微生物實驗

實驗二

Simple Stain & Gram Stain

日期 2022/9/2
8
系所 藥學系

組別 21

I84096064 陳振瑀
I84096161 蘇聖崴

組員 I84076048 邱晟綸
實驗 A：Simple Stain
一、目的
用 methylene blue 分別將 E.coli 和 S.aureus 兩種菌染色，並在顯微鏡下
觀察細菌的外觀、大小、排列方式等。

二、步驟
1. 用 loop 沾取一些水，滴在載玻片上。
2. 將 loop 燒紅冷卻後取菌，均勻地畫在載玻片上和水混合。
3. 將載玻片過火，固定細菌位置。
4. 等水乾掉後，取 methylene blue 滴在細菌上，等待一分鐘染色。
5. 用清水洗掉染劑，以擦手紙吸去殘餘水分，以顯微鏡的油鏡觀察。

三、實驗材料
1. loop 一支。
2. E.coli 和 S.aureus 兩種菌。
3. 染劑 Methylene blue。
4. 托盤一個。
5. 顯微鏡。

四、實驗結果與討論
放大 1000 倍（目鏡：10 x；油鏡：100 x）
Escherichia coli 觀察與討論

細菌排列有緊密的地方也有稀疏的，取菌量偏
多，但不太均勻。仔細觀察可發現菌體為
兩端鈍圓短桿狀型， 寬為 0.4-0.8μm，
長為 1.0-4.0μm。
 Staphylococcus 觀察與討論
aureus

菌體在顯微鏡下呈現球狀，且會如葡萄串般聚集
成簇。
菌體外觀為球型，直徑約 0.5-1.0μm
看不太到菌落，取菌量偏少。圖中大部分藍
色為未脫色乾淨的部分。

實驗 B：Gram Stain
一、目的
用多種不同染劑將 E.coli、S.aureus、S.pyogenes 和 Pseudomonas
aeruginosa
四種菌染色，並在顯微鏡下觀察，判斷細菌為格蘭氏陰性菌或是陽性菌。

二、步驟
1. 用 loop 沾取一些水，滴在載玻片上。
2. 將 loop 燒紅冷卻後取菌，均勻地畫在載玻片上和水混合。
3. 將載玻片過火，固定細菌位置。
4. 等水乾掉後，取染劑 Crystal violet 滴在細菌上，等待一分鐘染色。
5. 用清水洗掉染劑，以擦手紙吸去殘餘水分，再取 Iodine 滴在細菌上並
等待一分鐘。
6. 用清水洗掉試劑，以擦手紙吸去殘餘水分，用 95% alcohol 快速清洗
脫色。
7. 用清水洗掉酒精，以擦手紙吸去殘餘水分，再用 Safranin 滴在細菌上，
停留一分鐘等待染色。
8. 用清水洗掉染劑，以擦手紙吸去殘餘水分，在顯微鏡的油鏡下觀察。

三、實驗材料
1. loop 一支。
2. E.coli、S.aureus、S.pyogenes 和 Pseudomonas aeruginosa 四種菌。
3. 染劑 Crystal violet、Gram iodine、95% alcohol、safranin。
4. 托盤一個。
5. 顯微鏡。
四、實驗結果與討論
放大 1000 倍（目鏡：10 x；油鏡：100 x）
Escherichia coli 觀察與討論
革蘭氏陰性短桿菌

E. coli 為革蘭氏陰性菌，染色結果應呈
紅色，但可觀察到顏色偏紫紅，因為結
晶紫染劑操作不佳未脫色完全。
菌體形狀為兩端鈍圓短桿狀型。
菌體稀疏，取菌量少。

Staphylococcus 觀察與討論
aureus
革蘭氏陽性球菌
染色結果呈紫紅色，應該也有未脫色完
全的部分。
菌體在顯微鏡下呈現球狀，且密度相當
低，未脫色的色塊太大片了。

Pseudomonas 觀察與討論
aeruginosa
革蘭氏陰性桿菌

染色結果呈粉紅色，可知其是革蘭氏陰
性菌，符合預期。但外面的色塊也未脫
色完全，造成可觀察部分很少，但仍可
看出菌體為桿狀。
 Streptococcus 觀察與討論
pyogenes
革蘭氏陽性鏈球菌

染色結果呈紫色，可知其是革蘭氏陽性菌，符
合預期。
菌體呈球狀，可能是由於菌量過多，菌體看起
來大多聚集成簇。

問題
1. What would happen if no heat fixing were done？or too much heat stain？
加熱可以將菌固定在玻片上，在染色及沖洗時菌就不會被不小心沖走了，本次實
驗菌的死活不影響結果，因此可以使用這個方法固定，至於過度加熱的話可能會
造成玻片破裂，也可能會造成細菌細胞破裂，適當加熱即可。

2. Why is the age of the bacterial culture important in a Gram stain？

培養 18~24 小時的菌落的細胞已經成長得較為完整了，因此比較容易進行染色，
效果較好。若菌齡過短，有可能會造成取菌量濃度過低而難以觀察，若過長的話，
可能會導致 crystal violet 的 complex 被沖走，使染色無法成功。

3. Did your results agree with the information in your textbook？If not,why
not？
形狀與顏色大致上符合理論結果，但有些菌落觀察起來相當困難，連助教來
都幫我們處理了好久，看來我們的取菌和染色技術還不夠純熟，沖洗也不夠
乾淨，之後如果有類似的部分要多注意一點。

六、參考文獻
1.https://sites.google.com/view/2017nthusummercamp11/%E5%BE%AE
%E7%94%9F%E7%89%A9%E5%AD%B8

2. http://biopioneer.com.tw/?p=24307