Kỹ thuật tách chất dựa trên sự tổ hợp nhiề u

quá trình vừa có tính chất hóa học, lý học.

Nó là sự cân bằ ng động xẩy ra trong cột sắc
ký giữa pha tĩnh và pha động là sự vận Dựa vào ái lực của chất phân tích với
Nguyên tắc cột khác nhau mà được tách ra
chuyển và phân bố lại liên tục các chất tan
theo từng lớp qua chất nhồ i cột từ đầu cột
đế n cuố i cột

Sắc ký phân bố
Nguyên tắc - phân loại
Sắc ký hấp phụ
Dựa vào kỹ thuật sắc ký
Sắc ký trao đổi ion

Phân loại Sắc ký loại trừ kích thước

siliaca đơn giản

Dựa vào vật liệu nhồ i
silica biế n tính

Cung cấp dung môi cho quá trình sắc ký,

Nhiệm vụ đưa chất phân tích ra khỏi cột

Loại bỏ khí hòa tan ( bằ ng sục khí trơ

như nito hoặc chạy siêu âm) và cặn -
giúp giảm độ rộng pic và ảnh hưởng
đế n chất lượng detetor

1 dung môi và thành phần không thay đổi

Isocratic
trong quá trình sắc ký

Lựa chọn chế độ tách rửa cho dm

Hỗn hợp nhiề u dung môi có độ phân cực
khác nhau nhiề u và có thể thay đổi tỷ lệ
Yêu cầu Gradient thành phần các dung môi trong quá trình sắc
ký => tăng chất lượng quá trình tách

Trang bị các loại valves tỷ lệ cho phép

đưa dung môi từ 2 bình chứa với các
lưu lượng thay đổi liên tục
Pha động ( hệ thố ng cấp dung môi )

Có 1 hoặc nhiề u bình chứa dung môi (

500ml )

Độ phân cực ngược với pha tĩnh

Lựa chọn dung môi
Độ phân cực tương đương với chất
phân tích

Ưu điểm : chỉ dùng 1 bơm

Trộn ở áp suất thấp
Nhược điểm : hệ thố ng 3 van lấy 3 dung môi
phức tạp, chi phí cũng không kém nhiề u với
chương trình thứ 2

Chương trình trộn dung môi

Ưu điểm : độ đúng và lặp lại cao hơn

Trộn ở áp suất cao
Nhược điểm : tố n kém, cồ ng kề nh

Bơm pha động qua cột tách thực hiện

Nhiệm vụ
quá trình sắc ký

Có khả năng hoạt động ở áp suất đầu

vào là 5000 psi trở lên ( 1 psi = 0,068 atm
; 1 atm = 1,01 bar = 101,01 kPa )

Bơm lưu lượng lặp lại trong khoảng 0,01-

Bộ phận bơm Yêu cầu
5ml/phút

Có thể chịu được tác động của nhiề u

loại dung môi ( không bị ăn mòn )

Bơm đẩy 1 pittong

Phân loại về mặt kế t cấu Bơm đầy nhanh

Bơm đẩy kéo

Nạp chính xác 1 lượng mẫu nhất định

Nhiệm vụ
vào cột sắc ký
Bộ phận tiêm mẫu
Tiêm bằ ng xilanh ( sai số <1%)
Chế độ tiêm
Tiêm mẫu tự động ( sai số < 0,5%)

Nhiệm vụ Tách các mẫu ra khỏi nhau

Phần lớn được thực hiện ở nhiệt độ phòng

tuy nhiên chất lượng sắc ký đồ sẽ tốt hơn
Máy Cột nhồ i nếu duy trì nhiệt độ không thay đổi (sai số
Cấu tạo <0,05 C) và được trang bị thêm lò gia nhiệt
Cột bảo vệ cho cột ổn định nhiệt ở 150 độ C và trang
bị hệ thống phun nước làm lạnh để khống
chế chính xác nhiệt độ
Pha tĩnh ( cột )
L = 10-30cm có thể nố i tiế p 2 cột hoặc nhiề u hơn

Đk = 4-10mm
Cột thường
Kích thước hạt nhồ i 3,5-10um

N = 40.000-60.000 đĩa
Phân loại
L = 3-7cm có thể nố i tiế p

Đk = 1-4,6mm
Cột tố c độ cao (hiệu quả hơn)
Kích thước hạt nhồ i 3-5um
Sắc ký HPLC
N= 100.000 đĩa

Phát hiện và đo nồ ng độ các chất phân

tích theo tính chất hóa lý bằ ng cách di
Nhiệm vụ chuyển các tín hiệu không điện thành tín
hiệu điện

Đáp ứng nhanh và lặp lại

Độ nhạy cao, phát hiện cpt ở nhiệt độ

thấp

Yêu cầu Vận hành ổn định, dễ sử dụng

Khoảng tuyế n tính rộng

Detetor Ít thay đổi theo nhiệt độ và tố c độ dòng

Đo ở bước sóng cố định

Hấp thụ UV-Vis ( phổ biế n, gradient) Cấu hình Đo ở bước sóng thay đổi

Mảng diod UV-DAD

Áp dụng hợp chất đa vòng

Huỳnh quang ( rất nhạy, chọn lọc gấp
1000 lần so với UV-Vis) gradient
Phân tích lượng vế t, mẫu sinh học, giám định pháp y

Phân loại Chỉ số khúc xạ

Tán xạ bay hơi ( gradient)

Đo độ dẫn

Đo ampe

Thể hiện thời gian lưu của chất

Máy tính ( Hệ thu nhận và xử lý số liệu )
Tách chất và xác định hàm lượng chất thông
qua đo độ hấp thụ

Hệ số phân bố

Thời gian lưu

Hệ số dung lượng
Các thông số
Số đĩa

Hệ số chọn lọc

Độ phân giải

Pha tĩnh là chất rắn phân cực

Nguyên lý
Lực lưu giữ là lực hấp phụ

Sắc ký hấp phụ or lỏng rắn Các chất khố i lượng phân tử <5000 , ít
tan trong nước

Ứng dụng Tách đồ ng phân

Phân tích hợp chất dầu mỏ, thực phẩm,

dược phẩm.

Dựa vào lực hút ion

Nguyên lý
Chất trao đổi cation và anion là polymer
không tan trong nước mang các nhóm
trao đổi ion
Sắc ký trao đổi ion
Tinh chế nguyên liệu tạp chất

Kỹ thuật sắc ký Ứng dụng làm giàu chất

Áp dụng cho sắc ký hiện đại

Dựa vào kích thước phân tử khác nhau

vào lỗ xố p pha tĩnh
Nguyên lý
Kích thước nhỏ ra sau, lớn ra trước
Sắc ký loại trừ kích thước

Ứng dụng Tách các mẫu khố i lượng phân tử lớn

Dựa vào quy luật phân bố của chất tan

Nguyên lý giữa 2 pha không trộn lẫn

Ứng dụng nhiề u nhất

Phân tích được những hợp chất không

Sắc ký phân bố Ứng dụng phân cực và phân cực

Hợp chất ion khố i lượng <3000

Chọn pha tĩnh pha động

Tố i ưu hóa quá trình

Ứng dụng