματολογικών Αναλυτών
Δεκαετία 1980

Ιω
1985 – Technicon H*1

άν
νη
ς
Σ
Πα
πα
Αυτοματοποιημένος αναλυτής για εκτέλεση

δά
ολοκληρωμένης γενικής αίματος με πλήρη
διαχωρισμό λευκοκυτταρικών πληθυσμών (5 part

κη
differential count)

ς
dr
.i
oa
Συνδυασμός τεχνολογίας κυτταροχημείας

nn
(cytochemistry) και κυτταρομετρίας ροής (flow

is
technology)

pa
pa
da
Δύο κυτταρογραφήματα λευκών αιμοσφαιρίων

ki
(white blood cell cytograms) δημιουργούνται με

s@
βάση τη δραστηριότητα της υπεροξειδάσης

gm
(peroxidase activity) και τα χαρακτηριστικά του
πυρήνα των κυττάρων

ai
l.
co
m
Bollinger PB, Drewinko B, Brailas CD, Smeeton NA, Trujillo JM. The technicon H*1--an automated hematology analyzer for today and tomorrow. Complete blood count parameters. Am J Clin Pathol. 1987
Jan;87(1):71-8. doi: 10.1093/ajcp/87.1.71. PMID: 3799545.
 Η εξέλιξη των Αιματολογικών Αναλυτών
Δεκαετία 1990

Ιω
Αναλυτές μεσαίου όγκου (Mid Volume Analyzers)

άν
νη
ς
Σ
Πα
Δημοφιλείς σε μεσαίου μεγέθους εργαστήρια 1996 – Abbott Cell Dyn 4000

πα
δά
Αυξημένη αυτοματοποίηση

κη
Αύξηση αποοδοτικότητας (efficiency) • Μέτρηση αιμοπεταλίων με

ς
συνδυασμό τριών μεθόδων

dr
Μείωση κόστους

.i
• Ηλεκτρική αντίσταση

oa
Εξελιγμένο λογισμικό - ακριβής ερμηνεία δεδομένων

nn
Ευρύτερο φάσμα παραμέτρων • Κυτταρομετρία ροής με

is
laser (οπτική μέθοδος)

pa
•ερυθροκυτταρικοί δείκτες
•αριθμός αιμοπεταλίων

pa
Κυτταρομετρία ροής με laser • Κυτταρομετρία ροής με

da
ki
•αυξημένη ακρίβεια διαφορικού λευκοκυτταρικού τύπου
χρήση ανοσολογικών

s@
1996 -Εισαγωγή τεχνικών φθορισμού (fluorescent analysis)
δεικτών CD41-CD61/

gm
•αυτοματοποιημένη μέτρηση NRBC
Μονοκλωνικών

ai
•αυτοματοποιημένη μέτρηση ΔΕΚ

l.
αντισωμάτων

co
m
BRIGGS, C., HARRISON, P. and MACHIN, S.J. (2007), Continuing developments with the automated platelet count. International Journal of Laboratory Hematology, 29: 77-91.
https://doi.org/10.1111/j.1751-553X.2007.00909.x
Paul Harrison, Carol Briggs, Chapter 27 - Platelet Counting, Editor(s): Alan D. Michelson, Platelets (Third Edition), Academic Press, 2013, Pages 547-557, ISBN 9780123878373, https://doi.org/10.1016/B978-
0-12-387837-3.00027-4. (https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/B9780123878373000274)
 Η εξέλιξη των Αιματολογικών Αναλυτών
Δεκαετία 2000

Ιω
Αναλυτές υψηλής απόδοσης (High Throughput Analyzers)

άν
νη
ς
Σ
Μεγάλα εργαστήρια/Επεξεργασία εκατοντάδων δειγμάτων ανά ώρα

Πα
πα
Δυνατότητα ανάλυσης πολλαπλών παραμέτρων

δά
κη
•Mέτρηση δικτυοερυθροκυττάρων

ς
•Μέτρηση IG
•Aξιολόγηση κυτταρικής μορφολογίας

dr
.i
Eπισήμανση μη φυσιολογικών αποτελεσμάτων

oa
Έλεγχος ρουτίνας για φλεγμονώδεις νόσους, σηψαιμία, κακοήθειες,

nn
ερυθροποιητικές ανωμαλίες και ελονοσία

is
pa
Ενοποίηση με εργαστηριακά πληροφοριακά συστήματα (LIS) και
λογισμικό διαχείρισης δεδομένων

pa
da
Ενισχυμένη αποτελεσματικότητα

ki
s@
Ποιοτικός έλεγχος

gm
ai
l.
Δοκιμασίες παρά τη κλίνη (Point of Care Testing - POC)

co
•ταχύτερη και αποτελεσματικότερη φροντίδα ασθενών, ιδιαίτερα σε καταστάσεις

m
έκτακτης ανάγκης

BRIGGS, C. (2009), Quality counts: new parameters in blood cell counting. International Journal of Laboratory Hematology, 31: 277-297. https://doi.org/10.1111/j.1751-553X.2009.01160.x
 Η εξέλιξη των Αιματολογικών Αναλυτών
Δεκαετία 2010

Ιω
Ψηφιακή Απεικόνιση (Digital Imaging)

άν
νη
ς
Σ
Aυτοματοποιημένοι αναλυτές κυτταρικών

Πα
πα
εικόνων (automated cell image analyzers)

δά
κη
Aκριβείς και λεπτομερείς εικόνες

ς
κυττάρων αίματος

dr
.i
oa
Απεικόνιση υψηλής ανάλυσης

nn
is
• Μορφολογία/λόβωση πυρήνα

pa
• Κυτταροπλασματική κοκκίωση

pa
da
Χρήση

ki
s@
• Επίχρισμα Περιφερικού Αίματος/Μυελός/Σωματικά

gm
Υγρά

ai
• Ερευνα

l.
• Eκπαιδευση

co
m
Hsu, D. and Lee, S.-H. (2012). Digital Imaging in Hematology. In Laboratory Hematology Practice (eds K. Kottke-Marchant and B.H. Davis).
https://doi.org/10.1002/9781444398595.ch55
Hutchinson CV, Brereton ML, Burthem J. Digital imaging of haematological morphology. Clin Lab Haematol. 2005 Dec;27(6):357-62. doi:
10.1111/j.1365-2257.2005.00727.x. PMID: 16307535.
Η αρχή Coulter (Coulter Principle) βασίζεται στην αρχή μεταβολής

Ιω
της ηλεκτρικής σύνθετης αντίστασης οπής (Electrical Impedance)

άν
νη
ς
Σ
Πα
πα
δά
κη
ς
dr
.i
oa
nn
is
pa
pa
da
ki
s@
gm
ai
l.
co
m
 Η αρχή Coulter (Coulter Principle) βασίζεται στην αρχή μεταβολής

Ιω
της ηλεκτρικής σύνθετης αντίστασης οπής (Electrical Impedance)

άν
νη
ς
Σ
Πα
Βασική Ρύθμιση

πα
(Basic Setup)

δά
κη
ς
• Ο πυρήνας ενός μετρητή

dr
Coulter αποτελείται από μια

.i
oa
μικροσκοπική κυλινδρική οπή

nn
(<100μm) (apperture) που

is
βυθίζεται σε ένα διάλυμα

pa
pa
ηλεκτρολύτη (electrolyte)

da
• Η οπή βρίσκεται συνήθως μέσα

ki
s@
σε ένα σωλήνα ή θάλαμο μέσω

gm
του οποίου διέρχεται το

ai
ελεγχόμενο δείγμα που

l.
co
περιέχει σωματίδια (particles)

m
https://www.azom.com/article.aspx?ArticleID=6020
https://www.escavo.com/docs/TheCoulterPrinciple.pdf
 Η αρχή Coulter (Coulter Principle) βασίζεται στην αρχή μεταβολής

Ιω
της ηλεκτρικής σύνθετης αντίστασης οπής (Electrical Impedance)

άν
νη
ς
Σ
Ηλεκτρικό ρεύμα

Πα
πα
(Electric Current)

δά
κη
ς
• Ένα ηλεκτρικό συνεχές ρεύμα

dr
(DC-Direct Current)

.i
εφαρμόζεται στην οπή,

oa
nn
δημιουργώντας ένα μικρό

is
ηλεκτρικό πεδίο

pa
pa
• Το ηλεκτρικό πεδίο διατηρείται

da
συνήθως σε σταθερή τάση

ki
(όταν δεν περνά κάποιο

s@
gm
σωματίδιο μέσα από την οπή η

ai
αντίσταση είναι σταθερή)

l.
co
m
https://www.azom.com/article.aspx?ArticleID=6020
https://www.escavo.com/docs/TheCoulterPrinciple.pdf
Η αρχή Coulter (Coulter Principle) βασίζεται στην αρχή μεταβολής

Ιω
της ηλεκτρικής σύνθετης αντίστασης οπής (Electrical Impedance)

άν
νη
ς
Σ
Ροή δείγματος

Πα
πα
δά
(Sample Flow)

κη
ς
dr
• Το δείγμα που περιέχει

.i
oa
σωματίδια (particles)

nn
εισάγεται στο διάλυμα

is
pa
ηλεκτρολύτη

pa
da
(electrolyte) και ρέει

ki
s@
μέσω της οπής

gm
(apperture)

ai
l.
co
m
https://www.azom.com/article.aspx?ArticleID=6020
https://www.escavo.com/docs/TheCoulterPrinciple.pdf
 Η αρχή Coulter (Coulter Principle) βασίζεται στην αρχή μεταβολής

Ιω
της ηλεκτρικής σύνθετης αντίστασης οπής (Electrical Impedance)

άν
νη
ς
Σ
Ανίχνευση

Πα
(Detection)

πα
δά
• Καθώς τα σωματίδια περνούν μέσα από

κη
την οπή ένα προς ένα, διακόπτουν τη

ς
ροή του ηλεκτρολύτη, προκαλώντας

dr
μια στιγμιαία διαφορά δυναμικού στα

.i
άκρα της οπής με συνεπακόλουθη

oa
nn
μεταβολή στην ηλεκτρική σύνθετη

is
αντίσταση (impedance)

pa
• H αλλαγή στην σύνθετη αντίσταση είναι

pa
ευθέως ανάλογη με τον όγκο του

da
σωματιδίου

ki
• Τα μεγαλύτερα σωματίδια θα

s@
gm
εκτοπίσουν περισσότερο ηλεκτρολύτη

ai
και, ως εκ τούτου, θα δημιουργήσουν

l.
μεγαλύτερη μεταβολή στην σύνθετη

co
αντίσταση

m
https://www.azom.com/article.aspx?ArticleID=6020
https://www.escavo.com/docs/TheCoulterPrinciple.pdf
 Η αρχή Coulter (Coulter Principle) βασίζεται στην αρχή μεταβολής

Ιω
της ηλεκτρικής σύνθετης αντίστασης οπής (Electrical Impedance)

άν
νη
ς
Μέτρηση (Measurement)

Σ
Πα
• Το όργανο μετρά το μέγεθος και τη διάρκεια

πα
αυτών των μεταβολών σύνθετης αντίστασης

δά
καθώς τα σωματίδια περνούν μέσα από την οπή

κη
• Αναλύοντας αυτές τις μεταβολές, καθορίζεται

ς
τόσο ο αριθμός όσο και το μέγεθος των

dr
σωματιδίων

.i
• Η μεταβολή δυναμικού ως προς το χρόνο

oa
αντιστοιχεί σε ένα παλμό

nn
• Ο αριθμός παλμών αντιστοιχεί στον αριθμό

is
κυττάρων

pa
• Ο όγκος του κυττάρου υπολογίζεται με βάση το
ύψος του παραγόμενου παλμού, με την

pa
προϋπόθεση ότι τα κύτταρα διέρχονται κάθετα

da
και ένα-ένα από την οπή (το ύψος του παλμού

ki
εξαρτάται από την τροχιά του κυττάρου)

s@
• Τα δεδομένα μπορούν να υποβληθούν σε

gm
επεξεργασία (παλμογράφος) για να δημιουργηθεί

ai
μια κατανομή μεγέθους σωματιδίων

l.
(ιστόγραμμα)

co
m
https://www.azom.com/article.aspx?ArticleID=6020
https://www.escavo.com/docs/TheCoulterPrinciple.pdf
 Η αρχή Coulter (Coulter Principle) βασίζεται στην αρχή μεταβολής
της ηλεκτρικής σύνθετης αντίστασης οπής (Electrical Impedance)

Ιω
Μειονεκτήματα

άν
νη
ς
Σ
Επανακυκλοφορία (Recirculation) Συνεπίπτωση (Co-incidece)

Πα
• ‘Eνα κύτταρο αίματος διέρχεται από την • Δύο ή περισσότερα κύτταρα αίματος περνούν

πα
οπή του αναλυτή σύνθετης αντίστασης μέσα από το άνοιγμα τόσο κοντά μεταξύ τους,

δά
ώστε ο αναλυτής να τα ανιχνεύει ως ένα ενιαίο
περισσότερες από μία φορές, οδηγώντας

κη
κύτταρο
σε πολλαπλές μετρήσεις του ίδιου

ς
• Υποεκτίμηση του αριθμού των κυττάρων,
κυττάρου

dr
ιδιαίτερα σε δείγματα με υψηλές

.i
• Ανακρίβεια στον αριθμό των κυττάρων συγκεντρώσεις κυττάρων ή συσσώρευση

oa
και στις μετρήσεις μεγέθους κυττάρων

nn
• Μεγαλύτερα κύτταρα, όπως • Η συνεπίπτωση είναι πιο πιθανό να συμβεί σε

is
αιμοπετάλια ή μη φυσιολογικά δείγματα με υψηλά επίπεδα αιμοπεταλίων,

pa
λευκών αιμοσφαιρίων ή άλλων μικρών
κύτταρα, μπορεί να είναι πιο επιρρεπή

pa
σωματιδίων, καθώς η στενή εγγύτητα αυτών
στην επανακυκλοφορία, οδηγώντας σε των σωματιδίων μπορεί να οδηγήσει στην

da
υπερεκτίμηση λανθασμένη ανίχνευσή τους ως ένα

ki
• Οι σύγχρονοι αναλυτές χρησιμοποιούν μεγαλύτερο σωματίδιο

s@
συγκεκριμένους αλγόριθμους και • Οι αναλυτές χρησιμοποιούν διάφορες

gm
στρατηγικές, όπως αραίωση ή εξειδικευμένους

ai
μηχανισμούς ροής σωματιδίων για να
αλγόριθμους, για να μειώσουν τον αντίκτυπο

l.
μειώσουν τις πιθανότητες
του φαινομένου της συνεπίπτωσης

co
επανακυκλοφορίας των κυττάρων

m
Don M. The Coulter Principle: Foundation of an Industry. JALA: Journal of the Association for Laboratory Automation. 2003;8(6):72-81. doi:10.1016/s1535-5535(03)00023-6
 Υδροδυναμική Εστίαση (Hydrodynamic Focusing)

Ιω
άν
νη
ς
Σ
Πα
Τεχνική που διασφαλίζει ότι τα προς

πα
μέτρηση σωματίδια ευθυγραμμίζονται και

δά
περνούν μέσα από την οπή σε μονήρη

κη
διάταξη (αξονική τροχιά)

ς
dr
Ακρίβεια (ελαχιστοποίηση πιθανότητας

.i
διέλευσης σωματιδίων από την οπή σε

oa
ομάδες ή συγκολλήσεις) στη μέτρηση του

nn
μεγέθους και του αριθμού των σωματιδίων

is
pa
pa
da
Εφαρμογές

ki
s@
gm
• Αιματολογία

ai
• Έρευνα

l.
• Ποιοτικός Ελέγχος

co
m
https://ir.library.louisville.edu/cgi/viewcontent.cgi?article=2643&context=etd
 Υδροδυναμική Εστίαση (Hydrodynamic Focusing)

Ιω
άν
νη
ς
Σ
Υγρό Περιβλήματος

Πα
πα
(Sheath Fluid)
δά
κη
ς
• Χρησιμοποιείται για να

dr
.i
περικλείσει το υγρό του

oa
δείγματος που περιέχει τα

nn
is
σωματίδια

pa
pa
• Ρέει γύρω από το υγρό του

da
δείγματος με τρόπο που

ki
s@
περιορίζει και στενεύει τη

gm
διαδρομή του ρεύματος

ai
l.
ροής του δείγματος

co
m
 Υδροδυναμική Εστίαση (Hydrodynamic Focusing)

Ιω
άν
νη
ς
Σ
Έγχυση Δείγματος
Πα
πα
(Sample Injection)
δά
κη
ς
dr
• Το υγρό δείγμα, το

.i
oa
οποίο περιέχει τα

nn
σωματίδια που πρέπει

is
pa
να μετρηθούν ή να

pa
da
προσδιοριστούν οι

ki
s@
διαστάσεις τους,

gm
εγχέεται στο Υγρό

ai
l.
Περιβλήματος

co
m
 Υδροδυναμική Εστίαση (Hydrodynamic Focusing)

Ιω
άν
νη
ς
Σ
Ευθυγράμμιση

Πα
πα
(Alignment):

δά
κη
ς
• Καθώς τα δύο ρευστά ρέουν

dr
μαζί, το υγρό του περιβλήματος

.i
«εστιάζει» αποτελεσματικά τα

oa
nn
σωματίδια του δείγματος σε ένα

is
μόνο κεντρικό ρεύμα.

pa
• Αυτή η ευθυγράμμιση

pa
da
εξασφαλίζει ότι τα σωματίδια

ki
οδεύουν μέσω της οπής σε

s@
γραμμική διάταξη, η οποία είναι

gm
ai
κρίσιμη για ακριβείς μετρήσεις

l.
σύνθετης αντίστασης

co
m
 Υδροδυναμική Εστίαση (Hydrodynamic Focusing)

Ιω
άν
νη
ς
Σ
Πα
Μέτρηση οπής (Aperture

πα
Measurement)

δά
κη
ς
• Τα σωματίδια περνούν μέσα από

dr
τη μικρή οπή και οι μεταβολές

.i
στην ηλεκτρική σύνθετη αντίσταση

oa
ανιχνεύονται και μετρώνται καθώς

nn
is
τα σωματίδια μεταβάλουν το

pa
ηλεκτρικό ρεύμα στο άνοιγμα

pa
• Το μέγεθος και η διάρκεια αυτών

da
ki
των μεταβολών σύνθετης

s@
αντίστασης χρησιμοποιούνται για

gm
τη μέτρηση και το μέγεθος των

ai
σωματιδίων

l.
co
m
 Αρχή Αγωγιμότητας

Ιω
(Conductivity Principle)

άν
νη
ς
Σ
Πα
Χρήση εναλλασσόμενου ρεύματος

πα
υψηλής συχνότητας (μήκος

δά
κύματος ραδιοσυχνότητας - RF)

κη
ς
dr
.i
Στη συχνότητα αυτή το κύτταρο

oa
γίνεται αγώγιμο και το ρεύμα

nn
is
διέρχεται από το εσωτερικό του

pa
κυττάρου (σε αντίθεση με το DC)

pa
da
ki
Πληροφορίες για μέγεθος πυρήνα,

s@
gm
σχήμα, λοβούς, πρωτοπλασματικά

ai
κοκκία)

l.
co
m
https://oncohemakey.com/automated-cell-counting-instrumentation/
 Βασικές Αρχές Κυτταρομετρίας Ροής
Ιω
άν
νη
ς
Σ
Πα
Προετοιμασία δείγματος

πα
(Sample Preparation)

δά
κη
• Πριν από την ανάλυση, το δείγμα

ς
dr
(το οποίο μπορεί να είναι

.i
κυτταρικό εναιώρημα, σωματίδια ή

oa
ακόμα και μικροί οργανισμοί)

nn
προετοιμάζεται κατάλληλα

is
pa
• Αυτό μπορεί να περιλαμβάνει την

pa
επισήμανση των κυττάρων με

da
φθορίζουσες χρωστικές ή

ki
αντισώματα που συνδέονται ειδικά

s@
gm
με ορισμένα κυτταρικά συστατικά,

ai
όπως πρωτεΐνες ή DNA

l.
co
m
McKinnon KM. Flow Cytometry: An Overview. Curr Protoc Immunol. 2018 Feb 21;120:5.1.1-5.1.11. doi: 10.1002/cpim.40. PMID: 29512141; PMCID: PMC5939936.
 Βασικές Αρχές Κυτταρομετρίας Ροής
Ιω
άν
νη
ς
Σ
Έγχυση δείγματος (Sample

Πα
Injection)

πα
δά
κη
• Το προετοιμασμένο δείγμα

ς
εισάγεται σε μια ροή

dr
.i
ρευστού (fluid stream), με

oa
αποτέλεσμα τη δημιουργία

nn
is
μιας γραμμικής διάταξης

pa
(single-file line) ενός

pa
da
συνόλου κυττάρων ή

ki
σωματιδίων μέσα σε ένα

s@
gm
στενό, ταχέως ρέον υγρό

ai
ρεύμα.

l.
co
m
McKinnon KM. Flow Cytometry: An Overview. Curr Protoc Immunol. 2018 Feb 21;120:5.1.1-5.1.11. doi: 10.1002/cpim.40. PMID: 29512141; PMCID: PMC5939936.
 Βασικές Αρχές Κυτταρομετρίας Ροής
Ιω
άν
νη
ς
Σ
Πα
Διέγερση λέιζερ (Laser Excitation)

πα
δά
κη
• Μια δέσμη λέιζερ (laser beam) ή

ς
λυχνία αλογόνου χρησιμοποιείται

dr
για να στοχεύσει κάθε κύτταρο ή

.i
σωματίδιο καθώς διέρχεται από το

oa
nn
κυτταρόμετρο ροής

is
• Το φως του λέιζερ αλληλεπιδρά με

pa
τα φθοροφόρα (fluorophores -

pa
da
φθορίζοντα μόρια) που συνδέονται

ki
με τα κύτταρα ή τα σωματίδια,

s@
προκαλώντας τους να εκπέμπουν

gm
φθορισμό (fluorescence)

ai
l.
co
m
McKinnon KM. Flow Cytometry: An Overview. Curr Protoc Immunol. 2018 Feb 21;120:5.1.1-5.1.11. doi: 10.1002/cpim.40. PMID: 29512141; PMCID: PMC5939936.
 Βασικές Αρχές Κυτταρομετρίας Ροής
Ιω
άν
νη
ς
Σ
Σκέδαση Φωτός και Εκπομπή φθορισμού

Πα
(Light Scattering and Fluorescence Emission)

πα
• Δύο τύποι σημάτων ανιχνεύονται ως

δά
αποτέλεσμα αυτής της αλληλεπίδρασης

κη
ς
• Πρόσθιος σκεδασμός (Forward Scatter-

dr
FSC): Μέτρηση έντασης φωτός που

.i
σκεδάζεται προς τα εμπρός.

oa
Πληροφορίες κυρίως για το

nn
μέγεθος/όγκο (size) ή δευτερευόντως

is
την κοκκίωση (granularity) του κυττάρου

pa
• Πλάγιος σκεδασμός (Side Scatter-SSC):

pa
Μέτρηση έντασης σκεδαζόμενου φωτός

da
σε γωνία 90 μοιρών ως προς τη δέσμη

ki
λέιζερ. Πληροφορίες σχετικά με την

s@
εσωτερική πολυπλοκότητα (internal

gm
complexity), πυκνότητα ή κοκκίωση

ai
(granularity) του κυττάρου.

l.
co
m
Vembadi, Abishek & Menachery, Anoop & Qasaimeh, Mohammad. (2019). Cell Cytometry: Review and Perspective on Biotechnological Advances.
Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 7. 10.3389/fbioe.2019.00147.
 Βασικές Αρχές Κυτταρομετρίας Ροής
Ιω
άν
νη
ς
Σκέδαση Φωτός και Εκπομπή

Σ
Πα
φθορισμού (Light Scattering

πα
and Fluorescence Emission)

δά
κη
• Φθορισμός (Fluorescence): Ο

ς
dr
εκπεμπόμενος φθορισμός

.i
συλλέγεται και μετράται σε

oa
nn
διάφορα μήκη κύματος,

is
επιτρέποντας την ανίχνευση

pa
pa
συγκεκριμένων

da
επισημασμένων μορίων εντός

ki
του κυττάρου, παρέχοντας

s@
gm
πληροφορίες σχετικά με τη

ai
βιομοριακή του σύνθεση

l.
co
m
Vembadi, Abishek & Menachery, Anoop & Qasaimeh, Mohammad. (2019). Cell Cytometry: Review and Perspective on Biotechnological Advances. Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 7.
10.3389/fbioe.2019.00147.
 Βασικές Αρχές Κυτταρομετρίας Ροής
Ιω
άν
νη
ς
Σ
Φωτοανιχνευτές

Πα
πα
(Photodetectors)

δά
κη
ς
• Φωτοανιχνευτές ή

dr
φωτοπολλαπλασιαστές

.i
oa
(or photomultiplier tubes-

nn
is
PMTs) συλλαμβάνουν το

pa
σκεδασμένο και

pa
da
εκπεμπόμενο φως,

ki
s@
μετατρέποντάς το σε

gm
ηλεκτρικά σήματα

ai
l.
co
m
Zhang, Shengwei & Li, Zheng & Wei, Qingshan. (2020). Smartphone-based cytometric biosensors for point-of-care cellular diagnostics. Nanotechnology and Precision Engineering. 3.
10.1016/j.npe.2019.12.004.
 Βασικές Αρχές Κυτταρομετρίας Ροής
Ιω
άν
νη
ς
Σ
Ανάλυση δεδομένων (Data Analysis)

Πα
πα
• Τα σήματα που παράγονται από

δά
κη
τους φωτοανιχνευτές

ς
(photodetectors) επεξεργάζονται

dr
και αναλύονται από έναν

.i
υπολογιστή.

oa
nn
• Το προηγμένο λογισμικό μπορεί να

is
δημιουργήσει λεπτομερή δεδομένα

pa
για πολλαπλές παραμέτρους για

pa
κάθε κύτταρο ή σωματίδιο,

da
ki
συμπεριλαμβανομένου του

s@
μεγέθους, της παρουσίας κοκκίων

gm
και της παρουσίας συγκεκριμένων

ai
μορίων.

l.
co
m
Zhang, Shengwei & Li, Zheng & Wei, Qingshan. (2020). Smartphone-based cytometric biosensors for point-of-care cellular diagnostics. Nanotechnology and Precision Engineering. 3.
10.1016/j.npe.2019.12.004.
 Βασικές Αρχές Κυτταρομετρίας Ροής
Ιω
άν
νη
ς
Σ
Οπτικοποίηση και Ταξινόμηση

Πα
(Visualization and Sorting)

πα
δά
• Τα δεδομένα μπορούν να

κη
χρησιμοποιηθούν για τη δημιουργία

ς
οπτικών αναπαραστάσεων, όπως

dr
.i
γραφήματα διασποράς (scatter plots)

oa
και ιστογράμματα (histograms), για

nn
την οπτικοποίηση κυτταρικών

is
πληθυσμών

pa
• Τα κυτταρόμετρα ροής που είναι

pa
da
εξοπλισμένα με δυνατότητες

ki
κυτταρικής ταξινόμησης μπορούν

s@
αυτόματα να διαχωρίσουν

gm
συγκεκριμένους κυτταρικούς

ai
πληθυσμούς

l.
co
m
Zhang, Shengwei & Li, Zheng & Wei, Qingshan. (2020). Smartphone-based cytometric biosensors for point-of-care cellular diagnostics. Nanotechnology and Precision Engineering. 3.
10.1016/j.npe.2019.12.004.
 m
co
l.
ai
gm
s@
ki
da
pa
pa
is
nn
oa
.i
dr
ς
κη
δά
πα
Πα
Σ
ς
νη
άν
Ιω